石莲花多糖抗凝血与抗血栓功能
专利汇可以提供石莲花多糖抗凝血与抗血栓功能专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 的石莲花多糖(EGP)具有抗凝血、抗血栓的功能。①抗凝作用。体外可显著延长混合人 血浆 的凝血时间和凝血酶元时间，灌胃 给药 ：50mg/kg，小鼠凝血时间延长31g％；37mg/kg，家兔凝血酶元时间延长40％。②抗血栓作用：灌胃给药37mg/kg，可抑制家兔实验性血栓形成，血栓形成时间明显延长，血栓长度缩短，血小板数减少20％，血小板粘附率降低43％， 全血 粘度 及血浆粘度分别降低16％和11％， 红细胞压积 降低20％，血沉增加75％，灌胃给药40mg/kg，豚鼠 纤维 蛋白溶解酶活动增加77％。由此可见，本发明产品具有予防与 治疗 心脑 血管 疾病 的功能，适用于中药与保健食品厂家生产。，下面是石莲花多糖抗凝血与抗血栓功能专利的具体信息内容。
石莲花多糖抗凝血与抗血栓功能
石莲花多糖(参见中国专利申请号00133666.5其缩写号是EGP)提取方法参考原专利，现将实验材料、方法、结果以及实施例列于后。
1.实验材料1.1仪器：体外血栓形成及血小板粘附两用仪，NSN-R II型，自动电子计时粘度计，SDZ-3型。
1.2动物：ICR种小鼠，体重20±2g；日本种大耳白兔，体重2.0±0.5kg；豚鼠，体重400±50g。均由北京大学动物学部供应。
2.方法与结果2.1抗凝血作用2.1.1对小鼠血凝的影响：实施例1取小鼠，雌雄各半，随机分成给药组和对照组。灌胃后30min自内眦以毛细玻璃管取血，每隔30s折断一次，直至出现血丝为止，记录凝血时间。结果表明，灌胃给药50mg/kgCPS，可使小鼠血凝时间延长319％。(表2.1-1)表2.1-1 EGP对小鼠血凝时间的影响( X±SD)
2.1.2体外抗凝血作用：实施例2在混合人血浆中加入不同的EGP，37℃孵育10min，作复钙时间测定。(混合血浆为枸橼酸钠抗凝的正常人新鲜血浆。)由表2可知，0.05mg的EGP即可延长复钙时间，0.4mg可以完全抑制血浆凝固。(表2.1-2)表2.1-2 EGP对混合人血浆凝固时间的影响( X±SD)
*为10次测定平均值**表示观察4h(下同)2.1.3对凝血酶元时间的影响：实施例3给药前自兔心脏取血1.8ml，以3000r/min离心10min，分离血浆，4℃冰箱保存。灌胃给药后2.5h再自兔心脏取血1.8ml，按上法制备血浆。在放有凝血活酶和25mmol/L氯化钙溶液各0.1ml的试管中加入血浆0.1ml，立刻计时，观察凝固膜出现。结果表明：灌胃EGP 37mg/kg，家兔凝血酶元时间由给药前9.46±0.79延长到13.3±0.50(s)，延长40％(P＜0.01)。
2.1.4体外对凝血酶元时间的影响：实施例4向混合人血浆中加入不同量的EGP，37℃孵育10min，作凝血酶元时间测定，表2.1-3表明：0.1mgEGP能够明显延长凝血酶元时间；0.4mg能使血浆在4h内不凝固。
表2.1-3 EGP对混合人血浆凝血酶元时间的影响( X±SD)
2.1.5对部分凝血活酶时间的影响：实施例5给药前自兔心脏取血1.8ml，制备血浆。在已含有白陶土部分凝血活酶试液0.1ml的试管中加入血浆0.1ml，37℃水浴孵育3min后加入25mmol/L氯化钙溶液0.1ml，立即计时，直至白陶土颗料聚集变粗。给药后3h再取血制备血浆，测定部分凝血活酶时间。结果表明：EGP对家兔部分凝血活酶时间给药前为25.0±2.9，给药后为28.7±2.9，作用不明显(p＞0.05)。
3.抗血栓作用3.1对优球蛋白溶解时间的影响：实施例6取试管置于冰浴中，每管加入3.8％枸橼酸钠0.3ml，给药前及给药后30min，分别自豚鼠心脏取血2.7ml加入试管中，3000r/min离心10min，分离血浆。取血浆0.5ml，加入9.0ml蒸馏水和1％的醋酸溶液0.1ml，放入4℃冰箱。30min后再以3000r/min离心15min，沉淀物加入硼酸钠缓冲液(pH9.0)0.5ml使之溶解，该时间为优球蛋白溶解时间。实验表明：豚鼠口服CPS40mg/kg，其优球蛋白溶解时间较给药前缩短43.6％。按照Memon等人的方法由下式将优球蛋白溶解时间换算成纤维蛋白溶解酶活力单位。纤维蛋白溶解酶活力(u)＝10000/优溶期(min)。结果表明：纤维蛋白溶解酶活力增加了77％。(表3.1-1)表3.1-1EGP对豚鼠优球蛋白溶解时间及纤维蛋白溶解酶活力的影响( X±SD)
与给药前比较，**p＜0.053.2对实验性血栓形成的影响：实施例7取家兔，按改良Chandler法给药前及给药后3h分别用硅化的注射器心脏取血1.8ml，立即注入血栓形成仪的旋转环内(该过程应控制在90s内)，以17±1r/min转动，恒温37℃。
当血栓开始形成时，血栓由于遇到阻力而形成一定的角度，当血栓的阻力增大到随环运动时，该时间称为纤维蛋白血栓形成时间(TFT)。15min后停止转动，倾出血栓，量其长度，结果(表3.1-2)EGP可缩短家兔实验性血栓长度，明显延长TFT。
3.3对血小板数的影响：实施例8给药前和给药后3h分别自兔心脏取血，用血色素吸管吸血10μl于放有2.0ml稀释液(尿素10.0g、枸橼酸钠0.5、甲醛0.1ml、蒸馏水加至100ml)的试管中混匀后观察并计算血小板数，结果(表3.1-2)血小板数减少20％。
3.4对血小板粘附率的影响：实施例9取家兔，给药前及给药后3h分别用硅化注射器心脏取血1.8ml，立即注入已有38％枸橼酸钠溶液0.2ml的硅烷化试管中，摇匀。取出1.0ml至容量为8.0ml的长颈圆瓶中，置于NSN-RII型体外血栓形成仪及血小板粘附两用仪的转盘上，在37±1℃下以3.7r/min的速率旋转15min，血小板计数。计算血小板粘附率，结果(表3.1-2)：灌胃37mg/kg，可使家兔血小板粘附率显著降低。
3.5对血液粘度的影响：实施例10给药前及给药后3h各自健康家兔心脏血2.0ml，加至放有3.8％枸橼酸钠0.2ml的试管中混匀，置25℃水浴供测定用。
全血比粘度：取抗凝血液，以3000r/min离心10min，取血浆同上法测定血浆比粘度。
血球沉降率：采用Wintrobe法，取全血于压积管中以3000r/min离心20min后测定。结果(表3.1-2)灌胃37mg/kg，可使家兔全血比粘度、血浆比粘度分别降低16％和11％，红细胞压积降低20％、血沉增加75％。
表3.1-2 EGP对家兔实验性血栓长度、血栓形成时间、血小板数、血小板粘附率、全血比粘度、血浆比粘度、红细胞压积和血沉的影响( X±SD)
动物数为6，Po给药，剂量37mg/kg，与给药前值比较**p＜0.05***p＜0.01，以上抗血栓部分兔子试验均同时进行。
4.实验结果本发明EGP具有抗凝血及抗血栓作用。EGP体内、体外均可显著延长血凝时间，并延长凝血酶元时间，但不影响部分凝血活酶时间，推测其主要是通过外源性凝血系统起作用。
用Chandler法形成的血栓，组织学上类似于人体动脉血栓，实验表明，EGP可显著延长血栓形成时间，缩短血栓长度，从而起到抗血栓的药理作用。血栓形成主要包括三个阶段：(1)血小板粘附和聚集(2)血液凝固(3)维纤蛋白溶解。EGP能明显抑制血小板的粘附作用，并降低血液粘度，后者也直接影响到血栓形成的第一阶段；EGP在体内、体外均有显著的抗凝作用，并能减少血小板数。血小板的减少将延长血凝时间，从而也影响到血栓的形成。但对正常人来说，血小板过多的下降将会影响到伤口血凝时间，在正常的给药剂量下(见权利要求3)不会出现上述情况。另外，EGP能提高纤维蛋白溶解酶活力。由此可见，EGP可能作用于血栓形成的所有环节。
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