因而在一方面,本发明提供生物质的生产方法,该方法在水性液体培 养基中培养一种微生物,优选甲烷营养细菌,该培养基在环流反应器内循 环,该反应器具有废气(effluent gas)清除区,在那里从反应器及其上游中 除去含有二氧化碳的废气;在其上游是脱气区(degassing zone),向其中引 入驱动气体,驱使液相中的二氧化碳进入可分离的废气相和所述脱气区的 上游;在脱气区上游是营养气引入区,其中向反应器引入氧,优选地还有 甲烷,与其中的液体培养基混合,其特征在于在所述营养气引入区中的氧 引入是在沿所述环流反应器流经路径的多个位置进行的,速率是这样的, (例如在反应器的无混合器区段)利用极谱氧
电极所测量的所述液体培养 基的平均溶解氧含量不超过25ppm,更优选20ppm,尤其15ppm,更尤其 10ppm,优选地也是这样的,所述液体培养基的溶解氧含量在每个所述位 置(所述脱气区下游的第一所述位置是可选的例外)为至少0.5ppm,尤 其至少1ppm,更尤其至少3ppm。
在这方面发明中,氧引入位置优选地是这样间隔的,流经两个位置之 间的时间小于20秒,尤其小于16秒,特别小于6秒,更优选小于5秒, 进而更优选小于4秒,最后与第一位置之间除外(也就是紧邻脱气区上游 和下游的那些)。
平均溶解氧含量表示沿反应器横截面直径的平均值。若反应器的横截 面不是圆形的,则术语直径应当被理解为表示内壁之间的最大尺寸。这样 一种平均值可以这样求算,在沿直径的若干、例如3、5或7个等距离点 测量溶解氧含量。
溶解氧含量应当可取地在环流反应器的无混合器部分加以测量,也就 是反应器内横截面不穿过混合装置的位置。可取地,溶解氧含量是在氧引 入区的无混合器区段下游和随后的混合器处加以测量的。
因而,培养基的溶解氧含量适宜这样测量,利用极谱氧电极(在商业 上例如可从Ingold获得),在氧引入位置之间,距离前一这类位置下游足 够远处,以便氧和培养基的混合基本上是完全的。
为了在氧引入之时可以避免氧浓度极限,引入优选地是通过每个引入 位置的大量窗孔(apertures)进行的,例如一组窗孔,横向分布于流经方向 的片上,可选地也沿着流经方向分布。可以这样实现之,在反应器中分散 有多臂穿孔气体分配器(multiarmed,perforated gas distributors),优选地分 配器的压降从内至外为至多6巴,例如0.4至3巴,尤其0.6至1巴。这 类分配器适宜排列在反应器中相邻静态混合器组之间的缝隙处。在一种优 选的实施方式中,气体分配器也排列在静态混合器组内,例如沿混合器通 道排列穿孔管,或者利用穿孔波纹嵌板,它既充当气体分配器,也充当混 合器组内的平板。还可以使用中空的嵌板混合器平板,冷却剂(例如冷水) 流过其中,以冷却反应器中的培养基。
溶解氧含量优选地是在每个氧引入位置的上游测量的,测量值输入计 算机,以便控制营养物引入速率、冷却、生物质抽出等。按照这种方式, 溶解氧含量得以维持在所需范围内,遍及反应器,并且长达整个操作阶段。
可取地,废气清除区中或者环路中最低溶解氧浓度点处的培养基氧含 量小于0.1ppm,按重量计。这使生物质产物作为饲料具有更大的生物利 用度。
尽管液体培养基的溶解氧含量可以下降至可忽略或者不可检测的水 平,也就是约0ppm,按重量计,不过优选的是它应当在至少显著比例的 穿过反应器的路径长度上保持在可检测的水平。因而鉴于另一方面,本发 明提供生物质的生产方法,该方法在水性液体培养基中培养一种微生物, 优选甲烷营养细菌,该培养基在环流反应器内循环,该反应器具有废气清 除区,由此从反应器中除去含有二氧化碳的废气,在其上游具有脱气区, 由此引入驱动气,以驱使液相中的二氧化碳进入可分离的废气相,在所述 脱气区的上游还具有营养气引入区,由此向反应器引入氧,优选还有甲烷, 并与其中的液体培养基混合,其特征在于在所述营养气引入区中的氧引入 是这样的,在所述营养气引入区与所述脱气区之间,液体培养基的溶解氧 含量不降至3ppm以下,按重量计(优选至少4ppm,尤其至少5ppm)。
鉴于另一方面,本发明提供生物质的生产方法,该方法在水性液体培 养基中培养一种微生物,优选甲烷营养细菌,该培养基在环流反应器内循 环,该反应器具有废气清除区,由此从反应器中除去含有二氧化碳的废气, 在其上游具有脱气区,由此引入驱动气,以驱使液相中的二氧化碳进入可 分离的废气相,在所述脱气区的上游还具有营养气引入区,由此向反应器 引入氧,优选还有甲烷,并与其中的液体培养基混合,其特征在于向所述 液体培养基的氧引入是这样进行的,所述液体培养基的溶解氧含量在相当 于30秒以上、优选20秒、更优选10秒、尤其5秒的环流反应器路径长 度上不降至3ppm以下,按重量计(优选至少4ppm,尤其至少5ppm)。
鉴于另一方面,本发明提供生物质的生产方法,该方法在水性液体培 养基中培养一种微生物,优选甲烷营养细菌,该培养基在环流反应器内循 环,该反应器具有废气清除区,由此从反应器中除去含有二氧化碳的废气, 在其上游具有脱气区,由此引入驱动气,以驱使液相中的二氧化碳进入可 分离的废气相,在所述脱气区的上游还具有营养气引入区,由此向反应器 引入氧,优选还有甲烷,并与其中的液体培养基混合,其特征在于在所述 营养气引入区中的氧引入是这样的,在所述营养气引入区与所述脱气区之 间,液体培养基的溶解氧含量不降至Xppm以下,按重量计,其中X是 由X=1.35Y.B所定义的,其中B是培养基的生物质含量,以g/L计,Y 是0.75至1.25,优选0.80至1.20,尤其0.85至1.15,更优选0.90至1.10, 更尤其0.95至1.05,B大于5,尤其大于10,特别是15至30,尤其是 18至25。
鉴于另一方面,本发明提供生物质的生产方法,该方法在水性液体培 养基中培养一种微生物,优选甲烷营养细菌,该培养基在环流反应器内循 环,该反应器具有废气清除区,由此从反应器中除去含有二氧化碳的废气, 在其上游具有脱气区,由此引入驱动气,以驱使液相中的二氧化碳进入可 分离的废气相,在所述脱气区的上游还具有营养气引入区,由此向反应器 引入氧,优选还有甲烷,并与其中的液体培养基混合,其特征在于在所述 营养气引入区中的氧引入是这样的,液体培养基的溶解氧含量在至少30% (优选至少50%,更优选至少60%)的环流反应器路径长度上为至少 10ppm,按重量计,液体培养基的溶解氧含量在所述脱气区中所述驱动气 的引入之前不久为至少3ppm,按重量计(优选至少4ppm,尤其至少5ppm), 所述废气的氧含量为至少1摩尔%(优选至少2摩尔%,例如2至8摩尔 %)。
这里作为发明另外方面所描述的这些方法优选地与如第一方面所定 义的发明方法联用。
本发明的方法中,优选的是利用
推进器驱使液体培养基在环流反应器 内循环。尤其优选的是利用具有重叠的或多个径向弯曲的
叶片的推进器, 也就是下部
空化推进器(low-cavitation propeller)。这类下部空化推进器在 水下设计领域中是所熟知的。重叠的叶片意味着存在至少一条这样的线, 它平行于推进器的轴,并且穿过至少两个叶片。径向弯曲的叶片意味着在 穿过叶片底部和顶端的径向线之间存在一个
角度。这类推进器在环流发酵 反应器中的应用是新颖的,构成本发明的另一方面。因而鉴于另一方面, 本发明提供生物质的生产方法,该方法在水性液体培养基中培养一种微生 物,优选甲烷营养细菌,该培养基在环流反应器内循环(该反应器优选地 具有废气清除区,由此从反应器中除去含有二氧化碳的废气,在其上游具 有脱气区,由此引入驱动气,以驱使液相中的二氧化碳进入可分离的废气 相,在所述脱气区的上游还具有营养气引入区,由此向反应器引入氧,优 选还有甲烷,并与其中的液体培养基混合),其特征在于所述液体培养基 是在推进器的作用下在所述环流反应器中循环的,该推进器具有重叠的或 多个径向弯曲的叶片。
利用这类下部空化推进器,有可能比常规推进器
泵送具有更大气体含 量的液体,因而有可能在尽可能接近推进器的上游向液体培养基引入营养 气。按照这种方式,可以减少溶解气体含量低的反应器路径长度的比例。
向液体培养基混入营养气是进行本发明方法的重要方面。我们已经发 现,在营养器注射点下游应用各自包含一组混合板(an array of mixer plates) 的静态混合器,即使气∶液体积比相当低也导致特别高效的营养气溶解。 混合板组在环流发酵反应器中的这类应用是新颖的,构成本发明的另一方 面。鉴于这一方面,本发明提供生物质的生产方法,该方法在水性液体培 养基中培养一种微生物,优选甲烷营养细菌,该培养基在环流反应器内循 环(该反应器优选地具有废气清除区,由此从反应器中除去含有二氧化碳 的废气,在其上游具有脱气区,由此引入驱动气,以驱使液相中的二氧化 碳进入可分离的废气相,在所述脱气区的上游还具有营养气引入区,由此 向反应器引入氧,优选还有甲烷,并与其中的液体培养基混合),其特征 在于营养气和液体培养基是通过穿过静态混合器而混合在所述环流反应 器内的,该混合器包含一堆平行的、带波纹的、柔韧的(优选开孔的)平 板,这些平板是这样排列的,堆积方向垂直于所述
流体培养基的流动方向, 其纹脉(corrugation ridges)与所述流动方向成一定角度(例如20至70°, 优选40至50°,尤其45°,相对于流动方向而言),它们与流动方向的角 度基本上与相邻平板是相等和相反的。
堆积方向、也就是置于混合器两个主表面之一上的平片表面正向,可 以是在垂直与水平之间的任意方向。不过,在连续堆积之间的堆积方向优 选地旋转90°,更优选80至90°,最优选约90°、0°、90°、0°等,或+45°、 -45°、-45°,相对于垂直方向而言。尤其优选地,连续堆积的堆积方向不 是0°、0°、0°等,相对于垂直方向而言。
在发明的这后两个方面中,甚至在发明的大多数方面中,环流反应器 优选地具有至少40m、更优选至少80m的中心线,也就是流经路径长度。
鉴于另一方面,本发明提供生成生物质的方法,该方法在液体反应介 质中培养微生物,该介质在环流反应器内循环,该反应器在废气清除区上 游具有废气-液体反应介质分离区,其特征在于在所述分离区中向液体反 应介质送入氧和/或甲烷。
鉴于另一方面,本发明提供发酵装置,包含环流反应器,该反应器在 废气清除区上游具有废气-液体反应介质分离区,其特征在于所述分离区 具有入口,用于将氧和/或甲烷送入其中的液体反应介质。
用在本发明方法中的环流反应器优选地依赖于推进
力而非气体浮升 力使液体培养基围绕环路运动。由于更容易使营养气和液体培养基在环路 的基本上水平的部分中恰当地混合,并且由于物质传递(也就是营养气向 液相的传递)随着培养基的压力增加而增加,环路优选地在废气清除区之 后包含基本上垂直的下流区(down flow zone),继之以基本上水平(例如 “U”型)的区域,进而继之以基本上垂直的上流区,引导废气返回清除 区。为了使废气/液体培养基脱气应当是特别有效的,在基本上垂直的上 流区与废气清除区之间,需要具有基本上不垂直的、例如水平的外流区。 在其中发生大多数或全部废气/液体培养基的分离,它可以具有均匀的梯 度,可以逐渐变得更加水平,或者可以逐步向水平方向改变。驱动气、也 就是用于置换溶解相中的二氧化碳的气体(通常为氮,但是也可以是另一 种惰性的不可燃气体),例如可以在一个或多个点引入,从基本上垂直的 上流区开始到废气清除区入口,不过特别优选的是一个或多个在上流区垂 直部分上部(例如上面20%,更优选上面10%)与外流区最平直(也就是 最水平)的部分开始之间的引入点。尤其优选地,驱动气是在上流区垂直 部分上部引入的。在这种背景中,将被理解的是可以引入气体的“点”可 以在环路内的液体路径内具有延伸的长度,例如通过一系列入口端口或者 通过多个开孔的入口端口引入气体。
一般而言,若环路中心线在气体洗脱清除区之外改变方向,这将由环 路的
曲率而非尖锐的角度弯曲所致,以便改善液体培养基的流动性质。
气体洗脱清除区中的顶部空间气压将优选为-0.5至+1.0个
大气压,相 对于环境压力而言,尤其是+0.2至+0.6。在外流区末端的气-液表面与水 平区环路的中心线之间的垂直下降优选为至少10m,尤其至少18m,例如 18至30m。
环流反应器(气体洗脱清除区之外)的横截面积可以是恒定的,但是 优选地至少在外流区中增加至最大值,例如至少2.0倍、更优选至少4.0 倍于下流区和水平流动区的最小横截面积部分(它们通常可以位于推进器 之前)。通常,气体洗脱清除区之外环路的内径可以在30cm至3.0m范 围内,尤其是1.0至2.5m。通常,除气体洗脱清除区以外的环路的中心线 长度在40至200m范围内,优选80至150m,在水平区中该长度优选为 至少50%,更优选至少60%,尤其至少70%。外流区的中心线长度优选 为0.5至10m,尤其是1.5至8m。
环路反应器在气体清除区之外的横截面一般将是圆形的;不过在分离 区中,也可以采取其他外形,例如矩形、椭圆形或卵形横截面,以增强气 体/液体分离。
环路中的营养气引入优选地是在沿环路长度的至少三个、更优选至少 六个位置进行的,优选地至少60%是在水平区中引入的。
尽管优选的是营养气是在下流部分被引入的,不过可能需要使用下部 空化推进器,用于随后推进液体培养基。这类推进设计在水下建筑领域中 是所熟知的。
典型的下部空化推进器可以具有重叠的叶片或者多个(例如至少6 个)径向弯曲的叶片(也就是底部和顶端在径向上彼此移置的叶片)。在 以前的反应器设计中,营养气的输入被设计成开始于脱气区,这样培养基 的溶解氧含量基本为零,然而需要以这样的量引入营养气,特别是氧,以 便在脱气区开始处的溶解氧含量为至少3ppm。为此,需要在上流区中引 入一定量的营养气,例如高达约25%的营养气。
由于过量的营养气能够对培养在反应器中的微生物引起毒性问题,氧 引入优选地是这样的,液体培养基中的最大溶解氧含量不多于25ppm,尤 其不多于20ppm,更尤其不多于15ppm。
同样为了使生物质生产方法效率最大化,引入甲烷的摩尔比优选为 1∶1至1∶3,尤其1∶1.2至1∶2.5,更尤其约1∶1.8,相对于氧而言。
可以使用甲烷的纯化形式或气体混合物,例如
天然气或富含甲烷的天 然气。同样可以使用纯化的氧或含氧气体混合物(例如空气或富含氧的空 气)。若使用空气,则优选地过滤之,以避免毒性杂质的引入。
所用甲烷和氧同样可以是气态(例如压缩的)或
液化形式;不过在后 者情况下,一般将需要预先加热,以防止营养气过分
冷却液体培养基。
天然气主要由甲烷组成,不过它的组成将因不同的气田而异。通常, 可以预期天然气含有约90%甲烷、约5%乙烷、约2%丙烷和一些高级烃。 在天然气的发酵期间,甲烷被甲烷营养细菌氧化为生物质和二氧化碳。甲 醇、甲
醛和
甲酸是代谢中间体。甲醛和一些二氧化碳被同化为生物质。不 过,甲烷营养细菌不能利用包含碳-碳键的底物进行生长,天然气的其余 组分、即乙烷、丙烷和一些高级烃,被甲烷营养细菌氧化,生成对应的羧 酸(例如乙烷被氧化为乙酸)。这类产物可能对甲烷营养细菌而言是抑制 性的,因此重要的是它们的浓度在生物质生产期间保持低水平,优选低于 50mg/l。该问题的一种解决方案是一种或多种异养细菌的联合使用,它们 能够利用由甲烷营养细菌所产生的代谢产物。
这类细菌还能够利用由细胞溶解产物释放至发酵液的有机材料。这一 点很重要,目的是避免
泡沫的形成,还能够使培养物被不需要的细菌污染 的危险最小化。甲烷营养与异养细菌的组合导致稳定和高收率的培养。
除了氧和甲烷以外,一般还将向液体培养基加入其他营养物,例如矿 物质和氮源(例如
氨、
硝酸盐、尿素等)。不过不象氧和甲烷,脱气操作 不会对它们的浓度产生决定性影响,因而它们的加入一般可以各自在沿环 路的一个、两个或三个点。不过就某些矿物质而言,特别是
铜,可能需要 在沿环路的更多数量的点进行引入。就铜而言,增加铜浓度能够增加甲烷 的消耗。
可以使用空气或纯氧进行氧化,优选地使用氨作为氮源。除了这些营 养物以外,细菌培养通常还将需要水、
磷酸盐(例如磷酸的形式)和若干 矿物质,可以包括镁、
钙、
钾、
铁、铜、锌、锰、镍、钴和钼,通常使用
硫酸盐、氯化物或硝酸盐的形式。所有用在单细胞材料生产的矿物质都应 当是食品级的。
在本发明的方法中,需要监测废气中的二氧化碳、氧和甲烷含量,和 培养基的生物质、氮、溶解氧、磷酸盐和矿物质含量。生物质含量可以使 用为进一步加工而提取的含生物质介质样本加以测量;例如离心分离生物 质和液体,称重。在这种经过提取的材料中也可以测量氮、磷酸盐和矿物 质含量,例如利用标准的工艺,例如
原子吸收等。溶解氧含量也是借助标 准工艺测量的,优选地在环路上的两个或多个点监测之。优选地对废气取 样,冷却至约5℃,然后优选地通过红外
光谱法测量气体和甲烷和二氧化 碳的顺
磁性,测定氧。通常,当该方法顺利进行时,氧含量优选为约7.5% (v/v),甲烷含量为约4.0%(v/v),二氧化碳含量为约35%(v/v)。
氨浓度优选为至多200ppm,尤其是0.1至5ppm,按重量计。
生物质浓度优选为至多30g/L,例如5至20g/L。
培养基中的磷酸盐含量优选为至少10ppm,按重量计,以便使反应器 顶部的发泡最小化,尤其约100至200ppm。
培养基中的钾、镁和钙含量分别优选为至少5、0.5和0.5ppm,按重 量计,尤其约100-200、20-50和20-50ppm。可以适宜地在所提取的 生物质中测量铜和铁含量;优选地,它们的最小含量分别为5和200mg/kg。
在单细胞材料的生产期间,一般将调节发酵混合物的pH在约5.5与 7.5之间,例如6.5±0.3。本领域技术人员可以容易地选择适合于pH调节 的酸/
碱。特别适用于这一点的是氢氧化钠和硫酸。在发酵期间,发酵器 内的
温度应当优选地维持在40℃至50℃的范围内,最优选45℃±2℃。
在本发明方法的操作中,优选地将可选含有止泡剂的液体(例如一些 或全部的液体营养物、为补偿生物质除去而加入的液体、从反应器抽出、 冷却并返回反应器以控制温度的液体部分等)喷在脱气区中的液体培养基 表面,以减少泡沫的形成。同样,脱气区的水平流动区段优选地在其上部 区段具备横向延伸的
挡板,以对抗泡沫的形成。作为进一步的止泡措施, 反应器可以在脱气区排列有
蒸汽入口,以将蒸汽注射到液体表面上的顶部 空间。
按照本发明的方法,可以生产任何单细胞蛋白质材料。不过,优选的 微生物包括细菌和酵母。可以使用任何被批准用在食品中的细菌或酵母, 本领域技术人员可以容易地选择适合的种类。特别优选地,用在本发明中 的单细胞将是一种微生物培养物,它由甲烷营养细菌组成,可选地联合有 一种或多种异养细菌,尤其优选甲烷营养与异养细菌的组合。本文所用的 术语“甲烷营养”涵盖任何利用甲烷或甲醇进行生长的细菌。术语“异养” 用于表示利用除甲烷或甲醇以外的有机底物进行生长的细菌。
尽管本发明的方法尤其适合于生产仅需相对少量的进一步加工即可 用作饲料或
食品添加剂的生物质,不过该方法还可以用于制备由液体培养 基中的微生物生成的特殊化学品。在这种情况下,培养基的发酵后处理将 牵涉分离出有关的特定化学品,例如借助常规的化学技术,可选地继之以 微生物细胞的溶解,以释放有关的化学品。在这种发明实施方式中,可以 使用天然产生有关化学品(例如蛋白质、药物、类胡萝卜素等)或者经过 遗传修饰而产生有关化学品的微生物。很多这类微生物是文献已知的;不 过特别优选的是使用甲烷营养细菌。
优选用在本发明中的细菌包括荚膜甲基球菌(Methylococcus capsulates)(Bath),它是最初从Bath,England
温泉分离的嗜热细菌,在The National Collections of Industrial and Marine Bacteria,Aberdeen,Scotland的 保藏号为NCIMB 11132。荚膜甲基球菌(Bath)在约45℃下具有最佳生长, 不过生长也可以发生在37℃与52℃之间。它是革兰氏阴性的、不能动的 球形细胞,通常成对存在。细胞内膜排列成I型甲烷营养菌特有的囊状盘 束。荚膜甲基球菌(Bath)在遗传上是非常稳定的生物体,没有已知的质粒。 它能够利用甲烷或甲醇进行生长,利用氨、硝酸盐或分子氮作为氮源进行 蛋白质合成。
其他适合用在本发明中的细菌包括异养细菌Ralstonia sp.(以前名为 Alcaligenes acidovorans)DB3(NCIMB 13287)、Brevibacillus agri(以前名为 坚强芽孢杆菌)DB5(NCIMB 13289)和Aneurinibacillus sp.(以前名为短芽 孢杆菌)DB4(NCIMB 13288),它们各自在约45℃的温度下具有最佳生 长。
Ralstonia sp.DB3是革兰氏阴性的、需氧的、能动的杆菌,属于假单 胞菌科,它能够利用
乙醇、乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐进行生长。 Aneurinibacillus sp.DB4是革兰氏阴性的、形成内孢子的、需氧的杆菌, 属于芽孢杆菌属,它能够利用乙酸盐、D-果糖、D-甘露糖、核糖和D-塔 格糖进行生长。Brevibacillus agri DB5是革兰氏阴性的、形成内孢子的、 能动的、需氧的杆菌,属于芽孢杆菌属,它能够利用乙酸盐、N-乙酰葡糖 胺、枸橼酸盐、葡糖酸盐、D-
葡萄糖、甘油和甘露糖醇进行生长。
尤其优选用在本发明中的是这样一种微生物培养物,它包含甲烷营养 细菌荚膜甲基球菌(Bath)(NCIMB 11132)与异养细菌Ralstonia sp.DB3 (NCIMB 13287)和Brevibacillus agri DB5(NCIMB 13289)的组合,可选地联 合有Aneurinibacillus sp.DB4(NCIMB 13288)。Ralstonia sp.DB3的作用是 利用由荚膜甲基球菌(Bath)从天然气中的乙烷和丙烷所产生的乙酸盐和丙 酸盐。Ralstonia sp.DB3可以占所得生物质总细胞数的至多10%,例如约 6至8%。Aneurinibacillus sp.DB4和Brevibacillus agri DB5的作用是利用 培养基中的溶解产物和代谢产物。通常,在连续发酵期间Aneurinibacillus sp.DB4和Brevibacillus agri DB5将各自占细胞数的不到1%。
适合用在本发明方法中的酵母可以选自由酵母属和念珠菌属组成的 组。
如果需要的话,可以使用经过遗传修饰的细菌(或酵母)进行本发明 的方法,以便生成所需的化合物,然后可以从反应器中收获细胞内液或生 物质,从中提取这些化合物。科技与
专利文献含有大量这类遗传修饰微生 物的实例,尤其包括甲烷营养细菌。
在一种尤其优选的发明实施方式中,使用WO 02/18617所述类型的甲 烷营养细菌进行该方法,以生产类胡萝卜素,例如花药黄质、adonixanthin、 虾青素、角黄素、玉米黄质和其他在WO 02/18617第39和40页所提到 的类胡萝卜素。为此,特别适合使用甲烷营养细菌甲基单胞菌16a(ATCC PTA 2402)。可以如WO 02/18617、WO 02/20728和WO 02/20733所述从 液体培养基中分离出按照这种方式所生产的类胡萝卜素。
理想地,从天然气的发酵作用所生产的生物质将包含60至80重量%
粗蛋白;5至20重量%粗脂肪;3至15重量%灰分;3至15重量%核酸 (RNA和DNA);10至30g/kg磷;至多500mg/kg铁;和至多250mg/kg 铜。特别优选地,生物质将包含68至73%、例如约70重量%的粗蛋白; 9至11%、例如约10重量%的粗脂肪;5至10%、例如约7重量%的灰分; 8至12%、例如约10重量%的核酸(RNA和DNA);10至25g/kg的磷; 至多310mg/kg的铁;和至多110mg/kg的铜。蛋白质成分的氨基酸分布应 当在营养学上是可取的,具有高比例的重要氨基酸半胱氨酸、甲硫氨酸、 苏氨酸、赖氨酸、
色氨酸和精氨酸。通常,它们的含量可以分别为约0.7%、 3.1%、5.2%、7.2%、2.5%和6.9%(以氨基酸总量的百分比表示)。一般 地,
脂肪酸将主要包含饱和的棕榈酸(大约50%)和单不饱和的棕榈烯酸 (大约36%)。产品的矿物质成分通常将包含大量的磷(约1.5重量%)、 钾(约0.8重量%)和镁(约0.2重量%)。
本发明的生物质产品尤其可用作食品中的组分或前体,特别是用作动 物饲料和
宠物食品中的天然血浆代用品。当用在宠物食品中时,可以向产 品加入另外的成分,例如脂肪、糖、盐、矫味剂、矿物质等。然后可以使 产品形成
块状,在外观和纹理上类似于天然的肉块。本发明的产品具有进 一步的优点,它容易配制成含有必需的营养物,容易被动物消化,是动物 的美味。
本发明的产品可以进一步用作肉产品(例如肉团)中的构造剂,常用 作新鲜肉类填充剂的血浆蛋白代用品、以增加重量和体积,用作乳化剂(例 如在
敷料等中),和用在面包产品中、以提高生面团的性质。
当用在食品中时,生物质或经过加工的生物质材料的用量通常将为1 至10重量%,优选至多5重量%。精确的比例将依赖于材料的所需功能, 本领域技术人员能够容易地确定之。通常,当用作
胶凝剂时,其含量可以 是至多20重量%,例如5至10重量%(基于产品的干物质含量)。
当反应器没有满足上述溶解氧含量条件时(特别是存在过高的溶解氧 含量),并且当达到某一生物质含量时,尽管反应器也能继续令人满意地 运转很多小时,不过氨的使用会相当突然地下降,并且在仅仅两三个小时 内,活的细菌种群(以及材料的生物质成分,如果继续从反应器中提取的 话)也下降至事实上为零。
尽管在有些情况下,立即停止氨的供应、减少或停止从反应器中提取 生物质和增加或降低氧的供应能够“治愈”微生物种群和恢复生物质收率, 不过在很多情况下这都是不够的。对死亡细菌的研究显示,尽管它们还没 有被溶解,不过内部的细胞器结构也已经被显著地破坏了。这表明细菌的 基因组是迄今未被认识的病毒核酸序列的宿主,它们在反应器中的非常条 件下被活化而表达终止正常细胞操作的产物。据信单细胞微生物的这类基 因组前
噬菌体而非质粒
病毒感染迄今还没有得以
鉴别,可能同样证实在需 氧环流反应发酵器的大规模生物质操作中是成问题的,例如细菌、真菌(例 如新月菌素)、酵母或经过遗传修饰的细胞(例如细菌、
哺乳动物(例如 人、仓鼠、小鼠等)),本发明的另一方面是使用本发明的溶液在细菌、 真菌、酵母或经过遗传修饰的细胞的需氧环流反应器发酵中减少消耗溶解 氧的反应器路径长度,例如用于生产醇(尤其是甲醇或乙醇)、食品或食 品添加剂或其前体、药物、
抗体等。
针对方法故障所观察到的微生物细胞器重排一般还可以用作发酵反 应器反馈控制的控制参数,特别是环流反应器,例如利用在所有
阈值水平 之下或之上的细胞器重排观察结果,用以引发营养物供应的增加,特别是 氧和/或甲烷的供应,或者减少或终止氨的供应等。这类观察结果例如可 以针对从反应器的提取或取样端口除去的细胞、利用流式细胞术获得。这 种形式的发酵反应器反馈控制构成本发明的另一方面。
本发明方法操作故障的主要指标是培养基出现pH降低,尽管加入碱 (例如NaOH)调节pH也会复发。这似乎是由于甲酸的生成或者甲酸被 甲烷营养细菌不适当地转化为二氧化碳。监测细菌的细胞内甲酸浓度能够 获得这一问题的预警,例如将培养基取样,溶解细胞,用光谱测定法测定 甲酸。若所检测的甲酸浓度上升至预先设置的阈值之上,可以采取
预防性 措施,例如减少氧和/或氨的供应速率等。除了细胞内甲酸以外,还可以 监测细胞外甲酸浓度,也用作方法控制参数。同溶解氧浓度一样,可以监 测溶解甲烷浓度和溶解氨浓度,用作方法控制参数。可取地,这类监测是 在线进行的,也就是在反应器处,可以使用常规的监测装置(例如光谱计 等)。这类监测和控制构成本发明的另一方面。
鉴于另一方面,本发明提供适用于一种或多种根据本发明的方法的发 酵反应器,例如包含适当
定位的营养气入口、下部空化推进器、堆积平板 静态混合器等。
鉴于另一方面,本发明提供由本发明方法所生产的生物生成产物(例 如生物质、药物、抗体、醇等)和它们的用途,例如用于或者用作食品前 体、用作药物、用作化学品原料等。
若利用环流反应器进行细胞培养,从培养基中除去溶解所溶解的二氧 化碳是重要的,氮特别适合用于这一点(也就是用作如上所述的驱动气)。
其结果是,尤其有利的是将反应器布置在对氧有很大需求的装置附近 (例如1km以内),例如酒精或乙醇生产厂,按照这种方式,在一家工 厂为生产氧所进行的空气分离(例如液化)中所产生的氮可以用在发酵装 置中,如果需要的话以及少量的氧(例如作为发酵器中的营养气)。而且, 如果发酵器产物需要被干燥,尤其如果它在干燥时是氧敏感性的,这正是 用于生物蛋白的生物质生产的情况,那么氮还可以用作喷雾干燥器中的干 燥气。氮/氧分离器、发酵器和氧需求工厂的这类协作共同布置构成本发 明的另一方面。
若需要本发明方法的大规模操作,当然有可能简单地增加反应器的尺 寸和驱动
马达的功率即可。不过替代选择是操作一组反应器,例如从中心 单元放射排列,中心单元容纳所有反应器的脱气区。利用一组(例如2、 3、4或5个)反应器的一个优点是可以借助接种来自已经处于操作中的 反应器的液体培养基而启动一个反应器中的反应。由于反应器一般不得不 需要停机时间进行清洗或维修,这样一种排列确保了操作可以连续进行, 并且可以显著减少个别反应器的启动时间。
附图说明
现在将参照附图进一步描述本发明方法和装置的实施方式,图中:
图1是根据本发明的环流反应器的
流程图;
图2是图1反应器水平区段的横截面,显示其中静态混合器平板的排 列;
图3是根据本发明的另一环流反应器的图示;
图4是图1或图3反应器水平区段的横界面,显示其中静态混合器平 板的排列。
参照图1,显示了环流反应器1,其中的环路包含用于除去废气的顶 部单元2、垂直下流区段3、水平流动区段4、垂直上流区段5和水平废 气/液体反应介质分离区段6。下流区段3连接在圆柱形顶部单元2的圆锥 形基部,而分离区段6正切进入顶部单元2的一侧,以便实现旋流式气/ 液分离。
从顶部单元2的顶部,通过出口端口7除去废气。顶部单元的顶部还 具备紧急排放口8,如果顶部单元中的废气压力超过预先设置的最大值, 例如环境压力以上0.5个大气压,8会自动打开。
用马达11(例如650kW马达)驱动推进器10,使液体培养基9围绕 环路循环。推进器10的上游是出口端口12,从中除去生物质,进行脱水 和进一步的加工,例如水解、喷雾干燥等。
在环路的水平区段4内,放置有一系列营养气(例如O2和CH4)入 口13(例如扩散平板(diffuser plate))和静态混合器14。优选地在下流和 上流区段3和5也具备营养气入口15和16。优选地围绕环路具备氨和矿 物质入口17和18和取样端口。优选地围绕环路和顶部单元2的顶部空间 还具备监测和取样端口(没有显示)。
向上流区段5的顶部提供驱动气(例如氮)入口19,例如扩散平板。
在分离区段6的基部,优选地具备用于营养气(尤其是氧)的多孔扩 散器20,它沿着流动方向延长,以便将营养气供应到从这一区段中分离 的液体中。
参照图2,显示环流反应器含有一堆平行的、水平的、带波纹的、开 孔的平板21,依次放置,波纹集中在一起(in registry)但是改变了方向,以 便为培养基提供流经通道22。
参照图3,显示了环流反应器1,其中的环路包含用于除去废气的顶 部单元2、垂直下流区段3、水平流动区段4、垂直上流区段5和水平废 气/液反应介质分离区段6。下流区段3连接在圆柱形顶部单元2的圆锥形 基部,而分离区段6进入顶部单元2的一侧。从顶部单元2的顶部,通过 出口端口7除去废气。顶部单元的顶部还具备紧急排放口,如果顶部单元 中的废气压力超过预先设置的最大值,例如环境压力以上0.5个大气压, 它会自动打开。
用马达11(例如650kW马达)驱动垂直分布的驱动杆,驱动推进器, 使液体培养基9围绕环路循环。受垂直分布的驱动杆驱动的推进器的上游 是出口端口12,从中除去生物质,进行脱水和进一步的加工,例如水解、 喷雾干燥等。
在环路的水平区段4内,放置有一系列营养气(例如O2和CH4)入 口13(例如扩散平板)和静态混合器。优选地围绕环路具备氨和矿物质 入口17和18和取样端口。优选地围绕环路和顶部单元2的顶部空间还具 备监测和取样端口(没有显示)。
向上流区段5顶部提供驱动气(例如氮)入口19,例如扩散平板。
利用反应器内的探针23测量溶解氧含量。利用反应器收获出口中的 探针24和25测量氨浓度和细胞
密度,利用出气排放管线中的探针26测 量气体组成(CO2,O2,CH4)。利用探针27和28测量反应器内的温度和pH。 利用来自这些探针的信息作为反馈控制,由此基于发酵过程的机械模型计 算收率最佳的气体和氨分布,反复为O2、CH4和NH3引入
阀门、培养基 从反应器流入
热交换器和返回到反应器内和酸/碱加入(以优化pH)提供 最佳设置。
图4显示更优选的混合器排列。在这种实施方式中,平行的、垂直的、 带波纹的、开孔的平板21是这样放置的,它们的波纹与流动方向形成一 定角度,并且在取向上是交替的。
混合器平板优选地是柔韧的,因为按照这种方式,它们是可自我清洁 的。为此,它们适宜由不锈
钢制成,厚度为至少0.2mm,例如约0.5至 1.5mm,尤其是0.8至1.2mm。最大平板间距、也就是波纹之间的通道高 度,优选为至少25mm,例如50至250mm,更优选为80至150mm,尤 其是90至110mm。