技术领域
[0001] 本
发明涉及一种干式电化学法凝血酶原时间检测卡及制备方法，属于
生物检测技术领域。
背景技术
[0002] 凝血酶原时间是指在缺乏血小板的
血浆中加入过量的组织凝血活酶和
钙离子，凝血酶原转化为凝血酶，导致血浆
凝固所需的时间。凝血酶原时间反映了
止血功能强弱，直接用于华法林剂量调整。便携式凝血分析能够将单纯凝血酶原时间检测从医院繁冗的程序操作中解脱出来，减少了等待实验室报告的时间，也缩短了通知患者进行剂量调整的周期，大大方便了患者就医，而且在
质量控制的前提下，能够确保用药安全，具有明显的社会效益。
[0003] 由于便携式凝血分析仪准确迅速检测的优点以及患者测试凝血酶原时间的实际需要，实施商品化凝血酶原时间检测卡的开发设计和生产有着极大的现实意义。临床上凝血酶原时间的检测主要采用全自动或半自动凝血分析仪进行检测，但测定耗时过长、操作复杂繁琐、无法实现快速便捷的检测，标本用量多，受时间、地点限制无法进行即时检测。
发明内容
[0004] 本发明针对
现有技术存在的不足，提供一种干式电化学法凝血酶原时间检测卡及制备方法，标本用量少，简便快速，不受时间、地点限制，适合于即时检测。
[0005] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种干式电化学法凝血酶原时间检测卡，包括亲
水膜层和导电
基板，所述亲水膜层和导电基板之间设有双面胶层；所述导电基板上连接有导电触
角；
[0006] 所述亲水膜层形成有第一加样孔，所述双面胶层形成有第二加样孔，所述第一加样孔和第二加样孔互相连通；所述第二加样孔连通有形成于双面胶层上的进样通道，所述进样通道连通有形成于双面胶层上的测试区；所述测试区
覆盖于所述导电触角的上方。
[0007] 作为干式电化学法凝血酶原时间检测卡的优选方案，所述亲水膜层上端形成有对称设置的透气孔，所述双面胶层的厚度≥0.1μm，双面胶层与亲水膜层通过所述透气孔连通，透气孔的直径≤0.5mm。
[0008] 作为干式电化学法凝血酶原时间检测卡的优选方案，所述亲水膜层采用PET、PC或PMMA材质，亲水膜层的厚度≥0.1μm。
[0009] 作为干式电化学法凝血酶原时间检测卡的优选方案，所述测试区包括点样区和质控区，所述第二加样孔通过所述进样通道连通所述点样区，所述点样区连通所述质控区；所述点样区包括相互连通的第一点样孔和第二点样孔。
[0010] 作为干式电化学法凝血酶原时间检测卡的优选方案，所述第一点样孔的直径小于等于所述第二点样孔的直径，点样孔的直径为2mm～5mm。
[0011] 作为干式电化学法凝血酶原时间检测卡的优选方案，所述第二点样孔的直径大于所述进样通道的宽度，所述进样通道的宽度为0.5mm～3mm。
[0012] 作为干式电化学法凝血酶原时间检测卡的优选方案，所述亲水膜层与双面胶层贴合，双面胶层与导电基板贴合，亲水膜层和双面胶层总厚度与
全血样本用量呈正相关，所述全血样本用量小于15微升，所述导电基板采用PET材质，导电基板厚度不小于0.2μm。
[0013] 作为干式电化学法凝血酶原时间检测卡的优选方案，所述全血样本为指尖血样本及抗凝静脉血样本，抗凝静脉血样本包括枸橼酸钠抗凝及肝素抗凝静脉血。
[0014] 作为干式电化学法凝血酶原时间检测卡的优选方案，所述进样通道至少设有两条分支，进样通道至少连通两组测试区，两组测试区分别用于凝血酶原时间测试和血样
红细胞压积数值测试。
[0015] 本发明
实施例还提供一种干式电化学法凝血酶原时间检测卡制备方法，采用上述的凝血酶原时间检测卡，包括以下步骤：
[0016] (1)点样
试剂配制，配制5％BSA、10％曲拉通X-100、1％
蔗糖溶于0.1M pH为7.5的
柠檬酸钠缓冲液中，搅拌混匀1小时后加入0.1％组织因子，再次混匀1小时后作为试剂一；配制0.2M CaCl2混合1％
硫酸鱼精蛋白作为试剂二；
[0017] (2)将双面胶层贴在导电基板上，将试剂一点在双面胶层的点样区的第一点样孔中，试剂一点样体积为1.5～2.0微升；试剂二点在双面胶层的点样区的第二点样孔中，试剂二点样体积为2.0～2.4微升，点样完成后静置3分钟；
[0018] (3)将点样完成的导电基板放入烘箱中30分钟，控制烘箱
温度45℃；
[0019] (4)将烘干完成的导电基板取出恢复室温后贴上亲水膜层，滚压后进行切条，完成凝血酶原时间检测卡的制备。
[0020] 本发明的有益效果是：实现凝血酶原时间及红细胞压积同时检测，可使用指尖血及静脉血样进行测试，利用在检测卡上滴入全血样本，血样进入进样通道，凝血酶原时间通道中，
血液样本逐步凝固，同时其电导率会随之变化，并导致
电流值发送改变，同时其电导率会随之变化，并导致电流值发送改变，电化学检测仪对这一过程进行测试，进而计算出凝血酶原时间的数值；红细胞压积通道中，不同红细胞压积的血样
电阻值不同，通过对电阻值的计算从而可得出红细胞压积的数值。本发明测试时间短，所用样本量低，方便检测，相对成本较低。
附图说明
[0021] 为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0022] 本
说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。
[0023] 图1为本发明实施例中提供的干式电化学法凝血酶原时间检测卡分解示意图；
[0024] 图2为本发明实施例中提供的干式电化学法凝血酶原时间检测卡亲水膜层示意图；
[0025] 图3为本发明实施例中提供的干式电化学法凝血酶原时间检测卡双面胶层示意图；
[0026] 图4为本发明实施例中提供的干式电化学法凝血酶原时间检测卡导电基板示意图；
[0027] 图5为本发明实施例中提供的干式电化学法凝血酶原时间检测卡点样区截面示意图；
[0028] 图6为本发明实施例中提供的干式电化学法凝血酶原时间检测卡截面示意图；
[0029] 图7为本发明实施例中提供的干式电化学法凝血酶原时间检测卡制备方法
流程图。
[0030] 图中，1、亲水膜层；2、导电基板；3、双面胶层；4、导电触角；5、第一加样孔；6、第二加样孔；7、进样通道；8、测试区；9、透气孔；10、点样区；11、质控区；12、第一点样孔；13、第二点样孔。
具体实施方式
[0031] 为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
[0032] 除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0033] 参见图1、图2、图3、图4、图5和图6，提供一种干式电化学法凝血酶原时间检测卡，包括亲水膜层1和导电基板2，所述亲水膜层1和导电基板2之间设有双面胶层3；所述导电基板2上连接有导电触角4。所述亲水膜层1形成有第一加样孔5，所述双面胶层3形成有第二加样孔6，所述第一加样孔5和第二加样孔6互相连通；所述第二加样孔6连通有形成于双面胶层3上的进样通道7，所述进样通道7连通有形成于双面胶层3上的测试区8；所述测试区8覆盖于所述导电触角4的上方。
[0034] 具体的，本实施例利用在检测卡上滴入全血样本，血液样本逐步凝固，同时其电导率会随之变化，并导致电流值发送改变，同时其电导率会随之变化，并导致电流值发送改变，电化学检测仪对这一过程进行测试，并计算出样本的凝血酶原时间，将结果报告在屏幕上。所述检测卡通过亲水
力、毛细虹吸力驱动样本
流体通过通道。亲水力驱动由亲水膜层1提供，亲水性大小可通过水
接触角表征，通过控制亲水性大小，可控制样本从进入加样孔到开始测试的流速和反应时间。
[0035] 参见图2，干式电化学法凝血酶原时间检测卡的一个实施例中，所述亲水膜层1上端形成有对称设置的透气孔9，所述双面胶层3的厚度≥0.1μm，双面胶层3与亲水膜层1通过所述透气孔9连通，透气孔9的直径≤0.5mm。所述亲水膜层1采用PET、PC或PMMA材质，亲水膜层1的厚度≥0.1μm。所述导电基板2采用PET材质，导电基板2厚度不小于0.2μm。通过将双面胶层3进行加工切割成镂空的特定形状，将上述双面胶层3贴合在导电基板2和亲水膜层1之间形成完整的进样通道7。
[0036] 参见图3，干式电化学法凝血酶原时间检测卡的一个实施例中，所述测试区8包括点样区10和质控区11，所述第二加样孔6通过所述进样通道7连通所述点样区10，所述点样区10连通所述质控区11；所述点样区10包括相互连通的第一点样孔12和第二点样孔13。所述第一点样孔12的直径小于等于所述第二点样孔13的直径，点样孔的直径为2mm～5mm。亲水膜层1上的第一点样孔12与双面胶层3上的第二点样孔13中心
位置一致。所述第二点样孔13的直径大于所述进样通道7的宽度，所述进样通道7的宽度为0.5mm～3mm。
[0037] 具体的,所述进样通道7至少设有两条分支，进样通道7至少连通两组测试区8，两组测试区8分别用于凝血酶原时间测试和血样红细胞压积数值测试。具体的，在点样孔顶端发散出的进样通道7的分支数目，以及进样通道7上圆形的测试区8数量可以通过改变进行增减。两条由点样孔顶端发散出的进样通道7，一条可用来测试凝血酶原时间，一条用来测试血样红细胞压积数值。可用来测试凝血酶原时间的进样通道7上点有试剂，用来测试血样红细胞压积数值的通道上未点试剂。两条进样通道7用途并不固定，点样试剂可互换，电化学分析仪可通过反应
信号判断处于凝血酶原时间还是红细胞压积测试模
块，实现报告凝血酶原时间(PT)和国际标准化比值(INR)两个测试结果。
[0038] 干式电化学法凝血酶原时间检测卡的一个实施例中，所述亲水膜层1与双面胶层3贴合，双面胶层3与导电基板2贴合，亲水膜层1和双面胶层3总厚度与全血样本用量呈正相关，所述全血样本用量小于15微升。亲水膜层1和双面胶层3紧密贴合，同时与导电基板2紧密贴合，所述全血样本为指尖血样本及抗凝静脉血样本，抗凝静脉血样本包括枸橼酸钠抗凝及肝素抗凝静脉血。
[0039] 参见图7，本发明实施例还提供一种干式电化学法凝血酶原时间检测卡制备方法，采用上述的凝血酶原时间检测卡，包括以下步骤：
[0040] S1：点样试剂配制，配制5％BSA、10％曲拉通X-100、1％蔗糖溶于0.1M pH为7.5的柠檬酸钠缓冲液中，搅拌混匀1小时后加入0.1％组织因子，再次混匀1小时后作为试剂一；配制0.2M CaCl2混合1％硫酸鱼精蛋白作为试剂二；
[0041] S2：将双面胶层3贴在导电基板2上，将试剂一点在双面胶层3的点样区10的第一点样孔12中，试剂一点样体积为1.5～2.0微升；试剂二点在双面胶层3的点样区10的第二点样孔13中，试剂二点样体积为2.0～2.4微升，点样完成后静置3分钟；
[0042] S3：将点样完成的导电基板2放入烘箱中30分钟，控制烘箱温度45℃；
[0043] S4：将烘干完成的导电基板2取出恢复室温后贴上亲水膜层1，滚压后进行切条，完成凝血酶原时间检测卡的制备。
[0044] 完成后的凝血酶原时间检测卡重复性、准确度测试结果如下：
[0045]项目 凝血酶原时间 红细胞压积
指尖血样本重复性 7.8％ 6.3％
指尖血样本准确度 ±0.2 4.5％
静脉血样本重复性 4.7％ 7.8％
静脉血样本准确度 7.5％ 5.6％
线性相关系数 0.985 0.990
[0046] 结果显示，本发明生产的凝血酶原时间检测卡测试指尖血及静脉血样本变异系数(CV)均在10％以内，测试红细胞压积数据也均符合要求，线性相关系数均大于0.975。因此本发明测试重复性、准确度及线性相关系数均符合市场所需要求，具有良好的实用性。本发明实现凝血酶原时间及红细胞压积同时检测，可使用指尖血及静脉血样进行测试，利用在检测卡上滴入全血样本，血样进入进样通道7，凝血酶原时间通道中，血液样本逐步凝固，同时其电导率会随之变化，并导致电流值发送改变，同时其电导率会随之变化，并导致电流值发送改变，电化学检测仪对这一过程进行测试，进而计算出凝血酶原时间的数值；红细胞压积通道中，不同红细胞压积的血样电阻值不同，通过对电阻值的计算从而可得出红细胞压积的数值。本发明测试时间短，所用样本量低，方便检测，相对成本较低。
[0047] 以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0048] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明
专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干
变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附
权利要求为准。
