发明领域

本发明涉及三嗪化合物。更特别地，本发明涉及制备和使用三嗪化 合物的方法和组合物。

                       发明背景

合成新的化合物带来了发现新的治疗干预手段的新的可能性。通过 使用构效关系研究，可有针对性地修饰化合物，这样化合物具有至少一 种可从其结构预测的活性。使用高效测定能够迅速确定新合成的化合物 的活性。

在很多医药和疾病治疗领域都需要用于新的治疗干预的新化合物。 例如，慢性和急性炎性病症形成了影响所有器官系统的疾病的基础，这 些疾病包括但不限于哮喘、急性炎性疾病、血管炎性疾病、慢性炎症、 动脉粥样硬化、血管病、心肌炎、肾炎、局限性回肠炎、关节炎、I和 II型糖尿病以及相关的血管病变。在全部人口中，这些炎性病症的发生 率正在增加，仅糖尿病就影响着一千六百万人。

虽然炎症自身是正常免疫反应，但是慢性炎症导致由于未知细胞因 子的相互作用所致的并发症和发展的系统损害。特别是，慢性炎症可引 起内皮损害，从而导致血管并发症。在慢性炎性疾病中，由动脉粥样硬 化和血栓栓塞性大血管病导致的慢性动脉、脑血管和周围血管疾病是主 要死亡原因。

由于涉及生活方式例如饮食和锻炼的病症，或者由于发展成疾病的 遗传素因，许多人和动物具有有限的寿命和生活方式。例如，血管平滑 肌细胞增殖是内皮损伤的常见后果，并且据信是形成动脉粥样硬化斑或 涉及血管损伤的并发症的早期发病事件，或者是手术干预的结果。据信 异常血管平滑肌细胞(SMC)增殖是血管闭塞损伤疾病，包括动脉硬化、 动脉粥样硬化、再狭窄和器官移植后移植物动脉粥样硬化的发病原因。

在美国，经皮冠状动脉干预(PTCA)手术是最常见的住院病人医院手 术。根据American Heart Association，在进行了囊式血管成形术的 患者当中，约有三分之一的患者在约6个月内发生血管变宽部分的再狭 窄。可能需要在再狭窄的动脉上进行另一血管成形术或冠状动脉旁路手 术。再狭窄的主要特征是损伤反应，该损伤反应导致在颈动脉壁内部和 外部的炎性级联和细胞改变被激活。这包括称为新内膜(neointimal) 增生的结缔组织和平滑肌过度生长到动脉腔内。目前没有能控制血管闭 塞损伤疾病，包括动脉硬化、动脉粥样硬化、再狭窄和器官移植后移植 物动脉粥样硬化的有效药物治疗。确定出具有最小副作用的有效治疗将 恢复生命质量，同时无需另外的手术例如冠状动脉旁路手术。

长期以来，控制或调节身体在对损伤、手术起反应时所产生的因子、 代谢因子或导致因子过多或过少的反馈机制失控一直是施用药物活性 剂的目标。在工业化国家迅速增长的一种疾病是糖尿病及其所有伴随的 后发病。在与糖尿病有关的损害中很重要的一个因素是存在糖化蛋白。

糖化蛋白和高级糖化终产物(AGE)通过至少两个主要机制导致细胞 损伤，特别是糖尿病性组织损伤；通过与特异性细胞表面受体相互作用 来调节细胞功能，和改变导致蛋白交联形成的细胞外基质。研究表明， 糖化蛋白和AGE与细胞的相互作用可促进炎性过程和氧化细胞损伤。AGE 增加脂蛋白的易氧化性和动脉粥样硬化形成。其与基质蛋白结合引起细 胞因子合成和激活细胞信使。其中糖化蛋白和AGE蓄积被怀疑是致病因 素的疾病包括糖尿病的血管并发症、微血管病、肾机能不全和阿尔茨海 默氏病。

高血糖，例如在糖尿病中发生的高血糖引起微血管损害的精确机制 尚不完全清楚。可将高血糖与微血管病联系在一起的一个可能机制是经 由重要蛋白的非酶糖化过程。非酶糖化，即蛋白与葡萄糖的交联导致形 成糖化蛋白。该糖化途径的第一个步骤涉及葡萄糖与蛋白中的游离氨 基，主要是赖氨酸残基的ε-氨基的非酶缩合，形成Amadori加成物。这 些早期糖化产物可发生进一步的反应例如重排、脱水和缩合，以形成不 可逆的高级终产物(AGE)。这些是与据信导致病原结果的特异性细胞表 面受体相互作用的分子的高反应性基团。

需要对其治疗和对于它们没有充分有效治疗的疾病的其它主要领 域是细胞增殖病症或者由不需要或非故意细胞生长所引起的病症。如上 所述，平滑肌细胞(SMC)增生是动脉粥样硬化中的主要事件，并且也是 血管手术例如血管成形术、斯滕特印模和冠状动脉旁路手术后众多衰竭 事件的原因。在正常血管中，SMC是静息的，但是当发生内皮损害时它 们增殖。有许多是衍生自内皮的天然生长调节剂在体内牢固地控制SMC 增殖。当控制失调时，会在个体中诱导疾病状态。

未被身体调节系统的检查的不需要的细胞生长的另一主要领域是 癌症或肿瘤病症。已经使用了许多治疗来恢复健康或至少停止不需要的 细胞生长。在很多时候，治疗剂可单独起作用，但是治疗方案经常需要 联合采用不同的药物活性剂与治疗例如手术或放疗。

目前需要治疗慢性或急性疾病例如动脉粥样硬化、不需要的细胞生 长或细胞增殖、糖尿病、炎性病症和血管闭塞病症，这是因为它们发生 频繁，目前采用的治疗的费用高，并且病症对于很多药物治疗来说是难 治的。涉及控制或预防这样的疾病的机制尚不清楚，并且需要预防和治 疗这些和其它疾病。因此，目前需要可在用于治疗和预防慢性和急性疾 病的方法和组合物中使用的新化合物。

                           发明概述

本发明涉及方法和组合物，其中包含主要基于取代的三嗪母核的新 化合物。本文公开了制备新化合物的方法，所述化合物，包含所述化合 物的组合物，和使用所述化合物的方法和组合物。本发明化合物和包含 所述化合物的组合物可用于治疗多种不同疾病。

本发明组合物包含三嗪化合物、其类似物、衍生物和化合物。这样 的三嗪化合物具有如下结构，其中NA、NB和NC一般用于代表在2、4和 6位与1，3，5-三嗪连接的侧取代的氨基：

这样的三嗪化合物包括具有如下结构的化合物。

在该实例中，每一侧氨基(NRR’)可简单地代表NH2或仲氨基或叔氨 基，包括环仲酰胺，以及如本文所述的其它取代基。本发明组合物还包 含三(氨基)化合物的类似物，所述类似物包括在上述三(氨基)三嗪化合 物合成中的中间体化合物，例如如下所示的二氨基氯三嗪化合物或氨基 二氯三嗪化合物，其中NA和NB是如上所述的取代的氨基。

本发明组合物还包含上述三(氨基)三嗪化合物的类似物，所述类似 物包括在三(氨基)三嗪化合物的合成中作为副产物分离出来的化合物， 例如如下所示的二(氨基)烷氧基三嗪化合物，其中E＝O或S等。

本发明还包括在新化合物的制备中使用的组合物，和制备本文公开 的新化合物的方法。

本发明还涉及方法和组合物，其中包含可用于治疗病症的化合物。 本发明一个方面包括化合物和包含所述化合物的组合物，用于治疗涉及 不需要的细胞增殖的疾病的方法中。许多血管疾病，例如心血管疾病， 器官移植后发病，血管闭塞病症，包括但不限于新内膜增生、再狭窄、 移植物血管病、心脏同种移植物血管病、动脉粥样硬化和动脉硬化，是 由侧索损害引起的或具有侧索损害，而侧索损害又是由不需要的细胞增 殖例如平滑肌细胞(SMC)增生所引起的。一种或多种这些化合物的至少 一种活性是，所述化合物具有影响蛋白聚糖合成，包括诱导和合成蛋白 聚糖以及蛋白聚糖的活性片段的活性。方法包括施用包含化合物的组合 物，所述化合物具有至少影响细胞增殖和影响蛋白聚糖合成和活性的活 性。

本发明还包括方法和组合物，其中包含本文所述化合物，所述化合 物具有与调节糖苷酶有关的活性，并因此影响糖苷酶的底物。糖苷酶以 及对其底物例如蛋白聚糖或糖化蛋白的活性是多种疾病例如血管病症、 与蛋白聚糖有关的疾病、肾疾病、自身免疫性疾病和炎性疾病的特征。 具有能影响糖苷酶底物浓度的活性的本文所述化合物可在治疗这样的 血管、炎性、转移和系统疾病的方法中使用。

本发明的一个实施方案包括方法和组合物，其中包含本发明化合 物，所述化合物可用于治疗和预防以炎症为疾病或病症特征的病症或疾 病。本发明的一个方面涉及方法和组合物，所述组合物包含能有效抑制 炎症，特别是与糖化蛋白或AGE蓄积或存在有关的炎症的化合物。治疗 方法包括施用包含化合物的组合物，所述化合物具有至少调节是生物病 症成分的炎性反应的活性，所述生物病症包括但不限于I和II型糖尿 病引起的血管病的血管并发症、其它血管病、微血管病、肾衰竭、阿尔 茨海默氏综合征和炎症引起的疾病例如动脉粥样硬化。本发明的一个方 面涉及用于治疗与炎性细胞因子和其它炎症相关分子有关的疾病、前病 症或病变的方法和组合物。

本发明的另一个实施方案包括方法和组合物，其中包含化合物，所 述化合物具有至少引起细胞死亡或细胞活动停止的活性—在本文中称 为细胞毒害活性。该活性可在体外或体内细胞毒害方法中使用。例如， 可将具有该活性的化合物选择性地递送到活生物体的区域内，以选择性 地杀死该区域中的细胞。这样的方法可用于治疗细胞过度增殖例如癌 症，或其它不需要的细胞生长或细胞活动。本发明的一个方面提供了组 合物，其中包含能非选择性地杀死细胞的化合物。本发明的另一个方面 提供了这样的化合物，它们能选择性地杀死细胞，例如具有特定细胞标 志或其它识别特征例如识别特定化合物的代谢速度或摄取的特征的细 胞。

本发明还包括药物组合物，其中包含本文公开的化合物。本发明还 公开了本发明化合物和药物组合物的给药途径和有效剂量。例如，本发 明化合物可以在多种有效治疗疾病的方案中与其它药物活性剂联合使 用。

在另一个方面，本发明涉及药物递送或洗脱医疗装置，其中包含或 包被有至少一种本发明化合物。适于和本发明化合物一起使用的医疗装 置包括但不限于斯滕特印模(stent)以及可提供用于递送至少一种化 合物的底物的其它医疗装置。

本发明的其它方面包括用于微阵列装置的组合物和方法。这样的微 阵列装置和方法包括多个微阵列，所述微阵列可用于例如研究和监测作 为对用本发明化合物治疗的反应的基因表达。所述微阵列可包含针对特 异细胞、组织、物种、病症、诊断预测、疾病进行的核酸序列、糖类或 蛋白，或可用于确定一种或多种本发明化合物的作用的任何其它分子组 合。本发明其它实施方案包括使用数据库和计算机应用程序的方法。

                         附图概述

附图1.N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环己基甲基-N”-甲基 -N_-(1-甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图2.N-环庚基-N’-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N”-(3-氟 -4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图3.N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-甲基-N’-(1-甲基-哌啶 -4-基)-N”-(1-丙基-丁基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图4.N-(1-氮杂-二环[2.2.2]辛-3-基)-N’-(3-氯-4-甲氧基- 苯基)-N”-)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的 1H NMR。

附图5.N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-环庚基-N6-甲基-N6-哌啶 -4-基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图6.N-环庚基-N’-乙基-N”-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5] 三嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图7.N-环庚基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-6-吡咯烷-1-基 -[1，3，5]三嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图8.N-环己基甲基-N’-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N”-(3- 氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图9.6-氯-N-环庚基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三 嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图10.(3-氯-4-甲氧基-苯基)-(4，6-二氯-[1，3，5]三嗪-2- 基)-胺的1H NMR。

附图11.N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-异丙基-N”-甲基-N” -(1-甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图12.N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-异丙基-N6-甲基-N6-哌 啶-4-基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图13.5-{4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-[甲基-(1-甲基-哌 啶-4-基)-氨基]-[1，3，5]三嗪-2-基氨基}-戊-1-醇的1H NMR。

附图14.5-[4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-(甲基-哌啶-4-基- 氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基]-戊-1-醇的1H NMR。

附图15.6-氯-N，N”-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪 -2，4-二胺的1H NMR。

附图16.N，N’-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-甲基-N”-(4- 甲基-环己基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图17.N，N’-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-环庚基-[1，3，5] 三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图18.N-丁基-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-(1-甲基-哌 啶-4-基)-N-丙基-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图19.N2-丁基-N4-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-哌啶 -4-基-N2-丙基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图20.6-环己基甲氧基-N，N’-二-(3-氟-4-甲氧基-苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图21.(4-氯-6-环己基甲氧基-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3-氟-4- 甲氧基-苯基)-胺的1H NMR。

附图22.N，N’-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-6-环己基甲氧基 -1，3，5-三嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图23.(4-氯-6-环己基甲氧基-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3-氯-4- 甲氧基-苯基)-胺的1H NMR。

附图24.6-环己基甲氧基-N-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N’-(3- 氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图25.N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-6-环己基甲氧基-N’-甲基-N’ -(1-甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图26.N-氮杂环庚烷(Azepan)-1-基-N’-(3-氯-4-甲氧基- 苯基)-N”-(1-甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图27.N4-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N2-全氢-氮杂_ -1-基-N6-哌啶-4-基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图28.N-氮杂环庚烷-1-基-6-氯-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯 基)-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图29.N”-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N，N’-二-全氢-氮杂_ -1-基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图30. N-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N” -(1-甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图31.N-(1-苄基-哌啶-4-基)-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N” -环庚基-[1，3，5]-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图32.2-氯-4-{4-环庚基氨基-6-[甲基-(1-甲基-哌啶-4-基- 氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-苯酚的1H NMR。

附图33.N2-环庚基-N4-((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3- 氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图34.N2-环庚基-N4-((R)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3- 氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图35.N2-环己基甲基-N4-((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲 基)-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图36.N2-环己基甲基-N4-((R)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲 基)-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图37.({4-环庚基氨基-6-[((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)- 氨基]-1，3，5-三嗪-2-基}-苯基-氨基)-乙腈的1H NMR。

附图38.({4-环庚基氨基-6-[((R)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)- 氨基]-1，3，5-三嗪-2-基}-苯基-氨基)-乙腈的1H NMR。

附图39.N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基]-N4-(3-氟-甲氧基苯 基)-6-[(S)-2-(甲氧基甲基)-1-吡咯烷基]-1，3，5-三嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图40.6-氯-N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-[1，3，5]三 嗪-2，4-二胺的1H NMR。

附图41.N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N” -(1-甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图42.4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-环庚基氨基-1，3，5-三 嗪-2-醇的1H NMR。

附图43.N2-(3-氯-4-二乙基氨基-苯基)-N4-环庚基-N6-(1-乙基 -吡咯烷-2-基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图44.N2-环庚基-N4-(2-二甲基氨基-乙基)-N6-(3-氟-4-甲氧 基-苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图45.({4-环庚基氨基-6-[1-乙基-吡咯烷-2-基甲基]-氨 基]-1，3，5-三嗪-2-基}-苯基-氨基)-乙腈的1H NMR。

附图46.N，N’-二正丙基-N”-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1，3，5- 三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图47.N，N’-二环丙基-N”-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1，3，5- 三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图48.N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-(1- 甲基-哌啶-4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图49.N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-哌 啶-4-基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺的1H NMR。

附图50.N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-甲基-N6-(1- 甲基-哌啶-4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺，盐酸盐的1H NMR。

附图51.N2-(3-氯-4-二乙基氨基-苯基)-N4-环庚基-N6-(1-乙基 -吡咯烷-2-基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺S4 2-6 3盐酸盐的1H NMR。

附图52.N2-环庚基-N4-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟 -4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺盐酸盐的1H NMR。

附图53.表明化合物在其中糖化人血清白蛋白G-HSA)诱导IL-6生 成的测定中的作用的图。

附图54.表明化合物在抗增殖测定中的作用的图。

                        发明详述

应当理解，本发明不限于本文所描述的特定方法、方案、细胞系、 结构和试剂，并且自身可以改变。还应当理解，本文所用的术语仅是为 了描述特定实施方案，并不是限制本发明范围，本发明范围仅由权利要 求书限定。

本文所提及的所有出版物和专利都引入本文，以描述和公开例如在 出版物中描述的可以与本发明结合使用的结构和方法。提供在上文和本 说明书中提及的出版物仅是由于它们是在本申请的申请日之前公开的。 本文中没有任何内容解释为承认本发明者们无权由于在先发明而早于 这样的公开。

I.化合物的描述

在-个方面，本发明包括一般描述为N2，N4，N6-三(氨基)-1，3，5-三 嗪的新的有机化合物，它们由表1中的名称和表2以及下文中的的结构 式代表。代表性的本发明化合物可用下面的结构通式描述，其中NA、NB 和NC一般用于代表在2、4和6位与1，3，5-三嗪连接的取代的氨基。

因此，本发明包括的典型化合物包括具有如下结构的三嗪化合物：

在该典型实施方案中，当键合到三嗪母核上时，每个NR1R2、NR3R4和NR5R6氨基可代表伯胺、仲胺或叔胺，包括环仲酰胺取代基(例如吡咯 烷-N-基)，以及如本文所述的其它取代基。本发明组合物还包含三(氨 基)化合物的类似物，例如在上述三(氨基)三嗪化合物的合成中作为中 间体化合物制得的化合物，或代表部分取代的三嗪母核的化合物。许多 本发明三嗪化合物的合成一般使用氰尿酰氯C3N3Cl3作为原料化合物，因 此本发明还包括中间体，例如如下所示的二(氨基)氯三嗪化合物或氨基 二氯三嗪化合物，其中NA和NB为如上所述的取代的氨基。

本发明组合物还包含上述三(氨基)三嗪化合物的类似物，所述类似 物包括在三(氨基)三嗪化合物的合成中作为副产物分离出来的化合物， 其通式如下所示，其中E＝O或S。这样的化合物的实例是二(氨基)烷氧 基三嗪化合物。

一般来说，本发明化合物和组合物包括如下通式所示的三(氨基)三 嗪化合物的类似物：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；烷基、环烷基、链烯基、环烯基、 环二烯基、炔基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、杂烷基、烷氧基、烷硫基、 烷基氨基或二烷基氨基，所述基团分别具有最高达12个碳原子，并包 括其直链或支链衍生物、其环状衍生物、其取代的衍生物、其杂原子衍 生物或其杂环衍生物；芳基；杂芳基；芳氧基；芳硫基；卤素；或氨基；

G选自NR1或O；

E选自CH或N；

Z时0-3的整数；

X1选自R1、NR13+、CN、NO2、CO2R1、C(O)NR12、CH＝CR12、C≡CR1、C(O)R1、 SO2R1、SO2OR1或NC(O)R1，或者X1和X2一起是稠合的芳基、吡啶、二氧 杂环己烷、吡咯、吡咯烷、呋喃或噻吩环；条件是：当X1是C(O)R1时， 在X1中，C(O)R1取代基的R1不是氨基或二烷基氨基；

X2选自R1；CXxH3-x，其中X是卤素，且x是0-3的整数；OR1；SR1； NR12；CN；C(O)OR1；NC(O)R1；4-吗啉基；4-甲基-1-哌嗪基；OR2，其中 R2选自CH2OCH3、CH2OCH2OCH3、CH2OCH2CH2OCH3、CH2SCH3或C(O)R1；SR3， 其中R3选自CH2OCH3、CH2OCH2CH2OCH3、CH2OCH2CH(CH3)2、CH2NHC(O)CH3或 SR1；OM或SM，其中M选自Li、Na、K、Mg或Ca；

AY1是卤素，或者A选自NR1或O，且

Y1选自R1；CR43；NR42；OR4；或SR4；

其中n是0-8的整数，m是1-8的整数，Z1独立地选自CR1或N， Z2独立地选自CR12、NR1、O或S，条件是两个O或S原子不彼此相邻， 并且条件还是，有不超过2个Z2基团是NR1；

R4在每次出现时独立地选自直链或支链烷基、环烷基、环烯基、环 二烯基、链烯基、炔基、芳烷基，芳烯基、芳炔基、杂烷基、烷氧基、 烷硫基，烷基氨基或二烷基氨基，所述基团分别具有最高达10个碳原子， -H、芳基、杂芳基、芳氧基、芳硫基、卤素、氨基、其NR12-取代的衍 生物、其OR1-取代的衍生物、其SR1-取代的衍生物或其卤素取代的衍生 物；且

DY2是卤素，，或者D选自NR1或O，其中R1如上所定义，且

Y2选自R1、

或

其中Z1独立地选自N或CR4，且Z2独立地选自如上所定义的基团， 条件是两个O或S原子不彼此相邻，并且条件还是，有不超过2个Z2 基团是NR1。依据该一般描述的本发明化合物不包括包含将提供下列化 合物的独特取代基组合的那些化合物：

N-环庚基-N’-甲基-N’-(1-甲基-哌啶-4-基)-N”-萘-2-基-[1，3，5] 三嗪-2，4，6-三胺；

N-环庚基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N”-甲基-N”-(1-甲基 -哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺；

[4-(4-苄基-哌嗪-1-基)-6-吗啉-4-基-[1，3，5]三嗪-2-基]-(4-甲氧 基-苯基)-胺；

N-环庚基-6-吗啉-4-基-N’-萘-2-基-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺；

N-环庚基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-6-吗啉-4-基-[1，3，5]三嗪 -2，4-二胺；

N-环庚基-6-吗啉-4-基-N’-苯基-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺；

N-环庚基-N’-(4-甲氧基-苯基)-6-吗啉-4-基-[1，3，5]三嗪-2，4- 二胺；

N-苄基-N’-环庚基-N”-(4-甲氧基-苯基)-N-甲基-[1，3，5]三嗪 -2，4，6-三胺；

N-(2-[1，3]二氧杂环戊烷-2-基-乙基)-N’-甲基-N’-(1-甲基-哌 啶-4-基)-N”-萘-2-基-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺；或

N-环丙基-N’-甲基-N’-(1-甲基-哌啶-4-基)-N”-萘-2-基-[1，3，5] 三嗪-2，4，6-三胺。

因为本发明包括代表上述一般结构的饱和衍生物的化合物，以及包 括各种不同不饱和态的化合物(例如上述化合物的烯、二烯、三烯或炔 衍生物)，所以在本发明中，在上述通式中显示的芳基或吡啶基环可以 被部分或完全氢化。结果是，在上面的结构中，C5E环可代表被X1和X2 取代的环己基或哌啶基环。一般说来，X1通常但不总是代表吸电子基团 例如卤素或硝基，而X2通常但不总是代表供电子基团例如醇化物或氨 基。

如上面的一般结构所示，AY1和DY2一般代表NR1基团(其中R1如上 所定义)，在这种情况下，这些取代基构成了一部分氨基或取代的氨基， 因此化合物自身构成了三嗪。在这种情况下，Y1和Y2可选自多种取代基， 包括但不限于具有最高达10个碳原子的环烷基；

其中n为1或2；

具有最高达10个碳原子的直链或支链烷基；CH2R1；(CHR1)xNR12，其 中x为1-6；CH2R1；(CHR1)xOR1，其中x为1-6；

其中x为3-5；

CH2CF3；(CHR1)xZ1，其中x为1-6，且Z1选自NR12、

其中y为3-5，

或

在这些实例中，R1独立地选自如上所定义的基团。这些仅是Y1和 Y2取代基的定义的代表性实例，不是排他性的。

还需要指出，AY1以及DY2还可以一起代表键合到三嗪母核上的多种 化学基团，例如卤素或仲氨基例如

或

在后一情况下，氨基取代基被称为仲氨基，然而，在键合到三嗪母 核上后，氨基氮变为叔胺基团。在一起的AY1和DY2的实例包括但不限 于卤素；

其中x为3-5；

其中x为0-6；

其中Z2选自R1、

C(O)R1、C(O)OR1、吡啶基、芳基、

或

其中x为0-6，且其中R1独立地选自如上所定义的基团。这些仅 是这些取代基的定义的代表性实例，不是排他性的。

代表性本发明化合物列在表1中。该表不是所有的本发明化合物， 而仅是本发明三嗪化合物的实例。

                                 表1   化合物   序号 化合物命名     1 N2-(4-溴-1-萘基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     2 N2-(4-氯-1-萘基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     3 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-喹啉 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     4 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(6-喹啉 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     5 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(8-喹啉 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     6 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-[1-(2-萘基)乙 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     7 N2-环庚基-N4-(3，4-二氯苯基)-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     8 N2-环庚基-N4-(3，4-二氟苯基)-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     9 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-[4-(三氟甲氧基) 苯基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     10 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(4-氟苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     11 4-[(4-(环庚基氨基)-6-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨 基}-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基]苄腈     12 N2-(4-氯苯基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     13 N2-(4-溴苯基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     14 4-[(4-(环庚基氨基)-6-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨 基}-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基]苯甲酸乙酯     15 N2-(1，1’-联苯-4-基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     16 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     17 N2-(3-氯苯基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     18 N2-(3-溴苯基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     19 3-[(4-(环庚基氨基)-6-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨 基}-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基]苯甲酸乙酯     20 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(2-氟苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     21 N2-(2-氯苯基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     22 N2-(2-溴苯基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     23 N2-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡 咯烷基)甲基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     24 N2-环庚基-N4-(2，3-二氢-1，4-苯并二氧杂环己烯-6-基)-N6-[(1- 乙基-2-吡咯烷基)甲基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     25 N2-环庚基-N4-[4-(二甲基氨基)苯基]-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基) 甲基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     26 N2-[3-氯-4-(二乙基氨基)苯基]-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯 烷基)甲基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     27 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-[4-(4-吗啉基)苯 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     28 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-[4-(4-甲基-1-哌 嗪基)苯基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     29 N2-{4-[(4-(环庚基氨基)-6-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨 基}-1，3，5-三嗪-2-基)氨基]苯基乙酰胺     30 N-{3-[(4-(环庚基氨基)-6-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨 基}-1，3，5-三嗪-2-基)氨基]苯基乙酰胺     31 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-甲氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     32 N2-环庚基-N4-(4-乙氧基苯基)-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     33 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-[4-(甲硫基)苯 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     34 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(2-吡啶 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     35 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(2-甲基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     36 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(4-苯氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     37 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-甲基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     38 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N9-(4-甲基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     39 2-[(4-(环庚基氨基)-6-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨 基}-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基]-4-甲基-3-噻吩甲酰胺     40 N2-(4-氯苯基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N2-甲 基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     41 3-[(4-(环庚基氨基)-6-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨 基}-1，3，5-三嗪-2-基)-(苯基)氨基]丙腈     42 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(4-甲氧基苯 基)-N6-甲基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     43 N2-环庚基-N4-(2，4-二氟苯基)-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-N4-甲基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     44 [(4-(环庚基氨基)-6-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨 基}-1，3，5-三嗪-2-基)(苯基)氨基]乙腈     45 N2-(3-氯苯基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N2-甲 基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     46 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-甲基-N6-[2-(三氟 甲基)苯基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     47 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-甲基-N6-[4-(三氟 甲氧基)苯基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     48 N2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-N4-环庚基-N6-[(1-乙基-2-吡咯烷基) 甲基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     49 N-苯甲酰基-4-[(4-(环庚基氨基)-6-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]氨基}-1，3，5-三嗪-2-基)氨基苯磺酰胺     50 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(2-萘基)-1，3，5- 三嗪-2，4，6-三胺     51 N2-乙基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     52 N2-(叔丁基)-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟-4-甲氧 基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     53 N2-苄基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     54 N2-环辛基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟-4-甲氧基 苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     55 N2-环己基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟-4-甲氧基 苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     56 N2-环戊基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟-4-甲氧基 苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     57 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-(1- 吡咯烷基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     58 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-六 氢-1H-氮杂_-1-基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     59 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-八 氢-1(2H)-喹啉基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     60 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-N6-(4-甲基环己基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     61 N2-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-6-((S)-2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     62 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-(4- 甲基-1-哌嗪基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     63 6-(4-乙酰基-1-哌嗪基)-N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3- 氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     64 4-{4-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨基}-N6-[(3-氟-4-甲氧基 苯基)氨基]-1，3，5-三嗪-2-基}-1-哌嗪甲酸乙酯     65 N2-(环己基甲基)-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟-4- 甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     66 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-N6-(2-呋喃基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     67 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-N6-(2，2，2-三氟乙基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     68 N2-[2-(二甲基氨基)乙基]-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲 基]-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     69 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基-]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-N6-{4-[2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]-1-哌嗪基}-1，3，5-三 嗪-2，4-二胺     70 N2，N4-二[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     71 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-N6-[2-(1-哌啶基)乙基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     72 N6-[4-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基甲基)-1-哌嗪基]-N2-[(1-乙 基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4-二胺     73 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-N6-[4-(2-吡啶基)-1-哌嗪基]-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     74 1-[3-({4-{[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨基}-6-[(3-氟-4-甲氧 基苯基)氨基]-1，3，5-三嗪-2-基}氨基)丙基]-2-吡咯烷酮     75 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-N6-[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     76 N2-环庚基-N4-乙基-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺     77 N2-(叔丁基)-N4-环庚基-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺     78 N2-苄基-N4-环庚基-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺     79 N2-环庚基-N4-环辛基-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺     80 N2-环庚基-N4-环己基-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺     81 N2-环庚基-N4-环戊基-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺     82 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-(1-吡咯烷基)-1，3，5-三 嗪-2，4-二胺     83 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-六氢-1H-氮杂_-1-基 -1，3，5-三嗪-2，4-二胺     84 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-八氢-1(2H)-喹啉基 -1，3，5-三嗪-2，4-二胺     85 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-(4-甲基环己基)-1，3，5- 三嗪-2，4，6-三胺     86 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-[(2S)-2-(甲氧基甲 基)-1-吡咯烷基]-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     87 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-(4-甲基-1-哌嗪 基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     88 6-(4-乙酰基-1-哌嗪基)-N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     89 4-{4-(环庚基氨基)-6-[(3-氟-4-甲氧基苯基)氨基]-1，3，5-三嗪 -2-基}-1-哌嗪甲酸乙酯     90 N2-环庚基-N4-(环己基甲基)-N6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三 嗪-2，4，6-三胺     91 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-(2-呋喃基甲基)-1，3，5- 三嗪-2，4，6-三胺     92 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-(2，2，2-三氟乙 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     93 N2-环庚基-N4-[2-(二甲基氨基)乙基]-N6-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     94 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-{4-[2-氧代-(1-吡咯烷 基)乙基]-1-哌嗪基}-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     95 N2-环庚基-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(3-氟-4-甲氧基 苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     96 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-[2-(1-哌啶基)乙 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     97 6-[4-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基甲基)-1-哌嗪基]-N2-环庚基 -N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺     98 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-[4-(2-吡啶基)-1-哌嗪 基]-1，3，5-三嗪-2，4-三胺     99 1-[3-({4-(环庚基氨基)-6-[(3-氟-4-甲氧基苯基)氨基]-1，3，5- 三嗪-2-基氨基}丙基)-2-吡咯烷酮     100 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-[3-(1H-咪唑-1-基)丙 基]-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     101 (3-氯-4-甲氧基-苯基)-(4，6-二氯-[1，3，5]三嗪-2-基)-胺     102 6-氯-N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环己基甲基[1，3，5]三嗪 -2，4-二胺     103 N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环己基甲基-N”-甲基-N”-(1- 甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     104 6-氯-N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-(1-丙基-丁基)-[1，3，5]三嗪 -2，4-二胺     105 N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-甲基-N’-(1-甲基-哌啶-4-基)-N” -(1-丙基-丁基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     106 N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-异丙基-N”-甲基-N”-(1-甲 基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     107 N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-异丙基-N6-甲基-N6-哌啶-4-基 -1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     108 5-{4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-[甲基-(1-甲基哌啶-4-基)- 氨基]-[1，3，5]三嗪-2-基氨基}-戊-1-醇     109 5-[4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-(甲基-哌啶-4-基氨 基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基]-戊-1-醇     110 N-丁基-6-氯-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N-丙基-[1，3，5]三嗪 -2，4-二胺     111 N-丁基-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-甲基-N”-(1-甲基- 哌啶-4-基)-N-丙基-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     112 N2-丁基-N4-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-哌啶-4-基-N2-丙 基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     113 2，4-二氯-6-环己基甲氧基-[1，3，5]三嗪     114 (4-氯-6-环己基甲氧基-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3-氟-4-甲氧基-苯 基)-胺     115 6-环己基甲氧基-N，N’-二-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4-二胺     116 6-环己基甲氧基-N-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N’-(3-氟-4-甲 氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺     117 (4-氯-6-环己基甲氧基-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3-氯-4-甲氧基-苯 基)-胺     118 N，N’-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-6-环己基甲氧基-1，3，5-三嗪 -2，4-二胺     119 N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-6-环己基甲氧基-N’-甲基-N’-(1-甲 基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺     120 6-氯-N，N”-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺     121 N，N’-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-甲基-N”-(1-甲基- 哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     122 N，N’-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-环庚基-[1，3，5]三嗪 -2，4，6-三胺     123 N-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N”-(1-甲 基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     124 (4，6-二氯-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-胺     125 6-氯-N-环己基甲基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪 -2，4-二胺     126 N-环己基甲基-N’-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N”-(3-氟-4- 甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     127 6-氯-N-环庚基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4- 二胺     128 N-环庚基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-6-吡咯烷-1-基-[1，3，5] 三嗪-2，4-二胺     129 N-环庚基-N’-乙基-N”-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪 -2，4-二胺     130 N-环庚基-N’-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N”-(3-氟-4-甲氧 基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     131 2-[4-氯-6-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-[1，3，5]三嗪-2-基氨 基]-丙-1，3-二醇     132 2-{4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-[甲基-(1-甲基哌啶-4-基)- 氨基]-[1，3，5]三嗪-2-基氨基}-丙-1，3-二醇     133 6-氯-N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-[1，3，5]三嗪-2，4- 二胺     134 N-(1-苄基-哌啶-4-基)-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-环庚 基-[1，3，5]-2，4，6-三胺     135 N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-环庚基-N6-哌啶-4-基-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺     136 N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-环庚基-N6-(1-乙基-吡咯烷-2-基 甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     137 N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N”-(1-甲 基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     138 2-氯-4-{4-环庚基氨基-6-[甲基-(1-甲基-哌啶-4-基氨 基]-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-苯酚     139 N2-环庚基-N4-((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟-4-甲氧 基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     140 N2-环庚基-N4-((R)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟-4-甲氧 基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     141 N2-环己基甲基-N4-((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟-4- 甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     142 N2-环己基甲基-N4-((R)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟-4- 甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(42，反应方案23)     143 ({4-环庚基氨基-6-[((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-氨 基]-1，3，5-三嗪-2-基}-苯基-氨基)-乙腈(43，反应方案24)     144 ({4-环庚基氨基-6-[((R)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-氨 基]-1，3，5-三嗪-2-基}-苯基-氨基)-乙腈     145 N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-6-[(S)-2-(甲氧基甲基)-1-吡咯烷基]-1，3，5-三嗪-2，4-二 胺     146 N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-环庚基-N6-甲基-N6-哌啶-4-基 -1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     147 4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-环庚基氨基-1，3，5-三嗪-2-醇     148 N-(1-氮杂-二环[2.2.2]辛-3-基)-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯 基)-N”)1-乙基-吡咯烷基-2-基甲基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三 胺     149 N2-(3-氯-4-二乙基氨基-苯基)-N4-环庚基-N6-(1-乙基吡咯烷-2- 基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     150 N2-环庚基-N4-(2-二甲基氨基-乙基)-N6-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     151 ({4-环庚基氨基-6-[1-乙基-吡咯烷-2-基甲基]-氨基}-1，3，5-三 嗪-2-基)-苯基-氨基)-乙腈     152 N-氮杂环庚烷-1-基-6-氯-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5] 三嗪-2，4-二胺     153 N”-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N，N’-二-全氢-氮杂_-1-基-1，3，5- 三嗪-2，4，6-三胺     154 N-氮杂环庚烷-1-基-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-(1-甲基- 哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺     155 N4-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N2-全氢-氮杂_-1-基-N6-哌 啶-4-基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     156 N，N’-二正丙基-N”-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6- 三胺     157 N，N’-二环丙基-N”-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6- 三胺     158 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌啶 -4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     159 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-哌啶-4-基 -1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     160 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌啶 -4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺，盐酸盐     161 [N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N”-(1- 甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺，盐酸盐     162 N2-(3-氯-4-二乙基氨基-苯基)-N4-环庚基-N6-(1-乙基吡咯烷-2- 基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺     163 N2-(3-氯-4-二乙基氨基-苯基)-N4-环庚基-N6-(1-乙基吡咯烷-2- 基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺盐酸盐     164 N2-环庚基-N4-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺盐酸盐     165 N2-(环己基甲基)-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(4-氟-3- 甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺盐酸盐     166 ({4-环庚基氨基-6-[(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-氨基]-1，3，5- 三嗪-2-基}-苯基-氨基)-乙腈盐酸盐     167 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌啶 -4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺马来酸盐     168 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌啶 -4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺柠檬酸盐     169 N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌啶 -4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺琥珀酸盐     170 N-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N”-(1-甲 基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺盐酸盐

一般说来，本发明组合物还包含具有如下结构的三(氨基)三嗪化合 物：

其中R1-R6代表H、烷基、芳基、链烯基、炔基、芳烷基、芳烯基、 芳炔基、环烷基、环烯基、杂烷基、杂芳基、卤素、烷氧基、芳氧基、 烷硫基、芳硫基、甲硅烷基、甲硅烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨 基等，包括其直链或支链衍生物、其环状衍生物、其取代的衍生物、其 杂原子衍生物、其杂环衍生物、其官能化衍生物、其盐、其异构体或其 组合。

例如，典型的取代基R1-R6是取代的烷基，其中取代基是杂环衍生 物。含氮杂环基团的实例包括但不限于基团例如吡啶基(衍生自吡啶， 经由环碳原子键合)、哌啶基(衍生自哌啶，经由环氮原子或环碳原子键 合)和吡咯烷基(衍生自吡咯烷，经由环氮原子或环碳原子键合)。

R1-R6的取代的或官能化衍生物的实例包括但不限于含有取代基例 如下列取代基的基团：酰基、甲酰基、羟基、酰卤、酰胺、氨基、叠氮 基、酸、烷氧基、芳氧基、卤素、羰基、醚、酯、硫醚、硫代酸酯、腈、 烷硫基、芳硫基、磺酸及其盐、巯基、链烯基、炔基、硝基、亚胺、酰 亚胺、烷基、芳基、其组合等。此外，对于上述基团的烷基化衍生物， 烷基取代基可以连接在上述化学基团上，或用于经由烷基取代基与胺氮 键合。

本发明化学基团R1-R6的实例还包括但不限于：H；甲基；乙基； 丙基；丁基；戊基；己基；庚基；辛基；乙烯基；丙烯基；丁烯基；乙 炔基；丙炔基；丁炔基；环丁基；环戊基；环己基；环丁烯基；环戊烯 基；环己烯基；苯基；甲苯基；二甲苯基；苄基；萘基；吡啶基；呋喃 基；四氢-1-萘基；哌啶基；吲哚基；二氢吲哚基；吡咯烷基；2-(甲氧 基甲基)吡咯烷基；哌嗪基；喹啉基；喹啉基；烷基化-1，3-二氧杂环戊 烷；三嗪基；吗啉基；苯基吡唑基；茚满基；二氢茚酮基吡唑基；噻二 唑基；绕丹宁基；thiolactonyl；二苯并呋喃基；苯并噻唑基；高哌啶 基；噻唑基；奎宁环基；异噁唑烷酮基；其任何异构体、衍生物或取代 的类似物；或任何取代或未取代的化学基团例如醇、醚、硫醇、硫醚、 叔胺、仲胺、伯胺、酯、硫代酸酯、羧酸、二醇、二酯、丙烯酸、丙烯 酸酯、蛋氨酸乙酯、苄基-1-半胱氨酸乙酯、亚胺、醛、酮、酰胺或二 烯。

本发明化学基团R1-R6的其它实例包括但不限于与胺氮共价键合的 下列基团或下列基团的取代或烷基化衍生物：呋喃；四氢呋喃；吲哚； 哌嗪；吡咯烷；吡咯烷酮；吡啶；喹啉；蒽；四氢喹啉；萘；吡唑；咪 唑；噻吩；吡咯烷；吗啉等。上述基团或这些基团的取代或烷基化衍生 物的一个特征是，它们可以以任何方式与胺氮共价键合，包括经由侧取 代基或烷基、如果适当的话经由杂原子或如果适当的话经由环原子与胺 氮共价键合，这是本领域技术人员所理解的。

本发明化学基团R1-R6还包括但不限于环烷烃和烷烃，并包括桥连 和非桥连环。桥连环的实例包括但不限于基团例如降冰片烷基；降冰片 二烯基；金刚烷基；6-氮杂二环[3.2.1]辛基；3-氮杂二环[2.2.2]辛基 等。

在一个本发明实施方案中，NR1R2、NR3R4或NR5R6衍生自环仲胺。本 发明环氨基化学基团的实例包括但不限于哌啶；4-苄基-哌啶；3-哌啶 甲醇；吗啉；4-哌啶子基哌啶；1-(2-氨基-甲基)-哌嗪；十氢喹啉； 1，2，3，4-四氢-吡啶并吲哚(任一胺基团)；3-氨基-5-苯基吡唑；3-氨基 吡唑；组氨醇；六亚甲基亚胺；4-羟基哌啶；2-哌啶甲醇；1，3，3-三甲 基-6-氮杂二环[3.2.1]辛烷；3-吡咯烷醇；1-甲基哌嗪；2-乙基-哌啶； 1，2，3，4-四氢异喹啉；3-氨基吡咯烷；2，6-二甲基吗啉；2，3，4-四氢异 喹啉；1，2，3，4-四氢喹啉；1-(2-甲氧基苯基)哌嗪；2，6-二甲基哌嗪(任 一胺基团)；亚氨基联苄基；5-甲氧基色胺；4，4’-联哌啶；1-(2-羟基 乙基)哌嗪；4-甲基哌啶等。

重要的是，本发明一般结构包括所有饱和状态的所示取代基，例如 任何取代基的所有烯、二烯、三烯和炔衍生物。一般结构还包括由特定 取代基组带来的所有构象异构体、区位异构体和立体异构体。一般结构 还包括所有对映体、非对映体以及对映体或外消旋形式的其它旋光异构 体，或立体异构体混合物。

制备化合物的集中库(focused library)

许多本发明化合物是在依据下述方法的平行合成操作中制得的。表 2中提供了通过平行合成技术制得的化合物的实例。这些制备涉及将各 种胺化合物(单体)与氰尿酰氯反应，其中所用的原料以及通过平行合成 方法制得的化合物的化学结构也列在表2中。

如下所述，依据本发明合成化合物库，以获得取代的N2，N4，N6-三(氨 基)-1，3，5-三嗪化合物。化合物库的设计主要是基于下面所示的结构 95。也就是说，集中N2，N4，N6-三(氨基)三嗪化合物的设计，这样在每一 合成期间仅改变一个侧氨基(上述结构中的NA、NB或NC)，让另外两个基 团保持恒定。所用的特定胺的组合产生了新构成的化合物的库。首先， 使用甲基-(1-甲基-哌啶-4-基)-胺，让环庚基和间氟茴香胺基团保持恒 定(在下文结构95中)来构建库。没有针对甲基-(1-甲基-哌啶-4-基)- 胺将三嗪化合物的合成优化，然后用可提供更易于处理的合成的(1-乙 基-吡咯烷-2-基)-甲基胺代替该胺。

N2，N4，N6-三(氨基)-1，3，5-三嗪化合物的库是基于每个合成仅改变 一个氨基的策略，并基于如上所示的母结构95来制得的。将库分成3 个小组：库I、II和III(如表2所示)。库I包括具有未改变的NB和 NC基团，但是具有不同NA基团的化合物(6)。依据下面列出的具体实例 来改变侧氨基NA。库II包括具有未改变的NA和NC基团，但是具有不同 NB基团的化合物(7)。依据下面列出的具体实例来改变侧氨基NB。库III 包括具有未改变的NA和NB基团，但是具有不同NC基团的化合物(8)。依 据下面列出的具体实例来改变侧氨基NC。

表2和下文中列出的N2，N4，N6-三(氨基)-1，3，5-三嗪化合物结构是 用ISIS-DrawTM第2.4.0.20版本产生的，并且有权显示未特别指出的氢 原子—如果未显示的话，然而，在所示结构中并不是显示所有氢原子。 在任何正文、表、反应方案或附图所给出的结构中，如果没有具体表明 的话，任何原子—不论是碳原子还是杂原子为达到其通常化学价所需的 任何氢原子都应当可以推断出。

下面的反应方案显示了制备本发明化合物的一种方法。本发明化合 物是这样制得的：将氰尿酰氯依次与伯胺或仲胺单体反应以获得所需的 1，3，5-三嗪衍生物[1，2，3，4]。因此，用于和氰尿酰氯反应的胺原料化 合物称为“单体”。在制备N2，N4，N6-三(氨基-取代的)-1，3，5-三嗪化合 物的过程中，在每个合成步骤之间无需纯化，并且终产物是通过标准方 法分离的。按照需要，使用快速柱色谱法进行纯化。制备、分离和纯化 本文所描述的这些有机化合物，以及对所示合成进行修饰在有机合成领 域技术人员的知识范围内。例如，本发明化合物可这样合成：在反应方 案1所示的任何三个步骤中，使用过量任何伯胺或仲胺单体，这样过量 单体既起三嗪母核的取代基的作用，又起碱的作用，在这样的情况下， 可不用使用碱i-Pr2Net。

在反应方案1中，可用如R1-R6基团所示的官能团将侧氨基取代。 侧氨基的官能化程度由结构和胺单体的复杂性决定，并且将影响 N2，N4，N6三(氨基-取代的)-1，3，5-三嗪化合物的整个分子多样性。在本 发明中可使用多种胺单体。一旦与三嗪母核键合，根据在氮原子上的取 代程度，侧氨基可描述为仲取代或叔取代的。

表2给出了本发明的库I-III的各种N2，N4，N6-三(氨基)-1，3，5- 三嗪化合物的结构式以及用于制备化合物的胺前体单体。实施例1-5 中详细描述了一般方法和合成方法。其中表2中还列出了在反应方案1 中加入各种单体的顺序，其中首先加入单体1，然后加入单体2，之后 加入单体3。虽然不想受缚于下列陈述，但是据信加入顺序很重要，因 为每一合成步骤必须涉及单体与不同三嗪气体的反应。也就是说，如反 应方案1所示，单体1与氰尿酰氯反应，单体2与氨基二氯(三嗪)反应， 单体3与二氨基氯(三嗪)反应。因此，使用单体的顺序基于一般合成原 则，即合成反应方案中使用的单体1-3的相对亲核性和/或碱性一般应 当从单体1到单体3是增加的。该策略使得亲核性和/或碱性最强的胺 单体与位阻拥挤较严重以及估计反应性较弱的二氨基氯(三嗪)反应，其 较强的反应性可有助于反应进行完全。在某些情况下，有一种以上的单 体加入顺序可提供所需产物，但是表2中提供的反应顺序代表目前已知 的最佳合成方法。

应当注意，仅在一般意义上，在上面一般结构中作为NA、NB和NC 显示的取代基相当于N2，N4，N6-三(氨基)三嗪化合物的实际N2，N4，N6命名 原则。因为其中N2、N4和N6取代基在三嗪母核上被指定为2-、4-或6- 位的顺序取决于分子中每个氨基的名称，一个特定氨基并不总是作为 N2、N4或N6取代基显示，即使当在一个位置上只有一个取代基被进行置 换时也是如此。例如，表2中的很多化合物既含有环庚基氨基也含有3- 氟-4-甲氧基苯基氨基，这些基团被命名为三嗪母核上的第三个取代基， 并且在不同的2-、4-或6-位上。结果是，在上面结构中，根据一个在 NA、NB或NC位(而不是N2、N4或N6位)上的可置换的氨基来讨论合成，同 时让其它氨基保持恒定。此外，应当注意，在表、权利要求书和说明书 中使用的化合物命名是用Beilstein’s AutonomTM 4.01.188以及 Beilstein’s AutonomTM的早期CD“独立”版本，Autonom 2000典型地 作出的。一般情况下，使用以该方式作出的化合物命名，无论化合物命 名是IUPAC、CAS、Beilstein还是其它命名原则。然而，在每种情况下， 命名明确地确定了所指定的化合物。

A.衍生自单体1的氨基

在反应方案1中显示的单体与三嗪母核的反应顺序是单体1、单体 2和单体3，它们以该顺序加入。因此，氨基二氯(三嗪)是用单体1与 氰尿酰氯形成的。对于第一个衍生自单体1和氰尿酰氯的侧氨基，建议 使用的单体1胺包括但不总是芳基胺，具体来说有苯基、萘基、萘基烷 基、喹啉基、杂芳基衍生物等。

用于生成N2，N4，N6-三(氨基-取代的)-1，3，5-三嗪化合物中第一个 侧氨基的单体1的具体实例及其[化学文摘登记号]包括但不限于4-氯 苯胺[106-47-9]、3，4-亚乙二氧基苯胺[22013-33-8]、4-溴苯胺 [106-40-1]、4-氨基苯甲酸乙酯[94-09-7]、4-氟-苯胺[371-40-4]、4- 氨基联苯[92-67-1 ]、3-氟苯胺[372-19-0]、2-氨基萘[91-59-8]、3- 氯苯胺[108-42-9]、4-吗啉代苯胺[2524-67-6]、3-溴苯胺[591-19-5]、 4’-氨基乙酰苯胺[122-80-5]、3-氨基苯甲酸乙酯[582-33-2]、间氨基 乙酰苯胺[102-28-3]、2-氟苯胺[348-54-9]、间甲氧基苯胺[536-90-3]、 2-氯苯胺[95-51-2]、对乙氧基苯胺[156-43-4]、2-溴苯胺[615-36-1]、 4-(甲硫基)苯胺[104-96-1]、3，4-(亚甲二氧基)苯胺[14268-66-7]、2- 氨基吡啶[504-29-0]、邻甲苯胺[95-53-4]、2，4-二氟-N-甲基苯胺 [138564-16-6]、4-苯氧基苯胺[139-59-3]、N-苯基甘氨腈[3009-97-0]、 间甲苯胺[108-44-1]、3-氯-N-甲基苯胺[7006-52-2]、对甲苯胺 [106-49-0]、2-(甲基氨基)三氟甲苯、4-氯-N-甲基苯胺[932-96-7]、 4-氨基苄腈[873-74-5]、3-苯氨基丙腈[1075-76-9]、丁卡因[94-24-6]、 N-甲基对甲氧基苯胺[5961-59-1]、3-氯对甲氧基苯胺[5345-54-0]、苯 甲酰磺胺[127-71-9]、3-氨基喹啉[580-17-6]、1-氨基-4-溴萘 [2298-07-9]、6-氨基喹啉[580-15-4]、1-氨基-4-氯萘[4684-12-2]、 8-氨基喹啉[578-66-5]、S-(-)-1-(2-萘基)乙胺[3082-62-0]、3，4-二 氯苯胺[95-76-1]、3，4-二氟苯胺[3863-11-4]、N-甲基-4-(三氟甲氧基) 苯胺[41419-59-4]、4-(三氟甲氧基)苯胺[461-82-5]、2-氨基-4-甲基 噻吩-3-甲酰胺[4651-97-2]、N，N-二乙基-N’-苯乙二胺[1665-59-4]、 1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌嗪盐酸盐[94520-33-9]、2-氯-N’，N’-二乙 基-1，4-苯二胺一盐酸盐[196938-07-5]、4-氨基苯甲酸2-(二甲基氨基) 乙基酯[11012-47-2]、N，N-二甲基-1，4-苯二胺[1665-95-4]。

B.衍生自单体2的氨基

在N2，N4，N6-三(氨基-取代的)-1，3，5-三嗪化合物的合成中，单体2 与预形成的氨基二氯(三嗪)的反应生成中间体二氨基氯(三嗪)。因此， 对于第二个侧氨基与三嗪母核的键合，建议使用的单体2胺包括胺类化 合物，具体来说有烷基(C1-C12直链或支链)、环烷基(C3-C10环大小)、氮 杂环(C2-C10)和苄基胺衍生物。环烷基和氮杂环胺的环以及苄基衍生物 的苯基环可任选被一个或多个基团或基团组合取代，所述基团是例如烷 基、链烯基、炔基、苯基、苄基、卤素、氰基、硝基、羟基、巯基、烷 氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、烷基氨基、芳基 氨基、酰基、羧基、酰氨基、磺酰氨基、磺酰基、硫酸酯、磺酸、吗啉 代、硫代吗啉代、哌嗪基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、 磷酸酯、膦酸、膦酸酯等。这些基团可以以标准有机合成中使用的保护 或未保护的形式存在。

此外，具有立体中心的所述任何单体包括对映体、非对映体和旋光 异构体，旋光异构体可以是对映体或外消旋形式，或者是立体异构体的 混合物。这包括作为使用旋光性、不等边(scalemic)或外消旋单体的结 果而形成的本文所描述的所有1，35-三嗪衍生物及其立体异构体。

在N2，N4，N6-三(氨基-取代的)-1，3，5-三嗪化合物的合成中，用于挂 接上第二个侧氨基的单体2的具体实例及其相应的[化学文摘登记号]包 括但不限于乙胺[75-04-07]、环己烷甲基胺[3128-02-8]、叔丁基胺 [75-64-9]、糠基胺[617-89-0]、苄基胺[100-46-9]、2，2，2-三氟乙胺 [753-90-2]、环辛基胺[5452-37-9]、N，N-二甲基乙二胺、环己基胺 [108-91-8]、环戊基胺[1003-03-8]、1-(2-氨基乙基)哌啶 [26116-12-1]、1-乙酰基哌嗪[13096-96-3]、吡咯烷[123-75-1]、1- 胡椒基哌嗪[32231-06-4]、六亚甲基亚胺[111-49-9]、1-(2-吡啶基) 哌嗪[34803-66-2]、十氢喹啉(顺式/反式)[2051-28-7]、1-甲基哌嗪 [109-01-3]、1-(3-氨基丙基)咪唑[5036-48-6]、1-哌嗪甲酸乙酯 [120-43-4]、4-甲基环己基胺(顺式/反式)[6321-23-9]、1-(3-氨基丙 基)-1-吡咯烷[7663-77-6]、2-(氨基甲基)乙基吡咯烷[26116-12-1]、 (+)-S-2-(甲氧基甲基)吡咯烷[63126-47-6]、1-(吡咯烷基羰基甲基) 哌嗪[339890-45-4]。

C.衍生自单体3的氨基

在N2，N4，N6-三(氨基-取代的)-1，3，5-三嗪化合物的合成中，单体3 与预形成的二氨基氯(三嗪)的反应是最后一个步骤。因此，对于第三个 侧氨基与三嗪母核的键合，建议使用的单体3包括胺类化合物，具体来 说有烷基(C1-C12直链或支链)、环烷基(C3-C10环大小)、氮杂环(C2-C10) 和苄基胺衍生物。这些环烷基、氮杂环胺的环以及苄基衍生物的苯基环 可任选被一个或多个基团或基团组合取代，所述基团是例如烷基、链烯 基、炔基、苯基、苄基、卤素、氰基、硝基、羟基、巯基、烷氧基、芳 氧基、卤代烷氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、酰 基、羧基、酰氨基、磺酰氨基、磺酰基、硫酸酯、磺酸、吗啉代、硫代 吗啉代、哌嗪基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、磷酸酯、 膦酸、膦酸酯等。

此外，具有立体中心的所述任何单体包括对映体、非对映体和旋光 异构体，旋光异构体可以是对映体或外消旋形式，或者是立体异构体的 混合物。这包括作为使用旋光性、不等边(scalemic)或外消旋单体的结 果而形成的本文所描述的所有1，3，5-三嗪衍生物及其立体异构体。

在N2，N4，N6-三(氨基-取代的)-1，3，5-三嗪衍生物的合成中，用于在 N2，N4，N6-三(氨基-取代的)-1，3，5-三嗪的合成中挂接上第三个侧氨基 的单体3的具体实例及其相应的[化学文摘登记号]包括但不限于乙胺 [75-04-07]、环己烷甲基胺[3128-02-8]、叔丁基胺[75-64-9]、糠基胺 [617-89-0]、苄基胺[100-46-9]、2，2，2-三氟乙胺[753-90-2]、环辛基 胺[5452-37-9]、N，N-二甲基乙二胺、环己基胺[108-91-8]、环戊基胺 [1003-03-8]、1-(2-氨基乙基)哌啶[26116-12-1]、1-乙酰基哌嗪 [13096-96-3]、吡咯烷[123-75-1]、1-胡椒基哌嗪[32231-06-4]、六亚 甲基亚胺[111-49-9]、1-(2-吡啶基)哌嗪[34803-66-2]、十氢喹啉(顺 式/反式)[2051-28-7]、1-甲基哌嗪[109-01-3]、1-(3-氨基丙基)咪唑 [5036-48-6]、1-哌嗪甲酸乙酯[120-43-4]、4-甲基环己基胺(顺式/反 式)[6321-23-9]、1-(3-氨基丙基)-1-吡咯烷[7663-77-6]、2-(氨基甲 基)乙基吡咯烷[26116-12-1]、(+)-S-2-(甲氧基甲基)吡咯烷 [63126-47-6]、1-(吡咯烷基羰基甲基)哌嗪[339890-45-4]。

除了用于制备表2的化合物的平行合成方法以外，表1还提供了单 独合成而不是用平行合成制得的其它示例性本发明三嗪化合物。实施例 给出了这些化合物的完整制备和特征，实施例还给出了所有合成方法的 详细描述。用于这些化合物的合成方法既包括在氰尿酰氯上的氯化物基 团的取代，也包括一旦键合在三嗪母核上后，对这些基团进行的各种化 学修饰。特别是，本发明还包括如在实施例和表中提供的中性三嗪化合 物的盐。

在本发明另一个方面，本发明化合物包括但不限于具有下式的化合 物：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；或具有最高达10个碳原子的环烷基；

X1选自m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、m-SO2R1或m-SO2OR1， 或者X1和X2一起是稠合的苯、吡啶或二氧杂环己烷环；

X2选自p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-OM或p-SM，其中M选自Li、Na、 K、Mg或Ca；

Y1选自具有最高达10个碳原子的环烷基；具有最高达10个碳原子 的直链或支链烷基；CH2R2，其中R2是具有最高达10个碳原子的环烷基； 或

其中n是1或2；

AY2选自卤素或OR1，或者

A是NR1，且Y2选自R1、

包含上式所示化合物的组合物，以及上式所示化合物的混合物或组 合也包括在本发明范围内。

在本发明另一个方面，本发明化合物包括但不限于具有下式的化合 物：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；具有最高达10个碳原子的环烷基；或芳基；

E是CH或N；

n是0-3的整数；

X1选自-H、m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、m-SO2R1或m-SO2OR1， 或者X1和X2一起是稠合的苯或吡啶环；

X2选自-H、o-Cl、o-Br、p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-F、p-Cl、p-Br、 p-CF3、p-C(O)OR1、p-OM或p-SM，其中M选自Li、Na、K、Mg或Ca；

A选自NR1或O，其中当A是NR1时，Y1选自具有最高达10个碳原子 的环烷基、具有最高达10个碳原子的直链或支链烷基或

并且当A是O时，Y1选自R1或CH2R1；或者AY1选自卤素

或

且DY2是卤素，或者D是NR1，且Y2选自

或(CHR1)xNR12，其中x是1-6的整数。

包含上式所示化合物的组合物，以及上式所示化合物的混合物或组 合也包括在本发明范围内。

在本发明另一个方面，本发明化合物包括但不限于具有下式的化合 物：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；具有最高达10个碳原子的环烷基；或(CH2)xCN，其中x是0 -6的整数；

E是CH或N；

n是0-3的整数；

X1选自-H、m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、m-SO2R1、m-SO2OR1、 m-NC(O)R1或o-F，或者X1和X2一起是稠合的苯、吡啶或二氧杂环己烷 环；

X2选自-H、o-Cl、o-Br、o-CF3、o-R1、p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-F、 p-Cl、p-Br、p-CF3、p-CN、p-C(O)OR1、p-NC(O)R1、p-(4-吗啉基)或p-(4- 甲基-1-哌嗪基)；

AY1是卤素，或者A是NR1或O，且Y1选自具有最高达10个碳原子 的环烷基、被R1取代的具有最高达10个碳原子的环烷基、具有最高达 10个碳原子的直链或支链烷基、CH2R1、(CHR1)yOR1，其中y是1-6的整 数，

或者AY1一起是

其中x是3-5的整数；且

DY2是卤素，或者D是NR1，且Y2选自

具有最高达10个碳原子的环烷基、被R1取代的具有最高达10个碳 原子的环烷基、具有最高达10个碳原子的直链或支链烷基、CH2R1、

其中x是3-5的整数，

CH2CF3、(CHR1)zZ1，其中z是1-6的整数，且Z1选自NR12、

其中x是3-5的整数，

或

或者NY2R1一起选自

其中Z2选自R1、C(O)R1、C(O)OR1、吡啶基、芳基、

或

其中q是0-6的整数。

包含上式所示化合物的组合物，以及上式所示化合物的混合物或组 合也包括在本发明范围内。

在本发明另一个方面，本发明化合物包括但不限于具有下式的化合 物：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；或具有最高达10个碳原子的环烷基；

X1选自H、m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、m-SO2R1或m-SO2OR1；

X2选自o-R1、p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-OM或p-SM，其中M选自Li、 Na、K、Mg或Ca；

Y1选自具有最高达10个碳原子的环烷基或

且

Y2选自具有最高达10个碳原子的直链或支链烷基、具有最高达10 个碳原子的环烷基或

且R2是-H；或者NY2R2一起选自

其中x是3-5的整数，

其中q是0-6的整数，或

其中Z2选自R1或

包含上式所示化合物的组合物，以及上式所示化合物的混合物或组 合也包括在本发明范围内。

在本发明另一个方面，本发明化合物包括但不限于具有下式的化合 物：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；或具有最高达10个碳原子的环烷基；

X1在每次出现时独立地选自-H、m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、 m-SO2R1或m-SO2OR1；

X2在每次出现时独立地选自o-CH3、p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-OM或 p-SM，其中M选自Li、Na、K、Mg或Ca；

Y1选自具有最高达10个碳原子的环烷基；

其中n是1或2；或

且

Y2选自

或

包含上式所示化合物的组合物，以及上式所示化合物的混合物或组 合也包括在本发明范围内。

上面给出的这些化合物和组合物不是限制性的，仅仅是本发明包括 的化学结构和结构式的代表。

可药用盐

对于所述N2，N4，N6-三(氨基-取代的)-1，3，5-三嗪化合物，术语“无 毒可药用盐”或“可药用盐”是指保留或提高了本发明所述化合物的生 物活性的1，3，5-三嗪化合物的盐或络合物。盐的实例是衍生自1，3，5- 三嗪化合物或衍生物与无机酸或有机酸的反应的盐，以及通过将三胺衍 生物的胺氮去质子化而生成的化合物。

无机酸的实例包括但不限于盐酸、氢溴酸、氢碘酸、氢氟酸、硝酸、 亚硝酸、高氯酸、氯酸、次氯酸、亚氯酸、磷酸、硫酸、亚硫酸和碳酸。 有机酸的实例包括但不限于乙酸、苯磺酸、苯甲酸、丁酸、樟脑磺酸、 柠檬酸、乙磺酸、富马酸、戊二酸、2-羟基乙酸(其中烷基是c＝3-7， 且因此具有羟基的衍生物)、2-羟基烷基磺酸(其中烷基是c＝3-7，且 因此具有羟基的衍生物)、乳酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、萘磺酸、 草酸、棕榈酸、丙酸、邻苯二甲酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、 酒石酸、对甲苯磺酸和氨基酸(例如丙氨酸、N-乙酰基甘氨酸、精氨酸、 天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸和苯丙氨酸)。

本文所述盐的实例包括通过将三胺衍生物的胺氮与强碱进行去质 子化反应以形成酰氨基盐、化合物或络合物而生成的化合物。例如，这 些化合物包括通过下述方法获得的那些：将起Bronsted酸或路易斯酸 作用的1，3，5-三嗪化合物或衍生物与无机碱或有机碱相互作用或进行 化学反应以形成离子和/或络合物质。无机碱的实例包括但不限于金属 碱或有机金属碱例如烷基锂或金属氢化物，其中金属抗衡离子包括但不 限于铝、钡、钙、锂、镁、钾、钠和锌。

有机碱的实例包括但不限于烷基和芳基胺以及氨。包括通过将无机 酸(例如路易斯酸)和金属抗衡离子以及起Bronsted碱或路易斯碱作用 的1，3，5-三嗪化合物或衍生物合并或相互作用/反应以形成离子和/或 络合物质而生成的盐。对于上述所有盐和络合物，包括水合或溶剂化形 式的化合物。

此外，本发明还包括无毒且可药用的这些三嗪衍生物的盐，如季铵 盐，例如[-N+R2R’]X-，其中R和R’代表氢或有机基团(例如烷基、链 烯基、炔基、芳基等)，且X是抗衡离子(卤素、氢氧化物、醇化物、硫 醇化物或者有机酸或无机酸的共轭碱)。对于上述所有盐和络合物，包 括水合或溶剂化形式的化合物。

III.抗增殖活性

本发明一个实施方案包括方法和组合物，其中包含可用于治疗和预 防病症或疾病的化合物，所述病症或疾病具有不需要的细胞增殖作为疾 病或病症的一个方面，或者是细胞增殖的结果。例如，许多血管疾病例 如心血管疾病，器官移植后发病，血管闭塞病症，包括但不限于新内膜 增生、再狭窄、移植物血管病、心脏同种移植物血管病、动脉粥样硬化 和动脉硬化，是由侧索损害引起的或具有侧索损害，而侧索损害又是由 不需要的细胞增殖引起的。平滑肌细胞(SMC)增生是动脉粥样硬化发展 中的主要事件，并且也是血管手术例如血管成形术和冠状动脉旁路手术 后众多衰竭事件的原因，特别是由于再狭窄。作为对局部损伤的反应的 动脉壁SMC增殖是众多血管增殖病症的主要特征。新内膜增生通常是在 各种形式的血管损伤之后发生的，并且是静脉移植物对收获和外科移植 到高压动脉循环内的反应的主要组成部分。作为对局部损伤的反应的 SMC增殖是血管增殖病症例如动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄的主 要特征。

本发明的一个方面涉及用于治疗和预防平滑肌细胞(SMC)增殖的方 法和组合物，优选包括具有抗细胞增殖活性的组合物和化合物。这些化 合物和包含这样的化合物的组合物称为抗增殖化合物或组合物。一种或 多种这些化合物的至少一种活性是，所述化合物具有影响蛋白聚糖合 成，包括诱导和合成蛋白聚糖以及蛋白聚糖的活性片段的活性。因此， 本发明一种或多种化合物和组合物的活性的一个方面包含诱导HSPG生 成和调节SMC(平滑肌细胞)增殖的分子。

具有至少影响细胞增殖活性的本发明化合物如表3所示。该表所示 化合物具有如通过其中提出的分析方法所测定的影响细胞增殖的活性。 本文表中目录下的化合物不应当视为限制性的，因为包括在表中的化合 物具有至少表内所示的活性，并且可具有多种或其它活性。表之所以不 应视为限制性的还是因为，这些是最佳的具有该活性的本文所公开的化 合物，具有至少表中所示特定活性的代表性化合物列在表中。一种或多 种本文所公开的化合物具有至少可用于治疗疾病的活性。

表现出至少该活性和用途的化合物的实例如下面的结构所示：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；或具有最高达10个碳原子的环烷基；

X1选自m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、m-SO2R1或m-SO2OR1， 或者X1和X2一起是稠合的苯、吡啶或二氧杂环己烷环；

X2选自p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-OM或p-SM，其中M选自Li、Na、 K、Mg或Ca；

Y1选自具有最高达10个碳原子的环烷基；具有最高达10个碳原子 的直链或支链烷基；CH2R2，其中R2是具有最高达10个碳原子的环烷基； 或

其中n是1或2；

AY2选自卤素或OR1，或者

A是NR1，且Y2选自R1、

表现出至少该活性和用途的化合物的其它实例如表3所示，表3中 也给出了化合物的活性。表3中使用的活性等级如下(数值是包括性的)： “+++”代表小于约3μM的IC50；“++”代表约3-约7μM的IC50；“+” 代表大于约7μM的IC50。此外，如果没有具体表明的话，任何原子— 不论是碳原子还是杂原子为达到表3中结构所示的其通常化学价所需的 任何氢原子都应当可以推断出。

除了上述化合物以外，下列化合物和包含这些化合物的组合物在抗 增殖测定(基底膜蛋白聚糖)中有活性。除了别的以外，这些化合物和包 含这些化合物的组合物一般可用于治疗与增殖活性有关的心血管病症。 具体来说，这些化合物包括N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-甲 基-N6-(1-甲基哌啶-4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺和N2-环庚基-N4-甲 基-N4-(1-甲基哌啶-4-基)-N6-萘-2-基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺。使用 在表3中使用的如上所述的相同活性等级，第一个化合物N2-环庚基 -N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基哌啶-4-基)-1，3，5-三 嗪-2，4，6-三胺的特征是表现出中级或中等活性，而第二个化合物N2- 环庚基-N4-甲基-N4-(1-甲基-哌啶-4-基)-N6-萘-2-基-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺表现出高活性。

如本文所用的，当提及蛋白聚糖时，包括整个分子或片段。例如， 基底膜蛋白聚糖是指整个基底膜蛋白聚糖分子或其片段。不同的基底膜 蛋白聚糖片段可对细胞具有相同或不同的作用，并且作用可以与整个基 底膜蛋白聚糖分子对细胞的作用相同或不同。本发明包括这些片段和活 性，并且本发明化合物可具有至少一种调节或影响片段活性或整个分子 活性的活性。虽然在本文中具体用基底膜蛋白聚糖进行描述，但是应当 指出，本文所描述的组合物、方法和测定同样适用于其它蛋白聚糖，包 括HSPG，并包括但不限于硫酸软骨素(例如A、B和C)、硫酸皮肤素、 多配体蛋白聚糖和磷脂酰肌醇蛋白聚糖。

第10/091,357号美国专利申请中描述了用于鉴定和筛选诱导蛋白 聚糖例如HSPG(硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)合成的一种或多种化合物或分 子的方法，该申请全文引入本文以供参考。测定化合物体内作用的方法 也记载于所引用的参考文件中，并且是本领域技术人员已知的。一般情 况下，方法包括加入这样的化合物，以分析和测定HSPG合成，包括但 不限于多配体蛋白聚糖、磷脂酰肌醇蛋白聚糖和基底膜蛋白聚糖，例如 多配体蛋白聚糖1、2和4；和磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1的生成。可用于 测定本发明化合物活性的其它测定方法包括用于测定基底膜蛋白聚糖 合成诱导的其它方法。例如，在一个测定中，通过一些诱导剂来诱导基 底膜蛋白聚糖，并测定反应。然后可将本发明化合物加到平行测定中， 并确定对基底膜蛋白聚糖诱导的作用。使用这样的方法，能够确定出可 抑制基底膜蛋白聚糖、增强基底膜蛋白聚糖诱导或根本不具有作用的化 合物。能有效作为治疗剂的化合物可用于患有细胞增殖疾病方面例如血 管相关病症或SMC增殖病变的动物、人或患者。

确定具有SMC作用的化合物的另一种测定方法包括向生长培养基或 不含血清的培养基中加入估计可以引起平滑肌细胞的SMC增殖的组合 物。可通过本领域技术人员已知的方法，例如向分裂细胞的DNA中掺入 标记的核苷酸来测定细胞增殖的改变，并与未用化合物处理的细胞的增 殖进行比较。其它测定方法包括通过测定HSPG的量或量的改变，例如 用测定HSPG的ELISA测定HSPG的量或量的改变来直接确定HSPG合成 的水平，并与未处理的细胞中HSPG合成的量进行比较。本发明可以采 用其它间接或直接测定方法，并且它们是本领域技术人员已知的。例如， 这样的方法包括但不限于测定RNA水平、RT-PCR、Northern印迹、基 于Western印迹启动子的测定，以确定影响一种或多种蛋白聚糖的化合 物，和在或不在所测试的化合物存在下，测定由得自表达蛋白聚糖的细 胞的重组蛋白、部分纯化的蛋白或裂解物所表明的蛋白聚糖生物活性。

鉴定和确定一种或多种本发明化合物的活性的测定方法包括鉴定 与基因启动子区域相互作用，或相互作用和影响与启动子区域相互作 用、并且在蛋白表达的转录调控中很重要的蛋白的化合物。例如，如果 基底膜蛋白聚糖是蛋白，则该方法通常包括载体，所述载体包含基底膜 蛋白聚糖基因的调控序列，以及在启动子-报道基因构建物中由调控序 列例如酶控制的指示基因区域。指示基因区域的蛋白产物在本文中称为 报道酶或报道蛋白。基底膜蛋白聚糖序列的调控区域包括大约-4000至 +2000的核苷酸范围，其中转录起始位点是+1，相对于转录起始位点， 更优选-2500至+1200，最优选-1500至+800的核苷酸范围。

用包含启动子-报道基因构建物的载体将细胞转染，然后用包含至 少一种本发明化合物的一种或多种组合物处理。例如，用包含估计能影 响基底膜蛋白聚糖转录的化合物的组合物处理转染的细胞，并将基底膜 蛋白聚糖调控序列活性水平与未用化合物处理的细胞中的活性水平进 行比较。基底膜蛋白聚糖调控序列活性水平是通过测定报道蛋白的量或 者测定由调控序列控制的报道酶活性来确定的。报道蛋白的量或报道酶 活性的增加表明通过正面影响启动子对基底膜蛋白聚糖有刺激作用，而 报道蛋白的量或报道酶活性的下降表明对启动子，并因此对基底膜蛋白 聚糖有负面影响。

此外，本发明包括可用于基因治疗方法和组合物的方法和组合物， 例如包括施用包含影响HSPG，特别是基底膜蛋白聚糖的合成或表达的核 酸的组合物的基因治疗方法。第10/091,357号美国专利申请中描述了 这样的方法和组合物，该申请全文引入本文以供参考1。

(1RICK-如何应用本发明-治疗疾病的化合物？没有描述或支持 影响HSPG合成的基因转染。我们应当摘录这一段并将作为引用的申请 吗？(18631-0141))。

本发明包括用于调节蛋白聚糖合成、表达和将SMC保持在静息 状态的方法和组合物。本发明方法和组合物包括治疗和预防涉及细胞增 殖例如SMC增殖的血管疾病和病变。这样的方法和组合物包括抑制平滑 肌细胞(SMC)生长和增殖，以及用于诱导平滑肌细胞静息的方法。本发 明实施方案包括用于诱导蛋白聚糖合成，特别是HSPG合成和表达，包 括但不限于诱导HSPG例如多配体蛋白聚糖、磷脂酰肌醇蛋白聚糖和基 底膜蛋白聚糖，优选基底膜蛋白聚糖合成和基因表达的方法和组合物。 基底膜蛋白聚糖是血管基质中的主要细胞外HSPG。其与细胞外基质蛋 白、生长因子和受体相互作用。基底膜蛋白聚糖还存在于不是血管的基 底膜和其它细胞外基质结构中。

本发明化合物的活性作用于细胞或组织以提高这些细胞或组织的 蛋白聚糖合成，或者可以直接作用于一种或多种蛋白聚糖以调节生物活 性或提高蛋白聚糖自身，例如基底膜蛋白聚糖的稳定性。本发明还包括 的活性是，通过增加蛋白聚糖基因转录，提高蛋白聚糖mRNA的生物稳 定性或提高蛋白聚糖mRNA翻译成蛋白来增加一种或多种蛋白聚糖的生 物合成。其它活性包括可阻断或降低抑制蛋白聚糖活性的物质或蛋白的 作用的化合物的活性。

本发明包括用于治疗和预防平滑肌细胞增殖，包括血管闭塞病变的 方法和组合物。这样的方法包括施用包含能够抑制SMC增殖的化合物的 组合物，例如包含能抑制SMC增殖的本文公开的化合物的组合物。有效 抑制SMC增殖的这样的化合物的给药是对被怀疑患有或患有例如血管疾 病或进行血管成形术或其它破坏内皮的手术的人和动物给药。给这样的 人和动物以安全有效的剂量，包括但不限于本文所述范围的剂量施用有 效量的化合物。给药途径包括但不限于本文所公开的那些。如本文所公 开，包含这样的化合物的组合物可以与其它治疗剂联合使用，或者在包 括步骤例如改变患者活动，包括但不限于改变锻炼或饮食的方法中使 用。

本发明化合物可用于治疗或预防细胞、组织、器官、动物或患者中 的至少一种心血管疾病，包括但不限于血管闭塞损伤，包括动脉粥样硬 化、移植物血管病、心脏同种移植物血管病、再狭窄、冠状移植术后的 移植物动脉粥样硬化、心脏昏迷综合征、心肌梗塞、充血性心力衰竭、 中风、缺血性中风、出血、动脉硬化、动脉粥样硬化、再狭窄、糖尿病 性动脉硬化疾病、高血压、动脉高血压、肾血管高血压、晕厥、中风、 心血管系统梅毒、心力衰竭、肺原性心脏病、原发性肺高血压、心律失 常、心房性异位搏动、心房扑动、心房纤维性颤动(持续或阵发性的)、 灌注后综合征、心肺旁路手术炎性反应、混乱或多灶性心房性心搏过速、 有规律的窄QRS心搏过速、特殊心律失常、心室纤维性颤动、希氏束心 律失常、房室传导阻滞、束支性传导阻滞、心肌缺血病症、冠状动脉疾 病、心绞痛、心肌梗塞、心肌病、扩张充血性心肌病、限制性心肌病、 心瓣膜病、心内膜炎、心包疾病、心脏肿瘤、主动脉和外周动脉瘤、主 动脉切开、主动脉炎症、腹主动脉及其分支闭塞、外周血管疾病、闭塞 性动脉病症、外周动脉粥样硬化疾病、闭塞性血栓动脉炎、功能性外周 动脉病症、雷诺氏现象和疾病、手足发绀、红斑性肢痛病、静脉疾病、 静脉血栓形成、静脉曲张、动静脉瘘、淋巴水肿、脂肪水肿、不稳定的 心绞痛、再灌注损伤、泵后综合征、缺血再灌注损伤等。这样的方法可 任选包括给需要这种调节、处理或治疗的细胞、组织、器官、动物或患 者施用有效量的包含至少一种化合物的组合物或药物组合物。

可用本发明化合物治疗的与蛋白聚糖有关的疾病包括但不限于遗 传性多发性外生骨疣，通常分别称为Huler’s综合征、Hunter’s综 合征、Sanfilippo’s综合征和Sly’s综合征的I-III和VII型粘多 糖病，阿尔茨海默氏病、Simpson-Golabi-Behmel综合征、与成纤维细 胞生长因子有关的疾病、单纯性疱疹病毒、登革热、帕金森病、肾疾病、 肌肉营养不良、Schwarts-Jampel综合征、蛋白性肾小球病、肌强直性 和骨骼营养不良、脊柱后侧凸、dyssegmental dysplasia、 Silverman-Handmaker症、软骨发育不全、牙周炎、类风湿性关节炎和 骨关节炎、Gerstmann-Straussler综合征、Creutzfeldt-Jakob病、瘙 痒病、癌症、Happle综合征、黄斑营养不良、骨疾病、角膜疾病、白细 胞介导的疾病、胶原纤维装配障碍和冠心病以及其它血管病症。

IV.糖苷酶调节活性

本发明还包括方法和组合物，其中包含本文所述化合物，所述化合 物具有与调节糖苷酶有关的活性，并因此影响糖苷酶的底物。糖苷酶以 及与其底物例如蛋白聚糖或糖化蛋白在一起的活性是多种疾病的特征， 所述疾病是例如血管病症，包括上述病症，上述与蛋白聚糖有关的疾病， 与血管组分成分相关的疾病，包括但不限于肾病、缺血性心脏病、心血 管疾病、普遍性血管疾病、增殖性视网膜病和大血管病，炎性疾病和代 谢疾病例如癌症、细胞增殖病症和实体瘤以及血液肿瘤或其它肿瘤病 症。能影响糖苷酶底物浓度的本文所述化合物可在治疗这样的血管、炎 性、转移和系统疾病的方法中使用。

本发明一个方面包括用于调节酶例如糖胺聚糖降解酶的方法和组 合物，所述酶可影响蛋白聚糖水平、量或活性或者可被蛋白聚糖水平、 量或活性影响。例如，本发明包括方法和组合物，其中包含可调节酶的 化合物，所述酶包括但不限于类肝素酶、软骨素酶、硫酸类肝素内切糖 苷酶、硫酸类肝素外切糖苷酶、多糖裂合酶、角蛋白酶、透明质酸酶、 葡聚糖酶、淀粉酶、糖苷酶或其它蛋白聚糖降解酶，所述方法和组合物 可用于治疗病症例如糖尿病性血管病、癌症、炎性疾病、自身免疫性疾 病和心血管疾病。例如，本发明包括可抑制、损害或下调蛋白聚糖降解 酶活性的化合物的方法和组合物。

蛋白聚糖例如HSPG是血管内皮下细胞外基质和基底膜的重要成分。 Rosenberg等人，99，J.CLIN.INVEST.2062-70(1997)。基底膜是 连续的细胞外基质片，由胶原和非胶原蛋白以及蛋白聚糖组成，它们将 实质细胞与下面的间质结缔组织分隔开。它们具有特征性的渗透性，并 且在保持组织结构中起作用。

除了HSPG以外，基底薄层还主要由粘连蛋白、纤连蛋白、层粘连 蛋白和玻连蛋白的复合网状结构组成。Wight等人，6 CURR.OPIN. LIPIDOL.326-334(1995)。硫酸类肝素(HS)是基底薄层的重要结构成 分。在基质内，每一粘连蛋白与HSPG的HS链相互作用。因此，HSPG 起转移性和炎性细胞外渗的载体的作用。由转移性肿瘤癌细胞和炎性细 胞产生的内切糖苷酶类肝素酶将HS裂解，结果破坏了层粘连蛋白的滤 过性质。此外，HS降解可有助于细胞外基质的装配，并因此通过让血细 胞进入血流来促进细胞迁移。Vlodavsky等人，12 INVASION METASTASIS 112-127(1992)。

据描述，在多种组织和细胞，包括肝脏、胎盘、血小板、成纤维细 胞、嗜中性白细胞、激活的T和B-淋巴细胞、单核细胞和内皮细胞中存 在类肝素酶活性(7-16)。Nakajima等人，(31)CANCER LETT，277-283 (1986)；Nakajima等人，36 J.CELL.BIOCHEM.157-167(1988)； Ricoveri等人，46 CANCER RES.3855-3861(1986)；Gallagher等人， 250 BOCHEM.J.719-726(1988)；Dempsey等人，10 GLYCOBIOLOGY 467 (2000)；Goshen等人，2 MOL.HUM.REPROD.679(1996)；Parish等 人，76 IMMUNOL CELL BIOL.104-113(1998)；Gilat等人，181 J.EXP. MED.1929-1934(1995)；Graham等人，39 BIOCHEM.MOL.BIOL.INT. 56371(1996)；Pillarisetti等人，270 J.BIOL.CHEM.29760-29765 (1995)。在血液肿瘤细胞和白细胞的组织侵袭中，一个重要过程涉及其 穿越血管内皮细胞层，以及随后下面的基底层或基底膜和细胞外基质被 一组分泌的蛋白酶和糖苷酶降解。Naka jima等人，220 SCIENCE 611-613 (1983)；Vlodavsky等人，12 INVASION METASTASIS 112-127(1992)。

据表明类肝素酶活性与动物和人肿瘤细胞系的转移可能有关。 Nakajima等人，31 CANCER LETT，277-283(1986)；Nakajima等人，212 Prog CLIN BIOL RES.113-122(1986)；Freeman等人，325 BIOCHEM J. 229-237(1997)；Vlodavsky等人，5 NAT.MED.793-802(1999)；Hulett 等人，5 NAT MED.803-809(1999)。其调节生长因子活性也是已知的。 许多生长因子与存储形式的硫酸类肝素结合，并且在血管生成期间被类 肝素酶解离，从而提高癌细胞的存活比例。

给大鼠注射高转移性乳腺癌细胞后，大鼠中血清类肝素酶水平提高 一个数量级以上。此外，在携带MTLn 3肿瘤的大鼠中，血清类肝素酶活 性与转移程度非常相关。另外，癌症患者中的血清/尿类肝素酶活性提 高了2-4倍，特别是当存在组织转移瘤时更是如此。因为HS裂解对于 转移肿瘤细胞和白细胞越过基底膜似乎是必不可少的，所以类肝素酶抑 制剂的研究给开发出新的高选择性抗转移和抗炎药物提供了可能性。

本发明包括方法和组合物，其中包含可调节类肝素酶活性或其它酶 的活性的化合物，所述其它酶包括但不限于具有糖胺聚糖活性的酶，例 如软骨素酶、硫酸类肝素内切糖苷酶、硫酸类肝素外切糖苷酶、多糖裂 合酶、角蛋白酶、透明质酸酶、葡聚糖酶和淀粉酶。表6中列出了具有 至少调节糖苷酶活性的活性的本发明化合物。该表所示化合物具有如通 过其中提出的分析方法所测定的调节糖苷酶活性的活性。本文表中目录 下的化合物不应当视为限制性的，因为包括在表中的化合物具有至少表 内所示的活性，并且可具有多种或其它活性。表之所以不应视为限制性 的还是因为，这些是最佳的具有该活性的本文所公开的化合物，具有至 少表中所示特定活性的代表性化合物列在表中。一种或多种本文所公开 的化合物具有至少可用于治疗疾病的活性。

表现出至少该活性和用途的化合物的实例如下式所示：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；或具有最高达10个碳原子的环烷基；

X1选自m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、m-SO2R1或m-SO2OR1，

X2选自o-R1、p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-OM或p-SM，其中M选自Li、 Na、K、Mg或Ca；

Y1选自具有最高达10个碳原子的环烷基或

Y2选自具有最高达10个碳原子的直链或支链烷基、具有最高达10 个碳原子的环烷基或

且R2是-H；或者NY2R2一起选自

其中x是3-5的整数，

其中q是0-6的整数，或

其中Z2选自R1或

表现出至少该活性和用途的化合物的其它实例如表6所示，表6中 也给出了化合物的活性。表6中使用的活性等级如下(数值是包括性的)： “+++”代表约70％-约100％的抑制；“++”代表约30％-约40％的 抑制；“+”代表0-约30％的抑制，所有这些都是在5μM化合物浓度 下的抑制。还需注意，任何原子—不论是碳原子还是杂原子为达到表6 中结构所示的其通常化学价所需的任何氢原子都应当可以推断出。

可有效调节糖苷酶活性的化合物或包含这样的化合物的组合物可 用于治疗和/或预防癌症，包括但不限于恶性和非恶性细胞生长、白血 病、急性白血病、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、B-细胞、T-细胞或FAB ALL、急性骨髓性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性淋巴 细胞性白血病(CLL)、发细胞白血病、骨髓发育不良综合征(MDS)、淋巴 瘤、何杰金氏病、恶性淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、Burkitt’s淋巴瘤、 多发性骨髓瘤、卡波济氏肉瘤、结肠直肠癌、胰腺癌、鼻咽癌、恶性组 织细胞增多病、假肿瘤形成综合征/恶性高钙血、实体瘤、腺癌、肉瘤、 恶性黑素瘤、血管瘤、转移性疾病、与癌症有关的骨吸收、与癌症有关 的骨疼痛等。

在本发明另一个方面中，本文所公开的化合物可作为治疗或预防自 身免疫性疾病的手段用于调节类肝素酶活性或其它糖苷酶活性。自身免 疫性疾病一般在下列情况下发生：(1)免疫系统将正常组织上的细胞表 面分子错误地识别为外来分子，(2)趋化因子、细胞因子和淋巴因子的 合成和分泌在疾病根除后没有被切断，或(3)免疫系统对外在感染过度 反应，并破坏大量周围正常组织。

为了在免疫反应中有效，免疫效应细胞必须与血管壁的腔/尖端表 面结合。这是通过免疫效应细胞上的粘连分子与其局部上调的血管组织 内皮细胞衬里上的同族受体在感染位点附近相互作用来实现的。与尖端 表明结合之后并且在进入发炎组织中之前，免疫效应细胞必须突破环绕 血管基底部分的基底膜(BM)和细胞外基质(ECM)，并给予血管形状和强 度。BM和ECM由嵌入在纤维网状组织中的结构蛋白组成，纤维网状组织 主要由含有糖类的复合结构(糖胺聚糖)构成，该复合结构的主要成分是 硫酸肝素蛋白聚糖(HSPG)。为了突破该屏障，免疫效应细胞必须减弱或 破坏该屏障，这是通过局部分泌蛋白酶和类肝素酶来实现的。

因此，使用本发明化合物抑制类肝素酶或其它糖苷酶活性可用来治 疗关节炎和其它自身免疫性疾病。更具体来说，本发明化合物可用于治 疗或预防细胞、组织、器官、动物或患者中的至少一种自身免疫相关疾 病，包括但不限于类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、全身发作 的青少年类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、僵硬性脊椎炎、胃溃疡、 血清反应阴性关节病、骨关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、全身性红 斑狼疮、抗磷脂综合征、虹膜睫状体炎/眼色素层炎/视神经炎、自发性 肺纤维变性、全身性结节性脉管炎/韦格内氏肉芽肿病、类肉瘤病、睾 丸炎/输精管切除术反向过程、过敏性/特应性疾病、哮喘、过敏性鼻炎、 湿疹、过敏性接触性皮炎、过敏性结膜炎、过敏性肺炎、移植、器官移 植物排斥、移植物对宿主疾病、全身性炎性反应综合征、脓毒症综合征、 革兰氏阳性脓毒症、革兰氏阴性脓毒症、组织培养阴性脓毒症、真菌性 脓毒症、嗜中性白细胞减少性发热、尿脓毒症、脑膜炎球菌血症、创伤 /出血、烧伤、离子放射暴露、急性胰腺炎、成人呼吸窘迫综合征、类 风湿性关节炎、酒精引起的肝炎、慢性炎性疾病、局限性回肠炎、镰状 细胞性贫血、糖尿病、肾病、特应性疾病、过敏反应、过敏性鼻炎、枯 草热、常年性鼻炎、结膜炎、子宫内膜异位、哮喘、荨麻疹、全身性 anaphalaxis、皮炎、恶性贫血、溶血病、血小板减少症、任何器官或 组织的移植物排斥、肾移植物排斥、心脏移植物排斥、肝脏移植物排斥、 胰腺移植物排斥、肺移植物排斥、骨髓移植物(BMT)排斥、皮肤同种移 植物排斥、软骨移植物排斥、骨移植物排斥、小肠移植物排斥、婴儿胸 腺移植物排斥、甲状旁腺移植物排斥、任何器官或组织的异种移植物排 斥、同种移植物排斥、抗受体过敏反应、Grave’s病、Raynoud’s病、 B型胰岛素抗性糖尿病、哮喘、重症肌无力、介导的细胞毒性、III型 过敏反应、POEMS综合征(多神经病、器官瘤、内分泌病、单克隆丙球蛋 白病和皮肤改变综合征)、多神经病、器官瘤、内分泌病、单克隆丙球 蛋白病和皮肤改变综合征、抗磷脂综合征、天疱疮、硬皮病、混合型结 缔组织疾病、自发性Addison’s病、自身免疫性溶血性贫血、自身免 疫性肝炎、自发性肺纤维变性、硬皮病、糖尿病、慢性活动性肝炎、白 癜风、结节性脉管炎、MI后心脏病变综合征、IV型过敏反应、接触性 皮炎、过敏性肺炎、同种移植物排斥、由于细胞内生物体引起的风湿性 肉芽肿、药物过敏、代谢/自发病、Wilson’s病、血色素沉着症、α-1- 抗胰蛋白酶不足、糖尿病性视网膜病、Hashimoto’s甲状腺炎、骨质疏 松、下丘脑-垂体-肾上腺轴评价、原发性胆汁性肝硬化、甲状腺炎、脑 脊髓炎、恶病质、胆囊纤维变性、新生儿慢性肺病、慢性堵塞性肺病 (COPD)、家族性噬红细胞性淋巴组织细胞增多症、皮肤病、牛皮癣、脱 发、肾病综合征、肾炎、肾小球性肾炎、急性肾衰竭、血液透析、尿毒 症、中毒、子痫前期、僵硬性脊椎炎、Behcet’s病、大疱性类天疱疮、 心肌病、口炎性腹泻、慢性疲劳免疫功能障碍(CFIDS)、慢性炎性脱髓 鞘性多神经病、Churg-Strauss综合征、瘢痕性类天疱疮、CREST综合 征、寒冷凝集素病、盘状狼疮、自发性混合型冷沉球蛋白血症、纤维性 肌痛-纤维肌炎、Graces’s病、Guillain-Barre、Hashimoto’s甲状 腺炎、自发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、 青少年关节炎、扁平苔癣、Meniere’s病、多发性硬化、寻常天疱疮、 结节性多动脉炎、Cogan’s综合征、多软骨炎、多腺综合征、风湿性多 肌痛、多肌炎和皮真菌病、原发性血γ球蛋白缺乏症、雷诺氏现象、 Reiter’s综合症、风湿热、Sjogren’s综合征、Stiff-man综合征、 Takayasu动脉炎、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、Wegener’s肉芽肿病、 okt3治疗、抗cd3治疗、细胞因子治疗、化疗、放疗(例如包括但不限 于toasthenia、贫血、恶病质等)、慢性水杨酸类药物中毒等。

可有效用于例如治疗癌症和自身免疫性疾病的具有类肝素酶活性 抑制作用的化合物可用测定方法例如描述在第09/952,648号U.S.专利 申请中的方法来确定，该申请全文引入本文以供参考。这样的测定可在 诊断转移瘤、转移可能和炎性状态的方法中定性和定量用于测定细胞和 酶活性，是通过加入或不加入至少一种本发明化合物来进行的，以测定 化合物活性。下列文献中公开了现有的类肝素酶测定方法：Goshen等人， 2 MOL.HUM.REPROD.679-84(1996)；Nakajima等人，31 CANCER LETT， 277-83(1986)；和Vlodavsky等人，12 INVASION METASTASIS 112-27 (1992)；Freeman和Parish，325 BIOCHEM J.229-37(1997)；Kahn 和Newman，196 ANAL.BIOCHEM.373-76(1991)。还开发了固相类肝 素酶测定法，其中是将化学和生物合成放射标记的肝素和HS链连接在 固体载体上，通过从固体载体上释放下来的放射标记物来衡量酶活性。 使用这类方法的测定描述在U.S.专利4,859,581中，该专利全文引入 本文以供参考。

优选的测定方法通常包括将一种结合配偶体连接到欲测定的酶的 底物上，形成结合底物配偶体。与包含欲测定的酶的样本温育，以让欲 测定的酶在反应混合物中发挥活性。根据所需的量，然后将一部分或全 部反应混合物与互补的结合配偶体混和，这样结合配偶体就结合在一 起。这是第一个结合反应。培养以让其结合后，进行洗涤。加入与连接 在底物上的第一个结合配偶体互补的互补结合配偶体。该互补结合配偶 体与第一个互补结合配偶体可相同或不同。这是第二个结合反应。以可 检测的方式将在第二个结合反应中的互补结合配偶体标记。例如，用在 适当反应条件存在下可引起可检测的颜色改变的酶将互补结合配偶体 标记。使用在与不在化合物存在下的酶活性之间的差异来确定化合物的 活性。

类肝素酶测定的实例包括下列步骤。将包含生物素-HS(硫酸类肝 素)的组合物与生物样本例如肿瘤样本、体液或估计具有类肝素酶活性 的其它液体混和以形成反应混合物。可将样本预处理以除去污染物或反 应性物质例如内源性生物素。该反应混合物的对照部分不含有本发明化 合物，而测试部分含有一种或多种本发明化合物。温育后，取出等份试 样或一部分该反应混合物，并置于生物素结合的测定平板中。生物素结 合的测定平板包含用以结合生物素，优选将生物素结合到固体表明上的 任何物质。参见WO 02/23197，该专利全文引入本文以供参考。用缓冲 液洗涤后，将链酶抗生物素蛋白-酶缀合物加到生物素结合的测定平板 中。加入用于该酶的试剂以形成可检测到的带色产物。例如，与已知标 准物相比，颜色形成降低表明样本中存在类肝素酶活性。使用在与不在 化合物存在下的酶活性之间的差异来确定化合物的活性。

使用上述测定方法或在本文实施例中描述的测定方法，可测定样本 中酶活性的量，并且可测定本发明化合物的活性。例如，在将类肝素酶 与其底物-结合配偶体温育之前或期间，将包含本发明化合物的组合物 加到已知量的类肝素酶中。如果化合物改变类肝素酶的活性，本发明测 定方法将表现出可检测的标记物的量的改变。这样的测定方法可用于以 高通量测定化合物的活性。参见WO 02/23197，该专利全文引入本文以 供参考。

本发明化合物的活性正性或反性调节糖苷酶活性，包括直接或间接 作用于糖苷酶。本发明化合物可调节细胞或组织合成糖苷酶，或者可直 接作用于一种或多种糖苷酶以调节酶自身，例如类肝素酶的生物活性或 生物稳定性。本发明还包括的活性是，通过增加糖苷酶基因转录，提高 糖苷酶mRNA的生物稳定性或提高糖苷酶mRNA翻译成蛋白来增加一种或 多种糖苷酶的生物合成。其它活性包括可阻断或降低抑制糖苷酶活性的 物质或蛋白的作用的化合物的活性。此外，还包括这样的活性，影响糖 苷酶的底物，例如上文描述的关于蛋白聚糖的活性，或影响酶与其底物、 辅因子或刺激或抑制性因子的结合参数。

本发明包括用于治疗和预防由于糖苷酶活性所致的疾病或病症。这 样的方法包括施用包含能够调节类肝素酶活性的化合物的组合物，例如 包含能抑制类肝素酶活性的本发明化合物的组合物。能有效调节类肝素 酶活性的这样的化合物的给药是对被怀疑患有或患有例如炎性病症、自 身免疫性疾病或糖尿病性血管病的人和动物给药。给这样的人和动物以 安全有效的剂量，包括但不限于本文所述范围的剂量施用有效量。给药 途径包括但不限于本文所公开的那些。如本文所公开，包含这样的化合 物的组合物可以与其它治疗剂联合使用，或者在包括步骤例如改变患者 活动的方法中使用。

V.炎症调节

本发明一个实施方案包括用于治疗和预防具有炎症作为疾病或病 症的一个方面的病症的方法和组合物，其中包含本发明化合物。本发明 的一个方面涉及方法和组合物，其中包含能有效抑制炎症，特别是与糖 化蛋白或AGE蓄积或存在有关的炎症的化合物。调节炎症的活性包括但 不限于抑制由糖化蛋白或AGE引起的炎症和/或其相关细胞激活，阻断 蛋白的糖化，阻断AGE与受体的相互作用，阻断AGE诱导的信号传导或 与信号传导有关的炎性反应、细胞因子诱导、合成或释放、AGE形成或 AGE交联。

本发明还提供了用于治疗生物病症，包括但不限于I型和II型糖 尿病引起的血管病的血管并发症、其它血管病、微血管病、肾机能不全、 阿尔茨海默氏综合征和炎症引起的疾病例如动脉粥样硬化。其它与炎症 有关的疾病包括但不限于关节炎性疾病，例如类风湿性关节炎、骨关节 炎，自身免疫性疾病例如上文描述的那些，链球菌细胞壁引起的关节炎、 辅药引起的关节炎、滑囊炎；甲状腺炎性疾病例如急性、亚急性和慢性 甲状腺炎，骨盆炎性疾病、肝炎；炎性肠病，例如局限性回肠炎和结肠 炎；神经炎性疾病例如多发性硬化、脓肿、脑膜炎、脑炎和结节性脉管 炎；心脏炎性疾病例如心肌炎，慢性堵塞性肺病、动脉粥样硬化、心包 炎；皮肤炎性疾病例如急性炎性皮肤病(荨麻疹)、海绵性皮炎、多形性 红斑(em minor)、Stevens-Johnson综合征(sjs，em major)、毒性表 皮坏死松解(ten)和慢性炎性皮肤病(牛皮癣、扁平苔癣、盘状红斑狼疮、 寻常痤疮)；眼睛炎性疾病例如眼色素层炎、过敏性结膜炎、角膜炎症、 眼内炎症、虹膜炎；喉炎和哮喘。

本发明化合物可用于抑制由糖化蛋白或AGE引起的炎症和/或其相 关细胞激活。药理性地抑制AGE引起的细胞激活给很多疾病，尤其是糖 尿病并发症和阿尔茨海默氏病的治疗干预提供了基础。用于抑制AGE引 起的炎症的治疗方法包括但不限于阻断蛋白的糖化，阻断AGE与受体的 相互作用，阻断AGE诱导的信号传导或与信号传导有关的炎性反应。

某些本发明化合物的至少一种活性是通过抑制AGE诱导的信号传导 来阻断AGE作用。导致炎症的这些信号传导事件的顺序尚不清楚，但是 抑制这些信号传导事件导致炎症减轻或没有任何炎症。阻断AGE诱导的 炎性分子上调的化合物是用筛选测定确定的。本发明的其它方面包括方 法和组合物，其中包含阻断糖化蛋白引起的炎症的化合物。某些化合物 可影响AGE形成或AGE交联。

某些本发明化合物的至少一种活性是通过抑制与AGE受体的反应来 阻断AGE作用，并且用于治疗相关病症的本发明方法也涉及这样的活性。 例如，RAGE-AGE的一种已知受体是治疗靶点。阻断RAGE可抑制AGE 引起的炎症。在使用本发明化合物之前，RAGE的多种功能以及在血浆中 蓄积的AGE的可能长期副作用已妨碍了该治疗方法被采用。然而，使用 本发明方法和组合物，更具体来说是抑制性化合物可用于治疗和克服以 该受体为靶点的治疗的通常问题。

表5中列出了具有至少调节炎症活性的活性的本发明化合物。该表 所示化合物具有如通过其中提出的分析方法所测定的调节炎症活性的 活性。本文表中目录下的化合物不应当视为限制性的，因为包括在表中 的化合物具有至少表内所示的活性，并且可具有多种或其它活性。表之 所以不应视为限制性的还是因为，这些是最佳的具有该活性的本文所公 开的化合物，具有至少表中所示特定活性的代表性化合物列在表中。一 种或多种本文所公开的化合物具有至少可用于治疗疾病的活性。

表现出至少该活性和用途的化合物的实例如下面的结构所示：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；具有最高达10个碳原子的环烷基；或(CH2)xCN，其中x是0 -6的整数；

E是CH或N；

n是0-3的整数；

X1选自-H、m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、m-SO2R1、m-SO2OR1、 m-NC(O)R1或o-F，或者X1和X2一起是稠合的苯、吡啶或二氧杂环己烷 环；

X2选自-H、o-Cl、o-Br、o-CF3、o-R1、p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-F、 p-Cl、p-Br、p-CF3、p-CN、p-C(O)OR1、p-NC(O)R1、p-(4-吗啉基)或p-(4- 甲基-1-哌嗪基)；

AY1是卤素，或者A是NR1或O，且Y1选自具有最高达10个碳原子 的环烷基、被R1取代的具有最高达10个碳原子的环烷基、具有最高达 10个碳原子的直链或支链烷基、CH2R1、(CHR1)yOR1，其中y是1-6的整 数，

或者AY1一起是

其中x是3-5的整数；且

DY2是卤素，或者D是NR1，且Y2选自

具有最高达10个碳原子的环烷基、被R1取代的具有最高达10个碳 原子的环烷基、具有最高达10个碳原子的直链或支链烷基、CH2R1、

其中x是3-5的整数，

CH2CF3、(CHR1)zZ1，其中z是1-6的整数，且Z1选自NR12、

其中x是3-5的整数，

或

或者NY2R1一起选自

其中Z2选自R1、C(O)R1、C(O)OR1、吡啶基、芳基、

或

其中q是0-6的整数。

表现出至少该活性和用途的化合物的其它实例如表5所示，表5中 也给出了化合物的活性。表5中使用的活性等级如下(数值是包括性的)： “++++”代表与没接受化合物的细胞相比，0-约25％的对照IL6生成 (或对照IL6生成量的百分比)；“+++”代表约25％-约50％的IL6生 成；“++”代表约50％-约75％的对照IL6生成；“+”代表约75％ -100％的对照IL6生成。注解“n.d.”是指在给定的测定中没有检测 到化合物的活性。还需注意，任何原子—不论是碳原子还是杂原子为达 到表5中结构所示的其通常化学价所需的任何氢原子都应当可以推断 出。

除了上述化合物以外，表7所示化合物以及包含这些化合物的组合 物也表现出如通过其中提出的分析方法所测定的调节炎症活性的活性。 表7中使用的活性等级如下(数值是包括性的)：“+++”代表与没接受 任何化合物的细胞相比，在AGE或TNF存在下的约85％-100％的IL6 生成抑制；“++”代表在AGE或TNF存在下的约65％-约85％的IL6 生成抑制；“+”代表在AGE或TNF存在下的约50％-约65％的IL6生 成抑制。如上所述，本文表中目录下的化合物不应当视为限制性的，因 为包括在表中的化合物具有至少表内所示的活性，并且可具有多种或其 它活性。表之所以不应视为限制性的还是因为，这些是最佳的具有该活 性的本文所公开的化合物，具有至少表中所示特定活性的代表性化合物 列在表中。一种或多种本文所公开的化合物具有至少可用于治疗疾病的 活性。

据信，提高的糖化蛋白和AGE形成和蓄积在糖尿病并发症和动脉粥 样硬化的发病机理中起重要作用，导致多种糖尿病并发症，包括肾病、 视网膜病和神经病的发展。有大量体内证据表明，与糖尿病有关的并发 症可通过下列手段减轻：1)防止蛋白糖化，2)打破糖化蛋白中的交联， 或3)阻断糖化蛋白与受体相互作用。尽管AGE在糖尿病微血管病的发病 机理中起重要作用，但是目前没有任何可利用的已知能阻断AGE形成的 治疗方法。

内皮是糖尿病中的损害靶器官。参见Laight等人，15 DIABETES METAB.RES.REV.274-82(1999)；Stehouwer等人，34 CARDIOVASC. 55-68(1997)。涉及内皮炎症的分子，例如IL-6和单核细胞化学引诱 蛋白-1(MCP-1)的上调导致内皮功能障碍和血管病。参见Stehouwer等 人，34 CARDIOVASC.55-68(1997)；Libby，247 J.INTERN.MED.349-58 (2000)；Van Lente，293 CLINICA CHIMICA.ACTA.31-52(2000)。

IL-6是促炎性细胞因子，已知其在糖尿病和动脉粥样硬化的发病机 理中起关键作用。参见Horii等人，39 KIDNEY INT.SUPPL.71-5(1993) Huber等人19 ARTERIOSCLER THROMB.VASC.BIOL.2364-67(1999)； Shikano等人，85 NEPHRON 81-5(2000)；Pickup等人，8(67)LIFE SCI. 291-300(2000)。IL-6还促进肾小球膜细胞的生长，因此导致肾病。 参见Kado等人，36 ACTA.DIABETOL.67-72(1999)。糖尿病个体中的 血清IL-6水平显著高于正常健康对照个体(3.48+/-3.29pg/ml对 0.784+/-0.90pg/ml，平均值+/-SD)。此外，尿IL-6水平是糖尿病 性肾病的良好指标。血清IL-6可用于评估动脉粥样硬化和肾病。

据发现，MCP-1-另一种促炎性细胞因子在人动脉粥样硬化损伤中 高度表达，并且有人假定其在单核细胞募集到动脉壁和发展出损伤的过 程中其关键作用。参见Libby，247 J.INTERN.MED.349-58(2000)。 最近的结果表明MCP-1也是糖尿病性肾病的关键致病分子。参见Eitner 等人，51 KIDNEY INT.69-78(1997)；Banba等人，58 KIDNEY INT. 684-90(2000)。糖化白蛋白刺激内皮生成IL-6和MCP-1生成。糖化白 蛋白对IL-6生成的影响与TNFα-IL-6的一种已知诱导剂相差不大。已 知这些细胞因子是血管疾病的因子。

本发明化合物抑制糖化蛋白和AGE引起的炎症的活性可用本文和第 10/026,335号U.S.专利申请中描述的测定方法测定，该申请全文引入 本文以供参考。这样的测定方法包括测定涉及已知细胞反应的生物组分 的特定活性。这些测定方法提供了其中测定化合物的活性的可测定的反 应。一种测定方法包括在刺激剂存在下测定化合物对细胞炎性反应的影 响。另一种测定方法包括可通过加入糖化蛋白，即刺激剂来刺激的内皮 细胞。内皮细胞通过生成特异性细胞因子来作为响应。通过本领域技术 人员已知的测定方法来测定所生成的细胞因子的量。然后将本发明化合 物加到测定物中，测定细胞因子的生成。通过比较不含化合物的测定物 与含有化合物的测定物的结果，可确定化合物的生物作用。化合物可具 有抑制作用、刺激作用或根本没有任何作用。

可用免疫方法例如ELISA分析方法测定所生成的细胞因子的量和类 型。本发明方法不受用于测定细胞因子生成量的测定方法类型的限制， 可使用本领域技术人员已知的任何方法和以后开发出的方法来测定作 为对刺激剂以及具有未知活性的化合物的反应而生成的细胞因子的量。

本发明的一个方面包括用于治疗与炎性细胞因子和其它炎性相关 因子有关的疾病、前病症或病变，所述炎性细胞因子和其它炎性相关因 子包括但不限于IL-6、VCAM-1、AGE诱导的MCP-1(单核细胞化学引诱 蛋白-1)、血红素加氧酶、胰岛素样生长因子、选择蛋白、IP-10、MIG 和I-TAC、NF-κB、IL-1β(白介素1β)、IL-11(白介素11)、m-CSF(巨 噬细胞集落刺激因子)、血纤维蛋白原、TNF-α(肿瘤坏死因子α)、粘连 分子、选择蛋白、VCAM-1(血管细胞粘连分子-1)、CRP(C-反应蛋白) 和PAI-1(血纤维蛋白溶酶原激活物抑制剂-1)。这样的疾病的实例包括 动脉粥样硬化病变和II型糖尿病中发展出糖尿病性血管病。例如，影 响TNFα活性或水平是急性或慢性炎性反应后组织损害的关键介质。本 发明提供了用于调节细胞因子和炎性分子例如TNFα、IL-6、VCAM-1、 IP-10、MIG、I-TAC和AGE诱导的MCP-1的作用，和治疗相关疾病、急 性或慢性病症、前病症和病变的组合物和方法。

用于测定能够调节炎症的化合物的活性的测定方法包括在第 10/026,335和09/969,013号U.S.专利申请中描述的测定方法，该申请 全文引入本文以供参考。一般情况下，由于建立了关于内皮细胞生成细 胞因子的对刺激剂的基准反应，由此包括筛选测定的对照水平，方法包 括加入本发明化合物。通过比较在刺激剂存在下生成的细胞因子的量与 在刺激剂和本发明化合物存在下生成的细胞因子的量，可确定化合物对 基准反应的影响。在优选的方法中，使用在糖化白蛋白存在下对细胞炎 症有抑制作用的化合物作为治疗剂。可向筛选测定中加入一种或多种化 合物。可加入化合物的组合或混合物。加入不同量和制剂形式的化合物， 以测定对筛选测定的影响。还可以使用筛选测定来确定刺激性化合物或 在测定中没有作用的化合物。

本发明包括用于治疗和预防与炎症有关的疾病、病症和病变的方法 和组合物。这样的方法包括施用包含能够调节炎症相关分子例如AGE或 细胞因子或其它细胞因子的活性，包括释放速度或活性的化合物的组合 物，包括包含具有炎症调节活性的本文公开的化合物的组合物。有效调 节炎症的这样的化合物的给药是对被怀疑患有或患有下列疾病的人和 动物给药：糖尿病引起的血管病、自身免疫性疾病、肾衰竭、阿尔茨海 默氏综合征和炎症引起的疾病例如动脉粥样硬化。给这样的人和动物以 安全有效的剂量，包括但不限于本文所述范围的剂量施用有效量的化合 物。给药途径包括但不限于本文所公开的那些。如本文所公开，包含这 样的化合物的组合物可以与其它治疗剂联合使用，或者在包括步骤例如 改变患者活动，包括但不限于改变锻炼或饮食的方法中使用。

VI.细胞毒性活性

本发明一个实施方案包括方法和组合物，其中包含具有至少引起细 胞死亡或细胞活动停止的活性—在本文中称为细胞毒性活性的化合物。 该活性可在体外和体内细胞毒害方法中使用。例如，可将具有该活性的 化合物选择性地递送到活生物体内的区域中，以选择性地杀死该区域中 的细胞。这样的方法可用于处理高增殖性细胞例如癌症或其它不需要的 细胞生长或细胞活动。本发明的一个方面提供了包含能非选择性地杀死 细胞的化合物的组合物。本发明另一个方面提供了能选择性地杀死细 胞，例如具有特定细胞标记物或其它区别特征例如特定化合物如钠、钙 或胸苷的代谢速度或摄取的细胞的化合物。

本发明还提供了用于治疗生物病症，包括但不限于其中细胞毒性活 性是治疗手段的病症的组合物。例如，用以提供具有至少细胞毒性活性 的化合物的组合物和方法可用于治疗或预防细胞、组织、器官、动物或 患者中的至少一种高增殖性疾病，包括但不限于恶性和非恶性细胞生 长、白血病、急性白血病、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、B-细胞、T- 细胞或FAB ALL、急性骨髓性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、 慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、发细胞白血病、骨髓发育不良综合征 (MDS)、淋巴瘤、何杰金氏病、恶性淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、Burkitt’ s淋巴瘤、多发性骨髓瘤、卡波济氏肉瘤、结肠直肠癌、胰腺癌、鼻咽 癌、恶性组织细胞增多病、假肿瘤形成综合征/恶性高钙血、实体瘤、 腺癌、肉瘤、恶性黑素瘤、血管瘤、转移性疾病、与癌症有关的骨吸收、 与癌症有关的骨疼痛等。

具有至少细胞毒性活性的本发明化合物如表4A和B所示。该表所 示化合物具有如通过其中提出的分析方法所测定的细胞毒性活性。本文 表中目录下的化合物不应当视为限制性的，因为包括在表中的化合物具 有至少表内所示的活性，并且可具有多种或其它活性。表之所以不应视 为限制性的还是因为，这些是最佳的具有该活性的本文所公开的化合 物，具有至少表中所示特定活性的代表性化合物列在表中。一种或多种 本文所公开的化合物具有至少可用于治疗疾病的活性。

表现出至少该活性和用途的化合物的实例如下式所示：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；具有最高达10个碳原子的环烷基；或芳基；

E是CH或N；

n是0-3的整数；

X1选自-H、m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、m-SO2R1或m-SO2OR1， 或者X1和X2一起是稠合的苯或吡啶环；

X2选自-H、o-Cl、o-Br、p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-F、p-Cl、p-Br、 p-CF3、p-C(O)OR1、p-OM或p-SM，其中M选自Li、Na、K、Mg或Ca；

A选自NR1或O，其中当A是NR1时，Y1选自具有最高达10个碳原子 的环烷基、具有最高达10个碳原子的直链或支链烷基或

并且当A是O时，Y1选自R1或CH2R1；或者AY1选自卤素

或

且DY2是卤素，或者D是NR1，且Y2选自

或(CHR1)xNR12，其中x是1-6的整数。

表现出至少该活性和用途的化合物的其它实例如下式所示：

或其烯、二烯、三烯或炔衍生物；其饱和衍生物；其立体异构体； 或其盐；

其中：

R1在每次出现时独立地选自-H；具有最高达10个碳原子的直链或 支链烷基；或具有最高达10个碳原子的环烷基；

X1在每次出现时独立地选自-H、m-F、m-Cl、m-Br、m-I、m-CN、m-NO2、 m-SO2R1或m-SO2OR1，

X2在每次出现时独立地选自o-CH3、p-OR1、p-SR1、p-NR12、p-OM或 p-SM，其中M选自Li、Na、K、Mg或Ca；

Y1选自具有最高达10个碳原子的环烷基；

其中n是1或2；或

且Y2选自

或

表现出至少该活性和用途的化合物的其它实例如表4A和4B所示。 象在本文其它表中一样，表4A和4B的化合物命名原则是用Autonom作 出的，其中所提供的名称可以是化学名称的Beilstein或CAS版本。需 注意，任何原子—不论是碳原子还是杂原子为达到表4A或4B中结构所 示的其通常化学价所需的任何氢原子都应当可以推断出。

测定能够实现细胞毒性活性的化合物的活性的测定方法包括在本 文中提出的方法以及本领域众所周知的其它方法。一般情况下，为了确 定化合物是否具有细胞毒性活性，用欲测定的化合物处理处于生长期或 静息期的特定类型的细胞。使用各种细胞死亡或停止参数来测定化合物 的作用。例如，可测定核酸或蛋白合成的量，或凭视力观察细胞的状态 例如从底物上的释放以确定细胞状态。

本发明包括用于治疗和预防存在细胞增殖或不需要的细胞生长或 细胞活动或者由它们导致的疾病或病症的方法和组合物。这样的方法包 括施用包含能够调节细胞活动或引起细胞死亡或停止生长的化合物的 组合物，例如包含具有细胞毒性活性的本文公开的化合物的组合物。有 效实现细胞毒性活性的这样的化合物的给药是对被怀疑患有或患有例 如癌症、过度反应性组织例如甲状腺或下丘脑或其中因子以不需要量释 放的细胞病症的人和动物给药。给这样的人和动物以安全有效的剂量， 包括但不限于本文所述范围的剂量施用有效量的化合物。给药途径包括 但不限于本文所公开的那些。如本文所公开，包含这样的化合物的组合 物可以与其它治疗剂联合使用，或者在包括步骤例如改变患者活动的方 法中使用。

化合物/组合物包被的医疗装置

本发明化合物可单独使用，或者与其它物质以及递送装置联合使用 以有效预防或治疗本文描述的疾病，特定应用是血管疾病，特别是由损 伤和/或移植引起的血管疾病。虽然该实例以血管疾病作为目标，但是 用于治疗能够用本发明化合物治疗的疾病和病症的本发明化合物和医 疗装置也在本发明范围内。

用于治疗血管疾病的各种医疗装置最终可引起另外的并发症。例 如，气囊式血管成形术是用于增加动脉血流的手术，并且是冠状血管狭 窄的主要治疗手段。然而，该手术一般引起血管壁发生一定程度的损伤， 从而在以后产生新的问题或加重原来的问题。虽然其它手术和疾病可引 起类似损伤，但是用下述方面来描述本发明的示例性实施方案：治疗经 皮经腔冠状血管成形术和其它类似动脉/静脉手术，包括动脉、静脉以 及在其它器官或身体位点例如肝脏、肺、膀胱、肾、脑、前列腺、颈和 腿中携带流体的导管的接合后的再狭窄和相关并发症。

从斯滕特固定模中局部递送本发明化合物以及在某些实施方案中 其它治疗剂可防止血管弹回和经由斯滕特固定模的支架作用的改型。与 或不与其它治疗剂在一起的所提供的化合物的活性有助于决定应用于 施用包被的医疗装置来治疗的疾病。例如，化合物包被的斯滕特固定模 可预防新内膜增生或再狭窄的多种组分，以及降低炎症和血栓形成。给 施以斯滕特固定模的冠状动脉局部施用本发明化合物和其它治疗剂还 具有另外的治疗益处。例如，使用局部递送而不是全身给药可达到较高 组织浓度的本发明化合物和其它治疗剂。此外，使用局部递送而不是全 身给药可实现降低的全身毒性，同时保持较高的组织浓度。在使用斯滕 特固定模局部递送而不是全身给药时，单一操作就足够了，从而使患者 具有较好的配合性。联合治疗剂和/或化合物治疗的另一益处是可以减 少每一治疗药物的剂量，从而限制了它们的毒性，而同时还能够达到降 低再狭窄、炎症和血栓形成的效果。因此，基于局部斯滕特固定模的治 疗是一种具有改进的抗再狭窄、抗炎、抗血栓形成治疗剂的治疗比例(效 力/毒性)的方法。

虽然本发明的示例性实施方案将根据再狭窄和相关并发症的治疗 来进行描述，但是重要的是应该注意到，可以单独或作为治疗剂组合的 一部分的本发明化合物的局部递送可用于治疗多种使用任何医疗装置 的病症，或提高装置的功能和/或寿命。例如，白内障手术后处于视力 恢复状态的眼内晶状体时常遭受继发性白内障的危害。后者通常是晶状 体表面上细胞过度生长的结果，并且能够通过一种或多种具有防止不需 要的细胞生长的活性的本发明化合物与装置的组合将其最小化。通常由 于组织的生长或蛋白质物质在装置中、在装置上和在装置周围的蓄积而 失败的其它医疗装置，例如脑积水分流器、透析移植物、结肠瘘袋附加 装置、耳导液管、起搏器导线和可植入式去纤颤器也能够从本发明化合 物、可能的其它药物活性剂与装置药物结合法中受益。如果使用本发明 化合物-装置联合方法，其它外科装置，缝合线、U形环(staple)、吻合 装置、脊椎板、骨钉、缝合锚、止血屏障、夹钳、螺钉、平板、夹子、 血管植入物、组织粘合剂和密封剂、组织支架、各种类型的敷料、骨替 代物、管腔内装置和血管支持器，也能够为患者带来更多的益处。基本 上，任何类型的医疗装置都可以用单独或作为治疗剂组合的一部分的本 发明化合物包上一定式样的包被，以获得优于不与本发明化合物联合使 用的装置或治疗剂的治疗效果。

如上所述，本发明化合物可与其它治疗剂在联合治疗中给药，并且 不限于本文所公开的其它治疗剂。因此，本发明还涉及，除了各种医疗 装置以外，在这些装置上的包被可用于递送与其它治疗剂联合递送的本 发明化合物。本文列出的示例性治疗剂可经由给药装置或者用医疗装置 给药，并且这样的治疗剂包括但不限于抗增殖/抗有丝分裂剂，包括天 然产物例如长春花属生物碱(例如长春花碱、长春新碱和长春瑞滨)、 紫杉醇、表鬼臼毒素(例如衣托泊苷、替尼泊苷)、抗生素(放线菌素 (放线菌素D)、柔红霉素、阿霉素和伊达比星)、蒽环类抗生素、米托 蒽醌、博来霉素、普卡霉素(光辉霉素)和丝裂霉素、酶(L-天冬酰胺 酶，其系统地代谢L-天冬酰胺并阻止没有能力合成它们自己的天冬酰胺 的细胞)；抗血小板剂例如G(GP)Iib/IIIa抑制剂和玻连蛋白受体拮 抗剂；抗增殖/抗有丝分裂烷化剂例如氮芥类药物(氮芥、环磷酰胺和 类似物、美法仑、苯丁酸氮芥)，吖丙啶和甲蜜胺类(六甲蜜胺和噻替 派)、烷基磺酸酯-白消安、硝基脲类(卡莫司汀(BCNU)和类似物、链 佐星)、trazenes-达卡巴嗪(DTIC)；抗增殖/抗有丝分裂抗代谢药物 例如叶酸类似物(甲氨喋呤)、嘧啶类似物(氟尿嘧啶、氟尿苷和阿糖 胞苷)、嘌呤类似物和相关抑制剂(巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁和 2-氯脱氧腺苷(克拉屈滨))；铂配位络合物(顺铂、卡铂)、甲苄肼、 羟基脲、米托坦、氨鲁米特；激素(例如雌激素)；抗凝血剂(肝素、 合成肝素盐和其它凝血酶抑制剂)；血纤维蛋白溶解剂(例如组织血纤 维蛋白溶酶原激活剂、链激酶和尿激酶)、阿司匹林、双嘧达莫、噻氯 匹定、氯吡格雷、阿昔单抗；抗转移；抗分泌剂(breveldin)；抗炎 剂：例如肾上腺皮质甾类药物(氢化可的松、可的松、氢氟可的松、强 的松、脱氢皮质甾醇、6α-甲泼尼龙、去炎松、倍他米松和地塞米松)、 非甾类药物(水杨酸衍生物，例如阿司匹林；对氨基酚衍生物，例如 acetominophen；吲哚和茚乙酸类(消炎痛、舒林酸和乙哚乙酸)、杂 芳基乙酸(托美丁、双氯芬酸、酮咯酸)、芳基丙酸类(布洛芬和衍生物)、 邻氨基苯甲酸类(甲芬那酸、和甲氯芬那酸)、烯醇酸类(吡罗昔康、 滕诺息卡、苯剂丁氮酮和oxyphenthatrazone)、萘丁美酮、金化合物 (金诺芬、金硫葡萄糖、硫代苹果酸金钠)；免疫抑制剂(环孢菌素、 他克莫司(FK-506)、西罗莫司(雷帕霉素)、咪唑硫嘌呤、麦考酚酸 吗乙酯)；血管生成剂：血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长 因子(FGF)；血管紧张素受体阻断剂；氧化氮供体；反义低聚核苷酸 及其组合；细胞周期抑制剂、mTOR抑制剂和生长因子信号转导激酶抑制 剂。

虽然按照本发明有多种斯滕特固定模可以使用，但为简便起见，在 本发明示例性实施方案中只是描述有限数量的斯滕特固定模。本领域技 术人员将会认识到，与本发明有关的若干斯滕特固定模都可以使用。另 外，如上面所述，也可以使用其它医疗装置。例如，虽然描述了斯滕特 固定模，但是在血管外的套管，以及可提供基质来施用至少一种本发明 化合物的其它医疗装置也包括在本发明内。

通常斯滕特固定模是作为管状结构使用，放置在管腔内部以减轻闭 塞。一般地，斯滕特固定模以未膨胀的形式插到腔中，然后自动膨胀， 或者在原处在辅助装置的帮助下膨胀。通常的膨胀方法是通过使用固定 在导管上的血管成形术气囊来实现，该气囊在狭窄的管或体腔内膨胀， 以切断和破裂与血管壁组分有关的堵塞和获得扩大的腔。

斯滕特固定模可类似于可膨胀的圆柱，并且可包含有孔结构以放置 在血管、导管或腔中以保持血管、导管或腔打开，更特别地是在血管成 形术之后保护动脉部分不发生再狭窄。斯滕特固定模可沿着圆周边缘膨 胀，并保持是圆周或径向刚性的膨胀构型。斯滕特固定模可以是径向柔 性的，并且例如当在一定区域弯曲时，斯滕特固定模避免了任何向外突 出的成分部分。

斯滕特固定模可以用多种方法制造。例如，斯滕特固定模可以用空 的或成形的不锈钢管制造，而该不锈钢管可以用激光、放电研磨、化学 蚀刻或其它方法进行加工。将斯滕特固定模以未膨胀的形式植入身体并 置放于所要求的部位。在一个实施方案中，膨胀可以通过气囊导管来在 血管中实现，其中斯滕特固定模的最终直径与所使用的气囊导管的直径 有关。应当理解，本发明斯滕特固定模可以用形状记忆材料，包括例如 适当的镍钛合金或不锈钢制造。

用不锈钢形成的斯滕特固定模可以通过以预定方式装配不锈钢，例 如通过将不锈钢扭曲成环状构型来实现自我膨胀。在该实施方案中，斯 滕特固定模形成后，可以将其压缩，以占据足够小的空间，从而容许用 植入工具将其植入血管或其它组织，其中植入工具包括合适的导管或柔 性杆。在从导管中露出时，斯滕特固定模可具有一定的外形进而膨胀成 为所要求的形状，其中膨胀是自动的或通过压力、温度的改变或电刺激 而被触发。

此外，可将斯滕特固定模改造以包含一个或多个贮库。按照需要， 每个贮库可以是打开或封闭的。这些贮库可专门设计，以保持欲递送的 本发明化合物或化合物/治疗剂组合。不论斯滕特固定模的设计如何， 优选的是让所施加的本发明化合物或化合物/治疗剂组合具有足够的特 异性和充分的浓度，以在损伤区域提供有效的剂量。关于这一点，包被 中的“贮库尺寸”优选达到这样的尺寸，其在所要求的部位以所要求的 量足够地施加本发明化合物或化合物/治疗剂组合剂量。

在另一个实施方案中，斯滕特固定模的全部内表面和外表面可以用 本发明化合物或化合物/治疗剂组合以治疗剂量的量包被。包被技术可 以随本发明化合物或化合物/治疗剂组合而变化。包被技术还可以随构 成斯滕特固定模或其它管腔内医疗装置的材料而变化。

可以通过多种方法将一种或多种本发明化合物以及在某些情况下 与其它治疗剂一起掺入或添加到斯滕特固定模上。在一个实施方案中， 将化合物直接掺入到聚合物基质内，并喷雾到斯滕特固定模的外表面 上。在一定时间内，化合物从聚合物基质中洗脱出来并进入周围组织。 化合物优选在斯滕特固定模上停留至少3天至最多约6个月，更优选7 -30天。

许多不被分解的聚合物都可以与化合物一起使用，并且这样的聚合 组合物是本领域众所周知的。在一个实施方案中，聚合物基质包含两层。 基础层包含聚(乙烯-共聚乙酸乙烯酯)与聚异丁烯酸丁酯的溶液。把化 合物掺入到该基础层中。外层只包含聚异丁烯酸丁酯，并起扩散屏障的 作用以防止化合物洗脱过快。该外层或顶包被的厚度决定化合物从基质 中洗脱下来的速度。基本上，化合物通过贯穿聚合物基质的扩散从基质 中洗脱下来。由于聚合物是可渗透的，因此使得固体、液体和气体能够 从那里脱逸。聚合物基质的总厚度为约1微米-约20微米或更大。重 要的是注意到，在将聚合物基质粘附到医疗装置之前，底层和金属表面 的处理是可以利用的。例如，可以将酸洗、碱洗、盐化和聚对亚苯基二 甲基沉积可用做下述整个方法的一部分。

可以用多种方法将聚(乙烯-共聚乙酸乙烯酯)、聚异丁烯酸丁酯和 化合物溶液掺入到斯滕特固定模里或斯滕特固定模上。例如，可以将该 溶液喷雾到斯滕特固定模上或把斯滕特固定模浸入该溶液中。其它方法 包括旋转包被和等离子体聚合。在一个实施方案中，将该溶液喷雾到斯 滕特固定模上，然后让其干燥。在另一个实施方案中，可以使该溶液带 一极性的电荷，而使斯滕特固定模带相反极性的电荷。如此，该溶液和 斯滕特固定模将会相互吸引。使用这种类型的喷雾方法，可以减少浪费， 并实现对包被厚度的更为精确的控制。

有多家公司生产药物包被的斯滕特固定模，这些公司包括Johnson & Johnson，Inc.(New Brunswick，NJ)，Guidant Corp.(Santa Clara， CA)，Medtronic，Inc.(Minneapolis，MN)，Cook Group Incorporared (Bloomington，IN)，Abbott Labs.，Inc.(Abbott Park，IL)，和 Boston scientific Corp.(Natick，MA)。参见例如U.S.专利 6,273,913；第20020051730号U.S.专利申请；WO 02/26271；和 WO02/26139，每一专利均全文引入本文以供参考。

表达特性和使用微阵列方法

本发明的其它方面包括用于微阵列装置的组合物和方法。这样的微 阵列装置和方法包括多个微阵列，所述微阵列可用于例如研究和监测作 为对于用本发明化合物治疗的反应的基因表达。微阵列可包括决定特异 细胞、组织、物种、疾病、预测、疾病进展的核酸序列、糖类或蛋白质， 或可用于测定一种或多种本发明化合物的作用的任何其它分子组合。

例如，本发明微阵列可衍生自例如特定生物体或细胞类型或者是其 代表，包括人微阵列、血管微阵列、炎症微阵列、癌微阵列、细胞程序 死亡微阵列、癌基因微阵列和肿瘤抑制因子微阵列、细胞-细胞相互作 用微阵列、细胞因子和细胞因子受体微阵列、血液微阵列、细胞周期微 阵列、神经微阵列、小鼠微阵列大鼠微阵列或其组合。在另外的实施方 案中，微阵列可代表疾病，包括但不限于心血管疾病、血管病变疾病、 炎性疾病、自身免疫性疾病、神经疾病、免疫疾病、各种癌症、感染性 疾病、内分泌障碍和遗传疾病。

或者，用于评估本发明化合物效力的微阵列可代表特定的组织类 型，包括但不限于心脏、肝脏、前列腺、肺、神经、肌肉或结缔组织； 优选冠状动脉内皮、脐动脉内皮、脐静脉内皮、主动脉内皮、皮肤微血 管内皮、肺动脉内皮、子宫肌层微血管内皮、角质形成细胞内皮、支气 管内皮、乳腺内皮、前列腺内皮、肾皮层内皮、肾邻近小管内皮、小气 管内皮、肾内皮、脐动脉平滑肌、新生儿皮肤成纤维细胞、肺动脉平滑 肌、皮肤成纤维细胞、神经祖细胞、骨骼肌、星形细胞、主动脉平滑肌、 肾小球膜细胞、冠状动脉平滑肌、支气管平滑肌、子宫平滑肌、肺成纤 维细胞、成骨细胞、前列腺基质细胞或其组合。

本发明还涉及包括基因表达特性的微阵列，所述基因表达特性包含 一种或多种聚核苷酸序列，包括互补和同源序列，其中所述基因表达特 性是由用本发明化合物处理的细胞类型产生的，并且选自冠状动脉内 皮、脐动脉内皮、脐静脉内皮、主动脉内皮、皮肤微血管内皮、肺动脉 内皮、子宫肌层微血管内皮、角质形成细胞内皮、支气管内皮、乳腺内 皮、前列腺内皮、肾皮层内皮、肾邻近小管内皮、小气管内皮、肾内皮、 脐动脉平滑肌、新生儿皮肤成纤维细胞、肺动脉平滑肌、皮肤成纤维细 胞、神经祖细胞、骨骼肌、星形细胞、主动脉平滑肌、肾小球膜细胞、 冠状动脉平滑肌、支气管平滑肌、子宫平滑肌、肺成纤维细胞、成骨细 胞和前列腺基质细胞。

本发明还涉及包含一种或多种蛋白结合剂的微阵列，其中所述蛋白 表达特性是由用本发明化合物处理的细胞类型产生的，并且选自冠状动 脉内皮、脐动脉内皮、脐静脉内皮、主动脉内皮、皮肤微血管内皮、肺 动脉内皮、子宫肌层微血管内皮、角质形成细胞内皮、支气管内皮、乳 腺内皮、前列腺内皮、肾皮层内皮、肾邻近小管内皮、小气管内皮、肾 内皮、脐动脉平滑肌、新生儿皮肤成纤维细胞、肺动脉平滑肌、皮肤成 纤维细胞、神经祖细胞、骨骼肌、星形细胞、主动脉平滑肌、肾小球膜 细胞、冠状动脉平滑肌、支气管平滑肌、子宫平滑肌、肺成纤维细胞、 成骨细胞和前列腺基质细胞。

更具体来说，本发明涉及可再现地测定和评估特定mRNA或蛋白在 例如特定细胞组中表达的方法。一种方法组合并使用下列技术：激光捕 集微解剖(laser capture microdissection)，基于T7的RNA扩增， 由扩增的RNA产生cDNA，和含有用于多种特定基因的固定的DNA分子， 包括HSPG例如基底膜蛋白聚糖的DNA阵列，以产生用于非常少量特定 细胞的基因表达特性分析。独立地鉴定所需细胞，并通过激光捕集技术 将其连接在基质上，然后将捕集的细胞与其余细胞分离开。从捕集的细 胞中提取RNA，使用基于T7的扩增技术将其扩增约一百万倍，可由扩增 的RNA制备cDNA。制备与特定微阵列的聚核苷酸杂交的多种特定DNA 分子，将DNA分子固定在合适的基质上。在容许cDNA与微阵列上的固 定的DNA杂交的条件下将由捕集的细胞制备的cDNA施加到微阵列上。 通过分析使用扩增的RNA或由扩增的RNA获得的cDNA与在微阵列上的 特定固定的DNA分子的杂交结果来获得捕集的细胞的表达特性。杂交结 果表明例如与得自捕集细胞的cDNA杂交的作为探针在微阵列上呈现的 基因，和/或特定基因表达的量。杂交结果呈现了捕集的细胞的基因表 达特性。可使用捕集的细胞的基因表达特性来比较不同组的捕集的细胞 的基因表达特性。例如，基因表达特性可由用本发明化合物处理(和未 处理)的细胞生成。类似性和差异提供了用于确定相同细胞类型在不同 条件下的差异的有用信息，更具体来说，提供了作为对于用本发明化合 物处理的反应的基因表达的改变的有用信息。

对于蛋白表达特性，用于基因表达分析的技术同样适用。可将所有 蛋白从细胞样本中分离出来，并与包含多种蛋白结合剂的微阵列杂交， 所述蛋白结合剂可包括抗体、受体蛋白、小分子等。使用本领域已知的 任何几种测定方法，可检测杂交并如上所述进行分析。对于荧光测定， 可使用算法来确定特定细胞类型的代表性蛋白表达特性。在这方面，可 评估作为对于用本发明化合物处理的反应的蛋白表达改变。

因此，在一个方面，在用于检测由于将所选的组织或细胞暴露于至 少一种本发明化合物而导致的基因转录水平改变的方法中，本发明包括 至少一个微阵列，所述微阵列与从特定组织或细胞类型中分离出来的基 因群体相对应。在该实施方案中，可将得自生物体的生物样本或建立的 细胞系在体内或体外暴露于至少一种本发明化合物。然后通过本领域众 所周知的方法分离组织或细胞的基因转录物，主要是mRNA。sambrook 等人，Molecular cloning：a lab.Manual(2001)。然后将分离出来 的转录物与微阵列在其中转录物与相应的探针杂交以形成杂交对的条 件下接触。因此，微阵列提供了暴露于至少一种本发明化合物后的转录 反应的模型。这样的信息可用于确定治疗候选物。然后可在每个杂交对 检测杂交信号以获得基因表达特性。

基因和/或蛋白表达特性和微阵列还可用于鉴定特定基因例如基底 膜蛋白聚糖或其它HSPG的激活或非激活性化合物。提高转录速度或刺 激、维持或稳定蛋白活性的化合物视为激活性的，降低转录速度或抑制 蛋白活性的化合物是非激活性的。此外，化合物的生物作用可在细胞的 生物状态中得到反应。该状态的特征是细胞组分。细胞的生物状态的一 方面是细胞的转录状态。在处于给定条件下的细胞中，细胞的转录状态 包括组成型RNA物质，尤其是mRNA的鉴定和量。因此，本文所述的基 因表达特性、微阵列和算法可用于分析暴露于激活或非激活性化合物， 具体来说本发明化合物后，给定细胞或组织的转录状态以及确定其特 征。

微阵列技术和用于分析结果的方法是本领域众所周知的。参见U.S. 专利6,263,287；6,239,209；6,218,122；6,197,599；6,156,501； 5,874,219；5,837,832；5,700,637；5,445,934；U.S.专利申请 2001/0014461A1；2001/0039016A1；2001/0034023A1；WO 01/94946； 和WO 01/77668。还参见Haab等人，2 GENOME BIOLOGY 1-12(2001)； Brown等人，97 Proc.NATL.ACAD.SCI.USA 262-7(2000)；Getz等 人.97 PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 12079-84(2000)；Harrington 等人，3 CURRENT OPINION MICROBIOL 285-91(2000)；Holter等人，97 PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 8409-14(2000)；MacBeath等人，289 SCIENCE 1760-63(2000)；Duggan等人，21 NATURE GENET 10-14(1999)； Lipshutz等人，21 NATURE GENET 5-9(1999)；Eisen等人，95 PROC. ACAD.SCI.USA 14863-68(1998)；Ermolaeva等人，20 Nature Genet.19-23(1998)；Hacia等人，26 NUCLEIC ACIDS RES.3865-66 (1998)；Lockhart等人，NUCLEIC ACIDS SYMP.SER.11-12(1998)； Schena等人，16 TRENDS BIOTECHNOL.301-6(1998)；Shalon，46 PATHOL. BIOL.107-9(1998)；Welford等人，26 NUCLEIC ACID RES.3059-65 (1998)；Blanchard等人，11 BIOSENSORS BIOELECTRONICS 687-90(1996)；Lockhart等人，14 NATURE BIOTECHNOL.1675-80(1996)； Schena等人，93 PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 10614-19(1996)；Tomayo 等人，96 PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 2907-12(1996)；Schena等 人，270 SCIENCE 467-70(1995)。

数据库产生、数据库访问和相关使用方法

本发明另一个实施方案包括管理或使用关于化合物的数据的方法， 制备化合物的方法，使用和施用化合物的方法，和诊断、预测和按照与 其中化合物能对其有效治疗的疾病有关的结果的方法。例如，本发明涉 及用于提供关于生物分子，包括HSPGS，特别是基底膜蛋白聚糖的诊断 和预测信息的方法。用于提供关于本发明化合物效力的诊断和预测信息 的方法也在本发明范围内。本发明还涉及提供表达特性数据库的方法， 和产生关于正常和患病组织的这样的数据库的方法。

表达特性数据库可以是内部数据库，其设计用来包括关于所产生的 表达特性的注释信息，以评价本发明化合物以及其它来源和方法的作 用。这样的信息可包括例如这样的数据库，在其中可找到给定生物分子， 与表达特性有关的患者信息，包括年龄、癌症或肿瘤类型或进展，关于 本发明化合物的信息例如剂量和给药信息，关于与序列、组织或细胞源 有关的cDNA的描述信息，由外部来源获得的序列数据，给定基因的表 达特性和相关疾病或疾病过程，例如表达特性是否涉及或预示特定病 症，和制备方法。表达特性可基于由得自公众可获得的或专有来源的蛋 白和/或聚核苷酸微阵列数据。可将数据库分成两部分：一个是存储序 列和相关表达特性的部分，另一个是存储相关信息的部分。该数据库可 作为私人数据库保持，这样的数据库在中央计算机设备内具有防火墙。 然而，本发明不限于此，并且表达特性数据库可由公众使用。

数据库可以是联系网络服务器与客户机的网络系统。该网络可以是 任一常规网络系统，包括局域网(LAN)或宽域网(WAN)，这是本领域已知 的(例如Ethernet)。服务器可包括软件以访问数据库信息来加工用户要 求，和用于给客户机提供服务信息的接口。服务器可支持全球信息网和 维持给客户使用的网址和网络浏览器。客户机/服务器环境、数据库服 务器和网络在技术、商业和专利文献中都得到了很好的描述。

通过网络浏览器，客户机可构建检索请求以从例如微阵列数据库和 表达特性数据库中获得数据。例如，用户可“点击”用户接口部件例如 按钮，拉出菜单和滚动条。客户请求可传递到网络应用程序中，网络应 用程序将它们格式化以产生查询，该查询可用于从系统数据库中收集信 息，其中信息收集是基于例如微阵列或客户机获得的表达数据和/或其 它表型或基因型信息。具体来说，客户机可提交基于得自用本发明化合 物治疗的患者的微阵列表达特性的表达数据，并使用该系统以获得基于 该信息的诊断，这是通过将客户机表达数据与数据库中包括的表达数据 进行比较来作出的。例如，该系统包括比较客户机提交的表达特性和数 据库中包括的表达特性，然后给客户机提供基于客户机表达特性与数据 库表达特性的最佳匹配的诊断信息。因此，在一个方面，比较表达特性 有助于临床医师确定用本发明化合物治疗的有效性。基于这样的比较， 临床医师可改变或调节治疗方案。

此外，网址可提供与公用数据库例如由National Center for Biotechnology Information(NCBI)保持的GenBank和相关数据库，部 分Natuinal Library of Medicine的超文本链接，以及提供关于基因 表达分析、遗传病症、科学文献等的信息的任何链接。本发明涉及信息， 包括但不限于标识符、标识符类型、生物分子序列、常用的族标识符 (GenBank、Unigene、Incyte模板标识符等)和与每个基因有关的物质 名称。

本发明还提供了用于评价和比较生物信息，具体来说是表达特性以 及对于本发明组合物和方法有用的其它信息的系统。在一个实施方案 中，计算机系统可包括计算机处理器，与计算机处理器相连的合适的内 存，和储存在内存中的计算机程序，该程序在计算机处理器中执行，并 包括用于将得自患者的生物分子序列的表达特性与数据库中的生物分 子序列的序列鉴定信息匹配的装置。更具体来说，使用该计算机系统来 将由用本发明化合物处理的生物样本产生的表达特性与数据库中的表 达特性和其它信息匹配。

此外，用于评估和比较生物分子数据库中包含的信息的系统包括计 算机程序，所述计算机程序包括计算机代码，该代码提供用于将由例如 用本发明化合物治疗的患者产生的表达特性与生物分子数据库中的表 达特性和序列鉴定信息进行匹配的算法。

在一个实施方案中，本发明包括使用图像用户界面(“GUI”)来获 取存储在生物分子数据库中的表达特性信息。在一个具体实施方案中， GUI可由两个框架构成。第一个框架可包含可由用户进入的生物分子数 据库的可选列表。当在第一个框架中选择生物分子数据库时，第二个框 架可展现通过如上所述将表达特性数据库与客户机提供的表达特性进 行成对比较而产生的信息，以及任何其它表型或基因型信息。

GUI的第二个框架可含有包含在所选数据库中的生物分子序列表达 信息和特性的列表。此外，第二个框架可容许用户选择子集，包括所有 生物分子序列，和在生物分子序列的列表上进行操作。在一个实施方案 中，用户可通过选择与每一生物分子序列有关的选择方框来选择生物分 子序列子集。在另一个实施方案中，可进行的操作包括但不限于将所有 列出的生物分子序列下载到具有分类信息的数据库电子表格中，将所选 的生物分子序列子集保存到用户文件中，将所有列出的生物分子序列下 载到不具有分类信息的数据库电子表格中，和在所选的生物分子序列子 集上显示分类信息。

如果用户选择在所选的生物分子序列子集上显示分类信息，可将第 二个GUI提供给用户。在一个实施方案中，第二个GUI可包含用于如上 所述产生表达特性数据库的一个或多个外部数据库的列表。此外，对于 每个外部数据库，该GUI可显示与每个外部数据库有关的一个或多个域 的列表。在另一个实施方案中，该GUI可容许用户选择或取消选定在第 二个GUI中显示的一个或多个域当中的每一个。在另一个实施方案中， 该GUI可容许用户选择或取消选定一个或多个外部数据库当中的每一 个。

本发明方法还涉及本发明组合物和方法的商业以及其它应用。在一 个方面，本发明方法包括市售、销售或特许本发明组合物和方法，以及 表达特性数据库，包括特别是依据本发明化合物使用而产生的数据库， 以提供给消费者，即患者、医师、医疗服务提供者、研究机构和药物销 售商或生产商。

在另一个实施方案中，本发明方法包括建立用于分配本发明药物组 合物以销售的分配系统，并可任选包括建立销售药物组合物的销售组。 本发明另一个方面提供了进行目标发明的方法，包括通过一种或多种上 述药物开发方法如上所述鉴定可调节基因表达水平或基因产物例如基 底膜蛋白聚糖的活性的测试化合物；确定所鉴定的活性剂或其类似物在 动物中的效力和毒性方面的治疗特性；和任选配制包含一种或多种具有 可接受的治疗特性的所鉴定的活性剂的药物组合物；以及任选许可或销 售对所述鉴定出的活性剂进行进一步药物开发的权力。

药物组合物

除了本文所公开的化合物以外，本发明药物组合物还可以包含至少 一种任意合适的辅助剂，例如但不限于稀释剂、粘合剂、稳定剂、缓冲 剂、盐、亲脂性溶剂、防腐剂、辅料等。可药用辅助剂是优选的。制备 这样的无菌溶液的实施例和方法是本领域众所周知的，并且参见众所周 知的教科书，包括但不限于REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Gennaro，Ed.18th Edition，Mack Publishing Co.(1990))。可常规 选择适于给药方式、化合物的溶解度和/或稳定性的可药用载体。

可用于本发明的药物赋形剂和添加剂包括但不限于蛋白、肽、氨基 酸、脂质和糖类(例如糖，包括单糖、二糖、三糖、四糖和低聚糖；糖 衍生物例如糖醇、醛糖酸、酯化的糖等；和多糖或糖聚合物)，它们可 单独使用或联合使用，并且用量为1-99.99％，按重量或体积计。蛋白 赋形剂的实例包括血清白蛋白例如人血清白蛋白(HAS)、重组人白蛋白 (rHA)、明胶、酪蛋白等。还具有缓冲剂作用的代表性的氨基酸组分包 括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半 胱氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、天 冬甜素等。

适用于本发明的糖类赋形剂包括例如单糖例如果糖、麦芽糖、半乳 糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖；二糖例如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维 二糖等；多糖例如蜜三糖、松三糖、麦芽糖糊精、葡聚糖、淀粉等；和 糖醇例如甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨醇、肌醇 等。

包含本发明化合物的药物组合物还可以包含缓冲剂或pH调节剂。 典型地，缓冲剂是由有机酸或碱制得的盐。代表性缓冲剂包括有机酸盐 例如下列酸的盐：柠檬酸、抗坏血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、 乙酸或邻苯二甲酸；Tris、氨丁三醇盐酸盐或磷酸盐缓冲剂。

此外，本发明的药用组合物可以包含聚合赋形剂/添加剂例如聚乙 烯吡咯烷酮、ficolls(一种聚合糖)、糊精(例如环糊精如2-羟基丙基 -β-环糊精)、聚乙二醇、矫味剂、抗微生物剂、甜味剂、抗氧化剂、抗 静电剂、表面活性剂(例如聚山梨醇酯如“吐温20”和“吐温80”)、 脂质(例如磷脂、脂肪酸)、甾类化合物(例如胆固醇)和鳌合剂(例如 EDTA)。这些和其它已知的适用于本发明的药物赋形剂和/或添加剂是本 领域已知的，例如列在REMINGTON：THE SCIENCE & PRACTICE OF PHARMACY (19th ED.Williams & williams(1995))和PHYSICIAN’s DESK REFERENCE (52nd ed.，Medical Economics(1998))中，这些文献的公开内容全文 引入本文以供参考。

用于口服给药的药物组合物

对于以片剂或胶囊形式口服给药，可将本发明化合物与口服、无毒 可药用惰性载体例如乙醇、甘油、水等合并。此外，当希望或必须时， 还可以向混合物中掺入合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂。合适 的粘合剂包括但不限于淀粉；明胶；天然糖例如葡萄糖或β-乳糖；玉米 甜味剂；天然和合成树胶例如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻酸钠、羧甲基纤维 素；聚乙二醇；蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括但不限于油酸钠、 硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不 限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。

适于口服给药的本发明制剂可作为下列形式提供：不连续单位例如 分别含有预定量活性组分的胶囊、扁囊剂或片剂；粉剂或粒剂；在水液 体或非水液体中的溶液或悬浮液；或水包油液体乳剂或油包水乳剂，和 大丸剂等。

片剂可通过任选与一种或多种辅助成分压缩或模制来制得。压缩片 可通过在合适的机器中，将任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐 剂、表面活性剂或分散剂混和的活性组分压片来制得。模制片可通过将 用惰性液体稀释剂润湿的化合物粉末混合物在合适的机器中模制来制 得。可任选给片剂包衣或刻痕，并且可将片剂配制成缓慢或控制释放其 中的活性组分的形式。

此外，可将组合物掺入到让化合物持续释放的生物可降解聚合物 内，将聚合物植入到希望递送药物的位置附近，例如植入到再狭窄位置 上。Brem等人，74 J.NEUROSURG.441-46(1991)中详细描述了生物 可降解聚合物及其应用。持续释放组合物的合适的实例包括含有本发明 化合物的固体疏水性聚合物的半渗透基体，所述基体呈有形物品例如膜 或微胶囊的形式。持续释放基体的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(异丁 烯酸2-羟基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(U.S.专利3,773,919)、L- 谷氨酸与L-谷氨酸乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降 解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOT_(Tap Pharmaceuticals， Inc.，Chicago，IL)(由乳酸-乙醇酸共聚物和leuprolide乙酸酯构成 的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。

用于非胃肠道给药的药物组合物

适于非胃肠道给药的制剂包括水和非水无菌注射溶液，其中可含有 抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与接受者的血液等渗的溶质；和 可含有悬浮剂和增稠剂的水和非水无菌悬浮液。制剂可以在单位剂量或 多剂量容器例如密封安瓿和小瓶中提供，并且可以在冷冻干燥(冻干)条 件下贮藏，在临使用前只需加入无菌液体载体例如注射用水即可。临时 注射溶液和悬浮液可由上述种类的无菌粉剂、粒剂或片剂制得。

对于非胃肠道给药，无菌悬浮液和溶液是可取的。当需要静脉内给 药时，采用一般含有合适的防腐剂的等渗制剂。药物组合物可通过将由 溶解在惰性液体载体中的活性组分组成的制剂注射来非胃肠道给药。本 文所用术语“非胃肠道给药”包括但不限于皮下注射、静脉内注射、肌 内注射、腹膜内注射或输注技术。可接受的液体载体包括例如植物油如 花生油、棉籽油、芝麻油等，以及有机溶剂如solketal、环亚甲基甘油 醚等。制剂可这样制得：将活性组分溶解或悬浮在液体载体中，使最终 的制剂含有约0.005％-30％重量的活性组分，即本发明化合物。

用于其它给药途径的药物组合物

适于在口中局部给药的制剂包括锭剂，其中在矫味的基质，通常是 蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶中包含活性组分；软锭剂，其中在惰性基质例 如明胶和甘油或者蔗糖和阿拉伯胶中包含活性组分；和漱口剂，其中在 合适的液体载体中包含欲给药的化合物。液体剂型可包含适当矫味的悬 浮剂或分散剂例如合成和天然树胶，如黄蓍胶、阿拉伯胶、甲基纤维素 等。

用于直肠给药的制剂可作为栓剂提供，所述栓剂具有合适的基质， 包括例如椰子油或水杨酸酯。

适于阴道给药的制剂可作为阴道栓、阴道塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、 泡沫剂或喷雾剂提供，除了活性组分以外，这样的制剂还含有本领域已 知的适当载体。

还可以将本发明化合物包囊在通过例如凝聚技术或通过界面聚合 例如羟甲基纤维素而制得的微胶囊，或明胶微胶囊和聚(异丁烯酸甲酯) 微胶囊中，包囊在胶态药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳 剂、纳米颗粒和纳米胶囊)或大乳剂中。REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES(A.Osol，ed.16th ed.(1980))。

在具体的实施方案中，将本文公开的化合物配制成脂质体。含有本 发明化合物的脂质体可通过本领域已知的方法制得。参见例如U.S.专利 5,013,556；4,485,045；4,544,545；WO 97/38731；Epstein等人，82 PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 3688(1985)；和Hwang等人，77 PROC.NATL. ACAD.SCI.USA 4030(1980)。本发明化合物还可以以脂质体递送系统 例如小的单层囊、大的单层囊和多层囊形式给药。脂质体可用多种磷脂 例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成。

本发明化合物还可以通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶联 的单独载体来递送。还可以将本发明化合物与作为靶向药物载体的合适 的聚合物偶联。这样的聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚 羟基丙基异丁烯酰胺苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰基取代 的聚氧化乙烯聚赖氨酸。

可药用防腐剂

本发明提供了稳定的制剂和含有防腐剂的保护的溶液和制剂以及 适于药用和兽药用的多用途保护的制剂，其中在可药用制剂中包含至少 一种本文公开的化合物。本发明制剂可任选含有至少一种已知防腐剂。 防腐剂包括但不限于苯酚、间甲酚、对甲酚、邻甲酚、氯甲酚、苯甲醇、 亚硝酸苯汞、苯氧基乙醇、甲醛、氯丁醇、氯化镁(例如六水合物)、对 羟基苯甲酸烷基酯(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯 甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等)、苯扎氯铵、苄索氯铵、脱氢乙酸钠 和硫贡散，或其在含水稀释剂中的混合物。可使用本领域已知的任意合 适的浓度或混合物，例如0.001-5％，或任何范围和值。非限制性实例 包括无稀释剂、0.1-2％间甲酚、0.1-3％苯甲醇、0.001-0.5％硫贡 散、0.001-2.0％苯酚、0.0005-1.0％对羟基苯甲酸烷基酯等。

可任选将其它赋形剂例如等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、防腐增强剂 加到稀释剂中。等渗剂例如甘油通常以已知浓度使用。优选加入生理耐 受的缓冲剂以提供改善的pH控制。制剂可具有宽的pH范围，例如约pH 4-约pH10的范围，特别是约pH5-约pH9的范围，更特别是约pH6.0 -约pH8.0的范围。在一个方面，本发明制剂具有约6.8-约7.8的 pH。合适的缓冲剂包括磷酸盐缓冲剂例如磷酸钠和磷酸盐缓冲盐水 (PBS)。

其它添加剂例如可药用助溶剂如吐温20(聚氧化乙烯(20)脱水山 梨醇一月桂酸酯)、吐温40(聚氧化乙烯(40)脱水山梨醇一月桂酸酯)、 吐温80(聚氧化乙烯(80)脱水山梨醇一月桂酸酯)、Pluronic F68(聚 氧化乙烯聚氧化丙烯嵌段共聚物)和PEG(聚乙二醇)或非离子表面活性 剂例如聚山梨醇酯20或80或泊洛沙姆184或188、Pluronic_多元醇、 其它嵌段共聚物和鳌合剂例如EDTA和EGTA可任选加到药物组合物中以 减轻聚结。如果使用泵或塑料容器来施用药物组合物，这些添加剂是特 别有用的。存在的可药用表面活性剂可降低组合物聚结倾向。

在制备本发明化合物的任何方法期间，可能需要和/或希望保护任 何所关注分子上的敏感性或反应性基团。这可通过常规保护基，例如在 下列文献中描述的保护基来实现：PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC CHEMISTRY(1973)和Green和Wuts，PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYBTHESIS(1991)。可使用本领域已知的方法在适宜的随后阶段除去保 护基。

给药途径

本发明还涉及通过下列途径施用至少一种本文公开的化合物：包括 但不限于口服给药、非胃肠道给药、皮下给药、肌内给药、静脉内给药、 关节内给药、支气管内给药、腹内给药、囊内给药、软骨内给药、腔内 给药、腹腔内给药、小脑内给药、脑室内给药、结肠内给药、子宫颈内 给药、胃内给药、肝内给药、心肌内给药、骨内给药、骨盆内给药、心 包内给药、腹膜内给药、胸膜内给药、前列腺内给药、肺内给药、直肠 内给药、肾内给药、视网膜内给药、脊柱内给药、滑膜内给药、胸内给 药、子宫内给药、膀胱内给药、快速浓注、阴道给药、直肠给药、颊给 药、舌下给药、鼻内给药、离子电渗装置或透皮装置。

经肺/经鼻给药

对于本发明化合物的给药，吸入装置有几个可取特征。例如，通过 吸入装置给药是可靠的、可再现的以及精确的。对于经肺给药，将至少 一种药物组合物以能有效达到肺的下部气道或窦的颗粒大小递送。为了 获得良好的可吸入性，吸入装置可任选递送小的干燥颗粒，例如颗粒小 于约10μm，优选为约1-15μm。

根据本发明，可通过本领域已知的用于通过吸入来施用治疗剂的任 何多种吸入或鼻用装置来递送至少一种药物组合物。能够将气雾化的制 剂在患者窦腔或肺泡内沉积的装置包括计量剂量吸入器、雾化器、干粉 生成器、喷雾器等。适于进行经肺或经鼻给药的其它装置也是本领域已 知的。

所有这样的装置都可用于施用气雾剂形式的药物组合物。合适的气 雾剂可包含溶液(水溶液或非水溶液)或固体颗粒。计量剂量吸入器例如 ventolin_计量剂量吸入器通常使用推进气体，并且在吸入期间需要启 动。参见例如WO 98/35888；WO 94/16970。干粉吸入器例如Turbuhaler_ (Astra)、Rotahaler_(Glaxo)、Diskus_(Glaxo)、Spiros_吸入器 (Dura)、Inhale Therapeutics销售的装置以及Spinhale_粉末吸入器 (Fisons)使用呼气启动的混和粉末。参见U.S.专利5,458,135； 4,668,218；WO 97/25086；WO 94/08552；WO 94/06498；和EP 0237507， 这些专利分别全文引入本文以供参考。喷雾器例如AERx_、Aradigm、 Ultravetn_喷雾器(Mallinckrodt)和Acorn II_喷雾器(Marquest Medical Products)—上述文献全文引入本文以供参考—从溶液中产生 气雾剂，而计量剂量吸入器、干粉吸入器等产生小的颗粒气雾剂。这些 市售吸入装置的具体实例是为了适于实施本发明的具体装置，并不是为 了限制本发明的范围。

其中载体是固体的适于经鼻给药的制剂包括粒径为20-50微米的 粗糙粉末，其是以鼻吸的方式给药，即从紧靠在鼻子上的粉末的容器中 经由鼻管迅速吸入。其中载体是液体，例如鼻喷雾剂或滴鼻剂的适当给 药制剂包括活性组分的水或油溶液。

包含本发明药物组合物的喷雾剂可通过将本发明化合物的悬浮液 或溶液经由喷嘴加压来制得。可选择喷嘴大小和构型、施加的压力和液 体进料速度来实现所需的排出量和粒径。电喷雾可通过例如与进料毛细 管或喷嘴连接的电场来产生。有利起见，至少一种通过喷雾器递送的化 合物的颗粒的粒径为小于约1μm至小于约20μm。

适于用喷雾器施用的至少一种本发明化合物的药物组合物一般包 括在水溶液中的本发明化合物，化合物的浓度为约0.1mg-约100mg 本发明化合物/ml溶液或mg/g，或其中的任何范围或值，包括但不限于 0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、 0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、 26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100mg/ml或 mg/g。药物组合物可包括辅助剂例如赋形剂、缓冲剂、等渗剂、防腐剂、 表面活性剂或其它已知的药物组合物辅助剂。

本发明药物组合物可通过喷雾器例如喷射式喷雾器或超声喷雾器 给药。典型地，在喷射式喷雾器中，使用压缩的气体源来经由喷嘴产生 高速气体。在气体膨胀出喷嘴时，产生了低压区域，该低压区域将组合 物蛋白溶液经由与液体贮存器连接的毛细管中驱出。从毛细管出来的液 体流在离开管时被剪切成不稳定的细丝和液滴，从而产生气雾剂。可使 用多种不同构造、流速和挡板类型来从给定的喷射式喷雾器中获得所需 的性能特征。在超声喷雾器中，使用高频电能来产生振动的机械能，一 般是采用压电式转换器。该能量被直接或经由偶合流体传递给组合物蛋 白制剂，产生包括组合物蛋白的气雾剂。有利起见，通过喷雾器递送的 药物组合物的颗粒具有小于约1μm至小于约20μm的粒径。

适于用喷射式或超声喷雾器递送的包含本发明化合物的药物组合 物一般包括约0.1mg-约100mg本发明化合物/ml溶液或mg/g的浓度， 或其中的任何范围或值，包括但不限于本文公开的关于喷雾组合物的各 个量。药物组合物可包括辅助剂例如赋形剂、缓冲剂、等渗剂、防腐剂、 表面活性剂以及其它已知的药物组合物辅助剂。

在计量剂量吸入器(MDI)中，推进剂、本发明化合物以及任何赋形 剂或其它添加剂作为混合物包含在罐中，并且还包括液化、压缩的气体。 启动计量阀门释放气雾剂形式的混合物，优选包含粒径为小于约1μm 至小于约20μm的颗粒。

所需的气雾剂粒径可通过采用通过各种本领域技术人员已知的方 法，包括但不限于射流粉碎、喷雾干燥、临界点浓缩等制备的本发明化 合物的制剂来获得。合适的计量剂量吸入器包括由3M或Glaxo生产的 并且采用氢氟碳推进剂的那些。

适于用计量剂量吸入器装置递送的药物组合物一般包括细分散的 粉末，其中含有作为在非水介质中的悬浮液的本发明化合物，例如借助 于表面活性剂悬浮在推进剂中的本发明化合物。推进剂可以是任何常用 于此的材料，例如氯氟碳、氢氯氟碳、氢氟碳或烃，包括三氯甲烷、二 氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇和1，1，1，2-四氟乙烷、HFA-134a(氢氟烷 -134a)、HFA-227(氢氟烷-227)等。在一个实施方案中，推进剂是氢氟 碳，可选择表面活性剂来稳定作为在推进剂中的悬浮液的本发明化合 物，以保护活性剂不发生化学降解等。合适的表面活性剂包括脱水山梨 醇三油酸酯、大豆卵磷脂、油酸等。在某些情况下，使用溶剂例如乙醇 的溶液气雾剂是优选的。本领域技术人员应当认识到，本发明方法可通 过用本文没有描述的装置经肺施用本发明化合物来实施。

对于经由粘膜表面吸收，用于施用本文公开的化合物的本发明组合 物和方法包括乳剂，其中包含亚微米颗粒、粘膜粘着性大分子、生物活 性肽和连续水相的复合体，其通过实现乳剂颗粒的粘膜粘着来促进经由 粘膜表面的吸收。参见例如U.S.专利5,514,670。适于施用本发明乳剂 的粘膜表面可包括角膜、结膜、颊、舌下、鼻、阴道、肺、腹、肠和直 肠给药途径。用于阴道或直肠给药的药物组合物例如栓剂可含有例如聚 亚烷基二醇、凡士林、椰子油等作为赋形剂。用于鼻内给药的药物组合 物可以是固体，并且含有赋形剂例如乳糖，或者可以是水或油溶液形式 的滴鼻剂。对于颊给药，赋形剂包括糖、硬脂酸钙、硬脂酸镁、预凝胶 化淀粉等。参见例如U.S.专利5,849,695。

在另一个实施方案中，本发明药物组合物可使用本领域技术人员众 所周知的透皮贴剂经由透皮途径给药。对于透皮给药，将本发明化合物 包囊在递送装置例如脂质体或聚合纳米颗粒、微颗粒、微胶囊或微球(除 非另有说明，通称为微颗粒)中。多种合适的装置是已知的，包括由下 列材料制成的微颗粒：合成聚合物例如聚羟基酸如聚乳酸、聚乙醇酸及 其共聚物，聚原酸酯，聚酸酐，和聚磷腈，以及天然聚合物例如胶原、 聚氨基酸、白蛋白和其它蛋白，藻酸酯和其它多糖，及其组合。参见例 如U.S.专利5,814,599。为了以透皮递送系统的形式给药，在给药方案 期间剂量施用可以是连续的而不是间歇的。

适于对皮肤局部给药的制剂可以作为膏剂、霜剂、凝胶剂和糊剂提 供，其中在可药用载体中包含欲施用的组分。优选的局部给药系统是包 含本发明化合物的透皮贴剂。

可将包含本发明化合物的局部给药用组合物与多种本领域众所周 知的载体材料混和，这些载体材料包括醇、库拉索芦荟凝胶、尿囊素、 甘油、维生素A和E油、矿物油、PPG2肉豆蔻醇丙酸酯等，以形成例如 醇溶液、局部清洁剂、清洁用霜剂、皮肤用凝胶剂、皮肤洗剂和在霜剂 或凝胶制剂中的香波。这样的载体和配制方法的实例可参见REMINGTON’ S PHARMACEUTICAL SCIENCES(1990)。药物制剂可含有约0.005％-约 10％重量的活性组分。在一个实施方案中，药物制剂含有约0.01％-约 5％重量的本发明化合物。

有时希望将本发明化合物在延长的时间内，例如在1周-1年的时 间内从单次给药中递送给个体。可采用一些医疗装置来提供连续间歇或 定时对患者给药。装置可以是扩散装置的泵或含有药物贮库和任选用于 调控药物递送的诊断或监测部件的其它装置。可使用各种缓释、贮库或 植入物剂型。例如，剂型可含有在体液中具有低溶解度的本发明化合物 的可药用无毒盐，例如(a)与下列酸形成的酸加成盐：多元酸例如磷酸、 硫酸、柠檬酸、酒石酸、鞣酸、扑酸、藻酸、聚谷氨酸、萘一磺酸或萘 二磺酸、聚半乳糖醛酸等；(b)与多价金属阳离子例如锌、钙、铋、钡、 镁、铝、铜、钴、镍、镉等形成的盐，或者与有机阳离子形成的盐，例 如与N，N’-二苄基乙二胺或乙二胺形成的盐；或(c)(a)与(b)的组合， 例如锌鞣酸盐。此外，可将本发明化合物或优选较不溶性盐例如上述盐 配制成凝胶剂，例如具有例如适于注射的芝麻油的一硬脂酸铝凝胶。盐 的实例包括但不限于锌盐、锌鞣酸盐、扑酸盐等。另一种用于注射的缓 释贮库制剂将含有分散或包囊在缓慢降解的无毒非抗原性聚合物例如 聚乳酸/聚乙醇酸聚合物中的本发明化合物或盐，例如，如U.S.专利 3,773,919中所述。还可以将本发明化合物或较不溶性盐例如上述盐在 胆固醇基质硅橡胶小丸，特别是在动物中使用的硅橡胶小丸中配制。其 它缓释、贮库或植入制剂例如气体或液体脂质体是文献中已知的。参见 例如U.S.专利5,770,212；SUSTAINED AND CONTROLLED RELEASE DRUG DELIVERY SYSTEMS(1978)。

其它实例包括通过含有生物可降解组合物的缓释递送系统提供欲 施用的本发明化合物。生物可降解组合物可由生物可降解、水可凝固、 非聚合材料与能够在水介质中混溶以分散的生物相容、无毒有机溶剂组 成。该递送系统可在引起溶剂经由所形成的微孔基质从组合物消散、分 散或渗透到周围组织液体内的植入位点上植入。

本文所用术语“植入位点”是指包括在其中或其上施用非聚合组合 物的位点。植入或植入位点还可以包括用固体装置掺入包含至少一种本 发明化合物的药物组合物。例如，将药物组合物掺入到植入个体内的斯 滕特固定模的包被内。此外，其它固体或生物可降解材料可用作在上面 施加药物组合物的基质。之后将包含药物组合物的包被材料植入、插入 个体或患者内或放置到与个体或患者相邻的位置上。术语“生物可降解” 是指随着时间的延长，通过酶的作用，通过简单或酶催化的水解作用和 /或通过人体中的其它类似机制，植入物的非聚合材料和/或基质将降 解。“生物分解”是指随着时间的延长，至少部分由于和在周围组织液 体、细胞作用等中发现的物质接触，植入物基质将受腐蚀或分解。“生 物可吸收”是指非聚合基质将在人体内分解，并被例如细胞、组织等在 人体内吸收。

可用于组合物的非聚合材料一般是生物相容、基本上不溶于水和体 液以及生物可降解和/或生物可分解的那些。非聚合材料能够至少部分 溶解在水溶性有机溶剂中。非聚合材料还能够凝结或固化以形成固体植 入物基质。将非聚合材料与相容的适当有机溶剂合并以形成具有所需稠 度的组合物，所述稠度从稀薄到粘稠到可摊开的油灰或糊不等。

合适的有机溶剂是生物相容的、可药用溶剂，并且将非聚合材料至 少部分溶解。有机溶剂在水中的溶解度从混溶到可分散不等。可任选在 组合物中包括孔形成剂以在植入物基质中产生另外的孔。孔形成剂可以 是任何有机或无机可药用物质，其在水和体液中大量溶解，在植入位点 将从植入物的凝结性非聚合材料和/或固体基质中消散到周围体液内。

本发明化合物能够在动物体中提供局部或全身生物、生理或治疗作 用。在配制本文描述的某些药物组合物的过程中，本发明化合物优选可 溶解或分散在非聚合组合物中，以形成均匀混合物，并且在植入时，掺 入到植入物基质内。在固体基质随着时间分解时，化合物能够从基质释 放到相邻组织液体内，和进入与植入位点相邻或远离植入位点的有关身 体组织或器官中，优选以控制的速度释放。化合物从基质中的释放可通 过例如化合物在水介质中的溶解度、化合物在基质内的分布、固体基质 的大小、形状、孔隙率和溶解度以及生物降解度来改变。参见例如U.S. 专利5,888,533。组分在欲施用给患者的组合物中量和浓度通常能有效 实现预期目的。

可通过包含悬浮在聚合物基质中的微颗粒的生物活性剂递送系统 来施用本发明化合物。微颗粒可以是本领域通常已知的微胶囊、微球或 纳米球。微颗粒应当能够完整地包在聚合物内，或者一旦在生物环境中 即变为凝胶。微颗粒可以是生物可降解的或非生物可降解的。现有技术 中提出了很多用于将生物活性剂掺入到微颗粒载体内的微包囊技术。参 见例如U.S.专利4,652,441；5,100,669；4,438,253；和5,665,428。

优选的聚合基质将是生物可降解的，并且在低温表现出水溶性，而 且在哺乳动物生理体温下发生可逆的热胶凝。随着时间的延长，聚合基 质能够以控制的方式释放包封在其基质内的物质。在水或生理环境中， 通过酶或非酶水解作用，聚合物逐渐降解。参见例如U.S.专利 6,287,588。

本发明化合物可通过药物递送组合物给药，所述组合物包含微颗 粒，所述微颗粒含有悬浮在聚合物基质中的至少一种化疗剂和至少一种 化学增敏剂。微颗粒可以是本领域通常已知的微胶囊、微球或纳米球。 在生理环境中微颗粒可以是生物可降解的或者是稳定的。微颗粒还容许 化疗剂和化学增敏剂从核芯中经由基质以预定释放速度扩散。离子化疗 剂适于在本发明递送组合物中给药。本发明药物递送组合物可以经由多 种已知的给药途径递送到靶位点。掺入到药物递送组合物中的化疗剂和 化学增敏剂的剂量取决于个体需要、所需作用和所选的给药途径。参见 例如WO 98/50018。

剂量确定

本文所公开的化合物一般可单独或者与其它治疗剂一起以适当剂 量使用，所述适当剂量是通过常规试验确定的能够获得最佳疗效，同时 将任何可能的毒性作用降至最小的剂量。可依据多种因素选择使用本发 明化合物的给药方案，这些因素包括患者的类型、种类、年龄、体重、 性别、病症；所治疗病症的严重程度；给药途径；患者的肾和肝脏功能； 和所用的特定化合物。医师和兽医可容易地确定和在处方中使用预防、 对抗或抑制病症进程所需的药物的有效量。

在获得在产生最大效力和具有最小毒性的范围内的药物浓度的过 程中，最佳精度可需要基于一个或多个靶位点利用化合物的动力学的方 案。当确定治疗方案的最佳浓度时，可以考虑药物的分布、平衡和消除。 当联合使用以获得所需效果时，可调节本发明化合物的剂量。另一方面， 这些不同治疗剂的剂量可以单独优化和组合以获得协同效果，其中病症 被减轻的程度大于单独使用任一种治疗剂所获得的效果。

特别是，本发明化合物的毒性和疗效可通过标准药理方法在细胞培 养物或实验动物中确定，例如确定LD50(导致50％群体死亡的剂量)和 ED50(在50％群体中有疗效的剂量)。毒性与疗效的剂量比例是治疗指 数，并且可以以LD50/ED50比例表示。表现出大的治疗指数的化合物是优 选的，除了当化合物的细胞毒性是所需活性或治疗结果时。虽然可以使 用表现出毒性副作用的化合物，但是递送系统可将这样的化合物靶向递 送到患病组织位点中，以将对未患病细胞的可能损害作用降至最小，由 此降低了副作用。本发明化合物通常可以以实现最大效力和带来最小毒 性作用的方式给药。

在决定用于人的剂量范围时，可使用在细胞培养测定和动物实验中 获得的数据。化合物的剂量优选在包括ED50，且具有很小或没有毒性作 用的循环浓度范围内。剂量可在该范围内改变，并取决于所用的剂型和 使用的给药途径。对于本发明方法中使用的任何化合物，最初可从细胞 培养测定中估计治疗有效剂量。可在动物模型中使用该剂量以获得包括 如在细胞培养中确定的IC50(达到症状最大抑制一半时测试化合物的浓 度)的循环血浆浓度。这样的信息可用于精确确定在人中的有用剂量。 可通过例如高效液相色谱法测定在血浆中的水平。

此外，本发明药物组合物的剂量给药可用药动学/药代学模型系统 来优化。例如，可选择一种或多种给药方案，并且可使用药动学/药代 学模型来确定一种或多种给药方案的药动学/药代学特性。然后可根据 特定的药动学/药代学特性选择能够实现所需药动学/药代学反应的一 个给药方案。参见WO 00/67776，该文献全文引入本文以供参考。

对于治疗和预防目的，测定本发明药物组合物或本发明药物组合 (不论是否配制在同一组合物中)的有效剂量的方法是已知的。对于治疗 目的，本文所用术语“联合有效量”是指单独或联合使用的每一活性化 合物或药物活性剂的量，这样的量在组织系统、动物或人中引起生物或 医疗反应，这样的反应是由研究人员、兽医、临床医生或其它医师寻找 的，并且包括减轻所治疗的疾病或病症的症状。对于预防目的(即抑制 病症发作或进展)，术语“联合有效量”是指单独或联合使用的每一活 性化合物或药物活性剂的量，这样的量在个体中抑制病症发作或进展， 这样的作用是由研究人员、兽医、临床医生或其它医师寻找的。因此， 本发明提供了两种或多种治疗剂的组合，其中，例如(a)每一治疗剂以 独立的治疗或预防有效量给药；(b)所述组合中至少一种治疗剂以这样 的量给药，如果是单独给药，该量是亚治疗或亚预防量，但是当与第二 种或另外的本发明治疗剂联合给药时，是治疗或预防量；或(b)两种治 疗剂都以这样的量给药，如果是单独给药，该量是亚治疗或亚预防量， 但是当一起给药时，是治疗或预防量。类似地，三种或更多种治疗剂的 组合也是可能的。联合治疗方法包括将含有所有活性剂的单一制剂共给 药；基本上同时施用一种以上的制剂；和施用单独配制的两种或多种活 性剂。

剂量

更具体来说，本发明药物组合物可以以单次日剂量给药，或者可将 总日剂量每天分2、3或4次给药。对于口服给药，本发明组合物的日 剂量可在约0.0001-约1000mg/患者/天的宽范围内改变。该范围更特 别为约0.001mg/kg-10mg/kg体重/天，对于成人(约60kg体重)， 约0.1-100mg，约1.0-50mg或约1.0-20mg/天。

药物组合物的日剂量可在约0.01-约1000mg/成人患者/天的宽范 围内改变。对于口服给药，药物组合物优选以片剂形式提供，所述片剂 含有0.1mg-约1000mg化合物，或0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、 10.0、15.0、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、 600、650、700、800、900或1000毫克活性化合物，对于欲治疗的患 者，可根据症状来调节剂量。通常以约0.1mg/kg-约20mg/kg体重/ 天的剂量水平提供有效量的药物。在一个实施方案中，该范围是约0.2 mg/kg-约10mg/kg体重/天。在另一个实施方案中，该范围是约0.5 mg/kg-约10mg/kg体重/天。在给药方案中，化合物每天可以给药约 1-约10次。

对于注射，每天对成人(约60kg体重)通过静脉内途径给予约0.01 -30mg，约0.1-20mg或约0.1-10mg通常是合适的。对于其它动 物，也可以施用按照60kg计算的剂量。

本发明化合物的剂量可任选包括0.0001-1,000mg/kg/给药，或 0.001-100.0mg/kg/给药，0.01-10mg/kg/给药，0.1-10mg/kg/ 给药，包括0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、 36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、 52、53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、64、65、66、67、68、 69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、 85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99和/ 或100-500mg/kg/给药，或其任何范围、值或部分，以获得0.1、0.5、 0.9、1.0、1.1、1.2、1.5、1.9、2.0、2.5、2.9、3.0、3.5、3.9、4.0、 4.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、8.5、 8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、20、12.5、 12.9、13.0、13.5、13.9、14.0、14.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、 6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、8.5、8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、 10.9、11.11.5、11.9、12、12.5、13.0、13.5、13.9、14、14.5、15、 15.5、15.9、16、16.5、16.9、17、17.5、17.9、18、18.5、18.9、19、 19.5、19.9、20、20.5、20.9、21、22、23、24、25、26、27、28、29、 30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、96、100、 200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、 3000、3500、4000、4500和/或5000μg/ml的血清浓度/单次或多次给 药，或其任何范围、值或部分。

作为非限制性实例，人或动物的治疗可通过下列单次或定期剂量来 提供：0.1-100mg本发明化合物/kg，例如0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、50、60、70、 80、90或100mg/kg/天，在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、 28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40天当中的至 少1天中提供，或在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、 30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、 46、47、48、49、50、51或52周中的至少1周中提供，或在1、2、3、 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20 年当中的至少1年中提供，或其任何组合，使用单次、输注或反复剂量 给药。

具体来说，本发明药物组合物可在几周的时间内每周给药至少一 次。在一个实施方案中，在几周到几个月的时间内，药物组合物每周给 药至少一次。在另一个实施方案中，在4-8周时间内，药物组合物每 周给药一次。在另一个实施方案中，在4周时间内，药物组合物每周给 药一次。

更具体来说，本发明药物组合物可在约2天的时间内每天给药至少 一次，在约3天的时间内每天给药至少一次，在约4天的时间内每天给 药至少一次，在约5天的时间内每天给药至少一次，在约6天的时间内 每天给药至少一次，在约7天的时间内每天给药至少一次，在约8天的 时间内每天给药至少一次，在约9天的时间内每天给药至少一次，在约 10天的时间内每天给药至少一次，在约11天的时间内每天给药至少一 次，在约12天的时间内每天给药至少一次，在约13天的时间内每天给 药至少一次，在约14天的时间内每天给药至少一次，在约15天的时间 内每天给药至少一次，在约16天的时间内每天给药至少一次，在约17 天的时间内每天给药至少一次，在约18天的时间内每天给药至少一次， 在约19天的时间内每天给药至少一次，在约20天的时间内每天给药至 少一次，在约21天的时间内每天给药至少一次，在约22天的时间内每 天给药至少一次，在约23天的时间内每天给药至少一次，在约24天的 时间内每天给药至少一次，在约25天的时间内每天给药至少一次，在 约26天的时间内每天给药至少一次，在约27天的时间内每天给药至少 一次，在约28天的时间内每天给药至少一次，在约29天的时间内每天 给药至少一次，在约30天的时间内每天给药至少一次，或者在约31天 的时间内每天给药至少一次。

或者，本发明药物组合物可每天给药约一次，每2天给药约一次， 每3天给药约一次，每4天给药约一次，每5天给药约一次，每6天给 药约一次，每7天给药约一次，每8天给药约一次，每9天给药约一次， 每10天给药约一次，每11天给药约一次，每12天给药约一次，每13 天给药约一次，每14天给药约一次，每15天给药约一次，每16天给 药约一次，每17天给药约一次，每18天给药约一次，每19天给药约 一次，每20天给药约一次，每21天给药约一次，每22天给药约一次， 每23天给药约一次，每24天给药约一次，每25天给药约一次，每26 天给药约一次，每27天给药约一次，每28天给药约一次，每29天给 药约一次，每30天给药约一次，或者每31天给药约一次。

或者，本发明药物组合物可每周给药约一次，每2周给药约一次， 每3周给药约一次，每4周给药约一次，每5周给药约一次，每6周给 药约一次，每7周给药约一次，每8周给药约一次，每9周给药约一次， 每10周给药约一次，每11周给药约一次，每12周给药约一次，每13 周给药约一次，每14周给药约一次，每15周给药约一次，每16周给 药约一次，每17周给药约一次，每18周给药约一次，每19周给药约 一次，每20周给药约一次。

或者，本发明药物组合物可每个月给药约一次，每2个月给药约一 次，每3个月给药约一次，每4个月给药约一次，每5个月给药约一次， 每6个月给药约一次，每7个月给药约一次，每8个月给药约一次，每 9个月给药约一次，每10个月给药约一次，每11个月给药约一次，或 者每12个月给药约一次。

或者，本发明药物组合物可在约2周的时间内每周给药至少一次， 在约3周的时间内每周给药至少一次，在约4周的时间内每周给药至少 一次，在约5周的时间内每周给药至少一次，在约6周的时间内每周给 药至少一次，在约7周的时间内每周给药至少一次，在约8周的时间内 每周给药至少一次，在约9周的时间内每周给药至少一次，在约10周 的时间内每周给药至少一次，在约11周的时间内每周给药至少一次， 在约12周的时间内每周给药至少一次，在约13周的时间内每周给药至 少一次，在约14周的时间内每周给药至少一次，在约15周的时间内每 周给药至少一次，在约16周的时间内每周给药至少一次，在约17周的 时间内每周给药至少一次，在约18周的时间内每周给药至少一次，在 约19周的时间内每周给药至少一次，或者在约20周的时间内每周给药 至少一次。

或者，本发明药物组合物可在约1个月的时间内每周给药至少一次， 在约2个月的时间内每周给药至少一次，在约3个月的时间内每周给药 至少一次，在约4个月的时间内每周给药至少一次，在约5个月的时间 内每周给药至少一次，在约6个月的时间内每周给药至少一次，在约7 个月的时间内每周给药至少一次，在约8个月的时间内每周给药至少一 次，在约9个月的时间内每周给药至少一次，在约10个月的时间内每 周给药至少一次，在约11个月的时间内每周给药至少一次，或者在约 12个月的时间内每周给药至少一次。

联合治疗

此外，可能需要将本发明化合物与其它治疗剂共同给药或依次给 药，所述其它治疗剂是例如化疗剂、免疫抑制剂、细胞因子、细胞毒性 剂、溶核化合物、放射性同位素、受体，和可天然或通过重组方法生成 的前药激活性酶。联合给药包括使用分开的制剂或单一药物制剂共同给 药，或以任何顺序顺序给药，其中优选两种(或所有)活性治疗剂同时实 施其生物活性的时间。

本发明化合物可以与至少一种选自下列的治疗剂联合给药：抗风湿 药(例如甲氨蝶呤、金诺芬、金硫葡糖、硫唑嘌呤、依那西普、硫代苹 果酸金钠、硫酸羟氯喹、来氟米特、柳氮磺吡啶)、肌肉松弛剂、麻醉 剂、非甾类抗炎药物(NSAID)、镇痛剂、麻醉药、镇静剂、局部麻醉药、 神经肌肉阻断剂、抗癌药物、抗微生物剂(例如氨基糖苷、抗真菌药、 杀寄生虫药、抗病毒药、卡巴培南、头孢菌素、氟喹诺酮、大环内酯、 青霉素、氨苯磺胺、四环素、另一种抗微生物剂)、抗牛皮癣剂、皮质 类固醇、合成代谢类固醇、糖尿病治疗剂、矿物质、营养素、甲状腺剂、 维生素、涉及钙的激素、止泻剂、止咳剂、抗吐剂、抗溃疡剂、泻药、 抗凝血剂、红细胞生成素(例如阿法依泊汀)、非格司亭(例如G-CSF、 Neupogen)、沙格司亭(GM-CSF、白细胞素)、免疫化剂、免疫球蛋白、 免疫抑制剂(例如巴利昔单抗、环胞菌素、达克珠单抗)、生长激素、激 素替代药物、雌激素受体调节剂、散瞳剂、睫状肌麻痹药、烷化剂、抗 代谢物、有丝分裂抑制剂、放射性药物、抗抑郁剂、抗躁狂剂、抗精神 病剂、安眠药、拟交感神经药、兴奋剂、多奈哌齐、他克林、哮喘治疗 药物、β-激动剂、吸入甾类药物、白三烯抑制剂、甲基黄嘌呤、色甘酸、 肾上腺素或其类似物、阿法链道酶(Pulmozyme)或细胞因子。

这样的抗癌或抗微生物化合物还包括毒素分子，毒素分子与至少一 种本发明化合物组合、结合、一起配制、一起给药或以任一顺序依次给 药。毒素可任选选择性地杀死病变的细胞或组织。病变的细胞可以癌细 胞或其它细胞。这样的毒素可以是但不限于纯化或重组的毒素或包含至 少一个毒素功能细胞毒性域的毒素片段，例如选自至少一种蓖麻素、白 喉毒素、毒液毒素或细菌毒素的毒素。术语毒素还包括由任何天然、突 变或重组的细菌或病毒产生的内毒素和外毒素，这样的细菌或病毒可在 人或其它哺乳动物中引起任何病症，包括可导致死亡的毒素性休克。这 样的毒素包括但不限于大肠杆菌肠毒素热不稳定的肠毒素(LT)、热稳定 的肠毒素(ST)、Shugella细胞毒素、Aeromonas肠毒素、中毒性休克综 合征毒素-1(TSST-1)、葡萄球菌肠毒素A(SEA)、B(SEB)或C(SEC)、 链球菌肠毒素等。这样的细菌包括但不限于下列菌株：肠毒素生成性大 肠杆菌(ETEC)、肠出血性大肠杆菌(例如血清型0157：H7菌株)、葡萄球 菌属(Staphylococcus)(例如金黄色酿脓葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、白色酿脓葡萄球菌(Staphylococcus pyogenes))、志贺氏菌 属(Shigella)(例如疟疾志贺氏菌属(Shigella dysenteria)、Shigella flexneri、波伊德氏志贺氏菌属(Shigella boydii)和宋内氏志贺氏菌 属(Shigella sonneil))、沙门氏菌属(Salmonella)(例如Salmonella typhi、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholera-suis)、肠炎沙门氏菌 (Salmonella enteritidis))、梭菌属(Clostridium)(例如产气荚膜梭 菌(Clostridium perfringens)、艰难梭菌(Clostridium dificile)、 肉毒梭菌(Clostridium botulinum))、弯曲杆菌属(Camphlobacter)(例 如空肠弯曲杆菌(Camphlobacter jejuni)、胚胎弯曲杆菌 (Camphlobacter fetus))、螺杆菌属(Heliobacter)(例如幽门螺杆菌 (Heliobacter pylori))、气单胞菌属(Aeromonas)(例如温和气单胞菌 (Aeromonas sobria)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、豚鼠气 单胞菌(Aeromonas caviae))、类志贺气单胞菌(Pleisomonas shigelloides)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersina enterocolitica)、 弧菌属(Vibrios)(例如霍乱弧菌(Vibrios cholerae)、副溶血弧菌 (Vibrios parahemolyticus))、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、绿脓假单 胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和链球菌(Streptococci)。参见例如 Stein，ed.，INTERNAL MEDICINE，3rf ed.，pp1-13，Little，Brown 和Co.，Boston，(1990)；Evansh等人，eds.，Bacterial Infections of Humans：Epidemiology and Control，2d.Ed.，pp239-254，Plenum Medical Book Co.，New York(1991)；Mandell等人，Principles and Practice of Infectious Diseases，3d.Ed.，Churchill Livingstone， New York(1990)；Berkow等人，eds.，The Merck Manual，16th edition， Merck and Co.，Raheway，N.J.，1992；Wood等人，FEMS Microbiology Immunology，76：121-134(1991)；Marrack等人，Science， 248：705-711(1990)，所有这些文献都全文引入本文以供参考。

更特别地，本发明化合物可以与至少一种免疫抑制剂联合给药来用 于例如治疗或预防血管闭塞病症例如移植物血管病。合适的免疫抑制剂 包括但不限于CellCept(Roche Labs.)、Gengraf(Abbott Labs.Inc.)、 Micrhogam(Ortho-Clinical)、Neoral(Novartis)、Orthoclone OKT3 (Ortho-Biotech)、普乐可复(Fujisawa)、西罗莫司(Wyeth-Ayerst)、 山地明(Novartis)、即复宁(SangStat)、赛尼哌(Roche)。

在一个实施方案中，同时或以任何顺序依次和任何次数与本发明化 合物给药的治疗剂包括化疗剂。“化疗剂”是可用于治疗癌症的化合物。 化疗剂的实例包括但不限于烷化剂例如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯 例如白消安、胺丙磺酯和哌泊舒凡；环乙亚胺例如苯佐替派、卡波醌、 美妥替派和乌瑞替派；乙基亚胺类和methylamelamines，包括六甲蜜 胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺和塞替派；氮芥类例如苯丁酸氮芥、 萘氮芥、氯磷酰胺、雌二醇氮芥、异环磷酰胺、双氯乙基甲胺、双氯乙 基甲胺氧化物盐酸盐、左旋苯丙氨酸氮芥、新氮芥、phensterine、松 龙苯芥、氯乙环磷酰胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲类例如cannustine、氯脲 菌素、福莫司汀、罗氮芥、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素例如阿克拉霉 素、放线菌素、authramycin、重氮乙酰丝氨氮、博莱霉素、放线菌素C、 calicheamicin、carabicin、洋红霉素、嗜癌素、chromoinycins、放 线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素、 epirubicin、依索比星、idambicin、马塞罗霉素、丝裂霉素、酶酚酸、 诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、potfiromycin、嘌呤霉素、三铁阿霉 素、罗多比星、链霉黑素、链脲菌素、块菌素、乌苯美司、净司他丁、 佐柔比星；抗代谢物例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸拮抗药例 如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物例如氟达拉 滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物例如环孢苷、阿扎 胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖孢苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷、阿诺 他滨、氟尿苷、5-FU；雄激素例如二甲睾酮、丙酸曲他雄酮、环硫雄醇、 美雄烷、睾内酯；抗肾上腺剂例如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸 补充剂例如frolinic acid；醋葡醛内酯；aldophosphamide糖苷；5- 氨基酮戊酸；安吖啶；bestrabucil；bisantrene；依达曲沙；defofamine； 脱乙酰甲基秋水仙硷；地吖醌；elfornithine；依利醋铵；乙环氧定； 硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达 醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；phenamet；pirarubicin；鬼臼酸；2-乙 基酰肼；丙卡巴肼；PSK_；丙亚胺；西佐喃；螺旋锗；细格孢氮杂酸； 三亚胺苯醌；2，2’，2”-三氯乙胺；氨基甲酸乙酯；长春地辛；达卡 巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine； 阿糖孢苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷类药物例如紫杉醇、 (TAXOL_，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，NJ)和 doxetaxel(TAXOTERE_，Phone-Poulenc Rorer，Antony，France)； 苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物 例如顺铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝 裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维苯；诺消灵；替尼泊 苷；红必霉素；氨基蝶呤；适罗达；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶 抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维甲酸；esperamicins； 卡培他；以及任何上述治疗剂的可药用盐、酸或衍生物。还包括在该定 义内的是用于调节或抑制作用于肿瘤的激素的抗激素剂，例如抗雌激素 类药物，包括例如他莫西芬、雷洛昔芬，芳香酶抑制药包括4(5)-咪唑、 4-羟基他莫西芬、曲沃昔芬、keoxifene、奥纳司酮和托瑞米芬 (Fareston)；和抗雄激素类药物例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮 丙立德和戈舍瑞林；以及任何上述治疗剂的可药用盐、酸或衍生物。

在另一个实施方案中，治疗剂包括细胞因子。术语“细胞因子”是 一般术语，它是指由一个细胞群体释放的作为细胞间介质作用于另一个 细胞的蛋白。这样的细胞因子的实例有淋巴因子、单核因子和常用的 多肽激素。细胞因子包括生长激素例如人生长激素、N-蛋氨酰人生长激 素和牛生长激素；甲状旁腺激素、甲状腺素、胰岛素、胰岛素原、松 弛素、松驰素原(prorelaxin)；糖蛋白激素例如促配子成熟激素(FSH)、 促甲状腺激素(TSH)和黄体化激素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长 因子；催乳激素；胎盘催乳激素；肿瘤坏死因子-α和-β；穆勒氏抑制物； 小鼠促性腺素相关肽；抑制素；活化素；血管内皮细胞生长因子；整合 素；血小板生成素(TPO)；神经生长因子例如NGF-β；血小板生长因子； 转化生长因子(TGFs)例如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长激素-I和-II； 红细胞生长素(EPO)；骨诱导因子；干扰素例如干扰素-α、干扰素-β和 干扰素-γ；集落刺激因子(CSFs)例如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞巨 噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(GCSF)；白介素(IL)例如IL-1、 IL-1a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-11、 IL-12、IL-15；肿瘤坏死因子例如TNF-α或TNF-β；和其它多肽因子， 包括LIF和试剂盒配体(KL)。本文所用术语细胞因子包括得自天然来源 或重组细胞培养物的蛋白，以及天然序列细胞因子的生物活性同等物。

在另一个实施方案中，本发明化合物可以与抗炎剂联合给药，所述 抗炎剂包括但不限于肾上腺皮质类固醇(皮质醇、可的松、氟氢可的松、 脱氢可的松、氢强的松、6α-甲基强的松龙、氟羟强的松龙、倍他米 松和地塞米松)，非甾类抗炎剂(水杨酸衍生物例如阿司匹林；对氨基酚 衍生物例如acetoaminophen；吲哚和茚乙酸类(吲哚美辛、舒林酸和依 托度酸)，杂芳基乙酸类(托美丁、双氯芬酸和酮咯酸)，芳基丙酸类(布 洛芬及其衍生物)，邻氨基苯甲酸类(甲芬那酸和甲氧芬那酸)，烯醇酸 类(吡罗昔康、滕诺息卡、保泰松和oxyphenthatrazone)，萘丁美酮、 金化合物(金诺芬、金硫葡糖、金硫丁二钠)。市售非甾类抗炎药物，包 括但不限于Anaprox(Roche Labs.)、Arthrotec(Searle)、 Catatlam(Novartis)、Celebrex(Pfizer)、Clinoril(Merck)、Dolobid (Merck)、Feldene(Pfizer)、Indocin(Merck)、Lodine(Wyeth-Ayerst)、 Mobic(Boehringer Ingelheim)、Motrin(McNeil Consumer)、 Naprosyn(Roche Labs)、Orudis(Wyeth-Ayerst)、 Oruvail(Wyeth-Ayerst)、Ponstel(First Horizon)、Relafen (GlaxoSmithKline)、Tolectin(Ortho-McNeil)、Toradol(Roche Labs.， Inc.)、Vioxx(Merck)、Voltaren(Novartis)、 Advair(GlaxoSmithKline)、Flovent(GlaxoSmithKline)、Pulmicort (AstranZeneca)和Vanceril(Schering)、Asacol(Procter & Gamble)、 Colazal(Salix)、Dipentum(Pharmacia & Upjohn)和Rowasa(Solvay)。

在另一个实施方案中，本发明化合物可以与抗风湿剂联合给药。市 售抗风湿剂包括但不限于Anaprox(Roche Labs.)、Arava(Aventic)、 Arthrotec(Searle)、Azulfidine(Pharmacia & Upjohn)、 Cataflam(Novartis)、Celebrex(Pfizer)、Celestone(Schering)、 Cuprimine(Merck)、Enbrel(Immunex)、Feldene(Pfizer)、Gengraf (Abbott)、Indocin(Merck)、Lodine(Wyeth-Ayerst)、Naprosyn(Roche Labs.)、Neoral(Novartis)，Pediapred(Celltech)、 Prednisone(Rocanne)，Remicacle(Centocor)、 Solu-Medrol(Pharmacia & Upjohn)、Triliate(Purdue Frederick) 和Voltaren(Novartis)。

此外，本发明化合物还可以与任何心血管治疗剂联合使用，所述心 血管治疗剂包括但不限于肾上腺素能阻断剂例如卡度雷(Pfizer)、台苯 齐林(WellSpring)、高特灵(Abbott)、Minipress(Pfizer)和 Minizide(Pfizer)；肾上腺素能刺激剂例如Aldoclor(Merck)、爱多美 (Merck)、Aldoril(Merck)、Catapres(Boehringer Ingelheim)、 Clorpres(Bertek)和Tenex(Robins)；α/β肾上腺素能阻断剂例如Coreg (GlaxoSmithKline)和Normodyne(Schering)；血管紧张素转化酶抑制 剂例如Aecupril(Parke-Davis)、Aceon(Solvay)、Altace(Monarch)、 Captopril(Mylan)、依那普利拉(Baxter Anesthesia)、洛汀新 (Novartis)、Mavik(Abbott)、Monopril(Bristol-Myers Sqnibb)、 Prinivil(Merck)、Univasc(Schwarz)、Vaotec(Merck)和 Zestril(AstraZeneca)；血管紧张素转化酶抑制剂例如Lexxel (AstraZeneca)、Lotrel(Novartis)、Tarka(Abbott)、Accuretic (Parke-Davis)、Lotensin(Novartis)、Prinzisde(Merck)、Uniretic (Schwarz)、Vaeretic(Merck)和Zestoretic(AstraZeneca)；血管紧 张素II受体拮抗剂例如Atacand(AstraZeneca)、Avapro (Briston-Myers Squibb)、Cozaor(merck)、Diovan(Novartis)、 Micardis(Boehringer Ingelheim)和Teveten(Unimed)；抗心律失常 药(I-IV类)；抗血脂剂例如胆汁酸螯合剂、Fibricacid衍生物、HMG-CoA 还原酶抑制剂和烟酸；β肾上腺素能阻断剂；钙通道阻断剂；影响收缩 力的活性剂；血管舒张药，包括冠状血管舒张药、利钠肽和周围血管舒 张药；和血管加压药。

本发明的另一方面，治疗剂包括小分子毒素，包括美坦素、刺孢霉 素、单瑞孢菌素以及CC1065。在一个具体实施方案中，治疗剂可以包括 一种以上的刺孢霉素分子。刺孢霉素类抗生素在亚微摩浓度下能够生产 双螺旋DNA断裂。刺孢霉素的结构类似物已经被公开。参见Hinman等 人，53 Cancer Research 3336-42(1993)；Lode等人，58 Cancer Research 2925-28(1998)。

在本发明的另一方面，治疗剂可包括一个或多个具有酶活性的毒素 及其片段。这样的毒素的实例包括白喉毒素的非结合性活性片段、白喉 毒素A链、外毒素A链(得自绿脓假单胞菌)、蓖麻毒素A链、红豆毒素 A链、modeccin A链、α-次黄嘌呤、dianthin蛋白、美商陆蛋白(PAPI、 PAPAII和PaP-S)、苦瓜抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒素sapaonaria officinals抑制剂、gelonin、米托洁林、restrictoein、phenomvcin、 新霉素和tricothecenes。参见例如WO93/21232。

本发明还涉及具有核酸分解活性的治疗剂例如核糖核酸酶以及脱 氧核糖核酸酶。另外，多种放射性同位素可用于生产放射缀合的结合配 偶体。实例包括Y90、At222、Ret86、Re186、Sm153、Bi222、P32以及Lu的放射 性同位素。

在本发明的另一方面，至少一种化合物可以与受体例如链霉抗生物 素蛋白缀合，以用于肿瘤预定向。简言之，将化合物-受体缀合物施用 给患者，用清除剂将未结合的缀合物从循环中除去。然后施用与细胞毒 性剂缀合的配体例如生物素。

给药时间

在几个本发明实施方案中，本发明化合物是在第二种治疗剂之前或 之后给药。本发明化合物可在施用第二种治疗剂之前从几分钟到几小时 的任何时间给药。或者，本发明化合物可在施用第二种治疗剂之前从几 小时到几天，可能几周，最高达几个月的任何时间给药。

更具体来说，本发明化合物可在施用第二种治疗剂之前或之后至少 约1分钟、至少约2分钟、至少约3分钟、至少约4分钟、至少约5分 钟、至少约6分钟、至少约7分钟、至少约8分钟、至少约9分钟、至 少约10分钟、至少约11分钟、至少约12分钟、至少约13分钟、至少 约14分钟、至少约15分钟、至少约16分钟、至少约17分钟、至少约 18分钟、至少约19分钟、至少约20分钟、至少约21分钟、至少约22 分钟、至少约23分钟、至少约24分钟、至少约25分钟、至少约26分 钟、至少约27分钟、至少约28分钟、至少约29分钟、至少约30分钟、 至少约31分钟、至少约32分钟、至少约33分钟、至少约34分钟、至 少约35分钟、至少约36分钟、至少约37分钟、至少约38分钟、至少 约39分钟、至少约40分钟、至少约41分钟、至少约42分钟、至少约 43分钟、至少约44分钟、至少约45分钟、至少约46分钟、至少约47 分钟、至少约48分钟、至少约49分钟、至少约50分钟、至少约51分 钟、至少约52分钟、至少约53分钟、至少约54分钟、至少约55分钟、 至少约56分钟、至少约57分钟、至少约58分钟、至少约59分钟或至 少约60分钟给药。此外，本发明化合物可在施用第二种治疗剂之前或 之后至少约1小时、至少约2小时、至少约3小时、至少约4小时、至 少约5小时、至少约6小时、至少约7小时、至少约8小时、至少约9 小时、至少约10小时、至少约11小时、至少约12小时、至少约13小 时、至少约14小时、至少约15小时、至少约16小时、至少约17小时、 至少约18小时、至少约19小时、至少约20小时、至少约21小时、至 少约2 2小时、至少约23小时或至少约24小时给药。

此外，本发明化合物可在施用第二种治疗剂之前或之后至少约1天、 至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至 少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至 少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、 至少约17天、至少约18天、至少约19天、至少约20天、至少约21 天、至少约22天、至少约23天、至少约24天、至少约25天、至少约 26天、至少约27天、至少约28天、至少约29天、至少约30天或者至 少约31天给药。

在本发明的另一个方面，本发明化合物可在施用第二种治疗剂之前 或之后至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5 周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10 周、至少约11周、至少约12周、至少约13周、至少约14周、至少约 15周、至少约16周、至少约17周、至少约18周、至少约19周或者至 少约20周给药。

在本发明的另一个方面，本发明化合物可在施用第二种治疗剂之前 或之后至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、 至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约 9个月、至少约10个月、至少约11个月或者至少约12个月给药。

方便起见，下面提供在说明书、实施例和权利要求书中使用的一些 术语和词语的意义。

定义

本文所用术语“化合物”包括单数和复数，并包括具有至少本文所 公开的活性的任何单一或组合的实体，以及这样的实体的组合、片段、 类似物或衍生物。这样的实体包括但不限于化学元素、分子、化合物、 混合物、乳液、化疗剂、药物活性剂、激素、抗体、生长因子、细胞因 子、核酸、蛋白、肽、肽模拟物、核苷酸、糖类，以及这样的实体的组 合、片段、类似物或衍生物。

术语“苯基胺”是指伯或仲苯胺，其更通常称为苯胺。苯胺上的氨 基可以被氢、烷基(C1-C12，直链或支链)、环烷基(C3-C10)或芳基取代的 芳基取代。该苯胺衍生物的苯环可任选被一个或多个官能团或官能团的 组合取代，所述官能团是例如烷基、链烯基、炔基、苯基、苄基、卤素、 氰基、硝基、羟基、巯基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、芳 硫基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、酰基、羧基、酰氨基、磺酰氨基、 磺酰基、硫酸酯、磺酸、吗啉代、哌嗪基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、 吡咯基、吡唑基、磷酸酯、膦酸或膦酸酯。如果适当的话，这些基团可 以以标准有机合成中使用的保护或未保护的形式存在。

术语“萘基胺”是指伯或仲α-或β-萘基胺。萘基胺中的环结构可任 选被一个或组合的官能团取代，所述官能团是例如烷基、链烯基、炔基、 苯基、苄基、卤素、氰基、硝基、羟基、巯基、烷氧基、芳氧基、卤代 烷氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、酰基、羧基、 酰氨基、磺酰氨基、磺酰基、硫酸酯、磺酸、吗啉代、硫代吗啉代、哌 嗪基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、磷酸酯、膦酸或膦 酸酯。这些基团可以以标准有机合成中使用的保护或未保护的形式存 在。

术语“萘基烷基胺”是指伯或仲α-或β-萘基烷基胺(例如2-α-萘基 乙基胺)。术语“苄基烷基胺”是指伯或仲苄基烷基胺(例如苯基乙基胺)。 这些芳基烷基结构或化合物可具有旋光性或没有旋光性。萘基烷基胺和 苄基烷基胺的芳基(环)结构可任选被一个或组合的官能团取代，所述官 能团是例如烷基、链烯基、炔基、苯基、苄基、卤素、氰基、硝基、羟 基、巯基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、烷 基氨基、芳基氨基、酰基、羧基、酰氨基、磺酰氨基、磺酰基、硫酸酯、 磺酸、吗啉代、哌嗪基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、 磷酸酯、膦酸或膦酸酯。如果适当的话，这些基团可以以标准有机合成 中使用的保护或未保护的形式存在。

术语“喹啉基胺”是指伯或仲喹啉基胺。这些胺可呈旋光或非旋光 形式。喹啉基胺的芳基(环)结构可任选被一个或组合的官能团取代，所 述官能团是例如烷基、链烯基、炔基、苯基、苄基、卤素、氰基、硝基、 羟基、巯基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、 烷基氨基、芳基氨基、酰基、羧基、酰氨基、磺酰氨基、磺酰基、硫酸 酯、磺酸、吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、 吡咯基、吡唑基、磷酸酯、膦酸或膦酸酯。如果适当的话，这些基团可 以以标准有机合成中使用的保护或未保护的形式存在。

术语“杂芳基胺”是指吡咯、吡唑、咪唑和吲哚。杂芳基胺的芳基 (环)结构可任选被一个或组合的官能团取代，所述官能团是例如烷基、 链烯基、炔基、苯基、苄基、卤素、氰基、硝基、羟基、巯基、烷氧基、 芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、 酰基、羧基、酰氨基、磺酰氨基、磺酰基、硫酸酯、磺酸、吗啉代、硫 代吗啉代、哌嗪基、磷酸酯、膦酸或膦酸酯。如果适当的话，这些基团 可以以标准有机合成中使用的保护或未保护的形式存在。

本文所用术语“糖化蛋白”包括通过酶或非酶的作用与葡萄糖连接 的蛋白，主要是蛋白中的游离ε-氨基与葡萄糖缩合，形成Amadori加成 物。此外，本文所用的糖化蛋白不仅包括含有这些初始糖化产物的蛋白， 而且还包括通过形成不可逆的高级终产物(AGE)的进一步的反应例如重 排、脱水和缩合而生成的糖化产物。

术语“多核苷酸”通常是指聚合形式的任何长度的核苷酸，包括核 糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸。因此，该术语包括但不限于单链、双链或 多链DNA或RNA。多核苷酸还包括基因组DNA、cDNA或DNA-RNA杂交体。 此外，本发明多核苷酸还可以是合成制备的。

多核苷酸可包含化学修饰的、生化修饰的或衍生的核苷酸。例如， 多核苷酸可部分包含修饰的核苷酸例如甲基化核苷酸或核苷酸类似物。 在其它实施方案中，多核苷酸可包含糖、帽、核苷酸支链和连接基团例 如氟核糖(fluororibose)和thioate。此外，核苷酸序列可被非核苷 酸组分间断。另外，在聚合后，可将聚合后的多核苷酸修饰以促进其与 其它多核苷酸、蛋白、金属离子、标记组分或固体载体的连接。

多核苷酸主链可包含修饰或取代的糖和/或磷酸基团。或者，多核 苷酸主链可包含合成亚单元例如氨基磷酸酯的聚合物，并因此可以是寡 脱氧核苷酸氨基磷酸酯或混和氨基磷酸酯-磷酸二酯寡聚物。参见 Peyrottes等人，NUCL.ACIDS RES.(1996)24：1841-1848，和 Chaturvedi等人，NUCL.ACIDS RES.(1996)24：2318-2323。

本文所用术语“同源性”是指互补度。可以有部分同源性或完全同 源性(即相同)。部分互补序列是至少部分抑制相同序列与目标多核苷酸 杂交的序列；其用功能术语“基本上同源”表示。抑制完全互补的序列 与目标序列杂交可用杂交分析在低严格条件下测定(Southern或 Northern印迹法、溶液杂交等)。在低严格条件下，基本上同源的序列 或探针将竞争并抑制完全同源的序列或探针与目标序列的结合(即杂 交)。这并不是说低严格条件是容许非特异性结合的条件；低严格条件 需要两个序列彼此的结合应当是特异性(即选择性)相互作用。没有非特 异性结合可通过使用缺乏甚至是部分互补性(例如小于约30％相同性) 的另一个目标序列来测定；在没有非特异性结合的情况下，探针将不与 第二个非互补的目标序列杂交。

术语“基因”是指多核苷酸序列，其中包括生成多肽或前体所需的 编码序列，并且还可以包括表达控制序列或其它控制或调控序列。多肽 可由全长编码序列或编码序列的任何部分来编码。基因可完全或部分衍 生自本领域技术人员已知的任何来源，包括植物、真菌、动物、细菌基 因组或游离基因，真核生物、细胞核或质粒DNA、cDNA、病毒DNA或化 学合成的DNA。基因可构成未间断的编码序列，或者其可以包括一个或 多个通过剪接接头结合的内含子。此外，基因可在编码或未翻译区域含 有一个或多个修饰，这样的修饰能够影响多核苷酸或多肽的一些性质， 例如表达产物的生物活性或化学结构、表达速度或表达控制方式。这样 的修饰包括但不限于一个或多个核苷酸的突变、插入、缺失和替换。在 这方面，这样的修饰的基因可称为天然基因的变体。

“基因表达”是指这样的过程，其中多核苷酸序列进行成功的转录 和翻译，这样可检测到水平的核苷酸序列作为蛋白表达出来，或者多核 苷酸序列进行转录—如果RNA是从DNA复制的话，或进行复制—如果DNA 是从DNA复制的话，这样所形成的核苷酸拷贝是可检测到的。

术语“基因表达特性”是指呈现特定细胞或组织类型(例如神经元、 冠状动脉内皮或疾病组织)的任何激活状态的一组基因。在一个方面， 基因表达特性是从暴露于本发明化合物的细胞产生的。可将该特性与在 用本发明化合物处理之前由相同类型的细胞或组织类型生成的基因表 达特性进行比较。此外，可由用本发明化合物以不同剂量或以不同时间 过程处理的细胞或组织产生一系列基因表达特性，以评价化合物的作 用。基因表达特性还称为基因表达特征。

术语“差别表达”是指在基因的时间和组织表达模式方面的定量和 定性差异。例如，在正常对疾病条件下，差别表达的基因的表达可以是 激活的或完全失活的。这样的定性调控的基因可在给定的组织或细胞类 型中表现出表达模式，这种表达模式可在对照或疾病条件下检测到，或 者在二者中都检测不到。本文所用的“差别表达的多核苷酸”是指这样 的多核苷酸序列，其独特地表明差别表达的基因，从而使得样本中差别 表达的多核苷酸的检测与样本中存在的差别表达的基因有关。

类似地，在正常对疾病条件下，差别表达的蛋白的表达可以是激活 的或完全失活的。这样的定性调控的蛋白可在给定的组织或细胞类型中 表现出表达模式，这种表达模式可在对照或疾病条件下检测到，或者在 二者中都检测不到。本文所用的“差别表达的蛋白”是指这样的氨基酸 序列，其独特地表明差别表达的蛋白，从而使得样本中差别表达的蛋白 的检测与样本中存在的差别表达的蛋白有关。

本文所用的“细胞类型”是指从给定来源(例如组织或器官)获得的 细胞，给定分化状态下的细胞，或者与给定的病变或遗传构成有关的细 胞。

术语“多肽”是指任何长度的聚合形式的氨基酸，其可包括翻译的、 未翻译的、化学修饰的、生物修饰的和衍生的氨基酸。多肽可以是天然 的、重组的或合成的或它们的任何组合。此外，本文所用术语“多肽” 是指具有任何大小、结构或功能的蛋白、多肽和肽。例如，多肽可包含 通过肽键连接在一起的一串氨基酸。或者，多肽可以包含通过肽键连接 在一起的长的氨基酸链。另外，多肽还可以包含天然蛋白或肽的片段。 多肽可以是单个分子或者可以是多个分子的复合物。此外，这样的多肽 也可以具有修饰的肽主链。

术语“多肽”还包括免疫标记的蛋白和融合蛋白，包括但不限于具 有异源氨基酸序列的融合蛋白、具有异源和同源前导序列的融合蛋白以 及具有或不具有N-末端蛋氨酸残基的融合蛋白。

术语“蛋白表达”是指这样的过程，其中多核苷酸序列进行成功的 转录和翻译，这样表达出可检测到水平的氨基酸序列或蛋白。

术语“蛋白表达特性”是指呈现特定细胞或组织类型(例如神经元、 冠状动脉内皮或疾病组织)的一组蛋白。在一个方面，蛋白表达特性是 从暴露于本发明化合物的细胞或组织产生的。可将该特性与在用本发明 化合物处理之前由相同类型的细胞或组织类型生成的蛋白表达特性进 行比较。此外，可由用本发明化合物以不同剂量或以不同时间过程处理 的细胞或组织产生一系列蛋白表达特性，以评价化合物的作用。蛋白表 达特性还称为“蛋白表达特征”。

本文所用的“生物分子”包括多核苷酸和多肽。此外，本文所用的 “生物分子序列”是指表示所有或部分多核苷酸序列的术语。生物分子 序列还指所有或部分多肽序列。对于生物分子例如基底膜蛋白聚糖，术 语“功能等同物”是指具有与所有或部分天然基底膜蛋白聚糖或天然基 底膜蛋白聚糖编码多核苷酸基本上类似的功能或结构特征的蛋白或多 核苷酸分子。天然基底膜蛋白聚糖的功能等同物可含有修饰，这取决于 特定结构或特定功能对这样的修饰的需求。术语“功能等同物”包括天 然基底膜蛋白聚糖的“片段”、“突变体”、“衍生物”、“等位基因”、 “杂交体”、“变体”、“类似物”或“化学衍生物”。

本文所用的“宿主细胞”是指可以或已经用作重组载体或其它多核 苷酸转移体的接受体的微生物、原核细胞、真核细胞或作为单层细胞实 体培养的细胞系，并包括已经转染的原始细胞的子代。应当理解，由于 天然、偶发或人为设计的突变，单细胞的子代可以不需要在形态或基因 组或全部DNA互补方面与原始母细胞完全相同。

对于免疫球蛋白，术语“功能等同物”是指表现出与母体免疫球蛋 白基本上类似的免疫结合特性的免疫球蛋白分子。本文所用术语“免疫 结合特性”是指在免疫球蛋白分子与该免疫球蛋白的特异性抗原之间发 生的非共价型相互作用。实际上，单克隆抗体免疫球蛋白的功能等同物 可例如抑制母体单克隆抗体与其抗原的结合。功能等同物可包含 F(ab’)2片段、F(ab)分子、Fv片段、在噬菌体上显示的单链片段变体 (scFv)、单结构域抗体、嵌合抗体等，只要免疫球蛋白表现出母体免疫 球蛋白的特征即可。

本文所用术语“分离的”是指处于不同于多核苷酸、多肽、抗体或 宿主细胞天然存在的环境中的多核苷酸、多肽、抗体或宿主细胞。分离 的多核苷酸、多肽、抗体或宿主细胞一般是进行了基本纯化的。

本文所用术语“基本纯化的”是指从其天然环境中分离出的化合物， 并且至少约60％-99.99％的化合物没有其它组分，或至少约60％、至 少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约83％、至 少约85％、至少约88％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至 少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至 少约98％、至少约99％、至少约99.9％或者至少约99.99％的化合物 不包含与其天然结合的其它组分。例如，对于含有A的组合物，当组合 物中总A+B的至少约85％重量是A时，该组合物“基本上不含”B。或 者，A占组合物中总A+B重量的至少约90％，还可以是至少约95％或 甚至是至少99％。

本文所用的“诊断”一般包括确定受试者患有疾病或病症的易感性， 确定受试者目前是否患有疾病或病症，或患有疾病或病症的预后(例如 鉴定前转移或转移性癌症、癌症阶段或癌症对治疗的反应)和治疗 (therametric)(例如监测受试者病症以提供关于治疗作用或效力的信 息)。

术语“生物样本”包括可用于诊断、监测或其它测定的得自或源自 生物体的各种样本类型。该术语包括血液、血清、血浆、细胞、蛋白、 糖类、核酸、尿、鼻分泌物、粘膜分泌物、细胞液、细胞渗出物以及其 它生物来源的液体样本，固体组织样本例如活组织检查样本或组织培养 物或由其衍生的细胞及其子代。该术语特别包括临床样本，并且还包括 细胞培养物中的细胞、细胞上清液、细胞裂解物、羊水、生物液体和组 织样本。该术语还包括获得后以任何方式例如用试剂处理、溶解或增加 某些组分来利用的样本。生物样本可直接得自生物体或者可从环境中收 集。

术语“个体”、“受试者”、“宿主”和“患者”是指需要进行诊 断、处理或治疗的任何受试者。在一个实施方案中，个体、受试者、宿 主或患者是人。其它受试者可包括但不限于动物，包括牛、绵羊、马、 狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、灵长类动物、负鼠和小鼠。其它受试者包括 细菌、噬菌体。细胞培养物、病毒、植物和其它真核生物、原核生物或 未分类的生物体。

术语“处理”、“治疗”等在本文中一般用于指获得所希望的药理 和/或生理效果。该效果可以是预防性的，即完全或部分预防疾病或其 症状，和/或可以是治疗性的，即部分或完全稳定或治愈疾病和/或该疾 病所导致的不利影响。本文所用的“治疗”包括受试者，特别是人中疾 病的任何处理，并包括：(a)在容易患有，但是尚未诊断出已患有疾病 或症状的受试者中预防疾病或症状发生；(b)抑制疾病症状，即抑制其 发展；或(c)缓解疾病症状，即引起疾病或症状消退。

术语“治疗有效量”是指例如能有效预防减轻、治疗或延迟疾病或 病症发作的本发明化合物的量。

术语“预防有效量”是指例如能有效预防疾症或病症的本发明化合 物的量。

“脂质体”是小囊，其由不同类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂 构成，并且可用于将药物递送给受试者例如哺乳动物或其它动物。本发 明化合物可通过脂质体递送。脂质体的组分通常以类似于生物膜的脂质 排列的双层构造形式排列。脂质体配方、脂质体负载以及脂质体的给药 和递送是本领域已知的。

广义定义的“杂交”是指多核苷酸序列与互补序列经由碱基配对结 合的任何过程。杂交条件可由例如预杂交和杂交溶液中的盐或甲酰胺浓 度或杂交温度决定，并且是本领域已知的。杂交可在各种严格条件下进 行。杂交还是指蛋白捕获剂与目标蛋白在一些条件下例如在正常生理条 件下的结合。

本文所用术语“激活”是指信号传导途径或生物反应的任何改变， 包括例如增加至基准水平以上，从抑制状态恢复至基准水平，和将途径 刺激至基准水平以上。

术语“生物活性”是指蛋白或肽的生物行为和作用。蛋白的生物活 性可在细胞水平和分子水平上受到影响。例如，反义寡核苷酸可阻止特 定的mRNA翻译，由此抑制由该mRNA编码的蛋白的活性。此外，抗体可 与特定的蛋白结合，并抑制该蛋白的生物活性。

本文所用术语“寡核苷酸”是指包含例如约4个核苷酸(nt)-1000 nt的多核苷酸序列。用于本发明的寡核苷酸优选具有约15nt-约150 nt，更优选约150nt-约1000nt的长度。寡核苷酸可以是天然寡核 苷酸或合成的寡核苷酸。寡核苷酸可通过氨基磷酸酯方法(Beaucage和 Carruthers，TETRAHEDRON LETT.(1981)22：1859-1862)、或三酯方法 (Matteucci等人，J.AM.CHEM.SOC.(1981)103：3185)或本领域已 知的其它化学方法制得。

术语“微阵列”一般是指通过寡核苷酸(多核苷酸序列)或蛋白结合 剂在微阵列上呈现的基因或蛋白类型，其中在微阵列上呈现的基因或蛋 白类型取决于微阵列的预期目的(例如监测人基因或蛋白表达)。在给定 微阵列上的寡核苷酸或蛋白结合剂可与相同类型、分类或组的基因或蛋 白相对应。如果共享某些共有特征，基因或蛋白可视为相同类型，所述 共有特征是例如物种源(例如人、小鼠、大鼠)；病症(例如癌症)；功能 (例如蛋白激酶、肿瘤抑制剂)；相同生物过程(例如细胞程序死亡、信 号传导、细胞周期调控、增殖、分化)。例如，一个微阵列类型可以是 “癌症微阵列”，其中每个微阵列寡核苷酸或蛋白结合剂与癌症相关基 因或蛋白相对应。“上皮微阵列”可以是与独特上皮基因或蛋白相对应 的寡核苷酸或蛋白结合剂的微阵列。类似地，“细胞周期微阵列”可以 是这样的微阵列，其中寡核苷酸或蛋白结合剂与独特的细胞周期相关基 因或蛋白相对应。

术语“可检测到的”是指通过本领域技术人员众所周知的标准聚合 酶链反应(PCR)、逆转录酶(RT)-PCR(RT-PCR)、差示显示和Northern 分析可检测到的多核苷酸表达模式。类似地，多肽表达模式可通过标准 技术，包括免疫测定例如Western印迹法“检测”。当观察到，特别是 通过物理手段例如颜色改变观察到作用，例如在测定步骤中加入化合物 的结果时，一般使用术语“可检测到的”。

“目标基因”是指寡核苷酸探针被设计用来与其特异性杂交的，通 常源自生物样本的多核苷酸。其是存在或不存在欲检测的目标多核苷酸 或欲定量测定的目标多核苷酸的量。目标多核苷酸具有与针对该目标的 相应探针的多核苷酸序列互补的序列。目标多核苷酸还可以指较大多核 苷酸的特异序列，其中探针是针对该目标多核苷酸希望检测其表达水平 的整个序列(例如基因或mRNA)。

“目标蛋白”是指蛋白捕获剂与其特异性杂交或结合的，通常源自 生物样本的多肽。其是存在或不存在欲检测的目标蛋白或欲定量测定的 目标蛋白的量。目标蛋白具有由针对该目标蛋白的相应的蛋白捕获剂识 别的结构。目标蛋白或氨基酸还可以指较大蛋白的特异结构，其中蛋白 捕获剂是针对该特异结构或希望检测其表达水平的整个结构(例如基因 或mRNA)。

术语“互补”是指探针分子与其目标物的相互作用表面在一起的拓 扑相容性或匹配。目标物与其探针可描述为互补的，并且接触表面特征 是彼此互补的。核苷酸或核酸之间，例如双链DNA分子的两条链之间， 或寡核苷酸探针与目标物之间的杂交或碱基配对是互补的。

术语“背景”是指例如多核苷酸、多肽、小分子与多肽之间，或者 小分子与多核苷酸之间的非特异性结合或其它相互作用。“背景”还可 以指包括免疫测定在内的测定中的非特异性结合或其它相互作用。

对于微阵列，术语“背景”是指由于标记的目标多核苷酸与寡核苷 酸微阵列的成分(例如寡核苷酸探针、对照探针、微阵列载体)之间，或 者目标蛋白与蛋白微阵列的蛋白结合剂之间的非特异性结合或其它相 互作用所导致的杂交信号。背景信号还可以由微阵列成分自身的内在荧 光性产生。可计算整个微阵列的信号背景，或者可计算每个目标多核苷 酸或目标蛋白的不同背景信号。背景可计算为平均杂交信号强度，或者 可计算每个目标基因或目标蛋白的不同背景信号。或者，背景可计算为 由于和不与样本中的任何序列互补的探针杂交所产生的平均杂交信号 强度(例如针对反义多核苷酸或样本中不存在的基因例如细菌基因(当 样本是哺乳动物多核苷酸时)的探针)。背景还可以计算为根本没有任何 探针或蛋白结合剂的微阵列区域所产生的平均杂交信号强度。

“小分子”包括化合物或分子复合物，其可以是合成、天然存在或 半合成的，由碳、氢、氧和氮组成，并且还可以含有其它元素，其分子 量为低于约100至约15000道尔顿，或小于约15000、小于约14000、 小于约13000、小于约12000、小于约11000、小于约10000、小于约 9000、小于约8000、小于约7000、小于约6000、小于约5000、小于约 4000、小于约3000、小于约2000、小于约1000、小于约900、小于约 800、小于约700、小于约600、小于约500、小于约400、小于约300、 小于约200或者小于约100。

术语“融合蛋白”是指由两个或更多个多肽组成的蛋白，所述多肽 虽然在其天然状态没有连接，但是在融合蛋白中，通过其各自的氨基和 羧基末端经由肽键连接以形成一个连续的多肽。应当理解，两个或更多 个多肽成分可以是经由肽接头/间隔物直接连接或间接连接的。

术语“标准生理条件”是指在活的生物体活细胞内的典型条件。虽 然某些器官或生物体提供极端条件，但是生物体内和细胞内环境通常在 约pH7附近改变(例如pH6.5-pH7.5)，含有水作为主要溶剂，并且 在0℃以上且50℃以下的温度存在。各种盐的浓度取决于器官、生物体、 细胞或用作参照的细胞隔室。

术语“簇”是指通过序列同源性而彼此相关的一组克隆或生物分子 序列。在一个实例中，簇是基于特定程度的同源性和/或重叠(例如严格 性)形成的。“簇集”可用序列数据进行。例如，可将被认为与在一个 组织中特定分子或生物活性有关的生物分子序列与另一个序列库或数 据库进行比较。这类检索可用于在其它组织或样本中寻找同源的、假定 功能有关的序列，或者可用于将本发明方法流线化，这样在进行本发明 方法之前，可在一个或多个数据库中使用簇集来建立生物分子序列簇。 表现出与代表性序列有足够同源性的序列视为“簇”的一部分。这样的 “足够”同源性可在本领域技术人员的需要内改变。

本文所用术语“内部数据库”是指由局部计算机网络保持的数据库。 其包含例如与设计有关的生物分子序列。其还可以包含与序列有关的信 息，包括但不限于其中能够找到给定序列以及关于与序列有关的可能基 因的描述性信息的库。内部数据库通常作为私人数据库保持，这样的数 据库在企业内具有防火墙。然而，本发明不限于该实施方案，并且内部 数据库可由公众使用。内部数据库还可以包括由保持该数据库的同一企 业产生的序列数据，并且还可以包括得自外部来源的序列数据。

在本文中应当理解，术语“外部数据库”是指位于所有内部数据库 外面的数据库。一般情况下，与持有内部数据库的企业网络不同的企业 网络将保持外部数据库。外部数据库可用于例如提供某些关于存储在内 部数据库中的生物分子序列的描述性信息。在一个实施方案中，外部数 据库是由National Center for Biotechnology Information (NCBI)-Natuinal Library of Medicine的一部分保持的GenBank和 相关数据库。

除非另有说明，在本文和权利要求书中使用的单数形式也包括复数 形式。因此，例如，在提及“化合物”时，这是指一种或多种这样的化 合物，并且包括本领域技术人员已知的其同等物，如此等。

除非另有说明，在本文中使用的所有技术和科学术语具有本领域技 术人员所通常理解的相同含义。虽然在实施或检验本发明时可使用与本 文所述的方法、装置和材料类似或等同的任何方法、装置和材料，但是 下面描述优选的方法、装置和材料。

在本文中引用的所有出版物和专利都全文引入本文以供参考，例 如，在出版物中描述的可以与本发明结合使用的构造和方法。提供上述 出版物和整个正文仅是为了表明其公开在本申请的申请日之前。任何出 版物的引用都不应当解释为对其的承认，或者本发明没有权力依靠在先 的发明让这样的出版比实际日期早。

应当理解，本发明不限于本文描述的特定方法、方案、细胞系、构 建体和试剂，它们可以改变。还应当理解，本文所用的术语仅是为了描 述特定的实施方案，而不是为了限制本发明的范围，本发明的范围由权 利要求书限定。

实施例

通过下列实施例来进一步举例说明本发明，这些实施例不应当以任 何方式解释为施加限制，而仅仅是举例说明。相反，应当清楚理解，可 能必须诉诸于多个其它实施方案、变型和同等方案，在阅读了本文的描 述之后，本领域技术人员在不背离本发明实质或权利要求的范围的情况 下，可提出这些其它实施方案、变型和同等方案。

下列首字母缩拼词、缩写、术语和定义在整个实验部分中使用。字 母缩拼词或缩写：DIEA(N，N-二异丙基乙胺)、THF(四氢呋喃)、HPLC(高 效液相色谱法)、TLC(薄层色谱法)、mp(熔点)、rt(室温)、aq(含 水)、min(分钟)、h(hr，小时)、atm(大气压)、conc.(浓缩)、MS(质 谱/质量色谱)、NMR(核磁共振)、Rf(TLC保留因子)和Rt(HPLC保留 时间)。NMR缩写：br(宽的)、apt(明显的)、s(单峰)、d(双峰)、 t(三重峰)、q(四重峰)、dq(双四重峰)、dd(双双峰)、dt(双三重 峰)、m(多重峰)。

                         实施例1

一般合成、纯化、特征确定和光谱分析操作

一般合成操作.室温定义为通常20-25℃的室温范围。冰浴(碎冰 /水)温度定义为通常-5至0℃的温度范围。回流温度定义为主要反应溶 剂的沸点±15℃。过夜定义为8-16小时的时间范围。真空过滤(水抽吸 器)定义为5-15mm Hg范围。减压干燥定义为使用0.1-5mm Hg的高 真空泵进行干燥。中和定义为典型的酸碱中和方法，并且使用pH试纸 测定pH 6-8的范围。盐水定义为饱和氯化钠水溶液。氮气氛定义为经 过具有油鼓泡器系统的Drierite柱的正氮气静压。浓氢氧化铵定义为 约15M的溶液。

用于柱色谱和薄层色谱的所有洗脱剂都是作为体积∶体积(v∶v)溶 液制备和给出的，并且HPLC洗脱剂比例是v∶v比例。氢氧化钠水溶液 或碳酸氢钠水溶液是以重量∶体积(w∶v)比例制备的。盐酸水溶液是以 v∶v比例制备的。

用于反应后处理或产物分离的溶剂和/或试剂的量是有机化学合成 领域技术人员常用的量，这些溶剂和/或试剂的量是基于合成经验以及 具体反应的适当性确定的。例如：1)根据反应规模，碎冰的用量为约 10-1000g，2)柱色谱法中硅胶的用量取决于材料的量、混合物的复 杂性以及所用色谱柱的尺寸，并且通常为约5-1000g，3)根据反应规 模，萃取溶剂的体积为约10-500mL，4)在化合物的分离过程中，根 据反应规模，所用的洗涤约10-100mL溶剂或含水试剂，5)根据欲干 燥的溶剂的量及其水分含量，干燥剂(碳酸钾、碳酸钠或硫酸镁)的量为 约5-100g。

熔点是用汞温度计测定的，并且未校正。

对于使用浓氢氧化铵作为部分流动相的柱色谱法，用硫酸钠、碳酸 钾或二者的混合物将从柱上收集的级份干燥。然后通过重力或真空将有 机溶剂过滤以除去干燥剂，之后浓缩/蒸发。

快速色谱法.在表中，“ISCO”是指通过如下所述的快速色谱法进 行的纯化。装置：ISCO CombiFlash_ Si 10×.柱：ISCO RediSep_-Disposable快速色谱柱(10g硅胶-正相-35-60微米粒径 (230-400目))。流动相A：CH2Cl2；流动相B：10％NH4OH在MeOH中 的溶液；梯度：0-10％B-22分钟，保持10％B 18分钟；级份：每个 柱收集30个级份，每次1.5分钟。流速：8.93mL/分钟。突出级份通 过MS和TLC(90∶9∶1 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH-Rf范围0.15-0.45)分析， 并在带标志符号的秤定瓶中合并。从所得溶液取样以进行LC/MS分析， 真空浓缩，测定如表中所示的其质量和产率。

完成平行合成后，如果没有进行任何另外的纯化，则这种情况在表 2中标为“无”。

分析HPLC操作：根据如下所述的所用装置和样本需求，依据两个 具体方法当中的一个来进行分析HPLC操作。

HPLC方法A：柱：Thomson Inst.Co.4.6×50mm C18 5μm 60A； 流动相A：含有0.1％TFA的H2O；流动相B：含有0.1％TFA的CH3CN； 检测：UV 254nm。梯度1：ELSD12MG；10-90％B-10分钟，保持90 ％B 5分钟；流速：1.0mL/分钟。梯度2：ELSD5MG；15-100％B-5 分钟，保持90％B 3分钟；流速：2.0mL/分钟。

HPLC方法B：柱：Thomson Inst.Co.21×50mm C18 5μm 60A； 流动相A：含有0.1％TFA的H2O；流动相B：含有0.1％TFA的CH3CN； 检测：UV 254nm。梯度1：MIC8MG；0-100％B-8分钟，保持100％B 2分钟；流速：0.5mL/分钟。梯度2：MIC15MG；10-90％B-15分钟， 保持90％B 3分钟；流速：0.5mL/分钟。

制备HPLC操作.如下所述进行制备HPLC。装置：Gilson；柱： Thomson Inst.Co.21.5×150mm C18 5μm 60A；流动相A：H2O；流 动相B：CH3CN；梯度：15-100％B-10分钟，保持100％B 5分钟；流 速：22mL/分钟；检测：UV 254nm。将含有所需化合物的级份收集到 带标志符号的秤定瓶中，取样以进行LC/MS分析，真空浓缩，测定如表 中所示的其质量和产率。

光谱和其它仪器操作.

NMR.本文中描述的1H和13C NMR光谱是用Varian INOVA600(600 MHz)、Varian UNITY600(600MHz)或Varian(400MHz)光谱仪获得的。 用于特定样本的光谱仪场强度和NMR溶剂如实施例以及附图实际显示的 任何NMR光谱数据所示。通常，1H NMR化学位移是作为δ值以百万分数 (ppm)给出的，其中使用四甲基硅烷(TMS)(δ＝0)作为内标，13C NMR化 学位移是以ppm给出，其中使用TMS作为内标，并以CDCl3信号中央线 (δ＝77.0ppm)作为参照。将固体或液体样本溶解在合适的NMR溶剂 (CDCl3或DMSO-d6)中，置于NMR样本管内，依据光谱仪指导手册收集数 据。大部分样本是以可变温度模式，通常在约55℃分析的，某些样品的 某些数据是用探针在室温收集的。使用Acorn NMR的NUTS：NMR Utility Transform Software(Lite Version-20011128)处理NMR数据。

LC-MS.用于测定本发明化合物的液相色谱-质谱仪(LC-MS)装置一 般是具有电子喷雾电离(ESI)的四极/飞行时间质谱仪。例如，使用的典 型LC-MS装置是使用电子喷雾电离(ESI)的Micromass Q-Tof。该装置 是能够达到约7500的m/z质量分辨率的四极/飞行时间质谱仪。如下所 述以直接注射方式引入样本：首先将样本在甲醇或乙腈中溶解和稀释， 然后经由10μL环Rheodyne注射阀将样本溶液注射到ESI源内。载体 溶剂一般是含有约0.1％甲酸的70％CH3CN或MeOH与30％H2O(v∶v)的 混合物。以类似方式进行精确质量分析，但是用相同装置在高质量分辨 率条件下进行多点质量校准。按照本领域技术人员已知的方法用合适的 质量内标化合物显示样本，并如上所述进行分析。

                       实施例2

用于平行合成的一般方法

实施例3-5描述了制备N2，N4，N6-三(氨基)-1，3，5-三嗪化合物的 “库”的合成方法，所述化合物是基于每个合成中仅改变一个侧氨基的 策略，并基于如下所示的母体结构95来制备的，其中库内的每一化合 物含有两个95所示的侧基团。

将库分成3个小组，并且表2中列出了所有这3个小组。库I(化 合物1-50)包括这样的化合物，它们具有未改变的环庚基氨基和[(1- 乙基-2-吡咯烷基)甲基]氨基取代基，在其余三嗪氨基位置上具有交换 的不同基团，是通过实施例3中描述的方法A制得的。库II(化合物 51-75)包括这样的化合物，它们具有未改变的[(1-乙基-2-吡咯烷基) 甲基]氨基和(3-氟-4-甲氧基苯基)氨基取代基，在其余三嗪氨基位置上 具有交换的不同基团，是通过实施例4中描述的方法B制得的。库III (化合物76-100)包括这样的化合物，它们具有未改变的(3-氟-4-甲氧 基苯基)氨基和环庚基氨基取代基，在其余三嗪氨基位置上具有交换的 不同基团，是通过实施例5中描述的方法C制得的。因此，采用的特定 胺的组合产生了新组合物的化合物的库。表2中还给出了加入每一单体 以形成库中化合物的顺序，因为是首先加入单体1胺，然后加入单体2 胺，之后再加入单体3胺。

                        实施例3

用于制备库I化合物的平行合成方法A

下述反应方案给出了用于制备归到方法A名下的表2化合物的平行 合成方法A所用的一般试剂和条件。

试剂和条件：(a)ArHNR，DIEA，CH3CN/1，4-二氧杂环己烷，-11℃， 1小时

(b)环庚基胺，DIEA，CH3CN/1，4-二氧杂环己烷，室温，过夜

(c)2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷，DIEA，CH3CN/1，4-二氧杂环己 烷，80℃，15

制备将氰尿酰氯(0.542M)在1，4-二氧杂环己烷中的贮备液，将分 别1mL该溶液(含有100mg或0.542mmol)加到50个带标志符号的40 mL小瓶中。使用与循环冷却器连接的J-KEM块将这些溶液冷却至约-11 ℃(冷冻)。同时制备各种芳基胺ArNHR(在表2中列为单体1，0.542 mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(77mg/104μl，0.596mmol)在1mL CH3CN中的溶液(对于盐酸盐，使用204μL DIEA(约2.1当量))。在涡旋下 用1小时将胺/DIEA溶液一个接一个地加到相应的冷冻的氰尿酰氯溶液 中。然后将所得溶液在约-11℃摇动约1小时，用1小时让反应块温热 至室温。所得2-氨基-4，6-二氯三嗪溶液不用纯化直接用于进行下一步 骤。

制备环庚基胺(1.08M)和DIEA(1.19M)在CH3CN中的贮备液，将 分别0.5mL(含有61mg/69μL，0.542mmol胺和77mg/104μL，0.596 mmol DIEA)加到得自第一个步骤的每个40mL小瓶中。将小瓶在J-KEM 块上于室温摇动过夜，不用纯化，置于冰箱(约-14℃)内直至用于下一 反应。

制备2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷(1.08M)和DIEA(1.19M)在 CH3CN中的贮备液，将分别0.5mL(含有69mg/79μL，0.542mmol胺 和77mg/104μL，0.596mmol DIEA)加到得自第二个步骤的每个40mL 小瓶中。将小瓶在J-KEM块上于约80℃摇动约15小时。将这些溶液冷 却至室温，真空处理至干。然后用乙酸乙酯萃取残余物，用盐水洗涤萃 取液。用乙酸乙酯将水层再萃取一次，用硫酸钠将合并的有机层干燥， 经由CeliteTM塞过滤到带标志符号的秤定瓶中。真空浓缩后，测定质量 并计算产率，对化合物取样以进行LC/MS分析。

                         实施例4

用于制备库II化合物的平行合成方法B

下述反应方案给出了用于制备归到方法B名下的表2化合物的平行 合成方法B所用的一般试剂和条件。

试剂和条件：(a)3-氟对甲氧基苯胺，DIEA，CH3CN/1，4-二氧杂环 己烷，-20℃，1小时

(b)R2NHR，DIEA，CH3CN/1，4-二氧杂环己烷，室温，过夜

(c)2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷，DIEA，CH3CN/1，4-二氧杂环己 烷，80℃，15

在烘箱干燥的圆底烧瓶内，将氰尿酰氯(5.0g，27.1mmol)在1，4- 二氧杂环己烷(40mL)中的溶液在CH3CN/干冰浴中冷冻。向该冷冻的溶 液中加入40mL CH3CN，然后加入DIEA(3.85g/5.19mL，29.8mmol)。 经由注射器缓慢地加入3-氟对甲氧基苯胺(3.83g，27.1mmol)在10mL CH3CN中的溶液。将该反应混合物在约-20℃搅拌约1小时，用约1小时 让其温热至室温。所得2-氨基-4，6-二氯三嗪溶液不用纯化直接用于进 行下一步骤。

将50mL(13.5mmol)制备的(4，6-二氯-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3- 氟-4-甲氧基苯基)胺溶液等量(分别是2mL或0.54mmol)分配到25个 带标志符号的40mL闪烁瓶中。制备各R2NHR(其中R2胺是表2中的单 体2，0.542mmol)和DIEA(77mg/104μL，0.596mmol)在0.5mL CH3CN中的溶液，并加到相应标记的40mL小瓶中。将所得溶液在J-KEM块上 于室温摇动过夜，不用纯化，置于冰箱(约-14℃)内直至用于下一反应。

制备2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷(1.08M)和DIEA(1.19M)在 CH3CN中的贮备液，将分别0.5mL(含有69mg/79μL，0.542mmol胺 和77mg/104μL，0.596mmol DIEA)加到得自第二个步骤的每个40mL 小瓶中。将小瓶在J-KEM块上于约80℃摇动约15小时。将这些溶液冷 却至室温，真空浓缩。然后用乙酸乙酯萃取残余物，用盐水洗涤萃取液。 用乙酸乙酯将水层再萃取一次，用硫酸钠将合并的有机层干燥，经由 CeliteTM塞过滤到带标志符号的秤定瓶中。真空浓缩后，测定质量并计 算产率，对化合物取样以进行LC/MS分析。

                          实施例5

用于制备库III化合物的平行合成方法C

下述反应方案给出了用于制备归到方法C名下的表2化合物的平行 合成方法C所用的一般试剂和条件。

试剂和条件：(a)3-氟对甲氧基苯胺，DIEA，CH3CN/1，4-二氧杂环 己烷，-20℃，1小时

(b)环庚基胺，DIEA，CH3CN/1，4-二氧杂环己烷，室温，过夜

(c)R3NHR，DIEA，CH3CN/1，4-二氧杂环己烷，80℃，15

在烘箱干燥的圆底烧瓶内，将氰尿酰氯(5.0g，27.1mmol)在1，4- 二氧杂环己烷(40mL)中的溶液在CH3CN/干冰浴中冷冻。向该冷冻的溶 液中加入40mL CH3CN，然后加入DIEA(3.85g/5.19mL，29.8mmol)。 经由注射器缓慢地加入3-氟对甲氧基苯胺(3.83g，27.1mmol)在10mL CH3CN中的溶液。将该反应混合物在约-20℃搅拌约1小时，用1小时让 其温热至室温。所得2-氨基-4，6-二氯三嗪溶液不用纯化直接用于进行 下一步骤。

将50mL(13.5mmol)制备的(4，6-二氯-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3- 氟-4-甲氧基苯基)胺溶液用环庚基胺(1.53g/1.73mL，13.5mmol)和 DIEA(1.93g/2.60mL，14.9mmol)在CH3CN(8mL)中的溶液处理。将 所得溶液在室温搅拌过夜，不用纯化直接用于进行下一步骤。

用CH3CN将所得6-氯-N-环庚基-N’-(3-氟-4-甲氧基苯基)-[1，3，5] 三嗪-2，4-二胺溶液(13.5mmol)稀释至62.5mL，等量(分别是2mL或 0.54mmol)分配到25个带标志符号的40mL闪烁瓶中。制备各R3NHR(其 中R3胺是表2中的单体3，0.542mmol)和DIEA(77mg/104μL，0.596 mmol)在0.5mL CH3CN中的溶液，并加到相应标记的40mL小瓶中。将 所得溶液在J-KEM块上于约80℃摇动约15小时。将这些溶液冷却至室 温，真空浓缩。然后用乙酸乙酯萃取残余物，用盐水洗涤萃取液。用硫 酸钠将各有机层干燥，经由CeliteTM塞过滤到带标志符号的秤定瓶中。 真空浓缩后，测定质量并计算产率，对化合物取样以进行LC/MS分析。

                        实施例6

合成6-氯-N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环己基甲基-[1，3，5]三 嗪-2，4-二胺(102)

向溶解在丙酮(4mL)内的101样本(0.3004g，1.0mmol，如本文 所述制得的)中加入环己烷甲基胺(0.13mL，1.0mmol)在丙酮(1mL) 中的溶液，然后加入NaOH溶液(0.0448g，1.0mmol溶解在1mL水中 的溶液)。让该反应混合物在回流状态下搅拌约3小时。然后将该反应 混合物倒入碎冰中，用10％盐酸(水溶液)和5％NaOH(水溶液)中和。 通过真空过滤收集所得固体，用水洗涤，并真空干燥过夜，获得了化合 物102(0.29g，76％产率)。

                         实施例7

合成N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环己基甲基-N”-甲基-N” -(1-甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(103)

向溶解在1，4-二氧杂环己烷(4mL)内的102样本(0.286g，1.0 mmol)中加入N-甲基-4-(甲基氨基)哌啶(0.15mL，1.0mmol)在丙酮(1 mL)中的溶液，然后加入NaOH溶液(0.0462g，1.0mmol溶解在1mL 水中的溶液)。让该反应混合物在约80℃搅拌约2小时。将该反应混合 物倒入碎冰中，用10％盐酸(水溶液)中和。通过真空过滤收集所得固 体，用水洗涤，并真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化(硅胶，96∶3∶1二 氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了浅紫色固体103(41mg，9％)，

                                              mp 84℃；HPLC：YMC Pack Pro C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm， Rt 12.7min，97％纯度)；1H NMR(600MHz，CDCl3，55℃)δ7.98(s，1H)，7.18 (S，1H)，6.85(d，J＝9Hz，1H)，6.58(s，1H)，4.89(s，1H)，4.58-4.62(m，1H)，3.87 (s，3H)，3.25(t，J＝6.6Hz，2H)，3.05(s，3H)，2.94(d，J＝11.4Hz，2H)，2.31(s， 3H)，2.15(S，2H)，1.86(dq，J＝12，4.2Hz，3H)，1.57-1.78(m，8H)，1.15-1.30 (m，4H)，1.00(dq，J＝11.4，3Hz，2H)；MS(ESI)：m/z 476(37.7)，474 (M+H， 100)，410(1.4).

                            实施例8

合成6-氯-N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-(1-丙基-丁基)-[1，3，5] 三嗪-2，4-二胺(104)

向溶解在丙酮(4mL)内的101样本(0.3062g，1.0mmol)中加入 4-庚基胺(0.15mL，1.0mmol)在丙酮(1mL)中的溶液，然后加入NaOH溶液(0.0410g，1mmol溶解在1mL水中的溶液)。让该反应混合物在 30-50℃搅拌约3小时。然后将该反应混合物倒入碎冰中，用10％盐酸 和5％NaOH(水溶液)中和。通过真空过滤收集所得固体，用水洗涤，并 真空干燥过夜，获得了104(0.363g，94％产率)。

                      实施例9

合成N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-甲基-N’-(1-甲基-哌啶-4- 基)-N”-(1-丙基-丁基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(105)

向溶解在1，4-二氧杂环己烷(6mL)内的104样本(0.363g，1.0 mmol)中加入N-甲基-4-(甲基氨基)哌啶(0.15mL，1.0mmol)在丙酮(1 mL)中的溶液，然后加入NaOH溶液(0.0414g，1.0mmol溶解在1mL 水中的溶液)。让该反应混合物在约80℃搅拌约2小时。将该反应混合 物倒入碎冰中，用10％盐酸水溶液中和。通过真空过滤收集所得固体， 用水洗涤，并真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化(硅胶，96∶3∶1二氯甲 烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了浅紫色固体105(97mg，20％)，mp 249℃. HPLC：YMC Pack Pro C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN]，264nm，Rt 14.4min，98％纯度；MS(ESI)：m/z 476(M+H，100)， 412(2.9)，366(2.8)，239(1.9).

                      实施例10

合成N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-异丙基-N”-甲基-N”-(1- 甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(106)

向溶解在无水1，4-二氧杂环己烷(15mL)内的101样本(0.6157g， 2.0mmol)中加入异丙基胺(0.17mL，2.0mmol)在无水乙腈(1mL)中的 溶液，然后加入在无水乙腈(1mL)中的N，N-二异丙基乙胺(DIEA)(0.38 mL，2.2mmol)。将该反应混合物在室温于氮气氛下搅拌过夜。向该混 合物中加入在无水乙腈(1mL)中的DIEA(0.38mL，2.2mmol)，然后 加入在无水乙腈(1mL)中的N-甲基-4-(甲基氨基)哌啶(0.29mL，2.0 mmol)。将该反应混合物在回流状态下于氮气氛下搅拌过夜。用乙酸乙 酯将该反应混合物萃取3次。将合并的有机层用盐水溶液洗涤一次，用 无水碳酸钾干燥。在旋转蒸发仪中将有机层浓缩，让其真空干燥过夜。 通过柱色谱法纯化(硅胶，96∶3∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶浓NH4OH)，获得了浅棕 色固体106(271mg，32％)，

TLC(silica gel，93∶6∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶conc.NH4OH)，Rf 0.28；HPLC： Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]， 264nm，Rt，4.4min，84.8％纯度；MS(ESI)：m/z422(26)，420(M+H，71.2)，378 (4.2)，231(100)，211(40.4)，118(5.4).

                          实施例11

合成N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-异丙基-N6-甲基-N6-哌啶-4-基 -1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(107)

通过柱色谱法纯化(硅胶，96∶3∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶浓NH4OH)，分离出 了作为副产物的化合物107(0.159g)。mp 129℃； TLC(silica gel，93∶6∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶conc.NH4OH)，Rf 0.14；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm， Rt 4.4min，93.5％纯度；MS(ESI)：m/z 408 (17.2)，406(M+H，46.6)，375 (18.5)，245(11.9)，224(100)，204(13.4).

                        实施例12

合成5-{4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-[甲基-(1-甲基哌啶-4- 基)-氨基]-[1，3，5]三嗪-2-基氨基}-戊-1-醇(108)

向溶解在无水1，4-二氧杂环己烷(30mL)内的101样本(1.5046g， 5.0mmol)中加入5-氨基-1-戊醇(0.5067g，5.0mmol)在无水乙腈(12 mL)中的溶液，然后加入在无水乙腈(2mL)中的N，N-二异丙基乙胺(DIEA) (0.95mL，5.5mmol)。将该反应混合物在室温于氮气氛下搅拌过夜。 向该混合物中加入在无水乙腈(1mL)中的DIEA(0.95mL，5.5mmol)， 然后加入在无水乙腈(1mL)中的N-甲基-4-(甲基氨基)哌啶(0.73mL， 5.0mmol)。将该反应混合物在回流状态下于氮气氛下搅拌过夜。用乙 酸乙酯将该反应混合物萃取3次。将合并的有机层用盐水溶液洗涤一次， 用无水碳酸钾干燥。在旋转蒸发仪中将有机层浓缩，让其真空干燥过夜。 通过柱色谱法纯化(硅胶，90∶9∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶浓NH4OH)，获得了浅棕 色固体108(300mg，13％)；

TLC(silica gel，90∶9∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶conc.NH4OH)，Rf 0.22；HPLC： YMC Pack Pro C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264 nm，Rt 3.5min，74.8％纯度；MS(ESI)：m/z 466(24.2)，464(M+H，71.5)，378 (5.2)，253(4.5)，244(20.5)，233(100)，216(33.3)，196(14.6)，118(5.1).

                        实施例13

合成5-[4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-(甲基-哌啶-4-基氨 基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基]-戊-1-醇(109)

通过柱色谱法纯化(硅胶，90∶9∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶浓NH4OH)，分离出 了作为副产物的化合物109(0.820g)。mp 101℃； TLC(silica gel，90∶9∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶conc.NH4OH)，Rf 0.08；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm， Rt 3.6min，95.3％纯度；MS(ESI)：m/z 452(13)，450(M+H，35.6)，419(3.9)， 267(5.1)，246(100)，226(21.3)，209(23.6)，118(1.1).

                              实施例14

合成N-丁基-6-氯-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N-丙基-[1，3，5]三 嗪-2，4-二胺(110)

向溶解在丙酮(20mL)中的101样本(1.5334g，5.0mmol)中加入 N-丙基-丁基胺(0.77mL，5.0mmol)在丙酮(1mL)中的溶液，然后加入 NaOH(2.0mL，2.5N，5.0mmol)。让该反应混合物在30-35℃于氮 气氛下搅拌约3小时。将该反应混合物用二氯甲烷萃取3次；将合并的 有机层用盐水溶液洗涤并用碳酸钾干燥。将样本在旋转蒸发仪上浓缩， 并把所得油状物真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化(硅胶，96∶3∶1二氯 甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了浅棕色固体110(1.4g，77％产率)。

                   实施例15

合成N-丁基-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-甲基-N”-(1- 甲基-哌啶-4-基)-N-丙基-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(111)

向溶解在1，4-二氧杂环己烷(25mL)内的110样本(1.323g，3.4 mmol)中加入N-甲基-4-(甲基氨基)哌啶(0.4mL，3.4mmol)在1，4-二 氧杂环己烷(1mL)中的溶液，然后加入NaOH(1.4mL，2.5N，3.4mmol). 让该反应混合物在回流状态下于氮气氛下搅拌约2小时。将该反应混合 物用二氯甲烷萃取3次；将合并的有机层用盐水洗涤，并用碳酸钾干燥。 将样本在旋转蒸发仪上浓缩，并把所得固体真空干燥过夜。通过柱色谱 法纯化(硅胶，90∶9∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了浅棕色固 体化合物111(527mg，33％)，mp 68℃； TLC(silica gel，90∶9∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶conc.NH4OH)，Rf 0.46；HPLC：ODS- 3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 41.6 min，90.8％纯度)；MS(ESI)：m/z 476(M+H，28.5)，261(20.2)，260(52.8)，259 (100)，239(18.6)，239(50.6).

                      实施例16

合成N2-丁基-N4-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-哌啶-4-基 -N2-丙基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(112)

通过柱色谱法纯化(硅胶，90∶9∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶浓NH4OH)，分离出 了作为副产物的化合物112(0.112g)。TLC(silica gel，90∶9∶1 CH2Cl2∶CH3OH∶ conc.NH4OH)，Rf 0.23；HPLC：ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶ CH3OH∶CH3CN]，265nm，Rt 41.4min，97.8％纯度)；MS(ESI)：m/z 464 (11.6)，462(M+H，28.9)，431(15.6)，273(12.7)，253(58.8)，252(100)，232 (25.8)，157(14.5).

                        实施例17

合成2，4-二氯-6-环己基甲氧基-[1，3，5]三嗪(113)

向溶解在甲苯(20mL)内的氰尿酰氯(3.76g，20.0mmol)中加入碳 酸氢钾(2.80g，20.0mmol)和18-冠-6(0.1614g，0.6mmol)，然后 滴加环己基甲醇(2.5mL，20mmol)在15mL甲苯(15mL)中的混合物。 让该反应混合物在回流状态下于氮气氛下搅拌约18小时。让该反应混 合物流过硅藻土塞，使用旋转蒸发仪浓缩，真空干燥过夜，获得了113， 为油状物(5.212g，99％产率)。

                           实施例18

合成(4-氯-6-环己基甲氧基-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3-氟-4-甲氧基 -苯基)-胺(114)

向溶解在丙酮(20mL)内113样本(1.011g，3.8mmol)中加入3- 氟-对甲氧基苯胺(0.541g，3.8mmol)在丙酮(10mL)中的溶液，然后 加入NaOH(1.52mL，2.5N，3.8mmol)和水(3mL)。让该反应混合物 在回流状态下于氮气氛下搅拌约3小时。将该反应混合物用二氯甲烷萃 取3次；将合并的有机层用盐水溶液洗涤并用碳酸钾干燥。将样本在旋 转蒸发仪上浓缩，并把所得油状物真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化(硅 胶，70∶30己烷∶乙酸乙酯)，获得了浅黄色固体化合物114(0.581g， 42％)，mp 98℃；TLC(硅胶，30∶70乙酸乙酯∶己烷)，Rf 0.36；MS (ESI)：m/z 369(39.1)，368(22.1)，367(M+H，100)，273(3.2)，271 (10.7)。

                    实施例19

合成6-环己基甲氧基-N，N’-二-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1，3，5-三 嗪-2，4-二胺(115)

通过柱色谱法纯化(硅胶，70∶30己烷∶乙酸乙酯)，获得了作为副产 物的化合物115(0.159g)，mp 181℃；TLC(硅胶，30∶70乙酸乙酯∶ 己烷)，Rf 0.17；MS(ESI)：m/z 472(M+H，100)，261(1.5)。

                    实施例20

合成6-环己基甲氧基-N-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N’-(3-氟-4- 甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺(116)

向溶解在1，4二氧杂环己烷(15mL)内的114样本(0.3004g，0.82 mmol)中加入2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷(0.12mL，0.82mmol)在丙 酮(1mL)中的溶液，然后加入NaOH(0.33mL，2.5N，0.82mmol)和 水(1mL)。让该反应混合物在回流状态下于氮气氛下搅拌约2小时。将 该反应混合物用二氯甲烷萃取3次；将合并的有机层用盐水洗涤，并用 碳酸钾干燥。将样本在旋转蒸发仪上浓缩，并把所得固体真空干燥过夜。 通过柱色谱法纯化(硅胶，93∶6∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得 了浅黄色固体化合物116(226mg，60％)，

             mp 59℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 10.5min，100％纯度；1H NMR (600MHz，CDCl3，55℃)δ7.65 宽共振，旋转异构体，1H)，7.07(br d，J＝ 7.8Hz，1H)，6.90(t，J＝9Hz，1H)6.84(宽共振，旋转异构体，1H)，4.12(s， 2H)，3.88(S，3H)，1.02(s，1H)，2.26(apt sextet，J＝6.6Hz，1H)，2.19(q，J＝ 9Hz，1H)，1.16-1.92(m，10H)，1.57(s，2H)，1.17-1.32(m，3H)，1.05-1.11(m， 4H)；MS(ESI)：m/z 459(M+H，100)，363(40.7)，223(16.1)，202(4.4)，138 (1.2).

                         实施例21

合成(4-氯-6-环己基甲氧基-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3-氯-4-甲氧基 -苯基)-胺(117)

向溶解在丙酮(20mL)内的化合物113样本(1.012g，3.8mmol) 中加入3-氯-对甲氧基苯胺(0.605g，3.8mmol)在丙酮(10mL)中的溶 液，然后加入NaOH(1.52mL，2.5N，3.8mmol)和水(3mL)。让该反 应混合物在回流状态下于氮气氛下搅拌约3小时。将该反应混合物用二 氯甲烷萃取3次；将合并的有机层用盐水洗涤，并用碳酸钾干燥。将样 本在旋转蒸发仪上浓缩，并把所得油状物真空干燥过夜。通过柱色谱法 纯化(硅胶，70∶30己烷∶乙酸乙酯)，获得了浅桃色固体化合物117 (0.547g，38％)，mp 114℃；TLC(硅胶，30∶70乙酸乙酯∶己烷)，Rf 0.44； MS(ESI)：m/z 385(74.3)，384，(22.9)，383(M+H，100)，287(8.3)。

                  实施例22

合成N，N’-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-6-环己基甲氧基-1，3，5-三 嗪-2，4-二胺(118)

通过柱色谱法纯化(硅胶，70∶30己烷∶乙酸乙酯)，获得了作为副产 物的化合物118(0.178g)，mp 188℃；TLC(硅胶，30∶70乙酸乙酯∶ 己烷)，Rf 0.22；MS(ESI)：m/z 504(M+H，100)，379(1)，338(1.3)。

                    实施例23

合成N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-6-环己基甲氧基-N’-甲基-N’-(1- 甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4-二胺(119)

向溶解在1，4二氧杂环己烷(15mL)内的117样本(0.3007g，0.78 mmol)中加入2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷(0.11mL，0.78mmol)在丙 酮(1mL)中的溶液，然后加入NaOH(0.31mL，2.5N，0.78mmol)和 水(1mL)。让该反应混合物在回流状态下于氮气氛下搅拌约2小时。将 该反应混合物用二氯甲烷萃取3次；将合并的有机层用盐水溶液洗涤并 用碳酸钾干燥。将样本在旋转蒸发仪上浓缩，并把所得固体真空干燥过 夜。通过柱色谱法纯化(硅胶，93∶6∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)， 获得了浅黄色固体化合物119(159mg，43％)，

      mp 140℃.HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 15.2min，99.7％纯度；MS (ESI)：m/z 475(M+H，64.1)，379(49.5)，231(48.6)，210(100)，190(3.2).

                      实施例24

合成6-氯-N，N”-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4- 二胺(120)

向溶解在丙酮(25mL)内的101样本(3.0556g，10.0mmol)中加入 3-氯-对甲氧基苯胺(1.6050g，10.0mmol)在丙酮(10mL)中的溶液， 然后加入NaOH(4.0mL，2.5N，10.0mmol)。让该反应混合物在室温 于氮气氛下搅拌约3小时。将该反应混合物倒入碎冰中。通过真空过滤 收集所得固体，用水洗涤，并真空干燥过夜，获得了化合物120(4.06g， 95％)，mp 213℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18， 40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 70.0min， 97.1％纯度MS(ESI)：m/z 427(20.90)，426(M+H，99.6)，210(100)，209 (22.2)，196(55.3)，169(25.4).

                     实施例25

合成N，N’-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-甲基-N”-(1-甲 基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(121)

向溶解在1，4-二氧杂环己烷(20mL)内的样本化合物120样本 (1.5004g，3.5mmol)中加入N-甲基-4-(甲基氨基)-哌啶(0.5mL，3.5 mmol)在1，4-二氧杂环己烷(1mL)中的溶液，然后加入NaOH(1.4mL， 2.5N，3.5mmol)。让该反应混合物在回流状态下于氮气氛下搅拌约2 小时。将该反应混合物倒入碎冰中，用10％盐酸(水溶液)中和。通过 真空过滤收集所得固体，用水洗涤，并真空干燥过夜。通过柱色谱法纯 化(硅胶，96∶3∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了紫色固体化合 物121(487mg，27％)，mp 130℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶ CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 8.1min，96％纯度；1H NMR(600MHz，CDCl3， 55℃)δ7.81-7.92(宽共振，2H)，7.19-7.30(宽共振，2H)，6.87 (d，J＝9Hz，2H)，6.72(s，2H)，4.60-4.65(m，1H)，3.88(s，6H)，3.05(s，3H)，2.95 (d，J＝12Hz，2H)，2.32(s，3H)，2.19(t，J＝11.4Hz，2H)，1.89(dq，J＝12.6，3.6 Hz，2H)，1.71(apt d，J＝11.4Hz，2H)，1.65(s，1H)；MS(ESI)：m/z 519(28.3)， 518(M+H，42.1)，261(71.9)，260(100).

                        实施例26

合成N，N’-二-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-环庚基-[1，3，5]三 嗪-2，4，6-三胺(122)

向溶解在丙酮(20mL)内的120样本(1.5004g，3.5mmol)中加入 环庚基胺(0.4mL，3.5mmol)在丙酮(1mL)中的溶液，然后加入NaOH(1.4mL，2.5N，3.5mmol)。让该反应混合物在回流状态下于氮气氛下 搅拌约2小时。将该反应混合物倒入碎冰中，用10％盐酸(水溶液)中 和。通过真空过滤收集所得固体，用水洗涤，并真空干燥过夜，获得了 浅紫色固体化合物122(1.5g，85％)，

mp 183℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH 3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 59min，96％纯度；MS(ESI)：m/z 503 (M+H，29)，502(100)，458(24.2)，425(17.9)，225(5.7)，155(11.3)，114(27.6).

                      实施例27

合成N-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N”-(1- 甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(123)

在约-10℃、搅拌下，向溶解在乙腈(3mL)内的氰尿酰氯(0.184g， 1.0mmol)中加入3-溴-对甲氧基苯胺(0.2019g，1.0mmol)在乙腈中 的溶液，然后加入N，N-二异丙基乙胺(DIEA)(0.17mL，1.0mmol)在 乙腈中的溶液。让该反应混合物在约-10℃于氮气氛下搅拌1小时。然 后将该反应混合物温热至室温，将其在室温于氮气氛下再搅拌1小时。 向该反应混合物中加入环庚基胺(0.13mL，1.0mmol)在乙腈中的溶液， 然后加入DIEA(0.17mL，1.0mmol)。让该反应混合物在回流状态下 于氮气氛下搅拌过夜。向该反应混合物中加入N-甲基-4-(甲基氨基)哌 啶(0.13mL，1.0mmol)在乙腈中的溶液，然后加入DIEA(0.17mL，1.0 mmol)。让该反应混合物在回流状态下于氮气氛下搅拌过夜。将该反应 混合物用乙酸乙酯萃取3次；将合并的有机层用盐水溶液洗涤，并用碳 酸钾干燥。将样本在旋转蒸发仪上浓缩，并把所得固体真空干燥过夜。 通过柱色谱法纯化(硅胶，90∶9∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得 了0.029g(6％)123。1H NMR (400MHz，CDCl3)δ7.97-8.19(宽共振，1H)，7.12(宽共振， 1H)，6.78-6.80(m，2H)，4.82(br s，1H)，4.58(br s，1H)，3.92(br s，1H)，3.84(s， 3H)，2.90-2.98(m，5H)，2.29(s，3H)，2.17(宽共振，2H)，1.99-2.24 (宽共振，4H)，1.72-1.85(m，3H)，1.42-1.62(m，11H)；MS(ESI)：m/z 520(100)，518(93.9)，458(10.4)，424(20.8)，422(21.1)，261(67.5)，260(63.4)， 213(13.9)，212(13.6).

                    实施例28

合成6-氯-N-环己基甲基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三 嗪-2，4-二胺(125)

向溶解在丙酮(300mL)内的124(40.02g，138.4mmol，如本文 所述制得的)中加入环己烷甲基胺(18.0mL，138.4mmol)在丙酮(30mL) 中的溶液，然后加入NaOH(55.4mL，2.5N，138.4mmol)和130mL 水。让该反应混合物在回流状态下搅拌约3小时。然后将该反应混合物 倒入碎冰中，用10％盐酸(水溶液)和10％NaOH(水溶液)中和。通过 真空过滤收集所得固体，用水洗涤，并真空干燥过夜。从乙酸乙酯中重 结晶，获得了浅黄色固体化合物125(32.93g，65％)，mp 156℃； HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶10∶50[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN]，264nm，Rt 47.9min，92％纯度；MS(ESI)：m/z 366(M+H，100).

                        实施例29

合成N-环己基甲基-N’-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N”-(3-氟 -4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(126)

向溶解在1，4-二氧杂环己烷(150mL)内的125样本(10.02g，27.3 mmol)中加入2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷(4.0mL，27.3mmol)在丙酮 (10mL)中的溶液，然后加入NaOH(11mL，2.5N，27.3mmol)和27mL 水。让该反应混合物在回流状态下搅拌约2小时。将该反应混合物用二 氯甲烷萃取3次；将合并的有机层用盐水洗涤，并用碳酸钾干燥。将样 本在旋转蒸发仪上浓缩，并把所得固体真空干燥过夜。通过柱色谱法纯 化(硅胶，93∶6∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了浅黄色固体化 合物126(7.014g，56％)，mp 72 ℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN]，264nm，Rt 8.5min，93.4％纯度；MS(ESI)：m/z 458(M+H，37.3)， 362(4)，250(100)，230(15.3)，229(44.1).

                            实施例30

合成N-环庚基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-6-吡咯烷-1-基-[1，3，5] 三嗪-2，4-二胺(128)

向溶解在THF(150mL)内的化合物127样本(13.24g，36.2mmol， 如本文所述制得的)加入吡咯烷(3.0mL，36.2mmol)在THF(10mL)中 的溶液，然后加入NaOH(14.5mL，2.5N，36.2mmol)和36mL水。 让该反应混合物在回流状态下搅拌约2.5小时。将该反应混合物用二氯 甲烷萃取3次；将合并的有机层用盐水洗涤，并用碳酸钾干燥。将样本 在旋转蒸发仪上浓缩，并把所得固体真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化 (硅胶，98∶2二氯甲烷∶甲醇)，获得了浅黄色固体128(3.36g，23％)，

                         mp 79℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18， 40∶10∶50[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 24.5min， 95.5％纯度；1H NMR(600MHz，CDCl3，55℃)δ7.77(宽共振，1H)， 7.01-7.03(m，1H)，6.86(t，J＝9Hz，1H)，6.62(s，1H)，4.80(s，1H)，4.02-4.06 (m，1H)，3.85(s，3H)，3.54(s，4H)，1.99-2.03(m，2H)，1.91-1.93(m，3H)，1.47- 1.66(m，11H)；MS(ESI)：m/z 402(30.7)，401(M+H，100).

                    实施例31

合成(4，6-二氯-[1，3，5]三嗪-2-基)-(3-氟-4-甲氧基-苯基)胺 (124)

在约0-5℃，向溶解在丙酮(200mL)内的氰尿酰氯(28.84g，156.0 mmol)中加入3-氟-对甲氧基苯胺(22.16g，156.0mmol)在丙酮(200mL) 中的溶液，然后加入NaOH(63mL，2.5N，156.0mmol)。让该反应混 合物在约0-5℃搅拌约2小时。然后将该反应混合物倒入碎冰中，用 10％盐酸(水溶液)和5％NaOH(水溶液)中和。通过真空过滤收集所得 固体，用水洗涤，并真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化(硅胶，70∶30 己烷∶乙酸乙酯)，获得了浅黄色固体化合物124(29.6g，66％)；mp 134 ℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN].264nm，Rt 20.3min，97.7％纯度。

                       实施例32

合成6-氯-N-环庚基-N’-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪 -2，4-二胺(127)

向溶解在丙酮(150mL)内的124样本(10.00g，34.6mmol)中加入 环庚基胺(4.4mL，34.6mmol)在丙酮(20mL)中的溶液，然后加入NaOH(13.8mL，2.5N，34.6mmol)和35mL水。让该反应混合物在回流状 态下搅拌约3小时。将该反应混合物用二氯甲烷萃取3次；将合并的有 机层用盐水洗涤，并用碳酸钾干燥。将样本在旋转蒸发仪上浓缩，将所 得固体真空干燥，获得了127(12.4g，98％产率)；

   mp 145℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M， pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 104.8min，97.3％纯度；1H NMR(600 MHz，CDCl3，55℃)δ7.50-7.64(m，1H)，7.02-7.03(宽共振，2H)，6.90(t， J＝8.9Hz，1H)，5.35-5.41(宽共振，1H)，3.99(br s，1H)，4.12(旋转异构体)， 3.87(s，3H)，2.01(br s，2H)，1.42-1.67(m，11H).

                        实施例33

合成N-环庚基-N’-乙基-N”-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5] 三嗪-2，4-二胺(129)

将溶解在THF(150mL)内的127(11.00g，30mmol)中加入乙胺 盐酸盐(2.43mL，30mmol)在THF(20mL)中的溶液，然后加入NaOH(24 mL，2.5N，60mmol)和30mL水。让该反应混合物在回流状态下搅拌 约2小时。将该反应混合物用二氯甲烷萃取3次；将合并的有机层用盐 水洗涤，并用碳酸钾干燥。将样本在旋转蒸发仪上浓缩，并把所得固体 真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化(硅胶，98∶2二氯甲烷∶甲醇)，获得 了浅黄色固体129(4.81g，43％)，mp 84℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶ CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 30.7min，94.2％纯度；1H NMR(600MHz， CDCl3，55℃)δ7.69(s，1H)，7.00(br d，J＝7.0Hz，1H)，6.86(t，J＝8.4Hz，1H)， 6.64(s，1H)，4.79-4.83(宽共振，2H)，4.01-4.03(m，1H)，3.85(s，3H)， 3.38-3.42(m，2H)，1.99-2.01(m，2H)，1.47-1.67(m，11H)，1.19(t，J＝7.2Hz， 3H)；MS(ESI)：m/z 376(29.5)，375(M+H，100).

                       实施例34

合成N-环庚基-N’-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N”-(3-氟-4- 甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(130)

向溶解在THF(80mL)内的127(5.009g，13.7mmol)中加入2-(氨 基甲基)-1-乙基吡咯烷(2.0mL，13.7mmol)在THF(10mL)中的溶液， 然后加入NaOH(5.5mL，2.5N，13.7mmol)和13mL水。让该反应混 合物在回流状态下于氮气氛下搅拌约2小时。将该反应混合物用二氯甲 烷萃取3次；将合并的有机层用盐水洗涤，并用碳酸钾干燥。将样本在 旋转蒸发仪上浓缩，并把所得固体真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化(硅 胶，90∶9∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了浅黄色固体130(3.63 g，58％)，mp 76℃；HPLC：Inertsil ODS- 3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 7.1 min，97.1％纯度：MS(ESI)：m/z 459(16.5)，458(M+H，48.7)，362(31.3)，250 (100)，230(22.8)，229(62.7)，222(17.2)，202(34).

                      实施例35

合成2-[4-氯-6-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-[1，3，5]三嗪-2-基氨 基]-丙-1，3-二醇(131)

向溶解在丙酮(3mL)内的101(0.6114g，2mmol)中加入溶 解在丙酮(1mL)和水(1mL)中的2-氨基-丙-1，3-二醇(0.1818g，2 mmol)。然后将水(1mL)加到该反应混合物中，之后加入2.5N NaOH(水 溶液)(0.8mL，2mmol)。将该反应混合物在氮气氛下加热回流3小时。 用乙酸乙酯将该反应混合物稀释，用2×盐水洗涤。分离出有机层，用 无水碳酸钾干燥，过滤，减压浓缩，获得了0.634g紫色固体。通过快 速硅胶柱色谱纯化粗产物，用100％乙酸乙酯洗脱，获得了131，为无 色油状物(0.124g，18％)；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M， pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 5.7min，83.3％纯度；MS(ESI)：m/z 360(M+H，100)，338(10.7)，183(10.3)

                         实施例36

合成2-{4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-[甲基-(1-甲基哌啶-4- 基)-氨基]-[1，3，5]三嗪-2-基氨基}-丙-1，3-二醇(132)

向溶解在3mL 1，4-二氧杂环己烷内的131(0.979g，0.271 mmol)中加入溶解在2mL 1，4-二氧杂环己烷中的甲基-4-(甲基氨基)哌 啶(0.05mL，0.34mmol)，然后加入2.5N NaOH(水溶液)(0.11mL，0.275 mmol)。将该反应混合物加热回流3小时45分钟，冷却至约室温，然后 减压浓缩。用二氯甲烷将所得产物浓缩，过滤。然后将滤液浓缩，获得 了56.5g产物。通过硅胶柱色谱纯化该粗产物，用100％甲醇洗脱，获 得了132，为白色固体(21.1mg，18％)；

mp 84℃；MS(ESI)：m/z 454(34.7)，452(M+H，100)，422 (11.3)，248 (25.3)，247(51.3)，157(60.3)，129(27.5).

                       实施例37

合成N-(1-苄基-哌啶-4-基)-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”- 环庚基-[1，3，5]-2，4，6-三胺(134)

向溶解在3mL乙腈内的133(0.1252g，0.382mmol，如本文所 述制得的)中加入N，N-二异丙基乙基胺(DIEA)(0.07mL，0.382mL)， 然后加入4-氨基-1-苄基胺(0.07mL，0.382mmol)。将该混合物在氮 气氛下回流过夜。将该反应混合物用二氯甲烷稀释，用盐水洗涤。分离 出有机层，用碳酸钾干燥，过滤并减压浓缩，获得了0.159g产物。通 过快速硅胶柱色谱法纯化该产物，用96∶3∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化 铵洗脱，用碳酸钾将收集的级份干燥，过滤，然后减压浓缩，获得了77 mg产物。在类似条件下进行第二次柱纯化，获得了另外30mg产物，将 产物合并，获得了134(103mg，50％)；

HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH 3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 13.7min，97.7％纯度；MS(ESI)：m/z 538 (15.4)，536(38.2)，448(19.3)，446(49.3)，290(41.4)，289(84.6)，269(100)，247 (4.4).

                         实施例38

合成N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-环庚基-N6-哌啶-4-基-1，3，5- 三嗪-2，4，6-三胺(135)

向在2mL甲醇内的134(0.0485g，0.0867mmol)中加入10％Pd/C(0.052g)，然后加入甲酸铵(0.0646g，1.02mmol)。将该混合物在氮 气氛下加热回流约1.5小时。将该冷却的反应混合物经由硅藻土真空过 滤，用二氯甲烷洗涤，将滤液减压浓缩，获得了36mg产物。通过快速 硅胶色谱纯化该粗产物，用90∶9∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵洗脱， 用碳酸钾将收集的级份干燥，过滤，然后减压干燥，获得了固体135(20 mg，51.8％)，mp 167℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30 [KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 4.6min，52,1％ (另一个主峰在Rt 7.3min，46.9％)；MS(ESI)：m/z 448(4.4)，446(12.5)， 412(22.7)，386(2.3)，265(32.9)，248(42.6)，244(56.2)，228(37.1)，227(100)， 207(6.9).

                       实施例39

合成N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-环庚基-N6-(1-乙基-吡咯烷-2- 基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(136)

向溶解在3mL乙腈内的133(0.1257g，0.382mmol，如本文所 述制得的)中加入DIEA(0.07mL，0.382mL)，然后加入2-(氨基甲 基)-1-乙基吡咯烷(0.06mL，0.382mmol)。将该混合物在氮气氛下回 流过夜。将该反应混合物用二氯甲烷稀释，用盐水洗涤。分离出有机层， 用碳酸钾干燥，过滤并减压浓缩，获得了0.143g产物。通过快速硅胶 柱色谱法纯化该产物，用96∶3∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵洗脱，用 约1∶1的碳酸钾/硫酸钠将收集的级份干燥，过滤，然后减压浓缩，获 得了77mg产物。在类似条件下进行第二次柱纯化，获得了另外30mg 产物，将产物合并，获得了98mg(54％)黄色固体，

                          mp 69-70℃；HPLC：YMC Pack Pro C18， 40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 12.9min， 96.5％纯度；MS(ESI)：m/z 476(16.3)，474(42.9)，260(15)，259(44.2)，258 (100)，238(56)，216(5.3)，210(9.2).

                      实施例40

合成2-氯-4-{4-环庚基氨基-6-[甲基-(1-甲基-哌啶-4-基-氨基 -1，3，5-三嗪-2-基氨基}-苯酚(138)

在无水条件下，在无水圆底烧瓶内，在约0℃(冰/水浴)于氮气氛下 将137(0.1008g，0.21mmol，如本文所述制得的)溶解在无水二氯甲 烷(3mL)中，通过注射器向其中缓慢加入BBr3(2.1mL，2.1mmol，1M 的二氯甲烷溶液)。将该混合物在约0℃搅拌约2小时，然后用水(5mL) 处理。在室温静置过夜后，将该混合物用乙酸乙酯、水和10％NaHCO3(水 溶液)稀释，分离出有机层，然后用盐水洗涤。用无水硫酸钠将有机层 干燥，过滤，并减压浓缩，获得了0.648g产物。通过快速硅胶柱色谱 法纯化该粗产物，用100％甲醇洗脱，获得了白色固体138(7mg，7％)；

        HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH 3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 4.9min，90.3％纯度；1H NMR(600MHz， CDCl3，55℃)(所有共振都是宽的)δ7.93(s，1H)，7.13(s，1H)，6.91-6.92 (m，1H)，6.55(s，1H)，4.80(s，1H)，4.59(s，1H)，4.02(s，1H)，2.96-3.0(m，5H)， 2.32(s，3H)，2.13(s，2H)，2.03(s，2H)，1.86-1.88(m，2H)，1.53-1.67(m，12H)； MS(ESI)：m/z 463(12.4)，461(27)，252(59)，251(100)，231(32.3)，224(1)，203 (9.8).

                        实施例41

合成N2-环庚基-N4-((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟-4- 甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(139)

在约-10至-20℃，向氰尿酰氯(0.368g，2mmol)在CH3CN内的混 合物中加入在CH3CN中的3-氟-对甲氧基苯胺(0.28g，2mmol)，然后 加入N，N-二异丙基乙基胺(DIEA)(0.35mL，2mmol)，并搅拌1小时。 然后将该反应混合物温热至室温并保持1小时。不用进一步纯化继续进 行下一个步骤。加入环庚基胺(0.25mL，2mmol)和DIEA(0.35mL，2 mmol)，将该反应混合物在室温搅拌过夜。也不用进一步纯化直接进行 第三个步骤。加入S-(-)-2-氨基甲基-N-乙基吡咯烷(0.29mL，2mmol) 和DIEA(0.35mL，2mmol)，将该反应混合物回流过夜。将该反应混 合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离出有机层，用碳酸钾干燥，过 滤，并减压浓缩，获得了0.920g粗产物。通过柱色谱法纯化该粗产物， 获得了白色固体139(0.550g，60％)，

mp 75-77℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶ CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 7.9min，95.9％纯度；MS(ESI)：m/z 458(M+H， 100).

                       实施例42

合成N2-环庚基-N4-((R)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟-4- 甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(140)

在约-10至-20℃，向氰尿酰氯(0.368g，2mmol)在CH3CN内的混 合物中加入在CH3CN中的3-氟-对甲氧基苯胺(0.28g，2mmol)，然后 加入N，N-二异丙基乙基胺(DIEA)(0.35mL，2mmol)，并搅拌1小时。 然后将该反应混合物温热至室温并保持1小时。加入环庚基胺(0.25mL， 2mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)，将该反应混合物在室温搅拌过夜。 向该反应混合物中加入R-(+)-2-氨基甲基-N-乙基吡咯烷(0.29mL，2 mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)，将该反应混合物回流过夜。将该反 应混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离出有机层，用碳酸钾干燥， 过滤，并减压浓缩，获得了0.920g粗产物。通过柱色谱法纯化该粗产 物，获得了白色固体140(0.500g，54.7％)，mp 77-79℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 7.9 min，74.3％纯度；MS(ESI)：m/z 458(M+H，100).

                          实施例43

合成N2-环己基甲基-N4-((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟 -4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(141)

在约-20℃，向氰尿酰氯(0.368g，2mmol)在CH3CN内的混合物中 加入在CH3CN中的3-氟-对甲氧基苯胺(0.28g，2mmol)，然后加入DIEA (0.35mL，2mmol)，并搅拌1小时。然后将该反应混合物在室温搅拌 1小时。加入环己基甲胺(0.26mL，2mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)， 将该反应混合物在室温搅拌过夜。向该反应混合物中加入S-(-)-2-氨基 甲基-N-乙基吡咯烷(0.29mL，2mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)， 将该反应混合物回流过夜。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗 涤。分离出有机层，用碳酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，通过柱色谱法 纯化该粗产物，用96∶3∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵洗脱，获得了白 色固体141(0.400g，43.7％)，mp 68- 69℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶ CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 8.2min，97.1％纯度；MS(ESI)：m/z 458(M+H， 100)，362(2.8)，230(85.4).

                        实施例44

合成N2-环己基甲基-N4-((R)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟 -4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(142)

在约-20℃，向氰尿酰氯(0.368g，2mmol)在CH3CN内的混合物中 加入在CH3CN中的3-氟-对甲氧基苯胺(0.28g，2mmol)，然后加入DIEA (0.35mL，2mmol)，并搅拌1小时。然后将该反应混合物在室温搅拌 1小时。加入环己基甲基胺(0.26mL，2mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)， 将该反应混合物在室温搅拌过夜。向该反应混合物中加入R-(+)-2-氨基 甲基-N-乙基吡咯烷(0.29mL，2mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)， 将该反应混合物回流过夜。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗 涤。分离出有机层，用碳酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，通过柱色谱法 纯化该粗产物，用96∶3∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵洗脱，获得了142 (0.100g，10.9％)，mp 66-67℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm， Rt 8.2min，96.7％纯度；1H NMR(600MHz，CDCl3)δ7.58-7.73( 宽共振1H)，7.07-7.11(宽共振，1H)，6.82(t，J＝9Hz，1H)，5.49- 5.65(宽共振，1H)，4.96-5.13(宽共振，1H)，3.82(s，3H)，3.54- 3.70(宽共振，1H)，3.13-3.20(br m，4H)，2.81(宽共振，1H)， 2.54(宽共振，1H)，2.05-2.18(m，2H)，2.01(s，1H)，1.50-1.83(br m， 9H)，1.05-1.22(m，5H)，0.91(apt q，J＝11.4Hz，2H)；MS(ESI)：m/z 458 (M+H，100)，362(3.8)，230(99.8)，216(1)，182(1.1).

                      实施例45

合成({4-环庚基氨基-6-[((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-氨 基]-1，3，5-三嗪-2-基}-苯基-氨基)-乙腈(143)

在约-20℃，向氰尿酰氯(0.368g，2mmol)在CH3CN内的混合物中 加入在CH3CN中的N-苯基甘氨腈(0.264g，2mmol)，然后加入DIEA (0.35mL，2mmol)，并搅拌1小时。然后将该反应混合物在室温搅拌 1小时。加入环庚基胺(0.25mL，2mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)， 将该反应混合物在室温搅拌过夜。然后加入S-(-)-2-氨基甲基-N-乙基 吡咯烷(0.29mL，2mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)，将该反应混合 物回流过夜。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离出有 机层，用碳酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，通过柱色谱法纯化该粗产物， 用96∶3∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵洗脱，获得了143(0.300g，33％)

                       mp 53-55℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18， 40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 6.9min， 94.1％纯度；MS(ESI)：m/z 449(M+H，100)，381(1.2)，353(16.2)，226(19.9)， 225(54.3)，212(20.5)，177(18.3)，164(9.6).

                       实施例46

合成({4-环庚基氨基-6-[((R)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-氨 基]-1，3，5-三嗪-2-基}-苯基-氨基)-乙腈(144)

在约-20℃，向氰尿酰氯(0.368g，2mmol)在CH3CN内的混合物中 加入在CH3CN中的N-苯基甘氨腈(0.264g，2mmol)，然后加入DIEA (0.35mL，2mmol)，并搅拌1小时。然后将该反应混合物在室温搅拌 1小时。加入环庚基胺(0.25mL，2mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)， 将该反应混合物在室温搅拌过夜。然后加入R-(+)-2-氨基甲基-N-乙基 吡咯烷(0.29mL，2mmol)和DIEA(0.35mL，2mmol)，将该反应混合 物回流过夜。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离出有 机层，用碳酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，通过柱色谱法纯化该粗产物， 用96∶3∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵洗脱，获得了144(0.300g，33％)

                       mp 53-55℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18， 40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 6.8min， 92.6％纯度；MS(ESI)：m/z 449(M+H，100)，381(1.4)，353(11.8)，226(13)， 225(33.1)，212(15)，177(13.5)，164(7.8). 

                   实施例47

合成N2-[(1-乙基-2-吡咯烷基)-N4-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-6-[(S)-2-(甲氧基甲基)-1-吡咯烷基]-1，3，5-三嗪-2，4-二胺 (145)

将氰尿酰氯(11.07g，60mmol)溶解在40mL CH3CN中，冷却至约 -20℃。向其中加入DIEA(11.5mL，60mmol)，然后加入在20mL CH3CN中的3-氟-4-甲氧基苯胺(8.47g，60mmol)(冷冻的反应)。在-20℃反 应约1小时后，让该反应温热至室温。TLC(2％CH3OH/CH2Cl2)和质谱表 明存在化合物124。将该反应混合物冷却至约0℃，然后加入DIEA(11.5 mL，66mmol)。加入在CH3CN(10mL)中的2-氨基甲基-1-乙基吡咯烷 (7.77g，60mmol)。让该反应温热至室温，并搅拌过夜。然后加入在 20mL 1，4-二氧杂环己烷中的DIEA(11.5mL，66mmol)和S-(+)-2- 甲氧基乙基吡咯烷(6.91g，60mmol)。将该反应在约50℃加热过夜。 真空除去溶剂，用填充在乙酸乙酯中的硅胶通过快速色谱法纯化所得残 余物。除去跑在前面的杂质，然后将洗脱剂的极性提高至10％CH3OH∶ 乙酸乙酯。将从柱上收集的材料溶解在水中，在CH2Cl2中萃取(4次)， 用MgSO4干燥，浓缩至干，获得了棕色固体145(9.7g，27.6％产率)，

                                                    71-72℃； HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN]：264nm，Rt 5.37min，90.3％纯度；1H NMR(600MHz，CDCl3，55℃) δ7.69(s，1H)，7.08(d，J＝7.8Hz，1H)，6.86(t，J＝9Hz，1H)，4.29(s，1H)，3.90 -3.96(m，1H)，3.84(s，3H)，3.63-3.81(m，6H)，3.35(s，3H)，3.23-3.25(m，1H)， 2.85(宽s，1H)，2.78(宽 s 1H)，2.14(宽s，2H)，1.89-2.04(m，6H)，1.37 (表观t，J＝7.2Hz，3H)；13C NMR(150.8MHz，CDCl3，55℃)δ165.8，163.8 (2C)，152.3(d，Jc-f＝243.5Hz)，143.0(142.9，旋转异构体或非对映体体)，133.7 (133.67，旋转异构体或非对映体)，115.0，114.4，109.1(108.9，旋转异构体或非对映体 )，72.8，66.6，59.0，57.0，56.6，53.7，51.0，46.8，42.2，28.4(28.2， 旋转异构体或非对映体)，23.1(23.0，旋转异构体或非对映体)，10.9；MS(ESI) m/z 460.2(M+H，44.7)，251.1(47.7)，235.1(27.5)，231.1(37.4)，230.6(100)， 214.6(36.5).

                        实施例48

合成(3-氯-4-甲氧基-苯基)-(4，6-二氯-[1，3，5]三嗪-2-基)-胺 (101)

在约0-5℃(冰水浴)、搅拌下，向溶解在丙酮(250mL)内的氰尿酰 氯(36.911g，200.0mmol)中加入3-氯-对甲氧基苯胺(31.528g，200.0 mmol)在丙酮(150mL)中的溶液，然后加入NaOH溶液(80mL，2.5N， 200.0mmol)。让该反应混合物在约0-5℃(冰水浴)搅拌约1小时。然 后将该反应混合物倒入碎冰中，用10％盐酸(水溶液)中和。将所得固 体用水洗涤，并真空干燥过夜，获得了101(58.3g，96％)，

                                                 mp 165℃；HPLC： YMC Pack Pro C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264 nm，Rt 24.3min，97.8％纯度)；MS(ESI)：m/z 305(M+H，100)，283(26.3)，271 (26.9)，269(75.2)，139(16.2).

                       实施例49

合成6-氯-N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-[1，3，5]三嗪 -2，4-二胺(133)

在室温，通过加液漏斗向在丙酮(200mL)内的化合物101样本 (20.02g，65.6mmol)中缓慢地加入在丙酮(55mL)中的环庚基胺(8.3 mL，65.5mmol)。然后加入水(66mL)，之后通过加液漏斗加入氢氧化 钠水溶液(26.2mL，2.5N，65.5mmol)。将该反应混合物在氮气氛下 加热回流约3小时。将该反应冷却，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤1次， 最后用盐水洗涤1次。分离出有机层，用碳酸钾/硫酸钠干燥。就有机 层过滤，并真空浓缩。将产物(24.13g)通过快速柱色谱法纯化(硅胶， 1∶4乙酸乙酯∶己烷)。将级份合并，真空浓缩，获得了133，为浅黄色 固体(17.66g，70.5％)，mp 146℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶10∶50 [KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 58.8min，99.9％ 纯度)；MS(ESI)：m/z 382(M+H，100)，241(2.8)，226(8.4)，139(43.5)，116(6).

                         实施例50

合成N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N”-(1- 甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(137)

通过加液漏斗向在1，4-二氧杂环己烷(80mL)内的133(10.014g， 26.2mmol)中缓慢地加入溶解在1，4-二氧杂环己烷(15mL)中的甲基 -(1-甲基-哌啶-4-基)-胺(3.8mL，26.2mmol)。然后通过加液漏斗加 入氢氧化钠水溶液(10.5mL，2.5N，26.2mmol)，之后加入水(26mL)。 将该反应混合物在氮气氛下加热回流约2.5小时。将该反应冷却，用二 氯甲烷稀释。使用真空过滤该反应混合物，除去固体147。用盐水将滤 液洗涤1次。用二氯甲烷将水层回萃取1次。将有机层合并，用碳酸钾 干燥。将该有机溶液过滤，并真空浓缩，获得了粗产物(5.89g)。通过 快速柱色谱法纯化(硅胶)纯化该反应粗产物，用96∶3∶1二氯甲烷∶甲 醇∶15M氢氧化铵洗脱。合并级份，用硫酸钠/碳酸钾干燥，过滤，真空 浓缩，获得了137，为白色固体(3.84g，30.9％)，mp 104-105 ℃；HPLC：YMC Pack Pro C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN]，264nm，Rt 13.8min，97％纯度)；MS(ESI)：m/z 474(M+H，41)，408 (2.3)，364(2.8)，258(13)，239(14)，239(47.5)，238(100)，127(5.3).

                        实施例51

合成N2-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N4-环庚基-N6-甲基-N6-哌啶-4-基 -1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(146)

通过柱色谱法纯化(硅胶，96∶3∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，分 离出了作为副产物的化合物146，mp 114-116℃；TLC(silica gel，90∶9∶1，CH2Cl2∶ CH3OH∶conc.NH4OH)，Rf 137 0.31 and Rf 146 0.15；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 10.7 min，91.1％纯度)；MS(ESI)：m/z 460(M+H，25.4)，364(17.9)，292(2)，273 (17.1)，272(37.9)，252(44)，251(100)，231(2.2)，157(10.54)，118(2.8).

                       实施例52

合成4-(3-氯-4-甲氧基-苯基氨基)-6-环庚基氨基-1，3，5-三嗪-2- 醇(147)

化合物147是在分离137之前，作为副产物通过真空过滤分离出的， 为白色固体，mp＞310℃；MS(ESI)；m/z 727([2(363)+H]，1.2，364 (M+H，100)。

                       实施例53

合成N-(1-氮杂-二环[2.2.2]辛-3-基)-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯 基)-N”)1-乙基-吡咯烷基-2-基甲基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(148)

在约0℃，向溶解在无水乙腈(30mL)内的101(3.056g，10.0mmol) 中加入2-(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷(1.5mL，10.0mmol)在无水乙腈 (5mL)中的溶液，然后加入DIEA(1.9mL，11.0mmol)。让该反应混合 物温热至室温，在室温于氮气氛下搅拌过夜。然后加入DIEA(1.9mL， 11mmol)，之后加入在1，4二氧杂环己烷(5mL)中的3-氨基奎宁环二 盐酸盐(1.962g，10.0mmol)。让该反应混合物在回流状态下于氮气氛 下搅拌过夜。将该反应混合物用二氯甲烷萃取2次，用乙酸乙酯萃取1 次。将合并的有机层用盐水洗涤1次，用无水碳酸钾干燥。将有机层用 20％盐酸(水溶液)洗涤，将水层用2.5N NaOH(水溶液)中和，然后用 乙酸乙酯萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤1次，用碳酸钾干燥， 在旋转蒸发仪中浓缩，真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化(硅胶，85∶14∶1 二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了灰白色固体148(100mg，2％)，

mp 83℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH 3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 8.1min，71.2％纯度)；MS(ESI)：m/z 488 (M+H，18.7)，280(100)，245([M+2H]++，37.4)，236(23.5).

                     实施例54 

合成N2-(3-氯-4-二乙基氨基-苯基)-N4-环庚基-N6-(1-乙基吡咯烷 -2-基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(149)

在约-20℃，向氰尿酰氯(1.8g，9.7mmol)在CH3CN内的混合物中 加入在CH3CN中的2-氯-N，N-二乙基苯-1，4-二胺盐酸盐(2.35g，10 mmol)，然后加入N，N-二异丙基乙基胺(DIEA)(1.75mL，10mmol)， 搅拌1小时。让该反应混合物温热至室温并保持1小时。然后加入环庚 基胺(1.25mL，9.8mmol)和DIEA(1.75mL，10mmol)，将该反应混 合物在室温搅拌过夜。加入(氨基甲基)-1-乙基吡咯烷(1.45mL，10 mmol)和DIEA(1.75mL，10mmol)，将该反应混合物回流过夜。将该 反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用盐水洗涤。分离出有机层，用硫酸钠 干燥，过滤，并减压浓缩。通过柱色谱法纯化(硅胶)粗产物，用96∶3∶1 二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵洗脱，获得了149(0.800g，15％)，为白色 固体，mp 84-85℃；HPLC： Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]， 264nm，Rt 9.5min，96％纯度；MS(ESI)：m/z 515(M+H，9.4)，259(16.8)，258 (55.1)，257(100).

                          实施例55

合成N2-环庚基-N4-(2-二甲基氨基-乙基)-N6-(3-氟-4-甲氧基苯 基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(150)

将在CH3CN(20mL)中的氰尿酰氯(1.84g，10mmol)冷却至约-10 ℃，加入3-氟-对甲氧基苯胺(1.41g，10mmol)，然后加入DIEA(1.8 mL，10mmol)。将该反应搅拌约45分钟，然后在室温于氮气氛下搅拌约 45分钟。加入环庚基胺(1.26mL，10mmol)，然后加入DIEA(1.8mL，10 mmol)，将该反应在室温搅拌过夜。加入N，N-二甲基乙二胺(1.1mL，10 mmol)，然后加入DIEA(1.8mL，10mmol)，将该混合物在氮气氛下加 热回流过夜。将该反应用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用无水碳酸钾干 燥。将所得产物(1.178g)通过硅胶柱色谱法纯化，获得了固体150 (1.178g，28％)，mp 73-76℃；HPLC： Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]， 264nm，Rt 10.8min，95.1％纯度；MS(ESI)：m/z 418(M+H，100)，373(11.9)， 322(7.8)，277(6.8)，162(3.6).

                        实施例56

合成({4-环庚基氨基-6-[1-乙基-吡咯烷-2-基甲基]-氨 基}-1，3，5-三嗪-2-基)-苯基-氨基)-乙腈(151)

在约-10至-20℃，向在CH3CN(20mL)内的氰尿酰氯(1.84g，10 mmol)中加入DIEA(1.75mL，10mmol)和N-苯基甘氨腈(1.3g，10 mmol)，搅拌约1小时。让该反应混合物温热至室温并保持1小时。向 该反应混合物中加入DIEA(1.75mL，10mmol)和环庚基胺(1.25mL，10 mmol)，将该反应混合物在室温搅拌过夜。然后加入DIEA(1.75mL，10 mmol)和2-氨基甲基-N-乙基吡咯烷(1.45mL，10mmol)，将该反应混 合物回流过夜。将该反应混合物后处理，分离，然后通过柱色谱(硅胶) 纯化，用96∶3∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵洗脱，获得了151(3g，66％)， mp 52-54℃；MS(ESI)：m/z 449(M+H，100)，225[(M+2H)2+，22.3]。

                      实施例57

合成N-氮杂环庚烷-1-基-6-氯-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[1，3，5] 三嗪-2，4-二胺(152)

向溶解在丙酮(75mL)内的101(6.03g，20.0mmol)中加入1-氨 基高哌啶(2.3mL，20.0mmol)在丙酮(10mL)中的溶液，然后加入NaOH(8.0mL 2.5N NaOH溶液，20.0mmol)和20mL水。将该反应混合物在 回流状态下于氮气氛下搅拌过夜。将该反应混合物用二氯甲烷萃取3次； 将合并的有机层用盐水洗涤，并用碳酸钾干燥。将样本在旋转蒸发仪上 浓缩，并把所得油状物真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化(96∶3∶1二氯 甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了浅紫色固体152(1.2g，16％)，

                   mp 139℃；TLC(silica gel，96∶3∶1，CH2Cl2， CH3OH，conc.NH4OH)，Rf 0.31；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30 [KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 52.5min，94.9％ 纯度；MS(ESI)：m/z 383(M+H，100).

                      实施例58

合成N”-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N，N’-二-全氢-氮杂_-1-基 -1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(153)

通过柱色谱法纯化(硅胶，96∶3∶1，CH2Cl2，CH3OH，浓NH4OH)，分 离出了作为副产物的化合物153(2.3g)，mp 199 ℃；TLC(silica gel，96∶3∶1，CH2Cl2，CH3OH，conc.NH4OH)，Rf 0.11；HPLC： Inertsil ODS 3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]， 264nm，Rt 15min，86％纯度)；MS(ESI)：m/z 461(M+H，100)，366(19.7)，365 (19.6)，232(11)，231(27.3).

                          实施例59

合成N-氮杂环庚烷-1-基-N’-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N”-(1- 甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(154)

向溶解在THF(10mL)内的152(0.2007g，0.5mmol)中加入N- 甲基-4-(甲基氨基)哌啶(0.07mL，0.5mmol)在THF(1mL)中的溶液， 然后加入在乙腈(1mL)中的DIEA(1.0mL，0.55mmol)。将该反应混 合物在回流状态下于氮气氛下搅拌过夜。将该反应混合物用二氯甲烷萃 取3次；将合并的有机层用盐水洗涤，并用碳酸钾干燥。将样本在旋转 蒸发仪上浓缩，并把所得油状物真空干燥过夜。通过柱色谱法纯化 (90∶9∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获得了浅黄色固体154(65mg， 27％)，mp 100℃；TLC(silica gel，90∶9∶1 CH2Cl2∶CH3OH，conc.NH4OH)，Rf 0.36；MS(ESI)：m/z 475(M+H，23.2)，378(11.6)，258(68.9)，239(52.2)，238 (100).

                        实施例60

合成N4-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N2-全氢-氮杂_-1-基-N6- 哌啶-4-基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(155)

通过柱色谱法纯化(硅胶，90∶9∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，获 得了作为反应副产物的化合物155(50mg)mp 81℃；TLC(silica gel，90∶9∶1 CH2Cl2∶CH3OH，conc.NH4OH)，Rf 0.25；MS(ESI)：m/z 461(M+H，20.3)，430 (2.8)，273(11.8)，272(25.5)，251(100)，236(4.6)，215(4.7).

                        实施例61

合成N，N’-二正丙基-N”-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺(156)

在约-20℃，向在CH3CN内的氰尿酰氯(0.368g，2mmol)中加入在 CH3CN中的3-氟-对甲氧基苯胺(0.28g，2mmol)，然后加入DIEA(0.39 mL，2.2mmol)，搅拌约1小时。然后将该反应混合物在室温搅拌约1 小时。加入正丙基胺(1.64mL，19.9mmol)和DIEA(0.39mL，2.2mmol)， 将该反应混合物在室温搅拌过夜。按照常规方式对该反应混合物进行后 处理，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离出有机层，用硫酸钠干燥， 过滤，减压浓缩，通过硅胶柱色谱纯化化合物156。 mp 53-55℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2) ∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 12.6min，93.7％纯度；MS(ESI)：m/z 335 (M+H，100)，331(1.5)，126(1).

                      实施例62

合成N，N’-二环丙基-N”-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1，3，5-三嗪 -2，4，6-三胺(157)

在约-20℃，向在CH3CN内的氰尿酰氯(0.368g，2mmol)中加入在 CH3CN中的3-氟-对甲氧基苯胺(0.28g，2mmol)，然后加入DIEA(0.39 mL，2.2mmol)，搅拌约1小时。然后将该反应混合物在室温搅拌约1 小时。加入环丙基胺(1.39mL，20mmol)和DIEA(0.39mL，2.2mmol)， 将该反应混合物在室温搅拌过夜。按照常规方式对该反应混合物进行后 处理，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离出有机层，用硫酸钠干燥， 过滤，减压浓缩，通过硅胶柱色谱纯化化合物157(200mg，30％)， mp 91-92℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18， 40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 8.6min， 99.1％纯度；MS(ESI)：m/z 331(M+H，100)，305(0.8)，151(.3).

                    实施例63

合成N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌 啶-4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(158)

在约-10至-20℃，向在1，4-二氧杂环己烷(1mL)内的氰尿酰氯 (0.180g，1mmol)中加入在CH3CN(1mL)中的N，N-二异丙基乙胺(DIEA) (0.19mL，1mmol)和在CH3CN(1mL)中的3-氟-对甲氧基苯胺(0.14g， 1mmol)，并搅拌约1小时。然后将该反应混合物在室温搅拌约1小时。 加入环庚基胺(0.13mL，1mmol)和DIEA(0.19mL，Immol)在CH3CN(0.5 mL)中的溶液，将该反应混合物在室温搅拌过夜。然后加入在CH3CN(0.5 mL)中的N-甲基-4-(甲基氨基)哌啶(0.15mL，1mmol)和DIEA(0.19mL， 1mmol)，将该反应混合物回流过夜。使用饱和碳酸氢钠和盐水对该反 应混合物进行后处理。分离出有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓 缩。通过柱色谱法纯化粗产物(硅胶，90∶9∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化 铵)，获得了158(0.130g，28％)；TLC(silica gel，90∶9∶1， CH2Cl2，CH3OH，conc.NH4OH)，Rf 0.26)；1H NMR(600MHz，CDCl3，55℃)δ 7.74(br s，1H)，6.94(br s，1H)，6.81-6.84(m，2H)，4.83(宽共振，1H)，4.55 (s，1H)，3.98(s，1H)，3.82(s，3H)，2.97(s，3H)，2.94(br d，J＝11.9Hz，2H)，2.29 (s，3H)，2.06-2.10(m，2H)，1.93-1.97(m，2H)，1.84-1.90(m，2H)，1.44-1.66(m， 12H).

                        实施例64

合成N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-哌啶-4-基 -1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺(159)

通过柱色谱法纯化(硅胶，90∶9∶1二氯甲烷∶甲醇∶浓氢氧化铵)，分 离出了作为副产物的化合物159(55mg)；

TLC(silica gel，90∶9∶1，CH2Cl2，CH3OH，conc.NH4OH)，Rf 0.1)； HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN]，264nm，Rt 8.3min，93.5％纯度；MS(ESI)：m/z 443(M+H，100).

                        实施例65

合成N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌 啶-4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺，盐酸盐(160)

在氮气氛下，通过注射器向在无水甲醇内的171(1mL，如本文所 述，依据平行合成方法C使用合适的单体制得的)中加入HCl(0.3mL， 0.3mmol，1M在乙醚中的溶液)。将该混合物在室温搅拌10分钟， 浓缩，真空干燥过夜，获得了灰白色固体160(0.131g)，该产物是水 溶性的，mp 189-190℃(样本在160℃变为棕色)；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CH]，264nm，Rt 7.3min， 89.1％纯度。

                   实施例66

合成[N-(3-氯-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N”-(1- 甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺(161)

向溶解在甲醇(5mL)内的137(0.473g，1.0mmol)中加入1.0M 盐酸的乙醚溶液(1.0mL，1mmol)。让该反应混合物在室温搅拌约1小 时。然后用旋转蒸发仪将该反应混合物浓缩。将所得固体溶解在水中， 过滤，并在旋转蒸发仪中浓缩。将样本在真空下冷冻干燥，收集固体161 (359.1mg，70％)，mp 173-176℃。

                    实施例67

合成N2-(3-氯-4-二乙基氨基-苯基)-N4-环庚基-N6-(1-乙基吡咯烷 -2-基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺盐酸盐(163)

向在甲醇(10mL)内的162(1.0g，2mmol，如本文所述，依据平 行合成方法A使用合适的单体制得的)中加入HCl的乙醚溶液(2.5mL， 2.5mmol，1M)，并搅拌。将该反应混合物蒸发。然后将其溶解在水中， 过滤，真空蒸发，真空干燥过夜，获得了固体163(1.1g，93％)。

                       实施例68

合成N2-环庚基-N4-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-N6-(3-氟-4-甲氧 基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺盐酸盐(164)

向在无水甲醇(10mL)内的130(2.285g，5mmol)中加入HCl(5mL， 5mmol，1M在乙醚中的溶液)，在室温搅拌约1小时。将该反应真空蒸 发，溶解在水中，过滤，蒸发，然后真空干燥过夜，获得了固体164(2.396 g，97％)，mp 131-133℃；HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M， pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm，Rt 7.9min，98.2％纯度。

                       实施例69

合成N2-(环己基甲基)-N4-[(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基]-N6-(4-氟 -3-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺盐酸盐(165)

向在无水乙醚内的136(0.457g，1mmol)中加入HCl(1mL，1mmol， 1M在乙醚中的溶液)。立即形成了沉淀。将该混合物在室温搅拌约1小 时，然后真空浓缩。将所得产物溶解在水中，过滤，蒸发，真空干燥过 夜，获得了固体165(0.400g，81％)，mp 85℃；HPLC： Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]， 264nm，Rt 8.2min，89.6％纯度。

                    实施例70

合成({4-环庚基氨基-6-[(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-氨 基]-1，3，5-三嗪-2-基}-苯基-氨基)-乙腈盐酸盐(166)

向在无水乙醚(2mL)内的151(0.448g，1mmol)中加入HCl(1mL， 1mmol，1M在乙醚中的溶液)。将该混合物在室温搅拌约1小时，然后 真空浓缩。将所得产物溶解在水(5-10mL)中，过滤，蒸发，并真空干 燥过夜，获得了固体166(0.418g，86％)，mp 125-127℃； HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN]，264nm，Rt 6.9min，73.4％纯度。

                      实施例71

合成N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌 啶-4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺马来酸盐(167)

将化合物158(100.3mg，0.219mmol)和马来酸(25.4mg，0.219 mmol)溶解在CH3OH(2mL)中，在氮气氛下于室温搅拌约75分钟。将该 反应混合物经由棉塞过滤，真空浓缩，获得了固体167，0.1239g，mp 99-100℃。在定性试验中，该产物是水溶性的。 HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN]，264nm，Rt 7.7min，87.9％纯度

                   实施例72

合成N2-环庚基-N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌 啶-4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺柠檬酸盐(168)

将158(100mg，0.219mmol)和柠檬酸(42.1mg，0.219mmol)溶 解在CH3OH(2mL)中，在氮气氛下于室温搅拌约2小时。将该反应混合 物经由棉塞过滤，真空浓缩，获得了固体168(0.1387g)，mp 125℃。 在定性试验中，该产物是水不溶性的。HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶CH3CN]，264nm， Rt 7.7min，90.1％纯度。

                       实施例73

合成N2-环庚基--N4-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-N6-甲基-N6-(1-甲基-哌 啶-4-基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺琥珀酸盐(169)

将化合物158(101.5mg，0.219mmol)和琥珀酸(24.8mg，0.219 mmol)溶解在CH3OH(2mL)中，在氮气氛下于室温搅拌约75分钟。将该 反应混合物经由棉塞过滤，真空浓缩，获得了固体169(0.1248g)，mp 81℃。在定性试验中，该产物是水溶性的。

HPLC：Inertsil ODS-3V C18，40∶30∶30[KH2PO4(0.01M，pH3.2)∶CH3OH∶ CH3CN]，264nm，Rt 7.6min，89.8％纯度。

                        实施例74

合成N-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-N’-环庚基-N”-甲基-N”-(1- 甲基-哌啶-4-基)-[1，3，5]三嗪-2，4，6-三胺盐酸盐(170)

向溶解在甲醇(5mL)内的123(1.0mmol)中加入1.0M盐酸的乙醚 溶液(1.0mL，1mmol)。让该反应混合物在室温搅拌约1小时。然后将 该反应混合物在旋转蒸发仪中浓缩。将所得固体溶解在水中，过滤并用 旋转蒸发仪浓缩。将样本在真空下冷冻干燥，收集固体170(70％)。

                        实施例75

合成三(氨基)1，3，5-三嗪化合物的另一合成途径

下列反应方案代表提出的1，3，5-三嗪化合物的另一合成途径。

该反应方案代表在专利中描述的制备三氨基取代的1，3，5-三嗪化 合物的合成途径的改进形式。其中，在SNAr反应中，可使用另一离去基 团X，而不是氰尿酰氯(X＝Cl)，在酸(质子)清除剂存在下依次加入亲核 性胺，获得了具有所需氨基组合的三取代的1，3，5-三嗪化合物。

                     实施例76

合成三(氨基)1，3，5-三嗪化合物的另一合成途径

下列反应方案代表提出的1，3，5-三嗪化合物的另一合成途径。

该反应方案代表在专利文本中描述的制备三氨基取代的1，3，5-三 嗪化合物的合成途径的改进形式。可使用碱，包括过量胺试剂R2NH作为 酸(质子)清除剂，来代替在我们的方法中使用的Hunig’s碱(iPr2NEt)。 这些碱可包括其它有机叔胺碱或离子性无机碱。在加入氰尿酰-X反应物 之前，可首先使用强碱(NaH、KH或RLi)将氨基单体去质子化。此外， 可使用以固体为载体的碱(例如树脂-NR2-一种修饰的Hunig’s碱)作为 质子清除剂。这有可能使得分离操作更容易，以及获得更纯的反应产物。 逻辑上，可使用与该方法所选的碱相容的合适的溶剂或溶剂组合。

                       实施例77

合成三(氨基)1，3，5-三嗪化合物的另一合成途径

下列反应方案代表提出的1，3，5-三嗪化合物的另一合成途径。

该反应方案代表在专利文本中描述的制备三氨基取代的 1，3，5-三嗪化合物的合成途径的改进形式。使用蜜胺作为原料，所述方 法将涉及三个依次进行的还原胺化步骤。通过控制加入、温度和pH，选 择醛或酮，可制得具有所需氨基组合的三氨基取代的1，3，5-三嗪化合 物。

                    实施例78

合成三(氨基)1，3，5-三嗪化合物的另一合成途径

下列反应方案代表提出的1，3，5-三嗪化合物的另一合成途径。

                   反应方案D

该反应方案代表制备对称或不对称取代的三氨基取代的1，3，5-三 嗪化合物的固相合成方法。树脂应当具有用以连接氨基的易于裂解的连 接基团(L)和离去基团(G)。该反应方案描述了首先通过将树脂与氨反应 来连接上简单氨基NH2的合成。使用用于取代全卤代1，3，5-三嗪化合物 的标准SNAr化学方法，可将三嗪与胺化的树脂连接。在酸清除剂存在下， 用官能化的胺将三嗪母核上的卤素依次取代，生成所需二氨基取代的 1，3，5-三嗪化合物。将所得三嗪化合物从树脂上裂解下来，以获得三氨 基取代的三嗪产物。可使用标准化学方法例如还原胺化或N-烷基化将三 嗪的游离NH2基团进一步烷基化或官能化，以生成完全官能化的三氨基 取代的1，3，5-三嗪化合物。

                         实施例79

合成三(氨基)1，3，5-三嗪化合物的另一合成途径

下列反应方案(反应方案A和B)代表提出的1，3，5-三嗪化合物的另 一合成途径。

该反应方案代表使用Suzuki偶联反应来合成三氨基取代的1，3，5- 三嗪化合物的变型。如反应方案A所示，可在合适的钯催化剂、添加剂 和溶剂存在下，依次将蜜胺的氨基与烷基或芳基硼酸衍生物反应，以获 得与上述实施例类似的对称或不对称三氨基取代的1，3，5-三嗪化合物。 在反应方案B中，三硼酸1，3，5-三嗪可由氰尿酰氯或氰尿酰溴制得。可 如上面的胺单体描述内容所示，在合适的金属催化剂(例如Cu或Pd催 化剂)、添加剂和溶剂存在下，将该衍生物与芳基或烷基胺偶联，以获 得对称或不对称三氨基取代的1，3，5-三嗪化合物。

                     实施例80

蛋白聚糖诱导

平滑肌细胞在缺乏血清期间达到静息，从而导致DNA合成被阻断。 为了证实基底膜蛋白聚糖(蛋白聚糖实例)在SMC静息中的作用，通过将 血清从培养基中除去来让细胞缺乏血清。该实施例和本文其它实施例中 使用的细胞是在补充生长因子bFGF和表皮生长因子(EGF)的基础培养基 中生长的人主动脉SMC(Clonetics，San Diego，CA)。

在或不在一种或多种本发明化合物存在下测定SMC分泌的总PG(蛋 白聚糖)以及基底膜蛋白聚糖。通过将细胞与(35S)硫酸盐一起培养2-6 小时来用(35S)硫酸盐将PG放射标记。收集培养基PG，通过DEAE-纤维 素色谱纯化。通过用含有4M urea、1％Triton X-100、0.1mM EDTA 和1mM PMSF的50mM Tris缓冲液pH7.4提取细胞来评估与细胞结合 的PG。(35S)硫酸盐和(3H)亮氨酸的水溶液得自Amersham。对照细胞中 不加入化合物，而处理的细胞中加入一种或多种本发明化合物。

为了测定PG水平的改变，进行DEAE-纤维素色谱。用含有4M尿素、 0.1M NaCl、0.1mM EDTA、1mM PMSF和1％3[(3-胆酰氨基丙基)二甲 基铵]-1-丙磺酸盐(CHAPS)的50mM Tris缓冲液pH7.4将DEAE-纤维 素柱平衡。用相同缓冲液和含有0.25M NaCl的缓冲液洗柱，用含有 0.5M NaCl的相同缓冲液洗脱PG。将含有放射性(35SO4)的级份合并，用 MEM透析过夜并计数。

为了测定HSPG与硫酸软骨素/硫酸皮肤素蛋白聚糖(CS/DS PG)的相 对比例，将等份试样的合并的级份在含有1单位/ml每种类肝素酶和肝 素酶或者含有0.5单位软骨素ABC裂合酶的50mM乙酸钠缓冲液pH5.2 中于37℃培养16小时。软骨素ABC是指不同异构型的软骨素，例如软 骨素A、软骨素B和软骨素C。用0.5体积的1％氯化十六烷基吡啶或3 体积的乙醇将该反应混合物沉淀，以沉淀出未消化的糖胺聚糖。测定上 清液和沉淀物中的放射性。

为了测定作为对存在本发明化合物的反应的基底膜蛋白聚糖的改 变，在(3H)亮氨酸存在下让细胞在不含血清或含有血清的培养基中生长 24小时(稳态)。将细胞以低密度(8×104个细胞/孔，在48-孔平板中， 30-40％铺满)铺在平板中，并培养24小时。然后用不含血清或含有10％ 胎牛血清(FBS)的新鲜培养基补充细胞。培养24小时后，用(3H)胸苷将 细胞标记6小时，通过用三氯乙酸(TCA)将细胞裂解物沉淀来测定掺入 到DNA内的放射性。(3H)胸苷得自NEN。通过与抗-基底膜蛋白聚糖抗体 (稀释100倍)培养，然后用蛋白A-琼脂糖沉淀来将纯化的PG(0.5M 洗脱液)免疫沉淀。通过5％SDS-PAGE分析免疫沉淀。通过放射自显影 法鉴定基底膜蛋白聚糖(Mr＞550kDa)。对照细胞中不加入化合物，而 处理的细胞中加入一种或多种本发明化合物。

                      实施例81

                  抑制平滑肌细胞增殖

使用实施例1中描述的方法，获得通过DEAE-纤维素色谱由SMC培 养基中分离的纯化的基底膜蛋白聚糖，并测定其对SMC的抗增殖作用。

向含有血清的培养基中加入基底膜蛋白聚糖使得SMC生长被抑制了 70％。将亚铺满的SMC(40-50％铺满)在具有或不具有纯化的基底膜蛋白 聚糖的不含血清培养基或含10％血清的培养基中培养24小时。然后通过 将细胞在含有(3H)胸苷的培养基中培养5小时来测定DNA合成。确定可 被TCA沉淀的(DNA)胸苷计数，并且以在10％FBS内的细胞生长中的DNA 合成百分比表示。

通过将本发明化合物与基底膜蛋白聚糖一起培养，然后进行测定， 该测定可用于表明本发明化合物对基底膜蛋白聚糖的直接影响。或者， 可用至少一种本发明化合物预先处理细胞以表明间接作用。对照细胞中 不加入化合物，而处理的细胞中加入一种或多种本发明化合物。

                          实施例82

在平滑肌增殖测定中试验本发明三嗪化合物

使用人主动脉平滑肌细胞(Clonetics)。让细胞在补充有生长因子、 基础成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和胰岛素的含有5％胎牛血清 的基础培养基中生长。为了测定本发明三嗪化合物对SMC增殖的影响， 将细胞以低密度(4000个细胞/孔，在96-孔平板中)铺在平板中，并培 养24小时。然后让细胞缺乏血清24小时以诱导静息。然后加入不含化 合物或含有10μM化合物的新鲜的生长培养基，并进一步培养24小时。 使用细胞增殖测定试剂盒(Celltiter96 AQueous，得自Promega)测定细胞 数目。

不同的本发明三嗪化合物对平滑肌细胞增殖的影响如附图53所示。 多种本发明三嗪化合物将SMC增殖抑制了70％以上。

                   实施例83

诱导和测定内皮类肝素酶蛋白

使用在48-孔平板(～90％铺满)中生长的人微血管内皮细胞(HMVEC) 进行试验。为了诱导类肝素酶活性，用200μl补充了1％牛血清白蛋 白(BSA)，并含有或不含有刺激剂(5ng/ml TGF-α、1ng/ml IL 1α、 200ng/ml VEGF或所需的其它刺激剂、细胞因子或诱导剂)的Dulbecco’ s Modified Eagle’s培养基(DMEM)替换培养基。通过SDS/PAGE分析 分泌的蛋白，并通过使用多克隆抗人类肝素酶抗体的免疫印迹法检测类 肝素酶活性。通过测光密度分析测定类肝素酶表达活性的改变。本文表 中给出的内皮类肝素酶蛋白的诱导和测定是依据本实施例进行的。

                          实施例84

制备生物素化的HS

使用得自Pierce的琥珀酰亚胺基-6-(生物素酰氨基)己酸酯 (NHS-LC-生物素)，用具有间隔臂的生物素将硫酸类肝素(HS)生物素化。 将约0.5ml HS溶液(2mg/ml在NaHCO3中的溶液，pH8.5)与0.05ml 新制备的NHS-LC-生物素在二甲亚砜中的溶液混和。将该混合物在室温 培养1小时。通过经由Microcon-3滤器(Millipore)离心(10,000RPM) 来除去未缀合的生物素，然后用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释。该操作重 复5次以保证除去所有游离的生物素。然后通过与1毫升Tris-甘氨酸 缓冲液(25mM-183mM，pH8.3)在室温培养20分钟来除去反应中不需 要的醛。将该混合物进行3次如上所述的微过滤。取出等份试样的生物 素化的HS(5mg/ml在PBS中的溶液)，并在-20℃贮存。为了获得最大 生物素化，使用25倍摩尔过量的生物素。使用HABA试剂，确定HS与 生物素的比例为1∶2。

使用抗生物素蛋白-HABA(Pierce Chemical Co)测定HS的生物素化 程度。HABA测定可在宽范围的pH和盐浓度下使用。HABA(4-羟基偶氮 苯-2’-甲酸)是一种染料，其与抗生物素蛋白结合，并起未被占据的结 合位点的指示剂的作用。抗生物素蛋白与生物素以化学计算比例结合， 使得能够使用在抗生物素蛋白与抗生物素蛋白-生物素复合物之间的差 异来作为定性和定量测定每一组分的测定方法的基础。

当HABA与抗生物素蛋白结合时，HABA染料中有大的光谱变化。在 500nm出现了新的吸收带，其是醌型染料的特征。抗生物素蛋白-生物 素复合物不与HABA结合，并且由于该复合物的离解常数非常低，该染 料被生物素以化学计算比例置换。因此，HABA测定可以是比色和滴定分 析的基础。生物素的量是由在500nm的增加的吸收度直接计算的，或 者染料可在测定生物素的分光光度滴定法中用作指示剂。

当加入生物素时，由抗生物素蛋白-HABA复合物导致的吸收带成比 例地降低。因为生物素对抗生物素蛋白具有高亲和力，其置换HABA染 料。未知量的生物素可以制备标准曲线来测定，所述标准曲线是通过使 用已知量的生物素来置换与抗生物素蛋白结合的HABA，并相对于在500 nm的吸收度绘图来制作的。

HABA溶液是通过将24.2mg HABA(Pierce)加到9.9ml H2O中， 然后加入0.1ml 1M NaOH来制得的。抗生物素蛋白-HABA试剂是通过 将10mg抗生物素蛋白和600μl HABA溶液加到19.4ml磷酸盐缓冲盐 水来制得的。向在比色杯内的1ml抗生物素蛋白-HABA试剂中加入100 μl生物素化的HS，在分光光度计中于500nm测定光密度。使用已知量 的HABA制作标准曲线。测定加入生物素化的HS后，HABA光密度的降低。

                    实施例85

类肝素酶测定

在对照和处理条件下，用类肝素酶将如上所述制备的生物素标记的 HS消化，将含有未降解和降解的HS的反应结合到生物素结合的平板上。 将与酶缀合的链霉抗生物素蛋白加到结合平板中。定量测定颜色反应以 确定可利用的生物素结合位点的量。颜色从已知量的下降反映了类肝素 酶消化HS的作用。对照条件不加入本发明化合物，处理条件加入本发 明化合物。

将含有0.1单位酶活性的类肝素酶冻干粉(得自Seikagaku的类肝 素酶III)在100μl反应缓冲液(3.33mM乙酸钙pH7.0，含有0.1mg/ml BSA)中水合。然后将该溶液在反应缓冲液中稀释至类肝素酶溶液的工作 浓度(0.01微单位至1毫单位)。酶活性由类肝素酶生产商(Seikagaku) 定义如下：1单位酶活性定义为每分钟产生1微摩尔己糖醛酸所需的量。 将生物素-HS在反应缓冲液中稀释至所需浓度。

为了测定类肝素酶活性，将含有或不含有至少一种本发明化合物的 10μl类肝素酶溶液与200μl生物素-HS底物在96-孔平板中混和。将 该反应在43℃温育1小时。将100微升该反应混合物加到水合的生物素 结合平板(Chemicon)中，在37℃温育30分钟。将生物素结合平板用200 μl 1×测定缓冲液(Chemicon)水合。用1×测定缓冲液将孔洗涤5次， 与100μl 1∶3000稀释的链霉抗生物素蛋白-酶缀合物(Chemicon)在37 ℃温育30分钟。用1×测定缓冲液将孔洗涤5次，与100μl底物溶液 (Chemicon)温育20分钟。通过在微量滴定板读数器(Labsystems， Muliskan Ascent model)中测定在450nm的光密度来评估孔中的颜色 生成。在对照与处理条件之间的差异表明所加入的化合物调节类肝素酶 的活性。

                       实施例86

通过IL-6 ELISA测定AGE引起的炎性反应

依据生产商的说明，将人主动脉内皮细胞(HAEC，Clonetics)在生 长培养基(Clonetics)中培养：基础培养基，其中含有人表皮生长因子、 氢化可的松、血管内皮生长因子、肝素结合生长因子-B、长R3-胰岛素 样生长因子-1、抗坏血酸、庆大霉素/两性霉素和5％FBS。在进行试验 处理之前，让这些细胞达到至少90％铺满。糖化人血清白蛋白(G-HSA) 得自US Biologicals。肿瘤坏死因子得自R&D Systems。

在对照和加入化合物(含有10μM化合物)的一式两份中，将内皮细 胞用对照培养基或含有10-100ng/ml TNF-α或300μg/ml糖化-HAS(处 理的细胞或处理)的培养基中处理24小时。所有处理、加入化合物和对 照都是在含有0.2％白蛋白的不含血清的培养基中进行的。收集得自所 有条件的培养基，并用于IL-6 ELISA。

按照生产商(R&D Systems)的描述，使用人IL-6 DuoSet ELISA显 影试剂盒进行IL-6 ELISA。使用小鼠抗-人I1-6作为捕获抗体(2 ug/ml)，使用生物素化的山羊抗-人IL-6(200ng/ml)作为检测抗体。 将培养基与捕获抗体(在96孔中)在室温温育2小时。将孔用洗涤缓冲 液(0.05％tween-20在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的溶液pH7.4)洗涤3次， 然后与检测抗体在室温温育2小时。洗涤3次后，将孔与链霉抗生物素 蛋白-HRP温育20分钟。在微量滴定板读数器中于450nm读取颜色生 成。

本发明化合物对G-HAS诱导的IL-6的影响如附图54所示。G是 G-HAS，且C是对照，未用化合物或G-HAS处理。内皮细胞在基本条件 下分泌约25pg/ml IL-6。将内皮细胞与G-HAS一起培养使得内皮细胞 的IL-6分泌量增加了3倍。向含有G-HAS的培养基中加入如每个化合 物序号所表示的本发明化合物使得内皮细胞分泌IL-6的量显著下降。 这些抑制作用是不同的，最有效的化合物使得IL-6分泌量下降了80％。 这些数据表明本发明化合物具有抗炎作用。

                     实施例87

细胞毒性/乳酸脱氢酶测定

将适当数目的细胞铺在四个96-孔平板中，一个平板用于“第0天”， 三个平板用于第1-3天。用不同浓度的至少一种本发明化合物与和不 与细胞程序死亡诱导剂顺铂(2μM)(“+cis”或“-cis”)处理细胞。 还测定具有或不具有顺铂的未处理的细胞。转染后，将平板在37℃培养 过夜。

将适当数目的细胞铺在四个96-孔平板中，一个平板用于“第0天”， 三个平板用于第1-3天。用不同浓度的至少一种本发明化合物处理细 胞。阴性对照细胞具有标准培养基条件，其中是用通过化合物的组合物 处理一式两份的孔，但是没有加入化合物，阳性对照细胞是用细胞程序 死亡诱导剂顺铂(2μM)处理。用对细胞程序死亡条件起反应的启动子的 载体转染所有细胞。当发生细胞程序死亡时，将启动子发挥作用，乳酸 脱氢酶基因被激活，产生酶蛋白和酶活性。活性易于通过颜色改变来检 测到。转染后，将平板在37℃培养过夜。

将约8ml温热的αMEM LDH裂解缓冲液(2％Triton XI 00)与约8ml 培养基(1/2稀释)合并。制备两个96-孔v-底平板，一个标记为“裂解”， 一个标记为“上清液”。为了裂解细胞，将约200μl αMEM裂解缓冲液 (1/2稀释的)加到一个测试平板中，该测试平板的上清液已被取出并加 到标记为上清液的平板中。混和后，将约200μl裂解的细胞转移到裂 解平板中。将裂解和上清液平板以约1600rpm离心约10分钟。离心后， 将约200μl上清液或裂解物转移到相应的96-孔平底板中。

用于细胞毒性的测定使用得自Roche Diagnostics Corp. (Indianapolis，IN)的细胞毒性检测试剂盒(LDH)。使用所提供的说明， 将染料溶液混和，并加到裂解物和上清液平板中，在黑暗条件下于15 -25℃培养最长达20-25分钟。

当与用顺铂或具有细胞毒性的本发明化合物处理的细胞比较时，从 未处理细胞中释放出的乳酸脱氢酶的量的差异表明所测试的化合物具 有细胞毒害活性。

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表2.通过平行合成反应制得的代表性本发明化合物，包括胺单体、产物和特征数据

注释1：活性等级如下(数值是包括性的)：(1)“+++”＝IC50＜3μM；(2)“++”＝IC50是3-7 μM；“+”＝IC50＞7μM。

表7.可用于治疗炎性病症以及涉及IL6抑制的所有疾病的的三嗪化合物

注释：“+++”代表与没接受化合物的细胞相比，在AGE或TNF存在下的约85％-100％的IL6生成抑制；“++”代表在AGE或TNF存在下的约65％-约85％的IL6生 成抑制；“+”代表在AGE或TNF存在下的约50％-约65％的IL6生成抑制。