发明背景技术

肿瘤坏死α因子(“TNF-α”)这个细胞因子有很大范围的生 物活性。TNF-α是由活化的巨噬细胞和其他细胞所产生的，包 括抗原激活的T细胞，激活的肥大细胞和激活的原始扼杀细胞。 TNF-α最初是作为一种约为25kD的转膜蛋白而产生的，这个转 膜蛋白的一个17kD的片段从细胞膜上被蛋白水解下来，然后以 一个同源三聚体的形式存在，分子量为51Kd。TNF-α介导的过 程继续通过同源三聚体蛋白和靶细胞表面的受体蛋白的相互作 用完成。

TNF-α在生物体针对感染的协调反应中扮演了一个重要的角 色，作为炎症的一个重要的传递因子而发挥作用。例如，TNF- α在T细胞产生的干扰素-γ和发烧的诱因中已经被显示。TNF- α诱导增长内皮细胞的白血球凝固值，导致了在感染部位的白血 球的积累。TNF-α在诱导产生白细胞介素1和前列腺素的巨噬 细胞中也被显示，这包括在母体的细胞外的障碍中，包含了滑 膜瘤骨胶原酶，和骨骼中经过活化的破骨细胞回吸作用。

TNF-α对生长型和转移型的潜在肿瘤有明显的作用。例如， 人类的肿瘤细胞系在体外对TNF-α非常敏感，TNF-α的活化可 以比巨噬细胞优先杀死肿瘤细胞。

高水平的TNF-α通常于慢性的免疫性或者炎症性的疾病相 关，并被认为是神经的或者细胞恶化的一个诱导因子。然而， 在低水平时，TNF-α在细胞生命循环，细胞对外来刺激的反应， 内环境稳定的维持中扮演了一个重要的角色。因为这个原因， 应该理解的是，本发明的目的并不是完全的或者绝对的抑制 TNF-α，而是调节细胞反应的TNF-α的水平，治疗TNF-α介导 的疾病，并许可对慢性的免疫性的或者炎症性的疾病进行有效 的治疗，在这些疾病中，TNF-α被过量的产生。

TNF-α的产生已经见于各种各样的疾病症状中，包括，但并 不仅仅局限于下列疾病：浓度性休克、内毒素性休克、由细菌 感染引起的恶病质并发综合症、例如：顿挫性结核和脑膜炎； 病毒性感染，例如AIDS(人类免疫缺陷病毒)；寄生虫感染， 例如，疾；瘤形成疾病；自体/自身免疫性疾病，包括一些形式 的关节炎，特别是类风湿性关节炎和退化性的；相反的作用铰 链于治疗移植物感染。因此，需要有一种试剂能打断或者调制 TNF-α过程。

发明的概述

本发明提供了可以调制肿瘤坏死α因子(TNF-α)信号的化 合物，也提供了使用它来对患有TNF-α介导的疾病的病人进行 治疗的方法。

在一个具体的实施方案中，本发明提供下述分子式(I)的化 合物

在分子式(I)中，R1是H或者NH2；R2和R3各自分别独立的 是-H或者-OH，取代的或者未取代的烷基，取代的或者未取代 的烷氧基；R4是-H或者是取代的或者未取代的烷基；X是O， S，CH2或者SO2；V、W、Z各自分别独立的是N或者CH；Y 是取代的或者未取代的苯基，或者是取代的或者未取代的杂环 基；n的值为0、1或者2。

在另一个具体的实施方案中，本发明提供下述分子式(III)的 化合物

在分子式(II)中，R5是取代的或者未取代的芳烷基、取代的 或者未取代的环烷基、或者是取代的或者未取代的环烷基烷基； R6是-H或者是-NR13R14；R7是取代的或者未取代的苯基；R13、 R14各自分别独立的是-H、或者是取代的或者未取代的烷基，或 者是取代的或者未取代的环烷基，取代的或者未取代的芳香基， 取代的或者未取代的芳烷基，或者R13和R14一起同N形成杂环 烷基。

本发明进一步相关于分子式为(III)的化合物

在分子式(III)中，R8和R12各自分别独立的是-H，取代的或 者未取代的烷基，取代的或者未取代的芳香基，取代的或者未 取代的芳烷基，取代的或者未取代的异芳烷基；R9是-H，取代 的或者未取代的芳香基，取代的或者未取代的芳烷基，取代的 或者未取代的异芳香基，取代的或者未取代的异芳烷基；R10是 取代的或者未取代的烷基，取代的或者未取代的芳香基，取代 的或者未取代的异芳烷基，取代的或者未取代的异环烷基烯丙 基；R11是取代的或者未取代的烷基，取代的或者未取代的芳香 基，取代的或者未取代的芳烷基，取代的或者未取代的环烷基 烷基，取代的或者未取代的异芳香基，取代的或者未取代的异 芳烷基，取代的或者未取代的苯并苯基，或者是取代的或者未 取代的环烷基烯丙基。

在其他一些具体的实施方案中，本发明相关于在病人中对 肿瘤坏死α因子(TNF-α)介导的疾病的治疗方法。该方法包含 对病人进行使用有效剂量的、上面所定义的分子式(I)、分子式 (II)、分子式(III)的化合物中的至少一种进行治疗。 本发明内容的详细描述

本发明相关于对肿瘤坏死α因子(TNF-α)信号有拮抗作用 的化合物，这些化合物是对TNF-α介导的状态、失控、疾病有 治疗作用的试剂，例如，慢性炎症、组织障碍和癌症。

就本发明而言，术语“烷基”是指包括直链结构的或者支 链结构的氢和二价碳基的基团。优选的烷基基团包括C1-C12的 烷基基团，更优选的烷基基团包括C1-C6的烷基基团。术语“环 烷基”是指包括单、双或者多环烷基基团，优选的环烷基基团 包括单环C3-C8的环烷基基团。术语“烷氧基”是指包括一个烷 基-O基团或者一个环烷基-O基团，其中优选的烷基基团和环烷 基基团如上面已经给出的那样所定义。术语“芳香醚”是指包 括一个-O-芳香基或者-O-异芳香基的。术语“烯基”是指包括直 链的或者支链的的氢和二价碳基的基团，这些基团包括有一个 或者更多个双键。优选的烯基基团包括C2-C12的烯基基团。术 语“环烯基”是指包括环氢和二价碳基的基团，这些基团包含 一个或者更多个双键，但是不是芳香族。优选的环烯基基团包 括C5-C8的环烯基基团。

术语“芳香基”是指包括芳香族碳环基团，例如，苯基、 萘基，或者是与含有5到6个碳原子的饱和的、部分未饱和的 碳环或者芳香环融合的苯基或者萘基。

术语“杂环”和“杂环基团”是指含有饱和环的、芳香环的 或者部分未饱和环的体系。这一体系至少包括一种杂原子，例 如一个或者多个氧原子、氮原子、硫原子或者它们的组合。

术语“杂环烷基”是指饱和的杂环基团，例如哌啶基，吡 咯基，四氢呋喃基和吗啡基。

术语“杂芳基”是指含有芳香族杂环基团的化合物。典型 的“杂芳基”化合物包括，吡啶基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉 基、吡咯基、喹喔啉基、咪唑基、唑基、异唑基、吡唑基、噻 吩基、呋喃基、噻重氮基、氧重氮基、吲哚基、噻唑基、异噻 唑基和四唑基，但不仅限于这些。除此之外，“异芳基”基团还 包括芳香环、非芳香环或者杂环与其他的杂环化合物相融合形 成的化合物。例如，苯并噻吩、苯并咪唑、苯并唑、苯并噻唑、 苯并噻二唑、苯并二唑、吲哚、四氢吲哚基、吖吲哚、吲哚、 喹啉、咪唑并嘌呤、丁二烯[2，3d]嘧啶、吡唑[3，4d]嘧啶。但不 仅限于这些。

术语“芳烷基”是指被一个或者多个芳基取代后的烷基基 团。对于一个被取代的芳烷基来说，其取代基位置可以位于其 芳基部分，也可以位于其烷基部分上。较好的芳烷基基团包括 苯甲基、二苯基甲基和2-苯乙基基团，术语“异芳烷基”是指一 个烷基被一个异芳基或者被一个异芳基和一个或者多个芳基所 取代后的化合物。对于一个被取代的异芳烷基来说，其取代基 的位置可以在其杂环芳基部分上，也可以在其烷基部分上。最 好的异芳基基团是被异芳基所取代的烷基基团。

术语“环烷基烷基”是指一个烷基基团被一个环烷基基团 所取代后的化合物。

术语“杂环烷基烷基”是指烷基基团被杂环烷基所取代后 的化合物。

烷基、环烷基、链烯基、环链烯基，芳烷基中的烷基部分， 杂烷基中的烷基部分，环烷基烷基，以及环氧基，都可以被取 代或者不被被取代。这种类型的取代基团可以包括一个或者多 个取代基，它们分别在以下物质中挑选出来的，例如氟、氯、 溴、碘；烷基、例如C1-C6-烷基；硝基；羟基；-NR13R14化合物， 其中R13和R14如上面所定义。-C(O)R15，其中R15为氢，烷基， 芳基，或者芳烷基；氰基；芳基基团；环烷基基团和杂环基团 如杂芳基等。

芳基、杂环基团如杂芳基，芳族醚，芳烷基中的芳基部分， 杂芳烷基的芳基部分，杂环烷基烷基和苯甲酮可以被取代或者 未取代。适宜的取代基团包括一个或者多个取代基，它们是分 别在以下物质中挑选出来的，卤素例如氟、氯、溴、碘；烷基， 最好是C1-C3-烷基；卤代烷基，最好是卤代C1-C3-烷基；烷氧基， 最好是C1-C3-烷氧基；芳族醚；被芳族醚取代的烷基；被羟基 取代的烷基；烷氧基取代的芳族醚；-S-(烷基)；氰基；叠氮化 物；硝基；-C(O)R15；-NR13R14；-C(O)-NR13R14；C(O)OR16，其 中R16为氢、烷基、芳基、或者芳烷基；苯基；4-(4-苯哌嗪-1- 基)甲基；4-4-(2-氟苯基)哌嗪-1-基)甲基；卤代芳基；二氧亚甲 基；芳基；杂芳烷基；杂环烷基烷基和象杂芳基这样的杂环化 合物。

在一个实施方案中，本发明提供了如下述结构式I的化合 物，

在结构式I中，R1是H或者NH2；R2和R3各自分别是-H， -OH，被或者未被取代的烷基，被或者未被取代的烷氧基；R4 为-H，被或者未被取代的烷基；X为O，S，CH2，或者SO2；V， W和Z各自分别为N或者CH；Y为被或者未被取代的苯或者 被或者未被取代的杂环化合物；n为0，1或者2。

在一个实施方案中，Y为含有一个或者多个取代基的苯基， 这些取代基各自选自卤素，直链或者带支链的C1-C4-烷氧基， 三氟甲氧基，二氧亚甲基，羟烷基，三氟甲基，HC(O)-，直链 或者带支链的C1-C4-烷基，杂环基和被取代或者未被取代的异 环烷基烷基。Y上的最适宜的取代基包括氟，氯，甲氧基，吗 啡基，N-吗啡代甲基，四氢异喹啉基，四氢异喹啉甲基，4-(4- 苯甲基-哌嗪-1-基)甲基，4-(4-(2-氟-苯基)哌嗪-1-基)甲基和异丙 基。Y可以是杂环基团，例如，吡啶基、呋喃基、吡咯烷基。

结构式(I)中，R1-R4，V，W，X，Z和n都如上面已经定义 的那样，Y可以用下面的结构式来表示。

其中R50和R51分别为烷基，被取代的烷基，芳基，被取代 的芳基，或者通过与它们各自结合的氮原子而聚合在一起的被 或者未被取代的杂环烷基，被取代的杂芳基或者未被取代的杂 芳基。R50和R51最好是通过与它们各自结合的氮原子而连在一 起，N-取代的哌嗪基团，其中取代基团为芳基，或者被取代的 芳基，或者-CH2-芳基基团或者-CH2-(被取代的芳基)，更优选的 是苯基，被取代的苯基，苯甲基，被取代的苯甲基。在优选的 实施方案中，R1和R4为-H，R2-R3为甲基，V和Z分别为-CH-， W为-N-，X为-O-，n为0。通过与自身所结合的氮原子作用而 连在一起的，由R50和R51形成的杂环烷基或者杂芳基的适宜的 取代基，是下面将描述的杂环化合物。

在另一实施方案中，本发明提供了下述结构式II的化合物，

其中R5为被或者未被取代的芳烷基，被或者未被取代的环 烷基，被或者未被取代的环烷基烷基；R6为-H或者-NR13R14；R7 为被或者未被取代的苯基；R13和R14分别为-H，被或者未被取 代的烷基，被或者未被取代的环烷基，被或者未被取代的芳基， 被或者未被取代的芳烷基，或者由R13和R14通过与它们结合的 氮原子在一起形成的异环烷基。

在一个实施方案中，R5为被或者未被取代的苯甲基，苯甲 基上的适宜的取代基包括卤素原子和直链或者支链的C1-C4-烷 氧基。R5最好是未被取代的苯甲基，或者苯甲基带有一个或者 多个从氯和甲氧基中挑选的取代基。另一实施方案中，R5为C3- C8-环烷基，C3-C8-环烷基-C1-C4-烷基，或者是被或者未被取代 的苯-C2-C4-烷基。例如，R5可以是2-苯乙基，环己基或者环戊 基乙基。

R7最好是带有一个或者多个以下取代基的苯基，取代基为 卤素，直链C1-C6-烷基，支链C1-C6-烷基，环C3-C6-烷基或者三 氟甲基。更优选的R7为带有一个或者多个以下取代基的苯基， 这些取代基是：氟，氯，直链C1-C4-烷基或者带支链的C1-C4-烷 基。

本发明进一步涉及下述结构式III的化合物，

其中，R8和R12分别为-H，被或者未被取代的烷基，被或者 未被取代的芳基，被或者未被取代的芳烷基，被或者未被取代 的异芳烷基；R9为-H，被或者未被取代的芳基，被或者未被取 代的芳烷基，被或者未被取代的异芳基，被或者未被取代的异 芳烷基；R10为被或者未被取代的烷基，被或者未被取代的芳基， 被或者未被取代的异芳烷基，被或者未被取代的异环烷基烷基； R11为被或者未被取代的烷基，被或者未被取代的芳基，被或者 未被取代的芳烷基，被或者未被取代的环烷基烷基，被或者未 被取代的异芳基，被或者未被取代的异芳烷基，被或者未被取 代的苯甲酮或者被或者未被取代的异环烷基烷基。

在更优选的实施方案中，R8和R12中的一个为-H，另一个为 被或者未被取代的苯基、苯基-C1-C4-烷基，二苯基-C1-C4-烷基， 直链C1-C12-烷基，支链C1-C12-烷基，环C3-C12-烷基或者双环烷 基-C1-C4-烷基。适宜R8和R12的苯基的取代基的例子包括一个 或者多个下列基团：烷氧基，如C1-C4-烷氧基，最好是甲氧基； 烷基，如C1-C4-烷基，最好是甲基和乙基；氰。适宜的R8和R12 包括但不限于2，2-二苯乙基，2-(4-乙基苯基)乙基，苯甲基，二 苯基甲基，1，2-二苯基乙基，3，3-二苯基丙基，3，4，5-三甲氧基苯 基，2，4，4-三甲基异戊基，2-(4-甲氧基苯基)乙基，2-环戊基-2-苯 乙基，或者2-苯基-2嘧啶乙基。

R9最好是被或者未被取代的苯基，被或者未被取代的苯基- C1-C4-烷基，二苯基-C1-C4-烷基，苯呋喃基或者异芳基-C1-C4-烷 基。被取代的苯基或者被取代的苯基-C1-C4-烷基上的适宜的取 代基包括一个或者多个选自下组的基团：氰；烷基，如C1-C4- 烷基，最好是甲基；烷氧基，如C1-C4-烷氧基，最好是甲氧基； C1-C4-烷基-S-；卤素，最好是氯或者氟；卤化的C1-C4-烷基，最 好是三氟甲基；以及苯氧基。苯氧基的取代物也可以被象上面 描述过的一个烷基或者烷氧基取代。适宜的R9包括但不限于苯 基，2-苯氰，3-苯氰，4-苯氰，二苯基甲基，吡唑基甲基，2，4- 二甲基苯基，2-甲基苯基，3-甲基苯基，4-甲基苯基，2-甲基-4- 甲氧基苯基，3-甲基-4-甲氧基苯基，4-甲基苯硫基，3-苯氯基， 3-三氟甲基苯基，苯甲基，2-三氟甲基苯甲基，3-三氟甲基苯甲 基，2-氯苯甲基，4-氯苯甲基，2-甲氧基苯甲基，3-甲氧基苯甲 基，4-甲氧基苯甲基，2-氟苯甲基，3-氟苯甲基，4-氟苯甲基， 3-叠氮苯基，3-(4-甲氧基苯氧基)苯基，或者5-苯基呋喃-2-基。

在一个实施方案中，R10为被或者未被取代的苯基，被异芳 基基团取代的烷基，被异环烷基基团取代的烷基，或者被-NR13R14 取代的烷基，取代基团最好是N，N-二烷基胺。适宜的R10包括 但不限于2-(咪唑-4-基)乙基，3-(咪唑-4-基)丙基，3-(咪唑-1-基) 丙基，2-(3-甲基咪唑-4-基)乙基，2-(吗啉-4-基)乙基，2-(4-吡唑 基)乙基，4-吡唑基甲基，2-N，N-二甲基氨基乙基，3-二甲基氨 基丙基，和2-(氨基羰基)苯基。

R11最好是直链或者支链的C1-C4-烷基，被或者未被取代的 苯基，被或者未被取代的苯酚基，吡唑基，氨基吡唑基，被或 者未被取代的吲哚-C1-C4-烷基，苯硫基，喹喔啉，被或者未被 取代的苯基-C1-C4-烷基，吡啶基羰基苯基，苯基羰基-C1-C4-烷 基，萘基，萘基-C1-C4-烷基，二苯基-C1-C4-烷基，C5-C8-环烷 基-C1-C4-烷基，C1-C4-烷基羰基-C1-C4-烷基，芴基，吡咯基，N- 甲基吡咯基，吡啶基。苯环上适宜的取代基包括卤素，最好是 氟；呋喃基；苯硫基；苯基；苯甲基；苯氧基；烷基，如C1-C4- 烷基，最好是甲基；苯氧基烷基；C1-C4-烷基羰基；-C(O)-苯甲 基；以及烷氧基，如C1-C4-烷氧基，最好是甲氧基。苯酚环系 统上的适宜的取代基团包括烷氧基，如C1-C4-烷氧基，最好是 甲氧基；卤素，最好是氯；以及C1-C4-烷基基团。吲哚基-C1-C4- 烷基环上适宜的取代基包括卤素，最好是溴。苯基-C1-C4-烷基 中的C1-C4-烷基上适宜的取代基包括羟基基团。吲哚基-C1-C4- 烷基中的C1-C4-烷基上适宜的取代基包括羟基。适宜的R11包括 但不限于苯甲酮-2-基，4’-甲氧基苯甲酮-2-基，4’-氯代苯甲酮-2- 基，2-(呋喃-2-基)苯基，2-(噻吩-2-基)苯基，2-苯甲基苯基，2- 吡啶基羰基苯基，2-(苯氧基甲基)苯基，2-(t-丁基羰基)苯基，2，2- 二苯基乙基，1-芴基，(萘-2-基)甲基，萘-1-基，3-(苯基羰基)丙 基，4-苯基丁基，4-丁基苯基，2-(4-氯代苯基羰基)苯基，3-甲 氧基苯基，N-甲基吡咯基-2-基，2，3-二甲氧基苯基，3-丁基-2- 吡啶基，2-萘基甲基，2-环己基乙基，3-甲氧基苯基，N-甲基-2- 吡咯基，2-环戊基乙基，3-氧丁基，2-苯吡嗪基，喹喔啉-2-基， 3-吲哚基，(2-甲基吲哚-3-)甲基，3-(吲哚-3-基)丙基，(吲哚-3-基) 甲基，(5-溴吲哚-3-基)甲基，3-氯苯基，3-氨基吡唑基-4-基，2-(吲 哚-3-基)-1-羟基乙基，3-氟苯基，1-苯基-1-羟基甲基，2-苯基苯 基，2-苯氧基苯基，硫苯-2-基，以及异丙基。

结构式I、II、III的某些化合物可能含有一个或者多个手性 中心，并且有不同的旋光型。当结构式I的复化合物含有一个 手性中心时，化合物以两种光学异构体形式存在，本发明包括 了对映体及其混合物。对映体可以通过应用本领域技术人员所 熟知的工艺技术手段溶解掉，例如，通过可分离的非对映异构 体盐的形成来达到目的，例如结晶；也可以通过可分离的非对 映异构体衍生物或者复合体的形成来达到目的；选择性地让一 种对映体与对其为特异性的试剂反应，例如，酯化反应；或在 手性环境下应用气相-液相或者液相层析，例如在手性支持下， 例如被一个手性配合体束缚的硅或者在有一个手性溶剂的存在 下。应该理解的是，如果通过上述的分离方案的一种将想要的 对映体转化为另外的化合物，那么需要进一步步骤来释放想要 的对映体。另外，特异的对映体可以用旋光试剂，底物，催化 剂或者溶剂通过不对称合成的方式合成；也可以通过不对称转 化的方式将一种对映体转化为另一种从而得到特异的对映体。

当分子式I、II、III所代表的化合物含有多个手性中心时， 就会存在非对映异构体。非对应异构体能够用本领域技术人员 熟知的的方法进行分离，如层析法或者结晶法，每一对非对映 异构体中的单个的对映异构体也可用上述方法进行分离。本发 明包括结构式I、II、III的化合物的各种非对映异构体，及其 未被分离的混合物。

分子式I、II、III所代表的某种特定的化合物可能存在于 不同的互变异构体形式，或者不同的几何异构体中，本发明包 括化合物I、II、III中每一种互变异构体和/或几何异构体及 其混合物。

分子式I、II、III所代表的某种特定的化合物可能存在于 不同的某种稳定的单独构象中。不对称扭转是由于单个不对称 位点的有限翻转，如由于原子的空间排列位阻或者环的张力， 这种不对称扭转可能会使不同的对应异构体分离。本发明包括 化合物I、II、III中每一种构象异构体及其异构体的混合物。

分子式I、II、III所代表的某种特定的化合物可能以两性 离子的形式存在，本发明包括I、II、III每一种两性离子形式 的化合物及其混合物。

本发明进一步关系到分子式I、II、III所代表的化合物在 药理学上的可接受盐，术语“药理学上的可接受盐”包括的这 样一种盐，这种盐能够保持游离碱基的生物效力和性质，这种 盐能够通过与无机酸或者有机酸的反应获得，如盐酸，氢溴酸， 硫酸，硝酸，磷酸，有机硫酸，有机羧酸，有机磷酸，例如：甲 基硫酰酸，乙基硫酰酸，水杨酸，乳酸，酒石酸等等。

分子式I、II、III的化合物是TNF-α其与受体结合后的信 号作用的调节子。在优选的实施方案中，本发明的化合物能够 阻断信号传递。在不受理论限制的情况下，一般认为这些化合 物干扰了包括TNF-α在内的一步或者几步的信号传递。这样， 这些化合物就成为医药上有效的治疗剂，针对的是包括TNF-α 在内的一种或者多种信号在其中发挥作用的疾病，例如包括产 生过多TNF-α的情况。当选则不同的物质来代替化合物I、II、 III时，本领域普通技术人员能利用可利用的信息来选择能代替 化合物I、II、III的物质并保证达到预期的治疗效果。这种化 合物可以给有TNF-α介导的疾病的病人用药，例如：阻止疾病 的发生，抑制病情的进一步扩展，改善相关的病情。

这样，在一个具体实施方案中，本发明相关于治疗有肿瘤 坏死α因子(TNF-α)介导的疾病的病人的方法。这种方法包括 给病人用具有治疗有效剂量的至少一种如上所述的结构式I、 II、III的化合物，病体可以是遭受肿瘤坏死α因子(TNF-α) 感染的或者被认为易受其感染的人或者任何动物。病体最好是 驯养的家禽，如：鸡；或者是哺乳动物如牛，猪，犬，猫，马。 更优选的，还是人。

术语“肿瘤坏死α因子(TNF-α)介导的疾病”通常包括慢性 或者急性疾病或者病理状态以及一些我们所不期望的生理状 态，无论这些状态是在发生，发展，还是维持，但是，它们都 有包括肿瘤坏死α因子(TNF-α)在内的信号通路发挥作用。

以下是肿瘤坏死α因子(TNF-α)介导的疾病的例子，但不 仅限于此：

(A)急性，慢性免疫和自身免疫病理过程，比如全身性红斑 狼疮(SLE)，风湿性关节炎，甲状腺炎，移植物抗宿主病，硬皮病， 糖尿病，甲状腺机能亢进，以及其他相似疾病。

(B)感染，包括脓毒综合病症，循环系统崩溃，急性或者慢 性细菌性感染，急性或者慢性寄生虫感染，和/或者有传染性的 疾病，无论细菌，病毒，或者真菌性起源，例如HIV或者AIDS， 也包括恶病质症状，自体免疫紊乱，获得性免疫缺失综合症， 痴呆复合症。

(C)炎性疾病，例如慢性炎症病理，包括类肉状瘤病，慢性 肠炎疾病，溃疡性结肠炎和克罗恩氏病(节段性回肠炎)，脉管 炎症病理，例如，弥散性血管内阻塞，动脉硬化症，川崎病；

(D)神经退行性疾病，包括神经脱髓鞘疾病，例如多样硬化 和急性横向脊髓炎；锥体束外的和小脑紊乱，例如皮层系统损 伤；基底神经中枢或者小脑紊乱；运动机能亢奋性紊乱，例如 亨廷顿舞蹈病和老年性痴呆；药物诱导性行动紊乱，例如药物 引发的阻断CNS多巴胺受体；运动功能减退的行动紊乱，例如 帕金森氏症；进行性核上性(眼肌)麻痹；小脑及脊髓小脑运 动失调症，例如脊椎共济失调，弗里德赖希氏共济失调，小脑皮 质退行；多发性统性退行，例如Mencel综合症，Dejerine-Thomas 综合症，Shi-Drager综合症，和Machado-Joseph综合症；系统 性紊乱，例如雷弗素姆氏病(遗传性共济失调性多发性神经炎 样病)，无B脂蛋白血，共剂失调，毛细管扩张，和线粒体多发 性系统失调(mitochondrial multisystem disorder)，脱髓鞘性核心 紊乱，例如多发性硬化症，急性横向性脊髓炎；运动神经功能 紊乱，例如神经生发性肌肉萎缩，前角细胞退行，肌萎缩行侧 索硬化，小儿脊髓麻痹和青少年脊髓性肌肉萎缩；阿尔兹海默 氏症；中年期的唐氏先天愚症；扩散的Lewy体病；Lewy体型 老年痴呆；威尔尼克氏-Korsakoff愚症；慢性酒精中毒；克雅 氏病(早老型痴呆)；亚急性硬化全脑炎，哈-斯二氏病(苍白 球黑质色素变形)；和拳击员痴呆症，或者这些疾病中的部分症 状，或者综合症状。

(E)包括分泌肿瘤坏死α因子(TNF-α)的肿瘤恶性病理或者 其他包括TNF的恶性病理，例如白血病，包含急性，慢性中幼 粒细胞炎，慢性淋巴细胞炎和(或者)骨髓增生异常综合征； 淋巴瘤包括何杰金氏病和非何杰金氏病淋巴瘤；和恶性淋巴瘤， 例如伯森特氏淋巴瘤或者似真菌霉菌病；

(F)和酒精引发的肝炎。

见：Berkow，et al，eds.The merk Manual，第16版，11章，pp1380 -1529，Merck and Co，Rahway，N，J，(1992)，上文的内容 通过在此引述而完全合并于本文。

“治疗的有效剂量”一语意在包括能抑制，无论整体或者 部分，由肿瘤坏死α因子(TNF-α)介导的疾病，阻止其进一步 恶化，或者改善伴行的症状足够的剂量。如此的剂量，可以用 来对一个被怀疑为有TNF-α介导的疾病的病人起预防性的作 用，同时，能够有效阻止或者减轻TNF-α介导的疾病的严重性。

此项发明的化合物可以由病人自己服用，或者以药物组合物 给药，其中它们与适合的载体或者受体混合，剂量为能够治疗或 者减轻肿瘤坏死α因子(TNF-a)介导的疾病引发的相关症状的 剂量。这些化合物可以作为一种简单的混合物给病人使用，也可 以适当的配药学形式使用。这些化合物的剂型和给药的形式的技 术则可以在Remington：the Science and Practice of Pharmacy，19th edition，Mack Publishing Co.，Easton，PA.(1995)找到。

适当的用药途径可以是，例如，口服，眼滴，直肠给药， 粘膜吸附，肠道局部注射用药；非肠道的注射用药物输送，包 括肌肉注射、皮下注射、骨髓注射，同时也有粘膜内注射、直 接心室注射、静脉注射、腹膜内注射、鼻内注射、眼内注射。

本发明的化合物也能够被控制在一个靶向药物输送系统 中，例如：可以放在包有内皮细胞特异性抗体的脂质体中。

此项发明还与上述的分子式I、II、III的化合物应用有关， 即它们在制造用于处理一种肿瘤坏死α因子(TNF-α)介导的症 候的药剂中的应用。

本发明的药用组合物能通过已知的方法来生产，比如说， 通过常规的混合、溶解、粒化、包糖衣、粉碎、乳化、胶囊化、 压合、或者冻干处理等方法。

本发明的药用组合物能以常规方法配方，应用一种或者更 多种包含赋形剂和辅助剂的生理可接受的载体，以促进此活性 化合物形成有药效的制备物。适当的配方设计取决于具体选择 的给药方法。

对于注射，本发明药剂可配制在水溶液中，优选配制在生 理学相容的缓冲液中，如hanks液、任氏液，或者是生理盐水。 对于粘膜吸附给药，可应用适宜渗透过有关屏障的渗透剂来配 制。这样的渗透剂在制备工艺方面是本领域共知的。

对于口服，这些化合物可以与药理学上可接受的载体一起 容易地制备成药，载体是制备工艺上众所周知的。这些载体可 以使此发明的化合物被制成片剂、丸药、糖衣丸、胶囊、流体、 胶凝体、糖浆、浆液、悬液等等，用于被治疗病人的口服。口 服药物的制备可通过将活性成分与固体赋形剂的结合来获得， 如果需要，还可把混合物磨碎，然后处理混合物颗粒，加入合 适的辅助剂，制成片剂或者糖丸。合适的赋形剂即添加剂，如 糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖、或者山梨糖醇，纤维素制备物， 例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、凝胶、黄 蓍胶、甲基纤维素、羟基丙烷基甲基纤维素、羧基甲基纤维素 钠、和/或者聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入交联 的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或者褐藻酸、或者是含盐的如藻酸 盐等溃散剂。

糖核外被适当的包被。对此，可使用浓缩的糖溶液，其还 可以含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羰乙烯凝胶、 聚乙烯乙二醇、还有二氧化钛、紫胶漆溶液、还有适合的有机 溶剂或者溶剂混合物。为了区别或者标志不同活性成分药剂的 化合物，还可以加一些染料或者色素。

口服药物的制备还包括凝胶制成的胶囊、还有由凝胶和可塑 剂例如甘油和山梨糖醇制成的软的密封胶囊。胶囊可以含有包含 在混合物中的活性成分，这种混合物含添加剂如乳糖，结合剂如 淀粉，还有润滑剂如滑石或者硬脂酸镁，最好还要有稳定剂。在 软胶囊里，活性成分可能被溶解或者悬浮于合适的液体中，如脂 肪油、液体石蜡或者液体的聚乙烯乙二醇。另外，还可加入稳定 剂。所有口服药剂的制作都应该有适宜的服用剂量。

对于口腔给药，组合物可以采取片剂或者锭剂的常规方式。

对于吸入方式的给药，本发明的相关化合物可方便的由一 种干粉吸入器送出，或者是用有合适的发射剂的加压包装气溶 胶喷剂或者是喷雾器。发射剂有二氯二氟甲烷、三氯一氟甲烷、 二氯四氟乙烷、二氧化碳、或者其他合适的气体。针对加压气 溶胶的情况，剂量单位应通过提供一个瓣膜来控制其给药量。 用于吸入器或者吹入器的胶囊和明胶药筒可制成包含混有药物 组分的化合物粉末和一种像乳糖或者淀粉一样的粉末基质。

组合物可被制成通过注射的肠道外给药方式，包括大丸剂 注射或者连续的灌输。注射方式应以单位剂量形式制备，比如 一次用量的针剂或者多剂量的容器，同时要加入防腐剂。组合 物的形式可以是悬液、溶液、或者以油或者水为媒介的乳剂， 而且可含成型剂如悬置剂、稳固化处理剂和分散剂。

肠道外给药的药用组合物包括把药物活性成分制成水溶形 式进而形成水溶液。另外，活性成分的悬液可制成适当的油溶 注射液。合适的亲脂性溶剂或者媒介包含脂肪油如芝麻油、或 者合成脂肪酸酯，如乙烷基油酸盐或者甘油酸三酯或者是脂质 体。肠道外注射悬液可包含使悬液粘性增加的物质，如羧甲基 纤维素钠、山梨糖醇或者右旋糖苷。另外，悬液中也可包含能 增加化合物溶解度的稳定剂，以便制备高浓缩的溶液

作为选择，活性成分可能制成粉剂形式，在用前，用合适 的媒介如热灭过菌的无菌水来溶解。

化合物还可制成直肠方式给药的组合物，如栓剂或者滞留 灌肠剂，举例来说，含有常规基质，如可可油或者甘油酯。

除了上述的配方外外，化合物也可制成沉淀物制剂。长时 间活性作用的方式可以是埋入法给药，例如，皮下埋入、肌肉 埋入或者是肌肉注射。这样，化合物可与适宜的聚合物或者疏 水物一起配制，如在可接受的油中制成乳剂，或者在离子交换 树脂中，或者是微溶性派生物，例如微溶性盐。

药用组合物也可包括合适的固体或者胶状的载体或者赋形 剂，这样的载体或者赋形剂有碳酸钙、磷酸钙、多种糖、淀粉、 纤维素派生物、明胶、还有像聚乙二醇等聚合物。

适用于此项发明的药用组合物包括其中含有可达到预期效 果的有效剂量的活性成分的组合物。具体而言，达到治疗学上 的有效剂量，正如以前定义的，针对治疗对象，能阻止其病情 的发展或者是减轻其现存症状的剂量即为有效剂量。有效剂量 的决定完全处于本领域普通技术人员的能力范围之内。

对于任何用于本发明方法的化合物，治疗学上的有效剂量 都可以通过体外试验和动物模型来进行初步的估计。例如，可 以对细胞和动物模型给以一定剂量，已达到一个循环的浓度范 围，细胞分析以IC50作为决定标准。也就是说，试验化合物达 到最大抑制肿瘤坏死α因子(TNF-α)活性一半时的浓度。有时 候，既然这样的测定可近似看作血浆蛋白与该化合物结合的影 响，那么，在存在3％-5％的血清清蛋白时测定IC50就比较适当。 这一信息可用于更精确的测定应用于人的有效剂量。进而，全 身给药的首选化合物有效抑制肿瘤坏死α因子(TNF-α)信号在 完整细胞间的传递，可确定其在血浆中被安全接受的水平。

这些化合物的毒性和治疗功效可以通过对培养细胞和实验 动物进行标准的制药学程序来测定，例如，测定其最大耐受剂 量(MTD)和ED50(最大反应的50％时的有效剂量)。毒性和疗 效的剂量比就是疗效指数，它可以表示为MTD和ED50的比率。 我们需要的是显示高疗效指数的化合物。从细胞培养分析和动 物实验研究所获得的数据可以用来建立一个应用于人体的剂量 范围。这些化合物的剂量应在一个循环浓度范围之内，即没有 或者几乎没有毒性的ED50。剂量可能在这一范围内变化，这就 取决于所给药剂量的类型和给药的利用通路。单个医生可以根 据病人的具体疾病来给出准确的处方、给药方式和剂量。(见 Fingl，et al.，in The Pharmacological Basis of Therapeutics，Chapter 1， p.1)。对于处于危险期的治疗，服用治疗急性病的大剂量或者灌 输MTD可能会得到很快的效果。

配药量和服药间隔时间要因不同个体而作相应的调整，以 提供血浆水平的充足的药物活力，从而能维持想要得到的效果， 或者最小限度的有效浓度(MEC)。MEC随化合物的不同而变 化，但可以通过体外实验数据估计。例如，用这里描述的分析 法可得到蛋白酶50-90％被抑制的浓度需要量。达到MEC所需 剂量依赖个体特征和给药方式。无论如何，HPLC分析或者生物 学分析可用来检测血浆浓度。

用MEC值也可以确定给药间隔时间。化合物以一种服法进 行给药，此种服法应维持血浆水平10-90％的时间在MEC之上， 更适宜在30-90％之间，最适宜在50-90％之间，直到达到所期 望的症状改善。如有局部给药获选择吸收，药物的局部有效浓 度就可能和血浆浓度无关。

组合物的服用数量将取决于接受治疗的对象，取决于其体 重、其痛苦程度、给药方式以及开药医生的判断。

合成策略

通常，对分子式I中吡唑环的取代可以由1，3-二羰基烷烃和 肼反应来制备(途径I)。

途径I：吡唑环的形成。

当用途径I方法构建分子式I代表的化合物时，R28表示环 A，R27表示-X(CH2)n-Y，R25和R26各自分别代表-H，或者取代 的或者未取代的烃基，或者取代或者未取代的烷氧基。上述反 应被用以制备实施例6-10和12-15的化合物。

形成吡唑环的反应要在极性溶剂中进行，如水、醇或者醚。 反应更适合在醇中进行，如乙醇。反应温度在约35℃-150℃之 间，70-90℃之间更为可取。典型的反应是在所用溶剂的回流温 度下进行的。

在可被分子式I表示的化合物中，环A可以是吡啶、嘧啶 或者三嗪环。取代的2-肼嘧啶可通过碱存在的情况下向3-(N，N- 甲基氨基)丙-2-烯-1-酮中加入硫脲来制备，随后原位硫脲成环并 甲基化(见途径II，步骤1)。得到的4-取代2-甲磺酰嘧啶经肼 处理并加热，形成4-取代2-肼嘧啶(见途径II，步骤2)。

途径II：制备取代2-肼嘧啶

途径II所示的反应用在实施例5中，来制备中间产物，2- 肼-4-(吡啶-2-某基)-嘧啶。此中间产物和1，3-二羰基烷烃通过途 径I所示方法反应，得到实施例6-9中的取代的吡唑。

形成取代的2-甲磺酰嘧啶的反应(见途径II，步骤1)是在 极性溶剂中进行的，如水、醇或者醚。反应更适宜在醇如乙醇 中进行，并用碱性的或者碱性金属醇盐作为碱。反应温度约在 35-150℃之间，在大约70-90℃更适宜。典型的反应是在其溶剂 的回流温度进行的。通常反应过程所需时间约1小时到24小时， 升高温度时2-5小时更为适宜，之后降低反应温度，一个基本 的卤代烷烃，最好是碘代烷烃被加入以烷基化硫醇基团。

然后用肼升温处理取代2-甲磺酰嘧啶以得到取代的2-肼嘧 啶。这一反应在像水、醇、醚的极性溶剂中进行。典型的反应 是在含有35％(vol/vol)肼的水中进行的。反应约在80-110℃进 行，优选约100℃。

取代的2-肼三嗪可通过2-氨基吡啶或者2-氨基喹喔啉与烷 氧基-双-(二甲基氨基)甲烷，如叔-丁氧基-双-(二甲基氨基)甲烷 反应来合成，反应温度约在80-170℃，优选在约145-160℃，约 1-5小时，优选约2-4小时，以得到第一中间产物。典型反应在 极性的质子惰性溶剂中进行，如二甲基甲酰胺。2-氨基吡啶或 者2-氨基喹喔啉的典型存在浓度为约0.2-1M，烷氧基-双-(二甲 基氨基)甲烷常以相对于2-氨基吡啶或者2-氨基喹喔啉为约1.5- 3当量存在(途径III，步骤1a)。

然后，第一中间产物与硫脲、碱在水、醇或者醚等极性溶 剂中接触反应。此反应适宜在醇，如乙醇中进行，并以碱性的 或者碱性金属醇盐作为碱。反应温度约在35-150℃之间，优选 在约70-90℃间。反应过程常允许在约1-24小时内，优选在约2-5 小时升温状态下形成4-取代-2-硫代三嗪(见途径III，步骤1b)。 然后，4-取代-2-硫代三嗪被烷基化及被肼取代(见途径III，步 骤2、3)以形成取代的2-肼三嗪并经上述方法合成取代的2-肼 嘧啶。

途径III：取代的2-肼三嗪的合成

2-肼三嗪可以和1，3-二甲基烷烃反应，形成如途径I方法所 示的吡唑环。实施例12-14就是按途径III的方法然后用途径I 的方法而制备的。

当A环是吡啶环时，吡唑环就能首先通过途径I所示的肼 与1，3-二甲基烷烃反应的方法来合成，此处R28为氢。然后，吡 唑环能经取代反应加在吡啶环上(见途径IV)。

途径IV：取代的1-(吡啶-2-基)吡唑。

在途径IV中，R29是一个离去基团，如卤素。吡唑与碱相 接触，该碱碱性很强，足以在取代的吡啶加入前的3-30分钟内 对吡唑去质子化。一般使用氢化物，如氢化钠。加入取代的吡 啶后，反应体系加热至约80-120℃，约6-24小时，来合成6-取 代2-(吡唑-1-基)吡啶。反应常在质子惰性的溶剂如乙醚中进行。 实施例10就是通过途径I所示的方法接着用途径IV的方法所 制备的。

表2和4中所列出的化合物是用途径I-IV的方法来制备的。

分子式II的取代三唑环可以通过N-硫代羰基酰胺和肼的反 应来制备。(见途径V)。

途径V：三唑的合成

当用途径V所示的反应来合成分子式II的化合物时，R24是 4-(吡啶-2-基)三嗪-2-基。反应需在酸性缓冲液如羧酸和羧酸盐 中进行，例如，醋酸和醋酸钠。还可以存在有机溶剂如乙醚。 反应加热到约70-110℃，进行约6-24小时。实施例11就是途 径V所描述方法的典型代表。

表3中所列的化合物都是使用途径III和途径V的方法来制 备的。

分子式III所代表的化合物可经Ugi反应来制备，见途径VI

途径VI：Ugi反应—分子式III所示化合物的合成。

Ugi反应见Gross and Meienhofer，The Peptides，vol.2，pp.365- 381，Academic Press，New York，(1980)Intra-Sci.Chem.Rep.(1971)， 5：229-261；Rec.Chem.prog.(1969)，30：289-311；and Eberle，et al.， Tetrahedron(1978)，34：977，其中的所有教导都通过在此引述而 合并于本文。Ugi反应的起始物如异腈、羧酸、醛或者酮以及胺， 在极性溶剂如醇中混合，优选甲醇和乙醇。反应体系加热至约 40-80℃，进行约6-12小时。实施例1和实施例2中的化合物就 是通过Ugi反应获得的。

Ugi反应的局限性在于，起终端氮原子的取代，即R8的取 代是单取代。于是，分子式III所示化合物的第二种合成方法被 发展出来，使其终端的氮能够被单取代或者双取代(见途径 VII)。

途径VII：分子式III所代表的化合物的构成

在途径VII中，R29是离去基团，例如卤化物；R30是取代或者 未取代的芳基或者取代或者未取代的烷基。第一步反应的起始 物在大概等摩尔量的二氯甲烷或者乙醚等非极性、质子惰性溶 剂中混匀，反应时间为约0.5小时到6小时，优选约1小时，产 生乙酰胺。接下来，通过和氢氧化锂水解产生α-羟基酰胺。

在第二步，α-羟基酰胺作为前面反应的产物，溶解在乙醚 等非质子溶剂中，浓度为约0.2M到0.4M，用大概1.1当量到1.5 当量，最适1.2当量的强碱处理大约2分钟到20分钟，所用强 碱例如氢化钠等氢负离子盐，之后加入大约1.1当量到1.5当量， 最适1.2当量的芳基磺酰卤化物或者烷基磺酰卤化物，反应大约 进行1个小时到6个小时。然后往反应体系中加入溶于酒精等 极性溶剂的伯胺，大约3当量到5当量，最适4当量。加入伯 胺后反应进行大约6小时到24小时。

第二步反应的产物用大约1.1当量到1.8当量的酰基卤处 理，酰基卤溶于含碱的(如叔胺)的非极性溶剂，例如卤代烷， 处理时间为大约1小时到4小时，处理温度为大约30℃到80℃， 最终得到所需产物。实施例4所使的就是这种方法。

制备分子式III所代表的化合物的第三种方法已被发展，在 此方法中，对R9的化学计算量的碳取代是可被控制的(见途径 VIII)。

途径VIII：分子式III所代表的化合物的第三种制备方法

在途径VIII中，R29是离去基团，例如卤素，而R31是氨基 保护基团。保护氨基的方法可参照Greene，et al.，Protecting Groups in Organic Synthesis，2nd Edition，John Wiley & Sons，Inc.， (1991)，pp.309-405，其中的所有教导都通过在此引述而合并于本 文。途径VIII所描述的合成方法中，反应起使物可以是其中的 氨基被保护了的天然氨基酸或者人工合成的氨基酸。优选的氨 基保护基团是9-芴甲基氨基甲酸基和t-丁基氨基甲酸基。如果 起使物是手性氨基酸，在合成过程中，α-C的手性中心将会被 保留。

途径VIII的第一步中，起始反应物中的羧酸通过本领域技 术人员熟知的方法转化成被活化的酯。然后，活化的酯和伯胺 接触，结合形成酰胺化合物。第二步中，采用了光田反应 (Mitsunobu reaction)，用在步骤1中形成的氨基被保护的产物 取代R10-OH的氢氧基，其中在有步骤1的产物存在的条件下， 用三苯基磷和二叔丁基-偶氮羧酸处理醇(见Fukuyama T.，et al.， Tetrahedron Letters(1995)，36：6373)。然后，胺在第三步中去保 护，并与前面在途径VII的第三步所描述的酰基卤反应。例3是 使用这种方法的一个典型例子。

表I的化合物是通过途径VI-VIII的方法合成的化合物。

实施例 I：合成方法

实施例一：2-苯甲酰基-N-[(2，2-二苯乙氨酰基)-苯甲基] -N-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]苯甲酰胺  (化合物5)

步骤一：制备2，2-联苯乙异腈

2，2-联苯乙氨(7.00g，35.5mmol)溶于25mL甲酸乙酯，混 匀悬液，回流加热过夜。浓缩反应体系直到产生的甲酰氨成为 白色的固体，此为粗品。粗品加入到二氯甲烷(50mL)和二异 丙基胺(13.3mL，94.9mmol)，在冰浴中冷却。摇动同时加入三 氯氧化磷(5.0mL，54mmol)。一小时后从冰浴中取出，加入碳 酸钠水溶液(75mL)，水50mL和二氯甲烷50mL，用力搅拌一 小时。用水洗净有机层，用硫酸钠干燥和浓缩。得到的粗品用 硅胶柱(二氯甲烷)过滤以形成6.62g，90％的白色固体产物：1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.18(m，10H)，4.35(t，J＝7.5Hz，1H)，3.98(d， J＝7.3，2H)ppm.

步骤二：制备化合物5.

组胺溶液(1.11g，10.0mmol)、2-苯甲酰苯甲酸溶液(2.26g， 10.0mmol)、苯甲醛溶液(1.06g，10.0mmol)和溶于甲醇的第 一步的产物(2.07g，10.0mmol)通过回流加热过夜。反应体系 被浓缩，用乙酸乙酯和碳酸钠水溶液萃取。有机层用硫酸钠干 燥并浓缩形成带泡的浅棕色固体。用硅胶(二氯甲烷或者甲醇) 进行急骤层析法以形成2.99g(47％)的浅褐色固体产物：1H NMR (CDCl3)δ7.88-6.84(m，25H)，6.65-6.25(m，2H)，5.66-5.30(m， 1H)，4.44-4.20(m，1H)，4.17-3.84(m，2H)，3.47-3.03(m，2H)， 2.69-2.18(m，2H)ppm.MS(ESI)m/z 634(M+H+)

实施例二：N-[(-腈苯基)-(2，2-二苯乙氨酰基)-

甲基]-2-(2，2-二甲基-丙酰)-N-[2-(1H-咪唑-4-

     基)-乙基]-苯甲酰胺(化合物54)

组胺溶液(0.100g，0.900mmol)、2-三甲基乙酰苯甲酸溶液 (0.186g，0.902mmol)、3-腈基苯甲醛溶液(0.118g，0.900mmol) 和溶于甲醇的例1第一步的产物(0.187g，0.902mmol)混合， 回流加热过夜。浓缩反应体系，用乙酸乙酯和碳酸钠水溶液萃 取。有机层用硫酸钠干燥并浓缩形成0.521g(91％)的多泡的浅黄 色固体粗品。该产品未经进一步纯化即用于生物测试。

实施例三：2-苯甲酰-N-[(1’R)-1’-(2’，2’-二苯-氨甲

     酰乙基)-2’-苯基-乙基]-N-[2-(1H-咪唑基-4-基)-

         乙基]-苯甲酰胺(化合物47)

步骤一：制备(2R)-2-氨基-N-(2，2-联苯-乙基)-3-苯丙酰胺

搅拌存在于氯仿(125mL)中的N-叔丁氧基羰基-D-苯丙氨 酸(11.0g，41.5mmol)溶液，加入1-〔3-(二甲氨基)丙基〕- 3-乙基碳化二亚胺(7.95g，41.5mmol)和1-羟基苯并三唑(5.60g， 41.4mmol)。五分钟后加入2，2-二苯乙氨(7.44g，37.7mmol)。 搅拌两小时。用氯仿(100mL)稀释，用碳酸钠水溶液洗净。 有机层用硫酸钠干燥并浓缩形成白色固体。加入乙醚研磨形成 粗品酰胺。粗品溶于二氯甲烷(100mL)，用三氟乙酸(45mL， 580mmol)处理。摇动15分钟，浓缩反应体系，用乙酸乙酯和 碳酸钠水溶液萃取分离残余物。有机层用硫酸钠干燥和浓缩形 成12.4g(通过导引残余溶液可使产量提高到111％)无色胶状产 物：1H NMR(CDCl3)δ7.34-6.95(m，15H)，4.10(t，J＝8.2，1H)， 3.88-3.79(m，2H)，3.68-3.61(m，1H)，3.49(br s，2H)，3.13-3.03(m， 1H)，2.70-2.59(m，1H)ppm.

步骤二：制备(2R)-N-(2，2-联苯乙基)-2-(2-硝基-苯磺酰氨基)- 3-苯基-丙酰胺

将第一步的产物(12.3g，35.6mmol)搅拌溶解于二氯甲烷 (200mL)，依次加入2-硝基苯磺酰氯(9.00g，40.6mmol)和三乙胺 (6.4mL，46mmol)。30分钟后，浓缩反应体系，残余物用乙酸 乙酯和碳酸钠水溶液萃取分离。有机层用硫酸钠干燥和浓缩。 带黄色的多泡沫的产物可用快速色谱通过硅胶(己烷/醋酸)纯 化，形成无色泡沫产物14.0g(74％)：1H NMR(CDCl3)δ7.95- 7.87(m，1H)，7.76-7.62(m，3H)，7.35-7.15(m，10H)，7.06-6.94(m， 3H)，6.90-6.83(m，2H)，6.42(t，J＝5.6，1H)，5.80(d，J＝5.8，1H)， 4.12(t，J＝8.1，1H)，4.01-3.82(m，3H)，3.18-3.08(m，1H)，2.68-3.75(m， 1H)ppm。

步骤三：制备(2R)-N-(2，2-二苯乙基)-2-{(2-硝基苯磺酰基)- [2-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)-乙基]-氨基}-3-苯基-丙酰胺

将第二步的产物(3.40g，6.42mmol)和2-(1-三苯甲基-1H- 咪唑-4-基)-乙醇(2.73g，7.70mmol)搅拌溶解于二氯甲烷(40 mL)，然后依次加入三苯基磷(2.19g，8.35mmol)和二叔丁基- 偶氮羧酸盐(1.77g，7.69mmol)。三小时后浓缩反应体系，剩 余物用乙酸乙酯和碳酸钠水溶液萃取，有机层用硫酸钠干燥和 浓缩，得到黄色胶状产物。用快速色谱通过硅胶(二氯甲烷/甲 醇洗脱)可以得到5.42g(97％)部分纯化(被二叔丁基-亚腈基二 甲酸污染)的浅黄色的泡沫状产物：1H NMR(CDCl3)δ7.81- 7.74(m，1H)，7.64-7.55(m，1H)，7.53-7.44(m，2H)，7.41-7.03(m， 31H)，6.69(t，J＝5.6，1H)，6.53(s，1H)，4.48(t，J＝8.1，1H)，4.08(t，J＝8.1， 1H)，3.84-3.58(m，4H)，3.44-3.34(m，1H)，2.91-3.80(m，1H)， 2.78-2.68(m，1H)，2.63-2.51(m，1H)ppm。

步骤四：制备(2R)-N-(2，2-二苯乙基)-3-苯基-2-[2-(1-三苯甲 基-1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-丙酰胺

将第三步的产物(5.42g，6.26mmol)搅拌溶解于N，N-二甲 基甲酰胺(17mL)，然后依次加入巯基乙酸(1.1mL，15.8mmol) 水合氢氧化锂(1.3lg，31.2mmol)。搅拌混合物3小时，用乙酸 乙酯和碳酸钠水溶液萃取分离，再次往有机层中加入乙酸乙酯， 然后干燥(硫酸钠)和浓缩得到黄色油状产物。用快速色谱通 过硅胶柱(二氯甲烷/氨水甲醇洗脱)得到2.50g(59％)的无色粘 稠泡沫状产物：1H NMR(CDCl3)δ7.54(t，J＝5.5，1H)，7.38-7.01(m， 31H)，6.33(s，1H)，4.16(t，J＝8.3，1H)，4.02-3.92(m，1H)，3.83-3.74(m， 1H)，3.22-3.15(m，1H)，3.12-3.04(m，1H)，2.51-2.18(m，5H)ppm。

步骤五：制备2-苯甲酰-N-[(1’R)-1-(2’，2’-二苯-氨基甲酰乙 烷)-2’-苯-乙基]-N-[2-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)-乙基]-苯甲酰胺

将2-苯甲酰安息酸(1.33g，5.88mmol)溶解于二氯甲烷 (4.5mL，9.0mmol)形成2M的乙二酰氯溶液。加入一滴N，N-二 甲基甲酰胺，搅拌此多泡混合物2小时，然后浓缩。将第四步 的产物(2.50mL，3.67mmol)溶解于氯仿(30mL)  和三乙胺 (1.05mL，7.53mmol)，再将此溶液加入到浓缩产物中。混合物 回流加热2.5小时。接着再加入三乙胺(0.50mL，3.6mmol)， 继续加热30分钟。然后浓缩反应体系，剩余物用乙酸乙酯和碳 酸钠水溶液萃取分离。有机层用硫酸钠干燥并浓缩得到黄色泡 沫状物体，此物体通过硅胶柱过滤(二氯甲烷/氨水甲醇洗脱)， 最后得到1.44g(40％)的浅黄色泡沫状产物，此产物在下一步使 用前未经纯化。

步骤六制备化合物47

第五步的产物(1.44g，1.62mmol)搅拌溶解于4∶1的乙酸/ 水混合物(7mL)，在90℃水浴加热30分钟。等反应体系冷却 后用乙酸乙酯和碳酸钠水溶液萃取分离，再次往有机层加入乙 酸乙酯，干燥(硫酸钠)，浓缩得到黄色泡沫状物。用快速色谱 通过硅胶柱(二氯甲烷/甲醇洗脱)，得到0.62g(59％)的浅黄色带 泡固体。用薄层色谱和1H NMR色谱检测知道此固体与复合物 43的外消旋Ugi结构一致。通过HPLC手性分析(ChiralPack AD，4.6×250mm；洗提液：0.1％氨基二乙基溶于88∶12己烷/乙醇； 流速：1mL/min；检测波长：260nM)可知所得物为一种有波长 限制的单旋光学异构体：1H NMR(CDCl3)δ8.35(brs，1H)， 7.90-6.94(m，27H)，6.78-6.57(m，1H)，6.39-6.17(m，1H)，4.65-3.72 (m，4H)，3.64-2.70(m，5H)，2.46-2.18(m，1H)ppm.MS(ESI)m/z 648(M+H+)

实施例四：2-苯甲酰-N-{[(2，2-二苯乙基)-甲基-甲氨酰

    基]-苯甲基}-N-[2-(1H-咪唑-4-基)-乙基]-苯甲酰胺

步骤一：制备N-(2，2-二苯乙基)-2-羟基-N-甲基-2-苯基-乙酰 胺

将(2，2-二苯乙烷)甲胺(4.97g，23.5mmol)搅拌溶于氯 仿(50mL)，依次加入O-乙酰邻扁桃酸氯(5.3mL，24mmol) 和三乙胺(4.0mL，29mmol)。摇动混匀1小时，浓缩。剩余物 用乙酸乙酯和碳酸钠水溶液萃取分离，有机层用硫酸钠干燥和 浓缩以得到无色胶状物。将此粗胺溶于1∶1的四氢呋喃/甲醇 (80mL)，用1N氢氧化锂水溶液(30mL，30mmol)处理。搅 拌混合物2小时，浓缩后移去有机层，用水稀释剩余溶液，再 用乙酸乙酯萃取两次，用二氯甲烷萃取一次。混合有机萃取物， 用硫酸钠干燥并浓缩得到白色固体。用二乙醚磨碎产物，得到 7.59g(93％)的白色固体产物：1H NMR(CDCl3)δ7.35-6.98(m， 15H)，5.07(s，1H)，4.57-4.44(m，1H)，4.36-4.28(m，1H)，3.76-3.64(m， 1H)，2.46(s，3H)ppm.

步骤二制备N-(2，2-二苯-乙烷基)-2-[2-(1H-咪唑-4-基)-乙烷 基]-N-甲基-2-苯基-乙烷胺

将第一步的产物(1.50g，4.34mmol)搅拌溶于四氢呋喃 (15mL)，加入60％的溶于矿物油(0.210g，5.25mmol)的氧化 钠。等气体停止选出后，加入p-甲苯磺酸氯(0.990g，5.20mmol)， 摇动混匀2小时。接着加入组胺(1.93g，17.4mmol)和甲醇 (10mL)，摇动过夜，浓缩。剩余物用乙酸乙酯和碳酸钠水溶 液萃取分离，有机层用硫酸钠干燥和浓缩，得到浆状白色固体。 用快速色谱通过硅胶柱(二氯甲烷/甲醇氨溶液洗脱)，得到 1.08g(57％)无色粘稠带泡产物：1H NMR(CDCl3)δ7.52-7.43(m， 1H)，7.40-7.00(m，15H)，6.78-6.69(m，1H)，4.36-3.97(m，4H)， 2.92-2.20(m，7H)ppm.

步骤三制备化合物26

将2-苯甲酰苯甲酸溶于二氯甲烷(1.5mL，30mmol)和2M 乙二酰氯溶液，加入一滴N，N-二甲基甲酰胺，将此多泡混合物 震荡过夜，浓缩。2-苯甲酰苯甲酰氯粗品溶于二氯甲烷(4mL) 制成溶液加入到第二步的产品(0.220g，0.502mmol)中，接着加 入三乙胺(0.25mL，1.8mmol)。回流加热混合物2小时，再浓 缩，产物加入到5∶1甲醇/1N氢氧化锂溶液(12mL)，摇动1 小时。体系再次浓缩，用乙酸乙酯和碳酸钠溶液萃取分离浓缩 产物，有机层用硫酸钠干燥并浓缩得到黄色多泡固体。用快速 色谱通过硅胶柱(二氯甲烷/甲醇)得到0.229g(71％)的浅黄色多 泡固体：1H NMR(CDCl3)δ7.91-6.92(m，26H)，6.54-6.39(m， 1H)，6.34-6.06(m，1H)，4.83-4.31(m，2H)，3.97-2.82(m，3H)， 2.70-2.39(m，3H)，2.35-2.09(m，2H)ppm.MS(ESI)m/z 648(M+H+)

实施例五：2-肼-4-(吡啶-2-基)-嘧啶

步骤一：制备2-甲磺酰-4-吡啶-2-基-嘧啶

(实施例6，7，8，15中所用的合成中间产物)

用乙氧基钠(用金属钠新鲜配置)(5.11g，222mmol)和乙 醇(350mL)，3-二甲氨基-1-吡啶-2-基-丙烯酮(28.0g，159mmol) 和硫脲(12.9g，170mmol)制成混合液，回流加热混合液并震 荡3小时。冷却到室温，逐滴滴入碘代甲烷(13.8mL，222mmol) 超过10分钟。室稳中振荡2小时，用饱和氯化铵溶液(250mL) 和水稀释。用二乙醚(200mL×3)萃取悬液，混合有机萃取物再 用饱和硫代硫酸钠溶液(150mL)和盐水(150mL)洗净。接着 用硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩得到30.1g(96％)棕色油状产 物：1H NMR(CDCl3)δ8.70-8.69(m，1H)，8.64(d，J＝5.2Hz，1H)， 8.48(d，J＝7.9Hz，1H)，8.01(d，J＝5.2Hz，1H)，7.87-7.82(m，1H)， 7.41-7.38(m，1H)，2.65(s，3H)ppm.13CNMR(CDCl3)δ172.6， 163.1，158.5，153.9，149.7，137.3，125.7，122.0，102.6，14.5ppm.

步骤二：制备(4-吡啶-2-基-嘧啶2-基)肼

将90ml的水合肼加入到(30.0g，148mmol)的2-甲磺酰-4- 吡啶-2-基-嘧啶中。将混合溶液回流加热兵搅拌17个小时。将 溶液在室温下冷却有黄色沉淀产成。液体过滤并用水清洗，干 燥后有22.5克(81％)的黄色针状结晶：1H NMR(DMSO-d6) δ8.68-8.67(m，1H)，8.45-8.41(m，2H)，8.29(s，1H)，7.98-7.93(m， 1H)，7.52-7.48(m，2H)，4.28(s，2H)ppm，13C NMR(DMSO-d6) δ164.6，162.6，159.3，153.9，149.4，125.5，121.0，106.0ppm.

实施例六：2-[4-(4-异丙基-苯氧基)-3，5-二甲基-

    吡唑-1-基]-4-嘧啶-2-基-嘧啶(化合物97)；

步骤一：制备3-(4-异丙基-苯氧基)-戊烷-2，4-二酮

将4-异丙基-苯酚(0.548g，4.02mmol)，醋酸铑(II)(ca，15mgs) 溶解于10ml苯中，加入3-二氮-戊烷-2，4-二酮(0.507g，4.02mmol) 溶于20ml苯中，回流40分钟，反应后的混合物冷却至室温， 浓缩后得到绿色油状物，用硅胶层析(流动相为：乙酸乙酯/己 烷)，得到0.371g(39％)白色固体，核磁共振数据如下：1H NMR (CDCL3)δ14.4(s，1H)，7.15(d，J＝8.6Hz，2H)，6.82(d，J＝8.6Hz，2H)， 2.87(sept，J＝7.0Hz，1H)，2.04，(s，6H)，1.23(d，J＝7.0Hz，6H)ppm.

步骤二：制备化合物97

将3-(4-异丙基-苯氧基)-戊烷-2，4-二酮(0.371g，1.58mmol)置 于20ml乙醇中，加入(4-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-肼(0.296g， 1.58mmol)及ρ-甲苯磺酸一水化物(ca.10mgs)。将溶液加热回 流搅拌14小时。反应后的混合物冷却至室温，用100ml蒸馏水稀 释，然后用100ml乙酸乙酯提取。用50ml饱和碳酸氢钠及50ml 苯洗脱，干燥(硫酸镁)，过滤，浓缩得黄色固体。用硅胶层析(流 动相为：甲醇或者亚甲基氯化物)得到0.421g(69％)亮黄色固体， 核磁共振数据如下：1H NMR(CDCL3)δ8.93(d，J＝5.1Hz，1H)， 8.75-8.74(m，1H)，8.46(d，J＝7.9Hz，1H)，8.24(d，J＝5.1Hz，1H)， 7.88(dt，J＝7.9，1.7Hz)，7.46-7.42(m，1H)，7.14(d，J＝8.7Hz，2H)， 6.88(d，J＝8.7Hz，2H)，2.88(sept，J＝6.9Hz，1H)，2.69(s，3H)，2.23(s， 3H)及1.23(d，J＝6.9Hz，6H)ppm.13CNMR(CDCL3)，δ164.3，160.2， 157.5，156.4，153.4，149.7，145.4，142.5，137.9，137.2，133.1， 127.4，125.7，122.0，114.7，114.0，33.3，24.1，12.7，11.3ppm.

实施例七：2-{4-[4-(4-苯甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯氧基]-3，5-

      二甲基-吡唑-1-基}-4-吡啶-2-]嘧啶(化合物104)

步骤一：制备{4-[3，5-二甲基-1-(4-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-1H- 吡唑-4-基氧代]-苯基}-甲醇。

将3-(4-乙酸基甲基-苯氧基)-戊烷-2，4-二酮(1.24g，4.69mmol) 溶于30ml乙醇中，加入(4-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-肼(0.877g， 4.69mmol)及ρ-甲苯磺酸一水化物(约10mgs)。将溶液加热回 流搅拌14小时.反应后的混合物冷却至室温，用100ml蒸馏水 稀释.将沉淀过滤，用水洗脱，干燥得白色固体。粗提物溶于60ml 甲醇-水混合物中(5∶1)并用过量的醋酸钾处理。混合物在室 温下搅拌两小时，然后用100ml蒸馏水稀释，形成的沉淀物过 滤后用水洗，干燥得1.53g(87％)白色固体，氢谱分析结果与上 述结构相符。

步骤二：制备{4-[3，5-二甲基-1-(4-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-1H- 吡唑-4-基氧代]-苯甲醛。

将{4-[3，5-二甲基-1-(4-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-1H-吡唑-4-基氧 代]-苯基}-甲醇(1.53g，4.10mmol)溶于80ml氯仿中，加入 Dess-Martin过氧化碘(2.36g，56mmol)，混合物在室温下搅拌三 小时，浓缩得白色糊状物，上硅胶柱分离(流动相为：甲醇， 二氯甲烷)的白色固体1.37g(90％)。1HNMR分析与上述结构 相符。

步骤三：准备化合物104。

将1-苄基哌嗪(0.310g，1.76mmol)和{4-[3，5-二甲基-1-(4-吡 啶-2-基-嘧啶-2-基)-1H-吡唑-4-基氧代]-苯甲醛(0.545g， 1047mmol)溶于10mL二氯乙烷中，加入三乙酰氧硼氢化钠 (0.436g，2.06mmol).反应物在室温搅拌17小时。用50mL二氯 甲烷稀释，用饱和的碳酸氢钠30mL洗两次，50mL盐水洗一次。 干燥有机相(硫酸镁)，过滤，浓缩得黄色油状物。用硅胶层析 (流动相为：2M氨溶于甲醇/二氯甲烷)的到0.183g(23％)白色 泡沫物。核磁共振数据如下：1HNMR(CDCl3)δ8.94-8.93(m，1H)， 8.75(d，J＝3.9Hz，1H)，8.46(d，J＝7.9Hz，1H)，8.25(d，J＝3.9Hz，1H)， 7.90-7.87(m，1H)，7.46-7.43(m，1H)，7.31-7.21(m，7H)，6.89 (d，J＝8.5Hz，2H)，3.52(s，2H)，3.47(s，2H)，2.68(s，3H)，2.48(br s，8H)， 2.21(s，3H)ppm.

实施例八：2-[4-(4-氯-苄基亚磺酰)-3，5-二甲基-吡

    唑-1-基]-4-吡啶-2-基-嘧啶(化合物119)

步骤一：准备3-(4-氯-苄基亚磺酰)-戊烷-2，4-二酮.

将3-氯-戊-2，3-二酮(1.94g，14.4mmol)溶于50mL乙二醇二 甲醚中，加入碳酸氢钠(ca.15g)和氯苯甲基硫醇(2.29， 14.4mmol)。将溶液加热回流搅拌3小时。反应后的混合物冷却 至室温，用200ml蒸馏水稀释.然后用100mL乙基醚提取两次， 用150mL盐水洗脱有机提取物。干燥有机相(硫酸镁)，过滤， 浓缩得黄色油状物。用硅胶层析(乙酸乙酯/己烷)得2.48g(67％) 白色固体。核磁共振数据如下：1HNMR(CDCl3)δ7.26 (d，J＝8.4Hz，2H)，7.06(d，J＝8.4Hz，2H)，3.60(s，2H)，2.13(s，6H)ppm.

步骤二：准备化合物119。

将3-(4-氯-苄基亚磺酰)-戊烷-2，4-二酮(1.15g，4.48mmol) 溶于60mL乙醇，加入(4-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)肼(0.838g， 4.48mmol)和甲苯磺酸一水合物(ca.20mgs)。将溶液加热回流搅 拌5小时。反应后的混合物冷却至室温，用200ml蒸馏水稀释。 将沉淀过滤，从甲醇溶液中再结晶得1.36g(74％)b白色针状物。 核磁共振数据如下：1HNMR(CDCl3)δ 8.94-8.92(m，1H)，8.75- 8.73(m，1H)，8.41(d，J＝7.9Hz，1H)，8.28-8.26(m，1H)，7.91 (t，J＝7.9Hz，1H)，7.46-7.43(m，1H)，7.20(d，J＝8.0Hz，2H)，6.89 (d，J＝8.0Hz，2H)，3.66(s，2H)，2.46(s，3H)，2.28(s，3H)ppm.13CNMR (CDCl3)δ164.6，160.5，157.4，155.2，153.5，149.8，147.3，137.6， 137.2，133.1，130.6，128.7，126.1，122.2，114.7，111.3，40.1， 14.2，12.6ppm.

实施例九：2-[4-(4-氯-苯甲基磺酰)-3，5-二甲基-吡唑-1-基]-4-

          吡啶-2-基-嘧啶(化合物124)

将2-[4-(4-氯-苄基亚磺酰)-3，5-二甲基-吡唑-1-基]-4-吡啶-2- 基-嘧啶(0.920g，2.26mmol)和碳酸氢钠(4.10g，48.8mmol)溶 于125mL丙酮/45mL水，加入过硫酸氢钾制剂(3.47g，5.64mmol). 混合物在室温下搅拌18小时。混合物加入过量氢硫化钠，搅拌15 分钟，用3×50mL乙酸乙酯抽提。有机相用100mL盐水冲洗， 干燥(硫酸镁)，过滤，浓缩得白色固体。粗提取物加入热甲醇 粉碎，然后用硅胶层析(甲醇/二氯甲烷)得0.230g(23％)白色固 体。氢谱分析结果与上述结构相符。

实施例十：6-[4-(4-氯-苄基亚磺酰)-3，5-二甲基-吡唑

      -1-基]-[2，2]二吡啶基(化合物126)

步骤一：准备4-(4-氯-苄基亚磺酰)3，5-二甲基-1H-吡唑.

将粗提物3-(4-氯-苄基亚磺酰)-戊烷-2，4-二酮[如上所述从3- 氯-戊-2，3-二酮(1.03g，7.63mmol)和4-氯苯甲(1.21g，7.63mmol)] 溶于60mL乙醇，加入水合肼(0.713mL，22.9mmol)和甲苯磺 酸一水合(ca.25mg)。将溶液加热回流搅拌15小时。反应后的 混合物冷却至室温，用300ml蒸馏水稀释。将沉淀过滤，用水 洗脱，干燥得白色固体1.38g(72％).氢谱数据如下： δ7.17(d，J＝8.4Hz，2H)，6.92(d，J＝8.4Hz，2H)，3.57(s，2H)，和2.02(s，6H) ppm.13CNMR(CDCl3)δ137.2，132.7，130.3，128.3，105.2，39.9， 10.7ppm.

步骤二：准备化合物126。

将4-(4-氯-苄基亚磺酰)-3，5-二甲基-1H-吡唑(0.708g， 2.80mmol)溶于7mL 2-甲氧基乙醚，加入氢化钠[0.123g(60％分 散)，3.08mmol]。搅拌5分钟，加入6-溴代-[2，2’]二吡啶(0.691g， 2.94mmol)，加热混合反应物至100℃16小时。反应后的混合物 冷却至室温，用100ml蒸馏水稀释。然后用50mL乙酸乙酯提取 两次，用100mL盐水洗脱有机提取物。干燥有机相(硫酸镁)， 过滤，浓缩得棕褐色固体。用硅胶层析(甲醇/二氯甲烷)，然后 在甲醇溶液中再结晶得0.485g(43％)白色固体。氢谱数据如下： 1HNMR(CDCl3)δ8.70-8.68(m，1H)，8.34(d，J＝7.9Hz，1H)，8.29(d， J＝7.9Hz，1H)，7.94(t，J＝7.9Hz，1H)，7.86(dt，J＝2.0，7.9Hz，2H)， 7.35-7.31(m，1H)，7.22(d，J＝8.3Hz，2H)，6.99(d，J＝8.3Hz，2H)， 3.65(s，2H)，2.45(s，3H)，2.21(s，3H)ppm.13CNMR(CDCl3) δ155.7，154.5，153.8，152.9，149.5，145.9，139.7，137.3，137.2， 133.1，130.7，128.7，124.2，121.3，118.5，116.1，110.0，40.3， 13.6，12.3ppm.

实施例十一：4-[5-苯甲基-3-(4-氯-苯基)-[1，2，4]三唑-1-

    基]-6-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪-2-基胺  (化合物133)

步骤一：准备N-(4-氯-硫代苯酰)-2-苯-乙酰胺。

将4-氯硫代苯甲酰胺(0.519，3.02mmol)溶于5mL丙酮，加 入吡啶(0.367M1，4.53mmol)和苯乙酰氯(0.480mL，3.63mmol)。 加热明亮橙色的反应混合物至55℃1小时。反应后的混合物冷 却至室温，加入20ml水。将沉淀过滤，用水洗脱，干燥得红色 固体0.721g(82％)。氢谱数据如下：1HNMR(CDCl3)δ9.34(brs， 1H)，7.50-7.22(m，9H)，3.96(s，2H)ppm.

步骤二：准备化合物133。

将N-(4-氯-硫代苯甲酰)-2-苯-乙酰胺(0.536g，1.85mmol) 和醋酸钠(ca.0.25g)溶于30mL 1∶1醋酸/1，4二氧杂环己烷， 加入4-肼-6-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪-2-基胺(0.376g，1.85mmol)。 加热溶液至90℃15小时。反应后的混合物冷却至室温，加入 100ml水。将沉淀过滤，用300mL热甲醇粉碎，干燥得白色固 体0.489g(60％)。氢谱数据如下：1HNMR(CDCl3)δ8.78(d， J＝4.3Hz，1H)，8.32(d，J＝6.1Hz，2H)，8.22(d，J＝7.8Hz，1H)，8.06(d， J＝8.5Hz，2H)，7.96(dt，J＝1.5，7.8Hz，1H)，7.62-7.57(m，3H)， 7.36-7.26(m，2H)，7.24-7.22(m，2H)，7.19-7.16(m，1H)，4.90(s， 2H)ppm.

实施例十二：2-[4-(4-氯-苯亚磺酰)-3，5-二甲基-吡

唑-1-基]-4-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪(化合物141)

步骤一：准备4-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪-2-硫醇。

将吡啶酰胺(1.50g，12.3mmol)溶于20mL的N，N-二甲基 甲酰胺，加入叔丁氧基双(二甲氨基)甲烷(5.2mL，25mmol)。混 合物回流2.5小时，然后浓缩。用溶于乙醇(50mL，25mmol) 中的0.5M乙醇钠萃取得到的粘性棕褐色油状物。加入硫脲 (0.72g，9.5mmol)，然后回流溶液2.5小时。浓缩反应物，残 余物被乙酸乙酯和稀释的氢氧化钠溶液分隔。水层用乙酸乙酯 冲洗两次，再用1N的盐酸溶液中和。得到的沉淀过滤后用水漂 洗，真空干燥得粗提取物0.72g(40％)，为棕色固体微粒。这种 物质未经进一步提纯即用于以后的步骤。

步骤二：准备2-甲基亚磺酰-4-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪.

将步骤一中得到的物质(0.707g，3.72mmol)搅拌悬浮溶于 36mL丙酮，加入碳酸钠(0.79g，7.5mmol)，碘甲烷(0.35mL， 5.6mmol)。搅拌过夜后，过滤掉未溶固体，浓缩得明亮棕色固 体。氢谱数据如下：1HNMR(DMSO-d6)δ9.13(s，1H)，8.84-8.76(m， 1H)，8.55-8.43(m，1H)，8.11-8.00(m，1H)，7.69-7.60(m，1H)，2.63(s， 3H)ppm.

步骤三：准备(4-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪-2-基)-肼.

将步骤二中得到的物质(0.763g，3.74mmol)和肼水合物 (0.22mL，3.9mmol)搅拌溶于8mL乙醇，加热回流30分钟。 反应在冰浴中冷却，过滤沉淀。真空干燥得明亮棕色固体粗提 取物。这种物质未经进一步提纯而用于后面的步骤。

步骤四：准备化合物141。

将步骤三中得到的物质(0.333g，1.77mmol)和3-(4-氯- 苯亚磺酰)-戊烷-2，4-二酮(0.473g，1.95mmol)搅拌悬浮溶于n- 丙醇，加热至95℃过夜。反应溶液浓缩后，直接进行硅胶层析 (二氯甲烷/甲醇)得混浊的黄色固体。该物质在二乙醚中进一 步提纯得0.056g(8％)白色固体。氢谱数据如下：1HNMR(DMSO-d6) δ9.44(s，1H)，8.94-8.77(m，1H)，8.68-8.43(m，1H)，8.18-7.96(m， 1H)，7.77-7.57(m，1H)，7.45-7.24(m，2H)，7.20-6.98(m，2H)，2.83(s， 3H)，2.20(s，3H)ppm.

实施例十三：4-(4-苯甲基-3，5-二甲基-吡唑-1-基)-6-吡

     啶-2-基-[1，3，5]三嗪-2-基胺(化合物142)

步骤一：准备3-苯甲基戊烷-2，4-二酮.

在氢化钠(0.474g，19.8mmol)和50mL无水乙醇新鲜配制 的乙醇钠溶液中加入戊烷-2，4-二酮(6.00g，60.0mmol)。反应混 合物加热至50℃，30分钟后，加入溶于20mL乙醇的苄基溴 (3.42g，20mmol)。反应物加热回流。2小时后，浓缩混合物， 残余物溶于乙酸乙酯，水洗脱三次，盐水洗一次，硫酸镁干燥， 浓缩得油状物。进行硅胶闪层析(乙酸乙酯/二氯甲烷)得 3.13g(82％)无色油状物。质谱分析显示产物中存在同等酮类和烯 醇互变(异构)体。数据如下：1HNMR(CDCl3)δ16.81(s，0.5H)， 7.13-7.32(m，5H)，4.00(t，J＝7.6Hz，0.5H)，3.65(s，1H)，3.14(d， J＝7.6Hz，0.5H)，2.06-2.13(m，6H)ppm.

步骤二：准备化合物142。

将4-肼-6-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪-2-基胺(5.25g，25.6mmol)， 3-苯甲戊烷-2，4-二酮(5.0g，28.4mmol)，和p-甲苯磺酸一水合物 酸(0.475g，2.50mmol)溶于50mL二甲亚砜，加热至70℃，20 小时。反应后的混合物冷却至室温，悬浮物溶于700mL二氯甲 烷。水洗脱三次，盐水一次，硫酸镁干燥，浓缩得潮湿固体。 粗提取物悬浮于50mL乙酸乙酯，加热回流，冷却至室温，过滤， 重复三次。最终产物的包含3％二甲亚砜(重量)白色固体： 8.63g(90％)。质谱数据如下：1HNMR(CDCl3)δ8.84-8.53(m， 1H)，8.84(d，J＝7.9Hz，1H)，7.86-7.91(m，1H)，7.46-7.50(m， 1H)，7.13-7.30(m，5H)，6.61(brs，1H)，6.40(br s，1H)，3.83(s， 2H)，2.79(s，3H)，2.24(s，3H)ppm.MS(EST)m/z 358(M+H＝).

实施例十四：4-[3，5-二甲基-4-(3-苯-丙基)-吡唑-1-基]-

   6-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪-2-基胺(化合物144)

步骤一：准备3-(3-苯-丙基)-戊烷-2，4-二酮.

混合戊烷-2，4-二酮(3.87g，38.6mmol)，3-苯-1-碘丙烷(3.18g， 12.9mmol)和无水碳酸钾(1.7g，12.3mmol)，溶于7.5mL丙酮， 加热回流24小时。冷却至室温，过滤，丙酮洗脱(25mL×3)。 总体过滤物浓缩，剩余物分隔在乙酸乙酯和水层。有机层分别 用水和盐水洗脱，硫酸镁干燥，浓缩得油状物。硅胶层析(乙 酸乙酯/己烷)，得1.13g(42％)无色油状物。在重氢氯仿进行 的质谱分析显示产物中存在同等酮类和烯醇互变(异构)体。

步骤二：准备化合物144。

将4-肼-6-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪-2-基胺(6.17g，30.4mmol)， 3-(3-苯-丙基)-戊烷-2，4-二酮(6.66g，30.4mmol)，和p-甲苯磺 酸一水合物(0.05g，0.26mmol)溶于二甲亚砜(200mL)，加热 至75℃18小时。冷却至室温，乙酸乙酯(700mL)稀释。所得 溶液分别用水和盐水洗脱，硫酸镁干燥，浓缩得膏状有色固体。 固体在沸腾的乙酸乙酯(200mL)中悬浮，悬浮物冷却至室温。 2小时后，过滤收集产物，真空干燥得5.87g(50％)白色固体。质 谱数据如下：1HNMR(CDCl3)δ8.84-8.54(m，1H)，8.49(d， J＝7.9Hz，1H)，7.87-7.91(m，1H)，7.46-7.50(m，1H)，7.18-7.32(m， 5H)，6.44(brs，1H)，6.25(br s，1H)，2.73(s，3H)，2.65-2.73(m， 2H)，2.44-2.49(m，2H)，2.31(s，3H)，1.79-1.86(m，2H)ppm. MS(EST)m/z 358(M+H＝).

实施例十五：4-(4-氯-苯亚磺酰)-5-甲基-2-(4-吡啶-2-基

    -嘧啶-2-基)-2，4-二羟-吡唑-3-酮(化合物147)

步骤一：准备2-(4-氯-苯亚磺酰)-3-氧-丁酸乙酸酯。

将乙烷2-氯乙酰乙酸(1.58g，9.61mmol)溶于乙二醇二甲 基醚(30mL)，加入碳酸氢钠(ca.15g)和4-氯苯酚(1.39g， 9.61mmol)。悬浮液加热回流搅拌3小时。反应后的混合物冷却 至室温，100mL水加入稀释。75mL乙基醚抽提混合物，150mL 盐水洗脱有机抽提物。有机相硫酸镁干燥，过滤，浓缩得黄色 油状物。硅胶闪层析(乙酸乙酯/己烷)，得1.44g(55％)无色油状 物。质谱数据如下：1HNMR(CDCl3)δ13.8(s，1H)，7.26-7.21(m， 2H)，7.06-7.04(m，2H)，4.21(q，J＝7.1Hz，2H)，2.33(s，3H)， 1.20(t，J＝7.1，3H)。

步骤二：准备化合物147。

将2-(4-氯-苯亚磺酰)-3-氧-丁酸乙酯(4.13g，15.1mmol)溶 于丙醇(85mL)，加入(4-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-肼(2.84g， 15.1mmol)和p-甲苯磺酸一水合物(ca.25mgs)。溶液加热回流 搅拌1 5小时。反应后的混合物冷却至室温，400mL水稀释，乙 酸乙酯(250mL)抽提。有机相分别用水(200mL)和盐水(200mL) 洗脱，硫酸镁干燥，过滤，浓缩得棕色油状物。粗提物在二乙 醚中粉碎，过滤得到分离出来的固体。用少量的热甲醇进一步 的粉碎，得到棕褐色固体。1HNMR(CDCl3)δ12.8(br s，1H)，8.85(d， J＝5.3Hz，1H)，8.77(d，J＝4.3Hz，1H)，8.44(d，J＝7.8Hz，1H)，8.29(d， J＝5.3Hz，1H)，7.62(dt，J＝1.5，7.8Hz，1H)，7.51-7.48(m，1H)，7.19(d， J＝8.6Hz，2H)，7.09(d，J＝8.6Hz，2H)，2.32(s，3H).13CNMR(CDCl3) δ165.1，159.1，158.8，157.1，156.8，152.0，137.7，136.6，131.3， 129.2，127.3，126.8，122.7，114.6，88.9，13.3。

实施例十六：2-[4-(4-氯-苯亚磺酰)-5-甲氧基-3-甲基-

     吡唑-1-基]-4-嘧啶-2-基-嘧啶(化合物148)

将4-(4-氯-苯亚磺酰)-5-甲氧基-2(4-吡啶-2基-嘧啶-2-基)-2，4- 二羟-吡唑-3-酮(0.344g，0.869mmol)溶入丙酮(10mL)，加入碳 酸钾(ca.3g)碘甲烷(0.130g，0.912mmol)。悬浮液加热回流 搅拌2小时。冷却至室温，加水(100mL)稀释.二乙醚(50mL) 抽提混合物，有机相用盐水(50mL)洗脱，硫酸镁干燥，过滤， 浓缩得白色固体。硅胶闪层析(二氯甲烷/2M氨溶于甲醇，两 次)得0.007g(2％)白色固体。氢谱分析结果与上述结构相符。 表1：

a化合物45制备出的是(R)对映体。化合物46制备出的是(S) 对映体。对映体的过量被确定分别为91.4％和＞95％。

b化合物47制备出的是(R)对映体。化合物48制备出的是(S) 对映体。对映体的过量被确定分别为100％(在可测限度内)和 91.8％。

c化合物49和50分别为化合物44的(-)对映体和(+)对映 体。采用了手性HPLC(ChiralPack OD，2×25cm，洗脱剂：40/60 二氧化碳/乙睛；检测在260nM)。 表2： 化合 物号 实施 例号     R19  R4 R3  n  X  W  V  93  6  H  H  CH3  0  O  N  CH  94  6  4-Cl  H  CH3  0  O  N  CH  95  6  4-F  H  CH3  0  O  N  CH  96  6  4-CH3O  H  CH3  0  O  N  CH  97  6  4-(CH3)2CH  H  CH3  0  O  N  CH  98  6  4-CF3  H  CH3  0  O  N  CH  99  6  4-CF3O  H  CH3  0  O  N  CH  100  7  4-(CH2OH)  H  CH3  0  O  N  CH  101  7  4-CHO  H  CH3  0  O  N  CH  102  7  4-(N-吗啉代)CH2  H  CH3  0  O  N  CH  103  7  4-(N-四羟异喹啉 代)CH2  H  CH3  0  O  N  CH  104  7  4-(4-苄基-哌嗪-1- 基)CH2  H  CH3  0  O  N  CH  105  7  4-(4-(2-氟-苯基)哌嗪 -1-基)CH2  H  CH3  0  O  N  CH  106  6  4-Cl  H  CH3  0  O  N  N  107  6  4-Cl  H  CH3  1  O  N  CH  108  8  H  H  CH3  0  S  N  CH  109  8  2-Cl  H  CH3  0  S  N  CH  110  8  3-Cl  H  CH3  0  S  N  CH  111  8  4-Cl  H  CH3  0  S  N  CH  112  8  4-F  H  CH3  0  S  N  CH  113  8  4-CH3O  H  CH3  0  S  N  CH  114  8  3，4-di Cl  H  CH3  0  S  N  CH  115  8  4-Cl  4-CH3  CH3  0  S  N  CH  116  8  4-Cl  5-CH3  CH3  0  S  N  CH  117  8  H  H  CH3  1  S  N  CH  118  8  2-Cl  H  CH3  1  S  N  CH  119  8  4-Cl  H  CH3  1  S  N  CH  120  8  4-F  H  CH3  1  S  N  CH   121   8   4-CH3   H   CH3   1   S   N   CH   122   8   4-CH3O   H   CH3   1   S   N   CH   123   8   4-CF3O   H   CH3   1   S   N   CH   124   9   4-Cl   H   CH3   1   SO2   N   CH   125   10   4-Cl   H   CH3   0   O   C   CH   126   10   4-Cl   H   CH3   1   S   C   CH   147   15   4-Cl   H   OH   0   S   N   CH   148   16   4-Cl   H   OCH2   0   S   N   CH 表3：   化合物号   使用的方法     R21     R22     127     11   2，4-diClPh     4-ClPhCH2     128     11     2，4-diFPh     4-ClPhCH2     129     11     4-t-BuPh     4-ClPhCH2     130     11     2，4-diFPh     4-ClPhCH2     131     11     4-ClPh   4-(CH3O)PhCH2     132     11     4-ClPh   3-(CH3O)PhCH2     133     11     4-ClPh     PhCH2     134     11     4-ClPh     c-C6H11     135     11     4-ClPh   c-(C5H9)CH2CH2     136     11     4-ClPh     c-C5H9     137     11     4-ClPh     (CH3)3CCH2     138     11     4-ClPh  3，4-di(CH2O)PhCH2 表4： 化合物号 使用的方法     R23     R24     n     X     139     8     4-Cl     NH2     0     S     140     9     4-Cl     NH2     0     SO2     141     12     4-Cl     H     0     S     142     13     H     NH2     0     C     143     13     4-Cl     NH2     1     C     144     14     H     NH2     2     C     145     13     4-Cl     NH2     1     C     146     14     H     NH2     2     C II.生物学结论

实施例十七：化合物在肿瘤坏死α因子(TNF-α)

         和VCAM体外实验中的活性

对表V的描述：表V中所显示的肿瘤坏死α因子(TNF-α) 实验结果是按照TNF高通量筛选方法和VCAM高通量筛选方 法得到的，这些方法的实验步骤在下面有详细描述。这些实验 测量细胞在肿瘤坏死α因子(TNF-α)作用下的反应，其数据在 以抑制百分比的形式在表格中给出。抑制的百分比的范围从0 到100％，0抑制说明该化合物在实验中没有任何作用(细胞反 应与肿瘤坏死α因子(TNF-α)单独作用的结果无法区分)，100 ％的抑制表示化合物在给定浓度下的结果，如同在没有施加肿 瘤坏死α因子(TNF-α)时的结果一样。这两种分析测试方法分 别度量施加肿瘤坏死α因子(TNF-α)后的两种不同结果，细胞 的凋亡和血管黏附分子(VCAM)的表达，捕获了肿瘤坏死α因 子(TNF-α)引起的多种生物学效应中的两种。肿瘤坏死α因子 (TNF-α)介导的细胞凋亡是在免疫/炎症反应中产生肿瘤坏死α 因子(TNF-α)直接导致细胞和组织坏死的作用机制。肿瘤坏 死α因子(TNF-α)VCAM在上皮细胞中的表达引起白细胞趋化 反应，从血管内向免疫炎症位点迁移。这两种生物学活性都会 引起病理上的免疫炎症疾病。表中的第一栏记录了肿瘤坏死α因 子(TNF-α)介导的细胞调亡实验中在1uM待测化合物的浓度 下的抑制百分比。表中的第二栏列出了化合物的IC50的测试结 果，IC50是分析测试中一种标准的用于稀释的方法，使剂量依赖 曲线与S曲线向一致。IC50是指该化合物在分析实验中出现50％ 抑制时的浓度(该值来源于Sigmoidal函数)。第三和第四栏列 出了肿瘤坏死α因子(TNF-α)的血管粘附分子分析的相应的数 据。在表VI中，与表V中第一栏的数据相对应，只是在高通筛 选中把鼠的细胞换成人的细胞。表中的数据显示出有一类化合 物在两种测试中的一种表现出很好的活性，而另一类化合物可 以在两类测试中显示出都具有相应的活性，这是非常容易理解 的。虽然没有严格的理论说明，我们仍相信这些数据说明了化 合物有不止一种的调节生物活性。作为结果，这些化合物将可 以用于不止一种肿瘤坏死α因子(TNF-α)介导的条件，也许根 据不同条件状况选择不同的化合物。相应的这些化合物可以用 于治疗人类的疾病。

肿瘤坏死α因子(TNF-α)高通量筛选：

分析测试步骤：

1.下午，取Costar 96孔板，将4×104浓度L929细胞培养 在100μl完全EMEM培养基。

2.第二天，用化合物、抑制剂、以及化合物的溶剂预处理 2小时。

3.预处理两小时后，加入10μl浓度为5ng/ml的人类肿瘤 坏死α因子(TNF-α)和放线菌素D(40μg/ml终浓度)。

4.温浴过夜。

5.上午，除去上清液。

6.用微量盘自动清洗机清洗96孔板(0.9％NaCl)。

7.加100μl，0.1％龙胆紫溶于20％乙醇。

8.室温下，温浴10分钟。

9.在微量盘自动清洗机上清洗。

10.37℃空气中干燥96孔板。

11.在每个孔中加100μl甲醇。

12.在水平式回旋振荡器振荡每个孔板并在595nm的酶标 仪上读数。

VCAM高通量筛选：

分析测试步骤：

1.在96孔板中培养人的脐带静脉上皮细胞，每孔1.8×104 个细胞。

2.37℃温浴48-72小时，然后开始检测。

3.实验时，吸出孔板中的培养液并在每个孔中加入180μl 的上皮生长细胞培养基(EGM)。

4.每个孔中加入化合物。

5.振荡孔板3分钟。

6.在37℃下温浴孔板1小时。

7.加入肿瘤坏死因子(TNF)中浓度到1.0ng/ml。

8.振荡孔板3分钟。

9.37℃下温浴2小时。

10.从温浴器中拿出平板，用磷酸缓冲液(PBS)在微量盘 自动清洗机上清洗3遍。

11.加入抗血管黏附分子(VCAM)的抗体到0.5μg/ml的 终浓度。

12.4℃温浴过夜。

13.在微量盘自动清洗机上用磷酸缓冲液(PBS)清洗3遍。

14.加入羊抗鼠的用辣根过氧化物酶的标记的抗体。

15.室温下温浴1小时。

16.在微量盘自动清洗机上用磷酸缓冲液(PBS)清洗3遍。

17.加入TMB到孔板中的每一个孔，在室温下反应15分钟。

18.加入100μl 2N的硫酸终止反应。

19.在450nm的光吸收处读酶标仪。

表V化合物在肿瘤坏死α因子(TNF-α)和

        VCAM分析测试中的活性 化合物号     TNFα ％Inh.@1μM   TNFα IC50(μM) VCAM％Inh.   @12.5μM   VCAM   IC50(μM)     1     2.64     2     5.65     3     1.29     4     0.941     5     0.872     6     1.06     7     4.01     8     1.62     9     0.496     10     3.68     11     2.89     12     5.15     13     1.37     14     1.79     15     0.386     16     1.32     17     1.5     18     2.68     19     0.457     20     0.299     21     0.913     22     3.85     23     2.58     24     1.03     25     1.58     26     3.36     27     2.72     28     5.27     29     3.72     30     2.36     31     3.35     32     2.33     33     2.35     34     1.54     35     2.64     36     2.15     37     2.36     38     2.79     39     1.32     40     1.74     41     6.49     42     0.779     16     43     2.98     44     0.41     24.4     45     3.34     46     4.37     47     5.58     48     4.05     49     1.53     50     0.39     51     3.56     52     3.49     53     7.13     54     6.03     55     7.64     56     6.63     57     56     58     50     59     51     60     50     61     51     62     59     63     55     64     63     65     52     66     51     67     52     68     57     69     61     70     58     71     57     72     57     73     76     74     55     75     67     76     56     77     54     78     60     79     62     80     53     81     50     82     55     83     56     84     52     85     52     86     53     87     50     88     53     89     56     90     51     91     71     92     52     93     1.21     94     0.029     95     0.2     96     0.046     97     0.397     98     0.058     99     0.177     100     3.46     101     17.9     102     0.431     103     0.709     104     0.05     105     0.089     106     0.96     107     47     108     2.28     109     0.63     110     6.34     111     0.132     112     0.309     113     0.498     114     1.44     115     19.4     116     355     117     16     118     72     119     7.95     120     13.2     121     9.93     122     11.9     123     7.1     124     13.4     125     0.023     126     37.9     2.52     127     2.2     128     20.6     8.67     129     19.5     130     8.96     131     12.8     132     1.39     133     19.5     134     0.526     135     0.275     136     1.44     137     9.67     138     54a     139     62b     140     1.77     141     0.0011     142     0.152     143     6.06     144     0.015     145     2.5     146     0.197     147     0.734     148     32.1

a：在浓度为2μM测定的抑制。

b：在浓度为25μM测定的抑制。

表VI.化合物44抑制肿瘤坏死因子(TNF-a)

    介导的人类初级成纤维细胞凋亡。 OD595nm   标准偏差     ％营救     DMSO     0.189     0.005     N/A     TNF+DMSO     0.091     0.006     N/A  2μM化合物44     0.109     0.008     18.4  4μM化合物44     0.147     0.033     57.1  8μM化合物44     0.198     0.002     109.2

将正常的人真皮成纤维细胞培养在96孔板中，细胞浓度 3×104每孔。细胞先用2μg/ml的放线菌素D预处理，再施加化 合物44或者作为空白对照的DMSO。随后将细胞在2ng/ml的 肿瘤坏死α因子(TNF-α)下处理24小时，再用龙胆紫的乙醇 溶液染色。龙胆紫可溶于乙醇，并且在595nm的光吸收下被酶 表仪读出。

实施例18：化合物在败血症模型和发炎性肠道

     疾病模型中体内活性以及药物动力学参数

败血症模型：

败血症动物模型由C57/BL品系的小鼠诱导构建，每只小鼠 静脉注射20ng的脂多糖和20mg D-氨基半乳糖盐酸盐即可产生 败血症模型。化合物的抑制率以三天之内的非死亡率计算。在 诱导前1小时，将该化合物在10％cremophore 10％乙醇和80％ 的生理盐水助溶的腹腔注射。

发炎性肠道疾病模型：

三只雄性大鼠一组，体重150+-10g，固定24小时后使用。诱 导部位在结肠远端，每只大鼠结肠内注射0.5ml DNBS(2，4-硫 酸二硝基苯，60mg/ml溶于30％的乙醇)然后通过套管轻轻的 推入2ml的空气以确保溶液保存在结肠内。待测化合物在注射 DNBS前24小时和2小时分别喂食，注射后在连续喂食5天， 共喂食7次。在最后一次喂食待测化合物后24小时内将大鼠处 死，取出结肠并称重。

表VII化合物在败血症模型和发炎性肠道疾病模型中体内

            活性以及药物动力学参数 败血症： 鼠的脂多糖-D-氨 基半乳糖模型 发炎性肠道疾病： 大鼠DNBS模型 药物动力学参数 ％抑制百分比 ％结肠重量的抑制   T2/3   ％喂食生物   利用率   44   33+/-@200mg/kg(2   exp.)   44+/-8@100mg/kg   (2 exp.)   2.3   26   119   33@200mg/kg   51％@100mg/kg   2.3   没有探测导   94   200mg/kg以下没   有活性   18％@20mg/kg   10.9   没有探测导   43   33@10mg/kg   31％@50mg/kg   3.6   ＜1

实施例19：化合物在过敏性脑炎实验(鼠的

         多发性硬化模型)中体内活性

采用SJL品系的小鼠，用脂蛋白多肽139-151的氨基酸残 基辅以弗氏佐剂皮下免疫。免疫后第一天和三天皮下注射百日 咳毒素。免疫后7天鼠的体重开始减轻，免疫后9-14天小鼠 开始麻痹。

表VIII：化合物在过敏性脑炎实验(鼠的多

        发性硬化模型)中体内活性 化合物 给药方法1 最后一天给 药与对照相 比疾病严重 程度的比值 (ADSS)4 ％疾病抑 制率5 给药生存 率％与对 照生存率 ％的比值 44  mgs/kg/day/i.p.2  1.9/3.35  44.0％ 75比50 诱导法 从1-21天 p6＝0.06  75mgs/kg/day/i.p.2 从1-21天 0.8/3.35  75.7％ p＝0.001  100比50  44 治疗法 15mgs/kg/day/i.p.2 从1-21天 2.6/4.6  43.5％ p＝0.08  70比11  75mgs/kg/day/i.p.2 从7-21天 1.1/4.6  76.1％ p＝0.001  100比11  44 喂食治疗法 75mgs/kg/day/i.p.2 从7-28天 2.2/4.4  50％ p＝0.002  89比20  94 诱导法 75mgs/kg/day/i.p.2 从1-18天 2.15/3.53  39.1％ p6＝0.045  80比67

1.化合物溶解在10％的cremophore，10％乙醇80％的生理盐 水中

2.化合物施用于腹膜内

3.化合物用于口服

4.ADSS是疾病严重指数，大于1处为严重疾病。从尾处开 始麻痹一直延伸到鼠的头部，尾巴柔软值为1，完全麻痹值为5。 动物在大于或者等于分数4时无痛致死。

5.ADSS抑制百分数＝(平均检验ADSS-平均对照ADSS/对照 值)*100

6.P值用Student’s T检验计算得到

7.存活率指的是施以无痛致死剂量后存活的动物 等同性

本发明被以上展示的优选实施例所体现和描述，本领域普 通技术人员很容易理解的是，在不脱离本发明的权利要求所请 求保护的范围的情况下，可以有形式和细节上的改变。

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本申请要求了中请号为60/203,784的美国临时申请和申请 号为60/205,213的美国临时申请的优先权，其中申请号为 60/203,784的美国临时申请是于2000年5月12日的提交的，申 请号为60/205,213的美国临时中请是于2000年5月18日提交 的。这些申请的所有的教导在此通过引证而并入本申请中。