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一种 发酵生产恩拉霉素的方法

阅读：194发布：2020-05-14

专利汇可以提供一种发酵生产恩拉霉素的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及一种发酵生产恩拉霉素的方法，通过在发酵培养基中恒温培养的发酵过程中，不同阶段分批添加无机盐溶液，促进恩拉霉素的合成并能改善发酵液的溶氧，提高恩拉霉素的发酵水平。本发明简单易行，在发酵培养过程中通过该工艺发酵后，恩拉霉素发酵水平的可提高25％。，下面是一种发酵生产恩拉霉素的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种发酵生产恩拉霉素的方法，其特征在于，通过在发酵培养基中恒温培养的发酵过程中，不同阶段分批添加无机盐溶液；发酵过程中，在发酵52小时时，添加硫酸镁的浓度为0.05-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.1-0.3g/L的混合液且该混合液的体积为发酵液体积的
1.5％-3％；在发酵64小时时，添加硫酸镁的浓度为0.05-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.1-
0.3g/L的混合液且该混合液的体积为发酵液体积的1.5％-3％；在发酵72小时时，添加硫酸镁的浓度为0.05-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.1-0.3g/L的混合液且该混合液的体积为发酵液体积的1.5％-3％；
用于发酵生产恩拉霉素的菌株为杀真菌素链霉菌(Streptomycesfungicidious)FYFJ03，保藏号为CGMCC No.4113。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵过程中，在发酵52小时时，添加硫酸镁的浓度为0.08-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.2-0.3g/L的混合液且该混合液的体积为发酵液体积的2％-3％；在发酵64小时时，添加硫酸镁的浓度为0.08-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.2-
0.3g/L的混合液且该混合液的体积为发酵液体积的2％-3％；在发酵72小时时，添加硫酸镁的浓度为0.08-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.2-0.3g/L的混合液且该混合液的体积为发酵液体积的2％-3％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵过程中，在发酵52小时时，添加硫酸镁的浓度为0.1g/L，氯化铵的浓度为0.3g/L的混合液且该混合液的体积为发酵液体积的3％；
在发酵64小时时，添加硫酸镁的浓度为0.05g/L，氯化铵的浓度为0.3g/L的混合液且该混合液的体积为发酵液体积的3％；在发酵72小时时，添加硫酸镁的浓度为0.05g/L，氯化铵的浓度为0.3g/L的混合液且该混合液的体积为发酵液体积的3％。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，发酵温度为28℃，转速为250～
350r/min。
5.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，菌株扩大培养阶段先将菌株接种于固体斜面培养基上于25-30℃恒温培养培养；再用无菌水将菌洗下制成孢子悬液接种发酵培养基中；其中，所述固体培养基包括如下组分：麦芽糖10g/L，干酵母粉1g/L，金枪鱼膏
1g/L，胰蛋白胨1g/L，琼脂适量；
发酵培养过程中，所述发酵生产恩拉霉素的发酵培养基包括下述组分：玉米粉80-
120g/L，玉米浆8-12g/L，硫酸铵2.5-3.5g/L，硫酸锌0.05-0.15g/L，碳酸钙18-22g/L。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述发酵生产恩拉霉素的发酵培养基包括下述组分：玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L，硫酸锌0.1g/L，碳酸钙20g/L。

说明书全文

一种发酵生产恩拉霉素的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及发酵技术领域，具体为一种发酵生产恩拉霉素的方法。

背景技术

[0002] 恩拉霉素(enramycin)又名安来霉素或和持久霉素，是由杀真菌素链霉菌发酵产生的多肽类畜用抗生素。恩拉霉素是由包括13个不同种类的17个氨基酸分子和脂肪酸分子所组成的有机碱。主要组分有恩拉霉素A和B，是其盐酸盐形式应用。恩拉霉素在饲料中具有很高的稳定性，在肠道内不被降解，对革兰氏阳性菌的作用及强，长期使用不会产生耐药性，且它能改变肠道内细菌的群落分布，有利饲料成分的营养吸收，能够促进动物体重增加和提高饲料的利用率。恩拉霉素于1996年由日本武田药品工业株式研发，其后在许多国家被注册和广泛使用。2005年，国内生产企业和国外公司开始合作生产恩拉霉素预混剂。随着其他用抗生素步淘汰，恩拉霉素的使用势必会越来越广泛，但是恩拉霉素的工业生产一直面临产能产量低的问题。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于提供一种发酵生产恩拉霉素的方法，用于克服现有技术中存在的缺陷。

[0004] 为实现上述目的，本发明提供一种发酵生产恩拉霉素的方法，通过在发酵培养基中恒温培养的发酵过程中，不同阶段分批添加无机盐溶液，促进恩拉霉素的合成并能改善发酵液的溶氧，提高恩拉霉素的发酵水平。

[0005] 优选地，所述的发酵温度为28℃，转速为250～350r/min。

[0006] 优选地，所述无机盐为硫酸镁和/或氯化铵。

[0007] 优选地，所述无机盐溶液的添加量为发酵液体积的1.5％-5％。

[0008] 优选地，所述无机盐溶液为含硫酸镁和氯化铵的的混合液；其中硫酸镁浓度为0.05-0.1g/L，氯化铵浓度为0.1-0.3g/L。

[0009] 优选地，添加所述无机盐溶液的时间阶段为发酵52小时、64小时、72小时。

[0010] 优选地，发酵过程中，在发酵52小时时，添加硫酸镁的浓度为0.05-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.1-0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的1.5％-5％；在发酵64小时，添加硫酸镁的浓度为0.05-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.1-0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的1.5％-5％；在发酵72小时时，添加硫酸镁的浓度为0.05-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.1-0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的1.5％-5％；从而可以更好地利于恩拉霉素的合成及控制发酵液中溶氧，提高发酵生产强度，提高和加快恩拉霉素的生产。

[0011] 进一步优选地，发酵过程中，在发酵52小时时，添加硫酸镁的浓度为0.08-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.2-0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的2％-5％；在发酵64小时时，添加硫酸镁的浓度为0.08-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.2-0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的2％-5％；在发酵72小时时，添加硫酸镁的浓度为0.08-0.1g/L，氯化铵的浓度为0.2-0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的2％-5％。

[0012] 更优选地，发酵过程中，在发酵52小时时，添加硫酸镁的浓度为0.1g/L，氯化铵的浓度为0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的3％；在发酵64小时时，添加硫酸镁的浓度为0.05g/L，氯化铵的浓度为0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的3％；在发酵72小时时，添加硫酸镁的浓度为0.05g/L，氯化铵的浓度为0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的3％。

[0013] 本发明涉及的用于发酵生产的恩拉霉素的菌株为杀真菌素链霉菌(Streptomyces fungicidious)FYFJ03，保藏号为CGMCC No.4113，已在中国专利CN101974469A中公开。

[0014] 本发明所述发酵生产恩拉霉素的方法中，菌株扩大培养阶段先将菌株接种于固体斜面培养基上于25-30℃恒温培养培养；再用无菌水将菌洗下制成孢子悬液接种发酵培养基中。其中，所述固体培养基包括如下组分：麦芽糖10g/L，干酵母粉1g/L，金枪鱼膏1g/L，胰蛋白胨1g/L，琼脂适量。

[0015] 本发明的发酵培养过程中，所述发酵生产恩拉霉素的发酵培养基包括下述组分：玉米粉80-120g/L，玉米浆8-12g/L，硫酸铵2.5-3.5g/L，硫酸锌0.05-0.15g/L，碳酸钙18-
22g/L。

[0016] 优选地，所述发酵生产恩拉霉素的发酵培养基包括下述组分：玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L，硫酸锌0.1g/L，碳酸钙20g/L。

[0017] 研究发现，在发酵过程中添加无机盐会促进恩拉霉素的合成，提高发酵水平；另外，产恩拉霉素的菌株对氧的需求量很高，当菌体浓度过高会造成发酵过程溶氧供应不足，影响产量，菌浓度过低，恩拉霉素产出低，发酵周期长，菌体老化且易染菌，影响生产。所以在发酵过程中分批添加一种或几种无机盐的混合液即利于恩拉霉素的合成又利于改善发酵液的溶氧量，提高发酵水平。

[0018] 本发明提供的发酵生产恩拉霉素的方法即利于发酵过程中恩拉霉素的合成又解决了菌株发酵过程中溶氧量不足的问题，操作简单易行，在发酵培养过程中通过该工艺发酵后，较未补料添加无机盐的方法恩拉霉素的发酵水平可提高约25％，有效提高了发酵水平。

具体实施方式

[0019] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

[0020] 若未特别指明，实施例中所用的技术手段为领域技术人员所熟知的常规手段。加入的各原料除特别说明外，均为市售。

[0021] 实施例1

[0022] 1)菌株的扩大培养：

[0023] 取菌株FYFJ03的冻存菌液稀释成106个孢子/ml孢子液，涂布于平板固体培养基，28℃培养7天，选取菌形规则、生长良好的单菌株接种于固体斜面培养基上，28℃培养8天。

[0024] 其中，所述固体培养基包括如下组分：麦芽糖10g/L，干酵母粉1g/L，金枪鱼膏1g/L，胰蛋白胨1g/L，琼脂18g/L。

[0025] 2)发酵培养：

[0026] 将步骤1)培养的菌种在无菌条件下接种到先灭菌的50L 发酵罐发酵培养基中，28℃培养，发酵周期8天。发酵52小时开始批次添加硫酸镁的浓度为0.05g/L，氯化铵的浓度为0.1g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的1.5％；发酵64小时开始批次添加硫酸镁的浓度为0.05g/L，氯化铵的浓度为0.1g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的
1.5％；发酵72小时开始批次添加硫酸镁的浓度为0.05g/L，氯化铵的浓度为0.1g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的1.5％。发酵8天后平均发酵水平6100U/ml[0027] 其中，所述发酵培养基包括如下组分：玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L，硫酸锌0.1g/L，碳酸钙20g/L。

[0028] 实施例2

[0029] 取菌菌株FYFJ03的冻存菌液稀释成106个孢子/ml孢子液，涂布于平板固体培养基，28℃培养7天，选取菌形规则、生长良好的单菌株接种于固体斜面培养基上，28℃培养7天。

[0030] 其中，所述固体培养基包括如下组分：玉米粉20g/L，蛋白胨1g/L，硫酸锌0.1g/L，氯化锰0.02g/L，琼脂15g/L。

[0031] 2)发酵培养：

[0032] 将步骤1)培养的菌种在无菌条件下接种到先灭菌的50L发酵罐发酵培养基中，28℃培养，发酵周期8天。发酵52小时开始批次添加硫酸镁的浓度为0.08g/L，氯化铵的浓度为0.2g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的2％；发酵64小时开始批次添加硫酸镁的浓度为0.08g/L，氯化铵的浓度为0.2g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的2％；发酵72小时开始批次添加硫酸镁的浓度为0.08g/L，氯化铵的浓度为0.2g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的2％。发酵8天后平均发酵水平6640U/ml

[0033] 其中，所述发酵培养基包括如下组分：玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L，硫酸锌0.1g/L，碳酸钙20g/L。

[0034] 实施例3

[0035] 取菌株FYFJ03的冻存菌液稀释成105个孢子/ml孢子液，涂布于平板固体培养基，28℃培养7天，选取菌形规则、生长良好的单菌株接种于固体斜面培养基上，28℃培养7天。

[0036] 其中，所述固体培养基包括如下组分：玉米粉20g/L，蛋白胨1g/L，硫酸锌0.1g/L，氯化锰0.02g/L，琼脂15g/L。

[0037] 2)发酵培养：

[0038] 将步骤1)培养的菌种在无菌条件下接种到先灭菌的50L发酵罐发酵培养基中，28℃培养，发酵周期8天。发酵52小时开始批次添加硫酸镁的浓度为0.1g/L，氯化铵的浓度为0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的3％；发酵64小时开始批次添加硫酸镁的浓度为0.05g/L，氯化铵的浓度为0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积3％；发酵
72小时开始批次添加硫酸镁的浓度为0.05g/L，氯化铵的浓度为0.3g/L的混合液且混合液的体积为发酵液体积的3％。发酵8天后平均发酵水平7190U/ml

[0039] 其中，所述发酵培养基包括如下组分：玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L，硫酸锌0.1g/L，碳酸钙20g/L。

[0040] 对比例

[0041] 1)斜面培养：

[0042] 取菌株FYFJ03的冻存菌液稀释成105个孢子/ml孢子液，涂布于平板固体培养基，28℃培养7天，选取菌形规则、生长良好的单菌株接种于固体斜面培养基上，28℃培养7天。

[0043] 其中，所述固体培养基包括如下组分：玉米粉20g/L，蛋白胨1g/L，硫酸锌0.1g/L，氯化锰0.02g/L，琼脂15g/L。

[0044] 2)发酵培养：

[0045] 将步骤1)培养的菌种无菌条件下接种到50L罐的发酵培养基上，28℃，300r/min，在发酵培养过程中，不添加硫酸镁及氯化铵的混合液，发酵天数为8天，平均发酵水平5750U/ml。

[0046] 其中，所述发酵培养基包括如下组分：玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L，硫酸锌0.1g/L，碳酸钙20g/L.

[0047] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

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