技术领域
[0001] 本
发明属于
水产养殖技术领域，具体涉及一种南美白对虾防毒害养殖方法。
背景技术
[0002] 南美白对虾也称凡纳滨对虾，属
节肢动物门(Arthropoda)、甲壳纲(Crustacea)、十足目(Decapoda)、游泳亚目(Natantia)、对虾科(Penaeidae)、对虾属(Penaeus)、Litopenaeus亚属，原产于太平洋沿岸水域秘鲁北部至墨西哥桑诺拉一带，1988年引入我国养殖。由于其生长迅速、抗逆性强、营养价值高、耐高
密度和低
盐度养殖等优点，引种后迅速成为我国养殖对虾的绝对优势品种。
[0003] 随着南美白对虾高密度集约化养殖的迅速发展，对虾病毒性及细菌性
疾病高发，导致虾苗存活率低，成品虾个头小且个体差异较大，品质差、产量低；为了降低对虾疾病发病率又出现了抗生素类
药物滥用的问题，导致养殖的南美白对虾体内抗生素等化学药物残留的现象严重，影响南美白对虾的品质，进而影响其养殖效益。
发明内容
[0004] 针对以上技术问题，本发明的目的是提供一种南美白对虾防毒害养殖方法，不使用抗生素类药剂，能够维持养殖
水体的良好生态环境，
预防对虾病毒病并减少细菌性疾病的发生，提高对虾免疫
力，促进对虾生长，提高对虾的产量和
质量，进而提高养殖效益。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 一种南美白对虾防毒害养殖方法，包括以下步骤：
[0007] (1)清理池塘：将养殖池池底的
污泥去除，撒施生石灰，暴晒2-3d后，在养殖池内壁均匀喷洒中草药提取液，再次暴晒2-3d；所述中草药提取液包括以质量份计的以下成分：野菊花20-30份、紫胡10-15份、百部10-15份、鱼腥草10-15份、苦楝10-15份和五信子10-15份，加水300-400份煎煮2-3h后过滤，得到滤液即为所述中草药提取液；
[0008] (2)进水消毒：向养殖池内注水至水深为1.5-1.6cm，加入漂白粉进行消毒；
[0009] (3)肥水管理：在消毒后2-3d向养殖池中撒入5-10kg/亩
豆浆、1-2kg/亩EM菌和0.5-1kg/亩
钙镁磷肥，静置15-20d；
[0010] (4)虾苗投放：选取长度为0.8-1.2cm的虾苗，放养密度为4-6万尾/亩；
[0011] (5)
饲料管理：放苗后20-30d不投放人工饲料，20-30d之后投喂南美白对虾
微生物发酵饲料，所述南美白对虾微生物发酵饲料由
基础饲料加入复合菌
生物膜和中草药提取物发酵后，加入复合微量元素混合制备而成；所述复合菌生物膜包括枯草芽孢杆菌、解
淀粉芽孢杆菌、
沼泽红假单胞菌和假丝
酵母菌；所述中草药提取物包括黄芪提取物和板蓝根提取物；
[0012] (6)水质调控：养殖中后期，每2-4d在养殖池喷洒所述中草药提取液；
[0013] (7)日常管理：在养殖期间于养殖池中补充
淡水或
海水至水位为1.5-1.8m，不进行排污或换水；在养殖前期和中期的晚上及阴雨天开启增
氧机，养殖后期增氧机全天开启。
[0014] 进一步地，所述步骤(2)中漂白粉的用量为8-10kg/亩。
[0015] 进一步地，所述步骤(4)中虾苗投放时水温为22-35℃。
[0016] 进一步地，所述步骤(5)中南美白对虾微生物发酵饲料中复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料的质量比为0.5-1.5:0.1-0.5:10。
[0017] 进一步地，所述南美白对虾微生物发酵饲料中复合菌生物膜的制备方法为：将按质量百分比枯草芽孢杆菌25-45％、解淀粉芽孢杆菌30-40％、沼泽红假单胞菌10-25％和假丝酵母菌5-20％组成的复合菌接种至液体培养基中培养，取200ml培养液涂布于固体培养基上再次培养；刮取固体培养基表面培养物，用PBS重悬和
超声波震荡处理，得到悬浊液则为所述复合菌生物膜。
[0018] 进一步地，所述南美白对虾微生物发酵饲料中中草药提取物的制备方法为：将黄芪和板蓝根
粉碎，加水煎煮2-4h，重复提取一次，合并两次滤液，再次过滤后将滤液旋转
蒸发浓缩至原体积的5-10％，加入
乙醇至浓缩滤液中乙醇含量为70-80％，静置12-18h后抽滤，将获得的沉淀依次用无水乙醇和丙
酮酸洗涤，即得到所述中草药提取物。
[0019] 进一步地，所述复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料混合避光阴干后加入0.5-1％褐藻酸钠溶液混合均匀，装入密封容器内，常温密封发酵，密封容器中心
温度升至
45-48℃时发酵完成，再加入所述复合微量元素混合均匀即得所述南美白对虾微生物发酵饲料。
[0020] 进一步地，所述步骤(5)中南美白对虾微生物发酵饲料中复合微量元素包括羟基蛋
氨酸
铜10-15mg/kg、蛋氨酸锌60-70mg/kg、蛋氨酸锰20-25mg/kg、蛋氨酸钴15-30mg/kg和蛋氨酸硒0.3-0.5mg/kg。
[0021] 进一步地，所述步骤(5)中南美白对虾微生物发酵饲料每日早、中、晚共投喂3次，日投喂量为对虾体重的10-15％。
[0022] 进一步地，所述步骤(6)中中草药提取物每次使用量为20-30kg/亩。
[0023] 与
现有技术相比，本发明具有如下技术效果：
[0024] 本发明在南美白对虾养殖过程中采用中草药提取液清理池塘并分次喷洒于池水中，同时采用含复合微生物膜、中草药提取物和复合微量元素的微生物发酵饲料投喂对虾，饲料中含有的多种微生物制备的生物膜在养殖池水体
生态系统中成为优势群落，致病菌生长受到抑制，对虾细菌性疾病发病率极大降低，开启增氧机也抑制了弧菌的大量增殖，结合施入池水的中草药提取液能够显著预防对虾病害的产生，并促进对虾快速健康生长。
[0025] 同时本发明养殖过程中不进行排污和换水，不使用抗生素类药剂，依靠施入的有益菌和中草药提取液能够有效改善养殖池的水质和底质，降低水体氨氮及亚
硝酸盐含量，并减少换水造成对虾应激反应而导致的病害多发，特殊配比的微生物发酵饲料还能提高对虾免疫力，预防对虾病毒病的发生。
[0026] 本发明通过改善外部养殖环境和提高对虾自身免疫力，能够在不使用抗生素类药剂的情况下能有效预防病毒病并减少细菌性病害的发生，同时促进对虾生长，提高对虾的产量和质量，进而提高养殖效益。
具体实施方式
[0027] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明
实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0028] 以下实施例中所使用的材料均可自常规途径购买得到。
[0029] 制备例1南美白对虾微生物发酵饲料
[0030] 所述南美白对虾微生物发酵饲料由质量比为0.5:0.1:10的复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料混合避光阴干后加入0.5-1％褐藻酸钠溶液混合均匀，装入密封容器内，常温密封发酵，密封容器中心温度升至45-48℃时发酵完成，再加入复合微量元素混合制备而成。
[0031] 所述复合菌生物膜的制备方法为：将按质量百分比枯草芽孢杆菌25％、解淀粉芽孢杆菌30％、沼泽红假单胞菌25％和假丝酵母菌20％组成的复合菌接种至液体培养基中培养，取200ml培养液涂布于固体培养基上再次培养；刮取固体培养基表面培养物，用PBS重悬和
超声波震荡处理，得到悬浊液则为所述复合菌生物膜。
[0032] 所述中草药提取物的制备方法为：将黄芪和板蓝根粉碎，加水煎煮2-4h，重复提取一次，合并两次滤液，再次过滤后将滤液
旋转蒸发浓缩至原体积的10％，加入乙醇至浓缩滤液中乙醇含量为70％，静置12-18h后抽滤，将获得的沉淀依次用无水乙醇和丙
酮酸洗涤，即得到所述中草药提取物。
[0033] 所述复合微量元素包括羟基蛋氨酸铜10mg/kg、蛋氨酸锌60mg/kg、蛋氨酸锰20mg/kg、蛋氨酸钴30mg/kg和蛋氨酸硒0.5mg/kg。
[0034] 制备例2南美白对虾微生物发酵饲料
[0035] 所述南美白对虾微生物发酵饲料由质量比为1.5:0.5:10的复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料混合避光阴干后加入0.5-1％褐藻酸钠溶液混合均匀，装入密封容器内，常温密封发酵，密封容器中心温度升至45-48℃时发酵完成，再加入复合微量元素混合制备而成。
[0036] 所述复合菌生物膜的制备方法为：将按质量百分比枯草芽孢杆菌35％、解淀粉芽孢杆菌35％、沼泽红假单胞菌15％和假丝酵母菌15％组成的复合菌接种至液体培养基中培养，取200ml培养液涂布于固体培养基上再次培养；刮取固体培养基表面培养物，用PBS重悬和超声波震荡处理，得到悬浊液则为所述复合菌生物膜。
[0037] 所述中草药提取物的制备方法为：将黄芪和板蓝根粉碎，加水煎煮2-4h，重复提取一次，合并两次滤液，再次过滤后将滤液旋转蒸发浓缩至原体积的5％，加入乙醇至浓缩滤液中乙醇含量为75％，静置12-18h后抽滤，将获得的沉淀依次用无水乙醇和
丙酮酸洗涤，即得到所述中草药提取物。
[0038] 所述复合微量元素包括羟基蛋氨酸铜15mg/kg、蛋氨酸锌65mg/kg、蛋氨酸锰20mg/kg、蛋氨酸钴25mg/kg和蛋氨酸硒0.4mg/kg。
[0039] 制备例3南美白对虾微生物发酵饲料
[0040] 所述南美白对虾微生物发酵饲料由质量比为1.0:0.3:10的复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料混合避光阴干后加入0.5-1％褐藻酸钠溶液混合均匀，装入密封容器内，常温密封发酵，密封容器中心温度升至45-48℃时发酵完成，再加入复合微量元素混合制备而成。
[0041] 所述复合菌生物膜的制备方法为：将按质量百分比枯草芽孢杆菌45％、解淀粉芽孢杆菌40％、沼泽红假单胞菌10％和假丝酵母菌5％组成的复合菌接种至液体培养基中培养，取200ml培养液涂布于固体培养基上再次培养；刮取固体培养基表面培养物，用PBS重悬和超声波震荡处理，得到悬浊液则为所述复合菌生物膜。
[0042] 所述中草药提取物的制备方法为：将黄芪和板蓝根粉碎，加水煎煮2-4h，重复提取一次，合并两次滤液，再次过滤后将滤液旋转蒸发浓缩至原体积的10％，加入乙醇至浓缩滤液中乙醇含量为80％，静置12-18h后抽滤，将获得的沉淀依次用无水乙醇和丙酮酸洗涤，即得到所述中草药提取物。
[0043] 所述复合微量元素包括羟基蛋氨酸铜10mg/kg、蛋氨酸锌70mg/kg、蛋氨酸锰25mg/kg、蛋氨酸钴15mg/kg和蛋氨酸硒0.3mg/kg。
[0044] 实施例1
[0045] 一种南美白对虾防毒害养殖方法，包括以下步骤：
[0046] (1)清理池塘：将养殖池池底的污泥去除，撒施生石灰，暴晒2-3d后，在养殖池内壁均匀喷洒中草药提取液，再次暴晒2-3d；所述中草药提取液包括以质量份计的以下成分：野菊花20份、紫胡15份、百部10份、鱼腥草10份、苦楝15份和五信子15份，加水300份煎煮2-3h后过滤，得到滤液即为所述中草药提取液；
[0047] (2)进水消毒：向养殖池内注水至水深为1.5-1.6cm，加入漂白粉8kg/亩进行消毒；
[0048] (3)肥水管理：在消毒后2-3d向养殖池中撒入5kg/亩豆浆、2kg/亩EM菌和1kg/亩钙镁磷肥，静置15-20d；
[0049] (4)虾苗投放：选取长度为0.8-1.2cm的虾苗，放养密度为4-6万尾/亩，投放时水温为22-35℃；
[0050] (5)饲料管理：放苗后20-30d不投放人工饲料，20-30d之后投喂制备例1的南美白对虾微生物发酵饲料，每日早、中、晚共投喂3次，日投喂量为对虾体重的10-15％；
[0051] (6)水质调控：养殖中后期，每2-4d在养殖池喷洒所述中草药提取液；
[0052] (7)日常管理：在养殖期间于养殖池中补充淡水或海水至水位为1.5-1.8m，不进行排污或换水；在养殖前期和中期的晚上及阴雨天开启增氧机，养殖后期增氧机全天开启。
[0053] 实施例2
[0054] 一种南美白对虾防毒害养殖方法，包括以下步骤：
[0055] (1)清理池塘：将养殖池池底的污泥去除，撒施生石灰，暴晒2-3d后，在养殖池内壁均匀喷洒中草药提取液，再次暴晒2-3d；所述中草药提取液包括以质量份计的以下成分：野菊花25份、紫胡15份、百部15份、鱼腥草10份、苦楝10份和五信子15份，加水350份煎煮2-3h后过滤，得到滤液即为所述中草药提取液；
[0056] (2)进水消毒：向养殖池内注水至水深为1.5-1.6cm，加入漂白粉9kg/亩进行消毒；
[0057] (3)肥水管理：在消毒后2-3d向养殖池中撒入8kg/亩豆浆、1.5kg/亩EM菌和0.8kg/亩钙镁磷肥，静置15-20d；
[0058] (4)虾苗投放：选取长度为0.8-1.2cm的虾苗，放养密度为4-6万尾/亩，投放时水温为22-35℃；
[0059] (5)饲料管理：放苗后20-30d不投放人工饲料，20-30d之后投喂制备例2的南美白对虾微生物发酵饲料，每日早、中、晚共投喂3次，日投喂量为对虾体重的10-15％；
[0060] (6)水质调控：养殖中后期，每2-4d在养殖池喷洒所述中草药提取液；
[0061] (7)日常管理：在养殖期间于养殖池中补充淡水或海水至水位为1.5-1.8m，不进行排污或换水；在养殖前期和中期的晚上及阴雨天开启增氧机，养殖后期增氧机全天开启。
[0062] 实施例3
[0063] 一种南美白对虾防毒害养殖方法，包括以下步骤：
[0064] (1)清理池塘：将养殖池池底的污泥去除，撒施生石灰，暴晒2-3d后，在养殖池内壁均匀喷洒中草药提取液，再次暴晒2-3d；所述中草药提取液包括以质量份计的以下成分：野菊花30份、紫胡10份、百部15份、鱼腥草15份、苦楝10份和五信子10份，加水400份煎煮2-3h后过滤，得到滤液即为所述中草药提取液；
[0065] (2)进水消毒：向养殖池内注水至水深为1.5-1.6cm，加入漂白粉10kg/亩进行消毒；
[0066] (3)肥水管理：在消毒后2-3d向养殖池中撒入10kg/亩豆浆、1kg/亩EM菌和0.5kg/亩钙镁磷肥，静置15-20d；
[0067] (4)虾苗投放：选取长度为0.8-1.2cm的虾苗，放养密度为4-6万尾/亩，投放时水温为22-35℃；
[0068] (5)饲料管理：放苗后20-30d不投放人工饲料，20-30d之后投喂制备例3的南美白对虾微生物发酵饲料，每日早、中、晚共投喂3次，日投喂量为对虾体重的10-15％；
[0069] (6)水质调控：养殖中后期，每2-4d在养殖池喷洒所述中草药提取液；
[0070] (7)日常管理：在养殖期间于养殖池中补充淡水或海水至水位为1.5-1.8m，不进行排污或换水；在养殖前期和中期的晚上及阴雨天开启增氧机，养殖后期增氧机全天开启。
[0071] 对比例1为南美白对虾常规养殖方法。
[0072] 对比例2与实施例1的区别在于未使用中草药提取液喷洒养殖池内壁消毒。
[0073] 对比例3与实施例1的区别在于未使用南美白对虾微生物发酵饲料，使用常规饲料代替。
[0074] 对比例4与实施例1的区别在于养殖中后期未定期在养殖池内喷洒中草药提取液。
[0075] 实验例1不同养殖方法对南美白对虾非特异免疫的影响
[0076] 实验方法：采用实施例1-3和对比例1-4的方法分别养殖南美白对虾，每个处理均设置三个平行处理，随机
抽取不同处理中正常生长的南美白对虾，测定南美白对虾血清中的酚
氧化酶(PO)、血清过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力，结果如下表所示。
[0077] 表1不同养殖方法对南美白对虾非特异免疫的影响
[0078] PO(U/ml) POD(U/ml) SOD(U/ml)实施例1 0.0096 0.068 498.33
实施例2 0.0093 0.065 486.07
实施例3 0.0094 0.066 492.15
对比例1 0.0035 0.020 248.63
对比例2 0.0087 0.051 426.25
对比例3 0.0054 0.034 312.98
对比例4 0.0070 0.045 369.50
[0079] 由表1数据可知，与对比例1的常规养殖方法相比，采用本发明方法的实施例1-3对虾血清中的酚氧化酶、血清过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活力显著提高，说明本发明的养殖方法能够提高南美白对虾的非特异免疫。
[0080] 与实施例1相比，对比例2-4中三种酶活性均有一定提高，其中对比例2活性较接近实施例1，而对比例3三种酶活性提高幅度较小。
[0081] 实验例2不同养殖方法的对虾白斑
病毒感染实验
[0082] 实验方法：随机抽取不同处理中正常生长的南美白对虾，停食24h，投喂一次相当于其体重15％的已感染白斑病毒的对虾肌肉，之后正常投喂，随时取出死亡对虾，并记录感染后10d内各处理累计死亡率，计算相对免疫保护率，结果如下表所示。
[0083] 相对免疫保护率＝(1-实验组死亡率/对照组死亡率)×100％
[0084] 表2不同养殖方法的对虾白斑病毒感染实验
[0085]
[0086]
[0087] 由表2数据可知，对虾感染白斑病后10d，采用常规养殖方法的对比例1对虾累计死亡率达到98.3％，实施例1-3中累计死亡率平均为29.9％，显著低于对比例1，说明本发明的养殖方法能够显著提高南美白对虾抵抗疾病的能力，相对免疫保护率平均达到69.62％。
[0088] 对比例2未使用中草药提取液喷洒养殖池内壁消毒，其累计死亡率为42.7％；对比例3未使用南美白对虾微生物发酵饲料，使用常规饲料代替，其累计死亡率为69.1％，相对免疫保护率仅有29.70％；对比例4在养殖中后期未定期在养殖池内喷洒中草药提取液，其累计死亡率达到58.5％，说明投喂本发明的南美白对虾微生物发酵饲料、采用本发明制备的中草药提取液喷洒养殖池和定期加入池水能够有效提高对虾免疫力。
