技术领域
[0001] 本
发明涉及用于高通量筛选癌细胞的新型方式和方法。更具体地，本发明涉及用于识别对细胞有可测量作用的分析物的高通量筛选(HTS)的方法及其系统。
背景技术
[0002] 大麻素包括
植物大麻素，内生的内源性大麻素和合成大麻素。在大麻属植物内已经鉴定出超过60种植物大麻素鉴定。鉴定大麻素通过大麻素
信号通路中的大麻素1型受体(CB1)和2型受体(CB2)这两种G-蛋白偶联受体(GPCR)发挥其药学活性。这些受体具有44％的
氨基同一性和独特而相似的大麻素结合特征。CB1受体主要存在于中枢和周围神经系统中，抑制神经元兴奋性和介质释放，导致体温过低，
镇静作用，兴奋和精神状态改变。CB2受体
水平在外周神经系统，胃肠系统和免疫组织中较高。
[0003] 多发性硬化，神经性
疼痛，癌症，动脉粥样硬化，中
风，心肌梗死，
高血压，
青光眼，
肥胖症/代谢综合征和骨质疏松症已经证明是一些大麻素通路发生改变的
疾病。由于这些疾病据发现是多因素的，所以可以利用表达水平的变化和药理学上大麻素受体结合来达到
治疗效果。因此，一种限定的
植物提取物与单一的合成化合物相比，能更好地达到治疗目的，因为多种成分可以起到协同效应。
[0004] 大麻素尚未获准用于治疗癌症，尽管知道其抗癌作用已经超过30年。有证据表明大麻素可能具有抗癌活性。这在20世纪70年代的
肺腺癌模型中被注意到，随后的研究也在胶质母细胞瘤，乳腺，前列腺，甲状腺，结肠，
皮肤，胰腺，白血病和淋巴瘤的癌细胞模型中证明了
肿瘤生长受到体内和体外抑制。发生这种抗肿瘤作用的确切机制可能包括抑制增殖性细胞信号通路，抑制血管发生和细胞迁移以及诱导凋亡和/或诱导自噬。
[0005] 许多癌细胞和鼠肿瘤模型用于评价大麻素的
抗肿瘤效果和作用机制，得到的结论是内源性大麻素系统在不同的恶性和非恶性疾病状态中改变。在前列腺、乳腺、白血病、黑素瘤和甲状腺细胞系以及大肠癌和
肝细胞癌组织样本中发现了显著水平的大麻素受体。
前列腺癌细胞系与正常前列腺细胞相比，CB1和CB2的表达提高了，这个事实有特别的意义。类似地，在淋巴瘤和
乳腺癌组织以及一些衍生的细胞系中，CB1和CB2过表达。
[0006] 据报道，将分离出的化合物制成或精制成合成药物，其毒性远大于其植物来源。它们生效的速度更快、强度更大以及作用时间更短。据报道，它们没有重现其植物来源的期望效果。
[0007] 化疗是一种通过尝试产生抑制疾病的生存或发展的条件来治疗疾病的一个例子。然而，这种治疗是非自然的，具有高度毒性，因此是有害的。
[0008] 由于癌症是一种致命的疾病，所以人们愿意承受严重的
副作用，然而，治疗潜能和毒性之间没有逻辑联系。
[0009] 个性化医疗(PM)是一种新型的方法，它提出对个体患者定制
治疗方案。已知的癌症超过200种，人类间的遗传多样性使得几乎不可能找到一种适合一群人的疗法。
[0010] 鉴于上述情况，对使用新型疗法如使用
植物提取物治疗多功能疾病如癌症的需求仍长期存在，没有得到满足。
发明内容
[0011] 因此，本发明的一个目的是公开一种用于鉴定对细胞有可测量效果的分析物的高通量筛选(HTS)的方法及其系统：(a)提供包括多个细胞样品的阵列；(b)提供至少一种待测的分析物；(c)使所述细胞样品与所设分析物
接触；以及(d)检测指示所述对细胞的可测量效果的信号，其中，对所述细胞样品测得的、相对于对照样品的、所述信号随时间的变化，表示所述分析物对所述细胞样品的可测量效果。
[0012] 本发明的另一目的是公开上述方法，其中，所述分析物选自：大麻素型、大麻素衍
生物、大麻提取物或其组分、非大麻素型成分、产品、化合物、分子或取代物及其中的任何组合。
[0013] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述对细胞的可测量效果选自：生理的、基因的、生化的、结构的以及其任何组合。
[0014] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述对细胞的可测量效果选自：抗增殖的、再生的、抗炎的、抗有丝分裂的、分化的、抗转移的、抗血管生成的、凋亡的、细胞毒性的、引起细胞病变的以及其任何组合。
[0015] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述对细胞的可测量效果是对生物参数的作用，选自：增殖、迁移、吸收、黏附、凋亡、
坏死、自噬、细胞毒性、细胞尺寸、运动性、细胞周期以及其任何组合。
[0016] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述癌细胞选自：乳腺、卵巢、结肠/直肠、前列腺、黑色素瘤、头和颈、胰腺、骨肉瘤、胃、胶质瘤、恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、白血病、腺癌、肾上腺、肛
门、胆、膀胱、骨、脑/CNS、子
宫颈、子宫内膜、食管、眼、胃肠、肾、白血病、肝、肺、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、鼻腔和鼻旁窦、鼻咽、非霍奇金淋巴瘤、
口腔、口咽、骨肉瘤、卵巢、胰腺、阴茎、垂体、
视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺、肉瘤、皮肤、小肠、胃、睾丸、胸腺、甲状腺、子宫肉瘤、
阴道和外阴及其任何组合。
[0017] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述细胞样品用选自：异种移植物、同种异体移植物、细胞系、活检细胞以及其任何组合。
[0018] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述细胞系为癌细胞系，选自：中枢神经系统、骨、前列腺、胃、尿道、卵巢、造血和淋巴组织、肾、甲状腺、皮肤、软组织、唾液腺、卵巢、肺、胸膜、肝、子宫内膜、胰腺、乳腺、上消化道、大肠、自主神经节、食管、胆道、小肠、自主神经节以及其任何组合。
[0019] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述细胞样品用选自：人细胞系、动物细胞系以及异体移植物。
[0020] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述细胞样品选自：癌细胞、干细胞、神经元细胞、心肌细胞、
体细胞、生殖细胞、正常细胞以及其任何组合。
[0021] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述信号选自：光学的、发光的、
荧光的、免疫学的、细胞计数、
放射性同位素、非放射性的同位素、电学的以及其任何组合。
[0022] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述对细胞的可测量效果是对癌细胞标志物的表达水平的效果，选自：ALK基因、甲胎蛋白(AFP)、β-2-微球蛋白(B2M)、β-人绒毛膜促性腺
激素(β-hCG)、BCR-ABL融合基因、BRAF突变V600E、CA15-3/CA27.29、CA19-9、CA-125、降
钙素、癌胚
抗原(CE A)、CD20、嗜铬粒蛋白A(CgA)、
染色体3、7、17和9p21、细胞
角蛋白
片段21-1、EGFR突变、雌激素受体(ER)/孕
酮受体(PR)、
纤维蛋白/纤维蛋白原、HE4、HER2/neu、免疫球蛋白、KIT、KRAS突变、乳酸脱氢酶、核基质蛋白22、
前列腺特异性抗原(PSA)、甲状腺球蛋白、尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)、纤溶酶原激活物
抑制剂(PAI-1)、5-蛋白标记(Oval)、21-基因签名(Oncotype DX)、70-基因签名(Mammaprint)及其任何组合。
[0023] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述分析物从大麻中提取，所述大麻，选自：陈旧大麻(Cannabis sativa)、印度大麻(Cannabis indica)、莠草大麻(Cannabis ruderalis)以及其任何组合。
[0024] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述大麻素型选自：大麻萜酚(CBG)型、大麻色原烯(CABB)型、大麻二酚(CBD)型、Δ9-四氢大麻酚(THC)型、Δ8-THC型、大麻环酚(CBL)型、Cannabielsoin(CBE)型、大麻醇(CBN)和Cannabinodiol(BND)型、Cannabitriol(CBT)型、各种类型的大麻素及其任何组合。
[0025] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述大麻素型进一步选自：四氢大麻酚(THC)或其衍生物、大麻二酚(CBD)或其衍生物、CBG(大麻萜酚)、CBC(大麻色原烯)、CBL(大麻环酚)、CBV(次大麻酚)、THCV(四氢次大麻酚)、CBDV(次大麻二酚)、CBCV(Cannabichromevarin)、CBGV(Cannabigerovarin)、CBGM(大麻萜酚单甲醚)及其任何组合。
[0026] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述THC或其衍生物选自：THC、THCV、THCA、THCVA、Δ9-四氢大麻酚(A9-THC)、Δ8-THC(A8-THC)以及其任何组合。
[0027] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述大麻二酚(CBD)或其衍生物选自：CBD、CBDV、CBDA以及其任何组合。
[0028] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述非大麻素型成分、产品、化合物、分子或取代物选自：萜类化合物、
碳氢化合物、衍生自大麻的精油、含氮化合物、碳水化合物、类黄酮、
脂肪酸、氨基酸、
蛋白质、糖蛋白、酶、糖和相关化合物、非大麻素酚、单醇、
醛、酮、酸、酯、内酯、类固醇、萜烯、植物甾醇如菜油甾醇、麦角固醇、E-谷甾醇和豆甾醇、维生素如维生素A和维生素K、色素如胡萝卜素和叶黄素、元素如Na、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn和Hg以及其任何组合。
[0029] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述分析物衍生自选自以下的来源：人体、动物体、植物提取、合成的以及其任何组合。
[0030] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述HTS选自：微升板、自动菌落选择器、uHTS或超高通量筛选、用于HTS药物发现的3D肿瘤球体分析方法、Celigo成像仪、自动化系统、用于存储存储容量和高速通路的存储测定板的旋转系统、集成
机器人系统、读数或检测、数据收集过程以及其任何组合。
[0031] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，与单独使用的单独使用的传统抗肿瘤或抗
炎症疗法相比，所述分析物相对于所述对细胞的可测量效果具有协同效应。
[0032] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，与单独使用的传统传统抗肿瘤或抗炎症疗法相比，所述分析物提供了相对于抗肿瘤或抗炎症活性的反指示作用。
[0033] 本发明的一个目的是公开一种用于鉴定对细胞有可测量效果的分析物的高通量筛选(HTS)的系统，所述系统包括：(A)提供包括多个细胞样品的阵列；(b)提供至少一种待测的分析物；(c)使所述细胞样品与所设分析物接触；以及(d)检测指示所述对细胞的可测量效果的信号的方式，其中，对所述细胞样品测得的、相对于对照样品的、所述信号随时间的变化，表示所述分析物对所述细胞样品的可测量效果。
[0034] 本发明的另一目的是公开上述系统，其中，所述分析物选自：大麻素型、大麻素衍生物、大麻提取物或其组分、非大麻素型成分、产品、化合物、分子或取代物及其中的任何组合。
[0035] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述对细胞的可测量效果选自：生理的、基因的、生化的、结构的以及其任何组合。
[0036] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述对细胞的可测量效果选自：抗增殖的、再生的、抗炎的、抗有丝分裂的、分化的、抗转移的、抗血管生成的、凋亡的、细胞毒性的、引起细胞病变的以及其任何组合。
[0037] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述对细胞有可测量效果是对生物参数的作用，选自：增殖、迁移、吸收、黏附、凋亡、坏死、自噬、细胞毒性、细胞尺寸、运动性、细胞周期以及其任何组合。
[0038] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述癌细胞选自：乳腺、卵巢、结肠/直肠、前列腺、黑色素瘤、头和颈、胰腺、骨肉瘤、胃、胶质瘤、恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、白血病、腺癌、肾上腺、肛门、胆、膀胱、骨、脑/CNS、子宫颈、子宫内膜、食管、眼、胃肠、肾、白血病、肝、肺、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、鼻腔和鼻旁窦、鼻咽、非霍奇金淋巴瘤、口腔、口咽、骨肉瘤、卵巢、胰腺、阴茎、垂体、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺、肉瘤、皮肤、小肠、胃、睾丸、胸腺、甲状腺、子宫肉瘤、阴道和外阴及其任何组合。
[0039] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述细胞样品用选自：异种移植物、同种异体移植物、细胞系、活检细胞以及其任何组合。
[0040] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述细胞系为癌细胞系，选自：中枢神经系统、骨、前列腺、胃、尿道、卵巢、造血和淋巴组织、肾、甲状腺、皮肤、软组织、唾液腺、卵巢、肺、胸膜、肝、子宫内膜、胰腺、乳腺、上消化道、大肠、自主神经节、食管、胆道、小肠、自主神经节以及其任何组合。
[0041] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述细胞样品用选自：人细胞系、动物细胞系以及异体移植物。
[0042] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述细胞样品选自：癌细胞、干细胞、神经元细胞、心肌细胞、体细胞、生殖细胞、正常细胞以及其任何组合。
[0043] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述信号选自：光学的、发光的、荧光的、免疫学的、细胞计数、放射性同位素、非放射性的同位素、电学的以及其任何组合。
[0044] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述对细胞的可测量效果是对一种癌细胞标志物的表达水平的作用，选自：ALK基因、甲胎蛋白(AFP)、β-2-微球蛋白(B2M)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、BCR-ABL融合基因、BRAF突变V600E、CA15-3/CA27.29、CA19-9、CA-125、降钙素、癌胚抗原(CE A)、CD20、嗜铬粒蛋白A(CgA)、染色体3、7、17和9p21、细胞角蛋白片段21-1、EGFR突变、雌激素受体(ER)/孕酮受体(PR)、纤维蛋白/纤维蛋白原、HE4、HER2/neu、免疫球蛋白、KIT、KRAS突变、乳酸脱氢酶、核基质蛋白22、前列腺特异性抗原(PSA)、甲状腺球蛋白、尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、5-蛋白标记(Oval)、21-基因签名(Oncotype DX)、70-基因签名(Mammaprint)及其任何组合。
[0045] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述分析物从大麻中提取，所述大麻，选自：陈旧大麻、印度大麻、莠草大麻以及其任何组合。
[0046] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述大麻素型选自：大麻萜酚(CBG)型、大麻色原烯(CABB)型、大麻二酚(CBD)型、Δ9-四氢大麻酚(THC)型、Δ8-THC型、大麻环酚(CBL)型、Cannabielsoin(CBE)型、大麻醇(CBN)和大麻二醇(CBND)型、大麻三醇(CBT)型、杂型大麻素及其任何组合。
[0047] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述大麻素型进一步选自：四氢大麻酚(THC)或其衍生物、大麻二酚(CBD)或其衍生物、CBG(大麻萜酚)、CBC(大麻色原烯)、CBL(大麻环酚)、CBV(次大麻酚)、THCV(四氢次大麻酚)、CBDV(次大麻二酚)、CBCV(Cannabichromevarin)、CBGV(Cannabigerovarin)、CBGM(大麻萜酚单甲醚)及其任何组合。
[0048] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述THC或其衍生物选自：THC、THCV、THCA、THCVA、Δ9-四氢大麻酚(A9-THC)、Δ8-THC(A8-THC)以及其任何组合。
[0049] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述大麻二酚(CBD)或其衍生物选自：CBD、CBDV、CBDA以及其任何组合。
[0050] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述非大麻素型成分、产品、化合物、分子或取代物选自：萜类化合物、碳氢化合物、衍生自大麻的精油、含氮化合物、碳水化合物、类黄酮、脂肪酸、氨基酸、蛋白质、糖蛋白、酶、糖和相关化合物、非大麻素酚、单醇、醛、酮、酸、酯、内酯、类固醇、萜烯、植物甾醇如菜油甾醇、麦角固醇、E-谷甾醇和豆甾醇、维生素如维生素A和维生素K、色素如胡萝卜素和叶黄素、元素如Na、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn和Hg以及其任何组合。
[0051] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述分析物衍生自：人体、动物体、植物提取、合成的以及其任何组合。
[0052] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，所述HTS选自：微升板、自动菌落选择器、uHTS或超高通量筛选、用于HTS药物发现的3D肿瘤球体分析方法、Celigo成像仪、自动化系统、用于存储存储容量和高速通路的存储测定板的旋转系统、集成机器人系统、读数或检测、数据收集过程以及其任何组合。
[0053] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，与单独使用的传统抗肿瘤或抗炎症疗法相比，所述分析物相对于所述对细胞的可测量效果具有协同效应。
[0054] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的系统，其中，与单独使用的传统抗肿瘤或抗炎症疗法分别相比，所述分析物提供了相对于抗肿瘤或抗炎症的反指示作用。
[0055] 本发明的进一步目的是公开一种非临时计算机可读介质，包括指令，所述指令由一部或多部计算机执行，引起一部或多部计算机通过处理涉及指示所述对细胞的可测量效果的信号的数据而呈现对预选细胞样品的一种或多种分析物的对细胞的可测量效果的相关数据，其中，对所述细胞样品测得的、相对于对照样品的、所述信号随时间的变化，表示所述分析物对所述细胞样品的可测量效果。
[0056] 本发明的进一步目的是公开一种组合物，其包括
治疗有效量的根据
权利要求1所述的方法选取的分析物，或包括基本有效治疗量的根据权利要求1所述的方法选取的提取物，其中，所述组合物在治疗癌症类或炎性疾病的使用中具有抗肿瘤或抗炎症活性或协同效用。
[0057] 本发明的进一步目的是公开如上限定的组合物，其中，所述分析物选自：大麻素型、大麻素衍生物、大麻提取物或其组分、非大麻素型成分、产品、化合物、分子或取代物及其中的任何组合。
[0058] 本发明的进一步目的是公开一种鉴定一种或多种源自大麻的基因标志物的方法，其中，所述一种或多种源自大麻的基因标志物与上述任一项所限定的方法指示的对细胞有可测量效果相关，所述方法包括把所述信号与大麻DNA序列数据关联的额外步骤。
[0059] 本发明的进一步目的是公开一种或多种源自大麻的基因标志物，其中，所述一种或多种源自大麻的基因标志物与上述任一项所限定的方法指示的对细胞有可测量效果相关，且其中，所述信号与大麻DNA序列数据关联。
[0060] 本发明的进一步目的是公开上述任一基因标志物，其中，所述一种或多种基因标志物选自：基因座的变异、突变或改变、单核苷酸多态性(SNP)、
小卫星、RFLP(限制性片段长度多态性)、SSLP(简单序列长度多态性)、AFLP(扩增片段长度多态性)、RAPD(多态性随机扩增)、VNTR(可变数
串联扩增)、SSR(简单序列重复)、微序列多态性、STR(短串联重复)、SFP(单特征多态性)、DArT(多态阵列技术)、RAD标志物(限制位点相关DNA标志物)、核苷酸变化、得失位、缺失、复制、反转和/或插入以及其任何组合。
[0061] 本发明的进一步目的是公开一个分析物的
数据库，所述数据库包括关于所述分析物的数据，所述数据与由执行上述任一步骤限定的对细胞的可测量效果相关。
[0062] 本发明的进一步目的是公开一个用于高通量筛选(HTS)的系统，所述系统用于鉴定分析物，所述分析物选自：大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合，所述分析物指示体外细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性。所述系统包括：(a)包括多个癌细胞样品的阵列；(b)至少一种待测的分析物,所述分析物选自大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合；以及(c)检测信号的方式，所述信号指示所述体外细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性，其中，所述癌细胞样品相对于对照样品测得的所述信号随时间的变化，是所述分析物对所述癌细胞样品的体外的所述细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性的指示。
[0063] 本发明的进一步目的是公开用于鉴定分析物的高通量筛选(HTS)方法，所述分析物选自：大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合，所述分析物指示体外细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性。所述方法包括以下步骤：(a)提供包括多个癌细胞样品的阵列；(b)提供待测的所述分析物,所述分析物选自大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合；(c)使所述癌细胞样品与所述分析物接触；以及(d)检测信号，所述信号指示所述体外细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性，其中，所述癌细胞样品相对于对照样品测得的所述信号随时间的变化，是所述分析物对所述癌细胞样品的体外的所述细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性的指示。
[0064] 本发明的进一步目的是公开一个用于鉴定分析物的高通量筛选(HTS)的方法，所述分析物选自：大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合，所述分析物指示抗肿瘤活性，所述方法包括上述任一项所限定的方法，且额外地包括步骤：(a)将从所述癌细胞样品衍生的癌细胞异种物移植到实验动物中；(b)用所述分析物处理所述实验动物，所述分析物选自：大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合，由上述任一项所限定的方法鉴定；以及(c)监测所述实验动物的肿瘤生长。
[0065] 本发明的进一步目的是公开上述任一项所限定的方法，其中，所述实验动物为裸鼠。
[0066] 本发明的进一步目的是公开一种可用于鉴定植物分析物的方案，所述分析物对与疾病有关的细胞有可测量效果。所述方案包括以下步骤：(a)提供输入数据，所述数据包括选自一下的数据：所述分析物的参数、所述细胞的参数、鉴定具有如权利要求1指示的对细胞的可测量效果的分析物的高通量筛选(HTS)结果数据、临床或临床前数据以及其任何组合；(b)处理所述数据；以及(c)在
电子显示屏上呈现输出数据，所述数据关于所述分析物与疾病有关的对细胞的可测量效果记忆其组合。
[0067] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述
数据处理包括选自以下的步骤：关联、归一化、校准、因式分解、计算、统计分析以及其任何组合。
[0068] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述分析物参数选自：分析物来源、分析物处理以及其任何组合。
[0069] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述植物分析物来源参数选自：源株、源基因型、源表型、源生长条件、源
收获条件、源营养、来源部分或来源器官以及其任何组合。
[0070] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述来源部分或来源器官选自：根、茎、叶、花、
种子以及其任何组合。
[0071] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述植物分析物处理参数选自：
固化、干燥、提取过程、脱羧以及其任何组合。
[0072] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述提取过程选自：
丁烷、CO2梯度、
乙醇、
干冰以及其任何组合。
[0073] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述细胞参数选自：细胞来源、细胞处理以及其任何组合。
[0074] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述细胞来源选自：活检、细胞系、异种移植物、突变的细胞或分子以及其任何组合。
[0075] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述细胞处理选自：细胞培养基处理、血清处理、细胞稀释、细胞周期阶段以及其任何组合。
[0076] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述对细胞的可测量效果选自：增殖、凋亡、迁移、再生、分化、血管生成以及其任何组合。
[0077] 本发明的一个目的是公开上述任一方案，其中，所述临床或临床前数据选自：所述分析物对受试者的
给药途径、剂量、释放形式、癌症标志物水平、肿瘤尺寸监测、转移监测、存活、根据一种或多种量表测量的
生活质量以及其任何组合。
[0078] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述给药途径选自：舌下、口服、静脉内、外用、皮下以及其任何组合。
[0079] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述释放形式选自：缓慢释放、控制释放、持续释放、瞬时或快速释放以及其任何组合。
[0080] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，所述癌细胞标志物选自：ALK基因、甲胎蛋白(AFP)、β-2-微球蛋白(B2M)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、BCR-ABL融合基因、BRAF突变V600E、CA15-3/CA27.29、CA19-9、CA-125、降钙素、癌胚抗原(CEA)、CD20、嗜铬粒蛋白A(CgA)、染色体3、7、17和9p21、细胞角蛋白片段21-1、EGFR突变、雌激素受体(ER)/孕酮受体(PR)、纤维蛋白/纤维蛋白原、HE4、HER2/neu、免疫球蛋白、KIT、KRAS突变、乳酸脱氢酶、核基质蛋白22、前列腺特异性抗原(PSA)、甲状腺球蛋白、尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、5-蛋白标记(Oval)、21-基因签名(Oncotype DX)、70-基因签名(Mammaprint)及其任何组合。
[0081] 本发明的进一步目的是公开上述任一方案，其中，评估生活质量的所述一种或多种量表选自：痛苦量表、生活质量表、
癌症治疗的功能评估量表以及其任何组合。
附图说明
[0082] 以下结合附图格
实施例的描述来描述本发明的示例性非限制实施例。附图通常未按等比例展示，其任何尺寸的目的仅在于示例而并非限定。可选地，相应或相似的元件用相同的数字或字母表示。
[0083] 图1为大麻素分析的测试报告；
[0084] 图2为成像装置ImageXpress micro的照片例图；
[0085] 图3为用MetaXpress和Cell Health module分析的细胞图像。
[0086] 图3A为Hoechst 33342(蓝色)、YO-PRO-1(绿色)和PI(红色)三种不同滤波成像下的图像。
[0087] 图3B为Cell Health module根据荧
光标志物的强度对细胞进行的分割。
[0088] 图3C为每个孔中的晚期凋亡细胞的测量的屏幕显示的例子。
[0089] 图4为用选取的大麻提取物处理的不同癌细胞系与对照样品相比的图像。
[0090] 图5为用不同大麻提取物处理的前例腺癌细胞系与对照样品相比的图像。
[0091] 图6为用选取的大麻提取物处理的包括不同THC：CBD比例的恶性胶质瘤细胞系的图像。
[0092] 图7为五种不同大麻提取物对三种人癌细胞系类型的效果。
[0093] 图8为大麻提取物对PC3前列腺癌细胞的效果。
[0094] 图9为鉴定一种对与疾病有关的细胞有可测量效果的植物分析物的方案。
具体实施方式
[0095] 以下结合附图详细说明优选实施例，附图为本
说明书的一组分并以示例的方式说明可以用于实施本发明的特定实施例。应当理解，在不脱离本发明的范围的前提下，可以使用其他实施例，且作出其他结构变化。本发明可以根据权利要求书在缺少组分或全部具体细节下实施。为了清楚描述本发明，没有详细描述与本发明相关的技术领域中已知的技术材料，从而避免本发明产生不必要的模糊。
[0096] 更具体地，本发明涉及用于鉴定对细胞有可测量效果的分析物的高通量筛选(HTS)的方法。前述方法包括以下步骤：(a)提供包括多个细胞样品的阵列；(b)提供至少一种待测的分析物；(c)使所述细胞样品与所述分析物接触；以及(d)检测指示所述对细胞的可测量效果的信号，其中，对所述细胞样品测得的、相对于对照样品的、所述信号随时间的变化，表示所述分析物对所述细胞样品的可测量效果。
[0097] 根据一个特定方面，本发明提供用于鉴定分析物的高通量筛选(HTS)的方法，所述分析物选自：大麻提取物或其组分、大麻素型、非大麻素型以及其任何组合。所述分析物指示体外细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性，都在本
申请的范围之内。所述方法包括以下步骤：(a)提供包括多个癌细胞样品的阵列；(b)提供待测的所述分析物,所述分析物选自大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合；(b)使所述癌细胞样品与所述分析物接触；以及(c)检测信号，所述信号指示所述体外细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性，其中，所述癌细胞样品相对于对照样品测得的所述信号随时间的变化，是所述分析物对所述癌细胞样品的体外的所述细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性的指示。
[0098] 本文所用的术语“约”指的是所限定的量或测度或值的±25％。
[0099] 本文所用的术语“高通量筛选”或“HTS”指的是用于科学实验，特别是用于生物和化学领域中的任何方法。筛选设备包括机器人、数据处理和控制
软件、液体处理设备和灵敏检测器的使用，使研究人员能够快速进行数百万次的化学、遗传或药理学测试。通过这个过程可以快速鉴定活性化合物或分析物、
抗体、或调节特定生物分子通路的基因。这些实验的结果为药物设计和理解生物学中特定生化过程的相互作用或作用提供了起点。
[0100] 这里承认，自动化是HTS技术的重要组成元素。通常，包括一个或多个机器人的集成机器人系统将测试微孔板进行站间运送，用于样品和
试剂添加、混合、培养和最终的读数或检测。HTS系统通常可以同时制备、培养和分析许多样品，进一步加快数据收集过程。
[0101] 进一步地，在本申请的范围中，术语HTS进一步关联涉及每天筛选超过100,000种化合物的uHTS或超高通量筛选。
[0102] 进一步地，在本申请的范围中，本发明使用了额外的或HTS方法，例如在3D肿瘤球体分析方法中使用Celigo成像仪进行HTS药物发现；使用自动系统如旋转传送系统为高存储容量和高速通道存储测试板，以及任何其他HTS系统或技术。
[0103] 下文中使用的术语“分析物”通常指在分析过程中感兴趣的一种成分、分子、取代物或化学或植物成分。分析过程设计用于测量分析物的性质。
[0104] 下文中的术语“大麻”是指一种包括即陈旧大麻、印度大麻和莠草大麻这三种不同种类的开花植物属。
[0105] 在本申请的范围之内，大麻提取物或大麻浓缩物或其组分用作为对细胞样品的分析物，并用于筛选对细胞的可测量效果。这种提取物可以包括大麻素型化合物或组分、非大麻素型化合物或组分以及其组合。
[0106] 下文所使用的术语“非大麻素”或“非大麻素型”是指任何不是大麻素的分子或化合物或成分。
[0107] 下文术语“大麻素”是指一类多样化的化学化合物，所述化合物作用于细胞的大麻素受体和其他信号传递受体或蛋白质，抑制或激发大脑、心脏、肝、免疫系统和肺释放出的神经递质。所述受体蛋白包括内源性大麻素(人体或动物体内自然产生的)、植物大麻素(在大麻和一些其他植物中发现的)以及合成大麻素(化学合成)。最引人注目的大麻素是植物大麻素A9-四氢大麻酚(THC)，大麻的主要精神兴奋化合物。大麻二酚(CBD)是植物的另一个主要成分，在植物
树脂的提取物中占40％。从大麻中分离出至少85种不同的大麻素，其表现出不同的效果。参考http://www.medicinalgenomics.com/wp-content/uploads/2011/12/Chemical-constituents-of-cannabis.pdf，其全部内容通过引用并入本文，其显示了已鉴定的大麻素的非限制性列表。本发明包括全部大麻素，例如，属于以下类别或组别的大麻素：
[0108] 大麻萜酚(CBG)型：包括CBG及其前体大麻酚(CBGA)，其为在植物中形成的生物大麻素。该组中的其他大麻素有丙基
侧链类似物和单甲醚衍生物。
[0109] 大麻环萜酚(CBC)型：鉴定了五种主要作为C5-类似物的CBC型大麻素。
[0110] 大麻二醇(CBD)型：描述了具有C1至C5侧链的七种CBD型大麻素。CBD及其相应的酸性CBDA是纤维型大麻(工业大麻)中最丰富的大麻素。CBDA是第一种发现的大麻素酸。
[0111] Δ9-四氢大麻酚(THC)型：已知具有CI至C5侧链的九种THC型大麻素。THC酸A是主要的生物源前体，而THC酸B的存在量则小得多。THC是主要的精神兴奋药物，而酸不致精神兴奋。THC(6a，10a-反-6a，7,8,10a-四氢-6,6,9-三甲基-3-戊基-6H-二苯并[b，d]吡喃-1-醇)也包括在该组内。
[0112] Δ8-THC型：Δ8-THC及其酸性前体分别被认为是THC和THC酸人工产物。8,9双键
位置在热
力学上比9,10位置更稳定。Δ8-THC的活性比THC低约20％。
[0113] Cannabicyclol(CBL)型：已知三种特征是五元环和Cl-桥而非典型的环A的大麻素：CBL，其酸前体和C3侧链类似物。已知CBL是来自CBC的热生成的人工产物。
[0114] Cannabielsoin(CBE)型：从CBD形成的人工产物五种CBE型大麻素中，有CBE及其酸性前体A和B.
[0115] 大麻酚(CBN)和大麻二酚(CBND)型：已知六种CBN和两种CBND型大麻素。它们具有芳香环，分别是THC和CBD的
氧化人工产物。其在大麻产品中的浓度取决于年龄和储存条件。
[0116] Cannabitriol(CBT)型：已经鉴定了九种CBT型大麻素，其特征在于附加的OH取代。CBT本身以异构体和外消旋体的形式存在，而CBTV已被鉴定出两种异构体(9-a和9-b-羟基)。CBDA四氢大辛三醇酯(酯基在9-羟基)是唯一被报道的天然存在的大麻素酯。
[0117] 杂型：已知11种具有不同的非寻常结构的大麻素，例如，具有呋喃环的(dehydrocannabifuran，cannabifuran)，具有碳基功能的(大麻异黄酮，10-氧代-G-6a-四氢大麻酚)或四羟基取代物(cannabiripsol)。
[0118] 下文中的术语“大麻提取物”是指从包括至少一种大麻素的大麻植物中分离的任何提取物或浓缩物可以使用许多已知的提取方法中的任何一种从大麻植物中提取大麻素，例如非
烃提取法和烃提取方法。
[0119] 下文中使用的术语“大麻素的组分”是指用分离或纯化或
分馏过程处理后的大麻提取物。更具体地，它是指包括大麻素型组分或元素经纯化后或组分纯化后的大麻提取物。在可选的实施例中，大麻素的组分可以包括合成大麻素。
[0120] 下文中的术语“大麻二酚”或“CBD”是指已鉴定的大麻素中至少85种活性大麻素中的一种。大麻二酚是一种主要的植物大麻素，占植物提取物的40％。CBD被认为比四氢大麻酚(THC)具有更广泛的药用价值。大麻二酚对CB1和CB2受体具有非常低的亲和力，但可作为其兴奋剂的间接拮抗剂。CBD可通过增加CB 1受体
密度或通过另一种CB 1相关机制来增强THC的作用。它也是CB2受体的反向兴奋剂。CBD具有抗增殖，促凋亡作用并抑制癌细胞迁移，粘附和侵袭。术语CBD也指大麻二酚CBD的同系物次大麻二酚(CBDV)和指酸性大麻二酚(CBDV)。
[0121] 下文中的术语“四氢大麻酚”或“THC”是指大麻植物中的主要精神兴奋成分(或大麻素)。THC在大麻素受体CB1处具有组分兴奋剂活性，并且已知CB2受体增加皮质醇水平。包括在本申请的进一步范围内，术语THC是指四氢次大麻酚(THCV或THV)、四氢大麻酚(THC)和四氢大麻酚酸(THCA，2-COOH-THC)的同系物，是四氢大麻酚(THC)的生物合成前体。
[0122] 应该注意的是，大麻醇(CBN)、大麻色原烯(CBC)、CBD的酸(CBDA、CBGA、THCA)和丙基同系物(CBDV、CBGV、THCV)、大麻萜酚(CBG)、和THC、以及四氢次大麻酚酸(THC-V和THC-VA)也被包括作为本发明的成分组合物或制剂的可选活性成分。
[0123] 大麻提取物或其组分可以包括非大麻素型成分，选自：萜类化合物、碳氢化合物、衍生自大麻的精油、含氮化合物、碳水化合物、类黄酮、脂肪酸、非大麻素酚、单醇、醛、酮、酸、酯、内酯、类固醇、植物甾醇如菜油甾醇、麦角固醇、E-谷甾醇和豆甾醇、维生素K、色素如胡萝卜素和叶黄素、元素如Na、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn和Hg以及其任何组合。参考http://www.medicinalgenomics.com/wp-content/uploads/2011/12/Chemical-constituents-of-cannabis.pdf的出版内容，其全部内容通过引用并入全文。进一步地，在本申请的范围中，已知大麻中有483种不同的可鉴定的化学成分。最具特色和特殊类别的化合物是大麻素(已知的有66种)，已知仅在大麻植物中存在。大麻植物的其他成分是：含氮化合物(已知的有27种)、氨基酸(18)、蛋白质(3)、糖蛋白(6)、酶(2)、糖和相关化合物(34)、烃类(50)、简单醇类(7)、醛类(13)、酮类(13)、简单酸(21)、脂肪酸(22)、简单酯(12)、内酯类(1)、类固醇(11)、萜烯(120)、非大麻素酚类(25)、类黄酮(21)、维生素(1)[维生素A]、色素(2)和元素(9)。进一步地，在本申请的范围中,http://medicalmarijuana.procon.org/view.answers.php？questionID＝000636的全部内容已并入全文。
[0124] 下文中的术语“大麻素受体”是指G蛋白-偶联受体超家族下的一类细胞膜受体。现已知两种亚型的大麻素受体，称为CB1和CB2。CB1受体主要在大脑中表达，但也存在于肺、肝和肾。CB2受体主要在免疫系统、消化系统和造血细胞中表达，
[0125] 进一步地，在本申请的范围中，本发明的方法和系统筛选出的细胞系包括但不限于http://www.broadinstitute.org/ccle/data/browseSamples？actionMethod＝pages％2Fsearch％2FsearchResult.xhtml％3AbrowseSamplesBean.checkSkipFirstStep％28％
29&conversationPropagatio n＝begin中列出的细胞系，在此以引用方式并入本文。
[0126] 下文中所有的术语“生活质量表”是指评价病人在治疗后的生活质量的量表。这种量表的非限制性例子包括疼痛量表，例如面部疼痛量表，Wong-Baker FACES疼痛评定量表，彩色模拟量表，视觉模拟量表(VAS)，语言
数字量表(VNRS)，口头描述量表(VDS)和简易疼痛量表；生活质量量表(QOLS)；癌症治疗功能评估(FACT)量表以及其任何组合。
[0127] 下文中术语“持续释放剂型”是指以预定速率释放药物，使药物在一段特定的时间内保持恒定的浓度并具有最小的副作用。这可以通过各种制剂实现，包括脂质体和药物-
聚合物偶联物。持续释放的定义更类似于“控制释放”而不是“持续”。
[0128] 根据特定的实施例，本发明为新型癌症疗法提供了一种基于个性化治疗(PM)的用于筛选新型癌症疗法的系统和方法，包括以下方面中的至少一种。
[0129] 1.用大麻提取物处理后的病人活检的细胞的高通量筛选(HTS)。
[0130] 2.用大麻素的组分处理后的病人活检的细胞的高通量筛选(HTS)。
[0131] 3.用大麻素的组分处理后的来自异种移植物的活检(如，注射人癌细胞的小鼠)的高通量筛选(HTS)。
[0132] 4.用大麻提取物处理后的来自异种移植物(如，注射人癌细胞的小鼠)的活检的高通量筛选(HTS)。
[0133] 5.用大麻提取物或传统化疗处理后的病人活检的细胞的高通量筛选(HTS)。
[0134] 6.特定癌细胞系的高通量筛选(HTS)。
[0135] 7.使病人的生物信息(基因/血/神经学/行为/营养)与从HTS获得的活检的数据关联。
[0136] 8.使病人的临床数据与HTS数据关联。
[0137] 因此，本发明的一个目的是提供用于筛选无毒自然癌
细胞疗法的方法和系统。
[0138] 到目前为止，药物工业的普遍概念是使用分离物或合成整株植物的部分，其在医学使用期间有时在其患者中产生不良的副作用。例如，例如，用于癌症化疗的最有用的药物是从植物
马达加斯加长春花中分离出来的。它是一种对于乳腺癌和淋巴癌的有效药物。然而，它的副作用会使人虚弱且危险。因此，应当注意从植物中分离活性分子可能被错误计算。在某些情况下，单一化合物不能带来植物提取物或其组分的理想性质。用纯化的化合物而不是全部植物提取物治疗疾病更好的假设可能是误导性的。
[0139] 本文承认，据证明，使用整个大麻植物提取物相对于从大麻分离的化合物在治疗某些疾病和病症更有效。不同的大麻提取物成分可能导致协同效应或加成效应，这在使用分离的化合物或者其特定组合时可能不存在。
[0140] 根据一个进一步的方面，不希望受理论束缚，提取物混合物内的活性分子的协调比例(生物机制)可能是与人类受体共同进化的结果。
[0141] 本发明实现的“活性比例的定向演变”的
大数据的持续扫描和建立是另一个未满足的需求。
[0142] 不希望受到理论的束缚，众所周知的预期是，心理状态会通过体验为“健康”的平衡和体验为“疾病”的
不平衡效果我们身体的生理机能。今天的大多数癌症疗法是有害和有毒的，无论其治疗效果如何。可能这种现象与严酷治疗可以治愈严重疾病的思想文化方式相关。然而，现实证据中，癌症患者通常是从有轻微疼痛的“病”人到“治疗后”有不可忍受的疼痛的病人。
[0143] 恶心和体重减轻极大地削弱了身体和消磨生存意志。接近死亡的悲观预言和削弱的身体使得恢复健康需要克服的壁垒更高。因此，赋予癌症患者的情绪状态将转化到生理领域。本发明涉及提供解决癌症患者的心理状态以及其生理状况的治疗。虽然大麻素或大麻提取物是特别针对其细胞毒性或抗癌性质进行筛选的，其“副作用”也是令人想要的，因为众所周知它们对于癌症相关性恶病质和厌食综合征是有益的。它们同样具有减轻痛苦和抗抑郁活性。这些组合的治疗益处使得本发明成为有效的治疗方法，具有最小的不良副作用
[0144] 在此，使用高筛选技术，在生物过程中，例如在大麻素处理的从病人肿瘤分离的癌细胞系和/或细胞中的细胞坏死和凋亡中，鉴定了优选的自然大麻素组合。
[0145] 在本发明的进一步的范围内，筛选和提供有效的提取物，其以一预设剂型或给药途径(如胶囊、静脉内或口服)施用于病人时，发现可以阻碍癌细胞。
[0146] 根据一个进一步的方面，用本发明的方法鉴定的提取物(例如，大麻提取物或其组分)处理癌症患者时，有以下治疗益处：
[0147] 振奋患者的心理状态
[0148] 没有不良副作用
[0149] 个人定制的高度有效的抗癌化合物
[0150] 在病人另外用化疗或放疗的情况下，无论提取物的抗癌效果如何，改善食欲、减少恶心。
[0151] 根据本发明的另一个方面，本发明揭示了大麻素在癌症和其他非恶性疾病中的药理学重要性。
[0152] 为了解决上述公开的目的和方面，本发明提供了用于高通量输出筛选(HTS)的可靠方法，用于检测所选分析物如大麻素比例或剂量与抗肿瘤活性之间的关联性。根据一个实施例，本发明使用不断增长的从患者或实验动物衍生的人癌细胞系肿瘤细胞的文库，和创建大麻基化合物的扩大种类范围。这些化合物对不同的组织系的肿瘤细胞的生物活性的测试，产生高度有效的治疗数据。
[0153] 在本发明的进一步范围内，HTS系统应用于细胞系，联合或不联合使用标准化疗，用于筛选有效的大麻素或其他天然提取物。
[0154] 进一步地，在本申请的范围中，HTS系统应用于源于患者的活检，根据患者的整体治疗，用于筛选与化疗联合的有效的大麻素或大麻素组合或其他天然提取物。
[0155] 进一步地，在本申请的范围中，本发明开发了一套学习
算法，用于预测大麻素比例或萜类或混合物或提取物的效价。
[0156] 在另一个实施例中，提供了一组肿瘤特异性的高效的
专利化合物。
[0157] 根据一个进一步的方面，评估大麻素或大麻提取物或其组分或感兴趣的分析物对癌细胞，干细胞，神经元和心肌细胞的效果，用于开发高级天然治疗剂。
[0158] 通过本发明的系统和方法评估大麻素的抗肿瘤活性，其反映在对各种类型癌症的有效治疗活性中。
[0159] 为了鉴定活性化合物，例如对特定类型的癌细胞产生效果的大麻素型化合物或大麻素比例，本发明提供一种筛选(即高通量筛选或HTS)，其测试不同大麻素衍生组分的抗肿瘤活性。抗肿瘤活性测试包括：抗增殖作用(细胞周期停滞)、细胞毒性比色法如XTT法测定的下降的存活率的细胞死亡、凋亡、坏死、自噬和抗血管生成、抗迁移以及抗转移测定，以及大麻素可能具有的与现在临床使用的传统
化疗药物的协同作用。
[0160] 根据一个实施例，为了进行筛选，使用了ImageXpress Micro XLS System。ImageXpress Micro XLS System是一种能够进行固定细胞或活细胞研究的荧光、
透射光和
相位对比成像的宽场自动
显微镜。这种最先进的系统具有每个孔收集若干图像的能力。它具有更短的成像时间，其
视野是行业当前标准的三倍。此外，ImageXpress Micro XLS System可以在低
分辨率、全孔、3色细胞评分应用中捕获>1000万个细胞/小时，或在用于进行高通量筛选(HTS)的高分辨率双色测定中捕获>100万个细胞/小时。通过这种HTS，可以获得细胞尺寸、增殖、凋亡和迁移的参数。此外，目前的研究表明，大麻素在几种不同的肿瘤模型中表现出选择性抗肿瘤活性。本发明能够快速有效地筛选许多人和小鼠癌细胞系，包括：
乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌、黑素瘤、头颈部癌、胰腺癌、骨肉瘤、胃癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、白血病等。此外，在本发明的特定方面，同时对化疗后的和来自同一组织和/或来自相同患者的复发的癌细胞、正常细胞、转移细胞和/或肿瘤细胞测试了测试化合物或分析物的效果。
[0161] 因此，在本发明的范围内，提供一种用于鉴定对细胞有可测量效果的分析物的高通量筛选(HTS)的方法。前述方法包括以下步骤：(A)提供包括多个细胞样品的阵列；(b)提供至少一种待测的分析物；(c)使所述细胞样品与所设分析物接触；以及(d)检测指示所述对细胞的可测量效果的信号，其中，对所述细胞样品测得的、相对于对照样品的、所述信号随时间的变化，表示所述分析物对所述细胞样品的可测量效果。
[0162] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述方法，其中，所述分析物选自：大麻素型、大麻素衍生物、大麻提取物或其组分、非大麻素型成分、产品、化合物、分子或取代物及其中的任何组合。
[0163] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述对细胞的可测量效果选自：生理的、基因的、生化的、结构的以及其任何组合。
[0164] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述对细胞的可测量效果选自：抗增殖的、再生的、抗炎的、抗有丝分裂的、分化的、抗代谢的、抗血管生成的、凋亡的、细胞毒性的、引起细胞病变的以及其任何组合。
[0165] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述对细胞有可测量效果是对生物参数的作用，选自：增殖、迁移、吸收、黏附、凋亡、坏死、自噬、细胞毒性、细胞尺寸、运动性、细胞周期以及其任何组合。
[0166] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述癌细胞选自：乳腺、卵巢、结肠/直肠、前列腺、黑色素瘤、头和颈、胰腺、骨肉瘤、胃、胶质瘤、恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、白血病、腺癌、肾上腺、肛门、胆、膀胱、骨、脑/CNS、子宫颈、子宫内膜、食管、眼、胃肠、肾、白血病、肝、肺、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、鼻腔和鼻旁窦、鼻咽、非霍奇金淋巴瘤、口腔、口咽、骨肉瘤、卵巢、胰腺、阴茎、垂体、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺、肉瘤、皮肤、小肠、胃、睾丸、胸腺、甲状腺、子宫肉瘤、阴道和外阴及其任何组合。
[0167] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述细胞样品用选自：异种移植物、同种异体移植物、细胞系、活检细胞以及其任何组合。
[0168] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述细胞系为癌细胞系，选自：中枢神经系统，骨骼，前列腺，胃，
尿路，卵巢，造血和淋巴组织，肾，甲状腺，皮肤，软组织，唾液腺，卵巢，肺，胸膜，肝，子宫内膜，胰腺，乳腺，上消化道，大肠，自主神经，食道，胆道，自主神经节以及其任何组合。
[0169] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述细胞样品用选自：人细胞系、动物细胞系以及异体移植物。
[0170] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述细胞样品选自：癌细胞、干细胞、神经元细胞、心肌细胞、体细胞、生殖细胞、正常细胞以及其任何组合。进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述信号选自：光学的、发光的、荧光的、免疫学的、细胞计数、放射性同位素、非放射性的同位素、电学的以及其任何组合。
[0171] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述对细胞的可测量效果是对一种癌细胞标志物的表达水平的作用，选自：ALK基因、甲胎蛋白(AFP)、β-2-微球蛋白(B2M)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、BCR-ABL融合基因、BRAF突变V600E、CA15-3/CA27.29、CA19-9、CA-125、降钙素、癌胚抗原(CE A)、CD20、嗜铬粒蛋白A(CgA)、染色体3、7、17和9p21、细胞角蛋白片段21-1、EGFR突变、雌激素受体(ER)/孕酮受体(PR)、纤维蛋白/纤维蛋白原、HE4、HER2/neu、免疫球蛋白、KIT、KRAS突变、乳酸脱氢酶、核基质蛋白22、前列腺特异性抗原(PSA)、甲状腺球蛋白、尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、5-蛋白标记(Oval)、21-基因签名(Oncotype DX)、70-基因签名(Mammaprint)及其任何组合。
[0172] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述分析物从大麻中提取，所述大麻选自：陈旧大麻、印度大麻、莠草大麻以及其任何组合。
[0173] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述大麻素型选自：大麻萜酚(CBG)型、大麻色原烯(CABB)型、大麻二酚(CBD)型、Δ9-四氢大麻酚(THC)型、Δ8-THC型、大麻环酚(CBL)型、Cannabielsoin(CBE)型、大麻醇(CBN)和大麻二醇(CBND)型、大麻三醇(CBT)型、杂型大麻素及其任何组合。
[0174] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述大麻素型进一步选自：四氢大麻酚(THC)或其衍生物、大麻二酚(CBD)或其衍生物、CBG(大麻萜酚)、CBC(大麻色原烯)、CBL(大麻环酚)、CBV(次大麻酚)、THCV(四氢次大麻酚)、CBDV(次大麻二酚)、CBCV(Cannabichromevarin)、CBGV(Cannabigerovarin)、CBGM(大麻萜酚单甲醚)及其任何组合。
[0175] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述THC或其衍生物选自：THC、THCV、THCA、THCVA、Δ9-四氢大麻酚(A9-THC)、Δ8-THC(A8-THC)以及其任何组合。
[0176] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述大麻二酚(CBD)或其衍生物选自：CBD、CBDV、CBDA以及其任何组合。
[0177] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的系统，其中，所述非大麻素型成分、产品、化合物、分子或取代物选自：萜类化合物、碳氢化合物、衍生自大麻的精油、含氮化合物、碳水化合物、类黄酮、脂肪酸、氨基酸、蛋白质、糖蛋白、酶、糖和相关化合物、非大麻素酚、单醇、醛、酮、酸、酯、内酯、类固醇、萜烯、植物甾醇如菜油甾醇、麦角固醇、E-谷甾醇和豆甾醇、维生素如维生素A和维生素K、色素如胡萝卜素和叶黄素、元素如Na、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn和Hg以及其任何组合。
[0178] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述分析物衍生自：人体、动物体、植物提取、合成的以及其任何组合。
[0179] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述HTS选自：微升板、自动菌落选择器、uHTS或超高通量筛选、用于HTS药物发现的3D肿瘤球体分析方法、Celigo成像仪、自动化系统、用于存储存储容量和高速通路的存储测定板的旋转系统、集成机器人系统、读数或检测、数据收集过程以及其任何组合。
[0180] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，与单独使用的传统抗肿瘤或抗炎症疗法分别相比，所述分析物相对于所述对细胞有可测量效果具有协同效应。
[0181] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，与单独使用的传统抗肿瘤或抗炎症疗法分别相比，所述分析物提供了与抗肿瘤或抗炎症相反的指示作用。
[0182] 进一步地，在本申请的范围中，公开了一种用于鉴定对细胞有可测量效果的分析物的高通量筛选(HTS)的系统。所述系统包括：(A)提供包括多个细胞样品的阵列；(b)提供至少一种待测的分析物；以及(c)检测指示所述对细胞的可测量效果的信号的方式，其中，对所述细胞样品测得的、相对于对照样品的、所述信号随时间的变化，表示所述分析物对所述细胞样品的可测量效果。
[0183] 进一步地，在本申请的范围中，提供一种非临时计算机可读介质，包括指令，所述指令由一部或多部计算机执行，引起一部或多部计算机通过处理涉及指示所述对细胞的可测量效果的信号的数据而呈现对预选细胞样品的一种或多种分析物的对细胞的可测量效果的相关数据，所述数据关于对预选细胞样品的一种或多种分析物的对细胞的可测量作用，通过处理数据，所述数据有关指示所述对细胞的可测量作用的信号，其中，对所述细胞样品测得的、相对于对照样品的、所述信号随时间的变化，表示所述分析物对所述细胞样品的可测量效果。
[0184] 进一步地，在本申请的范围中，提供一种组合物，包括有效治疗量的，或一种提取物，所述提取物包括基本有效治疗量的根据上述任一方法所述的方法选取的分析物，其中，所述组合物在治疗一种癌症类型或炎性疾病的使用中具有抗肿瘤或抗炎症活性或协同效用。
[0185] 进一步地，在本申请的范围中，提供一种鉴定一种或多种源自大麻的基因标志物的方法，其中，所述一种或多种源自大麻的基因标志物与上述任一项所限定的方法指示的对细胞的可测量效果相关，所述方法包括把所述信号与大麻DNA序列数据关联的额外步骤。
[0186] 进一步地，在本申请的范围中，公开一种或多种源自大麻的基因标志物，其中，所述一种或多种源自大麻的基因标志物与上述任一项所限定的方法指示的对细胞的可测量效果相关，且其中，所述信号与大麻DNA序列数据关联。
[0187] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一基因标志物，其中，所述一种或多种基因标志物选自：基因座的变异、突变或改变、单核苷酸多态性(SNP)、小卫星、RFLP(限制性片段长度多态性)、SSLP(简单序列长度多态性)、AFLP(扩增片段长度多态性)、RAPD(多态性随机扩增)、VNTR(可变数串联扩增)、SSR(简单序列重复)、微序列多态性、STR(短串联重复)、SFP(单特征多态性)、DArT(多态阵列技术)、RAD标志物(限制位点相关DNA标志物)、核苷酸变化、得失位、缺少、复制、反转和/或插入以及其任何组合。
[0188] 进一步地，在本申请的范围中，提供一个分析物的数据库，所述数据库包括关于所述分析物的数据，所述数据与由执行上述任一步骤限定的对细胞的可测量效果相关。
[0189] 进一步地，在本申请的范围中，提供用于鉴定分析物的高通量筛选(HTS)方法，所述分析物选自：大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合，所述分析物指示体外细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性。所述方法包括以下步骤：(a)提供包括多个癌细胞样品的阵列；(b)提供待测的所述分析物,所述分析物选自大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合；(c)使所述癌细胞样品与所述分析物接触；以及(d)检测信号，所述信号指示所述体外细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性，其中，所述癌细胞样品相对于对照样品测得的所述信号随时间的变化，是所述分析物对所述癌细胞样品的体外的所述细胞毒性或抗增殖或抗有丝分裂或细胞生长抑制活性的指示。
[0190] 进一步地，在本申请的范围中，提供用于鉴定分析物的高通量筛选(HTS)方法，所述分析物选自：大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合，所述分析物指示抗肿瘤活性，所述方法包括上述任一项所限定的方法，且额外地包括步骤：(a)将从所述癌细胞样品分离得的癌细胞异种物移植到实验动物中；(b)用所述分析物处理所述实验动物，所述分析物选自：大麻提取物或其组分、大麻素型成分、非大麻素型成分以及其任何组合，由上述任一项所限定的方法鉴定；以及(c)监测所述实验动物的肿瘤生长。
[0191] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一项所限定的方法，其中，所述实验动物为裸鼠。
[0192] 进一步地，在本申请的范围中，提供一种可用于鉴定植物分析物的方案，所述分析物对细胞的可测量效果与疾病关联。前述方案包括以下步骤：(a)提供输入数据，所述数据包括选自以下的数据：所述分析物的参数、所述细胞的参数、鉴定具有如权利要求1指示的对细胞的可测量效果的分析物的高通量筛选(HTS)结果数据、临床或临床前数据以及其任何组合；(b)处理所述数据；以及(c)在电子显示屏上呈现输出数据，所述数据关于所述分析物与疾病有关的对细胞的可测量效果以及其任意组合。
[0193] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述数据处理包括选自以下的步骤：关联、归一化、校准、因式分解、计算、统计分析以及其任何组合。
[0194] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述分析物参数选自：分析物来源、分析物处理以及其任何组合。
[0195] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述植物分析物来源参数选自：源株、源基因型、源表型、源生长条件、源收获条件、源营养、来源部分或来源器官以及其任何组合。
[0196] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述来源部分或来源器官选自：根、茎、叶、花、种子以及其任何组合。
[0197] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述植物分析物处理参数选自：固化、干燥、提取过程、脱羧以及其任何组合。
[0198] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述提取过程选自：丁烷、CO2梯度、乙醇、干冰以及其任何组合。
[0199] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述细胞参数选自：细胞来源、细胞处理以及其任何组合。
[0200] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述细胞来源选自：活检、细胞系、异种移植物、突变的细胞或分子以及其任何组合。
[0201] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述细胞处理选自：细胞培养基处理、血清处理、细胞稀释、细胞周期阶段以及其任何组合。
[0202] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述对细胞的可测量效果选自：增殖、凋亡、迁移、再生、分化、血管生成以及其任何组合。
[0203] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述临床或临床前数据选自：所述分析物对受试者的给药途径、剂量、释放形式、癌症标志物水平、肿瘤尺寸监测、转移监测、存活、根据一种或多种量表测量的生活质量以及其任何组合。
[0204] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述给药途径选自：舌下、口服、静脉内、外用、皮下以及其任何组合。
[0205] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述释放形式选自：缓慢释放、控制释放、持续释放、瞬时或快速释放以及其任何组合。
[0206] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，所述癌细胞标志物选自：ALK基因、甲胎蛋白(AFP)、β-2-微球蛋白(B2M)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、BCR-ABL融合基因、BRAF突变V600E、CA15-3/CA27.29、CA19-9、CA-125、降钙素、癌胚抗原(CE A)、CD20、嗜铬粒蛋白A(CgA)、染色体3、7、17和9p21、细胞角蛋白片段21-1、EGFR突变、雌激素受体(ER)/孕酮受体(PR)、纤维蛋白/纤维蛋白原、HE4、HER2/neu、免疫球蛋白、KIT、KRAS突变、乳酸脱氢酶、核基质蛋白22、前列腺特异性抗原(PSA)、甲状腺球蛋白、尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、5-蛋白标记(Oval)、21-基因签名(Oncotype DX)、
70-基因签名(Mammaprint)及其任何组合。
[0207] 进一步地，在本申请的范围中，公开上述任一方案，其中，评估生活质量的所述一种或多种量表选自：痛苦量表、生活质量表、癌症治疗的功能评估量表以及其任何组合。
[0208] 为了理解本发明，以及认识如何在实际中实施，以下描述了若干实施例，以下实施例仅作参考，不具有限制性。
[0209] 实施例1
[0210] 大麻提取方案
[0211] 将六种陈旧大麻株系(即CNB1、CNB2、CNB3、CNB4、CNB6、CNB8)的干花浸泡在丁烷中，并以树脂
净化以排除浓缩油中的丁烷残留物。
[0212] 使用HPLC评估10种大麻素(即CBDA、CBGA、CBG、CBD、THCV、CBN、THCA、A9THC、A8THC和CBC)在提取物中的浓度(见图1)。
[0213] 为了制备细胞系的原料，将大麻提取物溶于DMSO(例如约50mg/ml)中并保持在-20℃直到使用。
[0214] 实施例2
[0215] 制备细胞系的方案
[0216] 现在参考用于本发明的细胞培养物的非限制性实例：
[0217] 人癌细胞系的实施例
[0218] ·MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞
[0219] U87MG和U118MG胶质母细胞瘤细胞
[0220] ·PC3前列腺癌细胞
[0221] ·HT29和SW480结肠癌细胞
[0222] ·AGS胃腺癌细胞
[0223] ·MiaPaCa2胰腺癌细胞
[0224] ·人癌细胞系的实施例(对照组)：
[0225] ·稳定的非肿瘤细胞系HDF(人真皮
成纤维细胞)
[0226] ·HaCat(人角质形成细胞)
[0227] 现在参考生长细胞系的方案：
[0228] 细胞系保持在含有5％CO 2的37℃的潮湿气氛中。
[0229] 除了PC3和SW480之外，所有细胞系常规生长在含酚红的最小必需培养基(DMEM)(Sigma)中。PC3和SW480在含有RPMI-1640(Sigma)的酚红中生长。
[0230] 培养基补充有10％胎
牛血清(FBS)，100U/mL青霉素，100μg/mL
链霉素和100mM L-谷氨酰胺。
[0231] 现在参考细胞活性研究：
[0232] 在暴露前三天收集细胞并接种(约50,000-200,000细胞/孔)到24孔微板中。在含有0.5％FBS的各自培养基中更换培养基，并将载体(DMSO)或大麻提取物(1-10μg/ml)加入培养基中培养24-48小时，一式两份。
[0233] 使用高含量筛选分析测定大麻素化合物对细胞活性的效果。例如，通过区分：活细胞与坏死细胞，早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞，来分析同一孔中细胞亚群的分化。
[0234] 用ImageXpress micro(参见图2)对细胞进行成像，并使用MetaXpress和Cell Cycle模
块进行分析。
[0235] 现在参考用于筛选大麻提取物对测试细胞系的效果的探针的非限制性实例：
[0236] 在预定的培养期之后，用含有荧光探针的PBS替换细胞系培养基，其中包括以下至少一种：
[0237] ·Hoechst 33342，一种紫外激发蓝色荧光探针，使凋亡细胞的浓缩染色质染色，并使活细胞的正常染色质微弱染色。
[0238] ·YO-PRO-1，能够进入凋亡细胞的绿色
荧光染料。
[0239] ·碘化丙啶(PI)，不能进入凋亡细胞的红色荧光染料。
[0240] 应注意，同时使用这三种染料产生的染色图案使得可以通过流式细胞仪或荧光显微镜区分正常细胞、凋亡细胞群和死细胞群。
[0241] 参照图3，其展示了细胞图像，并用MetaXpress和the Cell Health module进行分析。图3A中，展示了三种不同Hoechst 33342(蓝色)、YO-PRO-1(绿色)和PI(红色)的滤波成像图像。图3B为Cell Health module根据荧光标志物的强度对细胞进行分割而成的分化细胞亚群：活细胞(绿色)、早期凋亡细胞(蓝色)和晚期凋亡细胞(粉红色)重叠在透射光图像上。
[0242] 图3C为显示屏中每个孔中的晚期凋亡细胞的测量的例子。
[0243] 实施例3
[0244] 大麻提取物对癌细胞系的体外抗肿瘤活性
[0245] 目的：
[0246] 提供用于检测大麻素比例和剂量与抗肿瘤活性之间的关联性的高通量筛选(HTS)的稳健的方法和系统。该方法包括使用大麻基化合物或提取物的扩大种类范围筛选不断增长的人癌细胞系肿瘤细胞系和/或活检的文库。本发明证明，大麻提取物，其组分和化合物对不同肿瘤细胞系或不同组织系的生物活性的检测，产生了高度有效的治疗数据。在另一个方面中，HTS系统和方法应用于细胞系，用于筛选有效的大麻素或其他天然提取物，联合或不联合使用标准化疗。进一步地，在本申请的范围中，HTS系统和方法应用于源于患者的活检，根据患者的整体治疗，用于筛选与化疗联合的有效的大麻素或大麻素组合或其他天然提取物。
[0247] 实验结果：
[0248] 参考图4，展示了用选取的大麻提取物处理的不同癌细胞系与对照样品相比的图像。在本实验中，将20万细胞/孔AGS胃腺癌细胞、MDA-MB-231乳腺癌细胞和HaCat人角化细胞接种到24孔微板中，并用载体(DMSO)或两种不同菌株(即CNB3和CNB4)的大麻提取物(10μg/ml)处理。24小时后，使用ImageXpress micro对细胞进行成像。如图4所示，大麻提取物(即CNB3和CNB4)大大降低了癌细胞系，但不降低正常人角质形成细胞的细胞活性。该结果显示了大麻提取物的抗肿瘤活性的特异性及其在治疗癌细胞中的用途。进一步结果显示用载体(即DMSO)处理细胞系的对照组不效果细胞活性。
[0249] 参考图5，其展示了用选取的大麻提取物处理的不同癌细胞系与对照样品相比的图像。在本实验中，将PC3前列腺癌细胞接种到24孔微板中，并用载体(DMSO)或大麻提取物(10μg/ml)处理。24小时后，使用ImageXpress micro对细胞进行成像。图5的结果清楚展示了大麻提取物对PC3前列腺癌细胞的效果。在此图中，CNB1和CNB2提取物显示出对前列腺细胞系最有效的作用。
[0250] 参考图6，其展示了所选取的包括不同THC：CBD比例的大麻提取物处理胶质母细胞瘤的图像。在本实验中，将10,000个U87MG胶质母细胞瘤细胞接种到96孔微板中并用载体(DMSO)或大麻提取物处理。应当注意，提取物达到5μΜTHC。24小时后，使用ImageXpress micro对细胞进行成像。从结果可以看出，CBD使U87MG胶质母细胞瘤细胞活性降低。
[0251] 参考图7，其展示了五种不同大麻提取物对三种人癌细胞系类型的效果。更具体地说，在本实验中，将MCF-7、MDA-MB-231(乳腺癌)和PC3(前列腺癌)细胞接种在24孔微板中，并用载体(DMSO)处理作为对照，或用大麻提取物(10μg/ml)处理。处理24小时后，用Hoechst 33342染色细胞，使用ImageXpress micro进行成像，并使用MetaXpress进行分析。从结果可以看出，大麻提取物对癌细胞活性有很强的作用。结果进一步表明不同大麻提取物对各种癌症类型的细胞系测试的特异性。
[0252] 上述结果清楚地表明，本发明的系统和方法可用于筛选和选择对癌细胞有体外细胞毒性和对正常细胞有最小细胞毒性的大麻提取物或其组分。以这种方式筛选的大麻提取物或其组分可进一步研究其潜在的抗肿瘤活性。
[0253] 结果清楚地表明，本发明的HTS方法和系统可以区分大麻植物或其他植物提取物的潜在抗肿瘤作用。结果显示不同的菌株对不同的癌细胞系造成不同的凋亡作用，而对正常细胞没有效果。
[0254] 明显地，上述潜在的抗肿瘤提取物可以用作新型抗癌组合物和疗法的
基础。这些组合物在以下方面提供了对目前癌症治疗的显著进步：
[0255] ·本发明提供了对特定肿瘤具有强效作用的大麻菌株、大麻素比例和/或植物基因的数据。
[0256] ·它们可以在不同疾病阶段、进行化疗或不化疗的情况下，作为治疗方案的一部分施用于患者。
[0257] ·由于大麻提取物是纯天然的，因此施用于患者而无需调节程序。
[0258] ·除其他程序之外，来自患者的活检可以以所述相同程序进行扫描，并用作个性化医疗制度的重要组成部分。
[0259] ·有效大麻素比例的提供可用于开发在联合或不联合使用传统抗肿瘤药物的情况下，治疗特定癌症类型的新植物的或合成的药物。
[0260] ·对细胞中活性化合物及其结合受体的分析，可以揭示生物机制。
[0261] 实施例4
[0262] 评估大麻提取物对肿瘤异种移植物的抗肿瘤活性
[0263] 在本例中，在特定化合物或分析物(如大麻提取物，见实施例3)处理下，显示对细胞的体外可测量效果，例如凋亡和/或坏死作用的癌细胞系，被移植到实验动物中，如小鼠。然后，移植后的小鼠在有或没有化疗处理的情况下，用
选定分析物(例如，提取物或化合物或化合物组合)处理，作为更好地评价所选分析物在人类中对癌症的作用的手段。
[0264] 现在参考异种移植肿瘤测定示例性方案(Mt|3/4s:/ww整体并入本文)。应当注意，该方案的改进内容也在本发明的范围之内。
[0265] 1)确定注射细胞的数量(即5*106)以确定需要胰蛋白酶消化的板的数量(通常100mm2的100％汇合的板可以得到至少两次5*106细胞/注射量的注射量)
[0266] 2)同时胰蛋白酶消化所有待计数的板
[0267] 3)以50ml锥形管收集脱壁细胞，并在800rpm下旋转4分钟
[0268] 4)弃去上清液，重悬于25ml SFM中进行计数
[0269] 5)取100μl试样分别装入3个独立的eppendorf离心管中，向每个100μl中加入400uSFM以1:5稀释，混合均匀
[0270] 6)取50μl的1：5稀释液进行计数，三种稀释液各计数一次，取该三次结果的平均值[0271] 7)通过下列公式确定细胞浓度(细胞/ml)：
[0272] 平均计数*10,000*稀释因子(5)＝细胞个数/ml
[0273] 8)为了确定达到每注射体积的最终细胞浓度(即5*10+细胞/100μl注射量)需要加入的体积，首先要确定25ml悬液的细胞总数，即细胞个数/ml*25＝总细胞数。然后使用下列公式
[0274] 总细胞个数/x体积＝5*106/100μl，解得x＝达到期望最终浓度(即5*106细胞/100μl)的重悬细胞沉淀所需的体积
[0275] 9)在800rpm下旋转50ml锥形管4分钟
[0276] 10)弃去上清液，并将沉淀重悬在步骤#8中预先确定的体积中。
[0277] 11)在进入动物设施前，于组织培养罩中，用1ml
注射器吸取每小鼠的注射量把包括100μl的注射器放置在冰上(该步骤降低了重悬细胞再沉降而改变细胞浓度的几率)。
[0278] 12)注射前用异氟烷麻醉每只小鼠。注意不要过度麻醉，因为小鼠会死于呼吸抑制。小鼠恰好开始停止运动时则用量为正好，将它们移出麻醉源，然后让它们呼吸纯净空气数秒，在注射时，令其鼻子恰靠近50ml锥形管开口。
[0279] 13)注射
[0280] 参考图8，其展示了选定大麻提取物对PC3前列腺癌细胞的效果。在本实验中，在第一价段，将PC3前列腺癌细胞接种到24孔微板中，并用载体(DMSO)或选定大麻提取物(10μg/ml)处理。24小时后，使用ImageXpress micro对细胞进行成像。在下个阶段，将PC3细胞移植到裸鼠中，用于构建异种移植物。移植后的裸鼠用选定大麻提取物处理(例如，CNB1、CNB2、CNB3和CNB4)。从图8可看出，CNB1处理后的裸鼠肿瘤尺寸减小，而CNB4处理对肿瘤无效果。
[0281] 实施例5
[0282] 鉴定选定大麻提取物或其组分的抗肿瘤活性的方案
[0283] 参考图9，其展示了鉴定植物分析物的方案，所述分析物对细胞的可测量效果与疾病关联。在此图中，对植物提取物(F)的生物活性相对于细胞系(M)和/或活检(L)的生物活性进行筛选。从所有过程水平和参数获得的数据，包括有关分析物参数的数据(A，B)，测试细胞的数据，高通量筛选(HTS)得到的用于鉴定细胞(C、E)有可测量效果的分析物的临床或临床前数据(D)，以及其任何组合由大数据算法(N)进行处理和组织。对有益提取物进行分析，活性化合物列为新的IND(H)或直接作为自然疗法(I)施予病人。案例研究和临床试验的数据(J，K)建立了不断增长的对特定疾病或癌症或突变具有靶向性的提取物和植物分析物库。
[0284] 参考表1，其给出了本发明中用于评价所选植物提取物或分析物的抗肿瘤活性的部分参数。
[0285] 图1：评价所选植物提取物或分析物的抗肿瘤活性的部分参数
[0286]
[0287] 实施例6
[0288] 现在参考可在本发明中用于评估所选择的植物提取物或任何其它分析物的抗肿瘤活性的癌症标志物的非限制性实例。
[0289] ALK基因重排
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跟踪治疗反应；评估生殖细胞肿瘤的阶段，预后和反应。
[0297] β-2-微球蛋白(B2M)
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[0301] β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)
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[0317] CA19-9
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