内皮祖细胞在移植治疗大鼠冠状动脉微栓塞中的应用
阅读：1043发布：2020-06-13
专利汇可以提供内皮祖细胞在移植治疗大鼠冠状动脉微栓塞中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 冠状动脉 微栓塞的 治疗 。冠状动脉微栓塞(CME)是急性冠脉综合征及冠状动脉介入治疗中十分常见且重要的临床事件，本发明发现了低剂量EPC移植能增加内皮细胞生长因子VEGF和毛细血管的生成，抑制 成 纤维 细胞 生长因子bFGF，缓解CME引起的心肌组织病变以及心肌组织胶原纤维增生，为CME的治疗提供了新的策略。，下面是内皮祖细胞在移植治疗大鼠冠状动脉微栓塞中的应用专利的具体信息内容。
1.有效量的内皮祖细胞在制备移植治疗冠状动脉微栓塞疾病的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，所述内皮祖细胞的有效量为低剂量。
3.如权利要求2所述的应用，其中治疗大鼠冠状动脉微栓塞疾病时，所述低剂量为2×
105个内皮祖细胞。
4.如权利要求1-3任一项所述的应用，所述药物能够显著降低血清cTNI以及vWF含量。
5.如权利要求1-3任一项所述的应用，所述药物能够显著增加心肌组织VEGF和F8的表达，降低心肌组织bFGF的表达。
6.如权利要求1-3任一项所述的应用，所述药物能够使microRNA-21表达显著增加，microRNA-19a表达显著降低，microRNA-214表达有所增加，microRNA-486-3p表达显著增加。
7.一种用于移植治疗冠状动脉微栓塞疾病的药物，其特征在于：所述药物包含有效量的适合移植治疗冠状动脉微栓塞疾病的内皮祖细胞。
8.如权利要求7所述的药物，其中所述内皮祖细胞的有效量为低剂量。
9.如权利要求8所述的药物，其中治疗大鼠冠状动脉微栓塞疾病时，所述低剂量为2×
105个内皮祖细胞。
10.有效量的内皮祖细胞在制备改变患有冠状动脉微栓塞疾病的个体中的microRNA表达的试剂中的应用，所述改变的microRNA的表达具体是指microRNA-21表达显著增加，microRNA-19a表达显著降低，microRNA-214表达有所增加或microRNA-486-3p表达显著增加。
内皮祖细胞在移植治疗大鼠冠状动脉微栓塞中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及冠状动脉微栓塞的治疗，尤其涉及内皮祖细胞在移植治疗冠状动脉微栓塞中的应用。
背景技术
[0002] 冠状动脉粥样硬化性斑块破裂导致血小板活化、聚集形成血栓，而血栓完全阻塞心外膜较大的冠状导血血管是急性心肌梗死(ami)的重要发病机制，然而破裂的微小粥样硬化性斑块碎片落入远端小血管可直接或继发性造成远端血管阻塞即冠状动脉微栓塞(CME)。
[0003] 在死于缺血性心脏病的患者冠状动脉微循环(多数内径10～100μm)中常可找到微血栓。这种冠状动脉微血栓以血小板聚集、纤维蛋白原和动脉粥样硬化性物质(包括胆固醇结晶)形成为特征，微血栓栓塞的血管周围往往伴随着心肌微梗死和炎症反应。超声心动图检测显示，在直径25μm的彩色微球造成的cme动物模型上心室壁运动减弱，心脏病理标本上亦可见心肌微梗死等。如发生cme则患者预后较差，其近期及远期并发症包括心功能衰竭、致命性心律失常、微小心肌的梗死。其原因可能与斑块破裂、急性期微血管的炎症反应及慢性期的心脏重塑有关。
[0004] 目前尚缺乏针对冠状动脉微栓塞的有效治疗手段。本发明通过大量的实验为冠状动脉微栓塞的治疗提供有效途径。
发明内容
[0005] 本发明提供了有效量的内皮祖细胞在制备移植治疗冠状动脉微栓塞疾病的药物中的应用。
[0006] 优选地，所述内皮祖细胞的有效量为低剂量。
[0007] 优选地，其中治疗大鼠冠状动脉微栓塞疾病时，所述低剂量为2×105个内皮祖细胞。
[0008] 进一步地，所述药物能够显著降低血清cTNI以及vWF含量。
[0009] 进一步地，所述药物能够显著增加心肌组织VEGF和F8的表达，降低心肌组织bFGF的表达。
[0010] 进一步地，所述药物能够使microRNA-21表达显著增加，microRNA-19a表达显著降低，microRNA-214表达有所增加，microRNA-486-3p表达显著增加。
[0011] 本发明还提供一种用于移植治疗冠状动脉微栓塞疾病的药物，其特征在于：所述药物包含有效量的适合移植治疗冠状动脉微栓塞疾病的内皮祖细胞。
[0012] 优选地，其中所述内皮祖细胞的有效量为低剂量。
[0013] 优选地，其中治疗大鼠冠状动脉微栓塞疾病时，所述低剂量为2×105个内皮祖细胞。
[0014] 本发明还提供了有效量的内皮祖细胞在制备改变患有冠状动脉微栓塞疾病的个体中的microRNA表达的试剂中的应用，所述改变的microRNA的表达具体是指microRNA-21表达显著增加，microRNA-19a表达显著降低，microRNA-214表达有所增加或microRNA-486-3p表达显著增加。
[0015] 本发明具有以下积极效果：
[0016] 1.本发明证实了内皮祖细胞尤其是低剂量的内皮祖细胞的移植对于冠状动脉微栓塞疾病的显著疗效，为冠状动脉微栓塞疾病的治疗提供了新思路。
[0017] 2.本发明进一步证实了内皮祖细胞对于冠状动脉微栓塞疾病治疗的机制，包括对于心肌组织中VEGF、bFGF和F8表达水平的影响，对于心脏组织microRNA-21、microRNA-19a、microRNA-214和microRNA-486-3p表达的影响，为深入阐述冠状动脉微栓塞的发病机理提供了依据。附图说明
[0018] 图1为EPC细胞形态观察。
[0019] 图2为流式检测EPC表面标记物CD34-FITC和VEGFR2-PE比例。
[0020] 图3为各组大鼠超声心动检测结果。注：Sham表示假手术组；CME表示冠脉微栓塞组；CME+EPC(low)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(低剂量组)；CME+EPC(high)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(高剂量组)。Before表示手术前，1d表示手术后1d，7d表示手术后7d，28d表示手术后28d。
[0021] 图4为标准曲线。
[0022] 图5为各组大鼠血清ELISA检测。注：Sham表示假手术组；CME表示冠脉微栓塞组；CME+EPC(low)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(低剂量组)；CME+EPC(high)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(高剂量组)。Before表示手术前，after表示术后28d。
[0023] 图6为各组大鼠心脏组织VEGF免疫组化检测。注：Sham表示假手术组；CME表示冠脉微栓塞组；CME+EPC(low)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(低剂量组)；CME+EPC(high)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(高剂量组)。
[0024] 图7为各组大鼠心肌组织bFGF免疫组化染色观察。注：Sham表示假手术组；CME表示冠脉微栓塞组；CME+EPC(low)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(低剂量组)；CME+EPC(high)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(高剂量组)。
[0025] 图8为各组大鼠心肌组织F8免疫组化染色观察。注：Sham表示假手术组；CME表示冠脉微栓塞组；CME+EPC(low)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(低剂量组)；CME+EPC(high)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(高剂量组)。
[0026] 图9为各组大鼠心肌组织HE染色观察。注：Sham表示假手术组；CME表示冠脉微栓塞组；CME+EPC(low)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(低剂量组)；CME+EPC(high)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(高剂量组)。
[0027] 图10为各组大鼠心肌组织masson染色观察。注：Sham表示假手术组；CME表示冠脉微栓塞组；CME+EPC(low)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(低剂量组)；CME+EPC(high)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(高剂量组)。
[0028] 图11为各组大鼠心脏组织microRNA检测。注：Sham表示假手术组；CME表示冠脉微栓塞组；CME+EPC(low)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(低剂量组)；CME+EPC(high)表示冠脉微栓塞&EPC移植组(高剂量组)。
具体实施方式
[0030] 实施例1：EPC的分离培养鉴定
[0031] 1、EPCs的提取
[0032] 1)取SD大鼠，质量200～250g，鼠龄8～9周，称重，用5％的水合氯醛腹腔麻醉(0.6mL/100g)后，用电动剃毛器将大鼠腿部毛发去除。将大鼠俯卧位固定，脱毛、碘伏酒精消毒、铺巾。用剪刀取下SD大鼠的两条腿。所有手术操作均由同一人完成，目的是减少手术过程中可能带来的不必要的误差。
[0033] 2)将取下来的两条腿粗略的骨肉分离放入装有75％无水乙醇的50mL离心管中，然后将离心管放在传递舱紫外消毒10min。
[0034] 3)将消毒过的离心管拿到超净台，取出两条腿，用消毒过的镊子和小剪刀分离股骨和胫骨，并用咬骨钳剪开股骨和胫骨的两端。
[0035] 4)用无菌的1×PBS冲出股骨和胫骨内的骨髓，将含有骨髓的1×PBS逐滴加入等量的分离液(4.5mLPercoll与0.5mL8.5％氯化钠溶液混匀后弃0.2mL混合液，加入3.8mL0.85％氯化钠溶液)中，2000rpm/min离心20min。
[0037] 6)弃上清，加入4mL1×PBS混匀后，2000rpm/min离心20min。
[0038] 7)弃上清，加入1mLEGM-2培养基重悬浮后用吸管滴加到无菌培养瓶中，加入3mLEGM-2培养基在细胞培养箱中培养。
[0039] 8)将所提取的细胞连续纯化即可用于鉴定和后续实验。
[0040] 2、EPC细胞鉴定
[0042] 2)用吸管轻轻吹打，使贴壁细胞充分悬浮并吹散细胞团；
[0043] 3)离心，PBS洗涤细胞2次，重悬细胞，取100μL分别放置于流式管A管和B管中，A管中分别加入抗CD34-FITC流式抗体及抗VEGFR2-PE流式抗体，B管中分别加入同型对照抗体，常温下避光孵育30min；
[0044] 4)离心，弃去上清，加PBS于流式管中混匀，2000rpm离心5min，重复一次，洗掉未结合抗体。并以500μL PBS重悬细胞后4℃保存，待上机检测。
[0045] 3、结果分析
[0046] (1)EPC细胞鉴定
[0047] 图1是显微镜下EPC细胞形态。从图中可知，显微镜下细胞有血管样结构，细胞收缩、变圆，需后续流式进一步鉴定。
[0048] 图2是流式检测EPC细胞表面标记物CD34-FITC和VEGFR2-PE比例。从图中可知CD34-FITC单标阳性比例为99.95％，VEGFR2-PE单标阳性比例为99.71％，CD34-FITC和VEGFR2-PE双标阳性比例为98.96％。结果表明，CD34-FITC和VEGFR2-PE呈阳性表达，分离培养所得的细胞为EPC细胞，可用于后续实验。
[0049] 实施例2：大鼠冠状动脉微栓塞模型建立
[0050] 本实施例建立大鼠冠状动脉微栓塞模型：
[0051] 1、实验分组
[0052] 1)假手术组(Sham)
[0053] 2)冠脉微栓塞组(CME)
[0054] 3)冠脉微栓塞(CME)&EPC移植组(低剂量组)
[0055] 4)冠脉微栓塞(CME)&EPC移植组(高剂量组)
[0056] 2、动物建模
[0057] 术前紫外照射手术操作间半小时，10％三氯乙醛按3μL/g的剂量麻醉大鼠，待大鼠麻倒后尾静脉采血0.5mL，于37℃温箱内形成血凝块。鼠尾电凝止血，胸部剃毛，气管插管，接呼吸机，呼吸比为1:2，潮气量18，大鼠呼吸节奏与呼吸机一致表明插管正确。之后用匀浆器充分研碎血凝块后过300目筛网，滤掉较大血块得到微血栓备用。碘伏消毒大鼠胸部，靠胸部左侧依次用剪刀开皮肤、肌肉、肋骨，暴露心脏，找到左心室用胰岛素注射针注入300μL微血栓。挤出胸部空气，关胸，逐层缝合肌肉、皮肤，再次碘伏消毒伤口，之后皮下注射适量青霉素防止伤口感染。待老鼠有知觉后，脱离呼吸机自主呼吸。假手术组左心室注入0.3mL PBS，EPC低剂量组在300μL微血栓混悬液中溶入2×105的EPCs，EPC高剂量组在300μL微血栓混悬液中溶入2×106的EPCs。手术结束后，各组大鼠正常饲养。
[0058] 3、超声心动图检测
[0059] 在手术前、手术后1、7天，检测大鼠心脏功能的变化，具体步骤如下：
[0060] 1)大鼠麻醉；
[0061] 2)用3％戊巴比妥钠，将大鼠按照0.25mL/只的剂量，进行腹腔注射麻醉；
[0062] 3)麻醉后，按照75～100mg/kg(ip)的剂量补充氯胺酮，持续麻醉；
[0063] 4)然后注射阿托品20～30μg/kg，注射于腹腔，减少气道分泌物；
[0065] 6)将大鼠放置在操作台上，上机检测；
[0066] 7)收集3个连续的心动周期内左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末径(LVESD)、左心室舒张末径(LVEDD)及短轴缩短率(LVFS)。
[0067] 4、ELISA检测
[0068] 实验原理：
[0069] 将心肌肌钙蛋白I(TNNI3)抗体(血管性血友病因子(vWF)抗体)包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的心肌肌钙蛋白I(TNNI3)抗体(血管性血友病因子(vWF))与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的心肌肌钙蛋白I(TNNI3)抗体(血管性血友病因子(vWF)抗体)，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的心肌肌钙蛋白I(TNNI3)抗体(血管性血友病因子(vWF))呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
[0070] ELISA检测：
[0071] 1)实验前标准品、试剂及样本的准备；
[0072] 2)加样(标准品及样本)100μL，37℃孵育1h；
[0073] 3)吸弃，加检测溶液A100μL，37℃孵育1h；
[0074] 4)洗板3次；
[0075] 5)加检测溶液B100μL，37℃孵育30min；
[0076] 6)洗板5次；
[0077] 7)加TMB底物90μL，37℃孵育10-20min；
[0078] 8)加终止液50μL，立即450nm读数。
[0079] 5、结果分析
[0080] 图3为各组大鼠超声心动检测结果。结果可见，术前各组大鼠LVEDD、LVESD、LVEF和LVFS指标均无明显差异，术后LVEDD在各组均仍未有明显差异。与假手术组相比，LVESD显著增加，LVEF和LVFS略有降低。经过EPC移植后，LVESD显著降低，LVEF和LVFS略有增加，其中低剂量组效果较为明显。
[0081] 图4为标准曲线，图5为各组大鼠血清ELISA检测。结果可见，术前各组大鼠血清cTNI以及vWF均无明显差异，术后cTNI以及vWF在各组均有明显差异。与假手术组相比，CME组大鼠血清cTNI以及vWF含量有所增加。经过EPC移植后，大鼠血清cTNI以及vWF含量均有所降低，其中低剂量组效果较为明显。
[0082] 实施例3：EPC移植治疗大鼠冠状动脉微栓塞的作用检测
[0083] 1、实验分组：同实施例2相同。
[0084] 2、动物建模：同实施例2相同。
[0085] 3免疫组化检测
[0086] 3.1预处理
[0087] 石蜡切片：按常规方法进行脱蜡，水合，将切片用二甲苯浸泡5min，更换二甲苯后再浸泡5min；分别用无水乙醇中浸泡5min；95％乙醇中浸泡5min；85％乙醇中浸泡5min；70％乙醇中浸泡5min，蒸馏水浸洗3min×3次。
[0088] 3.2实验步骤
[0089] 1)切片37℃烤过夜；
[0090] 2)二甲苯1，2，3各10min，乙醇100％，95％，90％，80％，70％，50％各2min，蒸馏水1min；
[0091] 3)TBS洗3次，每次5min；
[0092] 4)抗原修复(高火至沸，转为低火20min)，自然冷却；
[0093] 5)TBS洗3次，每次5min；
[0094] 6)切片放入3％H2O2溶液，室温孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶；
[0095] 7)TBS洗3次，每次5min，甩干后5％BSA封闭20min；
[0096] 8)去除BSA液，每张切片加入50μL稀释的一抗覆盖组织(VEGF 1：200，bFGF1：100，F81：150)，4℃过夜；
[0097] 9)TBS洗3次，每次5min；
[0098] 10)去除PBS液，每张切片加50-100μL相应种属的二抗，室温孵育50min；
[0099] 11)TBS洗3次，每次5min；
[0100] 12)去除TBS液，每张切片加50-100μL新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色，用蒸馏水冲洗；
[0101] 13)苏木素染色25s，用自来水流水冲洗3-5min返蓝；
[0102] 14)用蒸馏水洗1min，然后50％，70％，80％，90％，100％浸泡1min，二甲苯1，2浸泡几分钟，晾干，滴加中性树胶，封片。
[0103] 4、HE检测
[0104] 4.1预处理
[0105] 石蜡切片：按常规方法进行脱蜡，水合，将切片用二甲苯浸泡5min，更换二甲苯后再浸泡5min；分别用无水乙醇中浸泡5min；95％乙醇中浸泡5min；85％乙醇中浸泡5min；70％乙醇中浸泡5min，蒸馏水浸洗3min×3次。
[0106] 4.2实验步骤
[0107] 1)苏木素染色：将已入蒸馏水后的切片放入苏木素水溶液中染色5min，1％盐酸乙醇中分色1s。流水冲洗，自然水返蓝20min。
[0108] 2)伊红染色：加入伊红染色液染色1min，流水冲洗冲洗干净。
[0109] 3)透明和封片：将玻片置于二甲苯中透明3min×2次，中性树胶封片。
[0110] 4)图像采集和分析：通过显微镜拍照，采集分析样本相关部位。
[0111] 5Masson检测
[0112] 5.1预处理
[0113] 石蜡切片：按常规方法进行脱蜡，水合，将切片用二甲苯浸泡5min，更换二甲苯后再浸泡5min；分别用无水乙醇中浸泡5min；95％乙醇中浸泡5min；85％乙醇中浸泡5min；70％乙醇中浸泡5min，蒸馏水浸洗3min×3次。
[0114] 5.2实验步骤
[0115] 1)苏木素染色5min，用蒸馏水冲洗干净；
[0116] 2)0.1％HCl分化，自来水冲洗后返蓝；
[0117] 3)丽春红酸性复红染色液染色5min，蒸馏水稍冲洗；
[0118] 4)1％磷钼酸水溶液处理50s；
[0120] 6)晾干后在切片上加中性树胶，加盖玻片；
[0121] 7)显微镜观察，拍照。
[0122] 6荧光定量PCR
[0123] 6.1总RNA抽提(枪头和离心管均经过湿热灭菌，无RNA酶)
[0124] 1)取匀浆器，加入1mL的Trizol Reagent，置冰上预冷。
[0125] 2)取100mg组织，加入到匀浆器中。
[0127] 4)12000rpm离心10min取上清。
[0128] 5)加入250μL三氯甲烷，颠倒离心管15s，充分混匀，静置3min。
[0129] 6)4℃下12000rpm离心10min。
[0130] 7)将上清转移到一新的离心管中，加入0.8倍体积的异丙醇，颠倒混匀。
[0131] 8)-20℃放置15min。
[0132] 9)4℃下12000rpm离心10min，管底的白色沉淀即为RNA。
[0133] 10)吸除液体，加入75％乙醇1.5mL洗涤沉淀。
[0134] 11)4℃下12000rpm离心5min。
[0135] 12)将液体吸除干净，将离心管置于超净台上吹3min。
[0136] 13)加入15μL无RNA酶的水溶解RNA。
[0137] 14)55℃孵育5min。
[0139] 16)将浓度过高的RNA进行适当比例的稀释，使其终浓度为200ng/μL左右。
[0140] 6.2反转录(枪头和PCR均经过湿热灭菌，无RNA酶)
[0141] 1)取一PCR管，加入含2μg RNA的溶液。
[0142] 2)加入1μL RT-PCR颈环引物。
[0143] 3)用无核糖核酸酶的去离子水补足至12μL。
[0144] 4)于PCR仪上65℃保温5min，迅速置冰上冷却。
[0145] 5)依次加入4μL5×buffer，2μL10mMdNTPs，1μL RNA inhibitor和1μL反转录酶，用枪抽吸混匀。
[0146] 6)于PCR仪上42℃保温60min，结束后80℃保温5min灭活反转录酶。
[0147] 6.3定量PCR
[0148] 1)取0.2mL PCR管，配制如下反应体系，每个反转录产物配制3管。
[0149]
[0150] 2)PCR扩增
[0151]
[0152] 6.4引物序列
[0154]
[0155] 7、结果分析
[0156] 7.1免疫组化检测结果
[0157] 图6为各组大鼠心肌组织VEGF免疫组化染色观察。结果可见，与假手术组相比，CME组心肌组织VEGF表达明显减少。与CME组相比，低剂量EPC移植组心肌组织VEGF表达明显增加。高剂量EPC移植组心肌组织VEGF表达无明显改变。
[0158] 图7为各组大鼠心肌组织bFGF免疫组化染色观察。结果可见，与假手术组相比，CME组心肌组织bFGF表达明显增加。与CME组相比，低剂量EPC移植组心肌组织FGF表达明显降低。高剂量EPC移植组心肌组织bFGF表达略有降低。
[0159] 图8为各组大鼠心肌组织F8免疫组化染色观察。结果可见，与假手术组相比，CME组心肌组织F8表达明显减少。与CME组相比，低剂量EPC移植组心肌组织F8表达明显增加。高剂量EPC移植组心肌组织F8表达无明显改变。
[0160] 结果提示低剂量EPC移植能增加内皮细胞生长因子VEGF和毛细血管的生成，抑制成纤维细胞生长因子bFGF。
[0161] 7.2HE检测结果
[0162] 图9为各组大鼠心肌组织HE染色观察。结果可见，假手术组心肌细胞排列整齐，间质无水肿。CME组心肌细胞排列紊乱，间质水肿、增大，出现部分梗死病灶，HE表现为深染，出现炎细胞浸润。低剂量EPC移植组心肌细胞排列整齐，间质无水肿，病灶基本消失，无明显炎细胞浸润。高剂量EPC移植组心肌病理状态比模型组无明显改善。结果提示低剂量EPC移植能缓解CME引起的心肌组织病变。
[0163] 7.3Masson检测结果
[0164] 图10为各组大鼠心肌组织masson染色观察。胶原纤维呈蓝色，心肌细胞呈红色。结果可见，假手术组心肌细胞排列整齐，无明显胶原纤维。CME组心肌细胞排列紊乱，胶原纤维明显增生。低剂量EPC移植组心肌细胞排列较为整齐，与CME组相比，胶原纤维增生情况明显改善。高剂量EPC移植组心肌细胞排列仍较为紊乱，胶原增生情况较为严重。结果提示低剂量EPC移植能缓解CME引起的心肌组织胶原纤维增生。
[0165] 7.4PCR检测结果
[0166] 图11为各组大鼠心脏组织microRNA检测。结果可见，与假手术组相比，CME组大鼠心脏组织microRNA-21表达显著降低，microRNA-19a表达显著增加，microRNA-214表达有所降低，microRNA-486-3p表达显著降低。经过EPC移植后，低剂量组大鼠心脏组织microRNA-21表达显著增加，microRNA-19a表达显著降低，microRNA-214表达有所增加，microRNA-
486-3p表达显著增加；高剂量组大鼠心脏组织microRNA-21表达无明显变化，microRNA-19a表达有所降低，microRNA-214表达无明显变化，microRNA-486-3p表达有所增加。结果提示，EPC低剂量组对大鼠CME损伤引起的microRNA表达变化改善较为明显。
486-3p表达显著增加；高剂量组大鼠心脏组织microRNA-21表达无明显变化，microRNA-19a表达有所降低，microRNA-214表达无明显变化，microRNA-486-3p表达有所增加。结果提示，EPC低剂量组对大鼠CME损伤引起的microRNA表达变化改善较为明显。
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