利用酶联免疫斑点法的结核效应T淋巴细胞检测方法
专利汇可以提供利用酶联免疫斑点法的结核效应T淋巴细胞检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且利用酶联免疫斑点法的结核效应T淋巴细胞检测方法，步骤包括：采集肝素锂抗凝外周血；离心后，吸取中间 云 雾状的单个核细胞层到离心管；离心后，弃去上清液，加入RPMI1640离心；弃去上清液，加入AIM-V培养液；制备稀释细胞工作液：向培养板中加入AIM-V培养液、 抗原 A、抗原B、阳性对照；用无菌PBS洗涤4遍，再以蒸馏 水 冲洗终止反应，放室温干燥培养板，用放大镜观察结果，进行斑点计数。本 发明 通过离心吸取红细胞与 血浆 之间的白细胞层提高淋巴细胞的数量，从而对抗凝 全血 中单个核细胞的收集做到最大效应的收集，显著提高了结核筛查的临床诊断应用效率和范围。，下面是利用酶联免疫斑点法的结核效应T淋巴细胞检测方法专利的具体信息内容。
1.利用酶联免疫斑点法的结核效应T淋巴细胞检测方法，其特征在于，步骤包括：
A．采集肝素锂抗凝外周血4-8ml，在1600-1800r/min离心28-30min；向装有平衡至室温的4ml的RPMI1640的15ml离心管中倒入4ml肝素锂抗凝外周血，混匀；按照2-3:1的比例小心将上述血样加在4ml的Ficoll淋巴细胞分离液上层，确保上述血样与所述Ficoll淋巴细胞分离液不混合；然后在18℃以2280r/min离心22min；
B．离心后，吸取中间云雾状的单个核细胞层到15ml离心管中，加入RPMI1640至10ml，混匀，在18℃以1780r/min离心7min；
C．离心后，弃去上清液，加入1ml的RPMI1640轻缓重旋沉淀，再加入RPMI1640至10ml，混匀，在18℃以1350r/min离心7min；
D．离心后，弃去上清液，加入0.5-1ml的AIM-V培养液轻缓重旋沉淀制成样品细胞悬液；
E．制备稀释细胞工作液：
在1.5ml离心管中加入10μl样品细胞悬液和40μl的0.4%的台酚兰，混匀，取10μl台酚兰和样品细胞悬液的混合物加入血细胞计数板中计算每ml的样品细胞悬液的细胞数量，计数4×4大格含0.1μl样品；
然后计算细胞稀释需要的体积，并加入AIM-V无血清培养液；
-5
按照公式：需要的样品细胞悬液量=（每个培养孔需要加入的细胞数量×10 ×需要-6
使用的稀释细胞工作液量）/（每ml的样品细胞悬液的细胞数量×10 ）；
4
每ml的样品细胞悬液的细胞数量=细胞计数×稀释倍数×10 ；
需要使用的稀释细胞工作液量=需加入的孔位数×100μl＋100μl；
AIM-V无血清培养液量=需要使用的稀释细胞工作液量-需要的样品细胞悬液量；
F．向培养板中加入AIM-V培养液、抗原A、抗原B、阳性对照各50μl至培养板中的阴性对照孔、抗原A孔、抗原B孔、阳性对照孔中，再往上面4孔中分别加入100μl稀释细胞工作液，放在37℃的CO2培养箱孵育16-20h；
G.试剂平衡至室温，用无菌PBS按1:200配制酶标抗体工作液，现配现用，即酶标抗体工作液=需要的孔位数×50μl＋100μl；
H.取出培养板，弃去孔内液体，用200μl新鲜准备的无菌PBS洗涤4遍，每洗完一次用拍板纸拍干，用加入50μl新鲜配制的酶标抗体工作液，将培养板放2-8℃冰箱孵育1h；
I.取出培养板，用200μl新鲜准备的无菌PBS洗涤4遍，每洗完一次用拍板纸拍干，每孔加入底物工作液50μl，室温避光反应7min，再以蒸馏水冲洗终止反应，放室温干燥培养板，用放大镜观察结果，进行斑点计数。
利用酶联免疫斑点法的结核效应T淋巴细胞检测方法
技术领域
背景技术
10ml，混匀，在18℃以1780r/min离心7min；
具体实施方式
样品细胞悬液的细胞数量是4.16×10 个/ml，则需要的样品细胞悬液量=（2.5×0.5ml）/4.16=0.3ml=300μl。需要加入的AIM-V无血清培养液为500μl-300μl=200μl，制备成浓度250,000/100μl的稀释细胞工作液。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| NKT细胞培养基、培养方法及二者的应用 | 2020-05-17 | 838 |
| 一种基于形态学分类计数白细胞的方法 | 2020-05-12 | 380 |
| 血液测试鉴别疾病使用的保藏非传染性对照细胞 | 2020-05-25 | 822 |
| NK细胞的分离培养及保存入库的方法 | 2020-05-20 | 78 |
| 一种体外扩增自然杀伤细胞的方法 | 2020-05-22 | 448 |
| 一种免疫细胞的分离方法及其应用 | 2020-05-14 | 257 |
| NK细胞培养基、培养方法及二者的应用 | 2020-05-17 | 615 |
| 一种对血液显微图像中白细胞个数自动计数方法 | 2020-05-18 | 516 |
| 一种人参提取物GQR1应用于肿瘤细胞的操作方法 | 2020-05-16 | 36 |
| 血小板产品的制备和用途 | 2020-05-18 | 71 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
