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吡咯并苯并二氮杂卓及其偶联物

阅读：995发布：2020-07-08

专利汇可以提供吡咯并苯并二氮杂卓及其偶联物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种式(A)的偶联物：虚线表示在C1和C2或C2和C3之间可选地存在双键；R2独立地选自H、OH、＝O、＝CH2、CN、R、OR、＝CH-RD、＝C(RD)2、O-SO2-R、CO2R和COR，并且可选地进一步选自卤素或二卤素；其中RD独立地选自R、CO2R、COR、CHO、CO2H和卤素；R6和R9独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和卤素；R7独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和卤素；Y选自单键和式A1或A2的基团：其中N显示了该基团结合至PBD部分的N10的部位；RL1和RL2独立地选自H和甲基，或者与它们结合的 碳 原子 一起形成亚环丙基；CBA表示细胞结合剂；Q独立地选自O、S和NH；R11为H或R或，其中Q是O、SO3M，其中M是金属阳离子；R和R’各自独立地选自可选取代的C1-12烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基，并且可选地涉及基团NRR’，R和R’与它们附连的氮原子一起形成可选取代的4-、5-、6-、或7-元杂环；其中R12、R16、R19和R17分别如针对R2、R6、R9和R7的定义；其中R”是C3-12亚烷基，其链可以被一个或多个杂原子如O、S、N(H)、NMe和/或芳香环如苯或吡啶中断，所述环是可选取代的；X和X’独立地选自O、S和N(H)。，下面是吡咯并苯并二氮杂卓及其偶联物专利的具体信息内容。

1.一种式(A)的偶联物：
虚线表示在C1和C2或C2和C3之间可选地存在双键；
2 D D
R 独立地选自H、OH、＝O、＝CH2、CN、R、OR、＝CH-R、＝C(R)2、O-SO2-R、CO2R和COR，并且可选地进一步选自卤素或二卤素；
D
其中R 独立地选自R、CO2R、COR、CHO、CO2H和卤素；
6 9
R 和R 独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和卤素；
7
R 独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和卤素；
Y选自单键和式A1或A2的基团：
其中N显示了所述基团结合至PBD部分的N10的部位；
L1 L2
R 和R 独立地选自H和甲基，或者与它们结合的碳原子一起形成亚环丙基；
CBA表示细胞结合剂；
Q独立地选自O、S和NH；
11
R 为H或R或，其中Q是O、SO3M，其中M是金属阳离子；
R和R’各自独立地选自可选取代的C1-12烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基，并且可选地涉及基团NRR’，R和R’与它们附连的氮原子一起形成可选取代的4-、5-、6-、或7-元杂环；
12 16 19 17 2 6 9 7
其中R 、R 、R 和R 分别如针对R、R、R 和R 的定义；
其中R”是C3-12亚烷基，其链可以被一个或多个杂原子如O、S、N(H)、NMe和/或芳香环如苯或吡啶中断，所述环是可选取代的；
X和X’独立地选自O、S和N(H)。
L1 L2
2.根据权利要求1所述的偶联物，其中R 和R 均为H。
L1 L2
3.根据权利要求1所述的偶联物，其中R 和R 均为甲基。
L1 L2
4.根据权利要求1所述的偶联物，其中R 和R 中的一个是H而另一个是甲基。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的偶联物，其中Y是单键。
6.根据权利要求1～4中任一项所述的偶联物，其中Y是：
7.根据权利要求1～4中任一项所述的偶联物，其中Y是：
8.根据权利要求1～7中任一项所述的偶联物，其中R9和R19是H。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的偶联物，其中R6和R16是H。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的偶联物，其中R7和R17均为OR7A，其中R7A是可选取代的C1-4烷基。
11.根据权利要求10所述的偶联物，其中R7A是Me。
12.根据权利要求1～11中任一项所述的偶联物，其中X是O。
13.根据权利要求1～12中任一项所述的偶联物，其中R11是H。
14.根据权利要求1～13中任一项所述的偶联物，其中在每个单体单元中的C2和C3之间具有双键。
15.根据权利要求14所述的偶联物，其中R2和R12独立地选自H和R。
16.根据权利要求15所述的偶联物，其中R2和R12独立地是R。
17.根据权利要求16所述的偶联物，其中R2和R12独立地是可选取代的C5-20芳基。
18.根据权利要求1～13中任一项所述的偶联物，其中R2和R12独立地选自＝O、＝CH2、＝CH-RD和＝C(RD)2。
19.根据权利要求18所述的偶联物，其中R2和R12是＝CH2。
20.根据权利要求1～19中任一项所述的偶联物，其中R″是C3亚烷基或C5亚烷基。
21.根据权利要求1～20中任一项所述的偶联物，其中所述细胞结合剂是抗体或其活性片段。
22.根据权利要求21所述的偶联物，其中所述抗体或抗体片段是肿瘤相关抗原的抗体或抗体片段。
23.根据权利要求21所述的偶联物，其中所述抗体或抗体片段是结合至选自(1)～(36)中的一种或多种肿瘤相关抗原或细胞表面受体的抗体：
(1)BMPR1B(骨形态生成蛋白受体类型IB)；
(2)E16(LAT1、SLC7A5)；
(3)STEAP1(前列腺六次跨膜上皮抗原)；
(4)0772P(CA125、MUC16)；
(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核细胞强化因子、间皮素)；
(6)Napi3b(NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶质载体家族34(磷酸钠)，成员2、II型钠依赖性磷酸盐转运体3b)；
(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、Semaphorin5b Hlog、sema结构域、七凝血酶敏感蛋白重复(I型和I型-样)、跨膜结构域(TM)和短胞质域、(Semaphorin)5B)；
(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA2700050C12、RIKEN cDNA2700050C12基因)；
(9)ETBR(内皮素B型受体)；
(10)MSG783(RNF124、假定蛋白FLJ20315)；
(11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相关基因1、前列腺癌症相关蛋白1、前列腺六次跨膜上皮抗原2、六次跨膜前列腺蛋白)；
(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬时受体电位阳离子通道，亚家族M，成员4)；
(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸胎癌衍生生长因子)；
(14)CD21(CR2(补体受体2)或C3DR(C3d/爱泼斯坦-巴尔病毒受体)或Hs73792)；
(15)CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相关β)、B29)；
(16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含有SH2结构域的磷酸酶锚定蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C)；
(17)HER2；
(18)NCA；
(19)MDP；
(20)IL20Rα；
(21)短蛋白聚糖；
(22)EphB2R；
(23)ASLG659；
(24)PSCA；
(25)GEDA；
(26)BAFF-R((B细胞活化因子受体、BLyS受体3、BR3)；
(27)CD22(B细胞受体CD22-B同种型)；
(28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相关α)；
(29)CXCR5(伯基特淋巴瘤受体1)；
(30)HLA-DOB(MHC II类分子的β亚基(Ia抗原))；
(31)P2X5(嘌呤型受体P2X配体门控离子通道5)；
(32)CD72(B细胞分化抗原CD72、Lyb-2)；
(33)LY64(淋巴细胞抗原64(RP105)、富含亮氨酸重复(LRR)家族的I型膜蛋白)；
(34)FcRH1(Fc受体样蛋白1)；
(35)IRTA2(免疫球蛋白超家族受体易位相关2)；和
(36)TENB2(假定的跨膜蛋白聚糖)。
24.根据权利要求21所述的偶联物，其中所述抗体或抗体片段是半胱氨酸工程化抗体。
25.根据权利要求21或权利要求24所述的偶联物，其中所述抗体或抗体片段是结合至ErbB受体的抗体。
26.根据权利要求25所述的偶联物，其中所述抗体是曲妥珠单抗。
27.根据权利要求21或权利要求24所述的偶联物，其中Ab是抗-HER2、抗-Steap1或抗-CD22抗体。
28.根据权利要求21所述的偶联物，其中药物(D)至抗体(Ab)的药物负载(p)为1～约8的整数。
29.根据权利要求28所述的偶联物，其中p是1、2、3或4。
30.根据权利要求28所述的偶联物，包含抗体-药物偶联物化合物的混合物，其中在所述抗体-药物偶联物化合物的混合物中，每个抗体的平均药物负载为约2～约5。
31.根据权利要求1～30中任一项所述的偶联物，用于治疗。
32.根据权利要求1～30中任一项所述的偶联物，用于治疗受试者的增殖性疾病。
33.根据权利要求31所述的偶联物，其中所述疾病是癌症。
34.一种药物组合物，包含权利要求1～30中任一项所述的偶联物、药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。
35.根据权利要求34所述的药物组合物，进一步包含治疗有效量的化疗剂。
36.根据权利要求1～30中任一项所述的偶联物在制备用于治疗受试者的增殖性疾病的药物中的用途。
37.一种治疗癌症的方法，包含向患者给予根据权利要求36所述的药物组合物。
38.根据权利要求37所述的方法，其中向所述患者给予化疗剂连同所述偶联物。
39.根据权利要求1～30中任一项所述的偶联物用于在靶位置提供式(B)的化合物及其盐和溶剂化物的用途：
40.根据权利要求39所述的用途，其中所述靶位置是增殖的细胞群。
41.根据权利要求1～30中任一项所述的偶联物用于在靶位置提供式(C)的化合物及其盐和溶剂化物的用途：
其中，Q独立地选自O、S和NH；且
11
R 为H或R或，其中Q是O、SO3M，其中M为金属阳离子。
42.一种式(E)的化合物及其盐和溶剂化物：
其中：
虚线表示在C1和C2或C2和C3之间可选地存在双键；
2 6 7 9 12 16 17 19 L1 L2
R、R、R、R、R 、R 、R 、R 、X、X’、R”、Y、R 和R 如在权利要求1～20中任一项中的定义。
43.根据权利要求42所述的化合物，其为：
44.根据权利要求43所述的化合物，其为：
45.一种制备根据权利要求1～30中任一项所述的偶联物的方法，所述方法包含以下步骤：使细胞结合剂与根据权利要求42～44中任一项中定义的化合物(D)反应。
46.一种制造的物品，包含根据权利要求35所述的药物组合物；容器；以及指示所述药物组合物能够用于治疗癌症的包装说明书或标签。

说明书全文

吡咯并苯并二氮杂卓及其偶联物

技术领域

[0001] 本发明涉及吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)，特别是具有不稳定的N10保护基团(为细胞结合剂接头形式)的吡咯并苯并二氮杂卓。

背景技术

[0002] 吡咯并苯并二氮杂卓
[0003] 一些吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)具有识别并结合特定DNA序列的能力；优选的序列是PuGPu。在1965年发现了第一种PBD抗肿瘤抗生素氨茴霉素(Leimgruber等 人 ,J.Am.Chem.Soc.,87,5793-5795(1965)；Leimgruber 等 人 ,J.Am.Chem.
Soc.,87,5791-5793(1965))。此后，已经报道了大量天然存在的PBD，并且针对各种类似物已经开发了超过10种合成路线(Thurston等人,Chem.Rev.1994,433-465(1994)；
Antonow,D.和Thurston,D.E.,Chem.Rev.2011111(4),2815-2864)。家族成员包括阿比霉素(abbeymycin)(Hochlowski等人,J.Antibiotics,40,145-148(1987))、契卡霉素(Konishi等人,J.Antibiotics,37,200-206(1984))、DC-81(日 本专 利58-180487；Thurston 等人 ,Chem.Brit.,26,767-772(1990)；Bose 等 人 ,Tetrahedron,48,751-758(1992))、甲 基 氨 茴 霉 素 (Kuminoto 等 人 ,J.Antibiotics,33,665-667(1980))、
新 茴 霉 素 A 和 B(Takeuchi 等 人 ,J.Antibiotics,29,93-96(1976))、
porothramycin(Tsunakawa 等 人 ,J.Antibiotics,41,1366-1373(1988))、
prothracarcin(Shimizu 等 人 ,J.Antibiotics,29,2492-2503(1982)；Langley
和 Thurston,J.Org.Chem.,52,91-97(1987))、西 班 米 星 (DC-102)(Hara 等 人 ,J.Antibiotics,41,702-704(1988)；Itoh等 人,J.Antibiotics,41,1281-1284(1988))、西伯利亚霉素(Leber等人,J.Am.Chem.Soc.,110,2992-2993(1988))和托马霉素(Arima等人,J.Antibiotics,25,437-444(1972))。PBD具有通式结构：
[0004]
[0005] 它们的区别在于：取代基的数量、类型和位置；它们的芳族A环和吡咯并C环；以及C环的饱和度。在B环中，在N10-C11位置(它是负责使DNA烷基化的亲电中心)存在亚胺(N＝C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺甲基醚(NH-CH(OMe))。所有已知的天然产物都在手性C11a位置具有(S)-构型(当从C环向A环观察时，呈现右手扭转)。这给予它们适合与B-型DNA小沟具有等螺旋性的三维形状，引起结合位点处的紧密配合(snug fit)(Kohn,在Antibiotics III中.Springer-Verlag,New York,第3-11页(1975)；Hurley和Needham-VanDevanter,Acc.Chem.Res.,19,230-237(1986))。它们在小沟中形成加合物的能力使它们能够干扰DNA加工，因此它们可用作抗肿瘤剂。
[0006] 本发明人先前在WO 2005/085251中公开了携带有C2芳基取代基的二聚体PBD化合物，如：
[0007]
[0008] 这些化合物已被证明是非常有用的细胞毒性剂。
[0009] 一种特别有利的吡咯并苯并二氮杂卓化合物由Gregson等人(Chem.Commun.1999,797-798) 描 述 为 化 合 物 1 并 且 由 Gregson 等 人 (J.Med.Chem.2001,44,1161-1174)描述为化合物4a。这种化合物，也称为SJG-136，如下所示：
[0010]
[0011] 本发明人先前已经公开，通过使用在体内可以移除的氮保护基团在N10位置进行保护，可以将PBD化合物用作前体药物(WO 00/12507)。许多这些保护基团是氨基甲酸酯，并且例如具有如下的结构：
[0012]
[0013] 其中星号(*)表示连接到PBD的N10原子的连接点。
[0014] 本发明人还已经描述了在N10位置具有氮氨基甲酸酯保护基团的PBD化合物的制备(WO 2005/023814)。所述保护基团可以从PBD部分的N10位移除从而留下N10-C11亚胺键。描述了一系列保护基团，包括可以通过酶的作用切割的基团。
[0015] WO 2007/085930描述了具有用于连接至细胞结合剂(如抗体)的接头基团的二聚体PBD化合物的制备。所述接头存在于连接二聚体的单体PBD单元的桥中。
[0016] 抗体-药物偶联物
[0017] 已经建立抗体疗法用于靶向治疗患有癌症、免疫疾病和血管生成疾病的患者(Carter,P.(2006)Nature Reviews Immunology6:343-357)。使用抗体-药物偶联物(ADC)(即，免疫偶联物)，其用来局部递送细胞毒性剂或细胞生长抑制剂(即，在癌症的治疗中用于杀死或抑制肿瘤细胞的药物)，将所述药物部分靶向递送至肿瘤并且在其中进行细胞内积累，而这些未偶联的药物的全身性给药可能给正常细胞以及试图消除的肿瘤细胞带来不可接受水平的毒性(Xie等人(2006)Expert.Opin.Biol.Ther.6(3):281-291；Kovtun等人(2006)Cancer Res.66(6):3214-3121；Law等人(2006)Cancer Res.66(4):2328-2337；Wu等 人(2005)Nature Biotech.23(9):1137-1145；Lambert J.(2005)Current Opin.in Pharmacol.5:543-549；Hamann P.(2005)Expert Opin.Ther.Patents15(9):1087-1103；
Payne,G.(2003)Cancer Cell3:207-212；Trail 等 人 (2003)Cancer Immunol.
Immunother.52:328-337；Syrigos和Epenetos(1999)Anticancer Research19:605-614)。
[0018] 由此寻求毒性最小而功效最大。设计和精制ADC的努力都聚焦在单克隆抗体(mAb)的选择性以及药物作用机制、药物连接、药物/抗体比率(载量，负载)和药物释放特性上(Junutula等人,2008b Nature Biotech.,26(8):925-932；Dornan等 人 (2009)Blood114(13):2721-2729；US 7521541；US 7723485；WO2009/052249；
McDonagh(2006)Protein Eng.Design&Sel.19(7):299-307；Doronina 等 人 (2006)Bioconj.Chem.17:114-124；Erickson等人(2006)Cancer Res.66(8):1-8；Sanderson等人(2005)Clin.Cancer Res. 11:843-852；Jeffrey等人(2005)J.Med.Chem.48:1344-1358；
Hamblett等人(2004)Clin.Cancer Res.10:7063-7070)。药物部分可以通过包括微管蛋白结合、DNA结合或拓扑异构酶抑制的机制来提供它们的细胞毒性和抑制细胞生长作用。当偶联至较大的抗体或蛋白质受体配体时一些细胞毒性药物易于失活或活性较低。
[0019] 本发明人已经开发出了用于与细胞结合剂形成PBD偶联物(特别是PBD抗体偶联物)的新方法。

发明内容

[0020] 在总的方面，本发明提供了一种偶联物，其包含通过与细胞结合剂的特异性的硫接头通过N10位置连接的PBD二聚体化合物。所述细胞结合剂优选地是抗体。
[0021] 在第一方面，本发明提供了式(A)的新型偶联化合物及其盐和溶剂化物：
[0022]
[0023] 其中：
[0024] 虚线表示在C1和C2或C2和C3之间可选地存在双键；
[0025] R2独立地选自H、OH、＝O、＝CH2、CN、R、OR、＝CH-RD、＝C(RD)2、O-SO2-R、CO2R和COR，并且可选地进一步选自卤素或二卤素；
[0026] 其中RD独立地选自R、CO2R、COR、CHO、CO2H和卤素；
[0027] R6和R9独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和卤素；
[0028] R7独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和卤素；
[0029] Y选自单键和式A1或A2的基团：
[0030]
[0031] 其中N显示了该基团结合至PBD部分的N10的部位；
[0032] RL1和RL2独立地选自H和甲基，或者与它们结合的碳原子一起形成亚环丙基；
[0033] CBA表示细胞结合剂；
[0034] Q独立地选自O、S和NH；
[0035] R11为H或R或，其中Q是O、SO3M，其中M是金属阳离子；
[0036] R和R’各自独立地选自可选取代的C1-12烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基，并且可选地涉及基团NRR’、R和R’与它们附连的氮原子一起形成可选取代的4-、5-、6-、或7-元杂环；
[0037] 其中R12、R16、R19和R17分别如针对R2、R6、R9和R7的定义；
[0038] 其中R”是C3-12亚烷基，其链可以被一个或多个杂原子(如O、S、N(H)、NMe)和/或芳香环(例如，苯或吡啶)中断，所述环是可选取代的；
[0039] X和X’独立地选自O、S和N(H)。
[0040] 因此，取决于Y，式A选自下式A-I、A-II和A-III：
[0041]
[0042]
[0043] 在式A的化合物中： 是含硫连接基团。
[0044] 本发明的第二方面涉及使用第一方面的偶联物以在靶向位置提供式(B)或(C)的化合物及其盐和溶剂化物：
[0045]
[0046]
[0047] 其中所述基团如第一方面，不同之处在于
[0048] Q独立地选自O、S和NH；且
[0049] R11为H或R或，其中Q是O、SO3M，其中M是金属阳离子。
[0050] 本发明的第三方面还提供了在本发明的偶联物化合物的制备中使用的式(D)化合物及其盐和溶剂化物：
[0051]
[0052] 其中所述基团如本发明的第一方面中的定义。
[0053] 在上述化合物中，由 表示的5-元环可以由选自以下的环来替代：
2 1 3
[0054] 其中R 和R 或R 与它们连接的C环上的碳原子一起形成可选取代的苯环；V和W各自选自(CH2)n、O、S、NR、CHR和CRR’，其中n是1、2或3，除了，
1 2 3
当R 和R 与它们连接的C环上的 碳原子一起形成可选取代的苯环时，V是C，并且当R 和
2
R 与它们连接的C环上的碳原子一起形成可选取代的苯环时，W是C；和
[0055] 其中T选自CH2、NR、CO、BH、SO和SO2；
[0056] U选自CH2、NR、O和S；
[0057] Y是(CH2)n，其中n是1、2、3或4；
[0058] 除了T、U和Y不均是CH2。

具体实施方式

[0059] 本发明提供了一种偶联物，其包含通过与细胞结合剂的特异性接头通过PBD部分之一上的N10位置连接的PBD二聚体。
[0060] 本发明适合用于将PBD化合物提供到受试者的优选位点。所述偶联物可以释放未保留所述接头任何部分的活性PBD化合物。不存在能够影响PBD化合物的反应性的残根(stub)。
[0061] 偏好
[0062] 下列偏好可以应用于上述本发明的所有方面，或者可以涉及单一方面。所述偏好能够以任何组合形式组合在一起。
[0063] 双键
[0064] 在一个实施方式中，在C1和C2以及C2和C3之间不存在双键。
[0065] 在一个实施方式中，虚线表示在C2和C3之间可选地存在双键，如下所示：
[0066]
[0067] 在一个实施方式中，当R2是C5-20芳基或C1-12烷基时，C2和C3之间存在双键。
[0068] 在一个实施方式中，虚线表示在C1和C2之间可选地存在双键，如下所示：
[0069]
[0070] 在一个实施方式中，当R2是C5-20芳基或C1-12烷基时，在C1和C2之间存在双键。
[0071] R2
[0072] 在一个实施方式中，R2独立地选自H、OH、＝O、＝CH2、CN、R、OR、＝CH-RD、＝C(RD)2、O-SO2-R、CO2R和COR，并且可选地进一步选自卤素或二卤素。
[0073] 在一个实施方式中，R2独立地选自H、OH、＝O、＝CH2、CN、R、OR、＝CH-RD、＝C(RD)2、O-SO2-R、CO2R和COR。
[0074] 在一个实施方式中，R2独立地选自H、＝O、＝CH2、R、＝CH-RD和＝C(RD)2。
[0075] 在一个实施方式中，R2独立地是H。
[0076] 在一个实施方式中，R2独立地是＝O。
[0077] 在一个实施方式中，R2独立地是＝CH2。
[0078] 在一个实施方式中，R2独立地是＝CH-RD。在PBD化合物中，基团＝CH-RD可以具有如下所示的任一构型：
[0079]
[0080] 在一个实施方式中，所述构型为构型(I)。
[0081] 在一个实施方式中，R2独立地是＝C(RD)2。
[0082] 在一个实施方式中，R2独立地是＝CF2。
[0083] 在一个实施方式中，R2独立地是R。
[0084] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的C5-20芳基。
[0085] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的C1-12烷基。
[0086] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的C5-20芳基。
[0087] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的C5-7芳基。
[0088] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的C8-10芳基。
[0089] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的苯基。
[0090] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的噻吩基。
[0091] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的萘基。
[0092] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的吡啶基。
[0093] 在一个实施方式中，R2独立地是可选取代的喹啉基或异喹啉基。
[0094] 在一个实施方式中，R2携带有一至三个取代基基团，更优选1个和2个，且最优选为单取代的基团。所述取代基可以在任何位置。
[0095] 在R2是C5-7芳基时，单取代基优选地在不与所述化合物剩余部分的键相邻的环原子上，即其优选为所述化合物剩余部分的键的β或γ位。因此，在C5-7芳基为苯基时，所述取代基优选在间位或对位，且更优选在对位。
[0096] 在一个实施方式中，R2选自：
[0097]
[0098] 其中星号表示连接点。2
[0099] 在R 是C8-10芳基，例如喹啉基或异喹啉基时，其可以在喹啉或异喹啉环的任何位置携带任何数量的取代基。在一些实施方式中，其携带有一个、两个或三个取代基，并且这些可以在近端环和远端环或两者上(如果多于一个取代基)。
[0100] 在一个实施方式中，在R2是可选取代的情况下，取代基选自在以下取代基章节中给出的那些取代基。
[0101] 在R是可选取代的情况下，取代基优选地选自：卤素、羟基、醚、甲酰基、酰基、羧基、酯、酰氧基、氨基、酰氨基、酰基酰氨基(acylamido)、氨基羰基氧基、脲基、硝基、氰基和硫醚。
[0102] 在一个实施方式中，在R或R2是可选取代的情况下，取代基选自由R、OR、SR、NRR’、NO2、卤素、CO2R、COR、CONH2、CONHR和CONRR’构成的组。
[0103] 在R2是C1-12烷基的情况下，可选的取代基可以另外包括C3-20杂环基和C5-20芳基。
[0104] 在R2是C3-20杂环基的情况下，可选的取代基可以另外包括C1-12烷基和C5-20芳基。
[0105] 在R2是C5-20芳基的情况下，可选的取代基可以另外包括C3-20杂环基和C1-12烷基。
[0106] 可以理解的是，术语“烷基”包括亚类：烯基和炔基以及环烷基。因此，在R2是可选取代的C1-12烷基时，可以理解的是，该烷基基团可选地含有一个或多个碳-碳双键或三键，其可以形成共轭系统的一部分。在一个实施方式中，所述可选取代的C1-12烷基含有至少一个碳-碳双键或三键，并且该键与存在于C1和C2或C2和C3之间的双键共轭。在一个实施方式中，所述C1-12烷基是选自饱和C1-12烷基、C2-12烯基、C2-12炔基和C3-12环烷基的基团。
[0107] 如果R2上的取代基是卤素，其优选为F或Cl，更优选F。
[0108] 如果R2上的取代基是醚，在一些实施方式中它可以是烷氧基，例如C1-7烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基)，或者在一些实施方式中它可以是C5-7芳氧基(例如，苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基)。
[0109] 如果R2上的取代基是C1-7烷基，它优选地是C1-4烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基)。
[0110] 如果R2上的取代基是C3-7杂环基，在一些实施方式中它是C6含氮杂环基，例如吗啉代基、硫代吗啉代基、哌啶基、哌嗪基。这些基团可以通过氮原子结合到PBD部分的其余部分。这些基团可以进一步被取代，例如被C1-4烷基取代。
[0111] 如果R2上的取代基为双氧-C1-3亚烷基，其优选为双氧-亚甲基或双氧亚乙基。
[0112] 特别优选的R2的取代基包括甲氧基、乙氧基、氟、氯、氰基、双氧-亚甲基、甲基-哌嗪基、吗啉代基和甲基-噻吩基。
[0113] 特别优选的取代的R2基团包括但不限于4-甲氧基-苯基、3-甲氧基苯基、4-乙氧基-苯基、3-乙氧基-苯基、4-甲基-苯基、4-氟-苯基、4-氯-苯基、3,4-双氧亚甲基-苯基、4-甲基噻吩基、4-氰基苯基、4-苯氧基苯基、喹啉-3-基和喹啉-6-基、异喹啉-3-基和异喹啉-6-基、2-噻吩基、2-呋喃基、甲氧基萘基和萘基。
[0114] 在一个实施方式中，R2是卤素或二卤素。在一个实施方式中，R2是-F或-F2，该取代基分别为如下(III)和(IV)所示：
[0115]
[0116] 在一些实施方式中，优选在C2和C3之间存在双键或者C2取代基通过双键结合至2
PBD环(即，C2位的C原子是sp 中心)。
D
[0117] RD
[0118] 在一个实施方式中，R 独立地选自R、CO2R、COR、CHO、CO2H和卤素。D
[0119] 在一个实施方式中，R 独立地是R。D
[0120] 在一个实施方式中，R 独立地是卤素。6
[0121] R6
[0122] 在一个实施方式中，R 独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn-和卤素。6
[0123] 在一个实施方式中，R 独立地选自H、OH、OR、SH、NH2、NO2和卤素。6
[0124] 在一个实施方式中，R 独立地选自H和卤素。6
[0125] 在一个实施方式中，R 独立地是H。6 7
[0126] 在一个实施方式中，R 和R 一起形成基团-O-(CH2)p-O-，其中p是1或2。7
[0127] R7
[0128] R 独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和卤素。7
[0129] 在一个实施方式中，R 独立地是OR.7 7A 7A
[0130] 在一个实施方式中，R 独立地是OR ，其中R 独立地是可选取代的C1-6烷基。7A
[0131] 在一个实施方式中，R 独立地是可选取代的饱和C1-6烷基。7A
[0132] 在一个实施方式中，R 独立地是可选取代的C2-4烯基。7A
[0133] 在一个实施方式中，R 独立地是Me。7A
[0134] 在一个实施方式中，R 独立地是CH2Ph。7A
[0135] 在一个实施方式中，R 独立地是烯丙基。9
[0136] R9
[0137] 在一个实施方式中，R 独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn-和卤素。9
[0138] 在一个实施方式中，R 独立地是H。9
[0139] 在一个实施方式中，R 独立地是R或OR。
[0140] 连接基团
[0141] 可以从式A的偶联物中的PBD部分的N10位置去除连接基团从而留下N10-C11亚11
胺键、甲醇胺、取代的甲醇胺(其中QR 是OSO3M)、亚硫酸氢盐加合物、硫代甲醇胺、取代的硫代甲醇胺或取代的胺基甲胺(substituted carbinalamine)(式B或C的化合物)，如下所示：
[0142]
[0143] 其中，R和M为针对本发明偶联物的定义。
[0144] 在一个实施方式中，所述连接基团可以从PBD部分的N10位置去除从而留下N10-C11亚胺键。
[0145] 在本发明中PBD二聚体和细胞结合剂(例如抗体)之间特异性连接优选在细胞外是稳定的。在转运或递送进入细胞之前，抗体-药物偶联物(ADC)优选是稳定的并且保持完整，即抗体保持与药物部分连接。接头在靶细胞外是稳定的，且可以在细胞内以一些有效速率切割。有效的接头可以：(i)维持抗体的特异性结合性质；(ii)允许偶联物或药物部分的细胞内递送；(iii)保持稳定和完整，即不被切割，直到偶联物递送或转运至其靶位点；和(iv)保持PBD药物部分的细胞毒性、细胞杀伤作用或抑制细胞生长的作用。可通过标准分析技术，如质谱法、HPLC和分离/分析技术LC/MS来测定ADC的稳定性。
[0146] 式B或C化合物的递送是通过酶在连接基团上的作用在式A偶联物的希望的活化位点来实现的。式A偶联物的S通过二硫键连接至细胞结合剂上的游离S(活性巯基)。
[0147] 所述连接基团可以通过酶的作用而切割。在一个实施方式中，酶为巯基还原酶(thioreductase)。
[0148] 某些抗体具有可还原的链间二硫化物，即半胱氨酸桥。将抗体用还原剂如DTT(二硫苏糖醇)处理可变得对于与接头试剂的偶联有反应性。理论上，每个半胱氨酸桥将因此形成两个反应性巯基亲核体。另外的亲核基团可以通过赖氨酸与2-亚氨基硫杂环戊烷(Traut试剂)反应(导致胺转变为巯基)引入抗体。可以通过引入一个、二个、三个、四个或更多个半胱氨酸残基(例如制备包含一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的突变抗体)而将反应性巯基引入抗体(或其片段)。US7521541教导了通过引入反应性半胱氨酸氨基酸而工程化抗体。
[0149] RL1和RL2选自H和甲基，或者与它们结合的碳原子一起形成亚环丙基。在一些实施方式中，均为H。在其他实施方式中，均为甲基。在进一步的实施方式中，一个是H而另一个是甲基；在这些实施方式中，它们结合的碳原子是手性中心。
[0150] 在一些实施方式中，Y是单键。
[0151] 在其他实施方式中，Y是
[0152] 在进一步的实施方式中，Y是
[0153] Q
[0154] 在一个实施方式中，Q选自O、S或N(H)。
[0155] 优选地，Q是O。
[0156] R11
[0157] 在一个实施方式中，R11是H或R或者，其中Q是O、SO3M，其中M是金属阳离子。
[0158] 在一个实施方式中，R11是H。
[0159] 在一个实施方式中，R11是R。
[0160] 在一个实施方式中，其中Q是O，R11是SO3M，其中M是金属阳离子。该阳离子可以+是Na。
[0161] 细胞结合剂
[0162] 细胞结合剂可以是任何种类，并包括肽类和非肽类。这些可以包括抗体或含有至少一个结合位点的抗体片段、淋巴因子、激素、生长因子、营养素转运分子或任何其他细胞结合分子或物质。
[0163] 本文中术语“抗体”以最广泛的含义使用并且具体地包括单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及抗体片段，只要它们表现出希望的生物活性(Miller等人(2003)Jour.of Immunology 170:4854-4861)。抗体可以是鼠的、人的、人化的、嵌合的，或源于其他物种。抗体是由免疫系统产生的蛋白质，其能够识别并结合特异性抗原(Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)Immuno Biology,第5版,Garland Publishing,New York)。靶抗原通常具有众多结合位点，也称为表位，由多种抗体上的CDR识别。与不同表位特异性结合的每种抗体具有不同的结构。因此，一种抗原可能有一种以上相应的抗体。 抗体包括全长免疫球蛋白分子或全长免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合感兴趣的靶抗原或其部分的抗原结合位点的分子，这样的靶标包括但不限于产生与自身免疫性疾病有关的自身免疫抗体的一种或多种癌细胞。免疫球蛋白可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)、种类(例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白可以源于任何物种，包括人、鼠或兔来源。
[0164] “抗体片段”包含全长抗体的一部分，通常为其抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双抗体(diabodies)；线性抗体(linear antibodies)；由Fab表达文库产生的片段，抗独特型(抗-Id)抗体，CDR(互补决定区)以及免疫特异性地结合至癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原的以上任何一种的表位结合片段，单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
[0165] 如本文中使用的术语“单克隆抗体”是指从基本同源抗体群获得的抗体，即除了可能以小量存在的可能的天然存在的突变之外，构成群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体类是高度特异性的，其针对单个抗原位点。此外，与包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除它们的特异性之外，单克隆抗体类是有利的，因为它们可以被合成不被其他抗体污染。修饰语“单克隆”表明抗体的特性是由基本同源的抗体群体获得，并且不应理解为需要通过任何特定方法生产抗体。例如，根据本发明有待使用的单克隆抗体可通过由Kohler等人(1975)Nature256:495首次描述的杂交瘤法来制备，或可通过重组DNA方法制备(参见，US 4816567)。所述单克隆抗体也可以使用Clackson等人(1991)Nature,352:624-628；Marks等人(1991)J.Mol.Biol.,222:581-597中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离。
[0166] 本文中的单克隆抗体具体地包括“嵌合”抗体以及此类抗体的片段，其中重链和/或轻链的一部分与源于特定物种或属于特定抗体种类或亚类的抗体的相应序列完全相同或同源，而该一种或多种链的剩余部分与源于其他物种或属于其他抗体种类或亚类的抗体的相应序列完全相同或同源，只要它们表现出希望的生物活性(US 4816567；和Morrison等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855)。嵌合抗体包括包含源于非人类灵长类(例如猕猴科(Old World Monkey)或猩猩科(Ape))的可变结构域抗原-结合序列和人类恒定区序列的“灵长类动物化(primatized)”抗体。
[0167] 本文中“完整抗体”是包含VL和VH结构域，以及轻链恒定结构域(CL)和重链恒定结构域，CH1、CH2和CH3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。完整抗体可以具有一种或多种“效应子功能”，其是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性。抗体效应子功能的例子包括C1q结合；补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；以及细胞表面受体(如B细胞受体和BCR)的下调。
[0168] 取决于它们的重链恒定结构域的氨基酸序列，完整抗体可以分成不同的“类别”。有五种主要类别的完整抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的几种可进一步地分成“亚类”(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。与不同类别的抗体相对应的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。免疫球蛋白的不同类别的亚基结构和三锥构型是众所周知的。
[0169] 细胞结合剂的例子包括用于WO 2007/085930中所描述的那些，将其并入本文中。
[0170] 细胞结合剂可以为或包含多肽。多肽可以是环状多肽。细胞结合剂可以是抗体。因此，在一个实施方式中，本发明提供抗体-药物偶联物(ADC)。
[0171] 药物负载
[0172] 药物负载是每个抗体的PBD药物的平均数。药物负载可以为每个抗体(Ab)1～8个药物(D)的范围，即其中1、2、3、4、5、6、7和8个药物部分共价地连接至抗体。ADC组合物包括与范围1～8个药物偶联的抗体集合。在由偶联反应制备ADC中每个抗体的药物平均数可以通过常规方法如质谱法、ELISA测定、电泳和HPLC来表征。还可以测定以p表示的ADC的数量分布。通过ELISA，可测定在ADC特定制备中p的平均值(Hamblett等人(2004)Clin.Cancer Res.10:7063-7070；Sanderson等人(2005)Clin.Cancer Res.11:843-852)。然而，通过抗体-抗原结合和ELISA的检测限，不能辨别p(药物)值的分布。而且，用于检测抗体-药物偶联物的ELISA测定不能确定药物部分与抗体连接的部位，如重链或轻链片段，或特定的氨基酸残基。在某些情况下，在p是来自具有其他药物负载的ADC的一定值时，同源ADC的分离、纯化和表征可以通过多种方式如反相HPLC或电泳来实现。
[0173] 对于一些抗体-药物偶联物，p可能受到抗体上连接位点的数量限制。例如，一个抗体可能仅有一个或几个半胱氨酸巯基，或可能仅有一个或几个有足够反应性的巯基(通过其与接头连接)。更高的药物负载，例如p>5，可能引起某些抗体-药物偶联物的聚集、不溶性、毒性或损失细胞渗透性。
[0174] 典型地，在偶联反应中少于理论最大值的药物部分与抗体偶联。抗体可以包括例如，不与药物-接头中间体(D-L)或接头试剂反应的多个赖氨酸残基。只有最具反应性的赖氨酸基团可与胺-反应性接头试剂反应。此外，只有最具反应性的半胱氨酸巯基基团可与巯基-反应性接头试剂反应。通常，抗体不含许多(如果有)可以与药物部分连接的游离的并有反应性的半胱氨酸巯基。化合物的抗体中的大多数半胱氨酸巯基残基以二硫键存在，并且在部分或完全还原条件下必须用还原剂如二硫苏糖醇(DTT)或TCEP还原。ADC的负载(药物/抗体比率)能够以几种不同的方式来控制，包括：(i)相对于抗体限制药物-接头中间体(D-L)或接头试剂的摩尔过量，(ii)限制偶联反应时间或温度，以及(iii)部分地或限制用于半胱氨酸巯基改性的还原条件。
[0175] 可以在抗体中的反应位点工程化半胱氨酸氨基酸，且其不形成链内或分子间的二硫键(Junutula等人,2008b Nature Biotech.,26(8):925-932；Dornan等人(2009)Blood114(13):2721-2729；US 7521541；US 7723485；WO2009/052249；Shen 等人 (2012)Nature Biotech.,30(2):184-191；Junutula 等 人 (2008)Jour of Immun.Methods332:41-52)。工程化的半胱氨酸巯基可与本发明的具有巯基-反应性的亲电基团(如马来酰亚胺或α-卤代酰胺)的接头试剂或药物-接头试剂反应，从而形成具有半胱氨酸工程化抗体(ThioMabs)和PBD药物部分的ADC。因而可以设计、控制并知道药物部分的位置。可以控制药物负载，因为工程化半胱氨酸巯基典型地以高产率与巯基-反应性接头试剂或药物-接头试剂反应。工程化IgG抗体以通过在重链或轻链上的单一位点的替换来引入半胱氨酸氨基酸，在对称抗体上给出两个新半胱氨酸。可以实现接近2的药物负载，并接近偶联产物ADC的均一性。
[0176] 其中，抗体的一种以上的亲核或亲电基团与药物-接头中间体或接头试剂反应，随后再与药物部分试剂反应，然后制得的产物为具有附连至抗体的药物部分分布(例如1、2、3个等)的ADC化合物的混合物。液体色谱法(如聚合物反相(PLRP)以及疏水性相互作用(HIC))可通过药物负载值分离混合物中的化合物。可以分离具有单一药物负载值(p)的ADC制剂， 然而，这些单一负载值ADC可能仍然是非均一混合物，因为药物部分可以经由接头附连至抗体的不同位点。
[0177] 因此，本发明的抗体-药物偶联物组合物包括抗体-药物偶联物化合物的混合物，其中抗体具有一个或多个PBD药物部分，并且其中药物部分可以附连至抗体的各个氨基酸残基上。
[0178] 在一个实施方式中，每个细胞结合剂的二聚体吡咯并苯并二氮杂卓基团的平均数范围为1～20。在一些实施方式中，该范围选自1～8、2～8、2～6、2～4以及4～8。
[0179] 在一些实施方式中，每个细胞结合剂具有一个二聚体吡咯并苯并二氮杂卓基团。
[0180] 肽
[0181] 在一个实施方式中，细胞结合剂为包含4～20，优选地6～20个连续氨基酸残基的线性或环状肽。在该实施方式中，优选一个细胞结合剂与一个单体或二聚体吡咯并苯并二氮杂卓化合物连接。
[0182] 在一个实施方式中，细胞结合剂包含结合整联蛋白ανβ6的肽。与XYS相比较该肽可以对ανβ6具有选择性。
[0183] 在一个实施方式中，细胞结合剂包含A20FMDV-Cys多肽。该A20FMDV-Cys具有序列：NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC。可替换地，可以使用A20FMDV-Cys序列的变体，其中一、二、三、四、五、六、七、八、九或十个氨基酸残基被其他氨基酸残基替换。
[0184] 在一个实施方式中，所述抗体是单克隆抗体；嵌合抗体；人化抗体；完全人抗体；或单链抗体。一个实施方式，抗体为具有生物活性的这些抗体之一的片段。这样的片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2以及Fv片段。
[0185] 在这些实施方式中，每个抗体可以与一个或几个二聚体吡咯并苯并二氮杂卓基团连接。以上给出了吡咯并苯并二氮杂卓与细胞结合剂的优选比率。
[0186] 所述抗体可以是结构域抗体(DAB)。
[0187] 在一个实施方式中，所述抗体是单克隆抗体。
[0188] 用于本发明的抗体包括在WO 2005/082023中所描述的那些抗体，其并入本文中。特别优选用于肿瘤相关抗原的那些抗体。本领域已知的那些 抗原的例子包括但不限于在WO 2005/082023中列出的那些肿瘤相关抗原。参见，例如，第41-55页。
[0189] 本发明的偶联物设计成通过肿瘤细胞表面抗原靶向肿瘤细胞。这些抗原通常是正常的细胞表面抗原，其是过表达或在异常时间表达。理想地，靶抗原仅在增殖细胞(优选地肿瘤细胞)上表达，然而这在实践中很少观察到。因此，靶抗原通常基于增殖的组织和健康的组织之间的差异表达来选择。
[0190] 已经生产出靶向特异性肿瘤相关抗原的抗体，包括：Cripto、CD30、CD19、CD33、糖蛋白NMB、CanAg、Her2(ErbB2/Neu)、CD56(NCAM)、CD22(Siglec2)、CD33(Siglec3)、CD79、CD138、PSCA、PSMA(前列腺特异性膜抗原)、BCMA、CD20、CD70、E-选择蛋白、EphB2、黑色素转铁蛋白、Muc16和TMEFF2。
[0191] 肿瘤相关抗原(TAA)是本领域中已知的，并且可以制备以用于利用本领域熟知的方法和信息来产生抗体。在试图发现用于癌症诊断和治疗的有效细胞靶点时，研究人员已经试图确定，与一种或多种正常非癌细胞相比，在一种或多种特定类型癌细胞的表面上特异性表达的跨膜或其他肿瘤相关的多肽。通常，与在非癌细胞的表面上相比，这样的肿瘤相关多肽更大量地表达于癌细胞的表面上。这样的肿瘤相关细胞表面抗原多肽的鉴定，已经产生通过基于抗体的治疗来特异性地靶向杀伤癌细胞的能力。
[0192] TAA的例子包括但不限于在下面列出的TAA(1)-(36)。为方便起见，关于所有在本领域中已知的这些抗原的信息在下面列出，并包括名称、替代名称、Genbank登记号以及主要参考文献，遵循国家生物技术信息中心(NCBI)的核酸和蛋白序列鉴定规则。对应TAA(1)-(36)的核酸和蛋白质序列可在公共数据库如GenBank中获取。抗体靶向的肿瘤相关抗原包括相对于所引证的参考文献中确认的序列具有至少约70％、80％、85％、90％,或95％序列一致性，或表现出与具有在所引证的参考文献中找到的序列的TAA基本相同的生物性质或特征的所有氨基酸序列变体和同种型。例如，具有变体序列的TAA通常能够特异性地与抗体结合，所述抗体特异性地与具有所列出的相应序列的TAA结合。在具体引证的参考文献中的序列和公开明确地通过引用并入本文中。
[0193] 肿瘤相关的抗原(1)-(36)：
[0194] (1)BMPR1B(骨形态生成蛋白受体类型IB，Genbank登记号NM_001203)ten Dijke,P.等 人 Science264(5155):101-104(1994),Oncogene14(11):1377-1382(1997))；WO2004/063362(权利要求2)；WO2003/042661(权利要求12)；US2003/134790-A1(第
38-39 页 )；WO2002/102235( 权 利 要 求 13；第 296 页 )；WO2003/055443( 第 91-92页 )；WO2002/99122( 实 施 例 2；第 528-530 页 )；WO2003/029421( 权 利 要 求 6)；
WO2003/024392(权 利 要 求2；图112)；WO2002/98358( 权 利 要 求 1；第 183页 )；
WO2002/54940(第100-101页)；WO2002/59377(第349-350页)；WO2002/30268(权利要求
27；第376页)；WO2001/48204(实施例；图4)；NP_001194骨形态生成蛋白受体，类型IB/pid＝NP_001194.1。交叉引用：MIM:603248；NP_001194.1；AY065994
[0195] (2)E16(LAT1,SLC7A5,Genbank登记号NM_003486)Biochem.Biophys.Res.Commun.255(2),283-288(1999),Nature395(6699):288-291(1998),Gaugitsch,H.W.等人(1992)J.Biol.Chem.267(16):11267-11273)；WO2004/048938(实施例2)；WO2004/032842(实施例IV)；WO2003/042661(权利要求12)；WO2003/016475(权利要求1)；WO2002/78524(实施例2)；WO2002/99074(权利要求19；第127-129页)；WO2002/86443(权利要求27；第222、393页)；WO2003/003906(权利要求10；第293页)；WO2002/64798(权利要求33；第93-95页)；
WO2000/14228(权利要求5；第133-136页)；US2003/224454(图3)；WO2003/025138(权利要求12；第150页)；NP_003477溶质载体家族7(阳离子氨基酸转运体，y+系统)，成员5/pid＝NP_003477.3-人类；交叉引用：MIM:600182；NP_003477.3；NM_015923；NM_003486_1[0196] (3)STEAP1(前列腺六次跨膜上皮抗原，Genbank登记号NM_012449)；Cancer Res.61(15),5857-5860(2001),Hubert,R.S. 等 人 (1999)Proc.Natl.Acad.Sci.
U.S.A.96(25):14523-14528)；WO2004/065577( 权 利 要 求6)；WO2004/027049(图 1L)；
EP1394274(实 施 例11)；WO2004/016225(权 利要 求 2)；WO2003/042661(权 利 要 求
12)；US2003/157089( 实 施 例5)；US2003/185830(实 施 例 5)；US2003/064397( 图2)；
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第173页，实施例2；图2A)；NP_036581前列腺六次跨膜上皮抗原；交叉引用：MIM:604415；
NP_036581.1；NM_012449_1
[0197] (4)0772P(CA125,MUC16,Genbank 登 记 号 AF361486)；J.Biol.Chem.276(29):27371-27375(2001))；WO2004/045553(权利要求14)；WO2002/92836(权利要求6；图12)；WO2002/83866(权利要求15；第116-121页)；US2003/124140(实施例16)；
交叉引用：GI:34501467；AAK74120.3；AF361486_1
[0198] (5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核细胞强化因子、间皮素，Genbank登记号NM_005823)Yamaguchi,N. 等 人 Biol.Chem.269(2),805-808(1994),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(20):11531-11536(1999),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93(1):136-140(1996),J.Biol.Chem.270(37):21984-21990(1995))；WO2003/101283(权利要求14)；(WO2002/102235(权利 要 求 13；第 287-288 页 )；WO2002/101075( 权 利 要 求 4；第 308-309 页 )；WO2002/71928(第320-321页)；WO94/10312(第52-57 页)；交 叉引 用：MIM:601051；
NP_005814.2；NM_005823_1
[0199] (6)Napi3b(NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶质载体家族34(磷酸钠)，成员2、II型钠依赖性磷酸盐转运蛋白3b，Genbank登记号NM_006424)J.Biol.Chem.277(22):19665-19672(2002),Genomics62(2):281-284(1999),Feild,J.A. 等 人 (1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.258(3):578-582)；WO2004/022778(权利要求2)；EP1394274(实施例11)；WO2002/102235(权利要求13；第326页)；EP0875569(权利要求1；第17-19页)；
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[0200] (7)Sema5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、Semaphorin5b Hlog、sema结构域、七凝血酶敏感蛋白重复(型I和型-I样)、跨膜结构域(TM)和短胞质结构域、(Semaphorin)5B，Genbank登记号AB040878)；Nagase T.等人(2000)DNA Res.7(2):143-150)；WO2004/000997(权利要求1)；WO2003/003984(权利要求1)；
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WO2003/054152(权利要求20)；WO2003/101400(权利要求11)；登记号：Q9P283；EMBL；
AB040878；BAA95969.1.Genew；HGNC:10737
[0201] (8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA2700050C12、RIKEN cDNA2700050C12基 因，Genbank 登 记 号 AY358628)；Ross等 人 (2002)Cancer Res.62:2546-2553；US2003/129192(权 利 要求2)； US2004/044180( 权利 要求 12)；US2004/044179(权利要求11)；US2003/096961(权利要求11)；US2003/232056(实施例
5)；WO2003/105758(权利要求12)；US2003/206918(实施例5)；EP1347046(权利要求1)；
WO2003/025148(权利要求20)；交叉引用：GI:37182378；AAQ88991.1；AY358628_1[0202] (9)ETBR(内皮素B型受体，Genbank登记号AY275463)；Nakamuta M.等人
Biochem.Biophys.Res.Commun.177,34-39,1991；Ogawa Y. 等 人 Biochem.Biophys.Res.Commun.178,248-255,1991；Arai H. 等 人 Jpn.Circ.J.56,1303-1307,1992；
Arai H. 等 人 J.Biol.Chem.268,3463-3470,1993；Sakamoto A.,Yanagisawa M. 等 人Biochem.Biophys.Res.Commun.178,656-663,1991；Elshourbagy N.A. 等 人 J.Biol.Chem.268,3873-3879,1993；Haendler B.等人J.Cardiovasc.Pharmacol.20,s1-S4,1992；
Tsutsumi M. 等 人 Gene228,43-49,1999；Strausberg R.L. 等 人 Proc.Natl.
Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002；Bourgeois C. 等 人 J.Clin.Endocrinol.Metab.82,3116-3123,1997；Okamoto Y. 等 人 Biol.Chem.272,21589-21596,1997；
Verheij J.B. 等 人 Am.J.Med.Genet.108,223-225,2002；Hofstra R.M.W. 等 人 Eur.J.Hum.Genet.5,180-185,1997；Puffenberger E.G. 等 人 Cell79,1257-1266,1994；
Attie T. 等 人，Hum.Mol.Genet.4,2407-2409,1995；Auricchio A. 等 人 Hum.Mol.Genet.5:351-354,1996；Amiel J. 等 人 Hum.Mol.Genet.5,355-357,1996；
Hofstra R.M.W. 等 人 Nat.Genet.12,445-447,1996；Svensson P.J. 等 人 Hum.Genet.103,145-148,1998；Fuchs S.等人Mol.Med.7,115-124,2001；Pingault V.等人(2002)Hum.Genet.111,198-206；WO2004/045516(权利要求1)；WO2004/048938(实施例
2)；WO2004/040000(权利要求151)；WO2003/087768(权利要求1)；WO2003/016475(权利 要 求1)；WO2003/016475( 权 利 要 求1)；WO2002/61087( 图1)；WO2003/016494( 图
6)；WO2003/025138(权利要求12；第144页)；WO2001/98351(权利要求1；第124-125页)；EP0522868( 权利要求8；图2)；WO2001/77172(权利要求1；第297-299页)；
US2003/109676；US6518404(图3)；US5773223(权利要求1a；第31-34栏)；WO2004/001004[0203] (10)MSG783(RNF124、假 定 蛋 白 FLJ20315，Genbank 登 记 号 NM_017763)；
WO2003/104275(权 利要 求1)；WO2004/046342(实 施例2)；WO2003/042661(权 利 要求12)；WO2003/083074( 权利 要 求14；第 61页)； WO2003/018621(权 利 要求 1)；
WO2003/024392(权利要求2；图93)；WO2001/66689(实施例6)；交叉引用：LocusID:54894；
NP_060233.2；NM_017763_1
[0204] (11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相关基因1、前列腺癌相关蛋白1、前列腺六次跨膜上皮抗原2、六次跨膜前列腺蛋白质，Genbank 登 记 号 AF455138)；Lab.Invest.82(11):1573-1582(2002))；WO2003/087306；US2003/064397(权 利 要 求1；图1)；WO2002/72596( 权 利 要 求 13；第54-55页)；
WO2001/72962(权利要求1；图4B)；WO2003/104270(权利要求11)；WO2003/104270(权利要求16)；US2004/005598(权利要求22)；WO2003/042661(权利要求12)；US2003/060612(权利要求12；图10)；WO2002/26822(权利要求23；图2)；WO2002/16429(权利要求12；图10)；
交叉引用：GI:22655488；AAN04080.1；AF455138_1
[0205] (12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬 时 受 体 电位 阳 离 子 通道、亚家族 M，成员4，Genbank登记 号NM_017636)；Xu,X.Z.等 人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(19):10692-10697(2001),Cell109(3):397-407(2002),J.Biol.Chem.278(33):30813-30820(2003))；US2003/143557(权利要求4)；WO2000/40614(权利要求14；第100-103页)；WO2002/10382(权利要求1；图9A)；WO2003/042661(权利要求12)；
WO2002/30268(权利要求27；第391页)；US2003/219806(权利要求4)；WO2001/62794(权利要求14；图1A-D)；交叉引用：MIM:606936；NP_060106.2；NM_017636_1
[0206] (13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸胎癌衍生生长因子，Genbank登记号NP_003203或NM_003212)；Ciccodicola,A.等人EMBO J.8(7):1987-1991(1989),Am.J.Hum.Genet.49(3):555-565(1991))；US2003/224411(权利要求1)；WO2003/083041(实施例1)；WO2003/034984(权利要求12)；WO2002/88170(权利要求2；第52-53页)；WO2003/024392(权利要求2；图58)；WO2002/16413(权利要求1；第94-95、105页)；
WO2002/22808(权利要求2；图1)；US5854399(实施例2；第17-18栏)；US5792616(图2)；
交叉引用：MIM:187395；NP_003203.1；NM_003212_1
[0207] (14)CD21(CR2(补 体 受 体 2) 或C3DR(C3d/ 爱 泼 斯 坦- 巴 尔 病 毒 受体 ) 或 Hs.73792Genbank 登 记 号 M26004)；Fujisaku 等 人 (1989)J.Biol.Chem. 264(4):2118-2125)；Weis J.J., 等 人 J.Exp.Med.167,1047-1066,1988；
Moore M., 等 人 Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84,9194-9198,1987；Barel M., 等人 Mol.Immunol.35,1025-1031,1998；Weis J.J., 等 人 Proc.Natl.Acad.Sci.
U.S.A.83,5639-5643,1986；Sinha S.K., 等 人 (1993)J.Immunol.150,5311-5320；
WO2004/045520(实施例4)；US2004/005538(实施例1)；WO2003/062401(权利要求9)；
WO2004/045520(实施例4)；WO91/02536(图9.1-9.9)；WO2004/020595(权利要求1)；登记号：P20023；Q13866；Q14212；EMBL；M26004；AAA35786.1.
[0208] (15)CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相关β)、B29，Genbank登记号NM_000626 或 11038674)；Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2003)100(7):4126-4131,Blood(2002)100(9):3068-3076,Muller 等 人 (1992)Eur.J.Immunol.22(6):1621-1625)；WO2004/016225(权利要求2，图140)；WO2003/087768、US2004/101874(权利要求1，第102页)；WO2003/062401(权利要求9)；WO2002/78524(实施例2)；US2002/150573(权利要求5，第15页)；US5644033；WO2003/048202(权利要求1，第306和309页)；WO99/58658、US6534482(权利要求13，图17A/B)；WO2000/55351(权利要求11，第1145-1146页)；交叉引用：MIM:147245；NP_000617.1；NM_000626_1
[0209] (16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含有SH2结构域的磷酸酶锚定蛋白Ia)、SPAP1B、SPAP1C，Genbank登记号NM_030764、AY358130)；Genome Res.13(10):2265-2270(2003),Immunogenetics54(2):87-95(2002),Blood99(8):2662-2669(2002),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(17):9772-9777(2001),Xu,M.J.,等人(2001)Biochem.Biophys.Res.Commun.280(3):768-775；WO2004/016225(权利要求2)；WO2003/077836；WO2001/38490(权利要求5；图18D-1-18D-2)；WO2003/097803(权利要求12)；WO2003/089624(权利要求25)；交叉引用：MIM:606509；NP_110391.2；NM_030764_1
[0210] (17)HER2(ErbB2，Genbank登 记 号M11730)；Coussens L.,等 人 Science(1985)230(4730):1132-1139)；Yamamoto T. 等 人 Nature319,230-234,1986；Semba K. 等人 Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82,6497-6501,1985；Swiercz J.M. 等 人 J.Cell Biol.165,869-880,2004；Kuhns J.J. 等 人 J.Biol.Chem.274,36422-36427,1999；Cho H.-S. 等 人 Nature421,756-760,2003；Ehsani A., 等 人 (1993)Genomics15,426-429；
WO2004/048938(实施例2)； WO2004/027049( 图1I)；WO2004/009622；WO2003/081210；
WO2003/089904( 权 利 要 求 9)；WO2003/016475( 权 利 要 求 1)；US2003/118592；
WO2003/008537(权利要求1)；WO2003/055439(权利要求29；图1A-B)；WO2003/025228(权利要求37；图5C)；WO2002/22636(实施例13；第95-107页)；WO2002/12341(权利要求68；
图7)；WO2002/13847(第71-74页)；WO2002/14503(第114-117页)；WO2001/53463(权利 要 求2；第41-46 页)；WO2001/41787(第15 页)；WO2000/44899(权 利 要 求 52；
图7)；WO2000/20579( 权利 要 求3；图2)；US5869445(权利 要 求3；第31-38栏 )；
WO9630514(权利要求2；第56-61页)；EP1439393(权利要求7)；WO2004/043361(权利要求7)；WO2004/022709；WO2001/00244(实施例3；图4)；登记号：P04626；EMBL；M11767；
AAA35808.1.EMBL；M11761；AAA35808.1
[0211] (18)NCA(CEACAM6，Genbank 登 记 号 M18728) ；Barnett T. 等人 Genomics3,59-66,1988；Tawaragi Y. 等 人 Biochem.Biophys.Res.
Commun.150,89-96,1988；Strausberg R.L. 等 人 Proc.Natl.Acad.Sci.
U.S.A.99:16899-16903,2002；WO2004/063709；EP1439393( 权 利 要 求 7)；
WO2004/044178( 实 施 例 4)；WO2004/031238；WO2003/042661( 权 利 要 求 12)；
WO2002/78524(实施例2)；WO2002/86443(权利要求27；第427页)；WO2002/60317(权利要求2)；登记号：P40199；Q14920；EMBL；M29541；AAA59915.1.EMBL；M18728
[0212] (19)MDP(DPEP1，Genbank 登 记 号 BC017023)；Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99(26):16899-16903(2002))；WO2003/016475(权利要求1)；WO2002/64798(权利要求33；第85-87页)；JP05003790(图6-8)；WO99/46284(图9)；交叉引用：MIM:179780；
AAH17023.1；BC017023_1
[0213] (20)IL20Rα(IL20Ra、ZCYTOR7，Genbank登记号AF184971)；Clark H.F.等人Genome Res.13,2265-2270,2003；Mungall A.J.等人Nature425,805-811,2003；Blumberg H. 等 人 Cell104,9-19,2001；Dumoutier L. 等 人 J.Immunol.167,3545-3549,2001；Parrish-Novak J.等人J.Biol.Chem.277,47517-47523,2002；Pletnev S.等人(2003)Biochemistry42:12617-12624；Sheikh F. 等 人 (2004)J.Immunol.172,2006-2010；
EP1394274(实 施 例11)；US2004/005320(实 施 例5)；WO2003/029262(第74-75页 )；
WO2003/002717(权利要求2；第63页)；WO2002/22153(第45-47页)；US2002/042366(第
20-21页)；WO2001/46261(第57-59页)；WO2001/46232(第63-65页)； WO98/37193(权利要求1；第55-59页)；登记号：Q9UHF4；Q6UWA9；Q96SH8；EMBL；AF184971；AAF01320.1.[0214] (21)短蛋白聚糖(BCAN、BEHAB，Genbank登记号AF229053)；Gary S.C.等人Gene256,139-147,2000；Clark H.F. 等 人Genome Res.13,2265-2270,2003；Strausberg R.L. 等 人 Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002；US2003/186372( 权利要 求11)；US2003/186373(权 利要求 11)；US2003/119131(权 利要求 1；图 52)；
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[0215] (22)EphB2R(DRT、ERK、Hek5、EPHT3、Tyro5，Genbank登记号NM_004442)；Chan,J.和Watt,V.M.,Oncogene6(6),1057-1061(1991)Oncogene10(5):897-905(1995),Annu.Rev.Neurosci.21:309-345(1998),Int.Rev.Cytol.196:177-244(2000))；WO2003042661( 权利 要 求12)；WO200053216( 权利 要 求1；第 41页)；WO2004065576( 权利 要 求1)；WO2004020583(权利要求9)；WO2003004529(第128-132页)；WO200053216(权利要求1；
第42页)；交叉引用：MIM:600997；NP_004433.2；NM_004442_1
[0216] (23)ASLG659(B7h，Genbank登 记 号AX092328)；US2004/0101899(权 利 要 求2)；WO2003104399(权利要求11)；WO2004000221(图3)；US2003/165504(权利要求1)；
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第45-46页)；WO2002/06317(实施例2；第320-321页，权利要求34；第321-322页)；
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第190-192页)；WO2000/36107(实施例2；第205-207页)；WO2004/053079(权利要求12)；
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Reiter R.E. 等 人 Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95,1735-1740,1998；Gu Z. 等 人 Oncogene19,1288-1296,2000；Biochem.Biophys.Res.Commun.(2000)275(3):783-788；
WO2004/022709；EP1394274( 实 施 例 11)；US2004/018553( 权 利 要 求 17)；
WO2003/008537(权利要求1)；WO2002/81646(权利要求1；第164页)；WO2003/003906(权利要求10；第288页)；WO2001/40309(实施例1；图17)；US2001/055751(实施例1；图1b)；
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AAC39607.1
[0218] (25)GEDA(Genbank登记号AY260763)；AAP14954脂肪瘤HMGIC融合-伴侣-样蛋白/pid＝AAP14954.1–人类(人)；WO2003/054152(权利要求20)；WO2003/000842(权利要求1)；WO2003/023013(实施例3，权利要求20)；US2003/194704(权利要求45)；交叉引用：GI:30102449；AAP14954.1；AY260763_1
[0219] (26)BAFF-R(B细胞-活化因子受体、BlyS受体3、BR3，Genbank登记号AF116456)；BAFF受体/pid＝NP_443177.1–人类：Thompson,J.S.等人Science293(5537),2108-
2111(2001)；WO2004/058309；WO2004/011611；WO2003/045422( 实 施 例；第32-33页 )；
WO2003/014294(权利要求35；图6B)；WO2003/035846(权利要求70；第615-616页)；
WO2002/94852(第136-137栏)；WO2002/38766(权利要求3；第133页)；WO2002/24909(实施例3；图3)；交叉引用：MIM:606269；NP_443177.1；NM_052945_1；AF132600
[0220] (27)CD22(B- 细 胞 受 体 CD22-B 同 种 型、BL-CAM、Lyb-8、Lyb8、SIGLEC-2、FLJ22814，Genbank登 记 号AK026467)；Wilson 等 人 (1991)J.Exp.Med.173:137-146；WO2003/072036(权利要求1；图1)；交叉引用：MIM:107266；NP_001762.1；NM_001771_1[0221] (28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相关α、一种B细胞特异性蛋白质，其与Igβ(CD79B)共价相互作用并与Ig M分子在表面上形成复合物，转导涉及B细胞分化的信号)，pI:4.84,MW:25028TM:2[P]基因染色体：19q13.2，Genbank登记号NP_001774.10)；
WO2003/088808,US2003/0228319；WO2003/062401( 权 利 要 求 9)；US2002/150573( 权利 要 求4，第13-14 页)；WO99/58658(权 利 要 求13，图 16)；WO92/07574( 图1)；
US5644033；Ha 等 人 (1992)J.Immunol.148(5):1526-1531；Müller 等 人 (1992)Eur.J.Immunol..22:1621-1625；Hashimoto 等 人 (1994)Immunogenetics40(4):287-295；
Preud’homme 等 人 (1992)Clin.Exp.Immunol.90(1):141-146；Yu 等 人 (1992)J.Immunol.148(2)633-637；Sakaguchi等人(1988)EMBO J.7(11):3457-3464
[0222] (29)CXCR5(伯基特淋巴瘤受体1，一种G蛋白偶联的受体，其由CXCL13趋化因子激活，在淋巴细胞迁移和体液防御中发挥功能，在HIV-2感染以及可能发展AIDS、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病中起作用)；372aa,pI:8.54MW:41959TM:7[P]基因染色体：11q23.3，Genbank 登 记 号NP_001707.1)；WO2004/040000；WO2004/015426；US2003/105292(实 施例2)；US6555339(实施例2)；WO2002/61087(图1)；WO2001/57188(权利要求20，第269页)；WO2001/72830(第12-13页)；WO2000/22129(实施例1，第152-153页，实施例2，第254-256页)；WO99/28468(权利要求1，第38页)；US5440021(实施例2，第49-52栏)；
WO94/28931(第56-58页)；WO92/17497(权利要求7，图5)；Dobner等人(1992)Eur.J.Immunol.22:2795-2799；Barella等人(1995)Biochem.J.309:773-779
[0223] (30)HLA-DOB(与肽结合并且将它们呈递给CD4+T淋巴细胞的MHC II类分子(Ia抗原)的β亚基)；273aa,pI:6.56,MW:30820.TM:1[P]基因染色体：6p21.3，Genbank登记号NP_002111.1)；Tonnelle等人(1985)EMBO J.4(11):2839-2847；Jonsson等人(1989)Immunogenetics29(6):411-413；Beck等人(1992)J.Mol.Biol.228:433-441；Strausberg等 人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA99:16899-16903；Servenius等 人 (1987)J.Biol.Chem.262:8759-8766；Beck 等 人 (1996)J.Mol.Biol.255:1-13；Naruse 等 人 (2002)Tissue Antigens59:512-519；WO99/58658(权利要求13,图15)；US6153408(第35-38栏)；US5976551(第168-170栏 )；US6011146(第 145-146栏)；Kasahara等 人 (1989)Immunogenetics30(1):66-68；Larhammar等人(1985)J.Biol.Chem.260(26):14111-14119[0224] (31)P2X5(嘌呤型受体P2X配体门控离子通道5，一种由细胞外ATP门控的离子通道，可参与突触传递和神经发生，缺陷可促成特发性逼尿肌不稳定的病理生理学)；422aa),pI:7.63,MW:47206TM:1[P]基因染色体：17p13.3，Genbank登记号NP_002552.2)；
Le等人(1997)FEBS Lett.418(1-2):195-199；WO2004/047749；WO2003/072035(权利要求10)；Touchman等人(2000)Genome Res.10:165-173；WO2002/22660(权利要求 20)；
WO2003/093444(权利要求1)；WO2003/087768(权利要求1)；WO2003/029277(第82页)[0225] (32)CD72(B细胞分化抗原CD72、Lyb-2)；359aa,pI:8.66,MW:40225,TM:1[P]基因染色体：9p13.3，Genbank登记号NP_001773.1)；WO2004042346(权利要求65)；
WO2003/026493( 第 51-52、57-58 页 )；WO2000/75655( 第 105-106 页 )；Von Hoegen 等人(1990)J.Immunol.144(12):4870-4877；Strausberg等 人 (2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA99:16899-16903.
[0226] (33)LY64(淋巴细胞抗原64(RP105)，富含亮氨酸重复(LRR)家族的I型膜蛋白，调节B-细胞激活和凋亡，功能的损失与患有全身性红斑性狼疮患者的增加的疾病活性有关)；661aa,pI:6.20,MW:74147TM:1[P]基因染色体：5q12,Genbank登记号NP_005573.1)；US2002/193567；WO97/07198(权利 要求11，第 39-42页)；Miura等 人(1996)Genomics38(3):299-304；Miura等人(1998)Blood92:2815-2822；WO2003/083047；
WO97/44452(权利要求8，第57-61页)；WO2000/12130(第24-26页)
[0227] (34)FcRH1(Fc受 体 样 蛋 白1，一 种 针 对含 有 C2型Ig样 和ITAM 结 构域的免疫球蛋白Fc结构域的假定受体，可能在B-淋巴细胞分化中发挥作用)；429aa,pI:5.28,MW:46925TM:1[P]基因染色体：1q21-1q22，Genbank登记号NP_443170.1)；
WO2003/077836；WO2001/38490(权利要求6,图18E-1-18-E-2)；Davis等人(2001)Proc.Natl.Acad.Sci USA98(17):9772-9777；WO2003/089624(权利要求8)；EP1347046(权利要求1)；WO2003/089624(权利要求7)
[0228] (35)IRTA2(免疫球蛋白超家族受体易位相关2，一种在B细胞发育和淋巴瘤生成中可能起作用的假定免疫受体；在一些B细胞恶性肿瘤中通过发生易位导致基因调节异常)；977aa,pI:6.88,MW:106468,TM:1[P]基因染色体：1q21，Genbank登记号人：AF343662、AF343663、AF343664、AF343665、AF369794、AF397453、AK090423、AK090475、AL834187、AY358085；小 鼠：AK089756、AY158090、AY506558；NP_112571.1；WO2003/024392( 权 利要 求2，图97)；Nakayama 等人 (2000)Biochem.Biophys.Res.Commun.277(1):124-127；WO2003/077836；WO2001/38490(权利要求3，图18B-1-18B-2)
[0229] (36)TENB2(TMEFF2、tomoregulin、TPEF、HPP1、TR、假定的跨膜蛋白聚糖，与生长因子和卵泡抑制素的EGF/神经生长因子家族有关)；374aa,NCBI登记号：AAD55776、AAF91397、AAG49451，NCBI RefSeq:NP_057276；NCBI 基 因 :23671；OMIM:605734；SwissProt Q9UIK5；Genbank 登 记 号：AF179274；AY358907、CAF85723、CQ782436；
WO2004/074320；JP2004113151；WO2003/042661；WO2003/009814；EP1295944( 第 69-70页 )；WO2002/30268( 第 329 页 )；WO2001/90304；US2004/249130；US2004/022727；
WO2004/063355；US2004/197325；US2003/232350；US2004/005563；US2003/124579；
Horie 等 人 (2000)Genomics67:146-152；Uchida 等 人 (1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.266:593-602；Liang 等 人 (2000)Cancer Res.60:4907-12；Glynne-Jones 等 人(2001)Int J Cancer.Oct15；94(2):178-84.
[0230] 亲本抗体还可以是包含白蛋白结合肽(ABP)序列的融合蛋白(Dennis等人(2002)“Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins”J Biol Chem.277:35035-35043；WO01/45746)。本发明的抗体包括具有以下教导的ABP序列的融合蛋白：(i)Dennis等人(2002)J Biol Chem.277:35035-35043在表III和表IV，第35038页；(ii)US2004/0001827在[0076]段；和(iii)WO01/45746在第
12-13页，并且所有这些通过引用并入本文中。
[0231] 在一个实施方式中，产生所述抗体以靶向特异性的肿瘤相关抗原ανβ6。
[0232] 可以标记细胞结合剂，例如以协助检测或纯化在结合之前作为偶联物或作为偶联物的一部分的试剂。标记可以是生物素标记。在另一个实施方式中，细胞结合剂可以用放射性同位素标记。
[0233] R和R’
[0234] 在一个实施方式中，R独立地选自可选取代的C1-12烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基。这些基团各自在下面取代基章节中定义。
[0235] 在一个实施方式中，R独立地是可选取代的C1-12烷基。
[0236] 在一个实施方式中，R独立地是可选取代的C3-20杂环基。
[0237] 在一个实施方式中，R独立地是可选取代的C5-20芳基。
[0238] 在一个实施方式中，R独立地是可选取代的C1-12烷基。
[0239] 关于R2的以上描述是涉及优选的烷基和芳基以及可选取代基的特性和数量的各2
种实施方式。当其应用于R时对于R 提出的偏好，在适当的时候，适用于所有其他基团R，
6 7 8 9
例如在R、R、R 或R 是R时。
[0240] 对R的偏好也适用于R’。
[0241] 在本发明的一些实施方式中，提供了具有取代基-NRR’的化合物。在一个实施方式中，R和R’与它们附连的氮原子一起形成可选取代的4-、5-、6-或7-元杂环。该环可以含有其他杂原子，例如N、O或S。
[0242] 在一个实施方式中，所述杂环本身被基团R取代。在存在其他N杂原子时，该取代基可在该N杂原子上。
[0243] R”
[0244] R”是C3-12亚烷基，其链可以被一个或多个杂原子(例如O、S、N(H)、NMe)和/或芳族环(例如苯或吡啶)中断，所述环是可选取代的。
[0245] 在一个实施方式中，R″是C3-12亚烷基，其链可以被一个或多个杂原子和/或芳族环(例如苯或吡啶)中断。
[0246] 在一个实施方式中，所述亚烷基可选地被一个或多个选自O、S和NMe中的杂原子和/或芳族环中断，所述环是可选取代的。
[0247] 在一个实施方式中，所述芳族环是C5-20亚芳基，其中亚芳基涉及通过从芳族化合物的两个芳族环原子上去除两个氢原子得到的二价部分，该部分具有5～20个环原子。
[0248] 在一个实施方式中，R″是C3-12亚烷基，其链可以被一个或多个杂原子(例如O、S、N(H)、NMe)和/或芳族环(例如苯或吡啶)中断，该环可选地被NH2取代。
[0249] 在一个实施方式中，R″是C3-12亚烷基，.
[0250] 在一个实施方式中，R″选自C3、C5、C7、C9和C11亚烷基。
[0251] 在一个实施方式中，R″选自C3、C5和C7亚烷基。
[0252] 在一个实施方式中，R″选自C3和C5亚烷基。
[0253] 在一个实施方式中，R″是C3亚烷基。
[0254] 在一个实施方式中，R″是C5亚烷基。
[0255] 以上列举的亚烷基可以可选地被一个或多个杂原子和/或芳族环(例如苯或吡啶)中断，该环是可选取代的。
[0256] 以上列举的亚烷基可以可选地被一个或多个杂原子和/或芳族环(例如苯或吡啶)中断。
[0257] 以上列举的亚烷基可以是未取代的直链脂族亚烷基。
[0258] X
[0259] 在一个实施方式中，X选自O、S或N(H)。
[0260] 优选地，X是O。
[0261] E
[0262] 其中一个或两个C环被式E的环替换的化合物，具有基团R2，其与R1或R3之一连同它们附连的C环的碳原子一起形成可选取代的苯环。可以认为所述可选取代的苯环与吡咯并苯并二氮杂卓的C环稠合。该稠合的苯环可称为D环。该稠环的结构如下所示：
[0263]
[0264] 其中D1、D2、D3和D4各自表示H或取代基。
[0265] 在一个实施方式中，苯环是未取代的。
[0266] 在一个实施方式中，苯环可选地被选自OH、CN、R、OR、O-SO2-R、CO2R、COR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和卤素中的一个、两个、三个或四个基团取代。
[0267] 在一个实施方式中，苯环是单取代的。该单取代基可以为D1、D2、D3或D4中的任何2 1 3 4
一种(其余为H)。在一个实施方式中，苯环在D 处取代，并且D、D 和D 各自为H。在一
3 1 2 4
个实施方式中，苯环在D 处取代，并且D、D 和D 各自为H。
[0268] 在一个实施方式中，R2与R1，连同它们附连的C环的碳原子一起形成可选取代的苯环。
[0269] 对于V和W的偏好在下面列出。
[0270] F
[0271] 在其中一个或两个C环被式F的环替换的化合物中：
[0272] 在一个实施方式中，当T为NR、BH、SO或SO2时，U为CH2。
[0273] 在一个实施方式中，当U为NR、O或S时，T为CH2或CO。
[0274] 在一个实施方式中，T选自CH2和CO。
[0275] 在一个实施方式中，U选自NR、O和S。
[0276] 在一个实施方式中，Y为(CH2)n，其中n为1或2。
[0277] 在一个实施方式中，化合物A-B的C环具有选自如下所示的结构：
[0278]
[0279] V和W
[0280] V和W各自选自(CH2)n、O、S、NR、CHR和CRR’，其中n是2、3或4，除了当R1和R2连同它们附连的C环的碳原子一起形成可选取代的苯环时，V为C，并且当R3和R2连同它们附连的C环的碳原子一起形成可选取代的苯环时，W是C。
[0281] 在一个实施方式中，当V和W中的一个是C时，V和W中的另一个选自CH2和NR。
[0282] 在一个实施方式中，当V和W中的一个为C时，V和W中的另一个是CH2。
[0283] 优选的化合物
[0284] 在一个实施方式中，所述偶联物是二聚体，其中PBD部分的每一个都具有C2亚甲基，即每个R2都为＝CH2。优选所述细胞结合剂是抗体。
[0285] 在另一个实施方式中，所述偶联物是二聚体，其中单体的每一个都具有C2芳基，即每个R2都为可选取代的C5-20芳基，并且在每个PBD部分中的C2和C3之间存在双键。优选所述细胞结合剂是抗体。
[0286] C2亚烷基
[0287] 在一个实施方式中，所述偶联物是化合物：
[0288]
[0289] 并且更优选地是：
[0290]
[0291] 其中CBA是细胞结合剂，如抗体或环状或直链肽，并且n是0或1。Y、RL1和RL2如E E” D先前所定义，并且R 和R 各自独立地选自H或R。
[0292] 对于上述化合物的每一种，在适合的情况下，可以使用以下偏好：
[0293] n是0；
[0294] n是1；
[0295] RE是H；
[0296] RE是RD，其中RD是可选取代的烷基；
[0297] RE是RD，其中RD是甲基；
[0298] CBA是抗体；
[0299] CBA是环状肽；
[0300] RL1和RL2是H；
[0301] RL1和RL2是Me。
[0302] C2芳基
[0303] 在一个实施方式中，所述偶联物是化合物：
[0304]
[0305] 且更优选为：
[0306]
[0307] 其中CBA是细胞结合剂如抗体或环状或直链肽，Y、RL1和RL2如前定义，Ar1和Ar2各自独立地是可选取代的C5-20芳基，且n是0或1。Ar1和Ar2可以相同或不同。
[0308] 在一个实施方式中，上述实施方式的每一个中的Ar1和Ar2各自独立地选自可选取代的苯基、呋喃基、硫代苯基和吡啶基。
[0309] 在一个实施方式中，上述实施方式的每一个中的Ar1和Ar2是可选取代的苯基。
[0310] 在一个实施方式中，上述实施方式的每一个中的Ar1和Ar2是可选取代的噻吩-2-基或噻吩-3-基。
[0311] 在一个实施方式中，上述实施方式的每一个中的Ar1和Ar2是可选取代的喹啉基或异喹啉基。
[0312] 所述喹啉基或异喹啉基基团可通过任何可用的环位置与PBD核芯结合。例如，喹啉基可以是喹啉-2-基、喹啉-3-基、喹啉-4-基、喹啉-5-基、喹啉-6-基、喹啉-7-基和喹啉-8-基。其中可优选喹啉-3-基和喹啉-6-基。异喹啉基可以为异喹啉-1-基、异喹啉-3-基、异喹啉-4-基、异喹啉-5-基、异喹啉-6-基、异喹啉-7-基和异喹啉-8-基。其中可优选异喹啉-3-基和异喹啉-6-基。
[0313] C2乙烯基
[0314] 在一个实施方式中，所述偶联物是化合物：
[0315]
[0316] 且更优选为：
[0317]
[0318] 其中CBA是细胞结合剂如抗体或环状或直链肽，Y、RL1和RL2如先前的定义，RV1和V2R 独立地选自H、甲基、乙基和苯基(该苯基可以可选地被氟取代，特别是在4位)和C5-6V1 V2
杂环基，且n为0或1。R 和R 可以相同或不同。
[0319] 在一些上述实施方式中，RV1和RV2可以独立地选自H、苯基和4-氟苯基。
[0320] 优选的中间体
[0321] 本发明还提供了用于制备本文所描述的偶联物化合物的中间体。
[0322] 优选的中间体描述如下，并且与上面描述的优选偶联物紧密对应。
[0323] 在一个实施方式中，所述中间体是化合物：
[0324]
[0325] 且更优选为：
[0326]L1 L2 E E” D
[0327] 其中n为0或1，Y、R 和R 如先前所定义，且R 和R 各自独立地选自H或R。
[0328] 在一个实施方式中，所述中间体是化合物：
[0329]
[0330] 并且更优选地为：
[0331]L1 L2 1 2
[0332] 其中Y、R 和R 如先前所定义，Ar 和Ar 各自独立地为可选取代的C5-20芳基，且1 2
n为0或1。Ar 和Ar 可以相同或不同。
[0333] 在一个实施方式中，所述中间体是化合物：
[0334]
[0335] 且更优选地为：
[0336]
[0337] 其中Y、RL1和RL2如先前所定义，RV1和RV2独立地选自H、甲基、乙基和苯基(该苯V1 V2基可以可选地被氟取代，特别是在4位)和C5-6杂环基，且n为0或1。R 和R 可以相同或不同。
[0338] 取代基
[0339] 本文中使用的术语“可选取代”涉及可以是未取代的或取代的母体基团。
[0340] 除非另有指定，本文所用的术语“取代的(substituted)”涉及携带一个或多个取代基的母体基团。本文中术语“取代基”以常规含义使用并且表示与母体基团共价附连或者(如果适当的话)与其稠合的化学部分。各种取代基都是熟知的，并且它们的生成方法和引入到各种母体基团的方法也是熟知的。
[0341] 在优选的实施方式中，本文中所描述的取代基(其包括可选的取代基)限于对细胞结合剂没有反应性的那些基团。在目前的情况下，与细胞结合剂的连接是通过细胞结合1 2
剂的接头基团(包括，例如，L、L 和A)由PBD化合物的N10位置来形成。位于PBD结构的其他部分的反应性官能团可能形成与细胞结合剂的另外的键(这可以称为交联)。这些另外的键可能改变偶联物的转运和生物活性。因此，在一些实施方式中，另外的取代基限于缺乏反应性官能团的那些。
[0342] 在一个实施方式中，所述取代基选自由R、OR、SR、NRR’、NO2、卤素、CO2R、COR、CONH2、CONHR和CONRR’构成的组。
[0343] 在一个实施方式中，所述取代基选自由R、OR、SR、NRR’、NO2、CO2R、COR、CONH2、CONHR和CONRR’构成的组。
[0344] 在一个实施方式中，所述取代基选自由R、OR、SR、NRR’、NO2和卤素构成的组。
[0345] 在一个实施方式中，所述取代基选自由R、OR、SR、NRR’和NO2构成的组。
[0346] 上面提及的实施方式中的任何一种可应用于本文所描述的任何一种取代基。可替换地，所述取代基可以选自在下面列出的一种或多种基团。
[0347] 下面详细描述取代基的例子。
[0348] C1-12烷基：本文所用的术语“C1-12烷基”涉及通过从具有1～12个碳原子的烃化合物的碳原子上除去氢原子得到的一价部分，它可以是脂肪族的或脂环族的，并且可以是饱和的或不饱和的(例如部分不饱和的、完全不饱和的)。因而，术语“烷基”包括以下讨论的亚类烯基、炔基、环烷基等。
[0349] 饱和烷基的例子包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、丙基(C3)、丁基(C4)、戊基(C5)、己基(C6)和庚基(C7)。
[0350] 饱和直链烷基的例子包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)、正丁基(C4)、正戊基(戊基)(C5)、正己基(C6)和正庚基(C7)。
[0351] 饱和支链烷基的例子包括异丙基(C3)、异丁基(C4)、仲丁基(C4)、叔丁基(C4)、异戊基(C5)和新戊基(C5)。
[0352] 烷基可以可选地被被一个或多个选自O、N(H)和S的杂原子中断。这样的基团可以称为“杂烷基”。
[0353] C2-20杂烷基：本文中使用的术语“C2-12杂烷基”涉及通过从具有2～12个碳原子和一个或多个选自O、Ν(Η)和S(优选O和S)的杂原子的烃化合物的碳原子上去除氢原子所获得的一价部分。
[0354] 杂烷基的例子包括但不限于包含一个或多个-(OCH2CH2)-型的乙二醇单元的那些。杂烷基的末端可以为杂原子的初级形式(primary form)，例如-OH、-SH或-NH2。在优选的实施方式中，末端是-CH3。
[0355] C2-12烯基：本文所用的术语“C2-12烯基”涉及具有一个或多个碳-碳双键的烷基。
[0356] 不饱和烯基的例子包括但不限于乙烯基(ethenyl)(乙烯基(vinyl)，-CH＝CH2)、1-丙烯基(-CH＝CH-CH3)、2-丙烯基(烯丙基，-CH-CH＝CH2)、 异丙烯基(1-甲基乙烯基，-C(CH3)＝CH2)、丁烯基(C4)、戊烯基(C5)和己烯基(C6)。
[0357] C2-12炔基：本文所用的术语“C2-12炔基”涉及具有一个或多个碳-碳三键的烷基。
[0358] 不饱和炔基的例子包括但不限于乙炔基(-C≡CH)和2-丙炔基(炔丙基，-CH2-C≡CH)。
[0359] C3-12环烷基：本文所用的术语“C3-12环烷基”涉及也是环状基团的烷基；即通过从环烃(碳环)化合物的脂环原子上除去氢原子所得到的一价部分，该部分具有3～7个碳原子，包括3～7个环原子。
[0360] 环烷基的例子包括但不限于从下列化合物衍生的那些：
[0361] 饱和单环烃化合物：环丙烷(C3)、环丁烷(C4)、环戊烷(C5)、环己烷(C6)、环庚烷(C7)、甲基环丙烷(C4)、二甲基环丙烷(C5)、甲基环丁烷(C5)、二甲基环丁烷(C6)、甲基环戊烷(C6)、二甲基环戊烷(C7)和甲基环己烷(C7)；
[0362] 不饱和单环烃化合物：环丙烯(C3)、环丁烯(C4)、环戊烯(C5)、环己烯(C6)、甲基环丙烯(C4)、二甲基环丙烯(C5)、甲基环丁烯(C5)、二甲基环丁烯(C6)、甲基环戊烯(C6)、二甲基环戊烯(C7)和甲基环己烯(C7)；和
[0363] 饱和多环烃化合物：降蒈烷(C7)、降蒎烷(C7)、降冰片烷(C7)。
[0364] C3-20杂环基：本文所用的术语“C3-20杂环基”涉及通过从杂环化合物的环原子上除去氢原子所得到的一价部分，该部分具有3～20个环原子，其中1～10个是环杂原子。优选地，每个环具有3～7个环原子，其中1～4个是环杂原子。
[0365] 在上下文中，前缀(例如C3-20、C3-7、C5-6等)表示环原子数或者环原子数的范围，无论是碳原子还是杂原子。例如，本文所用的术语“C5-6杂环基”涉及具有5或6个环原子的杂环基。
[0366] 单环杂环基的例子包括但不限于从下列化合物衍生的那些：
[0367] N1：氮杂环丙烷(C3)、氮杂环丁烷(C4)、吡咯烷(四氢吡咯)(C5)、吡咯啉(例如3-吡咯啉、2,5-二氢吡咯)(C5)、2H-吡咯或3H-吡咯(异吡咯，异唑)(C5)、哌啶(C6)、二氢吡啶(C6)、四氢吡啶(C6)、氮杂卓(C7)；
[0368] O1：氧杂环丙烷(C3)、氧杂环丁烷(C4)、氧杂环戊烷(四氢呋喃)(C5)、氧杂环戊烯(二氢呋喃)(C5)、氧杂环己烷(四氢吡喃)(C6)、二氢吡喃(C6)、吡喃(C6)、氧杂环庚三烯(C7)；
[0369] S1：硫杂环丙烷(C3)、硫杂环丁烷(C4)、硫杂环戊烷(四氢噻吩)(C5)、硫杂环己烷(四氢噻喃)(C6)、硫杂环庚烷(C7)；
[0370] O2：二氧杂环戊烷(C5)、二噁烷(C6)和二氧杂环庚烷(C7)；
[0371] O3：三噁烷(C6)；
[0372] N2：咪唑烷(C5)、吡唑烷(二唑烷)(C5)、咪唑啉(C5)、吡唑啉(二氢吡唑)(C5)、哌嗪(C6)；
[0373] N1O1：四氢噁唑(C5)、二氢噁唑(C5)、四氢异噁唑(C5)、二氢异噁唑(C5)、吗啉(C6)、四氢噁嗪(C6)、二氢噁嗪(C6)、噁嗪(C6)；
[0374] N1S1：噻唑啉(C5)、噻唑烷(C5)、硫代吗啉(C6)；
[0375] N2O1：噁二嗪(C6)；
[0376] O1S1：氧硫杂环戊烯(oxathiole)(C5)和氧硫杂环己烷(oxathiane)(噻噁烷)(C6)；和
[0377] N1O1S1：氧杂噻嗪(C6)。
[0378] 取代的单环杂环基的例子包括从环状形式的糖衍生的那些：例如呋喃糖类(C5)，如呋喃阿拉伯糖、呋喃来苏糖、呋喃核糖和呋喃木糖；和吡喃糖类(C6)，如别吡喃糖(allopyranose)、吡喃阿卓糖、吡喃葡萄糖、吡喃甘露糖、吡喃古洛糖、吡喃艾杜糖、吡喃半乳糖和吡喃塔罗糖。
[0379] C5-20芳基：本文所用的术语“C5-20芳基”涉及通过从芳族化合物的芳族环原子上除去氢原子所得到的一价部分，该部分具有3～20个环原子。优选地，每个环具有5～7个环原子。
[0380] 在上下文中，前缀(例如C3-20、C5-7、C5-6等)表示环原子数或者环原子数的范围，无论是碳原子还是杂原子。例如，本文所用的术语“C5-6芳基”涉及具有5或6个环原子的芳基。
[0381] 环原子可以全部是碳原子，如在“碳芳基”中。碳芳基的例子包括但不限于从下列化合物衍生的那些：苯(即苯基)(C6)、萘(C10)、甘菊环烃(C10)、蒽(C14)、菲(C14)、并四苯(C18)和芘(C16)。
[0382] 包含稠合环的芳基的例子(其中至少一个是芳族环)包括但不限于从下列化合物衍生的基团：二氢化茚(例如2,3-二氢-1H-茚)(C9)、茚(C9)、异茚(C9)、四氢化萘(1,2,3,4-四氢萘)(C10)、苊(C12)、芴(C13)、非那烯(C13)、醋菲(C15)和醋蒽(C16)。
[0383] 作为替代方案，环原子可以包括一个或多个杂原子，如在“杂芳基”中。单环杂芳基的例子包括但不限于从下列化合物衍生的那些：
[0384] N1：吡咯(唑)(C5)、吡啶(吖嗪)(C6)；
[0385] O1：呋喃(氧杂环戊二烯)(C5)；
[0386] S1：噻吩(硫杂环戊二烯)(C5)；
[0387] N1O1：噁唑(C5)、异噁唑(C5)、异噁嗪(C6)；
[0388] N2O1：噁二唑(呋咱)(C5)；
[0389] N3O1：氧杂三唑(C5)；
[0390] N1S1：噻唑(C5)、异噻唑(C5)；
[0391] N2：咪唑(1,3-二唑)(C5)、吡唑(1,2-二唑)(C5)、哒嗪(1,2-二嗪)(C6)、嘧啶(1,3-二嗪)(C6)(例如胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶)、吡嗪(1,4-二嗪)(C6)；
[0392] N3：三唑(C5)、三嗪(C6)；和
[0393] N4：四唑(C5)。
[0394] 包含稠合环的杂芳基的例子包括但不限于：
[0395] 从下列化合物衍生的C9(具有2个稠合环)：苯并呋喃(O1)、异苯并呋喃(O1)、吲哚(N1)、异吲哚(N1)、中氮茚(N1)、二氢吲哚(N1)、异二氢吲哚(N1)、嘌呤(N4)(例如腺嘌呤、鸟嘌呤)、苯并咪唑(N2)、吲唑(N2)、苯并噁唑(N1O1)、苯并异噁唑(N1O1)、苯并二氧杂环戊烯(O2)、苯并呋咱(N2O1)、苯并三唑(N3)、苯并噻吩(S1)、苯并噻唑(N1S1)、苯并噻二唑(N2S)；
[0396] 从下列化合物衍生的C10(具有2个稠合环)：色烯(O1)、异色烯(O1)、色满(O1)、异色满(O1)、苯并二噁烷(O2)、喹啉(N1)、异喹啉(N1)、喹嗪(N1)、苯并噁嗪(N1O1)、苯并二嗪(N2)、吡啶并吡啶(N2)、喹喔啉(N2)、喹唑啉(N2)、噌啉(N2)、酞嗪(N2)、萘啶(N2)、蝶啶(N4)；
[0397] 从苯并二氮杂卓(N2)衍生的C11(具有2个稠合环)；
[0398] 从下列化合物衍生的C13(具有3个稠合环)：咔唑(N1)、二苯并呋喃(O1)、二苯并噻吩(S1)、咔啉(N2)、萘嵌间二氮杂苯(N2)、吡啶并吲哚(N2)；和
[0399] 从下列化合物衍生的C14(具有3个稠合环)：吖啶(N1)、呫吨(O1)、噻吨(S1)、氧蒽(oxanthrene)(O2)、吩噁噻(phenoxathiin)(O1S1)、吩嗪(N2)、吩噁嗪(N1O1)、吩噻嗪(N1S1)、噻蒽(S2)、菲啶(N1)、菲咯啉(N2)、吩嗪(N2)。
[0400] 上述基团，无论单独还是作为另一取代基的一部分，本身可以可选地被一个或多个基团取代，所述基团选自它们自身和以下所列另外的取代基。
[0401] 卤素：-F、-Cl、-Br和-I。
[0402] 羟基：-OH。
[0403] 醚：-OR，其中R是醚取代基，例如C1-7烷基(也称C1-7烷氧基，如下讨论)、C3-20杂环基(也称C3-20杂环氧基)或C5-20芳基(也称C5-20芳氧基)，优选C1-7烷基。
[0404] 烷氧基：-OR，其中R是烷基，例如C1-7烷基。C1-7烷氧基的例子包括但不限于-OMe(甲氧基)、-OEt(乙氧基)、-O(nPr)(正丙氧基)、-O(iPr)(异丙氧基)、-O(nBu)(正丁氧基)、-O(sBu)(仲丁氧基)、-O(iBu)(异丁氧基)和-O(tBu)(叔丁氧基)。
[0405] 缩醛：-CH(OR1)(OR2)，其中R1和R2独立地是缩醛取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环1 2
基或C5-20芳基，优选C1-7烷基，或者在“环状”缩醛基团的情况下，R 和R 连同它们附连的两个氧原子和它们附连的碳原子一起构成具有4～8个环原子的杂环。缩醛基团的例子包括但不限于-CH(OMe)2、-CH(OEt)2和-CH(OMe)(OEt)。
[0406] 半缩醛：-CH(OH)(OR1)，其中R1是半缩醛取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。半缩醛基团的例子包括但不限于-CH(OH)(OMe)和-CH(OH)(OEt)。
[0407] 缩酮：-CR(OR1)(OR2)，其中R1和R2如对缩醛的定义，R是除氢以外的缩酮取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。缩酮基团的例子包括但不限于-C(Me)(OMe)2、-C(Me)(OEt)2、-C(Me)(OMe)(OEt)、-C(Et)(OMe)2、-C(Et)(OEt)2 和 -C(Et)(OMe)(OEt)。
[0408] 半缩酮：-CR(OH)(OR1)，其中R1如对半缩醛的定义，且R是除氢以外的半缩酮取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。半缩醛基团的例子包括但不限于-C(Me)(OH)(OMe)、-C(Et)(OH)(OMe)、-C(Me)(OH)(OEt)和-C(Et)(OH)(OEt)。
[0409] 氧代(酮基、-酮)：＝O。
[0410] 硫酮(硫代酮)：＝S。
[0411] 亚氨基(亚胺)：＝NR，其中R是亚氨基取代基，例如氢、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选氢或C1-7烷基。酯基团的例子包括但不限于＝NH、＝NMe、＝NEt和＝NPh。
[0412] 甲酰基(甲醛、羧醛)：-C(＝O)H。
[0413] 酰基(酮基)：-C(＝O)R，其中R是酰基取代基，例如C1-7烷基(也称C1-7烷基酰基或C1-7烷酰基)、C3-20杂环基(也称C3-20杂环基酰基)或C5-20芳基(也称C5-20芳基酰基)，优选C1-7烷基。酰基的实例包括但不限于-C(＝O)CH3(乙酰基)、-C(＝O)CH2CH3(丙酰基)、-C(＝O)C(CH3)3(叔丁酰基)和-C(＝O)Ph(苯甲酰基、苯基酮)。
[0414] 羧基(羧酸)：-C(＝O)OH。
[0415] 硫代羧基(硫代羧酸)：-C(＝S)SH。
[0416] 硫醇羧基(thiolocarboxy)(硫醇羧酸(thiolocarboxylic acid))：-C(＝O)SH。
[0417] 硫羰羧基(硫羰羧酸)：-C(＝S)OH。
[0418] 亚胺酸：-C(＝NH)OH。
[0419] 异羟肟酸：-C(＝NOH)OH。
[0420] 酯(羧酸酯、羧酸的酯、氧基羰基)：-C(＝O)OR，其中R是酯取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酯基团的例子包括但不限于-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3、-C(＝O)OC(CH3)3和-C(＝O)OPh。
[0421] 酰氧基(反酯)：-OC(＝O)R，其中R是酰氧基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酰氧基的例子包括但不限于-OC(＝O)CH3(乙酰氧基)、-OC(＝O)CH2CH3、-OC(＝O)C(CH3)3、-OC(＝O)Ph和-OC(＝O)CH2Ph。
[0422] 氧基碳酰氧基：-OC(＝O)OR，其中R是酯取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酯基的例子包括但不限于-OC(＝O)OCH3、-OC(＝O)OCH2CH3、-OC(＝O)OC(CH3)3和-OC(＝O)OPh。
[0423] 氨基：-NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，例如氢、C1-7烷基(也称C1-7烷基氨基或二-C1-7烷基氨基)、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选H或C1-7烷基，或者在“环状”氨基1 2
的情况下，R 和R 连同它们附连的氮原子一起构成具有4～8个环原子的杂环。氨基可以
1 1 2
是伯氨基(-NH2)、仲氨基(-NHR)或叔氨基(-NHRR)，并且可以是阳离子形式，可以为季铵+ 1 2 3
基(-NRRR)。氨基的例子包括但不限于-NH2、-NHCH3、-NHC(CH3)2、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2和-NHPh。环状氨基的例子包括但不限于氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉代基和硫代吗啉代基。
[0424] 酰胺基(氨基甲酰基、氨甲酰基、氨基羰基、甲酰胺)：-C(＝O)NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，如对氨基的定义。酰胺基的例子包括但不限于-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3、-C(＝O)N(CH3)2、-C(＝O)NHCH2CH3和-C(＝O)N(CH2CH3)2，以及这样的酰胺基，其1 2
中R 和R 连同它们附连的氮原子一起构成杂环结构，例如哌啶基羰基、吗啉代羰基、硫代吗啉代羰基和哌嗪基羰基。
[0425] 硫代酰胺基(硫代氨甲酰基)：-C(＝S)NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，如对氨基的定义。酰胺基的例子包括但不限于-C(＝S)NH2、-C(＝S)NHCH3、-C(＝S)N(CH3)2和-C(＝S)NHCH2CH3。
[0426] 酰基酰氨基(酰基氨基)：-NR1C(＝O)R2，其中R1是酰胺取代基，例如氢、C1-7烷基、2
C3-20杂环基或C5-20芳基，优选氢或C1-7烷基，且R 是酰基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选氢或C1-7烷基。酰基酰氨基的例子包括但不限于-NHC(＝O)CH3、-NHC(＝
1 2
O)CH2CH3和-NHC(＝O)Ph。R 和R 可以一起构成环状结构，例如琥珀酰亚胺基、马来酰亚胺基和邻苯二甲酰亚胺基：
[0427]
[0428] 氨基羰基氧基：-OC(＝O)NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，如对氨基的定义。氨基羰基氧基的例子包括但不限于-OC(＝O)NH2、-OC(＝O)NHMe、-OC(＝O)NMe2和-OC(＝O)NEt2。
[0429] 脲基：-N(R1)CONR2R3，其中R2和R3独立地是氨基取代基，如对氨基的定义，并且R1是脲基取代基，例如氢、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选氢或C1-7烷基。脲基的例子包括但不限于-NHCONH2、-NHCONHMe、-NHCONHEt、-NHCONMe2、-NHCONEt2、-NMeCONH2、-NMeCONHMe、-NMeCONHEt、-NMeCONMe2和-NMeCONEt2。
[0430] 胍基：-NH-C(＝NH)NH2。
[0431] 四唑基：具有四个氮原子和一个碳原子的五元芳族环，
[0432] 亚氨基：＝NR，其中R是亚氨基取代基，例如氢、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选H或C1-7烷基。亚氨基的例子包括但不限于＝NH、＝NMe和＝NEt。
[0433] 脒(脒基)：-C(＝NR)NR2，其中每个R是脒取代基，例如氢、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选H或C1-7烷基。脒基团的例子包括但不限于-C(＝NH)NH2、-C(＝NH)NMe2和-C(＝NMe)NMe2。
[0434] 硝基：-NO2。
[0435] 亚硝基：-NO。
[0436] 叠氮基：-N3。
[0437] 氰基(腈、甲腈)：-CN。
[0438] 异氰基：-NC。
[0439] 氰酰基：-OCN。
[0440] 异氰酰基：-NCO。
[0441] 氰硫基(硫氰酰)：-SCN。
[0442] 异硫氰基(异硫氰酰)：-NCS。
[0443] 硫氢基(硫醇、巯基)：-SH。
[0444] 硫醚(硫化物)：-SR，其中R是硫醚取代基，例如C1-7烷基(也称C1-7烷硫基)、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。C1-7烷硫基的例子包括但不限于-SCH3和-SCH2CH3。
[0445] 二硫化物：-SS-R，其中R是二硫化物取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基(本文中也称C1-7烷基二硫化物)。C1-7烷基二硫化物基团的例子包括但不限于-SSCH3和-SSCH2CH3。
[0446] 锍化物(亚磺酰基、亚砜)：-S(＝O)R，其中R是锍化物取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。锍化物基团的例子包括但不限于-S(＝O)CH3和-S(＝O)CH2CH3。
[0447] 砜(磺酰基)：-S(＝O)2R，其中R是砜取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基，例如包括氟化或全氟化C1-7烷基。砜基团的例子包括但不限于-S(＝O)2CH3(甲烷磺酰基、甲磺酰基)、-S(＝O)2CF3(三氟甲磺酰基)、-S(＝O)2CH2CH3(乙磺酰基)、-S(＝O)2C4F9(九氟丁磺酰基)、-S(＝O)2CH2CF3(三氟乙磺酰基)、-S(＝O)2CH2CH2NH2(牛磺酰基)、-S(＝O)2Ph(苯基磺酰基、苯磺酰基)、4-甲基苯基磺酰基(甲苯磺酰基)、4-氯苯基磺酰基(氯苯磺酰基)、4-溴苯基磺酰基(对溴苯磺酰基)、4-硝基苯基(硝苯磺酰基)、2-萘磺酸酯(萘磺酰基)和5-二甲氨基萘-1-基磺酸酯(丹磺酰基)。
[0448] 亚磺酸(亚磺基)：-S(＝O)OH、-SO2H。
[0449] 磺酸(磺基)：-S(＝O)2OH、-SO3H。
[0450] 亚磺酸酯(亚磺酸的酯)：-S(＝O)OR，其中R是亚磺酸酯取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。亚磺酸酯基团的例子包括但不限于-S(＝O)OCH3(甲氧基亚磺酰基、亚磺酸甲酯)和-S(＝O)OCH2CH3(乙氧基亚磺酰基、亚磺酸乙酯)。
[0451] 磺酸酯(磺酸的酯)：-S(＝O)2OR，其中R是磺酸酯取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。磺酸酯基团的例子包括但不限于-S(＝O)2OCH3(甲氧基磺酰基、磺酸甲酯)和-S(＝O)2OCH2CH3(乙氧基磺酰基、磺酸乙酯)。
[0452] 亚磺酰氧基：-OS(＝O)R，其中R是亚磺酰氧基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。亚磺酰氧基的例子包括但不限于-OS(＝O)CH3和-OS(＝O)CH2CH3。
[0453] 磺酰氧基：-OS(＝O)2R，其中R是磺酰氧基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。磺酰氧基的例子包括但不限于-OS(＝O)2CH3(甲磺酸酯)和-OS(＝O)2CH2CH3(乙磺酸酯)。
[0454] 硫酸酯：-OS(＝O)2OR，其中R是硫酸酯取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。硫酸酯基团的例子包括但不限于-OS(＝O)2OCH3和-SO(＝O)2OCH2CH3。
[0455] 氨亚磺酰基(氨基亚磺酰基、亚磺酸酰胺、亚磺酰胺)：-S(＝O)NR1R2，其中R1和2
R 独立地是氨基取代基，如对氨基的定义。氨亚磺酰基团的例子包括但不限于-S(＝O)NH2、-S(＝O)NH(CH3)、-S(＝O)N(CH3)2、-S(＝O)NH(CH2CH3)、-S(＝O)N(CH2CH3)2和-S(＝O)NHPh。
[0456] 氨磺酰基(氨基磺酰基、磺酸酰胺、磺酰胺)：-S(＝O)2NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，如对氨基的定义。氨磺酰基的例子包括但不限于-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NH(CH3)、-S(＝O)2N(CH3)2、-S(＝O)2NH(CH2CH3)、-S(＝O)2N(CH2CH3)2和-S(＝O)2NHPh。
[0457] 磺氨基：-NR1S(＝O)2OH，其中R1是氨基取代基，如对氨基的定义。磺氨基的例子包括但不限于-NHS(＝O)2OH和-N(CH3)S(＝O)2OH。
[0458] 磺酰氨基：-NR1S(＝O)2R，其中R1是氨基取代基，如对氨基的定义，R是磺酰氨基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。磺酰氨基的例子包括但不限于-NHS(＝O)2CH3和-N(CH3)S(＝O)2C6H5。
[0459] 亚磺酰氨基：-NR1S(＝O)R，其中R1是氨基取代基，如对氨基的定义，且R是亚磺酰氨基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。亚磺酰氨基的例子包括但不限于-NHS(＝O)CH3和-N(CH3)S(＝O)C6H5。
[0460] 膦基(膦)：-PR2，其中R是膦基取代基，例如-H、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选-H、C1-7烷基或C5-20芳基。膦基的例子包括但不限于-PH2、-P(CH3)2、-P(CH2CH3)2、-P(t-Bu)2和-P(Ph)2。
[0461] 二氧膦基：-P(＝O)2。
[0462] 氧膦基(氧化膦)：-P(＝O)R2，其中R是氧膦基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基或C5-20芳基。氧膦基的例子包括但不限于-P(＝O)(CH3)2、-P(＝O)(CH2CH3)2、-P(＝O)(t-Bu)2和-P(＝O)(Ph)2。
[0463] 膦酸(膦酰基)：-P(＝O)(OH)2。
[0464] 膦酸酯(膦酰酯)：-P(＝O)(OR)2，其中R是膦酸酯取代基，例如-H、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选-H、C1-7烷基或C5-20芳基。膦酸酯基团的例子包括但不限于-P(＝O)(OCH3)2、-P(＝O)(OCH2CH3)2、-P(＝O)(O-t-Bu)2和-P(＝O)(OPh)2。
[0465] 磷酸(膦酰氧基)：-OP(＝O)(OH)2。
[0466] 磷酸酯(膦酰氧基酯)：-OP(＝O)(OR)2，其中R是磷酸酯取代基，例如-H、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选-H、C1-7烷基或C5-20芳基。磷酸酯基团的例子包括但不限于-OP(＝O)(OCH3)2、-OP(＝O)(OCH2CH3)2、-OP(＝O)(O-t-Bu)2和-OP(＝O)(OPh)2。
[0467] 亚磷酸：-OP(OH)2。
[0468] 亚磷酸酯：-OP(OR)2，其中R是亚磷酸酯取代基，例如-H、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选-H、C1-7烷基或C5-20芳基。亚磷酸酯基团的例子包括但不限于-OP(OCH3)2、-OP(OCH2CH3)2、-OP(O-t-Bu)2和-OP(OPh)2。
[0469] 氨基亚磷酸酯：-OP(OR1)-NR22，其中R1和R2是氨基亚磷酸酯取代基，例如-H、(可选取代的)C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选-H、C1-7烷基或C5-20芳基。氨基亚磷酸酯基团的例子包括但不限于-OP(OCH2CH3)-N(CH3)2、-OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2和-OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2。
[0470] 氨基磷酸酯：-OP(＝O)(OR1)-NR22，其中R1和R2是氨基磷酸酯取代基，例如-H、(可选取代的)C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选-H、C1-7烷基或C5-20芳基。氨基磷酸酯基团的例子包括但不限于-OP(＝O)(OCH2CH3)-N(CH3)2、-OP(＝O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2和-OP(＝O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2。
[0471] 亚烷基
[0472] C3-12亚烷基：本文所用的术语“C3-12亚烷基”涉及通过从具有3～12个碳原子的烃化合物的同一碳原子上除去两个氢原子或者从两个不同碳原子各除去一个氢原子所得到的双齿合物部分(另有指定除外)，它可以是脂肪族的或脂环族的，并且可以是饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的。因而，术语“亚烷基”包括如下讨论的亚类亚烯基、亚炔基、亚环烷基等。
[0473] 直链饱和C3-12亚烷基的例子包括但不限于-(CH2)n-，其中n是整数3～12，例如-CH2CH2CH2-(亚丙 基)、-CH2CH2CH2CH2-(亚丁基)、-CH2CH2CH2CH2CH2-(亚戊 基)和-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-(亚庚基)。
[0474] 支 链 饱 和 C3-12 亚 烷 基 的 例 子 包 括 但 不 限 于 -CH(CH3)CH2-、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH(CH3)CH2CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2CH2-、-CH(CH2CH3)-、-CH(CH2CH3)CH2-和-CH2CH(CH2CH3)CH2-。
[0475] 直链部分不饱和C3-12亚烷基(C3-12亚烯基和亚炔基)的例子包括但不限于-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH＝CH2-、-CH＝CH-CH2-CH2-、-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-、-CH＝CH-CH＝CH-、-CH＝CH-CH＝CH-CH2-、-CH＝CH-CH＝CH-CH2-CH2-、-CH＝CH-CH2-CH＝CH-、-CH＝CH-CH2-CH2-CH＝CH-和-CH2-C≡C-CH2-。
[0476] 支链部分不饱和C3-12亚烷基(C3-12亚烯基和亚炔基)的例子包括但不限于-C(CH3)＝CH-、-C(CH3)＝CH-CH2-、-CH＝CH-CH(CH3)-和-C≡C-CH(CH3)-。
[0477] 脂环族饱和C3-12亚烷基(C3-12亚环烷基)的例子包括但不限于亚环戊基(例如亚环戊-1,3-基)和亚环己基(例如亚环己-1,4-基)。
[0478] 脂环族部分不饱和C3-12亚烷基(C3-12亚环烷基)的例子包括但不限于亚环戊烯基(例如4-亚环戊烯-1,3-基)、亚环己烯基(例如2-亚环己烯-1,4-基；3-亚环己烯-1,2-基；2,5-亚环己二烯-1,4-基)。
[0479] 包括其他形式
[0480] 除非另作说明，在上述中包括的是这些取代基的众所周知的离子、盐、溶剂化物和-受保护的形式。例如，提及羧酸(-COOH)，也包括其阴离子(羧酸根)形式(-COO)、其盐或+ 1 2
溶剂化物、以及常规受保护的形式。类似地，提及氨基，包括氨基的质子化形式(-NHRR)、盐或溶剂化物(例如，盐酸盐)以及氨基的常规受保护的形式。类似地，提及羟基，也包括-
其阴离子形式(-O)、盐或溶剂化物以及常规受保护的形式。
[0481] 盐
[0482] 可以方便地或令人希望地制备、纯化和/或处理所述活性化合物的相应盐，例如药学上可接受的盐。药学上可接受盐的例子在Berge等人,J.Pharm.Sci.,66,1-19(1977)中有论述。
[0483] 例如，如果化合物是阴离子性的、或者具有可能成为阴离子的官能团(例-如，-COOH可能成为-COO)，那么可以与适合的阳离子生成盐。适合的无机阳离子的例子+ + 2+ 2+
包括但不限于碱金属离子(如Na 和K)、碱土金属阳离子(如Ca 和Mg )和其他阳离子+3 +
(如Al )。适合的有机阳离子的例子包括但不限于铵离子(即NH4)和取代的铵离子(例+ + + +
如，NH3R、NH2R2、NHR3、NR4)。一些适合的取代的铵离子的例子是从下列化合物衍生的那些：
乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆+
碱、葡甲胺和氨丁三醇，以及氨基酸如赖氨酸和精氨酸。常见的季铵离子的例子是N(CH3)4。
[0484] 如果化合物是阳离子性的、或者具有可能成为阳离子的官能团(例如-NH2可能成+为-NH3)，那么可以与适合的阴离子生成盐。适合的无机阴离子的例子包括但不限于从下列无机酸衍生的那些：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。
[0485] 适合的有机阴离子的例子包括但不限于从下列有机酸衍生的那些：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、依地酸、乙二磺酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕榈酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、酒石酸、甲苯磺酸、三氟乙酸和戊酸。适合的聚合有机阴离子的例子包括但不限于从下列聚合酸衍生的那些：丹宁酸、羧甲基纤维素。
[0486] 溶剂化物
[0487] 可以方便地或令人希望地制备、纯化和/或处理活性化合物的相应的溶剂化物。术语“溶剂化物”在本文中以常规含义使用，表示溶质(例如，活性化合物、活性化合物的盐)与溶剂的复合物。如果溶剂是水，溶剂化物可以常规地称为水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。
[0488] 本发明包括这样的化合物，其中溶剂添加横过PBD部分的亚胺键，见下阐述，其中A A该溶剂是水或醇(ROH，其中R 是C1-4烷基)：
[0489]
[0490] 这些形式可以称为PBD的甲醇胺和甲醇胺醚形式(如以上关于R10的章节中所描述的)。这些等式的平衡依赖于化合物存在的条件以及该部分本身的属性。
[0491] 这些特定的化合物可以例如通过冰冻干燥法分离为固体形式。
[0492] 异构体
[0493] 本发明的某些化合物可能存在一种或多种特定的几何异构、光学异构、对映异构、非对映异构、差向异构、阻转异构、立体异构、互变异构、构象异构或端基异构的形式，包括但不限于顺式-和反式-形式；E-和Z-形式；c-、t-和r-形式；内-和外-形式；R-、S-和内消旋-形式；D-和L-形式；d-和l-形式；(+)和(-)形式；酮、烯醇和烯醇化物形式；顺(syn-)和反(anti-)形式；向斜-和背斜-形式；α-和β-形式；轴向(直立，axial)和赤道(平伏，equatorial)形式；船-、椅-、扭曲-、封套-和半椅-形式；以及它们的组合，此后统称为“异构体”(或“异构形式”)。
[0494] 术语“手性”是指具有镜像配偶体的非重叠性能的分子，而术语“非手性”是指与它们的镜像配偶体可重叠的分子。
[0495] 术语“立体异构体”是指具有相同的化学结构，但原子或基团在空间的排列不同的化合物。
[0496] “非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心且分子不是彼此镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可在高分辨率分析操作(如电泳和色谱)下分离。
[0497] “对映异构体”是指彼此为非重叠镜像的化合物的两种立体异构体。
[0498] 本文使用的立体化学的定义和规则一般遵循S.P.Parker编,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；以 及 Eliel,E. 和 Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。本发明的化合物可以含有非对称或手性中心，并由此可以以不同的立体异构形式存在。预期 本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们混合物(如外消旋混合物)，形成本发明的一部分。许多有机化合物以旋光形式存在，即它们具有旋转平面偏振光的平面的能力。在描述旋光化合物时，使用前缀D和L或R和S以表示分子关于其手性中心的绝对构型。采用前缀d和l或(+)和(-)以指示化合物的平面偏振光的旋转符号，(-)或l是指化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物为右旋的。对于给定的化学结构，除了它们是彼此镜像的，这些立体异构体是相同的。具体的立体异构体还可以称为对映异构体，且这样的异构体的混合物经常称为对映体混合物。对映异构体的50:50的混合物称为外消旋混合物或外消旋物，在化学反应或过程中没有立体选择性或立体特异性的时候其可能出现。术语“外消旋混合物”和“外消旋物”是指两种对映体物质的等摩尔的混合物，缺乏光学活性。
[0499] 需要注意，除了下面针对互变异构形式的讨论以外，特别地从本文所用的术语“异构体”中排除在外的是结构(或构造)异构体(即这样的异构体，它们的区别在于原子之间的连接，而不仅仅是原子的空间位置)。例如，提及甲氧基-OCH3时，不应解释为提及其结构异构体羟甲基-CH2OH。类似地，提及邻-氯苯基时，不应解释为提及其结构异构体间-氯苯基。不过，提及一类结构完全可以包括属于该类的结构异构形式(例如，C1-7烷基包括正丙基和异丙基；丁基包括正-、异-、仲-与叔-丁基；甲氧基苯基包括邻-、间-与对-甲氧基苯基)。
[0500] 上述排除不涉及互变异构形式，例如酮-、烯醇-与烯醇化物-形式，例如下列互变异构对：酮/烯醇(见下阐述)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒(amidine)/脒(amidine)、亚硝基/肟、硫代酮/烯硫醇、N-亚硝基/羟基偶氮和硝基/酸式硝基。
[0501]
[0502] 术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指不同能量的结构异构体，它们经由较低的能量势垒是可互换的。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的相互转化，如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。化合价互变异构体包括通过一些连接电子的重组的相互转化。
[0503] 需要注意，在术语“异构体”中特别包括具有一个或多个同位素取代的化合物。例1 2 3 12 13
如，H可以是任何同位素形式，包括 H、H(D)和 H(T)；C可以是任何同位素形式，包括 C、C
14 16 18
和 C；O可以是任何同位素形式，包括 O和 O；等等。
[0504] 可以结合到本发明化合物中的同位素的例子，包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同2 3 11 13 14 15 18 31 32 35 36 125
位素，例如但不限于 H(氘，D)、H(氚)、C、C、C、 N、F、P、P、S、Cl和 I。本发明
3 13 14
各种同位素标记的化合物，例如结合至放射性同位素(如 H、C和 C)中的那些。这样的同位素标记的化合物可以用于代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术，如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层照相(SPECT)，包括药物或底物组织分布试验或对患者的放射性治疗。本发明氘标记或取代的治疗化合物可以具有改善的DMPK(药物代谢和药代动力学)性质，涉及分布、代谢和排泄(ADME)。用较重的同位素如氘取代可能产生某
18
些由更高代谢稳定性产生的治疗益处，例如增加的体内半衰期或减少的剂量需求。 F标记的化合物可用于PET或SPECT研究。本发明同位素标记的化合物和其前体药物一般可以通过实施在下面所描述的方案或实施例以及制备中所公开的操作，通过用易于取得的同位素标记的试剂取代非-同位素标记的试剂而制备。而且，用较重的同位素取代，尤其是氘(即
2
H或D)可以产生由更高的代谢稳定性引起的某些治疗益处，例如增加的体内半衰期或减少的剂量需求或治疗指数的改善。应该理解的是，在该背景下认为氘是取代基。这样的较重同位素的浓度，特别是氘，可以由同位素富集因子限定。在本发明的化合物中，并未具体指定为特定同位素的任何原子是指代表该原子的任何稳定的同位素。
[0505] 除非另有指定，提及特定化合物，包括所有这类异构形式，包括其(完全或部分)外消旋混合物及其他混合物。这类异构形式的制备(例如不对称合成)和分离(例如分步结晶和色谱法)的方法是本领域已知的，或者通过以已知方式调整本文所教导的方法或已知方法而容易获得。
[0506] 生物活性
[0507] 体外细胞增殖测定
[0508] 通常，抗体-药物偶联物(ADC)的细胞毒性或抑制细胞生长活性通过以下测定：在细胞培养基中使具有受体蛋白质(例如HER2)的哺乳动物细胞暴露于ADC的抗体；培养细胞约6小时至约5天的时间；然后测定细 胞活力。基于细胞的体外测定用于测定本发明ADC的活力(增殖)、细胞毒性和诱导凋亡(半胱天冬酶激活)。
[0509] 抗体-药物偶联物的体外有效性可以通过细胞增殖测定来测量。发光细胞活性检测是市售的(Promega Corp.,Madison,WI)，基于鞘翅目
荧光素酶的重组表达的均一测定方法(美国专利第5583024；5674713和5700670号)。该细胞增殖测定基于存在的ATP(一种代谢活性细胞的指示剂)的量来确定培养物中的活性细胞的数量(Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88；US6602677)。
测定在96孔板中进行，使它易于自动化高通量筛选(HTS)(Cree等人(1995)AntiCancer Drugs6:398-404)。均一测定操作涉及将单个试剂( 试剂)直接加入到在
添加有血清的培养基中培养的细胞中。细胞洗涤、去除培养基以及多个吸取步骤是不必需的。在加入试剂并混合后10分钟内在384-孔板中，该系统检测出低至15个细胞/孔。细胞可以用ADC连续处理，或者可以处理它们并与ADC分开。通常，短暂处理(即3个小时)的细胞显示与连续处理的细胞相同的有效性。
[0510] 均一的“加入-混合-测量”形式导致细胞溶解并产生与存在的ATP的量成正比的发光信号。ATP的量直接与培养物中存在的细胞数量成正比。 测定产生“辉光型”的发光信号，其由荧光素酶反应生产，取决于细胞类型和所使用的培养基，其具有通常大于五小时的半衰期。活细胞以相对发光单位(RLU)来反映。底物(甲虫荧光素)通过重组萤火虫萤光素酶氧化脱羧，伴随ATP转化为AMP并产生光子。
[0511] 体内效力
[0512] 本发明的抗体-药物偶联物的体内效力可以通过在小鼠中的肿瘤异种移植研究来测量。例如，本发明的抗-HER2ADC的体内效力可以通过高表达HER2转基因的外植体小鼠模型来测量。同种异体移植物从对 治疗没有反应或反应较低的Fo5mmtv2
转基因小鼠增殖。在某剂量水平(mg/kg)和PBD药物暴露(μg/m)下用ADC治疗受试者一次；并且使用安慰剂缓冲剂对照(载体)，并且检测二周或更长时间以测量至肿瘤体积倍增、细胞杀伤对数值(log cell kill)和肿瘤收缩的时间。
[0513] 应用
[0514] 本发明的偶联物可用于在靶位置提供PBD化合物。
[0515] 所述靶位置优选增殖性细胞群。抗体是针对存在于增殖性细胞群中的抗原的抗体。
[0516] 在一个实施方式中，与存在于增殖性细胞群(例如肿瘤细胞群)中的抗原的量相比，该抗原在非增殖性细胞群中不存在或以降低的水平存在。
[0517] 在靶位置中，接头可以切割以释放式B或C的化合物。因此，所述偶联物可以用来选择性地向靶位置提供式B或C的化合物。
[0518] 接头可以由存在于靶位置的酶切割。
[0519] 靶位置可以是体外的、体内的或离体的。
[0520] 本发明的抗体-药物偶联物(ADC)化合物包括具有用于抗癌活性的效用的那些。尤其是，该化合物包括偶联的抗体，即通过接头共价连接到PBD药物部分(即毒素)。在药物未偶联至抗体时，PBD药物具有细胞毒作用。PBD药物部分的生物活性因而通过与抗体的偶联而进行调节。本发明的抗体-药物偶联物选择性地将有效剂量的细胞毒性剂递送至肿瘤组织，由此可以实现更高的选择性，即更低的有效剂量。
[0521] 因此，在一方面，本发明提供了本文中所描述的用于在治疗中使用的偶联物化合物。
[0522] 在进一步的方面，还提供了本文中所描述的用于在治疗增殖性疾病中使用的偶联物化合物。本发明第二方面提供了偶联物化合物在制造用于治疗增生性疾病的药剂中的应用。
[0523] 本领域的普通技术人员能够很容易地确定候选偶联物是否能够治疗任何特定细胞类型的增殖性疾病。例如，可以方便地用于评估由特定化合物提供的活性的测定在下面的实施例中进行描述。
[0524] 术语“增殖性疾病”涉及不希望的过度或异常细胞的不想要的或失控的细胞增殖，如肿瘤或增生性生长，无论是在体外或体内。
[0525] 增殖性疾病的例子包括但不限于良性、前恶性和恶性细胞增殖，包括但不限于赘生物和肿瘤(例如组织细胞瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、骨瘤)、癌症(例如肺癌、小细胞肺癌、胃肠癌、肠癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌，睾丸癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、脑癌、肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤、黑色素瘤)、白血病、银屑病、骨疾病、纤维增生疾病(例如结缔组织的)、以及动脉粥样硬化。特别令人感兴趣的癌包括但不限于白血病和卵巢癌。
[0526] 可以治疗任何类型的细胞，包括但不限于肺、胃肠(包括例如肠、结肠)、乳腺(乳房)、卵巢、前列腺、肝(肝脏)、肾(肾脏)、膀胱、胰腺、脑和皮肤。
[0527] 在一个实施方式中，治疗是针对胰腺癌。
[0528] 在一个实施方式中，治疗是针对在细胞表面上具有ανβ6整联蛋白的肿瘤。
[0529] 考虑了本发明的抗体-药物偶联物(ADC)可用于治疗各种疾病或紊乱，例如特征为肿瘤抗原的过表达。示例性疾病或过度增殖性紊乱包括良性或恶性肿瘤；白血病、血液恶性肿瘤和淋巴恶性肿瘤。其他包括神经元疾病、神经胶质疾病、星形胶质细胞疾病、下丘脑疾病、腺体疾病、巨噬細胞疾病、上皮疾病、间质疾病、囊胚腔疾病、炎性疾病、血管生成疾病和免疫学疾病(包括自身免疫疾病)。
[0530] 通常，待治疗疾病或紊乱是过度增殖性疾病，如癌症。本文中，待治疗的癌症的例子治疗包括但不限于癌瘤(carcinoma)、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。这样的癌症的更具体的例子包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌和肺的鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric cancer)或胃癌(stomachcancer)(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、以及头颈癌。
[0531] 可使用ADC化合物治疗的自身免疫性性疾病包括风湿病学紊乱(如，例如，类风湿性关节炎、干燥综合症( syndrome)、硬皮病、狼疮如SLE和狼疮肾炎、多肌炎/皮肌炎、冷球蛋白血症、抗磷脂抗体综合征、和牛皮癣关节炎)、骨关节炎、自体免疫胃肠疾病和肝疾病(如，例如，炎性肠疾病(例如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)、自身免疫性胃炎和恶性贫血、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬变、原发性硬化性胆管炎、和乳糜泻)、脉管炎(如，例如，ANCA相关脉管炎，包括丘-施二氏血管炎、韦格内氏肉芽肿病和多动脉炎)、自身免疫性神经疾病(如，例如，多发性硬化、眼阵挛-肌阵挛综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎、帕金森氏病、阿尔茨海默症、以及自身免疫性多神经病)、肾脏疾病(如，例如，肾小球肾炎、古德帕斯丘综合征和贝格尔病)、自身免疫性皮肤病疾病(如，例如，银屑 病、荨麻疹、假膜性喉头炎、寻常天疱疮、大疱性类天疱疮和皮肤红斑狼疮)、血液学疾病(如，例如，血小板减少性紫癜、血栓形成血小板减少性紫癜、输血后紫癜和自身免疫性溶血性贫血)、动脉粥样硬化、葡萄膜炎、自身免疫性听力疾病(如，例如，内耳疾病和听觉失灵)、贝切特病、雷诺氏综合征、器官移植和自身免疫性内分泌失调(如，例如，与糖尿病相关的自身免疫性疾病，例如胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、艾迪生病、和自身免疫性甲状腺疾病(例如格雷夫斯病和甲状腺炎))。例如，更优选的这样的疾病包括类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、ANCA-相关脉管炎、狼疮、多发性硬化、干燥综合症、格雷夫斯病、IDDM、恶性贫血、甲状腺炎和肾小球肾炎。
[0532] 治疗方法
[0533] 本发明的偶联物可以在治疗方法中使用。还提供了一种治疗方法，包含向需要治疗的受试者给予治疗有效量的本发明的偶联物化合物。术语“治疗有效量”是足以显示对患者有益的量。这样的益处可以是至少缓解至少一种症状。实际给药的量以及给药的速率和时程将取决于所治疗的疾病的性质和严重程度。治疗处方(例如对剂量决定)是全科医生和其他医生的责任范围。
[0534] 本发明化合物可以单独给药或与其他治疗组合给药，同时给药或顺序给药，这取决于待治疗的病症。治疗和疗法的例子包括但不限于化学疗法(给予活性剂，包括药物例如化疗剂)；手术；和放射疗法。
[0535] “化疗剂”是可用于治疗癌症的化合物，不考虑作用机制。化疗剂的分类包括但不限于：烷化剂、抗代谢药、纺锤体毒植物生物碱、细胞毒性/抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、抗体、光敏剂和激酶抑制剂。化疗剂包括用于“靶向治疗”和常规的化学疗法的化合物。
[0536] 化疗剂的例子包括：厄洛替尼( Genentech/OSI Pharm.)、多 西 紫 杉 醇( Sanofi-Aventis)、5-FU(氟 尿 嘧 啶、5- 氟 尿 嘧
啶、CAS 号 51-21-8)、 吉 西 他 滨 ( Lilly)、PD-0325901(CAS 号
391210-10-9,Pfizer)、顺 铂 ( 顺 式 - 二 胺、二 氯 铂 (II),CAS 号 15663-27-1)、卡 铂 (CAS 号 41575-94-4)、 紫 杉 醇 ( Bristol-Myers Squibb
Oncology,Princeton,N.J.)、曲 妥 珠 单 抗( Genentech)、替 莫 唑
胺(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮杂双环[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-氨甲酰，
CAS号85622-93-1, Schering Plough)、他 莫 昔 芬
((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺,
)、和多柔比星 Akti-1/2、HPPD以及
雷帕霉素。
[0537] 化疗剂的更多例子包括：奥沙利铂( Sanofi)、硼替佐米 ( Millennium Pharm.)、舒 尼 替 尼 (sutent)(
SU11248,Pfizer)、来曲唑( Novartis)、甲磺酸伊马替尼(
Novartis)、XL-518(Mek 抑 制 剂，Exelixis,WO2007/044515)、ARRY-886(Mek 抑 制剂 ,AZD6244,Array BioPharma,Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K 抑 制 剂 ,Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制剂,Novartis)、XL-147(PI3K抑制剂,Exelixis)、PTK787/ZK222584(Novartis)、 氟 维 司 群 ( AstraZeneca)、 甲
酰四氢叶酸(亚叶酸)、雷帕霉素(西罗莫司, Wyeth)、拉帕
TM
替 尼 ( GSK572016,Glaxo Smith Kline)、lonafarnib(SARASAR
,SCH66336,Schering Plough)、 索 拉 非 尼 ( BAY43-9006,Bayer
Labs)、吉 非 替 尼 ( AstraZeneca)、伊 立 替 康 (
TM TM
CPT-11,Pfizer)、替 吡 法 尼 (ZARNESTRA ,Johnson&Johnson)、ABRAXANE ( 无 克列莫佛)、紫杉醇的白蛋白工程化的纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical
Partners,Schaumberg,Il)、凡 德 他 尼(rINN,ZD6474, AstraZeneca)、
苯丁酸氮芥、AG1478、AG1571(SU5271；Sugen)、坦西莫司( Wyeth)、帕唑
帕尼(GlaxoSmithKline)、canfosfamide( Telik)、塞替派和环磷酰胺
磺酸烷基酯类如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶
类如benzodopa、卡波醌、关妥替哌(meturedopa)和尿烧亚胺(uredopa)；乙烯亚胺类和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酸胺和三羟甲基密胺；多聚乙酰(尤其是布拉它辛和布拉它辛酮)；喜树碱(包括合成类似物托泊替坎)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新的合成类似物)；隐藻素类(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀；多卡米星(duocarmycin)(包括合成的类似物、KW-2189和CBl-TM1)；艾植塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇；海绵抑制素；氮芥类，如苯丁酸氮芥，萘氮芥，氯代磷酰胺，雌莫司汀，异环磷酰胺，氮芥，氧化氮芥盐酸盐，美法仑，新氮芥，胆甾醇对苯乙酸氮芥，泼尼莫司汀，曲磷胺，尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类，如卡莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫 司汀和雷莫司汀；抗生素如烯二炔抗生素类(例如卡里奇霉素、卡里奇霉素γ1I、卡里奇霉素Ω1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；达内霉素、达内霉素A；双磷酸盐类如氯屈膦酸盐；埃斯波霉素；以及新制癌菌素生色团和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团)、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素(chromomycinis)、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、奈莫柔比星、麻西罗霉素、丝裂霉素类，如丝裂霉素C，麦考酚酸，诺拉霉素，橄榄霉素，培洛霉素，泊非霉素，嘌呤霉素，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星，链黑霉素，链佐星，杀结核菌素，乌苯美司，净司他丁，佐柔比星；抗代谢药，例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸、甲氨蝶呤，蝶罗呤，三甲曲沙；
嘌呤类似物，如氟达拉滨，6-巯基嘌吟，硫咪嘌呤，硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨，阿扎胞苷，6-阿扎尿苷，卡莫氟，阿糖胞苷，双脱氧法尿苷，去氧氟尿苷，依诺他滨，氟尿苷；
雄激素类，如卡普睾酮，丙酸甲雄烷醇酮，环硫雄醇，美雄烷，睾内酯；抗肾上腺类，如氨鲁米特，米托坦，曲洛司坦；叶酸补充剂，如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸(elfornithine)；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登素类如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；
nitraerine；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；
多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生；根胆酸；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2’,2”-三氯三乙基胺；单端孢霉烯类(特别是T-2毒素、疣疱菌素A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烧；gacytosine；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派；6-硫代鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；钼类似物，如顺钼和卡钼；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨 诺肖灵；替尼泊苷；依达曲沙；道
诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨( Roche)；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑
制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸((DMFO)；类维生素A，例如维A酸；以及任何上述的药学上可接受的盐、酸和衍生物。
[0538] 还包括在对“化疗剂”的定义中的为：(i)调节或抑制激素对肿瘤作用的抗激素剂，例如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬盐酸盐(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和 (托瑞米芬柠
檬酸盐)；(ii)抑制芳香酶的芳香酶抑制剂，其调节肾上腺中雌激素的生产，如，例如，
4(5)-咪唑类、氨鲁米特、 (醋酸甲地孕酮)、 (依西美坦；
Pfizer)、福美坦、法倔唑、 (伏氯唑)、 (来曲唑；Novartis)
和 (阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素类，如氟他胺、尼鲁米特、
比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂，如MEK抑制剂(WO2007/044515)；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，尤其是抑制牵涉异常细胞增殖的信号通路中的基因表达的那些，例如，PKC-α、Raf和H-Ras，如oblimersen( Genta Inc.)；(vii)核酶，如VEGF表达抑制
剂(例如 )和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，如基因治疗疫苗，例如
和 rIL-2；拓扑异
构酶抑制剂1，例如 rmRH；(ix)抗血管生成剂，如贝
伐单抗( Genentech)；以及任何上述的药学上可接受的盐、酸和衍生物。
[0539] 还包括在“化疗剂”的定义中的是治疗性抗体，如阿仑珠单抗(Campath)、贝伐单抗( Genentech)；西妥昔单抗( Imclone)；帕尼单抗( Amgen)、利妥昔单抗( Genentech/Biogen Idec)、帕妥
TM
珠单抗(OMNITARG ,2C4,Genentech)、曲妥珠单抗( Genentech)、托西
莫单抗(Bexxar,Corixia)和抗体药物偶联物、吉妥珠单抗奥唑米星(
Wyeth)。
[0540] 具有作为与本发明的偶联物联合的化疗剂的治疗潜力的人源化单克隆抗体包括：阿仑珠单抗、阿泊珠单抗、阿塞珠单抗、那他珠单抗、巴皮纽阻单抗、贝伐单抗、莫比伐单抗、美坎珠单抗、西利珠单抗、培瑟妥珠单抗、cidfusituzumab、cidtuzumab、达利珠单抗、依库珠单抗、依法珠单抗、依帕珠单抗、厄利珠单抗、非维珠单抗、芳妥珠单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、伊珠单抗奥唑米星、伊匹单抗、拉贝珠单抗、林妥珠单抗、马妥珠单抗、美泊利单抗、莫维珠单抗、motovizumab、那他珠单抗、尼妥珠单抗、nolovizumab、numavizumab、奥瑞珠单抗、奥马佐单抗、帕利珠单 抗、帕考珠单抗、pecfusituzumab、pectuzumab、帕妥珠单抗、培克珠单抗、ralivizumab、兰尼单抗、reslivizumab、瑞利珠单、resyvizumab、罗维珠单抗、鲁利单抗、西罗珠单抗、西利珠单抗、索土珠单抗、替他珠单抗(tacatuzumab tetraxetan)、他度珠单抗、他利珠单抗、替非珠单抗、托珠单抗、托利珠单抗、曲妥珠单抗、西莫白介素单抗、tucusituzumab、umavizumab、乌珠单抗和维西珠单抗。
[0541] 根据本发明所述的药物组合物以及根据本发明使用的药物组合物除了所述活性成分(即偶联物化合物)之外，可以包含药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员众所周知的其他材料。此类材料应该是无毒的并且不应该干扰活性成分的功效。载体或其他材料的确切性质将取决于给药途径，所述给药途径可以是口服或通过注射(例如皮肤、皮下或静脉内)。
[0542] 用于口服给药的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉末或液体形式。片剂可以包含固体载体或佐剂。液体药物组合物通常包含液体载体，例如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。可以包括生理盐水溶液、右旋糖或其他糖类溶液或二醇类(如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇)。胶囊可包含固体载体，例如明胶。
[0543] 对于静脉注射、皮肤或皮下注射、或在痛苦部位的注射，所述活性成分可以是肠胃外可接受的水溶液的形式，该水溶液是无热原的并且具有合适的pH、等渗性和稳定性。本领域相关技术人员完全能够制备适合的溶液，例如使用等渗载体如氯化钠注射液、林格注射液、乳酸化盐林格注射液。根据需要可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其他添加剂。
[0544] 制剂
[0545] 虽然可以单独使用(如给药)所述偶联物化合物，但经常优选提供它作为组合物或制剂。
[0546] 在一个实施方式中，所述组合物是包含本文所描述的偶联物化合物、以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物(例如制剂、制品、药物)。
[0547] 在一个实施方式中，所述组合物是包含至少一种本文所描述的偶联物化合物、以及一种或多种本领域技术人员熟知的其他药学上可接受的成分 的药物组合物，这些成分包括但不限于，药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、佐剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如湿润剂)、掩蔽剂、着色剂、调味剂以及甜味剂。
[0548] 在一个实施方式中，组合物进一步地包含其他活性剂，例如，其他治疗或预防用试剂
[0549] 合适的载体、稀释剂、赋形剂等可以在标准药物文件中找到。参见，例如，Handbook of Pharmaceutical Additives,第二版，(M.Ash和I.Ash编),2001(Synapse Information Resources,Inc.,Endicott,New York,USA)， Remington's Pharmaceutical Sciences,第 20 版 ,pub.Lippincott,Williams&Wilkins,2000；和 Handbook of Pharmaceutical Excipients,第二版,1994。
[0550] 本发明的另一方面涉及制备药物组合物的方法，包含混合至少一种如本文定义的11
[ C]-放射标记的偶联物或偶联物样的化合物连同一种或多种本领域技术人员熟知的其他药学上可接受的成分，例如载体、稀释剂、赋形剂等一起。如果配制成离散单位(例如片剂等)，每个单位含有预定量(剂量)的所述活性化合物。
[0551] 本文使用的术语“药学上可接受的”涉及在合理的医疗判断范围内适用于与所讨论的受试者(如人)的组织接触，而没有过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，具有适当的利益/风险比率的化合物、成分、材料、组合物、剂型等。每种载体、稀释剂、赋形剂等还必需在与制剂的其他成分相容的意义上是“可接受的”。
[0552] 制剂可以利用制药领域中已知的任何方法来制备。这样的方法包括将活性化合物与构成一种或多种辅助成分的载体相结合的步骤。通常，制剂通过将活性化合物与载体(例如液体载体、细分的固体载体等)均匀并紧密地结合而制备，然后在必要时将产品成型。
[0553] 可制备制剂以提供快速或缓慢释放；即时、延时、定时、或持续释放；或它们的组合。
[0554] 适合胃肠外给药(例如通过注射)的制剂，包括水性或非水性的、等渗的、无热原的、消毒的液体(例如溶液、悬浮液)，其中，活性成分是溶解的、悬浮或以其他方式提供的(例如在脂质体或其他微粒中)。这样的液体可另外含有其他药学上可接受的成分，如使制剂与预期的接受者的血液(或其他有关体液)等渗的抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂、 助悬剂、增稠剂以及溶质。例如，赋形剂的例子包括水、醇类、多元醇类、甘油、植物油等。用于这样制剂的合适的等渗载体的例子包括氯化钠注射液、林格溶液或乳酸盐化林格注射液。典型地，液体中的活性成分的浓度为约1ng/mL至约10μg/mL，例如约10ng/mL至约1μg/mL。例如，制剂可以存在于单位剂量或多剂量的密封容器中，如安瓿和小瓶，并且可以存储在仅需要加入无菌液体载体，例如在使用之前立即加入注射用水的冷冻干燥(冻干)条件下。临时注射溶液和悬浮液可以由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
[0555] 剂量
[0556] 本领域技术人员可以理解，偶联物化合物以及包含所述偶联物化合物的组合物的适当剂量在患者之间可以变化。确定最佳剂量将通常涉及治疗益处的水平与任何风险或有害副作用的平衡。所选择的剂量水平将取决于各种因素，包括但不限于特定化合物的活性、给药途径、给药时间、化合物的排泄速率、治疗的持续时间、组合使用的其他药物、化合物和/或材料、疾病的严重程度、以及患者的种族、性别、年龄、体重、病情、健康状况和既往病史。尽管通常选择剂量以达到作用部位的局部浓度，这在不引起实质有害的或有毒的副作用的情况下产生希望的效果，但是化合物的量和给药途径最终将由医生、兽医或临床医师来判定。
[0557] 在整个治疗过程中给药能够以一次剂量、连续地或间断地(例如，以适当间隔的分开剂量)实现。确定最有效的给药方式和剂量的方法对于本领域的技术人员是熟知的，并将随用于治疗的制剂、治疗目的、待治疗的靶细胞以及待治疗的受试者而变化。可以实行单次或多次给药，而剂量水平和模式由治疗医生、兽医或临床医师选择。
[0558] 总体上，活性化合物的合适剂量在每天、受试者的每千克体重约100ng至约25mg的范围内(更典型地约1μg至约10mg)。在活性化合物为盐、酯、酰胺、前体药物等的情况下，给药的量基于母体化合物计算，并且因此要使用的实际重量会成比例地增加。
[0559] 在一个实施方式中，根据以下剂量方案向人类患者给予所述活性化合物：约100mg，每天3次。
[0560] 在一个实施方式中，根据以下剂量方案向人类患者给予所述活性化合物：约150mg，每天2次。
[0561] 在一个实施方式中，根据以下剂量方案向人类患者给予所述活性化合物：约20mg，每天2次。
[0562] 然而，在一个实施方式中，根据以下剂量方案向人类患者给予所述偶联物化合物：约50或约75mg，每天3或4次。
[0563] 在一个实施方式中，根据以下剂量方案向人类患者给予所述偶联物化合物：约100或约125mg，每天2次。
[0564] 上面描述的剂量可适用于偶联物(包括PBD部分和与抗体的接头)或所提供的PBD化合物的有效量，例如在切割接头后可释放的化合物的量。
[0565] 对于疾病的预防或治疗，本发明的ADC的适当剂量将取决于如上所定义的待治疗的疾病类型、疾病严重程度和病程、不论给予分子用于预防性还是治疗性的目的、治疗前患者的病历和对抗体的应答、以及主治医师的判定。所述分子适当地以一次或通过一系列治疗来向患者给药。取决于疾病的类型和严重程度，约lμg/kg至15mg/kg(例如0.1-20mg/kg)的分子为用于向患者给药的最初候选剂量，无论例如通过一次或多次单独的给药，还是通过连续输注。典型的每日剂量可在约1μg/kg至100mg/kg或更高的范围内，这取决于以上所提及的因素。有待给予患者的ADC的示例性剂量在约0.1至约10mg/kg患者体重的范围内。对于几天或更长的重复给药，取决于病症，维持治疗直到发生对疾病症状令人希望的抑制。示例性给药方案包含给予约4mg/kg的初始负荷剂量，之后每一周、两周、或三周给予额外剂量的ADC的过程。其他剂量方案可能是有用的。这种治疗的进展容易通过常规技术和测定来监测。
[0566] 治疗
[0567] 在治疗疾病的上下文中在本文中使用的术语“治疗”通常涉及治疗和疗法，无论是人还是动物(例如在兽医应用中)，其中，实现了一些令人希望的治疗效果，例如，抑制病症的进展，并包括病症发展速率的减缓、发展速率的停止、回退，病症的改善，以及病症的治愈。还包括作为预防措施(即预防、防止)的治疗。
[0568] 本文中使用的术语“治疗有效量”涉及活性化合物，或包含活性化合物的材料、组合物或剂型的量，在根据希望的治疗方案给药时，其有效地产生一些令人希望的治疗效果，相应地具有合理的利益/风险比率。
[0569] 同样地，本文中使用的术语“预防有效量”涉及活性化合物，或包含活性化合物的材料、组合物或剂型的量，在根据希望的治疗方案给药时，其有效地产生一些令人希望的预防效果，相应地具有合理的利益/风险比率。
[0570] 抗体药物偶联物的制备
[0571] 抗体药物偶联物可以采用本领域技术人员熟知的那些有机化学反应、条件和试剂，通过几种路线来制备，包括：(1)使抗体的亲核基团与二价接头试剂反应，以通过共价键形成抗体-接头中间体Ab-L，接着与活化的药物部分试剂反应；以及(2)使药物部分试剂与接头试剂反应，以通过共价键形成药物-接头试剂D-L，然后与抗体的亲核基团反应。偶联方法(1)和(2)可以采用各种抗体和接头以制备本发明的抗体-药物偶联物。
[0572] 抗体的亲核基团包括但不限于侧链巯基，例如半胱氨酸。巯基是亲核性的，并且能够与接头部分上的亲电基团(例如本发明所述的那些)反应形成共价键。某些抗体具有可还原的链间二硫键，即半胱氨酸桥。通过使用还原剂如DTT(Cleland试剂，二硫苏糖醇)或TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐处理可以使得抗体变得对于与接头试剂的偶联有反应性(Getz等人(1999)Anal.Biochem.Vol273:73-80；Soltec Ventures,Beverly,MA)。理论上，每个半胱氨酸二硫桥将因此形成两个反应性巯基亲核体。另外的亲核基团可以通过赖氨酸与2-亚氨基硫杂环戊烷(Traut试剂)反应导致胺转变为巯基而引入至抗体中。
[0573] 受试者/患者
[0574] 受试者/患者可以是动物、哺乳动物、胎盘哺乳动物、有袋动物(例如，袋鼠、袋熊)、单孔类动物(例如，鸭嘴兽)、啮齿类动物(例如，豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠类(例如，小鼠)、兔类动物(例如，兔子)、禽类(例如鸟)、犬类(例如狗)、猫科(例如猫)、马科(例如，马)、猪类(例如猪)，羊类(例如绵羊)、牛(例如，奶牛)，灵长类、猿猴(例如，猴子或猿)、猴子(例如，绒猴、狒狒)、猿(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)或人。
[0575] 此外，受试者/患者可以为其发育的任何形式，例如，胎儿。在一个优选实施方式中，受试者/患者是人。
[0576] 在一个实施方式中，患者是其中每个患者具有在细胞的表面上具有ανβ6整联蛋白的肿瘤的群体。
[0577] 合成
[0578] 式VIII的二聚体中间体的一种可能的合成路线如下所示：
[0579]
[0580]
[0581] 在以上方案中，RL表示：
[0582] 一般说来，关于它们的N10-C11键，非对称的二聚体可以通过使用一当量的市售的(或容易制备的)氯甲酸酯试剂处理式IV的二氨基化合物来制备从而打破分子的对称L性。然后，可以独立地将余下的游离胺官能团化以引入连接基团前体(R)。进一步的官能团操作以关闭PBD的B-环，去除保护基团提供靶分子。
[0583] 式IV的化合物通常是通过将适当官能化的C-环片段(I)偶合至含有式II的二聚体核芯的A-环来制备的。C-环片段可以由已知的氨基甲酸酯保护的4-氧代脯氨酸甲酯结构单元来制备。可以采用在Wittig或Horner-Emmons条件下的烯化作用，以提供内-或外-不饱和烯烃。C-环和A-环片段可以利用A-环片段的酰基氯衍生物，在三乙胺存在下在标准条件下偶合，以给出式III的分子。在该阶段也可以通过引入不同的C-环来打破对称性。可以使用处于乙酸或甲酸中的锌将类型III的化合物还原，而不影响内或外C-环的不饱和性，得到式IV的分子。
[0584] 可替代地，可以将适合的4-羟基吡咯烷结构单元偶合到式II的二聚体核芯中。可以将所述羟基氧化为酮，然后再转化为烯醇三氟甲磺酸酯。可以使用Suzuki偶合来导入前C2取代基(pro C2substituent)(例如芳基、烯基等)。然后可以将硝基还原为胺，保护一个胺并且使另一个保持游离用以携带接头基团。
[0585] 类型VI的非对称的氨基甲酸酯可以通过用一当量的市售(或容易制备的)氯甲酸酯在吡啶或三乙胺存在下处理类型IV的二胺来制备。可以选择氯甲酸酯以提供适合的N L基于氨基甲酸酯的氮保护基团(Prot)，其与在前接头基团(R)中使用的那些是正交的。所L L
述R 氨基甲酸酯可以通过将剩余的氨基转化为异氰酸酯并且使用R 醇对其淬火来导入。
L
可替代地，所述R 醇可以转化为氯甲酸酯或功能等价物(氟甲酸酯、对硝基碳酸酯、五氟碳酸酯或羟基苯并三唑碳酸酯)。最后，可以将剩余的氨基转化为反应性对硝基氨基甲酸酯、L
五氟氨基甲酸酯或羟基苯并三唑氨基甲酸酯，它们可以使用R 醇置换来得到式VI的分子。
[0586] 式VII的分子可以由式VI的分子通过使用例如乙酸水溶液去除甲硅烷基保护基来制备。使用Dess-Martin高碘剂(Dess-Martin periodinane)(或可替代地TPAP/NMO、PDC或在Swern条件下)进行氧化得到闭环产物。
[0587] 式V的偶联物可以由式VII的分子通过去除基于氨基甲酸酯的氮保护基团来制备。
[0588] 在另一个实施方式中，式XVIII的偶联物可以由化合物IX来制备，如方案2所示。
[0589] 化合物II
[0590] 式(II)化合物的合成描述于本申请人的早期申请WO 2006/111759中并且还由Gregson等人(J.Med.Chem.2001,44,1161-1174)进行了描述。其中所述的化合物(II)的制备具体地通过引用并入本文。
[0591] 还可参考已知的合成PBD二聚体的方法，包括在Antonow,D.和Thurston,D.E.,Chem.Rev.2011111(4),2815-2864中综述的那些方法。
[0592] 进一步相关的公开可以在WO 2010/091150中找到。在WO2010/091150中描述的中间体化合物也可以应用在上述的方法中。
[0593] 例如，在第[164]段中显出的二聚体化合物(15)可以用作上述方案I中的化合物(III)。这以及进一步的修改对于本领域技术人员而言是显而易见的。
[0594] 实施例
[0595] 通用实验方法
[0596] 在ADP220旋光计(Bellingham Stanley Ltd.)上测试旋光度并且将浓度(c)表示为g/100mL。使用数字熔点仪(Electrothermal)测量熔点。在Perkin-ElmerSpectrum1000FT IR光谱仪上记录IR光谱。使用Bruker Avance NMR光谱仪分别在400和
1 13
100MHz下在300K获得 H和 C NMR波谱。化学位移相对于TMS(δ＝0.0ppm)进行报告，并且信号被指定为s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、dt(双重三重峰)、dd(双重峰双重峰)、ddd(双重峰双重峰双重峰)或m(多重峰)，偶合常数以赫兹(Hz)给出。使用耦合到具有Waters2996PDA的Waters2695HPLC的Waters Micromass ZQ仪器采集质谱(MS)数据。
所使用的Waters Micromass ZQ参数为：毛细管(kV)，3.38；锥体(V)，35；提取器(V)，3.0；
源温度(℃)，100；脱溶剂温度(℃)，200；锥体流量(L/h)，50；脱溶剂流速(L/h)，250。在Waters Micromass QTOFGlobal上以正W-模式记录高分辨质谱(HRMS)数据，使用金属涂覆的硼硅玻璃尖端将样品导入至仪器中。在硅胶铝板(Merck60,E254)上进行薄层色谱(TLC)，且快速色谱使用硅胶(Merck60,230-400目ASTM)。除了HOBt(NovaBiochem)和固体支持的试剂(Argonaut)，所有的其他化学品和溶剂均购自Sigma-Aldrich并且未经进一步纯化而按所供应的原样使用。无水溶剂如下制备：在适当干燥剂存在下在干燥氮气气氛下蒸馏，并且经过 分子筛或钠线贮存。石油醚是指在40-60℃下沸腾的馏分。
[0597] 通用的LC/MS条件：使用水(A)(甲酸0.1％)和乙腈(B)(甲酸0.1％)的流动相运行HPLC(Waters Alliance2695)。梯度：初始组合物5％B1分钟，然后在3分钟内由5％B至95％B。在95％B下将组合物保持0.5分钟，然后在0.3分钟内回到5％B。总梯度运行时间等于5分钟。流速3.0mL/min，通过零死体积T形接头分出400μL，将其送入质谱仪。波长检测范围：220～400nm。功能类型：二极管阵列(535次扫描)。柱：
Onyx Monolithic C18 50x4.60mm。
[0598] 实施例1
[0599] (a)(S)-2-(甲氧羰基)-4亚甲基吡咯烷鎓氯化物(3)
[0600]
[0601] (i)(S)-1-叔丁基2-甲基4-亚甲基吡咯烷-1,2-二羧酸酯(2)
[0602] 将碳酸钾(19.92g,14mmol,3eq.)加入到处于DMF(270mL)中的搅拌的羧酸(1)(10.92g,48mmol,1eq.)的溶液中。在室温下将所得到的白色悬浮液搅拌30min，此时加入碘代甲烷(21.48g,9.5mL,151mmol,3.15eq.)。在室温下将反应混合物搅拌3天。通过减压旋转蒸发去除DMF，得到黄色残留物，将其在乙酸乙酯和水之间进行分配。分离出有机相，并且使用乙酸乙酯萃取水相。使用水、盐水洗涤合并的有机层，并通过硫酸镁干燥。通过减压旋转蒸发去除乙酸乙酯，得到黄色油状粗产物。通过快速色谱法[85％正己烷/15％乙酸乙酯]纯化该粗产物，得到无色油状产物。(已知的化合物F，Manfré等人,J.Org.Chem.1992,57,2060-2065)。
[0603] (ii)(S)-2-(甲氧羰基)-4亚甲基吡咯烷鎓氯化物(3)
[0604] 在室温下，将处于二氧六环(63mL,254.4mmol,4.5eq.)中的4M盐酸溶液加入到Boc保护的C-环片段(2)(13.67g,56.6mmol,1eq.)中。观察到起泡表明CO2的释放和Boc基团的脱除。产物作为白色固体沉淀，添加额外的二氧六环以有助于搅拌。将反应混合物搅拌一个小时，然后使用醚稀释。通过真空过滤收集沉淀的产物，并且使用额外的醚洗涤。风干得到希望的产物为白色粉末2(9.42g,94％)(P Herdwijn等人,Canadian Journal of Chemistry.1982,60,2903-7)。
[0605] (b)叔丁基(5-((5-(5-氨基-4-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸酯(9)
[0606]
[0607] (i)(S)-(4,4'-(戊烷-1,5-二基双(氧基))双(5-甲氧基-2-硝基-4,1-亚苯基))双(((S)-2-(甲氧基羰基)-4-亚甲基吡咯烷-1-基)甲酮)(5)
[0608] 在室温下，将催化量的无水DMF(0.5mL)加入到处于无水DCM(180mL)中的搅拌的草酰氯(9.1g,6.25mL,71.7mmol,3eq.)和二聚体核芯(4)(11.82g,23.9mmol,1eq.)的悬浮液中。在加入DMF后观察到剧烈的起泡，并且将反应混合物在装有氯化钙干燥管的圆底烧瓶中搅拌18h。将所得澄清溶液在减压下蒸发，并且用醚研磨固体。通过真空过滤收集固体产物，使用额外的醚洗涤并且在40℃下在真空下干燥1.5小时。然后将该固体分批加入到处于TEA(12.08g,119.6mmol,5eq.)和干燥DCM(110mL)中的C-环(3)(9.35g,52.6mmol,2.2eq.)的悬浮液中，使用干冰/乙腈浴的辅助将温度维持在-40和-50℃之间。在-40℃下将反应混合物搅拌1小时，然后温热至室温，此时LCMS表明原料完全被消耗。使用额外的DCM稀释反应混合物，并且依次使用盐酸水溶液(1M,2x200mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(2x250mL)、水(250mL)、盐水(250mL)进行洗涤，干燥(MgSO4)。通过减+压旋转蒸发去除DCM，得到黄色泡沫状产物(13.94g,79％)。分析数据：RT3.95min；MS(ES)+.
m/z(相对强度)741([M+1] ,100)。
[0609] (ii)(S)-(4,4'-(戊烷-1,5-二基双(氧基)双(5-甲氧基-2-硝基-4,1-亚苯基))双(((S)-2-(羟甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-基)甲酮)(6)
[0610] 在氮气气氛下在0℃(冰浴)下，将固体硼氢化锂(0.093g,4.3mmol,3eq.)一次性加入到处于干燥THF(10mL)中的酯(5)(1.05g,142mmol,1eq.)溶液中。在0℃下将反应混合物搅拌30分钟，然后温热至室温，此时观 察到沉淀出橙色胶状物。在室温下将反应混合物搅拌另外2小时，然后在冰浴中冷却，并且使用水(20mL)处理得到黄色悬浮液。小心地加入盐酸(1M)(剧烈冒泡！)直到停止冒泡。使用乙酸乙酯(4x50mL)萃取反应混合物，并且使用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤合并的有机层并且干燥(MgSO4)。通过减压旋转蒸发去除乙酸乙酯，得到黄色泡沫状产物(0.96g,99％)。在12.4g规模上重复反应，得到11.06g+ +.产物(96％)。分析数据：RT3.37min；MS(ES)m/z(相对强度)685([M+H] ,100)。
[0611] (iii)(S)-((戊烷-1,5-二基双(氧基)双(5-甲氧基-2-硝基-4,1-亚苯基))双(((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-基)甲酮)(7)
[0612] 在氩气气氛下在室温下，将处于无水DMF(100mL)中的二硝基醇(6)(7.94g,11.6mmol,1eq)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(4.54g,30.15mmol,2.6eq)和咪唑(4.1g,60.3mmol,5.2eq)的溶液搅拌3小时。使用水(250mL)稀释反应混合物，并且使用DCM(4x100mL)萃取。使用水(200mL)、饱和盐水(200mL)洗涤合并的萃取物，干燥(MgSO4)并在减压下蒸发。通过快速柱色谱[以10％增量，由50％乙酸乙酯/50％正己烷至100％乙+
酸乙酯]纯化残留物，得到黄色泡沫状产物(10.0g,94％)。分析数据：RT4.57min；MS(ES)+.
m/z(相对强度)913([M+H] ,100)。
[0613] (iv)(S)-((戊烷-1,5-二基双(氧基)双(2-氨基-5-甲氧基-4,1-亚苯基))双(((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-基)甲酮)
(8)
[0614] 将甲酸溶液(5％v/v,15mL)一次性加入到处于乙酸乙酯/乙醇(80mL/150mL)中的锌粉(29.56g,0.45mol,40eq.)和化合物(7)(10.34g,11.32mmol,1eq.)的混合物中。观察到12℃的放热。15分钟后，通过硅藻土过滤反应混合物，使用乙酸乙酯(过量)洗涤。使用饱和碳酸氢钠(3x150mL)、水(200mL)、饱和盐水(200mL)洗涤过滤物，干燥(MgSO4)并且在减压下蒸发。通过快速柱色谱[乙酸乙酯]纯化，得到白色泡沫状产物(8.09g,84％)。+ +.
分析数据：RT4.43min；MS(ES)m/z(相对强度)853([M+H] ,100)。
[0615] (v)叔丁基(5-((5-(5-氨基-4-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸酯(9)
[0616] 将处于无水THF(50mL)中的双-苯胺(8)(6.02g,7.1mmol,1eq.)和二-叔丁基-二碳酸酯(1.54g,7.1mmol,1eq.)的溶液加热回流16小时。在减压下蒸去溶剂，并且通过快速柱色谱[40％乙酸乙酯/60％正己烷至60％乙酸乙酯/40％正己烷至100％乙酸+
乙酯]纯化残留物，得到白色泡沫状产物(3.22g,48％)。分析数据：RT4.27min MS(ES)m/+. - -.
z(相对强度)953([M+H] ,100)，MS(ES)m/z(相对强度)951([M-H]) ,100)。
[0617] (c)(11S,11aS)-2-(吡 啶 -2- 基 二 硫 烷 基 )乙 基11- 羟 基 -7- 甲 氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-10(5H)-羧酸酯(14)
[0618]
[0619] 化合物10是按照Jones等人,J.Am.Chem.Soc.,2006,128,6526-6527来制备的。
[0620] (i)叔丁基(2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙基)((S)-(戊烷-1,5-二基双(氧基)双(2-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基-5,1-亚苯基))二氨基甲酸酯(11)
[0621] 在室温下在氩气气氛下，将三乙胺(0.25g,0.34mL,2.42mmol,2.2eq.)加入到处于干燥THF(10mL)中的单-Boc保护的双-苯胺(9)(1.05g,1.1mmol,1.0eq.)和三光气(0.117g,0.4mmol,0.36eq.)的搅拌溶液中。将反应混合物加热至40℃，并且在5分钟后，+用甲醇处理样品并且通过LCMS 分析，为氨基甲酸甲基。分析数据：RT4.37min MS(ES)m/+.
z(相对强度)1011([M+H] ,100)。
[0622] 将 处 于 干 燥 THF(10mL)中 的2-( 吡 啶-2- 基 二 硫 烷 基 )乙 醇 (10)(0.31g,1.65mmol,1.5eq.)和三乙胺(0.17g,0.23mL,1.65mmol,1.5eq.)的溶液逐滴加入到新鲜制备的异氰酸酯中。在40℃下将反应混合物加热1.5h，之后加入另一部分的三光气(0.058g,0.2mmol,0.18eq.)。在另外30min之后，将反应混合物冷却，过滤以除去三乙胺盐酸盐并且将滤液蒸发至干燥，得到黄色油状的粗产物，将其通过快速柱色谱法[60％正己烷/40％乙酸乙酯改变至55％正己烷/45％乙酸乙酯]进行纯化，得到无色油状所需产物+ +. -(0.63g,49％)。分析数据：RT4.50min；MS(ES)m/z(相对强度)1166([M+H] ,100),MS(ES)-.
m/z(相对强度)1164([M-H]) ,70)。
[0623] (ii)叔丁基(2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙基)酯((S)-(戊烷-1,5-二基双(氧基)双(2-((S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基-5,1-亚苯基))二氨基甲酸酯(12)
[0624] 将 AcOH/H2O(3/1/)(8mL) 加 入 到 处 于 THF(2mL) 中 的 化 合 物 (11)(0.37g,0.32mmol,1eq)的溶液中，并且将所得到的溶液在室温下搅拌18h。使用饱和的NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节至pH8。使用乙酸乙酯(3x100mL)萃取混合物，并且使用饱和的NaHCO3溶液(100mL)、水(100mL)、饱和盐水(100mL)洗涤合并的萃取物，干燥(MgSO4)并在减压下蒸发。通过快速柱色谱法[以1％增量，氯仿/甲醇0％至5％梯度洗+脱]纯化残留物，得到白色泡沫状产物(0.24g,81％)。分析数据：RT3.08min；MS(ES)m/+. - -.
z(相对强度)938([M+H] ,100),MS(ES)m/z(相对强度)936([M-H]) ,100)。
[0625] (iii)(11S,11aS)- 叔 丁 基 11- 羟 基 -8-((5-(((11S,11aS)-11- 羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-10-((2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙氧基)羰
基)-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-10(5H)-羧酸酯(13)
[0626] 在 氩 气 气 氛 下 在-78 ℃(干 冰/ 丙 酮) 下，将 处 于 DCM(5mL)中 的DMSO(79mg,72μL,1.0mmol,4.4eq)的溶液逐滴加入到处于DCM(5mL)中的草酰氯(62mg,42μL,0.49mmol,2.15eq.)的溶液中。在-78℃将溶液搅拌15分钟。将处于DCM(6mL)中的化合物(12)(0.214g,0.23mmol,1.0eq.) 的溶液逐滴加入，并且在-78℃下将混合物搅拌45分钟。加入三乙胺(0.23g,0.32mL,2.28mmol,10eq.)，并且在5min之后，将反应混合物升温至室温。使用饱和的NH4Cl溶液(15mL)处理反应混合物，分离出有机部分并且使用1M柠檬酸溶液(3x50mL)、饱和的NaHCO3溶液(100mL)、水(100mL)、饱和的盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在减压下蒸发，得到浅黄色油状物。经快速柱色谱法纯化得到白色泡+ +.
沫状产物(68mg,32％)。分析数据：RT2.90min；MS(ES)m/z(相对强度)933([M+H] ,50)，- -.
MS(ES)m/z(相对强度)935([M-H]) ,55)。
[0627] (iv)(11S,11aS)-2-(吡 啶-2- 基 二 硫 烷 基) 乙 基 11- 羟 基 -7-甲 氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-10(5H)-羧酸酯(14)
[0628] 将95％三氟乙酸的冷(冰浴)溶液(1mL)加入到已经在在冰浴中冷却的化合物13中。将溶液在0℃下搅拌15分钟，此时通过LCMS显示反应完成。将反应混合物逐滴加入到冰和饱和NaHCO3溶液的混合物中，以中和三氟乙酸溶液。使用DCM(4x50mL)萃取混合物，并且使用饱和的盐水(100mL)洗涤合并的萃取物，干燥(MgSO4)并在减压下蒸发，得到白色泡+ +.沫状产物(26mg,96％)。分析数据：RT2.72min；MS(ES)m/z(相对强度)816([M+H] ,70)，- -.
MS(ES)m/z(相对强度)814([M-H]) ,40)。
[0629] 实施例2
[0630] (a)(R)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)丙-1-醇(18)
[0631]
[0632] (i)(R)-甲基2-(乙酰基硫代)丙酸酯(16)
[0633] 将硫代乙酸(1.99g,1.86mL,26.1mmol,1.1eq.)加入到处于干燥DMF(40mL)中的碳酸铯(7.73g,23.72mmol,1.0eq.)的悬浮液中。在30分钟之 后，加入(S)-甲基2-氯丙酸酯(15)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在二乙醚(150mL)和水(150mL)之间分配反应混合物；分离出水并且使用另一部分的二乙醚(150mL)洗涤。使用水(6x100mL)、盐水(200mL)洗涤合并的有机部分，干燥(MgSO4)并且在减压下蒸发。通过快速柱色谱法[10％乙酸乙酯/90％正己烷]纯化，得到无色油状产物(3.01g,82％)。分析数+ +. +. t据：RT2.25min；MS(ES)m/z( 相 对 强 度)163([M+H] ,10),185([M+Na] ,65)；[α]d ＝
17.8℃
[+141] d(c,2.26CHCl3)。
[0634] (ii)(R)-2-巯基丙-1-醇(17)
[0635] 在氩气气氛下，在回流下将处于干燥THF(10mL)中的硫代乙酸酯(16)(0.57g,3.54mmol,1.0eq.)的溶液逐滴加入到处于干燥THF(20mL)中的氢化铝锂
(0.54g,14.15mmol,4.0eq.)的悬浮液中。在1h之后，将反应混合物冷却至0℃并且逐滴加入2M HCl，保持温度低于30℃直到停止冒泡。将所得混合物在室温下搅拌1小时，然后通过硅藻土过滤，使用THF(40mL)洗涤。蒸发去除溶剂；将残留物重新溶解在DCM中，并且干燥(MgSO4)。在减压下蒸发去除DCM，随后将残留物通过柱色谱[60％正己烷/40％乙酸乙酯]，t 17.2℃
得到淡黄色油状产物(0.193g,58％)。分析数据：[α]d＝[-22] d(c,0.972CHCl3)。
[0636] (iii)(R)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)丙-1-醇(18)
[0637] 在0℃下在氩气气氛下，将磺酰氯(1M在DCM中,2.0mL,2.0mmol,1.1eq.)逐滴加入到处于干燥DCM(5mL)中的2-巯基吡啶(0.2g,1.81mmol,1.0eq.)的溶液中。将所得溶液在室温下搅拌2小时并且在减压下蒸发DCM得到黄色固体。将固体悬浮于干燥DCM(10mL)中并且逐滴加入处于干燥DCM(5mL)中的(R)-2-巯基丙-1-醇(17)
(0.18g,1.95mmol,1.08eq.)的溶液。在室温下在氩气气氛下将混合物搅拌18小时。将反应混合物过滤并且在减压下蒸发滤液得到黄色胶状物。将胶状物重新溶解在水中并且用氢氧化铵溶液将该溶液碱化，使用DCM(3x50mL)萃取，并且使用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤合并的萃取物，干燥(MgSO4)并蒸发，得到黄色油状物。通过快速柱色谱[以5％增量，由80％正己烷/20％乙酸乙酯至60％正己烷/40％乙酸乙酯]纯化，得到无色油状的产物+ +. t
(0.213g,59％)。分析数据：RT2.43min；MS(ES)m/z(相对强度)202([M+H] ,50)；[α]d＝
26.2℃
[+273] d(c,0.28CHCl3)。
[0638] (b)(11S,11aS)-(R)-2-(吡 啶-2-基 二硫 烷 基)丙 基11-羟 基-7-甲 氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-10(5H)-羧酸酯(22)
[0639]
[0640] (i)叔丁基((R)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)丙基)((S)-(戊烷-1,5-二基双(氧基))双(2-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基-5,1-亚苯基))二氨基甲酸酯(19)
[0641] 在室温下在氩气气氛下，将三乙胺(0.28g,0.39mL,2.8mmol,2.2eq.)加入到处于干燥THF(15mL)中的搅拌的单-boc保护的双-苯胺(9)(1.21g,1.27mmol,1.0eq.)和三光气(0.136g,0.46mmol,0.36eq.)的溶液中。将反应混合物加热至40℃并且在5分钟后，使+用甲醇处理样品并且通过LCMS分析为氨基甲酸甲酯。分析数据：RT4.30min MS(ES)m/z(相+.
对强度)1011([M+H] ,100)。
[0642] 将处于干燥THF(10mL)中的(R)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)丙-1-醇(18)(0.38g,1.91mmol,1.5eq.)和三乙胺(0.19g,0.27mL,1.91mmol,1.5eq.)的溶液逐滴加入到新鲜制备的异氰酸酯中。在40℃下将反应混合物加热4小时，并且然后在室温下搅拌
18小时。将反应混合物过滤以除去三乙胺盐酸盐，并且将滤液蒸发至干燥得到黄色油状的粗产物，将其通过快速柱 色谱[以5％增量，从60％正己烷/40％乙酸乙酯至40％正己烷/60％乙酸乙酯]纯化，得到白色泡沫状的所需产物(0.75g,50％)。分析数据：RT4.50min；
+ +. t 21℃
MS(ES)m/z(相对强度)1180([M+H] ,60)；[α]d＝[-18] d(c,0.28CHCl3)。
[0643] (ii)叔丁基((R)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)丙基)((S)-(戊烷-1,5-二基双(氧基))双(2-((S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基-5,1-亚苯基))二氨基甲酸酯(20)
[0644] 将乙酸/H2O(3/1,16mL)加入到处于THF(4mL)中的双-甲硅烷基醚(19)(0.72g,0.61mmol,1eq.)的溶液中。将所得溶液在室温下搅拌16小时。使用饱和
碳酸氢钠溶液将反应混合物的pH调节至pH8。使用乙酸乙酯(4x150mL)萃取混合
物，并且用饱和碳酸氢钠溶液(2x150mL)、水(150mL)、盐水(150mL)洗涤合并的萃取物，干燥(MgSO4)并在减压下蒸发。通过快速柱色谱法纯化得到白色泡沫状的产物+ +. t
(0.56g,96％)。分析数据：RT3.15min；MS(ES)m/z(相对强度)953([M+H] ,100)；[α]d＝
26℃
[-13.5] d(c,0.22CHCl3)。
[0645] (iii)(11S,11aS)-叔 丁 基 11-羟 基-8-((5-(((11S,11aS)-11- 羟 基-7- 甲氧 基-2-亚 甲 基-5-氧 代-10-(((R)-2-( 吡 啶-2-基 二 硫 烷 基)丙 氧 基) 羰基)-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-10(5H)-羧酸酯(21)
[0646] 在 -40 ℃ 下 在 氩 气 气 氛 下，将 处 于 无 水 DCM(5mL) 中 的DMSO(91mg,83μL,1.16mmol,4.4eq.)的溶液逐滴加入到处于无水DCM(5mL)中的草酰氯(2.0M在DCM中,318μL,0.635mmol,2.4eq.)的溶液中。在-40℃下将溶液搅拌15分
钟。逐滴加入处于无水DCM(10mL)中的双醇(20)(0.252g,0.26mmol,1eq.)的溶液，并且在-40℃下将所得到的混合物搅拌45分钟。在这期间，使温度达到-25℃。将温度降低至-35℃并且逐滴加入三乙胺(0.27g,0.36mL,2.6mmol,10eq.)。在5分钟后，使温度达到室温。用DCM(50mL)稀释反应混合物并且使用1M柠檬酸溶液(3x150mL)、饱和碳酸氢钠溶液(150mL)、水(200mL)、盐水(200mL)萃取，干燥(MgSO4)并且在减压下蒸发，得到黄色泡沫物。通过快速柱色谱法[以0.5％增量，氯仿/甲醇由0％至2％]纯化，得到白色泡沫状的+ +.
产物(0.137g,53％)。 分析数据：RT3.17min；MS(ES)m/z(相对强度)948([M+H] ,100)；
t 26℃
[α]d＝[+170] d(c,0.25CHCl3)。
[0647] (iv)(11S,11aS)-(R)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)丙基11-羟基-7-甲 氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四
氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓-10(5H)-羧酸酯(22)
[0648] 将95％三氟乙酸的冷(冰浴)溶液(8.5mL)加入到已经在冰浴中冷却的化合物(21)(0.221g,0.23mmol,1eq.)中。在0℃下将溶液搅拌25分钟，此时通过LCMS显示反应完全。将反应混合物逐滴加入到冰和饱和碳酸氢钠溶液(200mL)的混合物中，以中和三氟乙酸溶液。使用DCM(4x75mL)萃取混合物，并且使用水(100mL)、饱和盐水(100mL)洗涤合并的萃取物，干燥(MgSO4)并在减压下蒸发，得到粗产物。通过快速柱色谱法[以1％增量，氯仿/甲醇从0％至3％]纯化，得到白色泡沫状产物(0.192g,99％)。分析数据：RT3.00min；+ +. t 22℃
MS(ES)m/z(相对强度)830([M+H] ,75)；[α]d＝[+444] d(c,0.26CHCl3)。
[0649] 实施例3：体外细胞毒性的测定
[0650] 在37℃下，在含5％CO2的潮湿气氛中，将K562人慢性髓性白血病细胞保持在补充有10％胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPM11640培养基中，并且在37℃下在暗处，与特定剂量的药物孵育96小时。通过离心(5min,300g)终止孵育，并且使用无药物的培养基将细4
胞洗涤一次。在适当的药物处理后，将细胞转移至96-孔的微量滴定板中(10 细胞每孔，
8孔每样品)。然后将该板保持在暗处在37℃下在含5％CO2的潮湿气氛中。检测是以活细胞将黄色可溶性四唑盐(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物(MTT,Aldrich-Sigma))还原为不溶性紫色甲臜沉淀的能力为基础的。在将板孵育4天(使得对照细胞的数量增加约10倍)之后，向每个孔中加入20μL的MTT溶液(5mg/mL，在磷酸盐缓冲盐水中)，并且进一步将板孵育5小时。然后在300g下将板离心5分钟，从细胞团粒中吸除大部分的培养基，留下10～20μL每孔。向每孔中加入DMSO(200μL)，并且搅拌样品以确保完全混合。然后在Titertek Multiscan ELISA酶标仪上在550nm的波长下读取光密度，并且构建剂量-响应曲线。对于每条曲线，将IC50值读取为将最终光密度降低至对照值的50％所需的剂量。
[0651] 用于偶联的ThioMabs的还原/氧化
[0652] 在含有2mM EDTA的pH7.5的50mM Tris中，使用约20～40倍过量的TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐或DTT(二硫苏糖醇)将在CHO细胞中表达的全长、半胱氨酸工程化的单克隆抗体(ThioMabs–Junutula等人,2008bNature Biotech.,26(8):925-932；Dornan等 人 (2009)Blood114(13):2721-2729；US 7521541；US 7723485；WO2009/052249,Shen等 人(2012)Nature Biotech.,30(2):184-191；Junutula等 人 (2008)Jour of Immun.Methods332:41-52)在37℃下还原3小时或者在室温下还原过夜。(Getz等人(1999)Anal.Biochem.Vol273:73-80；Soltec Ventures,Beverly,MA)。将还原的ThioMab稀释并且装载至处于10mM醋酸钠(pH5)中的HiTrap S柱上，并且使用含有0.3M氯化钠的PBS洗脱。可替换地，通过加入l/20体积的10％醋酸来酸化抗体，用10mM琥珀酸盐(pH5)稀释，装载到柱上，然后用10柱体积的琥珀酸盐缓冲液洗涤。用50mM Tris(pH7.5)、2mmEDTA对柱进行洗脱。
[0653] 将洗脱的还原的ThioMab用15倍摩尔过量的DHAA(脱氢抗坏血酸)或200nM硫酸铜(CuSO4)水溶液处理。链间二硫键的氧化在约三小时或更长时间内完成。环境空气氧化也是有效的。将再氧化的抗体透析到20mM琥珀酸钠(pH5)、150mM NaCl、2mM EDTA中，并在-20℃冷冻保存。
[0654] Thio-Mabs与化合物偶联以制备抗体-药物偶联物
[0655] 在50mM Tris pH8中，使脱封闭、再氧化的硫代-抗体(ThioMab)与6～8倍摩尔过量的上述化合物(14,22)(来自浓度为20mM的DMSO储备液)反应，直到通过反应混合物的LC-MS分析确定反应完全(16～24小时)。
[0656] 然后，在使用20mM琥珀酸pH5稀释之后，将粗抗体-药物偶联物(ADC)施加到阳离子交换柱上。使用至少10个柱体积的20mM琥珀酸钠pH5洗涤该柱，并且使用PBS洗脱抗体。使用凝胶过滤柱，将抗体药物偶联物配制到具有240mM蔗糖的20mM His/乙酸盐pH5中。通过UV光谱对抗体-药物偶联物进行表征以确定蛋白质浓度，使用分析SEC(尺寸排阻色谱)进行聚集分析并且在使用赖氨酸C肽内切酶处理之前和之后进行LC-MS。
[0657] 使用Shodex KW802.5柱，用具有0.25mM氯化钾和15％IPA的0.2M磷酸钾pH6.2以0.75ml/min的流速实施尺寸排阻色谱。通过在280nm下的洗脱峰面积吸光度的积分来确定偶联物的聚集状态。
[0658] 使用Agilent QTOF6520ESI仪器来进行LC-MS分析。例如，在37℃下，在Tris pH7.5中使用1:500w/w蛋白内切酶Lys C(Promega)处理使用这种化学生成的抗体-药物偶联物30分钟。将所得到的切割片段装载到加热至80℃的1000A,8um PLRP-S柱上，并且使用在5分钟内由30％B至40％B的梯度进行洗脱。流动相A是具有0.05％TFA的H2O且流动相B是具有0.04％TFA的乙腈。流速为0.5ml/min。在电喷射离子化和MS分析之前，通过在280nm下的紫外吸收检测来监测蛋白质洗脱。通常实现了未偶联的Fc片段、残余未偶联的Fab和药物化的Fab的色谱分辨(Chromatographic resolution)。使用Mass TM
Hunter 软件(Agilent Technologies)将获得的m/z光谱去卷积，以计算抗体片段的质量。
[0659] 例如，与22偶联的硫代-Tmab的分子量(MW)(质量增加＝720道尔顿)。观察到的去卷积质量：
[0660] 53,296道尔顿对应于未偶联的Fc片段的MW
[0661] 47,431道尔顿对应于未偶联的Fab片段的MW
[0662] 48,150道尔顿对应于药物化的Fab片段的MW
[0663] 因此，在48,150道尔顿下的观察峰对应于希望的携带了一个药物22(+720道尔顿)的Fab片段(47,431道尔顿)。
[0664] ADC与22的硫化偶联物
[0665] 质量增加719.84
[0666]
[0667] ADC与14的硫代偶联物
[0668] 质量增加705.81
[0669]
[0670]
[0671] 以 下 体 外 和 体 内 测 定 法 也 描 述 于 Phillips等 人 (2008)Cancer Res.68(22):9280-9290中。
[0672] 体外细胞增殖测定
[0673] ADC的效能通过细胞增殖测定采用以下方案来测量(CellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay,Promega Corp.Technical Bulletin TB288；Mendoza等人(2002)Cancer Res.62:5485-5488)。所有的细胞系都获自于美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)：4
[0674] 1.将在培养基中包括约10 个细胞的细胞培养物的100μL的等分部分(例 如，KPL-4、一 种 人 乳 腺 癌 细 胞 系(Kurebayashi等 人 (1999)Brit.Jour.Cancer79(5-6):707-717))、SKBR-3或MCF7))沉积在96孔、壁不透明板中的每个孔中。
[0675] 2.制备含有培养基而没有细胞的对照孔。
[0676] 3.将ADC加入到实验孔中并孵育3～5天。
[0677] 4.将平板平衡至室温约30分钟。
[0678] 5.加入等于存在于每孔中的细胞培养基的体积的CellTiter-Glo试剂的体积。
[0679] 6.在定轨摇床上将内含物混合2分钟以诱导细胞破裂。
[0680] 7.在室温下将平板孵育10分钟以稳定发光信号。
[0681] 8.在图表中记录发光并报告为RLU＝相对发光单位。
[0682] 在96-孔板中以1000～2000/孔或2000～3000/孔，接种某些细胞，50μL/孔。在一天或两天后，以50μL的体积加入ADC至终浓度为9000、3000、1000、333、111、37、12.4、
4.1或1.4ng/mL，“没有ADC”的对照孔只接收培养基。条件为一式两份或三份。在3～5天后，加入100μL/孔的CellTiterGlo II(基于荧光素酶的测定；由ATP水平测定增殖)，并使用光度计来测定细胞计数。将数据绘制为每组重复的发光平均值，带有标准差误差棒。
该方案是CellTiter Glo发光细胞活性测定(Promega)的修改：
[0683] 1.铺板1000个细胞/孔，在50μL/孔的FBS/谷氨酰胺培养基中。使细胞贴壁过夜。
[0684] 2.以18μg/mL的工作浓度起始，将ADC1:3连续稀释在培养基中(这产生9μg/mL的最终浓度)。将50μL稀释的ADC加入到50μL的细胞中而培养基已经在孔中。
[0685] 3.孵育72～96小时(标准为72小时，但是在细胞为85～95％汇合时，看到0μg/mL浓度以停止试验)。
[0686] 4.加入100μL/孔的Promega Cell Titer Glo试剂，振动3分钟，并在光度计上读数。
[0687] 结果
[0688] 针对SK-BR-3、KPL-4和MCF-7细胞测试抗体-药物偶联物，曲妥珠单抗-14(110)和曲妥珠单抗-22(101)(Levenson等人(1997)Cancer Res.57(15):3071-3078)，以便在五天的研究中测量体外细胞活力。101针对SK-BR-3的IC50(μg/mL)值是22.12。110针对SK-BR-3的IC50值是102.78。SK-BR-3细胞是HER2+表达、曲妥珠单抗敏感的。101和110两者针对MCF-7(其为不表达HER2的人乳腺腺癌细胞系)实际上无活性。因此，偶联物101和110显示出了靶向细胞杀伤效能。
[0689] 在高表达HER2的转基因的外植体小鼠中肿瘤生长抑制的体内效能
[0690] 适合于转基因实验的动物可以从标准商业来源如Taconic(Germantown,N.Y.)获得。许多品系是合适的，但优选FVB雌性小鼠，因为它们更易于肿瘤形成。FVB雄性用于交配并且切除输精管，使用CD.1大头针刺激假孕。切除输精管的小鼠可以从任何商业供应商获得。创建者(founder)使用FVB小鼠或129/BL6x FVB p53杂合小鼠繁殖。在p53等位基因处具有杂合性的小鼠用于潜在增加肿瘤形成。然而，已证明这是不必要的。因此，一些F1肿瘤是混合品系。创建者肿瘤仅为FVB。使用一些发展肿瘤而没有产仔的动物获得六个创建者。
[0691] 有肿瘤的动物(由Fo5mmtv转基因小鼠同种异体移植繁殖)通过IV注射ADC用单剂量或多剂量治疗。在注射后的各时间点评估肿瘤体积。
[0692] 肿瘤在表达突变活化形式的neu(HER2的大鼠同系物)的转基因小鼠中已经出现，而在人乳腺癌中过表达的HER2没有变异，且肿瘤形成在过表达非突变HER2的转基因小鼠中是较不稳健的(Webster等人(1994)Semin.Cancer Biol.5:69-76)。
[0693] 为了提高具有非变异的HER2的肿瘤形成，利用删除了上游ATG以防止在该上游ATG密码子处起始翻译的HER2 cDNA质粒(否则其将减少从HER2的下游真正起始密码子处起始的翻译频率)，产生转基因小鼠，(例如，见Child等人(1999)J.Biol.Chem.274:24335-24341)。另外，如先前报道的，将嵌合内含子加入到5’末端，其也应增强表 达水平(Neuberger和Williams(1988)Nucleic Acids Res.16:6713；Buchman和 Berg(1988)Mol.Cell.Biol.8:4395；Brinster 等 人 (1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:836)。嵌合内含子源于Promega载体、Pci-neo哺乳动物表达载体(bp890-1022)。
cDNA3’末端侧翼为人生长激素外显子4和5以及多聚腺苷化序列。此外，使用FVB小鼠，因为该品系更易于肿瘤发育。使用来自MMTV-LTR的启动子以确保在乳腺中的组织特异性HER2表达。将动物用AIN76A饮食喂养，以增加肿瘤形成的易感性(Rao等人(1997)Breast Cancer Res.and Treatment45:149-158)。
[0694] Fo5小鼠乳腺肿瘤模型
[0695] Fo5模型是转基因小鼠模型，其中人HER2基因，在鼠乳腺肿瘤病毒启动子(MMTV-HER2)的转录调节下，在乳腺上皮细胞中过表达。过表达引起乳腺肿瘤的自发发育，其过表达人HER2受体。创建动物(创建者#5[Fo5])之一的乳腺肿瘤通过肿瘤片段的系列移植已经在FVB小鼠的后代中增殖。在用于体内效能研究之前，将MMTV-HER2Fo5转基因乳腺肿瘤以测量约2x2mm的碎片手术移植入nu/nu小鼠(来自Charles River Laboratories)的No.2/3乳腺的脂垫中。在肿瘤到达希望的体积时，将荷瘤小鼠随机分组并通过IV注射给予单剂量ADC。
[0696] 结果
[0697] 图1示出了在乳腺癌-模型MMTV-HER2 Fo5中，接种到CRL nu/nu小鼠中的乳腺同种异体移植肿瘤在第0天单次静脉内(iv)给药以下物质之后，体内平均肿瘤体积随时间变化的曲线图：(1)载体20mM组氨酸乙酸盐，pH5.5，240mM蔗糖，(2)10mg/kg的xCD22-22(103)，(3)1mg/kg的曲妥珠单抗-22(101)，(4)3mg/kg的曲妥珠单抗-22(101)，以及(5)10mg/kg的曲妥珠单抗-22(101)。图中的线用下列符号指示：
[0698]
[0699] 图2示出了在乳腺癌-模型MMTV-HER2 Fo5中，接种到CRL nu/nu小鼠中的乳腺同种异体移植肿瘤在第0天单次静脉内给药以下物质之后，体内平均肿瘤体积随时间变化的曲线图：1)载体20mM组氨酸乙酸酯，pH5.5，240mM蔗糖，(2)6mg/kg的xCD22-14(112)，(3)1mg/kg的曲妥珠单抗-14(110)，(4)3mg/kg的曲妥珠单抗-14(110)，(5)6mg/kg的曲妥珠单抗-14(110)，以及(6)1mg/kg的曲妥珠单抗-22(101)。图中的线用下列符号指示：
[0700]
[0701] 缩写
[0702] Ac 乙酰基
[0703] Acm 乙酰胺基甲基
[0704] Alloc 烯丙氧基羰基
[0705] Boc 二叔丁基二碳酸酯
[0706] t-Bu 叔丁基
[0707] Bzl 苄基，其中Bzl-OMe是甲氧基苄基且Bzl-Me是甲基苯
[0708] Cbz或Z 苄氧基-羰基，其中Z-Cl和Z-Br分别是氯-和溴苄氧基羰基
[0709] DMF N,N-二甲基甲酰胺
[0710] Dnp 二硝基苯基
[0711] DTT 二硫苏糖醇
[0712] Fmoc 9H-芴-9-基甲氧羰基
[0713] imp N-10亚胺保护基团：3-(2-甲氧基乙氧基)丙酸酯-Val-Ala-PAB[0714] MC-OSu 马来酸亚胺己酸基-O-N-琥珀酸亚胺
[0715] Moc 甲氧羰基
[0716] MP 马来酰亚胺基丙酰胺
[0717] Mtr 4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基
[0718] PAB 对-氨基苄氧基羰基
[0719] PEG 乙烯氧基
[0720] PNZ 氨基甲酸对-硝基苄酯
[0721] Psec 2-(苯磺酰基)乙氧基羰基
[0722] TBDMS 叔丁基二甲基甲硅烷基
[0723] TBDPS 叔丁基二苯基甲硅烷基
[0724] Teoc 2-(三甲基甲硅烷)乙氧基羰基
[0725] Tos 甲苯磺酰基
[0726] Troc 2,2,2-三氯乙氧羰基氯
[0727] Trt 三苯甲基
[0728] Xan 占吨基(xanthyl)
[0729] 参考文献
[0730] 下列参考文献通过引入以其全部内容并入本文：
[0731] EP 0522868
[0732] EP 0875569
[0733] EP 1295944
[0734] EP 1347046
[0735] EP 1394274
[0736] EP 1394274
[0737] EP 1439393
[0738] JP 05003790
[0739] JP 2004113151
[0740] JP 58180487
[0741] US 2001/055751
[0742] US 2002/034749
[0743] US 2002/042366
[0744] US 2002/150573
[0745] US 2002/193567
[0746] US 2003/0228319
[0747] US 2003/060612
[0748] US 2003/064397
[0749] US 2003/065143
[0750] US 2003/091580
[0751] US 2003/096961
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[0816] US 6011146
[0817] US 6153408
[0818] US 6214345
[0819] US 6218519
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[0827] US 6835807
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[0829] US 7375078
[0830] US 7521541
[0831] US 7723485
[0832] WO 00/012508
[0833] WO 00/12507
[0834] WO 00/12508
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[1010] WO 9630514
[1011] WO 97/07198
[1012] WO 97/44452
[1013] WO 98/13059
[1014] WO 98/37193
[1015] WO 98/40403
[1016] WO 98/51805
[1017] WO 98/51824
[1018] WO 99/28468
[1019] WO 99/46284
[1020] WO 99/58658
[1021] Am.J.Hum，Genet，49(3)：555-565(1991)
[1022] Amiel J.，et al Hum.Mol，Genet.5，355-357，1996
[1023] Amir et al(2003)Angew.Chem.Int.Ed.42:4494-4499
[1024] Amsberry，et al(1990)J.Org.Chem.55：5867
[1025] Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33：183-186
[1026] Annu.Rev.Neurosci.21：309-345(1998)
[1027] Arai H.，et al J.Biol.Chem，268，3463-3470，1993
[1028] Arai H.，et al Jpn.Circ.J.56，1303-1307，1992
[1029] Arima，et al.，J.Antibiotics，25，437-444(1972)
[1030] Attie T.，et al，Hum.Mol.Genet.4，2407-2409，1995
[1031] Auricchio A.，et al Hum.Mol.Genet.5：351-354，1996
[1032] Barel M.，et al Mol.Immunol.35，1025-1031，1998
[1033] Barella et al(1995)Biochem.J.309；773-779
[1034] Barnett T.，et al Genomics3，59-66，1988
[1035] Beck et al(1992)J.Mol.Biol.228:433-441
[1036] Beck et el(1996)J.Mol.Biol.255：1-13
[1037] Berge.et al.，J.Pharm，Sci.，66，1-19(1977)
[1038] Biochem.Biophys.Res.Commun.(2000)275(3):783-788
[1039] Biochem.Biophys.Res.Commun.255(2)，283-288(1999)
[1040] Blood(2002)100(9):3068-3076
[1041] Blood99(8):2662-2669(2002)
[1042] Blumberg H.，et al Cell104，9-19，2001
[1043] Bose，et al.，Tetrahedron，48，751-758(1992)
[1044] Bourgeois C.，et al J.Clin.Endocrinol.Metab.82，3116-3123，1997[1045] Brinster et al(1988)Proc.Natl，Acad.Sci.USA85：836
[1046] Buchrnan and Berg(1988)Moi.Cell.Biol.8:4395
[1047] Cancer Res.61(15)，5857-5860(2001)
[1048] Carl et al(1981)J.Med.Chem.24:479-480
[1049] Carlsson et al(1978)Biochem，J.173:723-737
[1050] Carter，P.(2006)Nature Reviews Immunology6:343-357
[1051] Cell109(3):397-407(2002)
[1052] CellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay，Promega Corp.Technical Bulletin TB288
[1053] Chakravarty et al(1983)J.Med，Chem.26:638-644
[1054] Chan，J.and Watt，V.M.，Oncogene6(6)，1057-1061(1991)
[1055] Child et al(1999)J.Biol.Chem.274:24335-24341
[1056] Cho H，-S.，et al Nature421，756-760，2003
[1057] Ciccodicola.A.，etal EMBO J.8(7):t987-1991(1989)
[1058] Clackson et al(1991)Nature，352:624-628
[1059] Clark H.F.，et al Genome Res.13，2265-2270，2003
[1060] Corey E，Quinn JE，Buhler KR，et al，LuCap35：a new model of prostate cancer progression to androgen independence.The Prostate2003；55:239-46
[1061] Coussens L.，et al Science(1985)230(4730)：1132-1139
[1062] Cree et al(1995)AntiCancer Drugs6:398-404
[1063] Crouch et al(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88
[1064] Davis et al(2001)Proc.Natl.Acad.Sci USA98(17):9772-9777
[1065] de Groot et al(200t)J.Org.Chem.66:8815-8830
[1066] de Groot et al(2003)Angew.Chem.Int.Ed.42:4490-4494
[1067] Dennis et al.(2002)"Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins"J Biol Chem，277:35035-35043
[1068] Dobner et al(1992)Eur.J.Immunol，22；2795-2799
[1069] Doman et al(2009)Blood114(13)；2721-2729
[1070] Doronina et al(2006)Bioconj.Chern，17:114-124
[1071] Dubowchik et al.Bioconjugate Chemistry，2002，13，855-869
[1072] Dubowchik，et al.(1997)Tetrahedron Letters，38:5257-60
[1073] Dumoutier L.，et al J.Immunol.167，3545-3549，2001
[1074] E.Schroder and K，Lübke，The Peptides，volume1，pp76-136(1965)Academic Press Ehsani A.，et al(1993)Genomics15，426-429
[1075] Eliel，E.and Wilen，S.，"Stereochemistry of Organic Compounds".John Wiley&Sons，Inc.，New York，1994
[1076] Elshourbagy N.A.，et al J.Biol.Chem.268，3873-3879，1993
[1077] Erickson et al(2006)Cancer Res.66(8)：1-8
[1078] Feild，J.A.，et al(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.258(3):578-582[1079] Fields.G.and Noble，R.(1990)"Solid phase peptide synthesis utilizing9-[1080] fluoroenylmethoxycarbonyl amino acids"，Int.J.Peptide Protein Res，35:1161-214
[1081] Fuchs S.，et al Mol.Med，7，115-124，2001
[1082] Fujisaku et al(1989)J.Biol.Chern，264(4):2118-2125)
[1083] Gary S.C.，et al Gene256，139-147，2000
[1084] Gaugitsch，H.W.，et al(1992)J.Biol，Chem.267(16):11267-11273)
[1085] Geiser et al"Automation of solid-phase peptide synthesis"inMacromolecular Sequencing and Synthesis，Alan R.Liss，Inc.，1988，pp.199-218[1086] Genome Res.13(10):2265-2270(2003)
[1087] Genomics62(2):281-284(1999)
[1088] Geoghegan&Stroh，(1992)Bioconjugate Chem.3:138-146
[1089] Getz et al(1999)Anal.Biochem.Vol273:73-80
[1090] Glynne-Jonas et al(2001)Iht J Cancer，Oct15；94(2):178-84
[1091] Gregson et al.，Chem.Commun.1999，797-798
[1092] Gregson et al.，J.Med.Chem.2001，44，1161-1174
[1093] GuZ.，et al Oncogene 19，1288-1296，2000
[1094] Ha et al(1992)J.Immunol.148(5):1526-1531
[1095] Haendler B.，et al J.Cardiovasc.Pharmacol.20，s1-S4，1992
[1096] Hamann P.(2005)Expert Opin.Ther.Patents15(9):1087-1103
[1097] Hamblett et al(2004)Clin.Cancer Res.10:7063-7070
[1098] Handbook of Pharmaceutical Additives，2nd Edition(eds.M，Ash and I.Ash)，2001
[1099] (Synapse Information Resources，Inc.，Endicott，New York，USA)
[1100] Handbook of Pharmaceutical Excipients，2nd edition，1994
[1101] Hara，et al.，J.Antibiotics，41，702-704(1988)
[1102] Hashimoto et al(1994)Immunogenetics40(4):287-295
[1103] Hay et al，(1999)Bioorg.Med，Chem.Lett，9:2237
[1104] Herdwijn，P.et al.，Canadian Journal of Chemistry，1982，60，2903-7[1105] Hermanson，G.T，(1996)Bioconjugate Techniques；Academic Press:New York，p234-242
[1106] Hochlowski，et al.，J.Antibiotics，40，145-148(1987)
[1107] Hofstra R.M.W.，et al Eur.J.Hum.Genet.5，180-185，1997
[1108] Hofstra R，M，W.，et al Nat，Genet12，445-447，1996
[1109] Horie et al(2000)Genomics67:146-152
[1110] Hubert，R.S.，et al(1999)Proc.Natl.Acad Sci.U.S.A.96(25):14523-14528)[1111] Hurley and Needham-VanDevanter，Acc.Chem.Res.，19，230-237(1986)[1112] Immunogenetics54(2):87-95(2002)
[1113] Int.Rev.Cytol.196:177-244(2000)
[1114] Itoh，et al.，J.Antibiotics，41，1281-1284(t988)
[1115] J.Biol.Chem.270(37):21984-21990(1995)
[1116] J.Biol.Chem.276(29):27371-27375(2001)
[1117] J.Biol.Chem.277(22):19665-19672(2002)
[1118] J.Biol.Chem.278(33):30813-30820(2003)
[1119] Janeway，C.，Travers，P.，Walport，M.，Shlomchik(2001)Immuno Biology，5th Ed.，
[1120] Garland Publishing，New York
[1121] Jeffrey et al(2005)J.Med.Chem.48:1344-1358
[1122] Jonsson et al(1989)Immunogenetics29(6):411-413
[1123] Junutula，et al.，2008b Nature Biotech.，26(8)；925-932
[1124] Kang，G-D.，et al.，Chem.Commun.，2003，1680-1689
[1125] Kasahara et al(1989)Immunogenetics30(1):66-68
[1126] King et al(2002)Tetrahedron Letters43:1987-1990
[1127] Kingsbury et al(1984)J.Med.Chem，27:1447
[1128] Kohler et al(1975)Nature256:495
[1129] Kohn，in Antibiotics III，Springer-Verlag，New York，pp.3-11(1975).[1130] Konishi，et al.，J.Antibiotics，37，200-206(1984)
[1131] Kovtun et al(2006)Cancer Res.66(6):3214-3121
[1132] Kuhns J.J.，et al J.Biol.Chem.274，36422-36427，1999
[1133] Kuminoto，et al.，J.Antibiotics，33，665-667(1980)
[1134] Kurebayashi et al(1999)Brit，Jour.Cancer79(5-6):707-717
[1135] Lab.Invest82(11):1573-1582(2002)
[1136] Lambert J.(2005)Current Opin.in Pharmacol.5:543-549
[1137] Langley and Thurston，J.Org.Chem.，52，91-97(1987)
[1138] Larhammar et al(1985)J.Biol.Chem.260(26):14111-14119
[1139] Law et al(2006)Cancer Res.66(4):2328-2337
[1140] Le et al(1997)FEBS Lett.418(1-2):195-199
[1141] Leber，et al.，J.Am.Chem.Soc.，110，2992-2993(1988)
[1142] Leimgruber，et al.，J.Am.Chem.Soc.，87，5791-5793(1965)
[1143] Leimgruber，et al.，J.Am.Chem.Soc.，87，5793-5795(1965)
[1144] Levenson et al(1997)Cancer Res，57(15):3071-3078
[1145] Liang et al(2000)Cancer Res.60:4907-12
[1146] Manfré，F.et al.，J.Org.Chem.1992，57，2060-2065
[1147] Marks et al(1991)J.Mol.Biol.，222:581-597
[1148] McDonagh(2006)Protein Eng.Design&Sel.，19(7):299-307
[1149] Mendoza et a/(2002)Cancer Res，62:5485-5488
[1150] Miller et al(2003)Jour.of Immunology170:4854-4861
[1151] Miura et al(1996)Genomics38(3):299-304
[1152] Miura et al(1998)Blood92：2815-2822
[1153] Moore M.，et al Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84，9194-9198，1987
[1154] Morrison et al(1984)Proc.Natl.Ac ad.Sci.USA，81:6851-6855
[1155] Muller et al(1992)Eur.J.Immunol.22(6)：1621-1625
[1156] Mungall A.J.，et al Nature425，805-811，2003
[1157] Nagase T.，et al(2000)DNA Res.7(2):143-150)
[1158] Nakamuta M.，et al Biochem，Biophys，Res，Commun.177，34-39，1991[1159] Nakayama et al(2000)Biochem.Biophys.Res.Commun.277(1)：124-127
[1160] Naruse et al(2002)Tissue Antigens59：512-519
[1161] Nature395(6699):288-291(1998)
[1162] Neuberger and Williams(1988)Nucleic Acids Res.16：6713
[1163] Novabiochem Catalog2006/2007
[1164] Ogawa Y.，et al Biochem.Biophys.Res.Commun.178，248-255，1991
[1165] Okamoto Y.，et al Biol.Chem.272，21589-21596，1997
[1166] Oncogene10(5)：897-905(1995)
[1167] Oncogene14(11)：1377-1382(1997))
[1168] Parrish-Novak J.，et al J.Biol.Chern，277，47517-47523，2002
[1169] Payne，G.(2003)Cancer Cell3：207-212
[1170] Phillips et al(2008)Cancer Res.68(22):9280-9290
[1171] Pingault V，et al(2002)Hum.Genet.111，198-206
[1172] Pletnev S.，et al(2003)Biochemistry42；12617-12624
[1173] Preud′homme et al(1992)Clin.Exp.Immunol.90(1):141-146
[1174] Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2003)100(7)：4126-413t
[1175] Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93(1):136-140(1996)
[1176] Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(17):9772-9777(2001)
[1177] Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99(26):16899-16903(2002)
[1178] Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(20):11531-11536(1999)
[1179] Protective Groups in Organic Synthesis，Greene and Wuts，3rd Edition，1999，John Wiley&Sons Inc.
[1180] Puffenberger E.G，et al Cell79，t257-1266，1994
[1181] Rao et al(1997)Breast Cancer Res.and Treatment45:149-158
[1182] Reiter R.E.，et al Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95，1735-1740.1998
[1183] Remington ′ s Pharmaceutical Sciences，20th edition，pub.Lippincott，Williams&Wilkins，2000
[1184] Rodrigues et al(1995)Chernistry Biology2：223
[1185] Ross et al(2002)Cancer Res.62:2546-2553
[1186] S.P.Parker，Ed.，McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company，New York
[1187] Sakaguchi et al(1988)EMBO J.7(11):3457-3464
[1188] Sakamoto A.，Yanagisawa M.，et al Biochem.Biophys.Res.Commun.178，656-663，1991
[1189] Sanderson et al(2005)Clin.Cancer Res.11；843-852
[1190] Semba K.，et al Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82，6497-6501，1985
[1191] Servenius et al(1987)J.Biol.Chem，262：8759-8766
[1192] Shamis et al(2004)J.Am.Chem.Soc.126：1726-1731
[1193] Sheikh F.，et al(2004)J.Immunol.172，2006-2010
[1194] Shimizu，et al，J.Antibiotics，29，2492-2503(1982)
[1195] Sinha S.K.，et al(1993)J.Immunol.150，5311-5320
[1196] Storm et al(1972)J.Amer.Chem.Soc，94:5815
[1197] Strausberg et al(2002)Proc，Natl，Acad.Sci USA99:16899-16903
[1198] Sun et al(2002)Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters12:2213-2215[1199] Sun et al(2003)Bioorganic&Medicinal Chemistry11：1761-1768
[1200] Svensson P.J.，et al Hum.Genet.103，145-148，1998
[1201] Swlercz J.M.，et al J.Cell Biol，165，869-880，2004
[1202] Syrigos and Epenetos(1999)Anticancer Research19：605-614
[1203] Takeuchi，et al.，J.Antibiotics，29，93-96(1976)
[1204] Tawaragi Y.，et al Biochem.Biophys.Res.Commun.150，89-96，1988
[1205] ten Dijke，P.，et al Science264(5155):101-104(1994)
[1206] Thompson，J.S.，et al Science293(5537)，2108-2111(2001)WO2004/058309[1207] Thurston，et al.，Chem，Brit.，26，767-772(1990)
[1208] Thurston，et al.，Chem，Rev，1994，433-465(1994)
[1209] Toki et al(2002)J.Org，Chem.67：1866-1872
[1210] Tonnelle et al(1985)EMBO J.4(11):2839-2847
[1211] Tou chman et al(2000)Genorne Res，10：165-173
[1212] Trail et al(2003)Cancer Immunol Immunother.52：328-337
[1213] Tsunakawa，et al.，J.Antibiotics.41，1366-1373(1988)
[1214] Tsutsumi M.，et al Gene228，43-49，1999
[1215] Uchida et al(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.266:593-602
[1216] Verheij J.B.，et al Am.J.Med.Genet.108，223-225，2002
[1217] Von Hoegen et al(1990)J.Immu nol.144(12):4870-4877
[1218] Webster et al(1994)Semin.Cancer Biol.5:69-76
[1219] Weis J.J.，etal J.Exp，Med.167，1047-1066，1988
[1220] Weis J.J，et al Proc，Natl.Aced.Sci.U.S.A.83，5639-5643，1986
[1221] Wilson et al(1991)J.Exp.Med.173：137-146
[1222] Wu et al(2005)Nature Biotech.23(9):1137-1145
[1223] Xie et al(2006)Expert，Opin.Biol.Ther.6(3):281-291
[1224] Xu，M.J.，et al(2001)Biochem.Biophys，Res.Commun.280(3) ：768-775WO2004/016225
[1225] Xu，X.Z.，et al Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(19):10692-10697(2001)[1226] Yamaguchi.N.，et al Biol.Chem.269(2)，805-808(1994)
[1227] Yamamoto T.，et al Nature319，230-234，1986
[1228] Yu et al(1992)J.Immunol.148(2)633-637
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