燕子掌多糖抗凝血与抗血栓功能
专利汇可以提供燕子掌多糖抗凝血与抗血栓功能专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 的燕子掌多糖具有抗凝血、抗血栓的功能。①抗凝作用。体外可显著延长混合人 血浆 的凝血时间和凝血酶元时间，灌胃 给药 ：50mg/kg，小鼠凝血时间延长31g％；37mg/kg，家兔凝血酶元时间延长40％。②抗血栓作用：灌胃给药37mg/kg，可抑制家兔实验性血栓形成，血栓形成时间明显延长，血栓长度缩短，血小板数减少20％，血小板粘附率降低43％， 全血 粘度 及血浆粘度分别降低16％和11％， 红细胞压积 降低20％，血沉增加75％，灌胃给药40mg/kg，豚鼠 纤维 蛋白溶解酶活动增加77％。由此可见，本发明产品具有予防与 治疗 心脑 血管 疾病 的功能，适用于中药与保健食品厂家生产。，下面是燕子掌多糖抗凝血与抗血栓功能专利的具体信息内容。
燕子掌多糖(Crassula argentea polgsaccharide缩写成CPS，见中国专 利申请号97112555.4)提取方法参考原专利，现将实验材料、方法、结果 以及实施例列于后。
1.实验材料
1.1仪器：体外血栓形成及血小板粘附两用仪，NSN-R II型，自动电 子计时粘度计，SDZ-3型。
1.2动物：ICR种小鼠，体重20±2g；日本种大耳白兔，体重2.0±0.5kg； 豚鼠，体重400±50g。均由北京大学动物学部供应。
2.方法与结果
2.1抗凝血作用
2.1.1对小鼠血凝的影响：实施例1取小鼠，雌雄各半，随机分成给 药组和对照组。灌胃后30min自内眦以毛细玻璃管取血，每隔30s折断一 次，直至出现血丝为止，记录凝血时间。结果表明，灌胃给药50mg/kgCPS， 可使小鼠血凝时间延长319％。(表2.1-1)
表2.1-1 CPS对小鼠血凝时间的影响( X±SD) 组别 给药途径 剂量 (mg/kg) 动物数 (只) 血凝时间 (min) 增加 (％) 对照组 Po 生理盐水 10 1.18±0.38 CPS Po 50 10 4.95±1.01… 319
2.1.2体外抗凝血作用：实施例2在混合人血浆中加入不同的CPS， 37℃孵育10min，作复钙时间测定。(混合血浆为枸橼酸钠抗凝的正常人新 鲜血浆。)由表2可知，0.05mg的CPS即可延长复钙时间，0.4mg可以完 全抑制血浆凝固。(表2.1-2)
表2.1-2 CPS对混合人血浆凝固时间的影响( X±SD) 混合人血浆 (ml) CPS (mg/0.2ml) CaCl2(ml) (25mmol/L) 凝固时间* (s) 0.2 0.400 0.4 不凝** 0.2 0.200 0.4 200±15.5 0.2 0.100 0.4 125.0±2.8 0.2 0.050 0.4 105.2±1.5 0.2 生理盐水 0.4 100.3±2.2
*为10次测定平均值 **表示观察4h(下同)
2.1.3对凝血酶元时间的影响：实施例3给药前自兔心脏取血1.8ml， 以3000r/min离心10min，分离血浆，4℃冰箱保存。灌胃给药后2.5h再自 兔心脏取血1.8ml，按上法制备血浆。在放有凝血活酶和25mmol/L氯化钙 溶液各0.1ml的试管中加入血浆0.1ml，立刻计时，观察凝固膜出现。结果 表明：灌胃CPS 37mg/kg，家兔凝血酶元时间由给药前9.46±0.79延长到 13.3±0.50(s)，延长40％(P＜0.01)。
2.1.4体外对凝血酶元时间的影响：实施例4向混合人血浆中加入不 同量的CPS，37℃孵育10min，作凝血酶元时间测定，表2.1-3表明：0.1mgCPS 能够明显延长凝血酶元时间；0.4mg能使血浆在4h内不凝固。
表2.1-3 CPS对混合人血浆凝血酶元时间的影响( X±SD) 混合人血浆 (ml) CPS (mg/0.2ml) 凝血活酶 (u) 凝固时间* (s) 0.2 0 400 0.2 不凝** 0.2 0.200 0.2 120.0±13.0 0.2 0.100 0.2 60.0±12.0 0.2 生理盐水 0.2 22.2±1.5
2.1.5对部分凝血活酶时间的影响：实施例5给药前自兔心脏取血 1.8ml，制备血浆。在已含有白陶土部分凝血活酶试液0.1ml的试管中加入 血浆0.1ml，37℃水浴孵育3min后加入25mmol/L氯化钙溶液0.1ml，立即 计时，直至白陶土颗料聚集变粗。给药后3h再取血制备血浆，测定部分凝 血活酶时间。结果表明：CPS对家兔部分凝血活酶时间给药前为25.0± 2.9，给药后为28.7±2.9，作用不明显(p＞0.05)。
3.抗血栓作用
3.1对优球蛋白溶解时间的影响：实施例6取试管置于冰浴中，每管 加入3.8％枸橼酸钠0.3ml，给药前及给药后30min，分别自豚鼠心脏取血 2.7ml加入试管中，3000r/min离心10min，分离血浆。取血浆0.5ml，加入 9.0ml蒸馏水和1％的醋酸溶液0.1ml，放入4℃冰箱。30min后再以3000r/min 离心15min，沉淀物加入硼酸钠缓冲液(pH9.0)0.5ml使之溶解，该时间 为优球蛋白溶解时间。实验表明：豚鼠口服CPS40mg/kg，其优球蛋白溶解 时间较给药前缩短43.6％。按照Memon等人的方法由下式将优球蛋白溶解 时间换算成纤维蛋白溶解酶活力单位。纤维蛋白溶解酶活力(u)＝10000/ 优溶期(min)。结果表明：纤维蛋白溶解酶活力增加了77％。(表3.1-1)
表3.1-1 CPS对豚鼠优球蛋白溶解时间及纤维蛋白溶解酶活力的影响( X±SD) 组别 给药 途径 剂量 (mg/kg) 动物数 (只) 优溶期(min) 纤维蛋白溶解酶活力(u) 给药前 给药后 给药前 给药后 CPS Po 40 6 29.6±8.4 16.7±3.0** 337.8±95.8 598.8±286.8**
与给药前比较，**p＜0.05
3.2对实验性血栓形成的影响：实施例7取家兔，按改良Chandler法 给药前及给药后3h分别用硅化的注射器心脏取血1.8ml，立即注入血栓形 成仪的旋转环内(该过程应控制在90s内)，以17±1r/min转动，恒温37 ℃。
当血栓开始形成时，血栓由于遇到阻力而形成一定的角度，当血栓的 阻力增大到随环运动时，该时间称为纤维蛋白血栓形成时间(TFT)。15min 后停止转动，倾出血栓，量其长度，结果(表3.1-2)CPS可缩短家兔实验 性血栓长度，明显延长TFT。
3.3对血小板数的影响：实施例8给药前和给药后3h分别自兔心脏取 血，用血色素吸管吸血10μl于放有2.0ml稀释液(尿素10.0g、枸橼酸钠 0.5、甲醛0.1ml、蒸馏水加至100ml)的试管中混匀后观察并计算血小板数， 结果(表3.1-2)血小板数减少20％。
3.4对血小板粘附率的影响：实施例9取家兔，给药前及给药后3h分 别用硅化注射器心脏取血1.8ml，立即注入已有38％枸橼酸钠溶液0.2ml的 硅烷化试管中，摇匀。取出1.0ml至容量为8.0ml的长颈圆瓶中，置于NSN-R II型体外血栓形成仪及血小板粘附两用仪的转盘上，在37±1℃下以 3.7r/min的速率旋转15min，血小板计数。计算血小板粘附率，结果(表 3.1-2)：灌胃37mg/kg，可使家兔血小板粘附率显著降低。
3.5对血液粘度的影响：实施例10给药前及给药后3h各自健康家兔 心脏血2.0ml，加至放有3.8％枸橼酸钠0.2ml的试管中混匀，置25℃水浴 供测定用。
全血比粘度：取抗凝血液，以3000r/min离心10min，取血浆同上法测 定血浆比粘度。
血球沉降率：采用Wintrobe法，取全血于压积管中以3000r/min离心 20min后测定。结果(表3.1-2)灌胃37mg/kg，可使家兔全血比粘度、血 浆比粘度分别降低16％和11％，红细胞压积降低20％、血沉增加75％。
表3.1-2CPS对家兔实验性血栓长度、血栓形成时间、血小板数、血小 板粘附率、全血比粘度、血浆比粘度、红细胞压积和血沉的影响( X±SD)
指标 给药前 给药后 血栓长度(cm) 13.60±0.89 11.40±1.19** 血栓形成时间(min) 7.43±0.18 8.18±0.14*** 血小板数(×104/mm2) 46.0±2.7 36.6±4.8** 血小板粘附率(％) 34.35±2.81 19.46±5.87** 全血比粘度 3.42±0.18 2.88±0.10*** 血浆比粘度 1.59±0.11 1.41±0.10** 红细胞压积(mm) 1.20±0.27 2.10±0.14*** 血沉(mm) 33.15±2.97 26.60±3.16**
动物数为6，Po给药，剂量37mg/kg，与给药前值比较**p＜0.05 ***p＜0.01，以上抗血栓部分 兔子试验均同时进行。
4.实验结果
本发明CPS具有抗凝血及抗血栓作用。CPS体内、体外均可显著延长 血凝时间，并延长凝血酶元时间，但不影响部分凝血活酶时间，推测其主 要是通过外源性凝血系统起作用。
用Chandler法形成的血栓，组织学上类似于人体动脉血栓，实验表明， CPS可显著延长血栓形成时间，缩短血栓长度，从而起到抗血栓的药理作 用。血栓形成主要包括三个阶段：(1)血小板粘附和聚集(2)血液凝固 (3)维纤蛋白溶解。CPS能明显抑制血小板的粘附作用，并降低血液粘 度，后者也直接影响到血栓形成的第一阶段；CPS在体内、体外均有显著 的抗凝作用，并能减少血小板数。血小板的减少将延长血凝时间，从而也 影响到血栓的形成。但对正常人来说，血小板过多的下降将会影响到伤口 血凝时间，在正常的给药剂量下(见权利要求3)不会出现上述情况。另外， CPS能提高纤维蛋白溶解酶活力。由此可见，CPS可能作用于血栓形成的 所有环节。
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