一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法
专利汇可以提供一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种霍山石斛精制多糖抗 肿瘤 活性的检测方法，包括体外抗肿瘤检测方法和体内抗肿瘤活性检测方法，通过体外抗肿瘤检测方法计算霍山石斛茎精制多糖对肿瘤细胞的抑制率，根据不同浓度抑制率绘制量效曲线，计算出对肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50，通过体内抗肿瘤活性检测方法霍山石斛精制多糖对C57BL/6J小鼠体内移植性小鼠 肺 癌LLC肿瘤体内生长抑制作用，体外实验表明霍山石斛精制多糖对体外抗肿瘤作用存在明显的剂量效应，体内活性实验表明霍山石斛精制多糖具有良好的抗肿瘤活性，且具有较好的量效关系，能显著性抑制小鼠肺癌移植瘤的生长，具有明显的体内抗肿瘤作用，两种实验方法相结合使得霍山石斛精制多糖对抗肿瘤活性的检测更加准确。，下面是一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法专利的具体信息内容。
1.一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法，其特征在于：该检测方法包括体外抗肿瘤检测方法和体内抗肿瘤活性检测方法，其中，
(1)体外抗肿瘤检测方法步骤为：
①把肿瘤细胞接种到新鲜培养基中进行培养，培养至对数生长期，并制成细胞悬液，接种到细胞培养板上；
②配置不同浓度的霍山石斛精制多糖，肿瘤细胞贴壁生长后，弃去旧培养基，设置对照组，在每组加入不同浓度的霍山石斛精制多糖，分别在培养箱内培养12h、24h、48h和72h；
③取出细胞培养板，加入MTT溶液，遮光孵育；
④取出细胞培养板，吸出上清液，加入DMSO终止反应，在避光条件下放置在摇床上震动；
⑤用酶标仪测定其OD值，每次重复测量3次；
(2)体内抗肿瘤活性检测的方法步骤为：
①实验动物喂养及LLC肺癌移植瘤模型建立，选择C57BL/6J雄性小鼠，6周龄，在SPF级动物实验室喂养，每天维持光照和黑暗环境，小鼠可以自由的摄取水和食物，适应性喂养一周后，设正常组小鼠，剩余小鼠接种LLC肺癌细胞，抽取LLC细胞悬液接种于消毒后的C57BL/
6J小鼠右腋下，并压迫注射点，继续在SPF级条件下饲养；
②实验分组及给药干预，建模后继续饲养小鼠，除正常组外，排除瘤块过大或过小者，将符合标准的荷瘤小鼠随机分为5组，分别为模型组、阳性组、霍山石斛茎精制多糖高剂量组、霍山石斛茎精制多糖中剂量组以及霍山石斛茎精制多糖低剂量组，开始灌胃给药，给药组采用中国药典人正常摄取推荐石斛用量低剂量6g/60kg·d为标准，根据抗肿瘤药物药效学指导原则，每种提取部位给药组设高、中、低三个剂量，按5倍、10倍及20倍给药，溶剂为生理盐水；
③小鼠体内抗肿瘤活性监测指标，一般情况观察：小鼠反应、活动情况、精神状况和毛发变化，每隔三天称取小鼠体重，绘制体重变化曲线；
摄食摄水情况观察，每隔三天对小鼠饮食情况进行记录；
实验结束CO2窒息处死小鼠，收集小鼠各器官，称重，计算脏器指数，瘤组织解剖，称重，测量肿瘤长短径，根据V＝1/2ab2计算肿瘤体积，拍照。
2.根据权利要求1所述的一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法，其特征在于：
具体操作参数如下：
(1)体外抗肿瘤检测方法步骤为：
①取处于对数生长期的肿瘤细胞，胰酶消化离心后调节细胞浓度为2×105个每毫升，接种在96孔细胞培养板上，每孔100μL，96孔板边缘孔用无菌PBS填充，置于含5％CO2的37℃培养箱中过夜；
②贴壁生长后，弃去旧培养基，对照组加入新鲜培养基100μL，阳性对照组加入含抗肿瘤阳性药物的完全培养基100μL，实验组加入含不同浓度霍山石斛茎精制多糖的完全培养基100μL，设置每组3个复孔，分别在培养箱中培育12h、24h、48h和72h；
③取出细胞培养板，每孔加入10μLMTT溶液，37℃遮光孵育4h；
④取出细胞培养板，吸出上清液，加入150μL DMSO终止反应，在避光条件下放置在摇床上震动10min；
⑤490nm波长下用酶标仪测定其OD值，每次重复测量3次；
(2)体内抗肿瘤活性检测方法的步骤为：
①实验动物喂养及LLC肺癌移植瘤模型建立，C57BL/6J雄性小鼠，6周龄，在SPF级动物实验室喂养，温度25℃,相对湿度50％-60％，每天维持12h光照和12h黑暗环境，小鼠可以自由的摄取水和食物，适应性喂养一周后，设正常组小鼠，12只，剩余小鼠接种LLC肺癌细胞，用1mL微量注射器抽取LLC细胞悬液接种于消毒后的C57BL/6J小鼠右腋下，每只各接种
0.2mL，并压迫注射点，继续在SPF级条件下饲养；
3
②实验分组及给药干预，建模后继续饲养小鼠，除正常组外，10天后瘤块长至100mm时，排除瘤块过大或过小者，将符合标准的荷瘤小鼠随机分为5组，每组12只，分别为模型组、阳性组、霍山石斛茎精制多糖高剂量组、霍山石斛茎精制多糖中剂量组以及霍山石斛茎精制多糖低剂量组，开始灌胃给药，共灌胃30d，给药组采用中国药典人正常摄取推荐石斛用量低剂量6g/60kg·d为标准，根据抗肿瘤药物药效学指导原则，每种提取部位给药组设高、中、低三个剂量，按5倍、10倍及20倍给药，溶剂为生理盐水；
③小鼠体内抗肿瘤活性监测指标，一般情况观察：小鼠反应，活动情况，精神状况，毛发变化，每隔三天称取小鼠体重，绘制体重变化曲线，摄食摄水情况观察，每隔三天对小鼠饮食情况进行记录；
实验结束CO2窒息处死小鼠，收集小鼠各器官，称重，计算脏器指数。瘤组织解剖，称重，测量肿瘤长短径，根据V＝1/2ab2计算肿瘤体积，拍照。
3.根据权利要求1所述的一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法，其特征在于：
所述肿瘤细胞为小鼠Lewis肺癌细胞、人大细胞肺癌细胞NC1-H460、人肝癌细胞HepG-2、人结肠癌细胞HT-29、人胃腺癌细胞AGS、人乳腺癌细胞MCF-7、人宫颈癌细胞Hela。
4.根据权利要求1所述的一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法，其特征在于：
所述体外抗肿瘤检测方法和体内抗肿瘤活性检测方法相对比较。
一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法
技术领域
背景技术
发明内容
具体实施方式
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