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报偿缺陷综合征的等位基因多基因诊断和治疗

阅读：617发布：2020-07-06

专利汇可以提供报偿缺陷综合征的等位基因多基因诊断和治疗专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且通过给予内啡肽酶 抑制剂 或内啡肽酶抑制剂和选择性地一种多巴胺前体或者一种5－羟色胺前体、一种GABA前体或者一种内啡肽或内啡肽酶释放剂或者包括Rhodiola rosea提取物(Pharmaline)和/或石杉 碱 的某些草药化合物获得了注意 力 过程的加强。这些成分促进正常神经递质功能的恢复而且联合的成分提高多巴胺在伏核处的释放,而且是非成瘾性的。利用多巴胺前体L－苯丙 氨 酸、或L－酪氨酸、内啡肽酶抑制剂D－苯丙氨酸、和/或5－羟色胺前体5－羟 色氨酸 以及天然的乙酰胆碱酯酶抑制剂和铬盐(如吡啶 甲酸 盐 、烟酸盐等)特别优选地,但并不限于,帮助缓解与大脑苯丙氨酸 缺陷 相关的症状。，下面是报偿缺陷综合征的等位基因多基因诊断和治疗专利的具体信息内容。

1.一种用于在受试者中治疗RDS行为的组合物，其基本构成如下：
a)抑制阿片破坏量的至少一种抑制神经肽酰阿片的酶解破坏的物 质，所说的物质选自：氨基酸、肽、及其结构类似物或衍生物；
b)神经递质合成促进量的至少一种神经递质前体，它选自：多巴胺 前体L-酪氨酸、L-苯丙氨酸和L-多巴，5-羟色胺前体L-色氨酸和5-羟 色氨酸，和γ氨基丁酸(GABA)前体L-谷氨酰胺、L-谷氨酸和L-谷 氨酸盐；以及
c)色氨酸浓度增强量的吡啶甲酸铬或烟酸铬，
上述的物质或神经递质前体以及铬化合物的量是可以有效减少受试者 的RDS行为的。
2.一种用于预防或治疗多余体重增加的组合物，其基本构成如下：
a)抑制阿片破坏量的至少一种抑制神经肽酰阿片的酶解破坏的物 质，所说的物质选自：氨基酸、肽、及其结构类似物或衍生物；
b)神经递质合成促进量的至少一种神经递质前体，它选自：多巴胺 前体L-酪氨酸、L-苯丙氨酸和L-多巴，5-羟色胺前体L-色氨酸和5-羟 色氨酸，和γ氨基丁酸(GABA)前体L-谷氨酰胺、L-谷氨酸和L-谷 氨酸盐；以及
c)色氨酸浓度增强量的吡啶甲酸铬或烟酸铬，
上述的物质或神经递质前体以及铬化合物的量是可以有效防止或降 低受试者的多余体重的。
3.一种用于预防或治疗注意缺陷障碍的组合物，其基本构成如下：
a)抑制阿片破坏量的至少一种抑制神经肽酰阿片的酶解破坏的物 质，所说的物质选自：氨基酸、肽、及其结构类似物或衍生物；
b)神经递质合成促进量的至少一种神经递质前体，它选自：多巴胺 前体L-酪氨酸、L-苯丙氨酸和L-多巴，5-羟色胺前体L-色氨酸和5-羟 色氨酸，和γ氨基丁酸(GABA)前体L-谷氨酰胺、L-谷氨酸和L-谷 氨酸盐；
c)色氨酸浓度增强量的吡啶甲酸铬或烟酸铬；以及
d)神经递质合成促进量的至少一种神经递质合成促进物质，它选自 Rhodila或石杉碱，
选择上述的物质、神经递质前体、无机化合物以及神经递质合成促进 物质，使该组合物可以有效降低注意缺陷障碍，改善注意力处理或记 忆。
4.一种治疗受试者的RDS行为的方法，所述行为基本选自：SUD、肥 胖、吸烟、抽动-秽语综合症、ADHD、分裂样/回避行为、创伤后应激 综合症、PMS或烟草使用，该方法包括给予受试者如下组合物，它包 括：
a)抑制阿片破坏量的至少一种抑制神经肽酰阿片的酶解破坏的物 质，所说的物质选自：氨基酸、肽、及其结构类似物或衍生物；
b)神经递质合成促进量的至少一种神经递质前体，它选自：多巴胺 前体L-酪氨酸、L-苯丙氨酸和L-多巴，5-羟色胺前体L-色氨酸和5-羟 色氨酸，和γ氨基丁酸(GABA)前体L-谷氨酰胺、L-谷氨酸和L-谷氨 酸盐；以及
c)色氨酸浓度增强量的吡啶甲酸铬或烟酸铬。
5.权利要求4的方法，其中所说的给药是在每天的饮食消耗中含有32 到10,000mg DL-苯丙氨酸、5到5,000mg L-色氨酸、3到30,000 mg L-谷氨酰胺，所述组合物还进一步含有1到300mg吡哆醛-5’-磷 酸。
6.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为是肥胖。
7.权利要求6的方法，其中所说的给药是在每天的饮食消耗中含有 460mg DL-苯丙氨酸、25mg L-色氨酸、25mg L-谷氨酰胺，该混 合物还进一步含有5mg吡哆醛-5’-磷酸。
8.权利要求6的方法，其中受试者具有化学品依赖的家族史，所说的 家族史提示成功的可能性提高。
9.权利要求6的方法，其中所说的给药抑制暴食行为。
10.权利要求6的方法，其中所说的给药抑制成瘾。
11.权利要求6的方法，其中在受试者中存在至少一种下列等位基因 提示成功反应的可能性提高：D2 TaqI A1、B1、C1或外显子6-7单倍 型，HTR2A-C等位基因纯合，OB-1875二核苷酸重复多态性＜ 208bp等位基因纯合性，人类2号染色体微卫星多态性，APO-D-TaqI 2.2或2.7bp，或OB基因D7S1875等位基因。
12.权利要求6的方法，其中所说的给药包括服用有效剂的烟酸铬， 且受试者中存在DRD2 A1等位基因提示反应的可能性提高。
13.权利要求11的方法，其中所说的给药包括服用有效量的吡啶甲酸 铬，且受试者中存在DRD2 A2等位基因提示反应的可能性提高。
14.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为是烟草使用。
15.权利要求14的方法，其中在受试者中存在至少一种下列等位基因 提示成功反应的可能性提高：D1(Dde A1纯合性)，D2(TaqI A1)， D4(VNTR2)，D5(二核苷酸13等位基因，范围在135-159bp)，DAT1 VNTR(10/10)，DβH(TaqI B1等位基因)。
16.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为进一步包括：孤独癖、抽 动-秽语综合症或ADHD，并且其中所说的受试者含有至少一种下列等 位基因：D(Dde A纯合性)，D(Taq)，D(VNTR)，D(二核苷酸等位基因 范围-bp)，DAT VNTR(/)，DβH(Taq B等位基因)， MAOA(X)，至少一种等位基因的存在提示成功反应的可能性提高。
17.权利要求16的方法，其中所说的给药进一步包括服用有效剂量的 Rhodila或石杉碱。
18.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为是病理性赌博，并且在受 试者中存在至少一种下列等位基因提示成功反应的可能性提高： D(Dde A纯合性)，D(Taq A，B，C)。
19.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为进一步包括病理性暴力、 分裂样/回避症(SAB)、攻击、发怒、敌意或创伤后应激障碍，其中 在受试者中存在至少一种下列等位基因提示成功反应的可能性提高： D(Taq A，B，C，外显子)，DAT(VNTR/)，mNOSIa-对于≤BP 等位基因的纯合性。
20.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为是PMS，其中存在至少一 种下列等位基因提示成功反应的可能性提高：DAT1 VNTR(10/10)，D2 TaqI A1，B1，C1，外显子6-7单倍型，或来自于DRD1、DRD2、 DRD4、HTT、HTRIA、TDO2、DβH、MAO、COMT、GABRAB、GABRB3、 PENk、ADRA2A或ADRA2C基因的等位基因。
21.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为进一步包括物质滥用障 碍。
22.权利要求21的方法，其中所说的RDS行为是物质使用障碍。
23.一种确定受试者对至少一种RDS行为的遗传素质的方法，包括检 测下组中的至少一种等位基因：DRD1，DRD2，DRD3，DRD4，DRD5， DAT1，HTT，HTRIA，TDO2，DβH，ADRA2A，ADRA2C，NET，MAOA， COMT，GABRA3，GABRB3，CNR1，CNRA4，NMDAR1，PENK，AR，CRF， HTRIDβ，HTR2A，HTR2C，γ-干扰素，CD8A，或PSl基因。
24.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：涉及躁狂、OCD、 性、睡眠、小学行为、赌博、学习、无注意力、ADHD、ADDR、冲动 性、MED，、CD、多动、恐怖、分裂样行为、广泛焦虑、躯体化、药 物、静脉注射药物、阅读、ODD、抽动、酒精或烟草使用的障碍。
25.权利要求24的方法，其中所说的等位基因是MAOA基因的VNTR多态 性。
26.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是分裂样或回避症。
27.权利要求26的方法，其中所说的等位基因选自：DRD2基因A1等位 基因，DAT1基因VNTR10/10等位基因，DβH基因B1等位基因。
28.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是药物使用。
29.权利要求29的方法，其中所说的等位基因是在CNR1基因中 (AAT)n三联重复序列数增加。
30.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：肥胖，焦虑，抑 郁，精神病，敌意，偏执观念，强迫，症状总和，一般症状指数，追 求新奇，整体总和，神经过敏症和谨慎。
31.权利要求30的方法，其中所说的等位基因选自：在OB基因中 D7S1873、D7S1875、D7S514或D7S680二核苷酸重复序列数增加。
32.权利要求31的方法，其中所说的D7S1875二核苷酸重复序列在 CNR1基因的两个拷贝中的数目都大于225bp长度。
33.权利要求32的方法，其中所说的等位基因是DRD2基因的D2A1等位 基因。
34.权利要求30的方法，其中所说的检测是检测DRD2基因的D2A1等位 基因，和从下面的组中选择出来的一个等位基因，该组包括：OB基因 中D7S1873、D7S1875、D7S514或D7S680二核苷酸重复序列数增加。
35.权利要求34的方法，其中所说的确定是用于肥胖。
36.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：抽动—秽语综合 症、躁狂症状、对立违抗、性、ADHD-R、分裂样、ADHD、抽动、重性 抑郁、品行、口吃、强迫、躯体化、酒精滥用、学习和睡眠问题。
37.权利要求36的方法，其中所说的等位基因是DRD2基因的D2A1等位 基因。
38.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：抽动—秽语综合 症、ADHD、吸烟、学习、小学行为、ADHD-R、对立违抗、抽动、躁 狂、酒精、阅读、药物滥用、睡眠、口吃、强迫、躯体化和重性抑 郁。
39.权利要求38的方法，其中所说的等位基因是DβH基因的Taq A1等 位基因。
40.权利要求36的方法，其中所说的RDS行为是抽动—秽语综合症， 其中所说的确定是通过检测DβH基因中Taq B1和Taq A1等位基因数增 加来进行的。
41.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：抽动—秽语综合 症、孤独癖、躯体化、酒精、ADHD-R、重性抑郁、恐慌、强迫、广泛 性焦虑、躁狂、对立违抗、性、阅读和ADHD。
42.权利要求41的方法，其中所说的抽动—秽语综合症是通过检测 DAT1基因的至少一个10等位基因数目增加来进行的。
43.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：ADHD、口吃、 ADHD-R、对立违抗、抽动、品行、强迫、躁狂、酒精、广泛性焦 虑、恐慌、分裂样、睡眠、性、药物和重性抑郁。
44.权利要求43的方法，其中所说的RDS行为是通过检测至少一种等 位基因的数目增加来进行的，这些等位基因选自：DAT1基因的10等位 基因、DβH基因的Taq A1等位基因、DRD2基因的D2A1等位基因。
45.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：酒精、吸烟、强 迫进食、抽动、赌博、药物、阅读，购物、对立违抗，重性抑郁发 作、分裂样、ADHD、品行障碍、强迫症和躁狂。
46.权利要求45的方法，其中所说的确定是通过检测DRDI基因的 DdeI等位基因的纯合性来进行的。
47.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：对立违抗、品行 障碍、进食、吸烟、赌博、ADHD、强迫症、躁狂和酒精。
48.权利要求47的方法，其中包括检测DRD2基因的TaqI A1和TaqI A2等位基因。
49.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：抽动—秽语综合 症、吸烟和赌博。
50.权利要求49的方法，其中所说的确定是通过检测DRD1基因的11 或22基因型而进行的。
51.权利要求50的方法，其中所说的确定是通过检测每个基因组两个 拷贝的DRD1基因的Dde1等位基因而进行的。
52.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：对立违抗、品行 障碍、冲动进食、吸烟、赌博、ADHD、躁狂、口吃、强迫症和分裂 样行为。
53.权利要求52的方法，包括所说的确定是通过检测DRD1基因的11 基因型的数目增加而进行的。
54.权利要求23的方法，其中所说的确定是通过检测DRD2 A1等位基 因而进行的，而所说的RDS行为选自：赌博、吸烟、强迫进食、对立 违抗、重性抑郁发作、ADHD、品行障碍、分裂样、强迫症、躁狂和 酒精。
55.权利要求54的方法，其中所说的确定是通过检测每个基因组两个 拷贝的DRD1基因的Dde1等位基因而进行的。
56.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：酒精、吸烟、强迫 进食、抽动、赌博、药物、阅读、购物、赌博和小学问题。
57.权利要求56的方法，其中所说的确定是通过检测DRD1基因的11 或22基因型而进行的。
58.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是抽动—秽语综合症。
59.权利要求58的方法，其中所说的确定是通过检测色氨酸2，3二氧 化酶基因的内含子6G→A多态性来进行的。
60.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：ADHD、 酒精依赖、药物依赖、病理性赌博。
61.权利要求60的方法，其中所说的确定是通过检测色氨酸2，3二氧 化酶基因的内含子6G→T多态性来进行的。
62.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：ADHD、酒精依 赖、药物依赖、病理性赌博和抑郁症。
63.权利要求62的方法，其中所说的确定是通过检测色氨酸2，3二氧 化酶基因的内含子6DGGE多态性来进行的。
64.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是药物使用。
65.权利要求64的方法，其中所说的确定是通过检测ADRA2C二核苷酸 多态性的低数目碱基对等位基因(≤181bp)的多态性来进行的。
66.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是酒精使用。
67.权利要求66的方法，其中所说的确定是通过检测ADRA2C二核苷酸 多态性的高数目碱基对等位基因(≥183bp)的多态性来进行的。
68.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：酒精和烟草使 用。
69.权利要求68的方法，其中所说的确定是通过检测早衰素-1 (PS1)多态性的两个同源等位基因来进行的。
70.权利要求68的方法，其中所说的确定是通过检测PENK基因CA二核 苷酸重复序列多态性的大于80bp的两个同源等位基因来进行的。
71.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：CD、ODD或多动 症。
72.权利要求71的方法，其中所说的确定是通过检测AR基因的短GGC 等位基因的存在来进行的。
73.权利要求23的方法，其中所说的确定是确定酒精中毒者、可卡因 成瘾者或RDS先证者中的B型行为的素质，包括在上述患者中检测与所 说的素质相关的DRD2等位基因的存在来进行的。
74.一种确定多基因性状的遗传素质的方法，包括检测与下组基因相 关的至少一种等位基因，该组包括：DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、 HTT、HTRIA、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、 GABRA3、GABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、CRF、DRD3、 DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ-干扰素、CD8A或PS1基因。
75.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对ADHD的遗传素质， 并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些 基因是：DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTRIA、TDO2、DBH、 ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、GABKB3、CNR1、 CNRA4、NMDAR1、PENK、AR或CRF基因。
76.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对ADHD缺乏易感性的 遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位 基因，这些基因是：DRD3、DRD4、NTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ-干 扰素、CD8A、PS1基因。
77.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对ODD的遗传素质， 并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些 基因是：DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、 DBH、ADRA2A、ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、 NMDAR1、PENK、AR或CD8A基因。
78.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对抽动的遗传素质， 并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些 基因是：DRD1、DRD5、HTR1A、HTR1Dβ、NTR2C、TDO2、DBH、 ADR2C、COMT、GABRA3、CNR1或CHRNA4基因。
79.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对LD的遗传素质，并 且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基 因是：DRD1、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2A、ADR2C、MAOA、CNR1或 CNRA4基因。
80.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对LDL水平升高的遗 传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基 因，这些基因是：HTT、OXYR、DRD2或PS1基因。
81.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对胆固醇水平升高的 遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位 基因，这些基因是：HTT、OXYR、DRD2或PS1基因。
82.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对长寿的遗传素质， 并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些 基因是：PS1、OXYR、或APOE基因。
83.一种发展诊断性多基因检测的方法，包括下列步骤：
a).鉴定所研究的性状，
b).创造一种用于测量所研究性状之严重性的量度，
c).选择至少一种可能对所说的性状有贡献的侯选基因，
d).鉴定至少一种与所说的侯选基因有关联的多态性，
e).将所述多态性的等位基因模式与所说的量度关联，
f).将所说的等位基因模式的关联与所述侯选基因与所述性状的 相关性进行比较，和
g).那些与所说的特点具有正关联的等位基因模式被加进来，形 成诊断性多基因检测。
84.权利要求83的方法，其中侯选基因包括：DRD1、DRD2、DRD5、 DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、 COMT、GABRA3、GABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、CRF、 DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ-干扰素、CD8A、或PS1 基因。
85.权利要求83的方法，其中多基因性状包括：ADHD、ADHD缺乏， ODD、CD、LD、抽动、药物滥用/依赖、吸烟、骨关节炎、胆固醇水平 升高、LDL水平升高或长寿。
86.权利要求85的方法，其中对所述ADHD的所述多基因检测包括检测 与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD1、DRD2、 DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、 MAOA、COMT、GABRA3、GABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、 或CRF基因。
87.权利要求85的方法，其中对所述ADHD缺乏的所述多基因检测包括 检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD3、 DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ-干扰素、CD8A、或PS1基 因。
88.权利要求85的方法，其中所说的对所说的ODD的多基因鉴定包括 检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD1、 DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、ADRA2A、 ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、NMDAR1、PENK、 AR或CD8A基因。
89.权利要求85的方法，其中对所述抽动的多基因检测包括检测与下 列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD1、DRD5、 HTR1A、HTR1Dβ、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2C、COMT、GABRA3、 CNR1或CHRNA4基因。
90.权利要求85的方法，其中对所述LD的多基因检测包括检测与下列 基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD1、HTR2C、TDO2、 DBH、ADR2A、ADR2C.MAOA、CNR1或CNRA4基因
91.权利要求85的方法，其中对所述LDL水平升高的多基因检测包括 检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：HTT、 OXYR、DRD2、或PS1基因。
92.权利要求85的方法，其中对所述长寿的多基因检测包括检测与下 列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：PS1、OXYR或APOE基 因。
93.权利要求85的方法，其中对所述骨关节炎的多基因检测进一步包 括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：COL2A1、 COL2A1、COL2A1、COL9A1、COL9A1、AGC1、IGF1、IGF1、IGF1R、 IGF1R、IGF2、IGF2R、TGFB1、TGFB2、IL1A、IL1B、IL1R1、 IL1RN、MMP9、TIMP1或维生素D3基因。
94.一种用于在受试者中治疗RDS行为的组合物，其基本构成如下：
a)抑制阿片破坏量的至少一种可以抑制神经肽酰阿片的酶解破坏的 物质，所说的物质选自氨基酸、肽以及其结构类似物或衍生物；
b)一种脑啡肽酶释放物质，它释放神经元的脑啡肽或内啡肽，所说 的物质选自多肽或氨基酸；和
c)阿片拮抗量的至少一种阻滞阿片在δ、μ、κ、σ或ε受体上之 效果的化合物，所说的物质选自麻醉拮抗剂如nalopotone或 IC1154129，
上述的物质、神经递质前体、铬化合物以及阿片拮抗剂的量是有效减 少受试者的RDS行为的。

说明书全文

发明背景

依照国家药物滥用研究所的基金1-ROI-DA08417号以及烟草相关研 究疾病计划基金4RT-0110政府拥有本发明中的权利。 1、发明领域

本发明部分涉及某些脱瘾成分的结合以及一些均参与报偿行为神 经递质功能的基因的特定基因分型。本发明的一个方面是理解在脑中 央边缘系统(meso-limbic system)中某些已建立的神经递质如何协同 工作活化神经通路、导致良好感觉，以及开发影响这些神经通路的物 质。本发明部分涉及利用前体氨基酸和某些草药化合物来提高注意力 处理过程和记忆以及在健康个体中增加注意力，并且促进体重减轻和 控制过食。本发明公开了利用神经递质基因的遗传多态性对各种神经 学异常和行为的各种诊断方法以及利用本发明的组合物治疗所鉴定患 者的治疗方法。还公开了对多基因性状的诊断方法。 2、相关领域的描述

在过去的几十年中，对于化学药物依赖性生物学基础的研究已经 能够确定参与报偿的一些大脑区域以及神经递质。特别是，对酒精、 阿片类物质以及可卡因的依赖看来有赖于一套共同的生物化学机制 (Cloninger，1983；Blum，1978；Blum，1989)。在大脑深处参与 边缘系统的一种神经元通路以及称为伏核和苍白球的两个区域在服药 (drugs)人的报偿表达中似乎是关键的(Wise和Bozarth，1984)。已 经证实可卡因、吗啡和酒精的慢性使用导致在边缘多巴胺系统中的几 种生物化学适应(Ortiz等，1996)。

中央边缘多巴胺系统联接脑中的高层结构特别框额叶皮质(在前额 后的额前区中)与在脑中央的杏仁体以及与伏核，其已经在动物研究 中被证实为成瘾中的一个主要活动位点。参与多种成瘾性的各种大 脑通路汇集于某些多巴胺能受体(D1、D2、D3、D4、D5)，其中D2位 点似乎最突出。虽然每种滥用的物质似乎作用于通路的不同部分，但 最后的结果是相同的：在伏核和海马中多巴胺被释放(Koob和Bloom， 1988)。多巴胺似乎是这些强化位点的报偿的主要神经递质。

多巴胺代谢的异常涉及几种行为，即性异常(Gessa和 Tagiamonte，1975)、躁狂(Goodwin和Jamison，1990)、分裂样 行为(Carlsson，1978；Snyder，1976)、ADHD(Shaywitz等， 1976)、品行障碍或攻击(Rofeness等，1986；Valzelli，1981； King，1986)、酒精滥用(Blum等，1990)和口吃。此外，已经报道 氟哌啶醇，一种DRD2受体拮抗剂，在一些口吃的治疗中有效(Murray 等，1977；Prins等，1980)。虽然5-羟色胺能机制最常参与强迫性 行为，但多巴胺的异常也已被考虑(Austin等，1991；Delgado等， 1990)。丘脑、基底核和额叶中的异常通路参与强迫性障碍(Baxter 等1992；Rauch等，1994；Modell等，1989)而特别是在纹状体和额 叶中多巴胺是一种主要的神经递质。

中枢去甲肾上腺能机制的缺陷常常参与注意缺陷多动障碍的病因 学。已经证实，同没有认知缺陷的ADHD儿童相比，具有阅读和其它认 知缺陷的ADHD儿童中血浆去甲肾上腺素(NA)显著增加(Halperin 等，YEAR)。他们推测ADHD+认知缺陷同影响顶/颞叶注意中枢的NA 失调相关。由于这些大脑区域邻近听觉和语言处理区，所以这可能引 起共生的认知障碍。从临床角度看，用可乐定治疗后通常发生症状的 显著改善(Hunt等，1985；Comings等，1990)，这提示在至少某些 ADHD中NA的作用。可乐定是一种突触前a2-去甲肾上腺素能受体拮抗 剂，其导致去甲肾上腺素释放入突触的抑制(Starke等，1974)。

据推测，NA和蓝斑(LC)在注意力的重要方面觉醒和不眠中发挥 作用(Aston-Jones等，1984)。据推测，对任务的应激耐受力和良 好的表现同儿茶酚胺低基础或紧张水平以及在精神应激时较高的急性 释放相关(Dienstbier，1989)。在ADHD中可能相反，具有一增高的 NA基线紧张刺激以及应激过程中儿茶酚胺的降低释放(Pliszka等， 1996)。为检测NA缺陷参与ADHD的假设，进行了许多CSF、血浆和尿 中NA代谢物(3-甲氧基-4-羟基苯基甘油(MHPG))排泄的研究。 一些研究表明ADHD患者具有低于对照的MHPG排泄率(Oades，1987； Shekim等，1983；Shekim，Dekirmenjian和Chapel，1997；Yu-cum 和Yu-feng，1984)而其它的研究表明没有变化(Rapoport等， 1978；Zametkin等，1985)或者NA转化的增加(Khan和 Dekirmenjian，1981)。已经报道同对照相比，在ADHD主体中，肾上 腺素水平明显较低(Hanna等，1996；Klinteberg和Magnusson， 1989；Pliszka等，1994)，或者表现出一种对葡萄糖摄取的迟钝反 应(Girardi等，1995)。去甲肾上腺素被由PNMT基因编码的苯乙醇 胺N-甲基转移酶转化为肾上腺素。

一种ADHD的模型基于肾上腺素的障碍来强直性抑制蓝斑NA神经 元。据报道，均通常用于ADHD治疗的d-安非他明和去甲丙咪嗪导致 MHPG排泄的显著降低(Mefford和Potter，1989；Shekim等， 1979)。然而，用于ADHD治疗最常用的药物哌醋甲酯(利他林)并不 引起MHPG排泄的降低(Zametkin等，1985)，而其它降低MHPG排泄的 药物例如氟苯丙胺(Donnelly等，1989)在治疗ADHD中无效。这些观 察同存在几种类型的ADHD以及多种神经递质和基因的参与相一致。

据推测NA和肾上腺素能α2受体在一些形式的ADHD中通过在顶/颞叶 的皮质后注意力系统的LC处的失调来发挥作用(Posner和Peterson， 1990；Pliszka，1996)，而另一种形式的ADHD是由于主要影响同冲 动性和执行障碍相关的前额叶注意力系统的多巴胺能缺陷。已经发现 几种多巴胺能基因，例如多巴胺D2受体(DRD2)(Comings等， 1991)、多巴胺D4受体(DRD4)(Lahoste等，1996)以及多巴胺转 运蛋白(DAT1)(Cook等，1995；Comings等，1996；Gill等， 1997；Waldmaqn等，1996)基因同ADHD相关。

据报道，具有ADHD和阅读障碍的男孩血浆MHPG水平显著高于仅仅 具有ADHD的男孩(Haperin等，1993；Halperin等，1997)。在后一 研究中，他们还证实了在血浆MHPG水平和WISC-R言语IQ、以及通过 WRAT-R(修订的宽范围成就测试)评价的阅读、拼写和算术问题之间 显著的负相关。这种不同与表明具有认知障碍的ADHD是ADHD的一种不 同亚型的先前他人的研究(August和Garfinkel，1989；McGee等， 1989；Pennington等，1993)一致。还已经表明，同顶叶缺陷相关的 注意缺陷类型倾向于一种选择性的注意缺陷(Posner和Peterson， 1990；Dykman等，1979；Richards等，1990)。

据推测，ADHD+认知障碍是由于一种涉及肾上腺素能α2受体的LC 的NA代谢失调，并且主要影响顶叶皮质的后注意系统(Halperin等， YEAR)。由于这些脑区域邻近听觉和语言处理区域，这可能导致共生 的认知障碍。由于ADHD是一种多基因异常(Comings等，1996)，因 此假定这些是纯的形式是错误的，而大多数的个体可能具有两种类型 的遗传基因。灵长类中的研究表明NA和肾上腺素能α2受体的缺陷在额 前叶认知缺陷中也发挥作用(Arnsten，1997)。

多种研究已经提示多巴胺受体参与成瘾行为。可卡因患者在他们 的神经元活动水平上表现出降低，这同接受多巴胺能力降低是一致的 (Volkow等，1993)。在吗啡成瘾的大鼠中具有D2多巴胺受体的神经 元表现为减小25％，并失去大部分它们从邻近神经元接受小量多巴胺 的能力(Nestler等，1996)。在阿片类物质依赖主体中观察到的D2 受体的减少，据推测这提示在他们开始滥用药物前主体便具有低的D2 受体，而且这种降低可能使他们更易于自我服药(Wang等，1997)。

虽然参与报偿生物学的神经递质系统是复杂的，但已知至少三种 其它的神经递质在大脑的几处位点参与：5-羟色胺在下丘脑、内啡 肽(阿片样肽)在腹侧盖区和伏核、以及抑制性神经递质GABA在黑 质、腹侧盖区和伏核(Stein和Belluzzi，1986；Blum和 Kozlowski，1990)。有趣的是，葡萄糖受体是下丘脑中5-羟色胺能 系统和阿片样肽之间的一个重要连接。另一报偿通路包括在海马中由 蓝斑发源的神经纤维对去甲肾上腺素的释放。

有阿片能和多巴胺能系统在解剖上和功能上相互关连的证据，这表 明内源性阿片能系统在介导酒精和其它药物对与报偿相关的大脑多巴 胺能通路的效应中有作用。多巴胺拮抗剂以及大脑中多巴胺能通路的 损伤影响前内啡肽原A活性(Morris等，1988；Normand等，1988)。 行为学、药理学以及神经化学研究表明阿片能和多巴胺能系统在增强 酒精和其它药物滥用的效应中有作用(Blum等，1976a，b；Blum， 1982a；Blum，1977；Blum，1973；Koob和Bloom，1988；Weiss等， 1993)。动物研究显示阿片受体激动剂增加对酒精的偏爱，而这些受 体的拮抗剂则降低酒精的消耗(Blum，1975；Le等，1993)。此外， 对动物和人酒精中毒者的研究表明阿片受体拮抗剂在降低酒精消耗的 正性强化效应(positive reinforcing effects)中是有效的 (O’Malley，1992；Swift等，1994；Blum，1975；Volpicelli等， 1992)。另外，在动物中乙醇诱导的大脑多巴胺水平的增加被阿片受 体拮抗剂纳络酮和纳曲酮阻断(Widdowson和Holman，1992；Benjamin 等，1993)。最近由Gianoukalis和de Waele所作的综述(1994)支持 内源性阿片样物质和滥用药物(酒精)的作用。

在正常人中，这些神经递质在刺激和复杂反应之间的一种激动或 抑制级联反应中共同工作，导致一种良好感觉，最终报偿。在报偿的 级联反应原理中，这些细胞间相互作用的破坏导致消极情绪。包括某 些多态性的遗传异常、长期紧张或精神活性药物(包括葡萄糖)的长 期滥用在动物和人中均可以导致异常成瘾的自我持续模式(Blum， 1991)。

药理的作用(溴环肽、安非他酮和N-丙基去甲阿扑吗啡)部分是 由个体的多巴胺D2基因型决定的。DRD2基因的A1携带者药理学上对D2 激动剂反应更强。一个研究已经显示将D2激动剂N-丙基去甲阿扑吗啡 直接显微注射至如大鼠的伏核中显著抑制动物阿片类物质戒断后的症 状，而多巴胺本身抑制酒精的戒断症状(Harris和Aston-Jones， 1994；Blum等，1976b)。在这方面，有多巴胺/内源阿片样肽在伏核 和大脑的其它处中相互作用的证据，而且可能是由外源性阿片类物质 对阿片样肽系统的过度刺激导致多巴胺功能的降低(Pothos等， 1991)。当同正常非酒精偏爱大鼠相比时，酒精偏爱大鼠在下丘脑中 具有较少的5-羟色胺神经元、在下丘脑中具有较高水平的内啡肽 (因为很少被释放)、在伏核中有更多的GABA神经元以及在边缘系统 的某些区域中低密度的D2受体(McBride等，1995；Smith等，1997； 和McBride等，1997)。

临床实验已经证明当向SUD或碳水化合物暴食的先证者给予某些神 经递质(5-羟色胺和多巴胺)的氨基酸前体以及D-苯丙氨酸(一种 通过抑制酶促裂解提高内啡肽活性的物质(美国专利号4,761,429和 5,189,064))时，发现减少成瘾、降低紧张的发病率、降低复发率 并且增加复原的的可能。

许多实验室追踪在某些基因和各种行为障碍之间的联系，包括多 巴胺D2受体等位基因同许多冲动性强迫性成瘾行为之间的关系。除有 研究通过SPECT扫描技术表明在抽动-秽语障碍患者中多巴胺转运蛋白 位点增加外(Malison等，1995；Tiihonen等，1995)，对于同DAT1 10/10等位基因或DβHB1等位基因相关联的多态性表达所知甚少。 ADHD、抽动-秽语综合征(TS)、品行障碍、ODD、阅读困难、学习障 碍、口吃、药物依赖以及酒精中毒均表现为男性为主。DRD2、DβH、 DAT的分子遗传学研究(Comings等，1996a)和临床遗传学研究 (Comings，1994b；1994c；1995b；Bierderman等，1991；Comings 和Comings，1987)表明这些是病因学上相关的系列障碍。已经有人 主张神经递质的缺陷参与酒精中毒(Blum，1991)。下面描述了参与 神经学通路的基因研究。

雄激素受体基因  据报道雄激素受体(AR)基因的特定突变引起 广泛类型的雄激素不敏感综合征(Gottlieb等，1977)。此外，导致 蛋白中多氨基酸束的两套多态性三核苷酸重复序列，CAG(Edwards 等，1992)和GGC(Sleddens等，1993；Sleddens等，1992)，存在 于AR基因的第一个外显子中。已表明，CAG三核苷酸重复序列当高度 扩扩展时，43至65倍，导致X连锁脊髓性肌萎缩(La Spada等， 1991)。在正常人群中重复序列的长度为11至31倍(Edwards等， 1992)。

在正常人群中存在的微卫星和小卫星的非高度扩增的等位基因可 能在基因的调节中发挥直接的作用。这是基于这样的观察，即大部分 短的串联的重复同Z-DNA的形成相关(Schroth等，1992)，而且Z- DNA重复参与基因调节的各个方面(Rich等，1984；Hamada等， 1982；Wolff等，1996)。由于所形成的Z-DNA的量对于重复的长度是 高度敏感的(Schroth等，1992)，所以提示重复等位基因的大小本 身可能同表型效应相关(Comings，1997)。

一些研究(Olweus等，1988；Mattsson等，1980；Schiavi等， 1984；Kreuz和Rose，1972)但并非所有的研究(Bradford和 McClean，1984；Schaal等，1998)提示攻击行为和血浆睾酮水平相 关。在TS加ADHD的主体中，攻击性行为障碍通常是一种共生病条件 (Comings，1995；Stewart等，1981；Biederman和Sprich，1991) 并且在TS和ADHD之间存在高程度共生性(Comings和Comings， 1984，1990；Knell和Comings，1993)。

多巴胺D1受体基因(DRD1)  在对照和患精神分裂症、躁狂抑郁和 酒精中毒的患者中进行DRD1基因的测序没有鉴定出对表型以及在精神 分裂症和TD的关联研究上产生效应的外显子突变(Jensen，1993k； Gelertner等，1993k)。在额叶皮质中的D1受体可能在记忆中发挥作 用(Comings等，1997k；Williams等，1995k)。已经报道了在大鼠 中D1和D2受体激动剂的对可卡因寻找行为的相反作用(Self等， 1996)。TD先证者、吸烟者以及病理性赌博者符合负杂种优势，其中 最一致的差别是Dde1多态性的12杂合子频率的相对降低以及11和22纯 合子的增加(Comings等，1996)。相反，正杂种优势存在于DRD2基 因，其定量评分12杂合子为最高，而11和22纯合子最低。虽然对于 ADHD的结果单独在DRD1位点并不显著，但检测在DRD1基因上的负杂种 优势和/或在DRD2基因上的正杂种优势的存在具有显著的加和效应 (Comings等，1997k)。

多巴胺D2受体基因(DRD2)以前的研究已经表明，在ADHD、 TS、CD和SUD的个体中，D2A1等位基因存在概率明显增加(Comings 等，1991)。由于这些障碍均以差的应激反应为特征，并且对于PTSD 的很多诊断标准具有许多同ADHD一致的症状，国家越南退伍兵再调节 研究(Kulka等，1990)报道了在PTSD和ADHD及CD一致性儿童期症状 史之间具有显著的相关性。从成瘾治疗中曾在越南经历激烈战争条件 的人中筛选创伤后应激障碍(PTSD)，并发现在PTSD同携带D2A1等位 基因的个体间具有相关性(Comings等，1996k)。

已经检测到在ADHD和DRD2基因的TaqA1等位基因之间的关联性 (Comings等，1991k)。刺激剂哌醋甲酯增加局部血流，而在其他人 中其降低血流。额叶、颞叶和小脑代谢的改变同D2受体的密度相关— —密度越高血流增加的越大。哌醋甲酯降低基底神经节中的代谢活 性。这些结果同这种观点一致，其认为导致在边缘系统和额叶中多巴 胺能状态的多巴胺代谢中的遗传缺陷引起在基底神经节中多巴胺能活 性的代偿性增高，以及哌醋甲酯通过联合其经过对多巴胺转运蛋白的 抑制提高大脑多巴胺能神经的多巴胺活性(Volkow等，1996k)以及 在基底神经节中多巴胺能活性的随后降低和基底神经节中血流的减少 来逆转这一现象。这些研究还同其他人的结果一致，表明在对哌醋甲 酯的反应和HVA的CSF水平间具有正相关性(Castellanos等， 1996k)，HVA是一种多巴胺的代谢物，其在CSF中的水平同D2受体的 密度相关。尽管在小脑中D2受体缺乏，但哌醋甲酯仍增加小脑的代谢 (Volkow等，1996k；Hall等，1994k)。这同越来越多的表明小脑在 注意力、学习以及记忆中发挥重要作用的证据是一致的(Leiner等， 1989k)。已经报道了在A1基因型和局部血流间的相关性。TaqI D2 A1携带者表现出在壳(豆状核)、伏核、额叶和颞叶的脑回以及中额 前叶、枕颞叶以及眶的皮质中相对葡萄糖代谢显著低于那些具有A22 基因型的个体(Nobel等，1997)。Taq D2 A1携带者在基底神经节中 具有显著降低的多巴胺D2受体Bmax(Nobel等，1991k)。内啡肽增加 同哌醋甲酯相似区域的血流并且因此可能参与一种多巴胺能机制 (Blum等，1985k)。在具有脱离(detachment)、社会隔绝以及缺 少亲密朋友的个体中检测到多巴胺受体密度的显著降低(Farde等， 1997k)。

虽然DRD2基因多态性同许多心理障碍相关，但在被禁闭的药物 滥用者中没有发现同某种精神病间具有相关性(Smith等，1993)。 在酒精中毒和DRD2等位基因之间相关性的报道变化较大，而已发现在 D2A1等位基因和多物质/药物滥用间的相关性(Smith等，1992； Noble等，1993；O’Hara等，1993；Comings等，1994；美国专利号 5,210,016和5,500,343)。在首次发现DRD2 A1和重度酒精中毒 间的相关性后(Blum等，1990)，几个研究组均不能重复出此观察结 果。提示具有两个可能的原因：第一，对于酒精、药物和烟草滥用对 照筛选不足；第二，疾病慢性性质和严重性鉴定方面的采样错误 (Blum等，1997；Bolos等，1990；Gelertner等，1991；Schwab 等，1991；Turner等，1992；Cook等，1992；Goldman等，1992； Goldman等，1993；Suarez等，1994)。

多巴胺起多种不同行为的调节剂的作用(LeMoal和Simon， 1991)，而且许多研究已经报道了在DRD2基因的等位基因和可卡因成 瘾、多物质滥用、吸烟、注意缺陷多动障碍(ADHD)、抽动-秽语综 合征、视觉-知觉障碍、行为障碍、创伤后应激障碍、病理性赌博以 及强迫进食之间具有显著的相关性(Blum等，1995；Blum等， 1996)。虽然有这些相关性，测序研究没有在外显子中发现能解释这 些发现的任何突变。如果D2A1等位基因同一未知的在调节DRD2功能中 发挥作用的非外显子突变联结失衡则可以解释这些发现(Comings 等，1991)。此外，已经报道酒精中毒的严重性和所用的对照的类型 是DRD2A1等位基因同酒精中毒相关性的重要决定因素(Noble等， 1994；Geijer等，1994；Parsian等，1991；Blum等，1990； Lawford等，1997)。

利用在DRD2位点的Taq1“A”RFLP和一种微卫星重复多态性在多 发罹患酒精中毒的家庭中进行的同胞对连锁分析表明，在该位点和发 展为重度酒精中毒的倾向性间具有显著的相关性。在DRD2基因中没有 发现相应的突变，该效应可能来自DRD2基因本身以外的一个紧密连锁 的位点(Cook等，1996)。已经证明了在酒精依赖患者的DRD2基因第 8外显子中的一个点突变(Finch等，1995)，而其他人报道在DRD2基 因的编码区中没有结构突变(Gejman等，1993)。

已经发现DRD2基因A1等位基因同许多行为相关，包括重度酒精中 毒、多物质依赖、克赖克(crack)/可卡因成瘾、吸烟、病理性赌 博、缺乏重性抑郁发作、以及碳水化合物暴食，或者概括为DSM-IV物 质利用障碍(Blum等，1996e；Blum等，1995b；Comings等， 1996c)。同其他轴II(Anix II)诊断群(反社会、自恋、妄想 狂)相比，MCMI-II评价的分裂样/回避群同酒精滥用的量表显著相关 (Corbisiero等，1991)。具有代表分裂样/回避品质的MCMI-II升高 的患者群倾向于维持治疗少些天，而且复发较早(Fals-Stewart， 1992)。分裂样/回避群的高分同无耐心的男性酒精中毒者(Matano 等，1994)以及可卡因依赖的患者(Kranzler和Satel，1994)相 关。发现分裂样/回避行为(包括低水平感觉)比具有高水平感觉的 患者消耗更多的酒精并具有更高的MAST评分(Ohannessian和 Hesselbrock，1995)；而且在具有重度暴食障碍的受试者中回避人 格显著相关(Yanovski等，1993)。

在健康个体和酒精中毒者中表现出多巴胺受体基因处的分子杂种 优势。比较健康自愿者同DRD2 TaqI A1A2和B1B2基因型的脑脊液中单 胺代谢物水平，包括多巴胺的HVA、5-羟色胺的5-HIAA以及去甲肾上 腺素的MHPG。结果表明在1，1+1，2纯合子对1，2时具有统计学显著 的差异，而在分析1，1+1，2对2，2基因型以及1对2等位基因时则没 有。TaqI B1B2多态性得出几乎相同的结果(Jonsson等，1996)。相 反，在芬兰和美国酒精中毒者中检测CSF HVA水平和DRD2 TaqI A1/A2 多态性，当检测1对2等位基因时未发现相关性，而在1，1+1，2对2， 2基因型时也没有(Goldman等，1992)。

通过比较HVA的CSF水平表明DRD2基因处的杂种优势为利用TaqI多 态性的DRD2基因型(Jonsson等，1996k)。在用于TD受试者的注意力 不集中评分 表中，12个杂合子表现为最高的注意力不集中评分受试者，他们是具 有最低水平的CSF HVA的12个杂合子(Jonsson等，1996)。在11个纯 合子中观察到最高水平的HVA，22个纯合子为中等。一些研究，并非 所有的研究表明在患有ADHD和TD的儿童中(Shaywitz等，1979k)CSF HVA水平明显较低(Cohen等，1979k)。在电生理异常和DRD2 A1等位 基因间发现具有显著的相关性(Blum等，1994k)。这些异常在ADHD 受试者以及酒精中毒的儿童中可以观察到(Comings等，1991k； Noble等，1994k)。

据报道在DRD2基因的TaqA1和注意力缺乏障碍(ADHD)及抽动-秽 语症之间具有正相关性(Comings等，1991；Comings等，1996a)， 而其他人发现同ADHD先证者没有相关性(Sunohara等，1996)。ADHD 先证者表现出同D4基因的48bp变体具有显著的相关性，而同DRD2、 DRD3或5-羟色胺转运蛋白基因则没有。DRD4的7倍重复等位基因在具 有ADHD的儿童中明显更频繁地出现。有D4受体基因的7倍重复等位基 因同新奇追求(以冲动、探究、浮躁、易怒、脾气急噪以及言行放肆 为特征)具有相关性的证据(Epstein等，1996；Benjamin等， 1996)。在可卡因依赖先证者中DRD2 A1等位基因同相反的状态相 关：低的新奇追求，其以熟虑、倔强、禁欲、慢脾气、回避、以及具 有加强的退缩抑郁为特征(Compton等，1996)。分子遗传学研究已 经发现D2多巴胺受体(DRD2)A1等位基因同酒精中毒和药物滥用间的 相关性(Blum等，1990)。已经表明同那些没有A1等位基因的 (A1-)相比，在携带A1等位基因(A1+)的受试者中具有降低的中枢 多巴胺能功能(Nobel等，1997)。虽然目前许多研究表明DRD2基因 在许多严重病例中具有显著的作用，但负责酒精中毒的基因仍未知 (Noble，1993；Blum等，1995)。

已经将DRD2基因同强迫行为(Comings和Comings，1987b)和成 瘾、冲动行为，包括强迫性进食、赌博以及吸烟相关联(Self等， 1996；Ogilvie等，1996；Blum等，1995b；Blum等，1996e)。据以 前报道在与TS群不同的受试者中这些行为同DRD2基因相关(Comings 等，1993a；Noble等，1994d；Blum等，1996a；Comings等， 1996c；Noble等，1994c；Noble，1993；Comings等，1996e)。

在酒精中毒者中多巴胺D2受体显著少于非酒精中毒者，并且同最 后一次酒精中毒后的天数无关(Volkow等，1997)。DRD2受体对转运 蛋白量的比例在非酒精中毒者中明显高于酒精中毒者。同非酒精中毒 者相比，酒精中毒者表现出D2受体(突触后标志)而非DA转运蛋白量 (突触前标志)的显著降低。由于纹状体中的D2受体主要位于GABA细 胞中，这些结果提供了GABA参与酒精中毒者中所见的多巴胺能异常的 证据。

多巴胺D3受体基因(DRD3)缺失DRD3基因的敲除(knockout)小鼠 显著地比它们带有正常DRD3基因的同窝小鼠活跃(Williams等， 1995k)。已经发现所报道的精神分裂症在DRD3位点处的负杂种优势 (Crocq等，1992k)。在TD(Comings等，1993j)和病理性赌博 (Comings等，1996)中DRD3MscI 12杂合性显著降低。

多巴胺D4受体基因(DRD4)  在多巴胺D4受体基因(DRD4)中，已 报道了在编码负责结合至鸟嘌呤核苷酸蛋白的第三个胞浆环的DNA内 具有一个48bp和16个氨基酸重复的多态性(Van Tol等，1992k； Lichter等，1993k)。该DNA区域重复2至11次，最常见的等位基因为 2、4和7次重复。7等位基因通过细胞内腺苷环化酶的抑制表现一种对 多巴胺迟钝的反应(Asghari等，1995k)。正常受试者的两个独立的 研究已经表明在7等位基因的存在和新奇追求(novelty seeking) (一种同冲动相关的性状)间具有相关性(Benjamin等，1996k； Ebstein等，1996k)。有一个研究没有发现这种相关性(Malhotra 等，1996)。一个同对照相比较的ADHD儿童研究报道，同对照相比更 多的ADHD儿童携带至少一个7等位基因(LaHoste等，1996k)。已经 报道了在TD中DRD4基因的7等位基因间的相关性(Grice等， 1996k)。该领域的其它工作并非模棱两可(Spielman等，1993k)。

多巴胺转运蛋白基因(DAT1)在囊性转运蛋白位点处的DAT1基因 标志频率在源自不同欧洲国家的不同美国白人中表现出相当的不均一 性，但同物质滥用没有明显的相关性(Uhl等，1993；Persico等， 1993)。DAT1 VNTR等位基因的分布不能区分任何物质滥用者或者精 神活性剂滥用者的对照样品(Persico等，1996)，然而观察到同日 本酒精中毒者相关(Muramatsu和Higuchi，1995)。DAT1基因还被 表明在强迫和成瘾障碍中发挥作用。由于可卡因的一种作用方式是抑 制多巴胺转运蛋白功能(Riz等，1992；Ritz等，1990)，所以其参 与药物成瘾生物学，以及包括帕金森病(Uhl，1990)和抽动-秽语综 合征(Singer等，1991)的其它异常。

利用SPECT扫描技术已经证明在抽动-秽语综合征中多巴胺转运蛋 白位点增加(Malison等，1995)，而且同非暴力酒精中毒者相比， 在暴力酒精中毒者中多巴胺转运蛋白受体位点显著增加(Tiihonen 等，1995)。TS受试者的死后样品研究报道，在纹状体中多巴胺摄取 位点数目增加，提示或者有更多数目的DAT1分子或者多巴胺神经末端 数量增加(Singer等，1991)。这是在ADHD治疗中广泛使用的化合物 哌醋甲酯(Volkow等，1995k)以及Dexedrine的作用位点。这些兴奋 剂抑制转运过程，导致突触多巴胺的增加。已经报道同对照比，TD受 试者的纹状体中多巴胺转运蛋白蛋白水平的显著增高(Maison等， 1995k)。DAT1敲除小鼠，其在限定的空间内非常多动，对其研究表 明大脑多巴胺水平增加5倍、D2受体下调、D2受体功能的解联以及身 体大小降低57％(Giros等，1996k)。仍然不知是否较少见的DAT1重 复等位基因同DAT1分子数量的增加或降低相关。

在ADHD/ADD病历(Cook等，1995k)以及抽动-秽语障碍(TD)中 的行为变化(Comings等，1996)中报道了同DAT1基因的10等位基因 间的相关性。在孤独受试者中的显著增加同一些表明TS和孤独是遗传 学相关的、而且涉及相似的几组基因的研究(Burd等，1987； Comings和Comings，1991b；Sverd，1991)是一致的。

同93个人种匹配的非酒精中毒者对照相比，在93个表现出戒断发 作或发狂的酒精中毒者中观察到在DAT1基因3’非翻译区的9重复等位 基因VNTR多态性的优势显著增加(Sander等，1997)。在药物滥用受 试者中检测了DAT1基因中5’UTR 40bp重复多态性，并发现同正常对 照相比任何3’UTR重复等位基因频率没有显著的差别(Persico等， 1993)。已发现9/10基因型同“病理性暴力”青少年相关；而在戒断 发作或发狂的酒精依赖中同9/9基因型相关。已经报道在DAT1基因 40bp重复的9等位基因同可卡因诱导的妄想狂间的相关性(Gelernter 等，1994a)。

多巴胺-β-羟化酶DβH是多巴胺代谢的主要酶之一，并催化多巴胺 向去甲肾上腺素(NE)的转化。在动物研究中，DβH活性的抑制导致 去甲肾上腺素水平的降低，其释放酪氨酸羟化酶的抑制，导致多巴胺 的过度产生。后者同活动过度、攻击性、自我兴奋以及刻板型活动相 关(Randrup和Scheel-Kruger，1966；Shekin等，1983k)。血液 DβH酶水平的研究表明该酶在感觉追求(sensation seeking) (Kuperman等，1988k；Comings等，1996)、ADHD和品行障碍 (Rogeness等，1982k；Rogeness等，1989k)中的作用。

以前已经将多巴胺β羟化酶(DβH)活性的紊乱同儿童期CD和酒精 中毒相关联(Pliszka等，1991)。据推测，表面化 (externalizing)障碍如CD同去甲肾上腺素能功能的降低以及多巴 胺能功能的增高相关，这是一对可能唯由DβH缺陷造成的条件 (Quay，1986)。其他人报道在具有低血浆DBD水平的情绪困扰的男 孩中CD的诊断频率增加。然而，Bowden等，1988年的门诊患者研究发 现，在患有CD的ADHD儿童中DβH水平低的可能性比没有CD的ADHD儿童 大得多(Rongeness等，1987；Pliszka等，1988；Bowden等， 1988；Comings等，1996)。相反，在青年拘留中心的门诊患者研究 中没有发现在CD和血浆DβH间的相关性。Umberkomen等(1981)已经 表明在低DβH水平和感觉追求行为间的相关性。

在具有多种心理障碍包括重性抑郁、双相情感障碍以及精神分裂 症的患者中CSF DβH水平的检测发现唯一显著的相关性是在低CSF DβH和双相情感障碍间(Lerner等，1978)。在DβH基因座和精神分 裂症(Aschauer和Meszaros，1994)、酒精中毒、抑郁、躁狂抑郁以 及抽动-秽语综合征(Comings等，1986)间的联系研究是阴性的。然 而，一些同胞对分析表明在ABO血型和DβH、以及一些心理障碍如抑郁 和酒精中毒间有弱的关联(Wilson等，1992)。

在DβH基因座和精神分裂症、酒精中毒、抑郁、躁狂抑郁以及抽动 -秽语综合征间的联系研究是阴性的(Aschauer和Meszaros，1994； Comings等，1986)。在DβHTaqIB1等位基因和病理性SAB间未发现相 关性(Blum等，1997)。据报道TaqI B1/B2多态性同经筛选排除药 物、酒精以及烟草滥用的对照相关。然而，多巴胺β羟化酶基因的B1 等位基因还同TD先证者以及ADHD先证者相关(Comings等，1996)。

大麻酯受体(CB1)虽然大麻酯受体同报偿通路的联系可能是首 要的，但更可能是通过anandaide和大麻酯受体在多巴胺代谢上的调 节效应的次级效应。这同在CB1受体和DRD2受体结果间的相似性一 致。同CD1基因类似，DRD2基因的遗传学变体同多物质滥用间的联系 (O’Hara等，1993；Smith等，1992；Noble等，1993；Comings 等，1994)比同酒精中毒本身间的联系是更可重复的。这些观察的一 个解释是多巴胺能-大麻报偿通路被药物特别是可卡因和安非他明激 活的比被酒精激活的多(DiChiara和Imperato，1988)。

已知在药物依赖动物模型中中央边缘多巴胺系统的激活引发可卡 因追求行为的复发。这种引发效应被多巴胺D2激动剂加强，但却被多 巴胺D1激动剂抑制(Self等，1996)。在这点上，anandamide引起纹 状体中D1和D2受体比率降低的能力可能是说明CB1变体在药物依赖性 中作用的原因。

单胺氧化酶已经检测了MAO-A cDNA的同在1460位点处的T→C变体 相关的Fnu4H1多态性以及同在941位点处的T→G变体相关的EcoRV多态 性(Hotamisligil和Breakefield，1994)。由于它们均涉及在一密 码子的第三个碱基的置换，所以它们同氨基酸置换无关。他们检测了 已知具有MAO-A活性的40个细胞系。所有携带Fnu4H1 C变体的细胞系 均还携带有EcoRV G变体。当基于较低对较高MAO-A活性将样品分成两 组时，存在于25％的细胞系中的较少见的Fnu4H1 C或+等位基因(发明 者的2等位基因)同较高活性组显著相关。Lin等(1994)报道了在躁 狂抑郁中同较低的MAO水平相关(Lin等，1994)，更普遍的MAOA Fnu4H1 T或1等位基因(Lin等，1994)显著增高，而Craddock等 (1995)和Nothen等(1995)没能证实这一点。

Vanyukov等(1993)利用CA重复多态性在23个男性和34个女性酒 精中毒者中检测了MAOA基因并同31个男性和78个女性对照相比较 (Black等，1991)。在年轻物质滥用者中在男性中(P＝0.17)而不 是女性中(P＝0.8)存在一个同较高分子量等位基因(＞115bp)间的 相关性趋势，而＞115bp的等位基因同开始的年龄之间存在弱的相关性 (P＝0.03)趋势。Tivol等(1996)最近测定了MAO-A酶活性表现出 ＞100倍变化的40个对照男性的外显子序列。在编码序列存在显著的保 守性。只发现5种多态性。其中，4种涉及第三个密码子位点而氨基酸 序列无改变。另一种为一个lys→arg置换。

烟碱受体基因编码CHRNA4基因的基因定位于染色体20q13.2-13.3 (Steinlein等，1994)并由6个外显子超过17kb的基因组DNA所组成 (Steinlein等，1996)。在一扩展的澳大利亚谱系中发现在CHRNA4 基因的跨膜区2中的Ser248Phe错义突变同常染色体显性夜间额叶癫痫 (ADNFLE)相关(Steinlein等，1995)。在一挪威谱系中发现M2结 构域C-末端编码区中三个核苷酸(GCT)的插入同常染色体显性夜间 额叶癫痫相关(Steinlein等，1997b)。大脑功能的两种其它异常， 良性家族性新生儿惊厥(Leppert等，1989；Malafosse等，1992) 以及低电压EEG(Steinlein等，1992)也同CHRNA4位点的区域相关。 D20S19，一个高度多态性的位点，是同引起所有三种这些异常的基因 紧密连锁的(Steinlein等，1996)。

Weiland和Steinlein报道了一种定位于CHRNA4基因的第一个内含 子中的高度多态性的二核苷酸VNTR多态性(Weiland和Steinlein， 1996)。也已经报道了单碱基对多态性(Steinlein等，1995； Phillips和Mulley，1997；Guipponi等，1997；Steinlein等， 1997a)。利用三种单碱基对多态性，Steinlein等(1997a)发现 CHRNA4基因同恐惧障碍间没有相关性。利用同ADNFLE相关的 Ser248Phe错义突变和4种沉默多态性，Steinlein等报道了同对照 (.027)相比，在常见的儿童期特发性全身性癫痫中CfoI 595多态性 的T等位基因的频率中度增加(.085)。

微/小卫星多态性同不同神经精神候选基因处的微/小卫星多态性 相关的行为表型研究已发现，具有各种定量行为性状的较短或较长等 位基因和下列基因的小或微卫星间具有显著的相关性：MAOA、MAOB、 HTR1A、DAT1、DRD4、HRAS、HTT、OB、CNR1、GABRA3、GABRB3、 FRAXA和NO(Comings等，1996k；Comings等，19961；Comings等， 1996m；Johnson等，1997；Comings等，1998；Grade等，1997)。 显著的表型行为效应与DAT1(Cook，1995；Gelernter等，1994)、 DRD4(Benjamin等，1996；Ebstein等，1996；Grice等，1996； Lahoste等，1996)、HRAS(Herault等，1993；Eggers等，1995； Thelu等，1993)、HTT(Ogilvie等，1996；Lesch等，1996)、INS (Bennett等，1955；Kennedy等，1995；Pugliese等，1997； Vafiadis等，1997)和DBH(Wei等，1997)基因相同多态性的特定大 小的等位基因相关。这些研究并不排除在这些长度变体的一个亚群中 存在单碱基对改变的重要作用(见下面以及Grice等，1996；Lichter 等，1993；Krontiris等，1985)。

在多种神经学异常(Caskey等，1992)包括脆性X综合征、亨廷顿 病(亨廷顿病联合研究组，1993)、萎缩性肌强直、肯尼迪氏病、弗 里德赖希共济失调(Campuzano等，1996)以及其它(Caskey等， 1992)中存在长的三联体重复参与的证据。至少这些异常中的5个涉 及在各自基因产物的氨基酸序列中产生多聚谷胺酰胺束的基因内GAG 重复。

肥胖相关基因从前的研究没有在数百的肥胖个体中鉴定出人OB基 因的任何突变(Ezzel等，1995；Hamilton等，1995；Considine 等，1996b)。然而，前期研究(Comings，1996b；Comings等， 1996c)已经表明参与多基因异常的突变可能是在外显子以外的，而 且多态性二核苷酸重复本身可能在调节它们所邻接基因的表达中发挥 作用(Krontiris等，1993；Green和Krontiris，1993；Trepicchio 和Krontiris，1992；Trepicchio和Krontiris，1993；Bennett等， 1955；Kennedy等，1995)。

载脂蛋白基因的TaqI多态性(APOE-D)被发现同肥胖受试者以及 在APO-D和空腹胰岛素间相关。该工作表明APO-D多态性可能是肥胖和 高胰岛素血症的遗传学标志物(Vijayaraghavan等，1994)。

5-羟色胺基因  该基因的功能变体可能是所观察到的在各种障碍中 5-羟色胺和色氨酸同时升高或降低的原因。已经鉴定了人TDO2基因的 4种不同多态性。相关性研究表明这些多态性的一个或多个同TS、 ADHD、和药物依赖具有显著的相关性。内含子6G-T变体同血小板5-羟 色胺水平显著相关(Comings等，1996a)。

多基因分析  多巴胺D4受体基因(DRD4)、大麻酯受体基因 (CNR1)和GABAB3受体基因(GABRB3)的联合检测解释了静脉药物滥 用性状变化的25％(Saucier等，1996；Comings等1997；Johnson 等，1997)。据观察，OB和DRD2基因的测试解释22.8％的体重指数改 变，表明多遗传学因素影响体重，而通过单个检测所确定的同精神症 状的相关性仅是一较少比例的原因(Comings等，1996b)。已经表明 在三个多巴胺能基因处的各个多态性：多巴胺D2受体(DRD2)的TaqI A1、多巴胺β羟化酶(DβH)的TaqIB1以及多巴胺转运蛋白(DAT1) 基因的40bp重复的10/10基因型同TS、ADHD和CD具有显著的相关性 (Comings，1996)。

神经递质和氨基酸前体的作用除了被认为参与神经异常的基因 外，已经研究了神经递质和药物在产生和减轻某些精神性状中的作 用。在人体中，已经表明中央额前多巴胺能活性参与人类认知 (Weinberger等，1988)。在帕金森病患者以及可能在精神分裂症患 者中，在认知过程中额前激活并具有多巴胺能功能的临床征象 (Weinberger等，1988k)。在动物中大脑化学物质的转化已经证实 了前体氨基酸负载或者系统性和直接中枢神经系统给药后神经递质水 平的变化(Blum等，1996a；Blum等，1996b)。动物研究表明NE和多 巴胺参与涉及寻找和探索活动、注意力分散、反应率、判别力以及注 意力转换的广泛的注意力相关行为。总之，动物和人的研究提示多巴 胺和NE分别在信息的早期和晚期处理中发挥作用(Sara等， 1994k)。几种神经递质，特别是在大脑功能和情绪调节中起关键作 用的多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、GABA、谷胺酰胺以及阿片肽 能够被它们的前体氨基酸营养物的循环水平剧烈影响(Wurtman， 1981k)。资料提示氨基酸前体和内啡肽酶抑制剂对于酒精、可卡因 以及食物成瘾的康复提供重要的效果(Blum等，1987a；Blum等， 1987b；Blum等，1987c；Blum等，1989b；Blum等，1990； Strandberg等，1996)。

大脑皮层儿茶酚胺神经支配的一个重要功能可能是控制注意力。 特别有趣的是从网状结构向大脑皮层的儿茶酚胺投射，即在中脑腹侧 盖区中的多巴胺神经元以及在上脑桥中蓝斑的NE神经元。已经发现乙 酰胆碱能(ACH)和多巴胺能系统(DA)对于维持准确认知性能都是 关键的。通过放射臂迷宫所揭示的检测认知功能这些方面的一系列研 究发现，这两种神经递质系统以一种复杂的方式相互作用(Levin 等，1995)。通过阻断毒蕈碱-或烟碱-ACH受体诱导选择准确度缺 陷。通过用东莨菪碱阻断毒蕈碱受体所诱导的选择准确度缺陷可以被 多巴胺受体阻断剂氟哌啶醇逆转。特异性DAD1阻断剂SCH23390也有这 个作用，而特异性D2受体阻断剂雷氯必利却没有。用D2拮抗剂雷氯必 利可见到该效应，而用D1拮抗剂SCH23390则没有。发现选择性D2激动 剂LY1771555逆转由美加明引起的选择准确度缺陷，表明D2受体参与 烟碱对认知功能的作用之中。这些选择性DA治疗在逆转认知缺陷中的 有效性是由于ACH活化不足(Levin等，1990k)。

越来越多的证据表明5-羟色胺可能在哺乳动物大脑的几个区域调 节胆碱能功能而且这些5-羟色胺能/胆碱能相互作用影响认知。据推 测并非所有由5-羟色胺能和胆碱能系统的并行处理所诱导的往事回 忆混乱可以归因于胆碱能系统的5-羟色胺能改变。一个机体的认知 能力不但来自几种神经递质间的相互作用，例如在如海马或皮质的大 脑结构内的DA，而且来自其它普通功能对记忆的影响，这可能涉及同 那些与记忆功能(例如注意力、觉醒知觉准确性等)经典相关的底物 不同的大脑底物(Cassel等，1995k)。

此外，已经确定海马θ的外在调节有赖于胆碱能和GABA能中层隔区 输入的共活化。胆碱能投射为海马θ-开细胞提供传入性兴奋动力， 而隔区GABA能投射通过抑制海马GABA能中间神经元(海马θ-关细 胞)来减少抑制的总水平。对于海马θ域和细胞活性的产生必须有这 两种活性存在。在胆碱能和GABA能系统间的平衡可能决定是否海马同 期性(θ)或不同期性发生(Symthe等，1992)。

其它神经递质如去甲肾上腺素(NE)在学习和记忆中可能也发挥 作用。NE的神经调节特性表明蓝斑皮质(LC)NE投射在注意力和记忆 过程中发挥重要的作用。例如，在靶感觉系统中所释放NE的门控和调 谐作用可以在变化的关键时刻促进对相关刺激的选择性注意(Sara 等，1994)。其它研究表明在应激或生理性挑战过程中LC活化的一个 结果可能是通过DA和NE的释放来增加或维持觉醒(Page等，1994)。

据报道，在行为大鼠和猴子中NE LC神经元的放电提示LC系统在调 节注意力状态或失眠症中的作用(Aston-Jones等，1991k)。其它对 于齿状回中NE的研究支持LC在促进对复杂感觉刺激反应的短时程或长 时程增强中的作用，并且同LC在记忆以及注意过程中的作用一致 (Harley等，1988k)。外源给予或内源释放的NE可以启动齿状回的 一个短时程或长时程增强(LTP)。

已进行研究了解神经激肽物质P(SP)和其N-和C-末端片段对于记 忆、强化以及大脑代谢的效应。研究显示当外周给予时SP促进记忆并 且有强化作用。然而，最重要的是发现这些效应似乎由不同的SP序列 编码，因为N-末端的SP1-7增强记忆，而SP的C-七肽和六肽序列被证 明以同SP等摩尔的剂量来起强化作用。这些不同的行为效应同DA活性 的选择性和位点特异性改变平行，因为SP和其C-末端而非N-末端增加 伏核(Nac)中的DA，在新纹状体中则无。这些结果表明外周所给SP 的强化作用可能是由其C-末端序列介导的，而且该效应可能同在NAC 中的DA活性相关(Huston等，1991k)。

至于多巴胺能活性，以前的研究已经表明溴环肽 (bromocriptine)，一种多巴胺受体激动剂，在正常受试人中对于视 觉-空间工作记忆功能可以起有益的作用(Kimberg等，1997)。在用 猴子进行的损伤和单个单位记录研究及在人类中的神经影象研究中均 发现这种记忆形式(其中刺激的一些方面维持了短的时间间隔)还同额 前皮质功能紧密相连(Goldman等，1987k；Jonidas等，1993)。还 报道了溴环肽在根据多巴胺D2受体基因型的情况降低酒精中毒者中的 释放率中具有选择性阳性作用(Lawford等，1995)。此外，已经证 实了多巴胺拮抗剂在执行记忆任务的猴子中对于神经元延迟期活性的 直接作用(Williams等，1995k)。Phentermine，一种多巴胺释放 剂，参与体重减轻(Weintramb等，1992)。

此外，在人类和动物中大脑多巴胺浓度的药理控制影响视觉-空间 工作记忆，后一效应定位于额前皮质。然而，多巴胺激动剂对于人类 的效应仍所知甚少。据推测溴环肽可能通过其对皮质多巴胺受体以及 投射于新皮层的区域中的皮层下受体的效应而对同额前皮层相关的认 知机能具有影响(Kimberg等，1997)。他们发现溴环肽对年轻正常 受试者的效应有赖于受试者的工作记忆能力。高能力受试者对药物反 应差，而低能力者则改善。这些结果证明在人类中多巴胺介导的工作 记忆系统和较高的认知功能间的一种经验联系。还表明DRD2 A1等位 基因同样也与视觉-空间记忆缺陷相关(Berman等，1995k)。

一个双盲研究证明给予携带A1等位基因(A1/A1和A1/A2基因型) 或仅携带A2等位基因(A2/A2)的酒精中毒者一种D2激动剂溴环肽或 一种安慰剂，在用溴环肽治疗的A1携带者中降低了渴望和焦虑。损耗 率在用安慰剂治疗的A1携带者中为最高。溴环肽对A1携带者的作用在 其经过六星期的治疗时强烈得多。多巴胺D2激动剂溴环肽可以改善高 等级认知机能。

在动物中利用高级技术，包括微量透析检测，已经证实了在负载 前体氨基酸后神经递质输出的改变(Hernandez等，1988)。此外， 系统性或直接中枢神经系统给予前体氨基酸后在动物中证实了行为的 改变(Blum等，1972)。虽然某些L-氨基酸是神经递质和神经调节物 的前体，但它们的外消旋物、D-氨基酸也具有生物学活性。特别是， D-苯丙氨酸、D-亮氨酸、其他D-氨基酸以及某些代谢物(例如氢化肉 桂酸)降低对于心境和行为的调节关键的阿片肽的降解(Blum等， 1977；Della Bella等，1980)。

在一些个体中，科学家已经描述了一种苯丙氨酸缺陷(PHD) (Lou，1994k)。在这点上，苯丙氨酸和酪氨酸组成多巴胺生物合成 中的两个启始步骤，而多巴胺是NE的代谢前体。在PHD中细胞外苯丙 氨酸浓度通过降低多巴胺合成来影响大脑机能。已经表明其诱导EEG 减慢并延长神经心理学测试的进行时间。CNS中酪氨酸浓度在PHD中降 低，这可能提示由于竞争抑制，例如通过血脑屏障，而用于儿茶酚胺 合成的酪氨酸的底物不足。在实验研究中，已经表明多巴胺的合成和 释放可以被酪氨酸量的增加所影响。在PHD中三种剂量酪氨酸的额外 饮食摄取(160mg/kg/24h)诱导反应时间的缩短并降低可变性，而在 一双盲交叉实验中报道了一相似的剂量诱导心理学测试的改善，较低 的剂量则无。

具有内啡肽酶抑制活性的前体氨基酸的联合可以用于可卡因依赖 的治疗(美国专利5,189,064号)。已知可卡因的急性应用可以改 善大脑电生理机能障碍的某些方面(Maurer等，1988k)。慢性可卡 因滥用改变注意处理过程(Noldy等，1990k)。已知可卡因的急性应 用可以改善大脑电生理机能障碍的某些方面(Jonsson等，1996)。 然而，矛盾的是，慢性可卡因滥用改变注意处理过程(Braverman和 Blum，1996)。虽然仍然具有争议，但已经表明注意力过程是依赖于 生物胺调节的(Lyoo等，1996)。

肥胖症和神经机能通常将肥胖症定义为超过理想体重20％或更 多。已经尝试了多种减轻体重的方法，包括低热量平衡饮食、“时 尚”饮食、行为调整、药物(即D-phenflouramine、phenteramine 等)、外科、完全饥饿、鄂部布线以及这些方法的联合。这些方法大 部分是问题的短期解决办法，而且只是短暂有效，有些甚至可能带来 严重的危险(Lockwood和Amatruda，1984)。即使在短期内证明了体 重减轻，但体重通常在体重减轻方案停顿后重新恢复。虽然大约28％ 的美国人肥胖，但广泛认为肥胖症是一种食物成瘾，一种美容的而非 健康指征的一种自我强加的状态(Kral等，1989；Weintraub和 Bray，1989)。

从最近对于肥胖症的一些原因以及治疗该状态的困难性进行的研 究产生了一种理解。在比马印第安人中的双胞胎研究中已经证实了肥 胖症的强遗传学基础(Bouchard，1989；Stunkard等，1990)。肥 胖症是一种病因不一而且很普遍的障碍，其具有遗传学和环境成分。 各种食物的宏观挑选和家族性物质利用障碍(SUD)间的关系已经由 文献记载，并且神经化学研究已经支持由酒精、尼古丁、可卡因以及 碳水化合物通过多巴胺能系统强化的共同性(Nobel，1998； DiChiara，1988)。在这方面，肥胖症和SUD均可被认为是食欲强 迫。一些基因例如多巴胺D2受体(DRD2)以及多巴胺转运蛋白 (DAT1)基因可能不仅对于肥胖症(Noble等，1994；Comings等， 1993；Blum等，1995a)而且对于总的SUD和其它精神心理障碍 (Noble等，1994；Smith等，1992；Comings，1994；Blum等， 1995b；Comings等，1996；Cook等，1995)是一个危险因子。此 外，小鼠ob基因及其人OB类似物的克隆和测序燃起希望，该基因的缺 陷可能在人类肥胖症的原因中发挥显著作用，而且瘦素、其基因产物 可能在治疗中有用(Zhang等，1994；Peileymounter等，1995)。 虽然遗传学效应可以单独起作用，但在大部分病例中遗传学情况仅仅 设定提供遗传-环境相互作用机会的状态(即在增加摄食时伴随体重 的明显增加)。对于具有这种遗传学危险状况的人，肥胖症是终生的 状态，与其它慢性疾病一样需要进行长期治疗。

对酒精、药物和食物(特别是碳水化合物)的不可控摄入行为的 特定原因还未完全了解。然而，清楚的是，这些食欲强迫行为是遗传 素质和环境损伤因素的产物。大量的研究已经表明阿片类物质、阿片 样肽、CCK-8、糖原、DA和胰岛素在葡萄糖利用和碳水化合物的选择 性摄取中的相互作用(Morley和Levine，1988；Moore等，1982； Morley等，1985；Riviere和Bueno，1987)。在参与饮食行为的主 要神经递质包括单胺类的多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上 腺素(EPI)和5-羟色胺(5-HT)；抑制性神经递质γ-氨基丁酸 (GABA)；以及多种神经肽例如胰多肽、阿片样肽、激素释放因子和 各种肠脑肽(综述见Cooper等，1988；Gosnell，1987；Bouchard， 1994)。对于许多大脑单胺化合物和神经肽在中央边缘报偿系统中协 调作用控制正常摄食行为的广泛证据(Leibowitz和Hor，1982)。在 人类和动物中脑脊液的分析提示同异常摄食模式相关的大脑神经化学 功能的特定紊乱(Kaye等，1985；Kaye等，1984)。

对过食者的一项研究证实摄入含有氨基酸前体的一种膳食补充剂 PHENCALTM变体的受试者在90天内平均减轻27lbs，而在对照组中仅 减轻10lbs(Blum，1990)。发现PHENCALTM或其它相似的神经营养 剂有利于酒精中毒者、多药物滥用者、海洛因滥用者和可卡因依赖个 体的康复(Blum等，1988c；Blum和Trachtenberg，1988；Cold， 1996)，进而提示一种对于这些多种物质成瘾的共同治疗方式(Blum 等，1996；Blum等，1997)。

烟碱的作用烟碱也释放多巴胺，而且还发现烟碱在大鼠、猴子和 人的多种测试中改善记忆(DiChiara等，1988)。烟碱以一种剂量依 赖的方式降低在大鼠辨别行为中的不正确反应(Geller等，1970)。 该效应同利眠宁相似，但不能被刺激剂咖啡因模拟(Geller等， 1970)。已经证明树胶或皮肤贴形式的烟碱对于一些患有抽动-秽语 综合征的受试者中抽动的治疗是有效的，而且已经报道吸烟提高注意 力、觉醒、学习以及记忆(Wesnes和Warburton，1984； Warburton，1992；Balfour和Fagerstrom，1996)并改善 ADHD的症状(Coger等，1996；Conners等，1996；Levin等， 1996)。

已经报道了一个安慰剂对照的双盲研究来确定利用烟碱在患ADHD 的成人的治疗中的效果(Levime等，1996；Conners等，1996)。17 位受试者中，6位是吸烟者而11位是不吸烟者。所有均符合成人ADHD 的DSM-IV标准。利用经皮的药贴将药物以对吸烟者为7mg/天而不吸烟 者为21mg/天的剂量给予。以平衡的顺序给予有活性和安慰剂药贴大 约1周。烟碱引起临床总体印象(CGI)评分的显著总体改善。该效应 甚至在只考虑非吸烟者时也是显著的，这提示并非仅仅由于规律性吸 烟戒断的缓解。烟碱引起如由情绪状态表(POMS)测试所测定的活力 显著增加以及在持续行为测试上反应时间的总体显著缩短。在无注意 力(inattention)指数上也有显著的降低。烟碱提高时间估计的精确 性而降低时间估计反应曲线的变化性。由于在患有ADHD的成人中吸烟 明显比那些无ADHD的成人更普遍(Conners等，1996)。

烟碱系统同多巴胺系统的相互作用对该效应可能是重要的。利用 在放射臂迷宫中进行获胜转移(win-shift)工作记忆任务的大鼠进行 了烟碱激动剂和拮抗剂同多巴胺系统相互作用的一系列研究(Levin 和Rose，1995k)。由烟碱拮抗剂美加明引起的工作记忆缺陷被D1/D1 DA拮抗剂氟哌啶醇以及特异性D2拮抗剂雷氯必利所加强。相反，美加 明诱导的缺陷被D2/D3激动剂喹吡罗的共给予所逆转。关于在放射臂 迷宫中的工作记忆行为，烟碱还同多巴胺药物具有明显的相互作用。 多巴胺激动剂培高利特并不通过其本身改善放射臂选择精确性。烟碱 在逆转该缺陷中是有效的。相对于单用其中一种药物，当同烟碱共同 给予时，D2/D3激动剂喹吡罗改善RAM选择精确性。美加明向中脑多巴 胺核的急性局部输注有效削弱在放射臂中的工作记忆机能(Noble 等，1998)。

铬盐(CrP和CrN)的作用三价铬时一种对正常胰岛素功能关键的 无机物(Jeejeehboy等，1977；Schwartz等，1959)。一些而并非 所有以前的研究表明补充铬可能有利地改变冠状动脉疾病(CAD)以 及非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的危险因素(Abraham等，1992； Anderson等，1991；Donaldson等，1985；Glinsmann等，1966； Kaats等，1991；Levine等，1968；Page等，1991；Press等， 1990；Roeback等，1991)。铬被认为是通过其对胰岛素的强化效应 来引起这些改变的(Offenbacher等，1988)。

动物研究支持CrP可以降低胰岛素抗性并改善机体组成的论点 (Liarn等，1993)，一个人体研究发现进行CrP补充时机体组成的阳 性改变(Hasten等，1992)，另一个报道了阳性结果，虽然机体组成 没有统计学上显著的改变(Hallmark等，1993)，而第三个没有发现 任何进行CrP补充时机体组成的阳性变化(Clancey等，1994)。已经 表明CrP补充改善机体组成，特别是减少多余的机体脂肪(Page等， 1992)。然而，以前观察同时补充铬和进行体育训练的工作已经被局 限于对体重和组成的效果，结果互相矛盾(Clancy等，1994；Evans 等，1993；Hallmark等，1996；Hasten等，1992)。

虽然关于铬盐(吡啶甲酸盐和烟酸盐)对机体组成和总体重减轻 上的效果仍是有争议的(Abraham等，1992；Anderson，1995； Hallmark等，1993；Clancey等，1994；Bulbulian等，1996)，但 一些报道似乎支持在人体中机体组成的阳性变化(Kaats等， 1996)。相反，(Grant等，1997；Bulbulian等，1996)报道了在 人体中有或无锻炼情况下用吡啶甲酸铬而体重增加，而在相同的群体 中对于烟酸盐则表现出阳性效果(Kaats等，1992)。

吡啶甲酸铬(CrP)是使用、研究和促进力度最大的铬化合物，但 体外研究表明烟酸铬在减轻体重和改变机体组成的领域中也可能是可 行的。以前的研究已经表明吡啶甲酸铬的补充降低脂肪质量而增加无 脂肪质量(Kaats等，1991；Page等，1991)。以前的锻炼研究同样 已表明无脂肪质量的增加(Stefanick，1993)。虽然对年轻男性 (Evans，1989)和女性(Hasten等，1992)的研究表明，联合锻炼 和吡啶甲酸铬补充提高进行锻炼时发生的机体组成的改变，但该发现 还未被证实(Clancy等，1994；Hallmark等，1996)。据报道，烟酸 盐(CrN)可能甚至比吡啶甲酸盐更重要(Grant等，1997)。

在行为障碍治疗中的营养补充  神经递质作用的纹乱可能构成多 种精神和行为障碍的基础(Blum等，1996e；Peisico和Uhl，1997； Noble等，1991)。特别是，多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、γ氨 基丁酸(GABA)、谷氨酰胺和阿片样肽的异常调节被认为在成瘾性障 碍中、特别是那些涉及酒精和可卡因滥用中发挥关键性作用 (Pohjalainen等，1996)。因而，这些观察已经为选择性营养物的 摄入可以影响情绪进而影响行为这种构思提供了契机。虽然营养策略 在过去已经使用(Grandy等，1989)，但有效性的证实受到很大限 制。已经表明联合氨基酸前体和内啡肽酶抑制剂对于从某些包括酒 精、可卡因和暴食的RDS行为的康复具有明显的效果(Noble等， 1993；Noble等，1994；Blum等，1994；Balldin等，1993；Duffy 等，1994；美国精神病联合会任务组，1991，美国专利5,189,064 号)。

精神病相关基因的多基因分析以及其它多基因性状  据推测，精 神病行为具有相同的基因，而且一旦多巴胺-5-羟色胺和其他神经递 质的平衡被打乱，结果大脑功能障碍可以导致广泛的不同行为 (Comings，1990a；Comings和Comings，1991a；Winokur等， 1970；Comings，1994b；Comings，1995b)。其他人支持人格性状 可能具有不同的由在多巴胺以及其它神经递质转运中的遗传学可变性 所介导的神经化学和遗传学基质这样的推测(Cloninger，1983； Benjamin等，1996；Epstein等，1996；Cloninger，1991)。 DRD2、DβH、DAT的分子遗传学研究(Comings等，1996a)和临床遗 传学研究(Comings，1994b；Comings，1994c；Comings，1995b； Biederman等，1991；Comings和Comings，1987)表明ADHD、抽动- 秽语综合征、行为障碍、ODD、诵读困难、学习障碍、口吃、药物依 赖以及酒精中毒是病因学上相关的谱系障碍，具有男性优势。

在过去的二十年中，这些障碍的大部分基因均已被鉴定、定位、 克隆以及测序。由于仍有待鉴定的此类基因的数目已经降低，所以对 更常见的多基因障碍存在越来越多的兴趣。通常认为鉴定参与这些障 碍的基因将困难得多。这种困难由精神障碍充分展示。虽然对躁狂抑 郁障碍、精神分裂症、抽动-秽语综合征、恐怖障碍、孤僻及其它(双 相障碍可能例外)有许多连锁研究(Risch和Botstein，1996)，但几 乎没有重复的发现。许多对于发现复杂障碍中基因的努力只是通过利 用优势对数评分分析(lod score analysis)、其它基于家族的连锁分 析形式或单倍型相对风险技术来试图将单基因单病模型用于为多基因 障碍服务(Falk和Rubinstein，1987)。目前，用于鉴定复杂障碍中 基因的最常用的方法由罹患同胞对的全基因组筛选组成。分析连锁的 非参数方法(Weeks和Lane，1988)较适于复杂的遗传(但见 Greenberg等，1996)。然而，当一给定的基因解释不到8％的变异 时，必须检测大量的亲-子对或同胞对(Carey和Williamson， 1991)。

已经越来越多地认识到，只有相关研究可能具有鉴定对一给定多 基因性状变异的百分比贡献较小的基因的能力(Risch和 Merikangas，1996；Collins等，1997)。相关研究通过比较在严重 罹患的先证者中和完全无关的人种相配的无病对照间突变体候选基因 的频率可以鉴别这些小的效应(Weeks和Lathrop，1995；Comings， 1996；Owen和McGuffin，1993)。已检测了DRD2、DβH和DAT基因 (Comings等，1996j)、DRD1和DRD2基因(Comings等，1997a)、 OB和DRD2基因(Comings等，1996d)、以及其它基因联合基因在TS、 ADHD、行为障碍、口吃和相关行为中的加和效应。在TS综合征中，已 发现鉴定三个多巴胺基因(DRD2、DβH和DAT1)的作用是通过对相当 大量的TS受试者、他们的亲属以及对照的检测而最明确决定的，这表 明TS和相关的障碍是多基因遗传的，而且每个基因仅负责任何行为评 分改变中的一小部分(Comings等，1996a；Comings，1996b； Comings等，1996d；Comings，1996c)。

大部分精神障碍是多基因的(Comings，1996b)而且每个基因负 责不到10％、通常不到5％的给定行为变量的改变。在两者的研究中， 通过检测一个以上基因的加和效应增加了相关性的强度。相关性研究 广泛应用的主要阻碍之一是在已经克隆并测序的许多候选基因处或附 近缺少可用的合适多态性(Comings，1994)。然而，即使在使用该 技术或经典的连锁技术时，来自一组调查者的阳性发现通常在随后的 研究中不能被重复(Egeland等，1987；Kelsoe等，1989；Blum等， 1990；Bolos等，1990)。由于群体分层，该技术还能产生假阳性， 然而通过对大量的受试者利用单倍型相对风险步骤(Falk和 Rubinstein，1987)可以将其降至最小。这些效应的小规模以及在重 复中的困难已导致一种关于鉴别参与多基因障碍的基因是否可能的悲 观情绪(Moldin，1997)。 发明概述

仅在美国便有一千八百万的酒精中毒者、二千八百万酒精中毒者 的孩子、六百万可卡因成瘾者、一千四百九十万滥用其它物质者、二 千五百万尼古丁成瘾者、五千四百万至少超重20％的人、三百五十万 患有ADHD或抽动-秽语综合征的学龄儿童以及大约三百七十万的强迫 性赌博者。本发明的发明者们相信测定人DRD2基因以及本发明中同心 理学障碍相关的其它基因的等位基因的基因型，实际上是朝着对社会 中破坏性问题合理治疗的第一步。

本发明首先提供一种用于在受试者中治疗报偿缺陷综合征(RDS)的 组合物。在某些方面，该组合物包括至少下述成分的一种：阿片破坏抑制 量的至少一种抑制神经肽酰阿片的酶促降解的物质，其为氨基酸、肽、 及其结构类似物或衍生物；一种神经递质合成促进量的至少一种神经递质 前体，其为一种多巴胺前体如L-Tyr、L-Phe和L-多巴、一种5-羟色胺前 体如L-Trp和5-羟色氨酸、或者一种γ氨基丁酸(GABA)前体如L-谷氨酰 胺、L-谷氨酸和L-谷氨酸盐；一种色氨酸浓度提高量的吡啶甲酸铬 (chromium picolinate)或烟酸铬(chromium nicotinate)；一种释放内 啡肽的化合物，其为，但并不限于，一种肽，优选一种含有D-氨基酸的肽； 或者一种阿片拮抗量的至少一种在δ、μ、κ、σ或ε受体处阻断阿片效应的 化合物。除了上面特别列出的外，在本申请中进一步描述了内啡肽酶 抑制剂、神经递质前体、阿片破坏抑制物、阿片拮抗剂、和/或铬化 合物的类型，并包涵在本发明中。在本发明某些优选的方面中，组合 物被用于预防或降低受试者不需要的体重。在本发明的某些其它方 面，组合物优选被用于注意缺陷障碍、注意力过程或记忆的治疗中。 在本实施方案中，对于注意缺陷障碍、注意缺陷多动障碍(ADHD)注 意力过程或记忆，组合物更优选包括神经递质合成促进量的至少一种 选自Rhodila或石杉碱(hubazine)的神经递质合成促进物质。此中所 用的“衍生物”可指一种化学修饰的化合物，而“类似物”指一种与 被比较的化合物具有相似特性或结构的不同化合物。

在本发明的某些方面，该组合物可以用于此中所公布的所有RDS相 关行为的治疗。RDS行为是那些同化学失衡相关的行为，这种化学失 衡表现为一种或多种与个体对焦虑、愤怒或对一种物质渴望有幸福感 相关的行为障碍。RDS行为包括酒精中毒、SUD、吸烟、BMI或肥胖、 病理性赌博、碳水化合物暴食、轴11诊断、SAB、ADD/ADHD、CD、 TS、SUD的家族史、以及肥胖症，此中进行了描述。

本发明还提供一种治疗受试者的RDS行为的方法，这些RDS行为包 括但不限于SUD、肥胖症、吸烟、抽动-秽语综合征、ADHD、精神分裂 症/回避行为、攻击、创伤后应激综合征、PMS或烟草滥用。RDS行为 并非特别局限于这些障碍，许多类型的亚障碍也被这些条件所涵盖。 例如，注意缺陷多动障碍(ADHD)可表现为酒精、药物、强迫强制行 为、学习障碍、阅读问题、赌博、躁狂症状、恐怖症、恐惧发作、对 立挑战行为、品行障碍、小学中的学习问题、吸烟、性行为、分裂 样、躯体化、抑郁、睡眠障碍、广泛焦虑、口吃、以及抽动障碍。作 为本发明的一部分，所有这些行为，以及此中所描述的与RDS行为相 关或与参与RDS相关神经通路的基因相关的其它行为均被包括在RDS行 为中。此外，此中所用的对于作为RDS障碍的多种特定障碍的许多临 床术语在《DSM-IVTM的诊断标准的快速参考》(Quick Reference to the Diagnostic Criteria From DSM-IVTM)美国精神病协会， 华盛顿特区，1994，358页中可查到。在该参考文献中可以找到定义 的特定障碍，以及它们在DSM-IVTM中的编号包括：焦虑障碍，包括不 伴广场恐怖的惊恐障碍300.01、伴广场恐怖的惊恐障碍300.21、无惊 恐障碍史的广场恐怖300.22、特殊恐怖症300.29、社交恐怖症 300.23、强迫症300.3、创伤后应激障碍309.81、急性应激障碍 308.3、广泛性焦虑障碍300.02、儿童期过度焦虑障碍300.02、躯体 情况(注明)所致焦虑障碍293.89、物质引致焦虑障碍293.89、焦虑障 碍(未注明)300.00；注意缺陷和破坏行为障碍，包括注意缺陷/多动障 碍突出无注意力型314.00、注意缺陷/多动障碍突出多动-冲动型 314.01、注意缺陷/多动障碍混合型314.01、注意缺陷/多动障碍(未 注明)314.9、品行障碍312.8、违抗性障碍313.81、破坏性行为障碍 (未注明)312.9；双相障碍，包括双相I型障碍296.0x、296.40、 296.4x、296.6x、296.5x和296.7、双相II型障碍296.89、环性情绪 障碍301.13、双相障碍(未注明)296.80；抑郁障碍，包括反复发作的 重性抑郁障碍296.3、心境恶劣障碍300.4、抑郁障碍(未注明)311、 单次发作的重性抑郁障碍296.2；进食障碍，包括神经性贪食 307.51、神经性厌食307.1、进食障碍(未注明)307.50；冲动控制障 碍，包括间歇性暴发障碍312.34、偷窃狂312.32、纵火狂312.33、病 理性赌博312.31、拔毛癖312.39、冲动控制障碍(未注明)312.30；人 格障碍，包括反社会型人格障碍301.7、回避型人格障碍301.82、强 迫型人格障碍301.4、分裂样人格障碍301.20；精神分裂症，包括偏 执型295.30、紊乱型295.10、紧张型295.20、未分型295.90、残留 型295.60、分裂情感性精神障碍295.70、分裂样精神障碍295.40；睡 眠障碍，包括原发睡眠障碍，例如包括原发失眠307.42、原发过度睡 眠307.44、发作性睡病347、睡眠的昼夜节律障碍307.45、睡眠障碍 (未注明)307.47的睡眠异常，包括恶梦障碍307.47、睡惊障碍 307.46、睡行症307.46、睡眠有关问题的异常(未注明)307.47的睡眠 有关问题的异常，与其他精神障碍相关的睡眠障碍-其包括与[轴I或轴 II障碍]相关的失眠307.42、与[轴I或轴II障碍]相关的过度睡眠 307.44，包括躯体情况(注明)引致的睡眠障碍780.xx、物质引致的睡 眠障碍780.xx的其它睡眠障碍；物质滥用障碍，包括酒精相关障碍例 如伴妄想的酒精所致精神病性障碍291.5、酒精滥用305.00、酒精中 毒303.00、酒精戒断291.8、酒精中毒谵妄291.0、酒精戒断谵妄 291.0、酒精所致持久性痴呆291.2、酒精所致持久性遗忘障碍 291.1、酒精依赖303.90、伴幻觉的酒精所致精神病性障碍291.3、酒 精所致情感障碍291.8、酒精所致焦虑障碍291.8、酒精所致性功能障 碍291.8、酒精所致睡眠障碍291.8、酒精相关障碍(未注明)291.9、 酒精中毒303.00、酒精戒断291.8；尼古丁相关障碍，其包括尼古丁 依赖305.10、尼古丁戒断292.0、尼古丁相关障碍(未注明)292.9；苯 丙胺相关障碍，其包括苯丙胺依赖304.40、苯丙胺滥用305.70、苯丙 胺中毒292.89、苯丙胺戒断292.0、苯丙胺中毒谵妄292.81、伴妄想 的苯丙胺所致精神病性障碍292.11、伴幻觉的苯丙胺所致精神病性障 碍292.12、苯丙胺所致情感障碍292.84、苯丙胺所致焦虑障碍 292.89、苯丙胺所致性功能障碍292.89、苯丙胺所致睡眠障碍 292.89、苯丙胺相关障碍(未注明)292.9、苯丙胺中毒292.89、苯丙 胺戒断292.0；大麻相关障碍，其包括大麻依赖304.30、大麻滥用 305.20、大麻中毒292.89、大麻中毒谵妄292.81、伴妄想的大麻所致 精神病性障碍292.11、伴幻觉的大麻所致精神病性障碍292.12、大麻 所致焦虑障碍292.89、大麻相关障碍(未注明)292.9、大麻中毒 292.89；可卡因相关障碍，其包括可卡因依赖304.20、可卡因滥用 305.60、可卡因中毒292.89、可卡因戒断292.0、可卡因中毒谵妄 292.81、伴妄想的可卡因所致精神病性障碍292.11、伴幻觉的可卡因 所致精神病性障碍292.12、可卡因所致情感障碍292.84、可卡因所致 焦虑障碍292.89、可卡因所致性功能障碍292.89、可卡因所致睡眠障 碍292.89、可卡因相关障碍(未注明)292.9、可卡因中毒292.89、可 卡因戒断292.0；致幻剂滥用障碍，其包括致幻剂依赖304.50、致幻 剂滥用305.30、致幻剂中毒292.89、致幻剂戒断292.0、致幻剂中毒 谵妄292.81、伴妄想的致幻剂所致精神障碍292.11、伴幻觉的致幻剂 所致精神障碍292.12、致幻剂所致情感障碍292.84、致幻剂所致焦虑 障碍292.89、致幻剂所致性功能障碍292.89、致幻剂所致睡眠障碍 292.89、致幻剂相关障碍(未注明)292.9、致幻剂中毒292.89、致幻 剂持久性感觉障碍(幻觉重现)292.89；吸入物相关障碍，其包括吸 入物依赖304.60、吸入物滥用305.90、吸入物中毒292.89、吸入物中 毒谵妄292.81、伴妄想的吸入物所致精神病性障碍292.11、伴幻觉的 吸入物所致精神病性障碍292.12、吸入物所致焦虑障碍292.89、吸入 物相关障碍(未注明)292.9、吸入物中毒292.89；阿片类物质相关障 碍，其包括阿片类物质依赖304.00、阿片类物质滥用305.50、阿片类 物质中毒292.89、阿片类物质中毒谵妄292.81、伴妄想的阿片类物质 所致精神病性障碍292.11、伴幻觉的阿片类物质所致精神病性障碍 292.12、阿片类物质所致焦虑障碍292.89、阿片类物质相关障碍(未 注明)292.9、阿片类物质中毒292.89、阿片类物质戒断292.0；多物 质相关障碍，其包括多物质依赖304.80；抽动障碍，其包括Tourette 障碍307.23、慢性运动或发声抽动障碍307.22、一过性抽动障碍 307.21、抽动障碍(未注明)307.20，口吃307.0，孤独性障碍299.00以 及躯体症状化障碍300.81。此外，其他RDS障碍被定义为将由本领域 的技术人员所知的那些，例如新奇追求，定义于(Clonigen等， 1993)。如果此中未特别定义，其它障碍同由本领域技术人员所共知 的相同，包括通用的缩写。

在本发明的某些方面中，每日所给用于RDS行为或障碍治疗的各种 上面所提化合物的量可以是大约1、大约2、大约4、大约5、大约6、 大约7、大约8、大约9、大约10、大约11、大约12、大约13、大约 14、大约15、大约16、大约17、大约18、大约19、大约20、大约21、 大约22、大约23、大约24、大约25、大约26、大约27、大约28、大约 29、大约30、大约31、大约32、大约33、大约34、大约35、大约36、 大约37、大约38、大约39、大约40、大约41、大约42、大约43、大约 44、大约45、大约46、大约47、大约48、大约49、大约50、大约55、 大约60、大约65、大约70、大约80、大约90、大约100、大约110、大 约120、大约130、大约140、大约150、大约160、大约170、大约 180、大约190、大约200、大约220、大约240、大约260、大约280、 大约300、大约325、大约350、大约375、大约400、大约425、大约 450、大约475、大约500、大约550、大约600、大约650、大约700、 大约725、大约750、大约775、大约800、大约825、大约850、大约 875、大约900、大约925、大约950、大约975、大约1,000、大约 1,100、大约1,200、大约1,300、大约1,400、大约1,500、大约 1,600、大约1,700、大约1,800、大约1,900、大约2,000、大约 2,100、大约2,200、大约2,300、大约2,400、大约2,500、大约 2,600、大约2,700、大约2,800、大约2,900、大约3,000、大约 3,250、大约3,500、大约3,750、大约4,000、大约4,250、大约 4,500、大约4,750、大约5,000、大约5,250、大约5,500、大约 5,750、大约6,000、大约6,250、大约6,500、大约6,750、大约 7,000、大约7,250、大约7,500、大约7,750、大约8,000、大约 8,250、大约8,500、大约8,750、大约9,000、大约9,250、大约 9,500、大约9,750、大约10,000、大约11,000、大约12,000、大约 13,000、大约14,000、大约15,000、大约16,000、大约17,000、大 约18,000、大约19,000、大约20,000、大约21,000、大约22,000、 大约23,000、大约24,000、大约25,000、大约26,000、大约 27,000、大约28,000、大约29,000、大约30,000mg或更多。此外， 虽然没有特别列出，但在上面特定范围内的所有量均可以使用而且由 本发明所涵盖。例如，大约4,751、大约4,752、大约4,753mg等，虽 然在前面的句子中没有特别列出，但在本发明中可以使用。

在本发明的某些实施方案中，其中RDS行为是肥胖症，组合物的优 选范围及成分是每日给予460mg DL-苯丙氨酸、25mg L-色氨酸、25 mg L-谷氨酰胺、以及5mg吡哆醛-5’-磷酸。在该实施方案其它优选 的方面中，利用此中公布的或本领域技术人员已知的方法来测试受试 者以确定是否受试者具有化学物依赖的家族史，其中该家族史提示成 功治疗的可能性高。在该实施方案的其它方面中，这一治疗抑制暴 食。在本发明的其它方面中，这一治疗抑制成瘾。在优选的方面中， 组合物含有铬盐。

如此中所描述的，利用一种分子生物学检测来测试受试者检测一 种同RDS或心理学行为相关的等位基因是本发明的一部分，这样一种 诊断性等位基因的存在是受试者更可能对此中所公布的用于治疗的组 合物发生阳性反应的指示物。在该实施方案优选的方面中，利用此中 所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检 测进行测试，检测下列等位基因中至少一种的存在：D2 TaqI A1、 B1、C1或外显子6-7单倍型、HTR2A-C等位基因纯合、0B-1875二核苷 酸重复多态性的＜208BP等位基因的纯合性、人2号染色体微卫星多态 性、APO-D-TaqI 2.2或2.7BP、或0B基因D7S1875，其中检测到上面 所提到的等位基因提示对治疗成功反应的可能性提高。在该实施方案 其它优选的方面中，组合物包括有效数量的烟酸铬，而且检测受试者 DRD2 A1等位基因的存在，其中DRD2 A1等位基因的存在提示对治疗反 应的可能性提高。在该实施方案其它优选的方面中，组合物包括有效 数量的吡啶甲酸铬，而且检测受试者DRD2A2等位基因的存在，其中 DRD2 A1等位基因的存在提示对治疗反应的可能性提高。

在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为是烟草滥用，利用此中 所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检 测进行测试，检测下面等位基因中至少一种的存在：D1(Dde A1的纯 合)、D2(Taq A1)、D4(VNTR2)、D5(二核苷酸13等位基因，范 围135-159BP)、DAT1 VNTR(10/10)、DβH(TaqI B1等位基因)， 其中检测到上面所提到的等位基因提示对治疗的成功反应的可能性提 高。

在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为进一步包括孤僻症、抽 动-秽语综合征或ADHD，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学 测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测下面等位基因中 至少一种的存在：D1(Dde A1的纯合)、D2(Taq A1)、D4(VNTR 2)、D5(二核苷酸13等位基因，范围135-159BP)、DAT1 VNTR (10/10)、DβH(TaqI B1等位基因)、MAOA(X)，其中检测到上 面所提到的等位基因提示对治疗成功反应的可能性提高。在该实施方 案的某些优选的方面中，组合物包括Rhodila或石杉碱。

在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为是病理性赌博，利用此 中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学 检测进行测试，检测下面等位基因中至少一种的存在：D1(Dde A1的 纯合)、D2(Taq A1、B1、C1)，其中检测到上面所提到的等位基因 提示对治疗成功反应的可能性提高。

在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为进一步包括病理性暴 力、分裂样/回避(SAB)、攻击、发怒、敌视或创伤后应激障碍，利 用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生 物学检测进行测试，检测下面等位基因中至少一种的存在：D2(Taq A1、B1、C1、外显子6-7)、DAT1(VNTR 10/10)、mNOSIa-≤201BP 纯合，其中检测到上面所提到的等位基因提示对治疗成功反应的可能 性提高。

在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为是PMS，利用此中所公 布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进 行测试，检测DAT1(VNTR 10/10)、D2 TaqI A1、B1、C1、外显子6- 7 单倍型等位基因或DRD1、DRD2、DRD4、HTT、HTRIA、TDO2、DβH、 MAO、COMT、GABRAB、GABRB3、PENk、ADRA2A或ADRA2C基因的等位基 因中至少一种的存在，其中检测到上面所提到的等位基因提示对治疗 成功反应的可能提高性。

本发明进而提供一种确定受试者对至少一种RDS行为的遗传学素质 的方法，其通过检测来自包括但不限于DRD1、DRD2、DRD3、DRD4、 DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、 MAOA、COMT、GABRA3、GABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、 CRF、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ干扰素、CD8A或PS1基因中至少一个 等位基因来进行，其中该等位基因对于一种RDS行为是诊断性的。在 本发明的一个实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传 学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测至少一个MAOA 等位基因VNTR多态性的存在，其中该等位基因的存在对于包括躁狂、 OCD、性、睡眠、小学行为、赌博、学习、无注意力、ADHD、ADDR、 冲动、MDE、CD、多动、恐怖症、分裂样行为、广泛焦虑、躯体症状 化、药物、静脉药物、阅读、ODD、抽动、酒精或烟草滥用的RDS行为 遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测至少一 个DRD2基因A1等位基因、DAT1基因、VNTR 10/10等位基因、或DβH基 因B1等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括分裂样或回避 的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测在CNR1 基因中增加数量的(AAT)n三联体重复的存在，其中该等位基因的存 在对于包括药物滥用的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测在OB基 因中增加数量的D7S1873、D7S1875、D7S514或D7S680二核苷酸重复 的存在，其中该等位基因的存在对于包括肥胖症、焦虑、抑郁、精神 病、敌视、偏执狂样想象、强迫、症状总和、一般症状指数、新奇追 求、整体总和、神经过敏、以及谨慎的RDS行为遗传素质的受试者是 诊断性的。在该实施方案中，优选等位基因为长度大于225bp的 D7S1875二核苷酸重复，而且该等位基因在CNR1基因的两个拷贝中均 存在。在该实施方案中，还优选所检测的另一等位基因为DRD2基因的 D2A1等位基因。在该实施方案中，还优选RDS行为是肥胖症。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD2基 因的D2A1等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括抽动-秽 语综合征、躁狂症状、违抗、性、ADHD-R、分裂样、ADHD、抽动、重 性抑郁、品行、口吃、强迫、躯体化症状、酒精滥用、学习和睡眠问 题的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DβH基 因的Taq A1等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括抽动- 秽语综合征、ADHD、吸烟、学习、小学、ADHD-R、违抗、抽动、躁 狂、酒精、阅读、药物滥用、睡眠、口吃、强迫、躯体症状化、以及 重性抑郁的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。在该实施方案 中，优选等位基因为DβH基因的Taq B1等位基因和Taq A1等位基因， 而且RDS行为是抽动-秽语综合征。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DAT1基 因的10等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于抽动-秽语综合 征、孤独症、躯体症状化、酒精、ADHD-R、重性抑郁、惊恐、强迫、 广泛焦虑、躁狂、违抗、性、阅读以及ADHD的遗传素质的受试者是诊 断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DAT1基 因的10等位基因、DβH基因的Taq A1等位基因或DRD2基因的D2A1等位 基因的存在，其中该等位基因的存在对于ADHD、口吃、ADHD-R、违 抗、抽动、品行、强迫、躁狂、酒精、广泛焦虑、惊恐、分裂样、睡 眠、性、药物以及重性抑郁的遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基 因的DdeI等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于酒精、吸烟、 强迫进食、抽动、赌博、药物、阅读、购物、违抗、重性抑郁发作、 分裂样、ADHD、品行障碍、强迫以及躁狂的遗传素质的受试者是诊断 性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD2基 因的TaqI A1和TaqI A2等位基因的存在，其中那些等位基因的存在对 于违抗、品行障碍、暴食、吸烟、赌博、ADHD、强迫、躁狂以及酒精 的遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基 因的11或22基因型的存在，其中该等位基因的存在对于抽动-秽语综 合征、吸烟以及赌博的遗传素质的受试者是诊断性的。在该实施方案 中，优选所检测的等位基因为两个拷贝/基因组DRD1基因Dde1等位基 因。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基 因的11基因型的存在，其中该等位基因的存在对于违抗行为、品行障 碍、强迫进食、吸烟、赌博、ADHD、躁狂、口吃、强迫以及分裂样的 遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基 因的DdeI等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于赌博、吸烟、 强迫进食、违抗、重性抑郁发作、ADHD、品行障碍、分裂样、强迫、 躁狂以及酒精的遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基 因的11或22基因型的存在，其中该等位基因的存在对于酒精、吸烟、 强迫进食、抽动、赌博、药物、阅读、购物、赌博以及小学问题的遗 传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测色氨酸 2，3二氧化酶的内含子6G→A多态性的存在，其中该等位基因的存在 对于抽动-秽语综合征的遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测色氨酸 2，3二氧化酶的内含子6G→T多态性的存在，其中该等位基因的存在 对于ADHD、酒精依赖、药物依赖、病理性赌博的遗传素质的受试者是 诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测色氨酸 2，3二氧化酶的内含子6DGGE多态性的存在，其中该等位基因的存在 对于ADHD、酒精依赖、药物依赖、病理性赌博以及抑郁的遗传素质的 受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行 遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测ADRA2C二 核苷酸重复多态性的低碱基对等位基因(＜181bp)多态性的存在，其 中该等位基因的存在对于药物滥用的遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测ADRA2C 二核苷酸重复多态性的两个≥183bp的高碱基对等位基因多态性的存 在，其中该等位基因的存在对于包括酒精滥用的遗传素质的受试者是 诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测早衰素 -1(presenilin-1)(PS-1)多态性的两个同源等位基因的存在，其中 该等位基因的存在对于包括酒精和烟草滥用的遗传素质的受试者是诊 断性的。在该实施方案中，优选所检测的等位基因为PENK基因的大于 80bp的CA二核苷酸重复多态性的两个同源等位基因。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测AR基因 的短GGC等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括CD、ODD或 多动的遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进 行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD2等 位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括酒精中毒的B型行 为、可卡因成瘾或RDS先证的遗传素质的受试者是诊断性的。

在本发明进而提供一种确定对多基因性状的遗传素质的方法，包 括检测来自DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、 ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、BABRB3、CNR1、 CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、CRF、DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、 HTR2C、γ干扰素、CD8A、或PS1基因中的至少一个相关等位基因。在 本发明的一个实施方案中，多基因性状为ADHD，而且等位基因同 DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、 ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、BABRB3、CNR1、CNRA4、 NMDAR1、PENK、AR或CRF基因相关。在另一实施方案中，多基因性状 为ADHD易感性的缺乏，而且等位基因同DRD3、DRD4、HTR1Dβ、 HTR2A、HTR2C、γ干扰素、CD8A、或PS1基因相关。

在本发明的另一实施方案中，多基因性状为OOD，而且等位基因同 DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、 ADRA2A、ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、 NMDAR1、PENK、AR或CD8A基因相关。

在本发明的另一实施方案中，多基因性状为抽动，而且等位基因 同DRD1、DRD5、HTR1A、HTR1Dβ、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2C、 COMT、GABRA3、CNR1或CHRNA4基因相关。

在本发明的另一实施方案中，多基因性状为LD，而且等位基因同 DRD1、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2A、ADR2C、MAOA、CNR1或CNRA4基因 相关。

在本发明的另一实施方案中，多基因性状为LDL，而且等位基因同 HTT、OXYR、DRD2或PS1基因相关。

在本发明的另一实施方案中，多基因性状为长寿，而且等位基因 同PS1、OXYR或APOE基因相关。

本发明此外提供一种建立诊断性的多基因检测法的方法，包括鉴 定待研究性状、建立待研究性状严重成度的量度；选择至少一种可能 对所述性状有贡献的候选基因，鉴定至少一种与候选基因相关的多态 性，将多态性的等位基因模式与所述量度相关联，并比较等位基因模式 对候选基因与性状相关性的相关性。将与性状正相关的等位基因模式 加在一起，形成一种对受试者的多基因性状易感性有诊断意义的多基 因检测法。将与性状负相关的等位基因模式相加形成一种对受试者缺 乏多基因性状易感性的诊断性多基因检测法，这也是本发明的一部 分。

在本发明的一个实施方案中，候选基因包括但并不限于DRD1、 DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、 NET、MAOA、COMT、GABRA3、BABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、 PENK、AR、CRF、DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ干扰素、 CD8A、或PS1基因。

在本发明的另一实施方案中，多基因性状包括但并不限于ADHD、 ADHD缺乏、ODD、CD、LD、抽动、药物滥用/依赖、吸烟、骨关节炎、 胆固醇水平升高、LDL水平升高或长寿。

在本发明的一个实施方案中，对于ADHD的多基因检测为检测至少 一个与DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、 ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、BABRB3、CNR1、 CNRA4、NMDAR1、PENK、AR或CRF基因相关的等位基因。

在本发明的另一实施方案中，对于ADHD缺乏的多基因检测包括检 测至少一个与DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ干扰素、 CD8A、或PS1基因相关的等位基因。

在本发明的一个实施方案中，对于OOD的多基因检测包括检测至少 一个与DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、 DBH、ADRA2A、ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、 NMDAR1、PENK、AR或CD8A基因相关的等位基因。

在本发明的另一实施方案中，对于抽动的多基因检测包括检测至 少一个与DRD1、DRD5、HTR1A、HTR1Dβ、HTR2C、TDO2、DBH、 ADR2C、COMT、GABRA3、CNR1或CHRNA4基因相关的等位基因。

在本发明的一个实施方案中，对于LD的多基因检测包括检测至少 一个与DRD1、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2A、ADR2C、MAOA、CNR1或 CNRA4基因相关的等位基因。

在本发明的另一实施方案中，对于LDL水平升高的多基因检测包括 检测至少一个与HTT、OXYR、DRD2或PS1基因相关的等位基因。

在本发明的一个实施方案中，对于长寿的多基因检测包括检测至 少一个与PS1、OXYR或APOE基因相关的等位基因。

在本发明的另一实施方案中，对于骨关节炎的多基因检测还包括 检测至少一个与COL2A1、COL2A1、COL2A1、COL9A1、COL9A1、 AGC1、IGF1、IGF1、IGF1R、IGF1R、IGF2、IGF2R、TGFB1、TGFB2、 IL1A、IL1B、IL1R1、IL1RN、MMP9、TIMP1或维生素D3基因相关的等 位基因。

在本文中应用时，“一种”或者“一个”或者“个”应当理解为 可能意味着一种或者一种以上。 附图简述

下列附图构成本说明书的一部分并用于进一步说明本发明的特定 方面。本发明可以通过参照一副或者多副附图和对本文中对特定实施 方案的详细描述得以更好的理解。

图1.“超级对照(正常)”和严重“RDS”先证者的DRD2基因。 用于比较所示各组的线性趋势分析中p＜0.000001。计算机分选组别：

组I(C1)：对酒精中毒，物质滥用障碍，多物质依赖，化学依赖 和肥胖家族史，尼古丁依赖(吸烟)BMI超过25，碳水化合物暴食，孤 独症，抽动-秽语，ADHD，Axis II，病理性赌博和创伤后应激障碍仔 细评价。发明者利用DSMIV准则来评价物质滥用障碍。(N＝11)

组II(C2)：除了Axis II以外组I的相同排除标准包括在内。 (N＝6)

组III(C3)：除了物质滥用障碍和肥胖阳性家族史以外组I和II 的相同排除标准包括在内。(N＝20)

组IV(C4)：除了吸烟行为(尼古丁依赖)以外组I，II，III的 相同排除标准包括在内。(N＝21)

组V(C5)：除了苯并二氮杂滥用/依赖以外组I，II，III，IV 的相同排除标准包括在内。(N＝31)

组VI(C6)：除了物质滥用障碍(即酒精和可卡因)以外组I， II，III，IV，V的相同排除标准包括在内。(N＝74)

组VII(C7)：除了BMI超过25的以外组I，II，III，IV，V，VI的 相同排除标准包括在内。(N＝140)

组VIII(C8)：除了共生物质滥用障碍(滥用酒精和可卡因)的 BMI超过25的以外组I，II，III，IV，V，VI，VII的相同排除标准包 括在内。(N＝31)

组IX(C9)：除了共生多物质依赖(即酒精和可卡因)的BMI超过 25的以外组I，II，III，IV，V，VI，VII，VIII的相同排除标准包括 在内。(N＝11)

另外，为了进行统计学比较，本发明也包括了按文献预先基因分型 有18.5％的D2A1流行率(Blum等，1990，Blum等，1991，Noble 等，1993，Parsian等，1991，Comings等，1991，Smith等，1992， Amedeo等，1993)的总数为286(N＝286)的健康白人(L1)男子和女 子(仅用于筛选酒精和毒品滥用者及在一些情况下筛选尼古丁滥用 者)。此外，本发明包括了总数714(N＝714)的受试者(L2)，他们 按文献仅用于筛选酒精或多物质依赖(Blum等，1990，Parsian 等，1991，Comings等，1993，Noble等，1994，Amedeo等，1993， Comings等，1994，Noble等，1993，Schwab等，1991，Uhl 等，1992，O’Hara等，1993，Uhl等，1992)，D2A1流行率为25.9。另 外，本发明也包括了总数980(N＝980)的受试者(L3)，按文献 (Bolo等，1990，Grandy等，1989，Gelernter等，Uhl 1992， Goldman等，Finns 1994，Nothen等，Noble等，1994，Jonsson 等，1993，Hedebrand等，1993，O’Hara等，1993)他们有32.9的 D2A1流行率(未知情况的对照)。

图2.PhencalTM对体重降低的效应。该图说明在两年期以后 PHENCALTM和非PHENCALTM组的体重比较。在两年研究的最后，与不使 用PHENCALTM的对照组(n＝117)的52.8％相比，使用PHENCALTM的受 试者(n＝130)平均超重23.5％(p＜0.0001)。

图3.MAOA VNTR等位基因多态性分布(等位基因总数＝768)。

图4.逐渐增加累加性基因变体的数目对ADHD评分的累加性效应。 它表明了一种从只有4或者5个变体基因的1.0到有15个变体基因的 25.0的进行性增加趋势。ADHD评分进行性增加的线性卡方检验的p值 ＜10-8。

图5.所有29个基因对ADHD评分的累加性和减性效应，以及只有累 加性基因的累加性效应。底部的空心正方形代表指定随机评分的每个 基因的r2值，它与观察的评分频率相配合。r2值的进行性累加性效应 由空的正方形来表示，只使用阳性相关的累加性效应通过有一个x的 正方形来代表。线上的点由x来标记的是累加性基因，线上的点由一 个实心点来标记的是累加性和减性基因。同时使用累加性和减性基因 的最终r2是.0001。只使用累加性随机基因的最终r2是.0004。没有一 个是显著的。此外，虽然在随机PENK基因中替代性r2高达.008，但当 最后的随机累加性基因(CD8A)加入后它降回到.0004。

图6.所有29个基因在分成两半的样品中(n＝166)的累加性和减 性效应。一些基因在两组中既是累加性又是减性的，一些基因在一组 中是累加性的而在另一组中是减性的。实心点代表组I的数据，实心 正方形代表组II数据。

图7.没有DSM-IV ADHD症状的受试者与那些ADHD的DSM-IV标准的 受试者相比的变体基因数量分布。

图8.四个基因HTT，OXYR，DRD2和PS1对胆固醇和LDL血液水平的 累加性效应。该图说明MAA技术鉴定出四个基因，与154个受试者结合 时，给出p＝2.0×10-4的显著结果。实心圆是胆固醇的数据，空心圆 是低密度脂蛋白的数据。 说明性实施方案的描述 用于RDS和其他多基因性状诊断的多基因

本发明者相信许多心理学障碍是通过共同的生物学底物相联系 的，脑中的“硬线”系统在报偿某些行为的过程中提供乐趣。本发明 者在本发明中提出，改变伏核或者别的边缘报偿区细胞间信号传导的 先天性化学不平衡可能以焦虑、愤怒或者是以对能够缓和消极情绪的 对物质(如酒精)的嗜欲来代替个体的幸福感觉。这种化学不平衡表 现为已创造的词汇“报偿缺陷综合症”下的一种或多种行为障碍 (Blum等，1996a)。

在报偿缺陷综合症或者RDS中，报偿途径的遗传学缺陷最好理解为 多基因障碍，遗传学检测需要检测多个基因。本发明鉴定了RDS的易 感性与包括但不局限于以下基因的相关性：多巴胺能基因DRD1， DRD2，DRD3，DRD4，DRD5，多巴胺转运蛋白基因(DAT1)；5-羟色胺 基因HTT，HTRA，HTRDb，HTRA，HTRC，色氨酸2，3-羟化酶 (TD02)；去甲肾上腺素基因，DβH，ADRAA，ADRAC，NT，儿茶酚胺 代谢基因，MAOA，COMT，GAGA基因，GABRAA，GABRAB，大麻酯受体 基因，CNR，烟碱胆碱能，CHRNA；NMDA受体基因，NMDAR，脑啡肽基 因，PENK；雄激素受体基因，AR，γ干扰素基因，INFG，CDA；早衰素 -，PS-；CRF基因，CRF，肥胖基因(OB)，瘦素受体基因；5-羟色胺 HTR1A受体基因，5-羟色胺受体(5HT2R)基因，儿茶酚(catachol)- O甲基-转移酶(COMT)基因，神经元氧化氮合成酶基因(nNOS1a)， 载脂蛋白-D(APO-D)以及解偶联蛋白(UCP1和UCP2)。

非常复杂的RDS和相关行为的性质以及许多环境因素的重要性，消 除了一个特定基因或者环境因素实际上起100％决定作用的可能性。虽 然相信总体上“报偿级联模式”在受到损害时导致RDS行为，本发明 者谨慎地指出，虽不止一个基因可能对在一种RDS亚性状总变异的一 定比例负责，它可能与另一个相关RDS行为极少或没有关系。

改进的基因分型技术已经使得在普通人类疾病的病因学中应用遗 传学方法绘制基因图在商业上变为可能。许多疾病基因通过连锁分析 方法进行了鉴定，该方法用随机标志位点在疾病性状的家庭成员中的 共分离进行检测。它们中的大部分属于具有简单遗传方式的单基因孟 德尔疾病基因(Weeks和Lathrop)。现在，人类遗传学家正在开始研 究多因素疾病的遗传学例如高血压，糖尿病，心脏病，多发性硬化， 关节炎和RDS行为如肥胖。多因素疾病是由相互作用并与环境因素相 互作用的多个基因引致，产生对疾病遗传素质的梯度。上位的程度和 类型或者这些基因的相互作用强烈影响应用连锁分析方法检测基因的 机会。即使没有上位，如果保持遗传学异质性，几个不同位点独立地 引起性状，成功的机会可能会降低。对于复杂的疾病如RDS，传统LOD 评分分析是不会非常有效的，因为它假定存在能解释大部分遗传变异 的单一主要疾病位点(有特异的遗传模式)，现在已知对RDS来说不 是这样的，因此相关研究将更有效并将是更好的方法。

现有技术在试图发现例如酒精中毒本身或者象TS和ADHD的RDS行为 的基因时，一个重要误区是大部分工作者包括本发明人，都集中在单 个基因方法，因此只能够鉴定所有变异的一小部分，如DRD2等位基 因。例如对于TS，主要工作也是运用带有减低外显率的常染色体显性 遗传模式的连锁研究，但不是相关研究，目前虽然排除了几乎百分之 百的基因组，这种方法不是有效的。本发明者已经说明RDS是来自双 亲基因的多基因系列障碍。当在一实际的多基因障碍中使用Lod评分 连锁研究时，在标记中会造成许多错误，以致于即使对于实际上参与 表型限定的基因，也会得到负的lod评分。另外，当障碍是多基因遗 传时，关于通过连锁分析已经排除特定基因作用的论点，如在DRD2基 因中，不再有效(Devor等，1994；Gelernter等，1990)。

本发明中，有时将多基因群的一个单个基因称作为一个多基因。 在过去的十年中，发明者已经检查了许多行为和神经病学表型的数十 个基因的潜在作用。基于相关系数的计算，发明者发现，不考虑显著 性的水平，特定的多态性解释QTV变异的百分比在0.5％到2.5％之间。 由于特定等位基因对性状如此低的效应水平，相关研究可能是鉴定多 基因作用的唯一有效方法。因为一个多基因解释表型的百分比降低， 鉴定该效应的困难增加并且必须研究的受试者的数量也增加。对相关 研究的一个批评是，如果对照是来自于不同的种族或人种的话，在这 些群体中基因频率的出现或者差别能产生错误的结果。这在理论上能 够通过单倍型相对风险技术消除，对二倍型(diabolic)标志来说，当 等位基因频率在0.1到0.2之间变化时，以及研究的基因只引起低于 20％的变异时，这项技术的能力受到严重限制。最后，相关研究方法 拥护者(尤其对于DRD2研究)的一个反驳理由是，仔细筛选对照以排除 许多已经相关的RDS行为(SUD，TS，ADHD，CD，SAB，及其它)的失 败以及检查的条件能够导致得到不相关的错误假设(Blum等，1995； Blum等，1997)。

然而，现有数据的几个中位分析已经说明这种相关是强的 (Cloinger，1991；Gorwood等，1994；Noble an Blum K，1993； Pato等，1993；Cook和Gurling，1994；Uhl等，1993；Blum 等，1995；Blum等，1997)。研究DRD2A1等位基因与酒精中毒(它也 适用其它RDS行为)相关的一个重要因素是使用比较对照类型。对以 前使用过的对照的结合分析已经说明A1等位基因在没有评定的对照中 有比在进行过酒精中毒和另外的有关因素评定的对照中显著高的流行 率(Uhl等，1993；Noble等，1994a)。这个结果在最近的研究中更 突出，Neiswanger等，1995以及Hill和Nyswander，1997，他们通过 使用“超级正常”对照，发现A1等位基因与酒精中毒之间的强关联 性。该研究组断定，如此评定的对照组对以前观察到的偏斜结果可能 是比抽样错误或者群体分层更重要的解释。

超级对照。发明者在Priceton，New Jersey神经精神病学和医学 诊所评价了184个先证者，他们谨慎地接近对照，因此每一个体都排 除了许多RDS行为(包括酒精中毒，SUD，吸烟，BMI或者肥胖，病理 性赌博，碳水化合物暴食，axis 11诊断，SAB，ADD/ADHD，CD， TS，SUD家族史，以及肥胖症)，然后进行TaqID2A1基因分型，发现与 32.9％的携带DRD2A1等位基因的未筛选白人组不同，在符合标准的三 十人之中只有一个携带DRD2A1等位基因或者只有3.3％(见图1.)。实 际上当所有的组都进行比较时，他们发现，与已经很好评价的对照相 比，共生多物质依赖组(严重)A1+等位基因流行率的渐进性百分比 (％)增加明显要高。(X2＝78.7，df＝1，p＜0.000001)。

本申请的一个重要实施方案包括单独或者联合检测一些基因变体 的方法，基于它们各自对所诊断RDS行为的作用进行。发明者相信通 过利用基因的联合以及检测上述的特定多态性或者实际突变，将能够 更准确地鉴定风险个体，即比如以前公布的专利建议的多巴胺受体基 因的DNA检测那样只有一个基因被检测时准确度更高。为了更清楚地 说明这种潜力，推测一些基因参与报偿路径。尽管这里说明神经递质 参与报偿路径，但在物质滥用和其他冲动、成瘾行为中有已报道的多 态性和遗传缺陷的理论效应的相关基因，发明者建议这些基因和许多 其他未鉴定的基因将组成完整的RDS异态图(allomorphic map)。它作 为一种基础，可以认为随着时间和更多研究的进行，影响其他神经递 质的基因将加入到该多基因群中，以及其他多基因的精神病学障碍 (尤其对于本发明的“报偿”和系列行为)应用本技术也将是可破译 的。实际上存在这样一种可能性，许多染色体位点和特定的标记或者 基因将在不久的将来被发现，但是本发明的目的是发展用于检测与发 明者定义为报偿缺陷综合症的冲动-强迫-成瘾行为以及其他多基因性 状相关的许多已关联基因的MULTIPLEX GENESCANTM。另外，本发明者 已开发了包括RDS的多基因性状的诊断方法，被称为多累加关联 (MAA)技术。

多重累加性关联(MAA)技术的步骤。特定的实施例说明MAA技术 在构建RDS相关障碍诊断分析中的应用。然而，发明者提出的一些实 施例是与精神病学障碍无关的并说明MAA技术可推广到所有的多基因 障碍和多基因性状。因此，发明者设想MAA技术成为对所有多基因障 碍的方法。多基因障碍被认为是由于许多基因的累加效应，每个基因 独自只能引起表型变异的一小部分。在全部个体中它们呈现不同的程 度。多基因障碍比单基因障碍要普遍的多，影响了人口的1％到20％。 部分实例是高血压，肥胖，大多数精神病学障碍，多发性硬化，红斑狼 疮，骨质疏松，冠状动脉疾病，类风湿性关节炎，骨关节炎，体重， 身高，血压，年龄(寿命)，心理学性状和任何其他在某种程度上由 超过一个基因或等位基因决定的性状。下面讲授MAA技术如何施行。

本MAA技术具有以下独特的额外特征。首先，它显著地扩大能够检 测的基因数量到数千。它通过应用相关系数(r)、变异比例(r2) 代替了性状本身把所有数量性状或二歧性状置于同一量度。它引入这 样的概念，当单个基因加入时，它们可能是累加性的(r和r2升高)或 是减性的(r和r2降低)。它利用这种升高和降低来鉴定在障碍或者 性状中起作用的那些基因，因为它们是累加性的，和在障碍或者性状 中不起作用的那些基因，因为它们是减性的。只利用累加性基因评估 由鉴定的累加性基因引起的变异的总百分比r2来进行再分析。通过评 估多个基因的累加性效应而不是以一次一个基因的方式评估基因， MAA技术在鉴定参与多基因障碍的基因时比单个地评估基因的方法例 如lod评分、血亲对、单倍型相关风险(Falk和Rubinstein， 1987)、以及遗传不平衡检验(Spielman和Ewens，1996)更加有 效。MAA技术显示一次一个基因的相关研究中的p值与一个基因是否参 与多基因障碍或性状很少有关。MAA技术可以描述为具有以下步骤， 一些步骤是该技术特有的。

步骤1.第一步是鉴定要研究的多基因障碍或性状，如注意缺陷多 动障碍(ADHD)，抑郁，胆固醇水平，体重，身高，寿命，血压，多 发性硬化，或者任何其他多基因性或推测是多基因的障碍或性状。除 非另有说明，采用已有的诊断会面方法如DIS(诊断会面程序) (Robins等，1991)或SCID(Williams等，1992)应用DSM标准，进 行已知或推测是多基因的心理学性状个体的精神病学诊断。发明者设 想最新DSM版本可以用于进行这样的诊断，但旧的版本仍可以使用。

步骤2.第二步是建立评估多基因障碍严重性的量度。这可能是数 量性状或者是二歧变量(QT或DV)。例如，研究血压时数量量度可能 是舒张期血压，研究身高时可以使用英尺或厘米表示的身高，研究肥 胖时量度可能是体重或BMI，研究抑郁时量度可能是抑郁的阳性DSM- IV标准数量，等等。二歧性状也可以应用。例如，如果研究200个对 照和200个多发性硬化的受试者，对照评分可能是0而多发性硬化的评 分是1。对性状、表型或者QTV的评分指性状的数量大小。例如，如果 我体重200Ibs，我的体重评分将是200。如果我有水平为250的胆固 醇，我的胆固醇评分将是250，等等。对基因进行评分依照哪种基因 型与最低、中等或最高的表型效应相关，将评分0、1或者2指定给基 因型。

步骤3.第三步是鉴定要检测的候选基因。作为实例，本申请为 ADHD、违抗障碍、品行障碍、学习障碍、酒精问题选择了29个候选基 因，它们是对包括多巴胺，5-羟色胺，去甲肾上腺素，GABA，以及其 它的神经递质的调节起作用的基因。本领域的普通技术人员将能够认 识到可能潜在地对多基因性状起作用的基因。首先选择那些可能与评 估的性状有代谢或生理学关系的基因，有助于选择在MAA技术中应用的 一个候选基因或一组基因。在公共图书馆可得到的科学文献或者从国 家生物技术信息中心的基因库(Genebank)那样的计算机化数据库中描 述或发现的基因或等位基因，都期待作为候选基因用于MAA技术对特 定性状进行诊断或预后分析。本领域技术人员将能够认识到有另外的 遗传学信息资源，包括个人的知识或者未发表或不能公开得到的知 识，它们能够用作鉴定大部分多基因性状和障碍的候选基因，并且这 样的资源可以用于MAA方法的实践。

涉及如身高或骨质疏松易感性这样的多基因性状的候选基因的一 个例子是涉及骨和/或形成、生长和/或调节的基因。另外一个能够评 价的性状是肥胖，候选基因将包括这些基因加上OB基因、OB受体基 因、神经肽Y基因和神经肽Y受体基因。对于如血压这样的性状，合理 的候选基因将是那些涉及去甲肾上腺素、肾上腺素、类固醇和血管紧 张肽原酶代谢的基因。

在本发明的实施例中，选择了许多推测涉及多基因性状的基因。 特别重要的是推测涉及RDS行为的基因。选择基因的标准包括文献报 道它们参与一个或多个RDS行为或者另外的目的多基因性状，和/或发 明者的实验数据(这会在下文中描述)。发明者期待基因或多态性与一 定性状的相关性可以用于该性状的诊断分析中，并对于某基因和/或 其特异多态性是否适用于目的多基因性状的MAA诊断分析提供指导。 对于该基因或多态性，性状不一定与RDS关联。

DRD1基因。这个特定基因在发明者的初步研究中和对照相比与严 重酗酒先证者没有关联，这样，对更大样本的附加发现是另人吃惊 的。研究表明对DRD1和DRD2两个多巴胺受体基因的检查发现它们比任 何一个单独基因解释系列行为变异的更大比例(Comings 等，1997)。D1受体基因多态性可能与多物质滥用比与严重酗酒更相 关。

多巴胺能基因，暴力和分裂样/回避行为。另外的发现支持在复杂 人格障碍如“病理性暴力”和分裂样/回避行为(SAB)中有多基因遗 传的概念。发明者发现在DRD2A1等位基因和在青少年先证者中的“病 理性暴力”之间有强相关，也发现多巴胺转运蛋白基因(DAT1)的10 等位基因相似的相关性。发现了DRD2A1等位基因与SAB的强相关，但 DβH基因没有发现相关，虽然发现DAT1基因与SAB有较弱的相关性 (Blum等，1997)。

DβH等位基因的检查可能是评估DβH基因在人类行为障碍中潜在作 用的最精确方法。这是支持DRD2TaqIA1等位基因与SAB和PV强相关的 首次研究。当这些复杂性状没有显示简单的孟得尔遗传方式时，将不 能预期由单个基因引起简单的遗传学答案。多巴胺基因与病理性暴力 的关系将在具体实施例17中作进一步描述。

多巴胺D2受体基因。在与多态性标记的连锁失衡中保持的位于基 因3’和5’非编码区的推定突变，可能影响DRD2的转录和/或mRNA的稳 定性并且因此影响DRD2受体的数量。这是基于以下的实事：发现与位 于侧翼区而不是外显子点突变的标记有更强的相关性；已报道在“A1 标记的”DRD2等位基因外显子(外显子8除外)中无突变；以及已报道 在没有Kd改变而有A1标记时DRD2 Bmax降低(Noble等人，1991)。这 可能帮助解释与多态性TaqID2缺乏相关性。与TaqID2缺乏相关性与群 体遗传学分析相符，后者说明尽管TaqI A和B彼此有着强烈的连锁不平 衡，A1的3’侧翼标记呈现与TaqI D较少的不平衡，可能因此预期它 与兴奋剂喜好的弱相关性(Suarez等人，1994)。

对于更复杂的问题，对于一些研究中失败的解释可能是由于 Comings(共同发明人)提出的分子杂种优势。这发生在当遗传多态 性是杂合的受试者比两个等位基因之一是纯合的受试者在数量性状变 数(QTV)上有着明显更高的(阳性杂种优势)或者更低的(阴性杂种 优势)平均数时。

阳电子发射X线断层照相机(PET)研究已说明了在解毒的酗酒者 和滥用可卡因者的脑区葡萄糖代谢下降。在本研究中，使用18F-脱氧 葡萄糖，在具有A1+和A1-等位基因的健康的非酒精/非毒品滥用的受 试者中测定了区域性葡萄糖代谢。在许多脑区域中包括豆状核、伏 核、额回和颞回以及额叶前部内侧、枕-颞和眶皮质，平均的相对葡 萄糖代谢率(GMR)在A1+组中比A1-组中明显要低。在A1+组的相对 GMR下降也发现于运动言语区、前脑岛、海马以及物质黑质。然而在 A1+组中部分脑区域呈现增加的相对GMR。

有几条说明多巴胺代谢缺陷在应激反应障碍病因学中作用的证 据。在A1等位基因携带者的脑中，较少数量的多巴胺D2受体可能在脑 涉及报偿的部分转化为较低水平的多巴胺能活性。A1携带者可能不会 从A2携带者发现满足感的刺激得到充足的报偿。这可能转化为A1携带 者持续的嗜欲或者寻求刺激的行为。由于已知多巴胺能减少应激或嗜 欲，A1携带者可能转向另外的物质或活动来释放更多数量的多巴胺以 得到暂时的缓解。酒精、可卡因、大麻、尼古丁以及碳水化合物(如 巧克力)都能引起脑中多巴胺的释放并带来对嗜欲的暂时缓解。这些 物质能够单独使用，联合使用或可互换地使用。相应的，DRD2基因与 吸烟的相关性已在我们的(Comings等人，1996b)和别人的(Noble 等人，1994；Lerman等人，1997)研究中得到证明。

多巴胺-β-羟化酶。由于DβH位于交感神经末端并在去甲肾上腺 素的释放过程中被释放进入循环，因此控制它的基因可能位于染色体 位点上而不是DβH本身。因此，在DβH位点的遗传学标记和ADHD， CD，酒精中毒以及另外的RDS相关行为的相关性研究可能是阴性的。 另一方面，如果DβH的血清水平是由于一系列环境因素共同确立的， 与DβH遗传学标记的相关性研究可能比血液水平对DβH基因在这些障 碍中的作用提供更精确的评价。

这些发现和另外的发现一起说明DβH基因的多态性可能只在特定 的RDS行为中起作用，通过以前关于DβH或它的活性产物(多巴胺或 去甲肾上腺素)的血液水平来预测遗传学结果是困难的。

在药物滥用和其他性状中的多巴胺-β-羟化酶。DβH活性的抑制 导致与多动、攻击、自我刺激和刻板运动相关的多巴胺的过度产生 (Randrup和Scheel-Kruger，1996)。这表明DβH在人类攻击行 为、ADHD和品行障碍(CD)中的可能作用。在低血浆DβH水平的情感 障碍男孩中CD诊断频率增加已有报道(O’Connel等人，1992； Rogeness等人，1984；Rogeness等人，1986；Rogeness等人， 1988；Rogeness等人，1987)。一些研究已表明在低DβH水平和某些 人格性状如在Eysenck人格调查表中的外翻评分(Roy和 Brockington，1987)和感觉寻找(Ballenger等人，1983； Umberkoman-Wita等人，1981)间的关系，而在一项研究中，血浆Dβ H水平与感觉寻找评分间有正相关性(Folatein和Rutter，1977)。

本发明的另一方面涉及多巴胺-β-羟化酶的相关性研究并表明Dβ H二核苷酸重复多态性与药物滥用模式之间的首次相关性(Comings等 人，1996a)。

发现DβH二核苷酸重复多态性在175bp以上或以下有双模式的等位 基因分布。将受试者基因分型为低的(≤174bp)或高的(≤176bp) 纯合，或者杂合。通常，发现带有高碱基纯合的病人于ASI以前有更 大量药物使用、更长的可卡因应用史、更高频率的安非他明静脉注 射、更高频率的静脉药物使用。这些受试者报告了更经常的父母酒精 中毒和儿童时期的性虐待史。高bp基因型的病人与“自我接受，启蒙 第二特性，和自我指导”(Self-Acceptance，Enlighted Second Nature，and Self-Derectiveness)的低评分相关。

象DRD2 A1等位基因一样，DβH B1等位基因与变量ADHD，强迫 症，躁狂，违抗以及睡眠是最相关的。不同之处包括DRD2 A1等位基 因与精神分裂症、性、品行和口吃变量的相关性更大，而DβH B1等 位基因与学习、阅读和学校问题有更强的相关性。与在倾向于列在底 部的DRD2研究相反，与学校行为如阅读、学习和小学相关的变量在D βH研究中等级高的趋势是特别引人注目的。这可能与DβH在记忆中 的作用有关。

抽动-秽语综合症(TS)可能是RDS最复杂的可辨认形式中的一 种。由于所有的与DβH活性抑制相关的行为在抽动-秽语综合症 (TS)病人中是常见的(Comings和Comings，1984；Comings和 Comings，1987b；Knell和Comings，1993；Comings，1990)，可 能在DβH Taq B多态性(d’Amato等人，1989)与TS、举止障碍、注 意缺陷多动障碍(ADHD)之间存在相关性。

DAT1基因在病态肥胖中的排除。DRD2 A1等位基因的存在指示不仅 对于肥胖也对于另外的成瘾行为来说风险增加，而且BMI超过25本身 (没有宏观选择[碳水化合物暴食]或者共生SUD的特征)对于与DRD2 A1等位基因的相关性不是充足的标准(Blum等人，1996)。

既评价DRD2 A1也评价DAT1基因的病态肥胖领域的工作表明在女子 中34％或更多的身体脂肪以及在男子中28％或更多的身体脂肪仅与 DRD2A1等位基因(p＜O.0001)相关而与DAT1基因无关。最高的体重出 现在具有DRD2A1/A1-DAT1-10/10单倍型的个体中，说明在病态肥胖中 两个基因的分布中D2受体基因有着大得多的分布。

大麻酯受体基因。静脉内药物(IV)药物使用的倾向性可能受到 遗传学和环境因素的影响。为了探索这些基因-文化病因学因素，对 77个男性非西班牙白人物质滥用者和70个种族相配的对照作了评估。 病人按成瘾严重性指数用药；所有先证者按“家庭环境量表”和“儿 童期体验调查表”用药，并且对多巴胺能、大麻和GABA能基因举行基 因分型。本发明者发现基因型仅含有CB1(大麻)受体基因的高分子量 等位基因和GABRB3基因的低分子量等位基因的受试者中静脉药物利用 的流行率更高。CB1基因一个三核苷酸重复序列，有至少9种等位基因， 本发明者发现证据表明，其对表型的效应不能从等位基因的相对重量 进行直线预测，它们与静脉药物利用间的相互作用要复杂得多。几种环 境变量(包括家庭环境量表中的一种)在去除与遗传变量相关的变异后 与静脉药物利用的易感性相关，尽管这些环境变量本身可能处于未鉴 定基因的影响之下。

电生理学异常和物质使用障碍(SUD)：与多巴胺D2受体和大麻酯 受体基因的关联。相应于“超级对照”和许多文献对照，严重物质使 用障碍(SUD)与DRD2A1等位基因之间的明显相关性已经被观察到 (Blum等人，1997；Hill等人，1997)。唤醒相关电位(ERP)的 P300波的幅度下降和潜伏期已与酒精和药物依赖相关联 (Braverman，R.等人，1990)。P300潜伏期的明显延长与三个风险 因素相关(1)双亲的SUD；(2)化学依赖(如可卡因依赖)以及 (3)碳水化合物暴食。P300幅度下降与酒精中毒和SUD的家族史有关 联，但与DRD2A1等位基因没有关联。

在本申请中，发明者提供了在额叶P300幅度下降与大麻酯受体基 因(CB1)≥5重复等位基因纯合性间明显相关的证据。为了评估是否 同样的基因型与酒精或药物依赖相关，对来自于ATU的98个受试者和 69个对照进行CB1重复等位基因的基因分型。所有受试者都是非西班 牙白人。应用“成瘾严重性指数”、诊断会面计划”、和MAST-R对ATU 受试者进行评估。只运用MAST-R从对照中排除药物和酒精滥用/依 赖。结果表明5重复等位基因的纯合与许多不同类型的药物依赖(可 卡因，安非他明，大麻)，与致幻觉剂、吸入物、海洛因、安非他 明、可卡因以及巴比妥酸使用的年限，与静脉药物使用和药物过量， 以及与药物滥用相关的法律问题(毒品指控、毒品定罪、驾车违章和 武器、攻击及故意破坏行为指控)有明显的相关性。相比之下，与和 酒精依赖有关的变量没有明显的相关性。这可能是由于对照和/或严 重酒精中毒的鉴定不足，特别是对于完全的RDS表型。然而，这些结 果与说明大麻酯受体在报偿路径和调整多巴胺代谢中起作用的研究是 一致的。

本发明鉴定了脑电活动图(BEAM)异常和与DRD2基因型相关性之 间的明显关系。发明者相信这作为诊断遗传诱导的RDS行为倾向的重 要验证试验具有商业价值。建议涉及上述人多巴胺受体基因A1等位基 因和大麻酯受体基因(CNR1)检测的方法伴随标准的脑图(即 Nicolett(TN))。

此外，加权的线性趋势揭示了与DRD2A2基因型和大麻SUD相比， DRD2A1等位基因存在下事件关联电位明显的恶化效果(p＜0.0001)。 Duncan’s Range检验说明与DRD2A2对照相比，带或不带DRD2A1等位基 因的SUD明显地恶化了EP’S。这些结果表明DRD2A1等位基因在涉及脑 功能和潜在成瘾倾向的非行为性病理生理表型中的作用。

5-羟色胺基因。5-羟色胺代谢的缺陷，以及血液5-羟色胺和色氨 酸水平异常，已经在许多精神病学障碍中有报道。5-羟色胺2，3-二氧 化酶(TDO2)是分解5-羟色胺为N-甲酰基犬尿氨酸的限速酶。发明者 试图确定5-羟色胺HTR1A基因的遗传变体是否与TS或其共生行为的表 型表达相关。在较少见等位基因(更短的和更长的等位基因)与 ADHD、CD、违抗障碍(ODD)、抽动、性和其他行为评分间有明显的 相关性。对这些评分的贡献是少量的，只引起2-4％的变异。HTR1A和 DRD2基因的效果是加和性的，共同引起ADHD、CD和ODD评分5.1％到5.4％ 的变异。这些结果与这些是多基因障碍的提法是一致的，部分是由于 影响5-羟色胺和多巴胺代谢的基因变体的几率会聚，以及环境因素。 重复序列本身可能在多基因遗传中重要的功能性等位多态性变体的产 生中起作用。

运用“Axis II人格障碍结构会面”和“成瘾严重性指数” (ASI)以及“Buss-Durkey敌意量表”(BHDS)对5HT-2受体基因 的T/C多态性的可能相关性作了评估。病人样本中，22基因型与边界人 格障碍(p＜0.05)和抑郁(p＜0.05)相关。这个标记在ASI中与花费 在药物上的钱的数量(p＜0.05)和强奸史(p＜0.05)以及入店行窃/ 对艺术的破坏(p＜0.05)相关。在BHDS中，男子对照中22基因型与袭 击(p＜0.01)和非直接敌意(p＜0.05)分量表升高的评分相关。在 女子对照中，5HT-2R基因与非直接敌意(p＜0.05)、抗拒症 (p＜0.05)、口头敌意(p＜0.005)和负疚感(p＜0.05)、以及总的 敌意评分(p＜0.01)是相关的，但相关的极性现象被逆转了(在所有 评分中11基因型与更高值相关)。基因型相关性的性别逆转表明它是 与性激素相互作用的复杂基因。

雌激素受体、芳香族酶位点和精氨酸加压素基因以及品行障 碍。由于雌激素受体基因敲除小鼠表现进攻性行为(Ogawa等人， 1996)，对该基因二核苷酸重复的研究可能与品行障碍有关。两个另 外的相关基因是在芳香族酶(CYP19)位点(Polymeropoulos等人， 1991)和精胺酸加压素(AVP)基因(Summar，1992)。

尼古丁(烟碱)受体基因。额叶前部皮质的尼古丁受体参与延迟的 反应任务，蕈毒碱受体更多的参与在总体工作记忆中(Granon等人， 1995)。许多研究已经表明了在尼古丁和多巴胺之间的紧密相互作 用。在与别的成瘾药物一起时，尼古丁与其他成瘾性药物一样能引起 中间边缘和伏核神经元多巴胺释放的增加(Dichiara和Imperato， 1988；Corrigall等人，1994；Pontiefi等人，1996)和强烈的自我 服药(Corrigall和Coen，1989；Corrigall和Coen，1991)。然而 耐药量随着重复服药迅速增加(Lapin等人，1989)。尼古丁抑制多 巴胺的摄入不象大部分的多巴胺摄入抑制剂那样，它只有50％的抑制 (Irenwasser等人，1991)。对多巴胺摄入抑制剂以及尼古丁受体激 动剂和抑制剂的研究表明对多巴胺摄入的影响是通过烟碱乙酰胆碱受 体介导的(Irenwasser等人，1991)。

神经元一氧化氮合成酶(NOS)基因。一氧化氮合成酶基因最近 发现与小鼠的攻击性行为有关。相对于非ob/ob的同窝小鼠，对ob/ob 小鼠的研究说明了一氧化氮合成酶水平的增加。对NOS基因敲除小鼠 的研究使一氧化氮在攻击以及性行为中的作用更加突出。ob/ob小鼠 在脑室旁核与外侧下丘脑有明显的去甲肾上腺素水平增加并在弓型漏 斗有明显的多巴胺水平下降(Oltman，1983)。

检查了神经元一氧化氮合成酶基因(nNOS1a)二核苷酸重复多态 性的相关性。对67个男性非西班牙白人物质滥用者和68个年龄种族相 符的对照的敌视程度、诊断特征以及人格性状进行了评估。病人样本 用AXIS-II人格障碍结构会面、成瘾严重性指数(ASI)以及 Cloniger脾气和性格调查(TCI)进行评估。病人和对照的等位基因分 布勉强不同(p＝0.056)，有高分子量等位基因纯合的病人。在AXIS- II会面中，高分子量等位基因纯合的病人更经常符合精神分裂症 (p＜0.05)和边界(p＜0.05)人格障碍的诊断标准。在ASI中，该基 因型与下列评分的增加相关：在过去的30天里表现过暴力行为 (p＜0.005)，伪造史(p＜0.05)，盗窃史(p＜0.005)，在过去的 30天里使用酒精(p＜0.005)，吸入物使用年限(p＜0.0075)，药物 解毒(detoxes)次数(p＜0.05)，在上个月经历酒精(p＜0.005)和 药物(p＜0.005)问题的天数。该基因型也与具有更少数量的朋友相 关(p＜0.04)，与它们的朋友具有更少的友情相关(p＜0.0005)， 与结婚次数更多相关(p＜0.05)。在TCI中，该基因型与下列相关： 冲动增加(p＜0.01)，依恋评分降低(p＜0.05)，依赖 (p＜0.02)，报偿依赖(p＜0.05)。目的性(p＜0.01)，自我指导 (p＜0.05)，感情移入(p＜0.05)，帮助(p＜0.02)，真诚的良心 (p＜0.02)，以及协同(p＜0.05)。

单胺氧化酶基因(MAO)。MAO是负责脑突触神经递质降解的一 个主要的酶。能够通过使用抑制MAO活性的药物来获得情绪和其他行 为的明显改善。许多研究已表明了MAO水平与下列关联：酒精中毒 (Wiberg等人，1977；Gottfries等人，1975；Devor等人，1994； 09)；精神分裂症(Wyatt等人，1979)；抑郁(Sherif等人， 1991；Pandey等人，1992)；躁狂抑郁障碍(Pandey等人， 1980)；自杀(Gottfries等人，1975；Sherif等人，1991； Buchsbaum等人，1976；Buchsbaum等人，1977；Meltzer和Arora， 1986)；ADHD，又名ADDH(Skekim等人，1982)；以及冒险，寻求感 觉或外在化的人格性状(Vonknorring等人，1991；Buchsbaum等 人，1976；Schooler等人，1978；Skekim等人，1989；Vonknorring 等人，1984)。然而另外的研究却没能够发现与这些性状中的一个或 多个的相关(Mann和Stanley，1984；Propping等人，1981； Tabakoff等人，1988)。运用酶水平(Wiberg等人，1977； Gottfries等人，1975；Devor等人，1994；Vonknorring等人， 1991)和遗传学变异(Vanyukov等人，1993)的以前的研究显示了 MAOA基因在物质滥用中的作用。

除了多巴胺能系统和大麻酯受体以外，已证明单胺氧化酶 (MAO)也在RDS中起显著的作用。本发明也提供了单胺氧化酶基因在 抽动-秽语综合症中的首次关联。X染色体连锁的MAOA或MAOB等位基因 的遗传缺陷可解释ADHA、TS及有关障碍在男性中的突出。三个重复多 态性的等位基因，MAOA的两个及MAOB基因的一个，在351个Ts病人、 亲属和对照中作了评估。每个受试者都完成了一张结构性调查表，对 与行为、学习和学校问题有关的23个不同数量性状进行评价。MAO VNTR和MAOB多态性的较长碱基对等位基因和MAO CA-1多态性的较短碱 基对等位基因有显著的趋势与ADHD、口吃、躁狂、抑郁、品行和学习 问题的高评分相关。最显著的结果是MAOA基因的CA-1重复对于ADHD (p＝0.005)、重性抑郁(p＝0.005)和口吃(p＝0.007)。而七种行 为的回归系数是显著的＜0.01，性连锁的MAOA基因的R2或变异的百分 比对一系列行为有贡献，涉及的程度不足以解释TS、ADHD或CD的男性 突出的程度。结果与TS系列障碍的多基因遗传机理以及小卫星本身可 能在基因调节中起作用的假设是相一致的。

肥胖中的OB、人第2染色体、解偶联蛋白2及APO-D基因。群体研 究表明女性比男性有更高程度的肥胖遗传负担，并存在这样的可能： 遗传学因素在年轻人中比在大于50岁的老年人更有可能参与肥胖，在 大于50岁的老年人中肥胖的发生率增加，占人群的很大比例，并且获 得性因素如更长的静坐生活方式可能更重要(Stunkard等人， 1986)。

涉及肥胖的一个重要蛋白产物是血清蛋白瘦素。它的合成由OB基 因控制并被认为在身体脂肪的调节方面起作用(Maffei等人， 1995)。已发现人体瘦素水平与个人的总肥胖性高度关联 (Considine等人，1996)。微卫星多态性，D2S1788，被发现位于由 lod评分显示与血清瘦素明显连锁的染色体22p21上(Comuzzie等人， 1997)。该基因座造成了47％的血清瘦素水平变异，并含有几个肥胖 候选基因，包括葡萄糖激酶调节蛋白(GCKR)和阿片皮质素原 (POMC)(Comuzzie等人，1997)。关于POMC基因的一个潜在的机理 是它是促肾上腺皮质激素(ACTH)的前体，促肾上腺皮质激素作用于 肾上腺皮质导致糖皮质激素的产生。然而有可能推论出POMC基因也作 为阿片肽的前体起作用。

名为解偶联蛋白(UCP1)的线粒体蛋白在产热和转变热量方面 起重要作用(Nicholls和Locke，1984)。该路径与体温、躯体组成 和葡萄糖代谢有关(Himms-Hagen，1990)。然而含有UCP1的褐色脂 肪组织并不参与居住于热中性环境的人类体重调节。UCP-2，与UCP-1 有59％的氨基酸相同，具有与在糖尿病和肥胖中的作用相一致的特性 (Fleury等人，REFERENCE)。当在酵母获得表达时，UCP-2对线粒体 膜电位比UCP-1有着更强的作用。UCP-2广泛表达于成年人体组织中， 包括在巨噬细胞丰富的组织中，并对脂肪食用反应而在白色脂肪中被 上调。

本发明结合了对所有这些具有许多不同生理学机理的肥胖基因的 多基因分析。这些区别可能考虑到累加性效应而不是协同作用，导致 更精确的基于DNA的预诊断试验。在一个样本中结合DRD2、OB、第2染 色体、UCP-2和APO-D基因是优选的实施方案，而不是使用任何单个的 基因。另外，发明确定病态肥胖的先证者不是根据BMI，而是根据身 体脂肪的百分比决定：女性34％，男性28％。

SUD的多基因方法。评估同组受试者的许多不同基因的等位基因 的独特优点是每个基因的相对效应能够通过不同的数量变量进行比 较。另外，基因型的鉴定给环境作用的分析更大的精致性和精确性， 因为基因的效应能够与环境的原因分离。

Moos’家庭环境量表(FES)的十个量表的评分被用作受检测者 童年和成年阶段家庭环境的指标。运用SPSS(SPSS，Inc)的“相关 性和部分相关性软件”分析数据。

对每种药物变量的分析开始于运用作为预报指标的七个基因座 的标记基因型进行的逐步回归分析。把变量代入乘积方程时要求p值 低于0.05。每次回归分析后，排除与最小可预见性基因相关的变量。 结果在表1中，显示了不同基因和环境因素的相应相关系数。

                         表1

   对不同药物和酒精滥用变量，特定基因型预测效应的

                  逐步多元回归分析   静脉药物   使用者  致幻觉剂  使用年数   (Yrs)  大麻使用    年数    (Yrs)  安非他明  使用年数   (Yrs)  可卡因 使用年数   (Yrs) 酒精滥用 严重等级 评定 药物滥用 严重等级 评定 N   100   .25**   .26**   .28**   100   .19*   .20**   .27**   118   .19*   .27**  94  .23*  .23* 128 .26* 130 .24** 128 .17* .37** 基因型 DRD11 GABRB32 CNR13 DRD44 DβH5   静脉药物    使用者   致幻觉剂   使用年数    (Yrs)   大麻使用   年    数    (Yrs)   安非他明   使用年数    (Yrs)    可卡因   使用年数    (Yrs)   酒精滥用   严重等级   评定   药物滥用   严重等级   评定   总计    .46    .21    .0002     .46     .21     .0001   .32   .10   .002   .38   .14   .003   .26   .07   .013   .24   .06   .007   .41   .17   ＜0.0001   R   r2   p   FES环境变量，显著的遗传预报指标已分离(Partialed Out)   ICO6    -.3.1*    -.21*    -.23*     -.2.2**     -.12     -.16   -.2.5**   -.26**   -.19*   -.2.3**   -.11   -.22*   -.15   -.19*   -.27**   -.31*   -.21*   -.35**   -.16   -.17   -.21*   ARO7   C8   *＜0.5  4DRD4±7个等位基因   **＜0.01              DβH Taq B1杂合vs.纯合  1DRD1 11基因型       6ICO＝FES的智力和文化定向  2GABRB3＜188碱基     6ARO＝FES的积极娱乐定向   对等位基因  3CNR≥5/≥5基因型    8C＝FES的家庭凝聚

步骤4.第四步是鉴定与每个基因相关的一个或多个多态性。这 些可能是单碱基对限制性片段长度多态性(RFLPs)，或二核苷酸、 三核苷酸或其他重复多态性，如可变的串联重复，或基因座的任何其 他标记。除了本文公开的多态性以外，如先前在上文中关于鉴定候选 基因的方法的描述，这种多态性和检测方法可以很容易地在以前发表 或未发表的工作中得到。此外，如果怀疑一个基因在目的多基因性状 中起作用，但是在查阅文献和遗传数据库后目前没有可在MAA技术中 应用的多态性，就可以采用遗传学分析以确定可以应用于MAA技术的 基因的多态性。除了本文描述的技术以外，这种分析在文献中常常运 用和描述。依照具体条件，可以运用精确检测基因组DNA、cDNA或RNA 样本中之突变的筛选法。

本发明涉及RDS疾病的检测、诊断、预后和治疗，以及运用MAA 技术对多基因性状的检测、诊断、预后和治疗。还公开了对多基因性 状起累加性或减性作用的等位基因标记，其呈从个体中分离出来的核 酸序列形式，和鉴定及检测用于MAA分析的新标记的方法。这些标记 是所分析多基因性状的指标，也是一个个体呈现特定性状潜在可能性 的诊断指标。

本领域技术人员将认识到本文中公开的核酸序列、及在公共数据 库中可得到的(例如在国家生物技术信息中心发现的)、从发表的科 学文献可得到的核酸序列都可以在MAA技术中应用，这样它们将用于 RDS或别的多基因性状的检测、诊断、预后和治疗的许多应用中。在 本发明范围内这些应用的实例包括，运用特异的引物扩增多基因性状 的一个或多个标记，检测多基因性状的标记，如用寡核苷酸或核酸探 针进行杂交，将分离的核酸插入载体中，来自于载体的RNA进行表 达。

检验行为障碍和其他多基因性状的多个基因是可行的而且并不 需要新的技术。涉及的多态性和变体有两种类型，1)单个碱基变化 引起限制性片段长度多态性(RFLP)，和2)短的串联重复多态性 (STR)[特别是二和三核苷酸重复]。对这些进行大量检验的方法每 种类型各不相同。

RELP.Applied Biosystem(应用生物系统)，Perkin-Elmer公司 的一个分部，已经发展了一种新的技术和仪器，用于进行单个碱基 RFLP类型遗传多态性的PCRTM快速检测。该仪器，即应用生物系统 Prism 7200序列检测系统(TaqMan)可以进行多基因检测。该方法运 用标准引物电泳含限制性内切酶多态性位点的DNA部分。该技术的独 特方面是设计两个短的寡核苷酸引物，一个与等位基因中的一个相 配，另一个与另一等位基因相配。荧光染料连接到每个引物的一个末 端，淬灭性染料连接到另一端。如果引物配合正确，当DNA聚合酶到 达寡核苷酸引物位置时，聚合酶通过的同时引物会被降解为核苷酸。 淬灭剂和染料的释放发出最强的荧光。然而，如果寡核苷酸引物不相 配，它会从位点上脱落并且淬灭持续而不是核酸酶降解。对板的双波 长阅读可以区别11、12、22基因型。阅读96个样品结果的全过程需要 时间低于15分钟，结果被输入计算机进行分析和保存。该技术，在计 算机化的工作站帮助下建立的PCRTM反应，可以在一天里检测数百个 不同的RFLP。

STR.用与上文中应用的同样工作站建立STR的PCRTM反应。区别 是STR引物本身是由不同的荧光染料标记的。可以对样品标记第二种 染料的应用生物系统373DNA测序仪可以精确地鉴定只有两个碱基区别 的等位基因。每一个都通过在不同的波长进行激光扫描来检测。例 如，一条PCRTM引物由荧光HEX Amidite(应用生物系统，Foster 城，CA)或别的荧光染料标记。2μl 10倍稀释的PCRTM产物中加入 2.5μl去离子甲酰胺和0.5μl的ROX 500标准，92℃变性2分钟，然后 加入到AB 373 DNA测序仪的6％的变性聚丙烯酰胺凝胶中。凝胶在恒定 的25W下电泳5小时。应用每一泳道的内部ROX 500标准对凝胶进行激 光扫描和分析。由Genotyper(1.1版本)基于碱基对长度决定的彩色片 段对峰值进行识别。

历史上，许多不同的方法用于检测点突变，包括变性梯度凝胶电 泳(“DGGE”)，限制酶多态性分析，化学和酶切方法，及其它方 法。目前应用的更普通的方法包括直接对PCRTM扩增的目的片段测序 (见下文)和单链构象多态性分析(“SSCP”)。

另一筛选点突变的方法是基于RNA酶对RNA/DNA和RNA/RNA异二聚 体错配碱基对的酶切。在本文中运用的时候，词汇“错配”定义为双 链RNA/RNA、RNA/DNA或DNA/DNA分子中一个或多个不配对或错误配对 的核苷酸。这样该定义包括由插入/缺失突变，以及单个和多个碱基 点突变引起的错配。

美国专利No.4,946,773描述了一种RNA酶A错配的酶切分析，包括 单链DNA或RNA试验样品与RNA探针退火，以及随后用RNA酶A对核酸二 聚体进行处理。在RNA酶的酶切反应后，RNA酶通过蛋白水解作用降解 和有机提取而失活，酶切产物加热变性并在变性聚丙烯酰胺凝胶上电 泳分析。根据分子大小电泳分离的RNA酶A处理过的单链产物，与相同 处理的对照二聚体相比较以检测错配。含有对照中没有的更小片段 (酶切产物)的样品为阳性。

目前可用的RNA酶错配酶切分析，包括那些根据美国专利 No.4,946,773实施的分析，需要运用放射性标记的RNA探针。Myers和 Maniatis在美国专利No.4,946,773描述了用RNA酶A对碱基对错配的 检测。别的研究者已经描述了一种大肠杆菌酶(RNA酶I)在错配分析 中的应用。由于RNA酶I比RNA酶A有更宽的酶切特异性，如果能发现减 低非特异性酶切增加对错配的酶切的成分，RNA酶I是应用于碱基对错 配检测理想的酶。用于错配检测的RNA酶I在Promega Biotech的文献 中有描述。Promega在市场上出售一种含RNA酶I的试剂盒，它们的文 献表明，如果该酶的水平够高的话，它能够酶切四个已知的错配中的 三个。

RNA酶保护分析首次应用于检测和显示溶液中特异mRNA的末端。 该分析依赖于能容易地通过体外转录产生与目的mRNA互补的高比活性 的放射性标记RNA探针。最初，体外转录的摸板是含有噬菌体启动子 的重组质粒。探针与总细胞RNA混合以杂交它们互补的片段，然后用 RNA酶处理来分解过剩的未杂交的RNA探针。同样的，与最初预期的一 样，使用的RNA酶是对单链RNA特异的，因此已杂交的双链探针可以受 到保护而不降解。在RNA酶灭活除掉以后，回收保护的探针(在数量 上与目的mRNA的数量成比例)并在聚丙烯酰胺凝胶上分析。

RNA酶保护分析也适合单个碱基突变的检测。在该类型的RNA酶A 错配酶切分析中，野生型序列体外转录得到的放射标记的RNA探针与 来自于检验样品的互补靶片段杂交。虽然偶尔会用到靶RNA(内源性 mRNA)，但检测的目标通常包含DNA(既有基因组DNA也有通过在质粒 上克隆扩增的DNA或PCRTM扩增的DNA)。如果在杂交的探针和把靶片 段之间有单个核苷酸(或更多)序列上的不同，导致在该位置(“错 配”)Watson-Crick氢键的断开，这能够被识别并且在一些情况下被 单链特异性核糖核酸酶切开。迄今为止，RNA酶A几乎是唯一的用于单 碱基错配酶切的酶，虽然RNA酶I最近也发现对错配的酶切有效。最近 也有关于用MutS蛋白和别的DNA修复酶检测单碱基错配的报道。检测 核酸和突变的另一些方法在本文中描述。

核酸.如同本文中描述的，本发明的一个方面是29个已知的基 因，它们的等位基因多态性是多基因性状的标志，包括象ADHD、违抗 障碍、品行障碍、学习障碍、酒精、胆固醇和LDL这样的多基因性状 的标志。

在一具体的实施方案中，本文中揭示的核酸序列将可作为杂交探 针或扩增引物。例如，这些核酸可能用于组织样品的诊断评估，或克 隆与之相应的全长cDNA或基因组克隆。在特定的实施方案中，这些探 针和引物为寡核苷酸片段。这些片段应该足够长以用于对RNA或DNA组 织样品进行特异的杂交。典型的序列将是10-20个核苷酸，但也可能 更长。更长的序列，如40，50，100，500，直至全长对特定的实施方 案是更好的选择。

选自任何可用于本发明诊断和治疗方法的基因具有大约10，15， 17，20，30，40，50，60，75或100或500个连续核苷酸的核酸分子都 可以使用。与上述序列互补的分子以及在高度严格条件下结合这些序 列的分子也是可以的。这些探针在许多杂交方案中是有用的，例如 DNA分子杂交和RNA分子杂交。在一些例子中，探针可以用于与多个靶 序列杂交而不影响它们有效诊断多基因性状的能力。

可以围绕所公开的核酸序列或者用作标记的多态性周围的序列 设计各种探针和引物，只要是本文公开的基因或者后来加入到本文描 述的29个基因这一组中的基因。预期可以用另外的基因创立新的组群 用于评估不同多基因性状，在MAA技术中使用任何另外的基因或优选 地基因多态性也是本发明的一部分。引物可以是任何长度的，典型的 是长10-20个碱基。通过设定序列的数值，例如，第一个残基为1，第 二个为2，等等，可以定义所有引物的算法为： n到n+y

n是从1到序列的最后数字的整数，y是引物的长度减去一(9到 19)，n+y不能超过序列的最后数字。因此，对于10碱基的，探针相 对于碱基1到10，2到11，3到12…等等。对于15碱基的，探针相对于 碱基1到15，2到16，3到17…等等。对于20碱基的，探针相对于碱基 1到20，2到21，3到22…等等。

在某些的实施方案中，希望运用多个探针用于单个样品的杂交。 运用长度为14到100个核苷酸的探针可以形成稳定的选择性的双链分 子。互补序列的长度超过20个碱基的分子通常是优选的，以便增加杂 交的稳定性和选择性，并且因此提高获得的特殊杂交分子的质量和程 度。人们通常更喜欢设计20到30个核苷酸的核酸分子，或者在需要的 时候更长。这种片段很容易的制备，例如直接由化学方法合成或者将 选择的序列插入重组质粒中进行重组生产。

相应地，本发明的核酸序列可以根据它们的性质用于选择性地与 基因或RNA的互补部分形成双链分子或者提供扩增组织来源的DNA或 RNA的引物。依照预期的用法，将应用不同的杂交条件以获得探针对 靶序列不同程度的选择性。

当需要较高的选择性时，可以采取相对严格的条件，即选择相对 低的盐和/或高的温度条件，例如从约50℃到70℃同时约0.02M到约 0.10M的NaCl。这样的高度严格条件几乎不允许(如果有的话)在探 针与摸板或目的链之间的错配，并特别适合分离特异的基因或检测特 异的mRNA转录。通常认为，条件可以通过加入增加数量的甲酰胺而控 制得更为严格。

对于特定的用法，例如，通过定位突变进行氨基酸替换，认为需 要较低程度的严格条件。在这些条件下，即使探针序列与靶链并非正 确地互补，杂交也可以发生，但是在一个或多个位点错配。通过增加 盐浓度和降低温度可以使条件更不严格。例如，中等程度的严格条件 可以是从约37℃到55℃的温度同时约0.1M到约0.25M的NaCl，而较低 程度的严格条件可以是温度从约20℃到55℃之间变化同时约0.15M到 约0.9M的盐。因此，杂交条件可以很容易地控制，并且通常是依照想 要的结果进行选择的。

在另外的实施方案中，杂交可以在如下条件中得到：50mM Tris-HCl(pH 8.3)，75mM KCl，3mM MgCl2，10mM二硫苏糖 醇，在大约20℃到约37℃的温度条件下。运用的另一杂交条件将包括 大约10mM Tris-HCl(pH 8.3)，50mM KCl，1.5μM MgCl2，在从 大约20℃到约37℃变化的温度条件下。

在某些实施方案中，本发明的核酸序列最好结合适当的工具来使 用，比如检测杂交的标记物。许多适当的指示工具在文献中是已知 的，包括荧光、放射性、酶、或者别的配基如亲合素/生物素，它们 能够被检测到。在优选的实施方案中，可以使用荧光标记或酶标记如 尿素酶、碱性磷酸酶或过氧化物酶代替放射性或别的对环境不利的试 剂。在应用酶标记时，比色指示底物是已知的，能够用来提供人眼可 见的或分光光度计可观测的检测方法，以鉴定与含互补核酸的样品的 特异杂交。

总体上，可预期本文描述的杂交探针既可以用作液体杂交的试 剂，如在PCRTM中检测相应基因的表达，也可以用于使用固相的方案 中。在涉及固相的方案中，试验DNA(RNA)被吸附或固定于选择的基 质或表面上。固定的单链核酸然后与所选的探针在要求的条件下进行 杂交。条件的选择依照特定的情况基于所需要的特定标准(例如，依 照G+C的含量，靶核酸的类型，核酸的来源，杂交探针的大小，等 等)。在对杂交表面洗涤除去非特异性结合的探针分子后，通过标记 检测杂交，甚至定量。

扩增和PCRTM。扩增用的核酸模板根据标准的方法学从生物学样品 的细胞中分离(Sambrook等人，1989)。核酸可以是基因组DNA或一 小部分或全部细胞RNA。当使用RNA时，可能希望将RNA转变为互补 DNA。在一实施方案中，RNA是全部细胞RNA并直接用作扩增的模板。

与多基因性状中的基因相应的核酸选择性杂交的成对引物在选择 性杂交的条件下与分离的核酸接触。在本文中定义的词“引物”意味 着能够以模板依赖的方式启动新生核酸合成的任何核酸。典型地，引 物是长十到二十或三十个碱基对的寡核苷酸，但是更长的序列也可以 应用。引物可以是双链或单链的形式，虽然单链的形式更好。

一旦杂交以后，核酸-引物复合体与一种或多种酶接触以利于模板 依赖的核酸合成。进行多轮的扩增，也被称作循环，直到产生足够数 量的扩增产物。

下一步是扩增产物的检测。在特定的用法中，检测可以是肉眼可 见的方式。另外，检测可以是产物的非直接鉴定，通过化学发光、所 掺入的放射性标记的放射性闪烁或荧光标记或者运用电子或热脉冲信 号的系统(Affymax技术)。

许多模板依赖的方法可以用于扩增一定样品中的标志序列。最为 人们所知的方法之一是聚合酶链式反应(称为PCRTM)，它在美国专 利No.4,683,195，4,683,202和4,800,159中有详细描述，每一个都 整体引入本文作为参考。

简单来说，在PCRTM中，制备两条引物，与标志序列两个反向互补 链的区域互补。在反应混合物中加入过量的三磷酸脱氧核糖核酸核、 DNA聚合酶如Taq聚合酶。如果样品中有标志序列，引物将结合到标志 上，聚合酶通过加上新的核苷酸沿着标志序列延伸引物。通过提高或 降低反应混合物的温度，延伸的引物将从标志上分离以形成新的反应 产物，过量的引物将结合到标志上和反应产物上，该过程得以重复。

反转录酶PCRTM扩增方法用于对扩增的mRNA的数量进行定量。反转 录RNA到cDNA的方法是众所周知的并在Sambrook等人，1989中有描 述。反转录的替代方法利用热稳定的RNA依赖性的DNA聚合酶。这些方 法在WO90/07641中有描述，1990年12月21日申请，引入本文作为参 考。聚合酶链式反应方法学在文献中是众所周知的。

扩增的另一方法是连接酶链式反应(“LCR”)，其在EPA No. 320 308中公开，后者全文引入本文作为参考。在LCR中，制备两个互 补的探针对，在有靶序列的时候，每对将结合到目标的反向互补链 上，因此它们互相毗邻。在有连接酶时，两个探针对将连接形成单一 的单位。通过温度的循环，象在PCRTM中一样，紧密连接的单位从靶 序列上分离然后作为“靶序列”用于过量探针对的连接。美国专利 4,883,750描述了与LCR相似的结合探针对到靶序列的方法。

在PCT申请No.PCT/US87/00880(引入本文作为参考)中描述的 Qbeta复制酶也可以用作本发明中的另一扩增方法。在该方法中，靶 序列有互补区的复制性RNA序列在有RNA聚合酶的情况下加入到样品 中。聚合酶将复制该复制性序列，其随后被检测。

一种恒温的扩增方法，其中限制性内切酶和连接酶用于扩增在限 制性位点的一条链上含有核苷酸5’-[α-硫]-三磷酸的靶分子，也可以 用于本发明中的核酸扩增。

链置换扩增(SDA)是另一恒温扩增核酸的方法，它包括多个循 环的链置换与合成，即缺口平移。一个相似的方法，叫做修复链反应 (RCR)，包括数条探针在用于扩增的区域中退火，然后是修复反 应，其中四个碱基只出现两个。另外两个碱基可作为生物素衍生物加 入以便于检测。相似的方法在SDA中运用。目的特异性序列也可以用 循环探针反应(CPR)检测。在CPR中，具有非特异DNA的3’和5’序列 和特异RNA的中间序列的探针与样品中的DNA杂交。杂交后，反应物用 RNA酶H处理，作为区别性产物的探针产物在酶切后释放。最初的模板 与另一循环探针退火并重复该反应。

还有另外的扩增方法在GB申请NO.2 202 328和在PCT申请No. PCT/US89/01025中得以描述，每一文献都引入本文作为参考，它们也 可以用于本发明。在前一个申请中，“修饰的”引物可以用于PCRTM 样、模板和酶依赖的合成。引物可以通过俘获基团(如生物素)和/ 或检测基团(如酶)标记进行修饰。在后一申请中，样品中加入过量 的标记探针。在存在靶序列时，探针结合并被催化分解。在分解以 后，靶序列得以完整释放并被过量的探针结合。标记探针的分解指示 靶序列的存在。

另外的核酸扩增方法包括基于转录的扩增系统(TAS)，它包 括基于核酸序列的扩增(NASBA)和3SR(Gingeras等人，PCT申请WO 88/10315，全文引入本文作为参考)。在NASBA中，可以通过标准的 酚/氯仿抽提、临床样品的热变性、用裂解缓冲液和微量离心柱处理 以分离DNA和RNA或经盐酸胍提取RNA制备核酸用于扩增。这些扩增技 术包括含有靶特异序列引物的退火。聚合作用后，DNA/RNA杂合体被 RNA酶H分解，同时双链DNA分子再次热变性。在每种情况中，单链DNA 通过第二个靶特异引物的加入而成为完全的双链，然后进行聚合作 用。双链DNA分子随后经由RNA聚合酶如T7或SP6被多倍转录。在恒温 循环反应中，RNA被反转录为单链DNA，然后转变为双链DNA，随后在 如T7或SP6这样的RNA聚合酶的作用下多次转录。得到的产物，不管是 不完全的还是完全的，都显示了靶特异性序列。

Davey等人，EPA No.329 822(全文引入本文作为参考)公 开了一种核酸扩增方法，包括循环性地合成单链RNA(”ssRNA”)、 ssDNA和双链DNA(dsDNA)，该方法可用于本发明。ssRNA是第一条 寡核苷酸引物的模板，它可以由反转录酶(RNA依赖的DNA聚合酶)延 长。然后RNA通过RNA酶H(RNA酶H，特异针对RNA与DNA或RNA形成的 双链)的作用从形成的DNA：RNA双链中除去。得到的ssDNA是第二条引 物的模板，它包括与模板同源序列5’的RNA聚合酶启动子(例如T7 RNA聚合酶)的序列。该引物在DNA聚合酶(例如大肠杆菌聚合酶I的 大“Klenow”片段)的作用下延伸，产生了双链DNA(”dsDNA”)分 子，其具有与两条引物之间的最初RNA相同的序列，另外在一端有启 动子序列。通过适当的RNA聚合酶，该启动子可以用于制备DNA的许多 RNA拷贝。这些拷贝可以重新进入循环进行快速的扩增。选择适当的 酶，该扩增可以在恒温下进行而无需在每个循环加酶。由于该方法的 循环特点，开始的序列既可以是DNA也可以是RNA。

Miller等人，PCT申情WO89/06700(全文引入本文作为参考) 发现一种核酸扩增方案，其基于启动子/引物序列与目的单链DNA (”ssDNA”)的杂交，随后转录该序列的许多RNA拷贝。该方案不是循 环性的，即并不从得到的RNA转录体中产生新的模板。别的扩增方法 包括“RACE”和“单向PCRTM”(Frohman，1990，引入本文作为参 考)。

基于在含有产生的“二-寡核苷酸”序列的核酸存在时两段 (或更多)寡核苷酸连接，并从而扩增该二-寡核苷酸的方法，也可 以用于本发明的扩增步骤中。

在任何扩增以后，都应该将扩增产物从模板和过量的引物中 分离出来以评估是否发生了特异的扩增。在一实施方案中，扩增产物 用标准的方法通过琼脂糖、琼脂糖-丙烯酰胺或聚丙烯酰胺进行分离 (Sambrook等人，1989)。

另外，层析技术也可以用来进行分离。有许多种层析法可以用于 本发明：吸附、分配、离子交换和分子筛，以及许多专门化的技术包 括柱、纸、薄层和气相层析。

扩增的产物必须进行显色以断定标志序列的扩增。一个典型的显 色方法包括用溴化乙锭对胶进行染色并在紫外线下观察。另外，如果 扩增产物用放射性或荧光标记的核苷酸完整地标记，扩增产物可以暴 光X光片或者分离后在适当的激发光下观察。

在一实施方案中可以间接的显色。扩增产物分离后，标记的核酸 探针与扩增的标志序列接触。探针优选与发色团结合但也可以进行放 射性标记。在另一实施方案中，探针与结合伴侣连接，如抗体或生物 素，结合对的另一成员带有可检测基团。

在一实施方案中，检测是通过DNA分子杂交和与标记探针的杂交进 行的。DNA分子杂交的技术对本领域技术人员来说是众所周知的，可 以在许多标准的分子操作工具书中找到。见Sambrook等人，1989。扩 增产物可以通过凝胶电泳简单地分离。然后凝胶与膜接触，如硝酸纤 维素膜，进行核酸的转移和非共价结合。随后膜与连有发色团的并能 与目的扩增产物杂交的探针孵育。通过用膜暴光X光片或用离子发射 检测装置进行检测。

前述方法的一个实施方案在美国专利No.5,279,721中进行了描述 (将其引入本文作为参考)，它公开了一种自动化的核酸电泳与转移 装置及方法。该装置无需外部对凝胶的操作就可进行电泳和杂交，它 是本发明理想的实施方法。

检测生物学样品中一个或多个多基因性状之基因标志必需的所有 物质和试剂，可以一起装配在一个试剂盒中。这通常包括预先选好的 特异性标志的引物。还可以包括适于扩增核酸的不同聚合酶(RT， Taq，等等)、脱氧核糖核酸和缓冲液，以提供扩增必需的反应体 系。

这种试剂盒一般以适当的方式包含盛有每种试剂和酶及每种 标志的引物对的不同容器。扩增核酸的优选引物对被选出来用于扩增 在下文中列出的序列：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3， SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：31，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34。

在另一实施方案中，这种试剂盒包含涉及多基因性状之基因的特 异杂交探针，相应于下文种列出的序列：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6， SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：l1，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：31，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34。发明者预期 已知能与多态性等位基因有效杂交的任何引物可以用于该试剂盒，怀 疑该多态性等位基因在本发明方法中有诊断意义，特别是在MAA技术 中。这种试剂盒通常以适当的方式包含盛有每种试剂和酶以及每种标 志杂交所用探针的不同容器。

编码特异基因的DNA片段可以导入重组宿主细胞中用以表达特定 结构蛋白或调节蛋白。另外，通过应用遗传工程技术，所选基因的部 分或衍生物也可以应用。包含调节区域如启动子区的上游区域可以被 分离并用于表达所选的基因。

应当理解，本发明并非仅限于本文中公开的具体探针，特别预期 至少包括与所公开序列杂交的核酸序列或者这些序列的功能性相似序 列。例如，一段不完全的序列可以用于鉴定结构相关的基因或其来源 全长基因组DNA或cDNA克隆。本领域技术人员清楚建立可以用作上述 探针之目标的cDNA和基因组文库的方法(Sambrook等人，1989)。

对于本发明核酸片段插入载体如质粒、粘粒或病毒中的应用， 这些片段可以与别的DNA序列结合，例如启动子、多聚腺苷酸信号、 限制性酶切位点、多克隆位点、别的编码序列以及相似的序列，这样 它们的全长可以有相当大的变化。预期几乎任何长度的核酸片段都可 以应用，但为了制备和DNA重组操作中的使用简单，全长优选受到限 制。

在一个DNA样品中检测多个基因的新方法学  由于预计许多基因 和它们的多态性位点需要用于诊断RDS和相关行为，发明者提出了多 基因筛选的方法(GENESCREENTM)。这可能用到新的DNA技术，如 Affymetrix发展的基因芯片。概括地说，就是用光敏化合物包被玻璃 嵌片。这些化学物质含有防止DNA碱基与芯片以及互相之间结合的光 敏保护基团。然而当光线照射这些化学物质时，保护基团被灭活并发 生化学结合反应。通过使用可以让光线照射芯片的特定区域而不是其 它区域的“面罩”，DNA碱基可以结合到芯片的所选区域。加入的每 个新的碱基都有结合的保护基团，因此该方法可以重复地将一个碱基 连接到另一个上。用该方法，大量的不同序列DNA探针可以在一个1/2 英寸的芯片上同时合成。

构建任何一组长20个DNA碱基的400,000条探针只需要80个化学步 骤。在适当的时间里利用传统的DNA合成仪合成不同的序列相同数目 的探针是不可能的。这些仪器以连续的方式合成探针而不是以 Affymetrix所用的大规模平行方式合成。在这种快速的DNA分析中， 样品DNA首先用荧光标签标记然后加入到芯片上的探针阵列中。如果 样品在芯片上找到互补的探针，它将结合上去。如果没有互补链，它 将从芯片上洗脱(有互补碱基的DNA片段是说它们是互补的：例如， 片段ATTTGCGC(SEQ ID NO：1)将结合含有以下序列的互补片段 TAAACGCG(SEQ ID NO：2))。每个探针的序列和位置是已知的，因 此扫描仪能判断样品结合了哪一个探针。由于芯片上探针的序列是已 知的，样品DNA的序列也就是已知的，因为它们的序列是互补的。使 用基因芯片不需要将信使RNA转变为cDNA并能大量地检测信使RNA和 cDNA。

然而，对于本发明中提议的分析，依赖于DNA仪器的其他方法可 能足以进行商业化。例如，预期使用质谱法进行基因分型。作为使用 基因芯片技术同时对许多基因分型的替代技术，Sequenom(San Diego，CA)已经采用基质辅助的激光解吸附作用/离子化飞行时间质 谱(MALDI-TOF)进行单个碱基对和短的串联重复多态性的大量基因 分型(Little等人，1997；Braun，Little，Koster，1997；Braun 等人，1997)。它通过以下步骤完成。首先，用生物素标记引物中的 一条，PCRTM扩增多态性区域(Jurinke等人，1997)。第二步，将扩 增的DNA固定到链亲合素珠上(Jurinke等人，1997)。第三步，进行 邻近多态性位点的一条引物的杂交(Braun，Little，Koster， 1997)。第四步，在有dNTP和不以脱氧形式出现的ddNTP存在时，用 DNA聚合酶延伸经过多态性位点。当依照序列合理设计时，这只能导 致少量额外碱基的加入(Braun，Little，Koster，1997)。第五 步，DNA然后进行加工以除去未使用的核苷酸和盐。第六步，通过变 性将短的引物+多态性位点移走并利用电压移液管转移到硅胶上 (O’Donnell等人，1997)。第七步，短的引物+多态性位点的质量通 过延迟提取MALDI-TOF质谱法进行测定(Li等人，1996；Tang等人， 1995)。序列中的单个碱基对和串联重复变异通过它们的质量很容易 判断。这最后的步骤是很快的，每个分析只需5秒钟。所有这些步骤 都是机器自动化的。该技术具有每天进行20,000个基因分型的潜力。

该技术是快速的极其精确的，并适用于任何多态性。相对于基因 芯片技术，它的显著优点是它更精确，既能够鉴定单个碱基对也能够 鉴定短的串联重复多态性，并以极小的花费在几秒钟内加入或除去检 验的多态性。

多基因试剂盒-基因筛选试剂盒  根据本申请提出的不同基因，表2 详细说明了基于GENECHIPTM概念的可能的基因障碍试剂盒。

                   表2 障碍                          基因 酒精中毒                      D1，D2，D4，DAT1，TDO2，nNOS1a 药物滥用(包括静脉药物使用)    D1，D2，D4，CNR1，GABAB3，TDO2，HT-2R，

                          MAOA(X)，COMT，nNOS1a，DOMC，前内啡肽 兴奋剂戒断抑郁                D2 物质滥用障碍(SUD)             D1，CNR1

SUD亚类：酒精中毒         D2，GABAB3

SUD亚类：多物质滥用       D4，HT-2R

SUD亚类：静脉药物滥用     DAT1，MAOA(X)

SUD亚类：兴奋剂戒断       COMT，nNosla

SUD亚类：兴奋剂戒断：     TDO2

         抑郁严重性

SUD亚类：酒精戒断         DAT1(9/9等位基因) 强迫                          D1，TDO2

强迫亚类：病理性赌博      D1，D1，TDO2

强迫亚类：性强迫 肥胖                          D2，OB，DAT1，APOD，UCP2，CHROME-2

肥胖亚类：女性身体        APOD，CHROME-2

          脂肪(＞34％)

肥胖亚类：男性身体        DAT1，OB

          脂肪(＞28％)

肥胖亚类：BMI＞25

肥胖亚类：碳水化合物暴食 表2(续) 障碍                            基因 注意力缺陷                      5HT-转运蛋白

注意力缺陷亚类：孤独症      D1，DAT1

注意力缺陷亚类：抽动-秽语   D1，D2，TDO2，DβH，MAOA(X)，HTR1A

                综合症

注意力缺陷亚类：ADHD        HTR1A，D2，DAT1，DβH，TDO2

注意力缺陷亚类：ADD         MAOA(X) 吸烟行为                        D1，D2

吸烟行为亚类：每天吸烟

              的包数

吸烟行为亚类：开始

吸烟行为亚类：吸烟年限

吸烟行为亚类：复发 人格障碍                        DAT1，D2

人格障碍亚类：病理性暴力    D2，DAT1，D4，CNR1

人格障碍亚类：分裂样回避    D2，DAT1

人格障碍亚类：P300          D2，CNR1

人格障碍亚类：AER/VER       D2

人格障碍亚类：创伤后应激    D2

人格障碍亚类：低新奇寻找    D2

人格障碍亚类：高新奇寻找    D4

人格障碍亚类：防卫型        D2

发明者建议，为了安全地鉴定RDS的高风险人群，所有的这些基 因必须检验。当发现别的基因时，期望对它们也进行检验。由于只有 几个基因构成检验名单，检验的最初计划包括PCRTM技术。。当这些 另外的基因发现时，期望它们也加入到GENECHIPTM(Affirmatrix， Santa Clara，CA)。

步骤5.第五步，基于说明哪种基因型与最高数量评分相关哪种 基因型与最低数量评分相关的独立研究，给基因型确定一个评分。给 基因确定评分是基于应用ANOVA，评估每种多态性中的每个基因型其 平均Kellgren评分的高度。这些研究在一组受试者中进行，与MAA中 的受试者无关。例如，对于多巴胺D2受体基因的Taq I A1/A2多态 性，DRD2，所有研究已表明1等位基因与一系列冲动、强迫、成瘾行 为相关，并且一些研究说明杂合基因型12，与最高评分相关，11和22 基因型与最低评分相关。因此，通过运用Taq I A1/A2多态性，DRD2 基因中基因型22或11的评分＝0，基因型12的评分＝2。如果独立研究表 明22基因型与数量性状中的最低评分相关，12与数量性状中的中等评 分相关，11与最高评分相关，评分应该是22＝0，12＝1和11＝2。

当应用二核苷酸和三核苷酸多态性时，即使有许多等位基因，也 有可能将等位基因分为较短的和较长的等位基因。如果较长的等位基 因与最大的表型效应相关，评分应该是SS＝0，SL＝1和LL＝2，其中S是 较短的等位基因，L是较长的等基因。

步骤6.通过不断加入每个基因的评分，建立虚构的多基因或PG 变量。例如，如果在实例1中第一个基因的评分是2，第二个基因的评 分是1，则PG评分变量是3。1至n实例对于数量性状变量评分的相关系 数r将通过回归分析进行评估。更优选的是运用off-the-self统计程 序。变异的百分比是r2。然后，对于1至n实例，加入第三个基因的基 因评分并重复该过程。绘出最终的结果。

步骤7.进行PG对QT或DV的单变量回归分析。下面是一个可以推 广到任何数量性状或二歧变量的实例。在分析开始以前，基因评分的 假设变量(PG)设定＝0。然后加入每个另外基因的评分，进行回归分 析，加入第二个基因的评分，重复回归分析。继续该过程直到所有的 检验基因都已加入。例如，PG最初设定为0。如果基因1的评分等于 2，PG值则加上2，或PG＝PG+2。然后进行PG对QT或DV的回归。如果基 因2的评分等于1，PG值则加上1，或PG＝PG+1。或者，如果基因2的评 分等于2，PG值则加上2，或PG＝PG+2。在基因2的评分加入后，再次进 行PG对PG对QT或DV的回归分析。

一个分析数据的优选方法是将所有的数据输入统计软件包如 SPSS。利用在上面第五步中描述的DRD2基因的值，SPSS程序的句法文 件将打开并建立下列示例算法。 Compute PG＝0. If(DRD1 eq2)PG＝PG+2. If(DRD2 eq2)PG＝PG+2. If(DRD3 eq2)PG＝PG+2. If(DRD4 eq2)PG＝PG+2. If(DRD5 eq1)PG＝PG+1. If(DRD5 eq2)PG＝PG+2. If(DAT1 eq1)PG＝PG+1. If(DAT1 eq2)PG＝PG+2. 回归变量＝ADHD PG /依赖＝ADHD /方法＝输入PG

PG变量被设定为0。由于DRD1、DRD2、DRD3、DRD4基因被计 为0或2分，如果受试者携带DRD1 DdeI 11基因型、和/或DRD2 TaqI 12基因型、和/或DRD3 MscI 11或22基因型、和/或DRD4 46、47或77基因型，它们仅需要PG单线增长2分。相反，DRD5 和DAT1基因被计为1或2分，它们就需要双线代码。当加入每个基 因时，进行对PG计分对QTV(ADHD评分)的回归分析。

步骤8.绘制结果。结果被绘制成图，进行性累加的基因位于X轴，r2 位于Y轴。如图5中的线条所示：它表示对ADHD的累加性和减性基 因。

步骤9.只使用累加性的基因重复这个过程。结果如图6所示，它表 示累加性的基因。

                  RDS相关行为的治疗

某些抗成瘾物质通过增强内源性或外源性神经多肽或神经递质的 功能，如多巴胺在伏核中的释放，而抑制对欣快感的渴望，从而明显 减少异常的成瘾性行为，又称“RDS”行为。能够引起欣快感的物质 包括酒精、可卡因、鸦片制剂、尼古丁、葡萄糖或其它碳水化合物， 以及性行为、赌博、攻击、暴力等，但并不仅限于此。RDS行为存在 共同的遗传基础，并与中-边缘系统内神经递质的足量供应有关。最 终的报偿途径包括受体部位多巴胺能的激活(D1，D2，D3，D4，D5和各种 亚型)，而这些受体的密度由它们各自的基因以及负责多巴胺合成、 贮存、释放和代谢的基因决定。

本发明建议通过联合使用脑啡肽酶抑制剂和一种脑啡肽释放剂如 京都酚(酪氨酸-精氨酸)或其稳定的类似物酪氨酸-D-精氨酸以促进D2 受体的长期占据，使之有可能发生增生或正调节(Fitz等，1994)，从 而增强突触多巴胺的释放。

本发明在部分程度上涉及多基因遗传的观点并提出了以多个基因 部位作为鉴别RDS高发人群决定因素的概念。在遗传特性完全不同的 各品系小鼠中的数量性状座位研究中未发现单基因机制的依据。检测 15种小鼠对酒精、吗啡、去氧麻黄碱的反应，发现各品系对上述3种 物质的反应不同，提示由不同基因决定对不同成瘾物质的易感性。这 些发现进一步提示受基因影响的对酒精的敏感性并不是独立现象，相 反，它对所研究的反应变量具有特异性(Crabbe等，1994)。

因此本发明的一个方面是把上述的特定基因以及怀疑和RDS行为 或其他多基因特征有关的其它基因分型，获取对定向治疗RDS相关性 行为或其他多基因特征比较重要的单倍型信息。当某一特定遗传变量 被发现和某种行为障碍有关时，发明者可利用这一知识帮助临床医生 采用药物进行遗传定向治疗。本发明采用基因分型和氨基酸前体引 入、抑制脑啡肽酶、诱导脑啡肽释放、麻醉拮抗和吡啶甲酸铬或烟酸 铬等作为抗成瘾的成份，增加多巴胺在伏核中的有利释放。

在本发明中，发明者提出涉及报偿级联回路(可能多达100个以 上)中各种分子表达的任何一个基因改变都可使个体发生RDS和相关 行为，甚至ADHD和暴力。尽管上述可能是事实，但目前很难预测具体 涉及到哪一个基因，直到本发明提出采用MAA技术。然而，至少D2多 巴胺受体基因的作用证据是充分的，并且发明者认为D2多巴胺受体基 因代表了在RDS和相关行为上起重要作用的主要“报偿基因”。本发 明的优选方案把TaqA1 DRD2等位基因(A1，B1，C1，外显子6-7之间的 单倍型多态性)和定向治疗的后果联系起来(注意力集中，防止体重 回升，停止吸烟，减少碳水化合物暴食，减少AMA次数，防止多物质 依赖，减少暴力行为及其它)。发明者还将提供一些针对上述特定基 因的基因分型例子，它们能够对某类药物产生最佳反应。

在神经递质报偿级联模型上，下丘脑5一羟色胺能神经元支配并 激活甲硫氨酸脑啡肽能神经元，后者抑制γ-氨基丁酸(GABA)神经 元，后者随后激活大脑脚盖腹侧的DA神经元。DA神经元随后投射到 Acb和海马的Cluster A1(CA1)细胞簇，在那里DA神经递质作为主要 的报偿基质(Stein和Beluzzi，1978)。

伏核和脑啡肽在这一复杂的回路中起重要作用(Heidreder等， 1988)。局部用脑啡肽酶抑制剂后可以诱导DA在纹状体的释放，提示 这一调节是通过刺激δ受体进行的(Chesselet等，1981)。事实上，京 都酚还可能保护缩胆囊素-8(CCK-8)不被脑肽酶降解。这一重要的 控制欲望神经多肽和DA一起存在于伏核中，并且与CCK-8、DA和内源 性阿片类多肽之间有密切的联系(Koob，1992)。

5一羟色胺(5-HT)、DA、去甲肾上腺素(NE)和脑啡肽等神经 递质被证明可减少甜食物的摄取。因此特别设计本发明的组合物，通 过给以氨基酸前体，包括1-色氨酸(5-HT前体)，1-苯丙氨酸 (DA和NE前体)以及脑啡肽酶抑制剂d-苯丙氨酸以增加这些食物抑 制性神经递质(Blum等，1986)。

发明者正在对Lewis大鼠进行研究以确立这些试剂类别的效果。 Lewis大鼠似乎具有多物质滥用的倾向，并用做RDS行为研究的重要动 物模型。在这一点上我们采用3种试剂(D-苯丙氨酸[DPA]，纳曲酮 [NTX]，酪氨酸-D-精氨酸[TA])的不同剂量和组合来治疗对酒精，可 卡因，尼古丁，大麻或碳水化合物的自行选择。与任何2种试剂的组 合相比，三种试剂组合在一起是最有效的(见表3)。

                        表3

      抗RDS试剂的联合及独立功效，从最高到最低

                 DPA+NTX+TA+铬盐

                  DPA+NTX+铬盐

                  DPA+TA+铬盐

                  NTX+TA+铬盐

                   DPA+铬盐

                   NTX+铬盐

                   TA+铬盐

                    铬盐

DPA＝D-苯丙氨酸；NTX＝纳曲酮；TA＝酪氨酸-D-精氨酸

治疗RDS的组合物：尽管各种障碍可以归类于RDS并侵犯多胺能系 统，一种药物不可能类似地治疗患RDS的所有病人。大量其它系统也 可受到侵犯，因此为取得全面满意的疗效必须同时对其进行治疗。涉 及药物或物质滥用的病症尤其需要个别治疗。因此尽管一个总的治疗 方案包括给病人有效剂量的脑啡肽酶抑制剂、脑啡肽释放剂和多巴胺 能系统的氨基酸前体，还需采用其它成份以增强总的治疗效果。

某些治疗试剂被“D2基因受体缺陷理论”所推崇。已经证实 DRD2A1携带者DRD2受体的水平很低。在紧张压力下病人需要完全依靠 这些受体来对付今天的社会。本发明的一个重要方案是提供治疗剂量 (单独或组合)的某些氨基酸前体、微量金属如吡啶甲酸铬和/或烟 酸铬、脑啡肽酶抑制剂、麻醉拮抗剂和脑啡肽释放剂，最终引起多巴 胺的自然释放以诱导D2增生，尤其在D2A1携带者中。这一总的观点早 已在可卡因成瘾中得到检验。由第一发明人研制的称做TROPAMINETM 的制剂已在病人中研究和采用。经与其它药疗法相比，TROPAMINETM 具有解毒和保持戒断的主要优点(Halikas等，1993)。见表4。

                 表4一般用于治疗可卡因滥用的药物治疗效力的排序

               解毒作用                                  戒断维持 解毒药         患者数 内科医生人数    效力     维持药     患者数 内科医生人数 效果 Tropamine       190       17          4.00    Tropamine     150       17      3.50 Buspiran        11        2           4.00    可乐定        15        2       3.00 去甲替林        100       3           4.00    去甲丙咪嗪    8,824     306     2.84 苯巴比妥        2,250     10          4.00    丙咪嗪        2,940     129     2.64 苯并二氮类    155       3           3.33    氟西汀        2,386     145     2.61 可乐定          412       15          3.33    L-酪氨酸      350       9       2.60 利眼宁          510       14          3.25    卡马西平      1,384     86      2.57 安定            2,710     18          3.23    溴隐亭        5,256     132     2.56 L-酪氨酸        510       9           3.13    金刚烷胺      6,527     119     2.39 溴隐亭          15,511    262         2.95    L-色氨酸      6,247     110     2.20 金刚烷胺        19,189    225         2.69    Neuroieptics  1,494     54      2.19 去甲丙咪嗪      10,352    287         2.65    纳曲酮        1,255     40      2.15

                   解毒作用                                        戒断维持    解毒药          患者数    内科医生人数    效果     维持药       患者数    内科医生人数    效果    丙咪嗪          2,885          122        2.48     苯巴比妥     100            3          NR   L-色氨酸         15,112         198        2.33    “其他药物”      853            47         2.64

                                                  的混合物    氟西汀          1,527          111        2.25 Bupranorphine      148            19         2.00    纳屈酮          817            31         1.68    马吲哚          11             2          1.00 “其他药物”                8,007          119        3.11   的混合物

总数           79,760         468        2.43     总数         37,166         381       2.57

该方案的一个组成部分是先把病人按基因分型，然后按他/她的 基因型提供适当的鸡尾酒治疗。对于D2异常，发明者研制了一个适当 的鸡尾酒方案，并在文中有描述。表5总结了对特定基因型已证实有 效的本发明各种组合物的应用，表6-16列出了对治疗各种障碍有效 的这些组合物的优选成分，表17-19显示了某些元件如何影响刺激物 (可卡因等)、阿片类和镇静催眠剂诱导的报偿。

                     表5多基因诊断和抗成瘾组合物：定向预防和治疗 选择的治疗组合物      接受治疗的RDS行为              疗效              研究类型           与改善的反应有关的目的基因

                                                                                          (SI)/等位基因 AlcotrolTM         物质滥用障碍             抗成瘾，焦虑降低，复发   DBPC-住院病人      DI(A1等位基因的Dde纯合性的

                特别侧重镇静-安眠剂滥    降低，对抗医生劝告率                        频率增加)

                用(如酒精、阿片类物质、  (AMA)降低，身体状况和                       D2(Taq A1，B1，外显子6-7单倍

                巴比妥类)                BESS得分有改善                              型，C1)

                                                                  DBPC-门诊病人      DATI VNTR(10/10)

                                                                                     CNRI(VNTR＜5bp重复纯合)

                                                                                     MOAA(x)-VNTR＜335bp

                                                                                     *

                                                                                     nNOSIa-≤201BP等位基因纯合

                                                                                     DBH-TaqI B1等位基因

                                                                                     COMT-108缬氨酸等位基因

                                                                                     TDO2内含子6(G→A)和/或(G→

                                                                                     T)

                                                                                     D4 VNTR 2或7 选择的治疗组合物    接受治疗的RDS行为             疗效                     研究类型         与改善的反应有关的目的基因

                                                                                             (SI)/等位基因 CocotrolTM       物质滥用障碍，特别侧重     与AlcotrolTM相同，外加     DBPC-住院病人      D2 TaqI A1，B1，C1或外显子6-7

              精神兴奋剂滥用             可卡因渴望降低                                 单倍型，D1(A1等位基因的Dde

              (可卡因，去氧麻黄碱)                                                      纯合性的频率增加)

                                                                     DBPC-门诊病人      Comt-108-缬氨酸等位基因，D3 Alcotox2         镇静-安眠剂戒断(包括酒     苯并二氮杂类需求降低      住院病人OT         DAT1 VNTR(9/9)

              精、阿片类物质、巴比妥     戒断震颤减轻，抑郁减轻      与标准解毒药比较   D2 TaqI A1，B1，C1或外显子6-7

              类)                                                                       单倍型 PHENCALTM        肥胖(碳水化合物暴食，      体重减轻，暴食事件减少      DBPC-门诊病人      D2 TaqI A1，B1，C1或外显子6-7

              厌食，食欲过盛)            身体组成的积极改变，防                         单倍型

                                         止减肥后体重反弹                                HTR2A-C等位基因纯合

                                                                                         OB-1875二核苷酸重复多态性的

                                                                                         ＜208BP等位基因纯合

                                                                                         人2号染色体微卫星多态性，

                                                                                         D2S1788

                                                                                         UCP-2(多态性待定)

                                                                                         APO-D-TaqI2.2或2.7BP

                                                                                         瘦素受体(多态性未知) 选择的治疗组合物  接受治疗的RDS行为              疗效                 研究类型        与改善的反应有关的目的基因

                                                                                         (SI)/等位基因 NicarestTM       吸烟行为                 吸烟停止，容易放弃(吸   DBPC-门诊病人       D1(Dde A1纯合)

                                       烟)，防止重吸                               D2(TaqI A1)

                                                                                   D4(VNTR 2)

                                                                                   D5(二核苷酸13等位基因，范

                                                                                   围135-159BP)

                                                                                   DAT1 VNTR(10/10)

                                                                                   DβH(TaqI B1等位基因) HyperGenTM       孤独症，抽动-秽语，ADHD  作业任务的能力增强，TOVA DBPC-门诊病人      D1(Dde A1纯合)

                                       得分改善，Cull/Blum ADHD                    D2(TaqI A1)

                                       得分改善，多动性降低                        D4(VNTR 2)

                                                                                   D5(二核苷酸13等位基因，范

                                                                                   围135-159BP)

                                                                                   DAT1 VNTR(10/10)

                                                                                   DβH(TaqI B1等位基因)

                                                                                   MAOA(X)    选择的治疗组合物    接受治疗的RDS行为             疗效               研究类型       与改善的反应有关的目的基因

                                                                                     (SI)/等位基因 GambotrolTM        病理性赌博              花钱减少，打赌频率降低， OT门诊病人      D1(Dde A1纯合)

                                        容易戒除                                 D2(TaqI A1，B1，C1) Tempaminc           病理性暴力行为，分裂样/ 暴力行为爆发减少，敌意   OT门诊病人      D2(TaqI A1，B1，C1，外显子6-7)

                回避症(SAB)，攻击性，   降低，防卫类型正常化，                   DAT1(VNTR 10/10)

                发怒，敌意，创伤后应激  焦虑降低，SAB降低                        mNOSIa-≤201BP等位基因纯合

                障碍 PMXTM              PMS                     疼痛和痛性痉挛减少，头   OT门诊病人      与AlcotrolTM和CocotrolTM的

                                        痛减少，整个心境改善                     相同

                                                                                 POMC-前内啡肽/强啡肽/Orphan

                                                                                 阿片受体

                                                                                 δ，σ，孤独，μ，κ，ε 1 配方见表6到17所述 2 替代成分限定如下：D-苯丙氨酸500mg/胶囊，每天6粒；酪氨酸-D-精氨酸，每胶囊1mg，每   天6粒；纳曲酮，每胶囊50mg，每天1到3粒。 * GABRB3-二核苷酸重复≥185bp纯合 HTR1A-TC多态性         HTR2A-C等位基因(纯合) 缩写： ADHD＝注意缺陷多动障碍 DPBC＝双盲、安慰剂对照  PMS＝月经前综合症   POME＝Propiomelancortin  OT＝开放试验

                                       表6

                                   KantrollTM  成分            基本或核心胶囊mg/胶囊             核心或″靶向″胶囊 生物素                0.050                                 核心 钙                    35.000                                核心 铬烟酸铬              0.033                                 核心 吡啶甲酸铬            0.033                                 核心 铜                    0.033                                 核心 5-羟色氨酸            ＞.5                                  核心 DL-苯丙氨酸           460.000                               核心 叶酸                  0.030                                 核心 碘                    0.025                                 核心 铁                    1.000                                 核心 L-谷氨酰胺            25.000                                核心 镁                    2.500                                 核心 甲硫氨酸              50.000                                核心 烟酸(未变红)          10.000                                核心 泛酸                  0.330                                 核心 硒                    0.012                                 核心 维生素A               IU 277.710                            核心 维生素B-2             0.800                                 核心 维生素B-1             0.375                                 核心 维生素B-6             1.000                                 核心 (P-5磷酸) 维生素B-12            0.005                                 核心 维生素C               100.000                               核心 维生素E               IU 5.000                              核心 锌                    1.500                                 核心 L-肉毒碱              10.000                                肥胖 Ginko B               25.000                                肥胖，焦点 L-酪氨酸              150.000                 赌博，激动.焦虑，烟碱，可卡因，肥胖 鸟氨酸门冬氨酸盐      10.000                                肥胖 可乐果(咖啡因)        20.000                                肥胖 L-精氨酸              10.000                                肥胖 焦谷氨酸盐 春黄菊*               25.000                                烟碱 牛磺酸*               25.000                                激动，焦虑 缬草*                 10.000                                烟碱 柳树皮提取物*         60.00                                 PMS 症状

注：对于在各种症状中共有的基本报偿缺陷综合症行为，发明者 推荐服用″核心″神经药物(Neutraceutical)，每天三次(餐前)。如 果患者具有一系列顽固的成瘾/冲动/强迫行为，或明显严重的成瘾/ 冲动/强迫行为，发明者推荐服用“核心”神经药物，加上每天适当 次数服用适当的附加神经药物。

对于肥胖，患者在医生指导下服用“核心”神经时应服用白色胶 囊，在早餐前应服用

橙色胶囊。

对于尼古丁依赖，患者应在就寝时服用蓝色胶囊。

                                表7

                             PHENCALTM    成分                        每胶囊(以毫克计) DL-苯丙氨酸                       500.000 L-谷氨酰胺                        15.000 L-酪氨酸                          25.000 5-羟色氨酸                        2.5mg 可乐果(咖啡因)                    20.000 L-肉毒碱                          10.000 吡啶甲酸铬或                      0.033 烟酸铬 钙                                35.000 铁                                1.000 镁                                2.500 锌                                2.500 生物素                            0.050 泛酸                              0.330 碘                                0.025 铜                                0.333 硒                                0.012 维生素C                           13.300 维生素B-1                         0.330

                  表7(续)

                 PHENCALTM    成分            每胶囊(以毫克计) 维生素B-2              0.500 烟酸(未变红)           3.330 维生素E                IU 5.000 维生素B-6(P-5磷酸)     0.330 叶酸                   0.066 维生素B-12             0.001 Ginko B                25.000

                   表8

               TropagenTM   成分            每胶囊(以毫克计) DL-苯丙氨酸           250.000 L-谷氨酰胺            50.000 L-酪氨酸              150.000 5-羟色氨酸            2.5mg 吡啶甲酸铬或烟酸铬    0.020 钙                    25.000 铁                    1.500 甲硫氨酸              50.000 镁                    2.500 锌                    5.000 泛酸                  1.500 维生素C               100.000 维生素B-1             1.670 维生素B-2             2.500 烟酸(未变红)          16.700 维生素B-6(P-5磷酸)    3.330 叶酸                  0.670 维生素B-12            0.670

              表9

       AlcotrolTM   成分                         每胶囊(以毫克计) DL-苯丙氨酸                             480.000 L-谷氨酰胺                              25.000 5-羟色氨酸                              2.5mg 吡啶甲酸铬或烟酸铬                      0.020 钙                                      25.000 铁                                      1.500 镁                                      2.500 锌                                      1.500 生物素                                  0.050 泛酸                                    15.000 维生素A                                 I.U.333.300 铜                                      0.333

                                    0.013 维生素C                                 13.300 维生素B-1                               2.417 维生素B-2                               0.850 烟酸(未变红)                            3.300 维生素E                                 I.U.5.000 维生素B-6(P-5磷酸)                      3.000 叶酸                                    0.670 维生素B-12                              0.670

               表10

            NicarestTM   成分                         每胶囊(以毫克计) DL-苯丙氨酸                            500.000 L-谷氨酰胺                             50.000 5-羟色氨酸                             2.5mg L-酪氨酸                               125.000 吡啶甲酸铬                             0.033 钙                                     50.000 铁                                     1.000 镁                                     2.500 锌                                     2.500 生物素                                 0.050 泛酸                                   0.330 碘                                     0.025 铜                                     0.333 维生素C                                100.00 维生素B-1                              2.417 维生素B-2                              0.850 烟酸(未变红)                           3.330 维生素B-6(P-5磷酸)                     3.000 叶酸                                   0.670 维生素B-12                             0.005 春黄菊                                 25.000* 缬草根                                 10.000* *就寝时

                      表11

                      PMXTM

成分                      每胶囊(以毫克计) DL-苯丙氨酸                         375.000 L-谷氨酰胺                          50.000 5-羟色氨酸                          2.5mg 吡啶甲酸铬                          0.020 钙                                  50.000 镁                                  25.000 铁                                  1.500 锌                                  1.500 生物素                              0.050 泛酸                                1.250 维生素A                             I.U.277.710 维生素C                             30.000 维生素B-1                           0.375 维生素B-2                           0.800 烟酸(未变红)                        10.000 维生素B-6(P-5磷酸)                  1.000 叶酸                                0.030 维生素B-12                          0.005 春黄菊                              25.00 柳树皮提取物                        25.00

                             表12

                           HyperGenTM   成分                         每胶囊(以毫克计) DL-苯丙氨酸                          400.000 L-谷氨酰胺                           25.000 L-酪氨酸                             150.000 5-羟色氨酸                           3.5mg 甲硫氨酸                             50.000 吡啶甲酸铬                           0.020 钙                                   25.000 铁                                   1.000 镁                                   3.500 生物素                               0.050 泛酸                                 15.000 维生素C                              13.300 维生素B-1                            0.375 维生素B-2                            0.800 烟酸(未变红)                         10.000 维生素B-6(P-5磷酸)                   3.330 叶酸                                 0.030 维生素B-12                           0.001 哈马灵(pharmaline)                   50 石杉碱(huberzine)                    150ug Ginko B                              40.000

                            表13

                          Stress-XTM   成分                             每胶囊(以毫克计) DL-苯丙氨酸                            400.000 维生素C                                100.000 L-谷氨酰                               35.000 5-羟色氨酸                             3.5mg 钙                                     25.000 泛酸                                   15.000 烟酸(未变红)                           3.300 维生素B-6(P-5磷酸)                     3.000 镁                                     2.500 维生素B-1                              2.417 铁                                     1.500 锌                                     1.500 维生素B-2                              0.850 叶酸                                   0.670 生物素                                 0.050 吡啶甲酸铬                             0.020 维生素B-12                             0.005 维生素A                                I.U.333.300 维生素E                                5.000I.U. 牛磺酸                                 0.005 缬草根                                 25.000

                    表14

                           TempamineTM

成分                           每胶囊(以毫克计) 生物素                                  0.050 钙                                      25.000 吡啶甲酸铬                              0.020 DL-苯丙氨酸                             400.000 叶酸                                    0.670 铁                                      1.500 L-谷氨酰胺                              35.000 5-羟色氨酸                              2.5000 L-酪氨酸                                100.000 镁                                      2.500 烟酸(未变红)                            3.300 泛酸                                    15.000 维生素A                                 I.U.333.300 维生素B-1                               2.417 维生素B-2                               0.850 维生素B-6(P-5磷酸)                      3.000 维生素B-12                              0.005 维生素C                                 100.000 维生素E                                 I.U.5.000 锌                                      1.500

                   表15

                Aggression

成分              每胶囊(以毫克计) DL-苯丙氨酸              460.000 L-谷氨酰                 25.000 L-酪氨酸                 100.000 5-羟色氨酸               2.5mg 吡啶甲酸铬               0.020 钙                       25.000 铁                       1.500 镁                       2.500 锌                       1.500 生物素                   0.050 泛酸                     15.000 维生素A                  I.U.333.300 维生素C                  100.000 维生素B-1                2.417 维生素B-2                0.850 烟酸(未变红)             3.300 维生素E                  I.U.5.000 维生素B-6(P-5磷酸)       3.000 叶酸                     0.670 维生素B-12               0.005

                 表16

              GambotrolTM

成分                 每胶囊(以毫克计) 钙                            25.000 吡啶甲酸铬                    0.020 DL-苯丙氨酸                   400.000 叶酸                          0.670 铁                            1.500 L-谷氨酰胺                    35.000 L-酪氨酸                      100.000 5-羟色氨酸                    2.5mg 镁                            2.500 甲硫氨酸                      50.000 烟酸(未变红)                  6.700 泛酸                          1.500 维生素B-1                     1.670 维生素B-2                     2.500 维生素B-6(P-5磷酸)            3.330 维生素B-12                    0.005 维生素C                       100.000 锌                            2.500

                                 表17

                         可卡因和安非他明报偿

      例子                                  对报偿的影响 颅内自我电刺激   下丘脑外侧                                        助长   脚盖区腹侧                                        助长 颅内自给药

前额皮质中部(可卡因)                            助长

伏核(安非他明)                                  助长 静脉自给药   去甲肾上腺素受体拮抗剂                            无改变   5-HT受体拮抗剂                                    助长   M-阿片受体拮抗剂                                  无改变   D1和D2多巴胺受体拮抗剂                            抑制   去甲肾上腺素去神经支配(6-羟基多巴胺)              无改变   5-HT去神经支配(5，7-双羟色胺)                     助长   多巴胺去神经支配(6-羟基多巴胺)

伏核                                            抑制

脚盖区腹侧                                      抑制

前额皮质中部                                    无改变

                     表18

                  阿片类报偿

   例子                           报偿效果 颅内自我电刺激    下丘脑外侧                           助长 颅内自给药   伏核                                  助长   下丘脑外侧                            助长   脚盖区腹侧                            助长 静脉内自给药   阿片受体拮抗剂   M-受体拮抗剂                          抑制   Δ-受体拮抗剂                         无改变   K-受体拮抗剂                          无改变   多巴胺受体拮抗剂                      混合结果   多巴胺去神经支配(6-羟基多巴胺)   伏核                                  无改变

               表19

         镇静剂/催眠剂报偿

   例子                     报偿效果 颅内自我电刺激   下丘脑外侧                      助长 颅内自给药   脚腹盖腹侧                      助长 经口自给药  GABAA受体拮抗剂                 抑制  GABAA受体激动剂                 助长  阿片受体拮抗剂                   抑制  多巴胺受体拮抗剂                 抑制  6-HT受体激动剂                   抑制  去甲肾上腺素合成抑制剂           抑制

治疗方法：在本发明治疗制剂中包含D-苯丙氨酸，D-亮氨酸和任 何含有氢化肉桂酸的D-氨基酸(见表6-16)。另外该制剂还包括脑啡 酶抑制剂，如某些蛋白合成抑制剂，如杆菌肽，贝他定和嘌呤霉素； 多肽氨基酸如D型游离单氨基酸，D型必需氨基酸的二肽或三肽；巯基 苄基氨基酸(2-[巯基-3-苯基-丙酰基]-L-亮氨酸)；羧基烷基甲基酯 (N-[(R，S)-2-乙氧羰基-3-苯丙醇]-L-亮氨酸)；以及大量其它的结构 上不相关的化合物如司可巴比妥(速可眠)，焦磷酸盐，O-菲咯啉， 磷酰胺(phosphamidon)，Z-亮氨酸-NHOH和Z-甘氨酸-NHOH。

此外，发明者认为通过进一步提供脑啡肽释放剂，它们可以非 常显著地改善病人对治疗的反应。因此脑啡肽释放剂酪氨酸-精氨酸 和酪氨酸-D-精氨酸也包括到治疗制剂中。

大量的等位基因与多种冲动性、强迫性和成瘾性障碍的关联提示 存在一个受精神兴奋剂刺激物和非精神兴奋剂刺激物影响的机制，可 引起多巴胺(DA)优先释放到伏核(Acb)中部。这一机制的遗传基础 至少包括含有多巴胺能基因和各种调节酶(D1- D5，DAT1，DβH，MAOA，COMT)的多态性；因此，改变报偿级联中的神经 递质(包括5-羟色胺，脑啡肽，GABA，DA)的成份对物质和行动障碍 应有有益的效果。物质滥用和行为障碍包括：酒精，可卡因，尼古 丁，葡萄糖，大麻，阿片类和阿片衍生物，赌博，性强迫，多动，长 期暴力行为和应激障碍，以及与月经前综合症(PMS)有关的症状。

为了在伏核处诱导多巴胺的释放，最终还涉及了阿片能活性。因 此希望联合使用防止脑啡肽降解的脑啡肽酶抑制剂和脑啡肽释放剂以 最大限度地增强阿片能活性。

这一方案的重要部分是先把基因分型，并根据他/她的基因型提 供适当的鸡尾酒治疗。关于D2异常发明者研制了适当的鸡尾酒疗法， 并在文中有述。

合成激动剂并不是理想的治疗试剂。某一特定激动剂可作用于几 个受体，或不同细胞上的相似受体，而不仅仅是我们希望的某一受体 或细胞。就象对药物可以产生耐受性一样(通过受体数目和对药物亲 和力的改变)，对拮抗剂也照样可产生而耐受性。比较特殊的如溴环 肽(bromocryptine)或去氧麻黄碱，它本身可以产生药物依赖。大家 知道溴环肽可被恒河猴自行给药(Woolverton等，1984)。

与之相反，D-苯丙氨酸(DPA)没有耐受性。根据S.Ehrenpreis的 研究，在小鼠长期按500mg/kg/天的剂量给药并没有产生耐受性和依 赖性(芝加哥医学院)。

这种组合的合理性还在于促释放剂只有存在可释放对象时才起作 用，它们并不能治疗多巴缺乏，事实上，发明者担心促释放剂能加重 多巴胺的长期缺乏，从这一点来说，前体采用的是比较自然的调节途 径，只有需要时前体才转化为神经递质，然后有机体根据需要分配其 产品。

现有技术采用过DPA对酒精和可卡因依赖者进行抗成瘾治疗。 Blum等的资料表明：在一个关于体重降低的90天开放试验中，他们提 出了DPA与1-色氨酸，1-谷氨酰胺，吡哆醛-5‘磷酸联合使用。在这 一研究中，与对照者仅降低10磅相比，补充治疗组平均降低了26磅。 另外，试验组仅18.2％的降低不超过15磅，而对照组为81.82％， 这些结果显示，使用这一产品的超重个体体重降低是未用者的2.7 倍。

发明者发现在247名门诊病人2年的低卡路里节食程序中，补充摄 入DPA、其它氨基酸和微量金属的组与服用核心维生素组相比，显 示：1)包括男性和女性在内，在超重百分比上都有2倍的降低。2) 女性成瘾性降低70％，男性降低63％。3)女性暴食行为降低66％。 男姓降低41％。在节食研究组，体重仅回升了他们在节食其间失去的 体重的14.7％，对照 组则恢复了41.7％。5)对数回归模型显示，补充治疗、女性、病态 肥胖和肥胖家族史是2年后体重增加的重要预示变量。

这些资料显示，单独使用DPA或和其它氨基酸前体、微量金属如 吡啶甲酸铬或烟酸铬联合使用，在2年期间，特殊在预防体重增加或 根除体重复升方面可以产生戏剧性效果，直到今天，发明者还未在市 场上发现有此类产品可以自称有如此重大的发现，包括与Redux (Interneuron，剑桥，质量)或Fastin(Smith/Kline Beacham， 费城，宾夕法尼亚)。

另外，还进行了一些关于肥胖者很难降低体重和中断减肥后保持 减轻后的体重的原理研究，这些研究证实机体是如何“捍卫”一个特 定的体重，通常称作“调定点”，面对减肥计划中的能量消耗降低， 机体通过增加饥饿感、减少耗氧、胃肠系统更有效地吸收营养、甲状 腺激素分泌来保持“调定点”，这一点已经有过描述 (Keesey，1989)。此外，体重已降低，保健或药物治疗等调节的影响 消失，导致体重稳定或许多节食者描述为“平台”的现象，甚至体重 回升，从这一点上用补充疗法，不仅可防止发生体重回升，似乎还可 以克服平台效应。

单用芬氟拉明和联合使用芬特明与PHENCALTM的比较：使用d-芬 氟拉明的结果是可保持的体重降低，尽管食物自由摄入恢复到正常水 平。直到今天在人和动物的试验都没有证明给药后代谢率会增加。而 用芬氟拉明时，每当能量消耗时，它似乎都能增强能量消耗，该药物 对人和动物都能增强食物的热效应。对它增强能量消耗的能力不会产 生耐受性，而对它在厌食症方面的作用则不同(Levitsky和 Troiano，1992)。

对于一个新型的减肥产品，最重要的治疗效应是能够防止降低的体 重回升，事实上，Turner建议持久的体重降低是减肥策略的目的，而 根据目前有关方面的证据，d-芬氟拉明似乎在长达一年的时间里都能 起到降低体重的效应而不产生耐受性，耐受性是制约使用其他药物进 行长疗程治疗该病的问题。尽管d-芬氟拉明通过5-羟色胺能系统促 使那些对其他降低体重的策略没有满意反应的病人降低体重，随后进 行的对d-芬氟拉明的最长时间的随访研究提示，对严重的肥胖病人， 要想保持体重降低应持续治疗。就防止体重的回升而言，d-芬氟拉明 似乎是通过减少每日能量摄取的13-25％而起作用，它还可降低对肥 腻食物的渴望。本发明观点是：用PHENCALTM配方可以达到的效果， 远超过d-芬氟拉明和其它兴奋剂等已经达到的治疗效果，甚至优于由 食品与药品管理局批准的第一个用于减轻体重的药物所应该达到的治 疗效果。发明者相信，采用氨基酸前体引入和脑啡肽酶抑制，是到目 前为止最先进的预防体重回升的治疗方法。

优选治疗方案：治疗RDS的基本方案至少应包括以下的一种物质， 单独使用或联合使用。本表包括以药物或神经药物为名用于治疗的主 要成分(具体配方见表6-16)：

                                表20

  治疗组合物的成分              考虑的有效剂量范围

D-苯丙氨酸                      16到5000mg

D1-苯丙氨酸                     32到10,000mg

纳曲酮                          1到1000mg

酪氨酸-精氨酸                   15ug到IS mg或

                                酪氨酸-D-精氨酸(在同样剂量范围)

吡啶甲酸铬                      10ug到10000ug

铬烟酸铬                        10ug到10000ug

L-肉毒碱                        1到200mg

L-酪氨酸                        9到90,000mg

L-谷氨酰胺                      3到30,000mg

L-酪氨酸                        5到5,000mg

5-羟基-酪氨酸                   0.5到500mg

L-精氨酸焦谷氨酸盐              1到1000mg

鸟氨酸天冬氨酸盐                1到1000mg

D-亮氨酸                        16到5000mg

DL-亮氨酸                       32到10,000mg

羟基肉桂酸                      1到100mg

茶氨酸(Taiyo Intl)              1到1000mg

石杉碱                          1.5到1500ug

维生素B6(吡哆醇HCI)             1到1000mg

Rhodioia rosea提取物            5到500mg

  (Pharmline)

预期其它脑啡肽酶抑制剂在这些治疗方法中也是有用的(见以前的 专利，美国专利第5,189,064号，第4,761,429号，加拿大专利第 1,321,146号。这里被作为参考文献而引用)。

碳水化合物暴食行为或抗肥胖化合物：在这一点上，前面叙述过 的氨基酸引入和脑啡肽抑制可以影响许多与体重有关的重要问题，最 重要的是预防2年后体重回升。

抗SUD的详细方案：AlcotrolTM和CocotrolTM根据基因分型的使 用。用在原始专利基础上改进的制剂，在一个开放试验中，评价了氨 基酸前体引入和脑啡肽酶抑制在防止酒精和可卡因依赖先证者复发的 效果。该研究在2年之间观察了280例病人，复发的标准是根据具有资 格的专家的评价：先证者是否恢复定期使用酒精和可卡因。病人分为 2组：组A＝仅仅one-A-Day维生素，组B＝对酒精成瘾用 AlcotrolTM的一种，对可卡因成瘾用CocotrolTM的一种。

2年后，本研究中对照组共有78人复发，复发率86％，用氨基 酸组189个病人无1例复发，复发率为0。结果提示在防止SUD病人复 发上有非常积极的效果，实质上这一效果增加了典型治疗在病人身上 所得到的结果，他们接受传统的12个步骤，接近康复。

酒精中毒和可卡因滥用者的分类：先证者基因分型为A型和B型。研 究者已经验证了将酒精中毒者分为A型和B型的概念，并且现在发现这 一概念对研究可卡因滥用同样有效。亚型是指将具有1个或多个共同 特征的个体进一步分类和研究的系统。对酒精中毒者的亚型分类能更 好地理解基因、性格和环境等危险因素在导致酒精中毒上的复杂的相 互作用，以及受这些危险因素影响而发生的反弹。

酒精滥用在B型酒精中毒者比A型更严重。B型酒精中毒者似 乎有几个特征：它较A型者更与遗传因素有关；更常发生在男性；B 型更具冲动性并且倾向有严重的酒精滥用家族史；它们有更多的儿童 时期品行障碍，更严重的酒精依赖性、多药物滥用和精神障碍，尤其 是反社会人格。

对可卡因滥用者而言，某种伤害因素，如酒精中毒或药物滥用家 族史、追求感觉行为和儿童期品行障碍等更倾向于导致其更严重的B 型可卡因依赖。因此，其它没有上述特征的可卡因滥用者(A型)， 可能主要受社会、环境的影响而不是遗传、心境或精神影响而产生依 赖性。

在B型可卡因滥用者身上可以发现3种主要的特征的重要方面，如 病前危险因素(物质滥用家族史，儿童期品行障碍和ADHD，追求感觉 的行为和开始滥用药物的年龄)；物质滥用的变量(如可卡因使用的 次数，大量使用可卡因的时间，可卡因依赖的症状，酒精依赖的症 状，多药物使用，医学和社会性后果)和精神问题(如抑郁症状和反 社会的人格障碍以及上述精神问题的严重性(Ball等，1995)。

另外，在追求感觉、攻击、犯罪、暴力和社会适应能力减弱等方 面的计分上，B型者分数高于A型。前者使用可卡因的量、次数和持续 时间也高于A型可卡因使用者。B型者还更易出现使用药物的副作用， 如失去知觉、暴力(及其它)，并且在他们中使用更多药物以减轻戒 断痛苦的比例更高。第1次使用、第1次过量使用、第1次定期使用、 第1次每天使用、第一次出现成瘾症状的B型可卡因滥用者的年龄已 经更加年轻。

两种亚型在第1次使用可卡因和第1次出现依赖症状的时间跨度 上；使用途径如鼻嗅、吸烟或注射；控制使用的策略数目；以前戒除 违禁药物或酒精的持续时间等方面没有明显差异。有趣的是，大部分 参加试验者被分为B型，但在住院治疗病人中，A型和B型的数量几乎 相等。在门诊病人和未参加治疗的试验者中，75％是A型。

本发明的一个方面是把新的分子基因诊断技术和以前确立的B型行 为判定标志结合起来，更准确地为酒精和可卡因滥用者分型。新的遗 传学发现令人惊奇地与B型相关的参数相吻合(Ball等，1995)。椐 Ball等1995年的报道，绝大部分B型参数与DRD2型基因有关，证据来 自一些有关非西班牙白人多巴胺D2受体基因基因分型的多态性研究 (见表20-A)。

                        表20-A

               可卡因滥用者的基因型分类

               B类                   DRD2A1          参考文献 滥用问题的原因   多基因                  53％         Noble等，1993 性别             男性更多                p＜0.05 病前风险因素     家族史(至少父母         p＜0.016     Noble等，1993

             之一是酗酒者)

             ADHD                    p＜0.0001    Comings等，1991 儿童期因素       第一次有规律使用可卡因  p＜0.030     Noble等，1993

             之前的越轨行为(CD)

             具有3个风险因素：FH+    p＜0.007     Noble等，1993

             强可卡因使用，CD 物质滥用变量     强可卡因的使用          p＜0.015

             (静脉注射的平均％时间

             ，游离碱，和克赖克)

             从第一次使用可卡因到    p＜0.033     Noble等，1993

             下次使用的平均间隔周数

                        表20-A(续)

                B类                     DRD2A1          参考文献 物质滥用的  多次用药(每周每种药品          p＜0.0005    Comings等，1994 严重性      花费超过25美元)

        在所有药品(包括可卡因和其

        它兴奋剂，除阿片类以外)上

        都花费更多钱                   p＜0.01      Comings等，1994 起始年龄    A1携带者＝23.2岁               p＜0.026     Comings等，1994

        A2携带者＝26.7岁 精神病理学  严重程度较高，更具有反社会性                Comings等，1994

        儿童期暴力                     p＜0.002

        青年期暴力                     p＜0.0001    Blum等，1996

        暴力犯罪                       p＜0.011     Comings等，1994 人格        高冲动性，寻求感觉

        (病理性赌博)                   p＜1×10-8  Comings等，1994

        分裂样/回避症                  p＜0.006     Blum等，1997

        (冷漠和分离)

ADHD ADHD先证者的主要问题在于不能集中注意力。发明者近来 的研究显示其中的一个叫做KantrollTM的配方影响一系列的电生理结 果(见表6A)

据发明者所知，这是首例有关人每天食入一种特殊的氨基酸混 合物影响与认知表现有关的事件相关能力(ERP)的报道。认知ER在正 常的青年志愿者试验中由两种计算机化的视觉注意项目产生，立体定 位项目(SOT)和偶然的持续性表现项目(CCPT)。每个受试摄入氨 基酸前体28-30天前和后在完全受本人控制的情况下进行检测。在2 种项目混合后，ERP成分P300振幅出现统计学上显著的增强 (p＜.009)以及认知过程速度的加快(p＜.015)。在本研究中所观 察到的正常对照中神经功能的增强与RDS患者(如物质使用障碍，注 意缺陷障碍，碳水化合物暴食)在补充氨基酸后的促进康复是一致 的。

这一工作在ADHD先证者中还未完成。但是随着一系列ADHD病例在 补充氨基酸后多动的减轻和学习能力的改善的报道，其合理性也是明 显的。发明者有资料表明，正如本文前边所指出的那样，DRD2A1等位 基因和P300及AER和VER异常也有关联。还可见Comings关于大麻对 P300波长影响的工作。所有这些使采用特殊配方(HyperGenTM)和至少 是脑啡肽酶抑制剂(dl-苯丙氨酸)治疗成为必要。利用这一原理发 明者还将得到有关DRD2A等位基因和称作TOVA的标准计算机化ADHD试 验之间关系的资料。

注意力集中障碍。本发明的一个方面是治疗注意力集中障碍和其它 RDS相关综合征。发明者依据注意力集中过程是受神经递质控制、和 对正常脑认知功能负责的某种特殊神经递质可以通过特定的氨基酸前 体调节的事实来进行治疗。对脑的电生理功能的理解应归因于涉及注 意力集中的化学调节物质的生物起源方面。

最近关心的一个问题是酒精中毒儿童的认知能力损害(通过P300 波长检测)和ADD/ADHD病人的注意力集中能力降低。关于这一点，有 证据支持这样一个概念，即许多破坏性的儿期和青春期行为障碍- 包括ADHD，抽动-秽语综合症，学习障碍，物质滥用，违抗障碍和品 行障碍是相互关联行为-的一部分，它有很强的遗传成分，是多基因 遗传性的，共享一系列影响多巴胺与5-羟色胺和其它神经递质的基 因，并且来自父母双方。集中有关注意缺陷多动障碍的观察提示：其 最好是按行为划分为一种自身调节或执行功能的障碍。解剖学上的神 经成象研究发现，相关的调节回路包括前额皮质和基底神经节，它们 通过来自中脑的多巴胺能神经支配来调节，并通过激动活性或多巴胺 释放来激活多巴胺受体的刺激剂调节。

本发明提供了能够增强神经递质控制作用，引起多巴胺的自然释 放，克服PHD以及通过突触多巴胺占据多巴胺D2受体而刺激其增生 的组合物(包括使用苯丙氨酸)。

5-羟色胺前体5-羟色胺(5-HTP)是一个CNS递质，它存在于肠嗜 铬系统和血小板中。这一神经化学物质的生物合成是通过先将L-色氨 酸羟基化成5-羟色胺酸，然后将后者脱羧基而成5-羟色胺的。羟基 化(限速步骤)是通过色氨酸羟化酶完成的。脱羧基是通过普遍存在 的L-芳香酸脱羧酶完成的，该酶需要磷酸吡哆醛共同参与。

5-羟色胺通过单胺氧化酶代谢成5-羟基吲哚乙酸。这一代谢物 随后通过尿排泄。脑中枢5-羟色胺机制在控制心情、行为、运动活 性、进食以及下丘脑的控制饥饿、体温调节、睡眠、幻觉状态的某些 神经内分泌机制中起重要作用。

长期使用可卡因可降低5-羟色胺及其代谢产物的浓度。可卡因 明显减少5-羟色胺前体色氨酸的摄入，因此减少5-羟色胺的合成。 可卡因还减少色氨酸羟化酶的活性从而降低5-羟色胺能活性(Reith 等，1985)。

用消耗5-羟色胺的药物处理大鼠(芬氟拉明，PCPA或5-7-DHT) 在下丘脑而不是大脑内同时增加了脑啡肽和内啡肽含量。因为没有 mRNA和脑啡肽原前体(PE)或popiomelanocortin含量改变，提示5 -羟色胺能传导调节阿片类多肽的利用而不是影响其合成。

这一发现支持如下假说，即脑啡肽的释放减少导致多巴胺活性降 低，表现为抑郁状态。在剧烈活动之后，某些行为障碍如疼痛、抑 郁、睡眠紊乱会发生。用L-色氨酸补充5-羟色胺能传导有助于恢复 积极的心境。已经发现在饮食中提供色氨酸，如补充前体对脑5-羟 色胺和相关化合物的代谢存在确切的影响(Moir和 Eccleston，1968)。大脑5-羟色胺的含量取决于血浆色氨酸的水平 (Fernstrom和Wurtman，1971)。喂以缺乏色氨酸食物，小鼠的脑5 -羟色胺水平很低，而L-色氨酸可使其恢复。如果将L-色氨酸注 射到血中，大脑色氨酸和5-羟色胺水平可分别升高9倍和2倍。向同 时有抑郁和失眠的神经科病人输以色氨酸，可以使皮质色氨酸水平升 高6倍(Gillman等，1981)。

对8个健康男性进行色氨酸(50mg/kg)、酪氨酸(100mg/kg)或安 慰剂的双盲交叉研究(Lieberman等，1983)，色氨酸而不是酪氨酸 可明显减轻疼痛。其它研究显示色氨酸能减轻临床疼痛(Seltzer 等，1983)、预防偏头痛(Poloni等，1974)和逆转止痛药的耐受性 (Hosobuchi等，1980)。色氨酸通过5-羟色胺能的激活而增强多巴 胺的释放从而达到止痛。

不同于酪氨酸羟化酶，在正常生理状况下，色氨酸羟化酶并不是 饱和的，也就是说并没有发挥出最大作用。因此，色氨酸羟化酶的活 性明显地受L-色氨酸的影响。可供使用的自由L-色氨酸的数量由许 多因素决定，包括血浆中循环L-色氨酸的浓度和其脑和突触前终端 的摄取速率。发明者预期采用L-色氨酸或5-HTP可以恢复被可卡因破 坏的5-羟色胺能系统。

5HTP并不是有效的治疗试剂。L-色氨酸进入脑的速率取决于血 浆中自由的和结合的色氨酸的比率，该比率受血中神经氨基酸、胰岛 素和药物的浓度影响，这些物质竞争血浆中的蛋白结合位点以及色氨 酸摄入位点。另外，5HTP不仅仅被5HT神经元还被其他神经元摄取。 因此5HT合成增加并不仅限于5-羟色胺神经元。

5-HT合成酶抑制剂包括不可逆的色氨酸羟化酶抑制剂(DL-对氯 苯丙氨酸，6-氟色胺酸，L-propyldoracetamide)和5HTP脱羧酶抑制 剂(卡比多巴和1-甲基-5HTP)。5-羟色胺在动作电位和药物的影响 下以胞外分泌的方式释放到突触间隙。可卡因、(+)-安非他明、 去氧麻黄碱、芬氟拉明、对氯安非他明、氯米帕明和阿密曲替林可促 进5HTP的释放。

目前提出的有3种5HT受体类型(5HT-1，-2，-3)。5HT受体激 动剂包括LSD、喹哌嗪、N，N-二甲基-色胺(DMT)。5HT受体的拮抗剂 包括赛庚定、美西麦角、LSD、2-溴-CDS(BOL)、酮色林、托西米 定、辛那色林和1-(-)-可卡因。5HT的失活涉及高亲和力的能量依 赖的主动转运机制用来将突触间隙的5HT送回到突触前神经元。

抑制神经元摄取5HT的物质包括三环抗抑制药(丙咪嗪，地昔帕 明(desimipramine)，阿米替林，氯米帕明，氟伏沙明，芬氟拉明 (一种厌食药))和可卡因。任何非贮存形式的5HT都将被MAO转化 成代谢产物，然而如果MAO被抑制，5-羟色胺将通过O-甲基-转移酶 (COMT)代谢成N-甲基或N-N-二甲基产物。

阿片类多肽的增强剂/释放剂阿片类多肽的增强剂和释放剂。本 发明的一个方面是使用抑制阿片类神经多肽降解的物质。这些阿片类 物质促进多巴胺的合成和释放。给动物阿片类物质可以增加纹状体DA 生物合成和代谢的速率，该作用受位于黑纹状体的多巴胺能未端上的 特殊阿片受体调节(Clouet等，1970；Biggio 等，1978；Regiawi，1990)。长期给予B-内啡肽和脑啡肽可以产生多巴 胺能耐受性(Iwatsubo等，1975；Arden等，1972)。在产生耐受性的 动物中突触后DA受体异常敏感(Schwartz等，1978)。

可卡因也影响阿片能神经活性。当大鼠长期接触可卡因后，可以 观察到剂量依赖性的纳洛酮结合的改变。阿片受体的密度在几种脑结 构上明显减少，但在下丘脑外侧增加，这表明阿片类的结合特别受 “报偿中枢”而不是其它区域的影响(Hammer等，1978)。此外在另 一个研究中，纳洛酮有效地阻断了脑报偿中枢降低可卡因作用的域值 (Bain和Korwetsky，1987)。另外可卡因似乎影响某些阿片类制剂 的止痛作用(Misra等，1987)。发明者相信可卡因的强化作用可以 部分地通过脑报偿中枢的阿片系统调节，后者通过长期接触可卡因而 改变。

人们发现麻醉药可用于各种“阿片受体”。脑和其它神经组织含 有内源性阿片(EO)。在脑中还发现相关的五肽、蛋氨酸和亮氨酸- 脑啡肽(Hughes等，1975)。脑啡肽激活δ和μ受体，而β内啡 肽激活ε受体。内分泌学家显示已被认做脑垂体激素的一种B-促脂 解激素(B-LPH)含有5个氨基酸的MET-脑啡肽序列并被水解成有活性 的阿片类物质B-内啡肽(Li等，1976)。

目前发明者已知至少有3种不同来源、不同功能的EO化学家族， 尽管所有多肽在N端都含有酪氨酸-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-X的序 列。内啡肽家族包括大的前体，阿片激素原(pro-opiocortin)，B- LPH和B-内啡肽，第二个EO家族是脑啡肽家族。蛋氨酸脑啡肽和亮氨 酸脑啡肽都来自包含2种序列的大的多肽前体。各有1个或2个碱性氨 基酸连接到脑啡肽羧基端的六肽和七肽和一种七肽：[Met]脑啡肽- Arg-Phe似乎是自然存在的中间体(Hexum等，1980)。第三个家族是 κ激动剂如强啡肽1-13和1-17。这些CNS成分拮抗吗啡的作用。强啡 肽可能作为亮氨酸-脑啡肽的前体、构成N端，转变为亚内啡肽形式 (E5)可以导致受体亲和力的改变(κ到δ)，说明调节配体表达 的酶类可能存在新的调节作用。

来自每个家族的多肽似乎都既作为神经递质又作为神经激素。5 肽脑啡肽位于神经未梢，受刺激后从神经元释放。亮氨酸和蛋氨酸脑 啡肽从肾上腺髓质释放到血液中，用做神经激素。β-内啡肽从脑垂体 释放到血液中，作为脑不同区域的神经递质(Bloom等，1978)。内啡 肽和脑啡肽都产生生化或药物理反应，包括耐受性、依赖性和禁欲， 与人和动物给以EO后麻醉止痛剂所引起的反应相似。内源性阿片类物 质和麻醉药一样是“阿片”家族的成员。降解脑啡肽(E5)的酶统称为 “脑啡肽酶”。

目前已知组织中含有多种使五肽脑啡肽(E5)代谢的肽酶。作用类 似脑啡肽酶的酶类包括可溶的和颗粒状结合的氨基肽酶 (Hersh，1981)，其它作用于甘氨酸3-苯丙氨酸-4部位的如肽基二 肽酶或金属内切肽酶(Benuck等，1982；Schwartz等，1980)。金属 羧肽酶A使脑啡肽裂解为酪氨酸-甘氨酸-甘氨酸-C和蛋氨酸-苯丙氨 酸或亮氨酸-苯丙氨酸末端二肽。和在靶位点主要由单一酶类负责使 其失活的生物胺不同，脑啡肽的降解需要多种酶类，尽管金属内切肽 酶似乎是主要的脑啡肽酶。以下的方案表明与E5降解有关的酶类作 用部位。

防止E5降解的一个策略是提供其替代物。为阻止各种组织酶对脑 啡肽的降解，须进行几种化学修饰，这些包括：a)N端酪氨酸修 饰，使蛋氨酸的酪氨酸修饰类似物能防止降解(Coy和Kastin， 1980)；b)在位置2引入1个D-氨基酸以阻断氨基肽酶的作用；和/或c) 在位置3-5修饰或引入1个D-氨基酸以阻断肽基二肽酶或其它作用于 甘氨酸3-苯丙氨酸4键的酶的作用。其它类似物包括D-丙氨酸-脑啡 肽酶酰胺或FK33-824，作为μ激动剂，脑啡肽-精氨酸-苯丙氨酸作为 δ激动剂，和强啡肽1-13或1-17作为κ激动剂(Wisler等， 1981)。

到目前还不清楚这些侯选的E5激动剂在临床使用时是否会有潜在 的成瘾倾向、耐受性和其它毒理学方面的问题，许多这些修饰过的、 对抗酶的替代物成瘾的可能性，大大减少了它们的临床应用。

第二种也是优选的在体内增加脑啡肽或脑啡肽活性的策略是使用 特定的酶抑制剂，某些脑啡肽片断(甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-蛋氨 酸或甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸，苯丙氨酸-蛋氨酸，苯丙氨酸 -亮氨酸)，可以作为脑啡肽的抑制剂，并且可能较大的脑啡肽形式 本身就具有抑制性。

在本发明中，“脑啡肽酶抑制剂”包括但并不仅限于D-苯丙氨酸 (DPA)，DL-苯丙氨酸(DLPA)，氢化肉桂酸和D-氨基酸如D-亮氨酸， 预期其它脑啡肽抑制剂也有特别的意义，它们选自某些蛋白合成抑制 剂(杆菌肽，贝他定，和嘌呤霉素)，多肽氨基酸(游离的D-型单氨 基酸，D-型必需氨基酸的二肽和三肽，巯基苄基氨基酸(如2-{巯基- 3-苯丙酰基}-L-亮氨酸)，羧基烷基甲基酯(如N-{(R，S)-2-乙氧羰 基-3-{苯基-丙醇}-l-亮氨酸}，苯并吗吩烷-脑啡肽，以及其它结构 上不相关的化合物如司可巴比妥，焦磷酸盐，O-菲咯啉，磷酰胺，Z- 亮氨酸-NHOH，Z-甘氨酸-NHOH。二肽如D-苯丙氨酸-D-亮氨酸和D-苯丙 氨酸-D-蛋氨酸，和多肽如L-酪氨酸-甘氨酸-甘氨酸-D-苯丙氨酸-D- 亮氨酸，和L-酪氨酸-甘氨酸-甘氨酸-D-苯丙氨酸-D-蛋氨酸，以及D- 苯丙氨酸，D-亮氨酸和氢化肉桂酸。

已经证明D-苯丙氨酸可抑制羟肽酶A(Hartruck和 Lipscomb，1971)，并且近来证明它还具有止痛(Ehrenpreis等， 1978；Della Bella等，1979)和抗抑郁作用(Beckmann等， 1977)。

为评价D-苯丙氨酸作为脑啡肽酶抑制剂的效力，经试验证明它在 小鼠肠粘膜上可以明显减少寡肽(D-丙氨酸2-D-亮氨酸)脑啡肽 (DAPLA)和酪氨酸-D-丙氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸(TAAGP)的降解 (Gail等，1983)。然而，D-苯丙氨酸在体外试验中抑制来自牛脑的 脑啡肽酶A和B的活性很低(Amsterdam等，1983)，有趣的是，在仅加 入1个氨基酸形成二肽D-苯丙氨酸-酪氨酸后，就可以显著地增加抑制 效力。

D-苯丙氨酸可以抑制脑啡肽和B-内啡肽的降解，它对于催化脑 啡肽分解的酶的作用强于催化B-脑啡肽的酶。它的活性还是组织特异 性的，在下丘脑，80％的脑啡肽酶被抑制，而内啡肽酶为5％；在皮 质，脑啡肽酶为60％，内啡肽酶仅为18％；在纹状体，脑啡酶为78 ％，内啡肽酶为10％；在脊髓，脑啡肽酶为84％，内啡肽酶为40％ (Ehrenpreis等，1981)。其它研究表明注射DPA后90分钟后，蛋氨酸 一脑啡肽在CNS实际增加了三倍，并且在6天后还维持在较高水平 (Balagot等，1983)，小鼠脑蛋氨酸-脑啡肽的增加类似地可见于注 射氢化肉桂酸后，它是一种已知的D-苯丙氨酸代谢物。

本发明的另一方面是把脑啡肽酶抑制剂和脑啡肽释放剂结合起 来，这样做的理论基础在于发明者可明显增强脑啡肽在各自的阿片受 体部位的效果(如δ或μ)。为达到这一目的，发明者优选使用酪氨 酸-精氨酸二肽(京都酚)和它的稳定的类似物酪氨酸-D-精氨酸，后 者具有止痛作用，并且在鼠脑纹状体部位的突触小体中增加细胞内 钙。这些物质似乎是蛋氨酸-脑啡肽释放剂，其作用方式未知(Ueda 等，1986)。

为了既抑制脑啡肽酶又增加神经元脑啡肽的释放，称作京都酚的 物质(酪氨酸-精氨酸)每日的用量应在15ug-15mg之间。每天用剂量 在15ug-15mg之间的更为稳定的类似物(酪氨酸-D-精氨酸)可以代替 它作为脑啡肽释放剂(Tajima等，1980；Ueda等，1986)。因此，一 种脑啡肽释放剂可以和脑啡酶抑制剂结合，在突触中达到高水平的脑 啡肽神经能活性，以进一步增加神经元多巴胺的释放。这可以作为 “置换治疗”的一种方式，减少对可卡因的″成瘾″以及其它这里所描 述的RDS行为。这一治疗在可卡因去毒后的12月中将最为有效。

γ-氨基丁酸(GABA)的前体。GABA是控制多巴胺释放的一种抑制 性神经递质(Gessa等，1985)。它似乎减少酒精脱瘾后的癫痫发 作。合成γ-氨基丁酸(GABA)的主要途径是通过谷氨酸脱羧酶 (GAD)将L-谷氨酸脱羧。和其它的氨基酸脱羧酶一样，该酶需要维 生素B6(磷酸吡哆醛)作为辅助因子。GAD仅存在于突触GABA神经末 端的细胞浆内。控制GABA合成的关键是GAD，它也是GABA合成的限 速步骤。GABA通过终产物抑制影响GAD的活性。在突触前神经元L-谷 氨酸的浓度处于饱和，因此，增加的物质浓度并不能影响GABA的合成 速度，所以，外源性给以L-谷氨酸并不能明显增加神经递质GABA， 除非L-谷氨酸的水平异常低下。有试验表明，持续10天通过饮水给不 同酒精诱导的成年白化病小鼠服用谷氨酰胺(500ng/kg，每天)可 以显著增加脑中谷氨酸盐、GABA和牛磺酸的含量。谷氨酰胺是将氨运 输出脑的有效的中间物，因此可大大影响神经组织中不同氨基酸的分 解代谢。在脱氨基后，谷氨酰胺可成为谷氨酸盐的前体，因而是是 GABA的前体(Thawki等，1983)。

至少有2种GABA受体：GABA-A受体对荷包牡丹硷和木防已苦毒素 或木防已苦毒宁的竞争性阻滞作用很敏感，这些受体位于突触后结构 上，调节典型的GABA抑制作用。而GABA-B受体位于突触前末端，对荷 包牡丹硷的阻滞作用不敏感。GABA-B受体不仅可调节GABA在CNS的释 放，而且可调节NE从交感神经系统的某些部位的释放。

已经有人提出某些临床上的功能障碍如运动障碍、Huntington氏 舞蹈病、癫病、酒精中毒等可能与GABA系统有关。GABA受体对GABA的 亲和力、苯并二氮杂的苯并二氮杂结合位点和巴比妥酸的巴比妥 酸结合位点的改变，都受一种叫“GABA调节素”的蛋白调节。与腺苷 酸环化酶相关受体有关的GTP调节蛋白一样，GABA调节素的活性由磷 酸化作用决定。

GABA通常与下丘脑、海马、脑基底神经节、脊髓后角和视网膜处 的胶状质的抑制性神经元有关。CNS内的某些长的轴突通路经认定也 与GABA能活性有关。

GABA激动剂包括乙酸咪唑、磺酸3-氨基丙烷、和THIP(4，5，6，7- 四氢-异噁唑并-[415-C]-吡啶-3-醇和在捕蝇蕈中发现的蝇蕈醇(3- 羟基-5-氨基-甲基异噁唑)。GABA拮抗剂包括荷包牡丹硷、木防已 苦毒素、木防已苦毒宁和苄青霉素。

在突触前的GABA神经末梢和神经胶质成份中存在一个高亲和性的 钠依赖性的摄入系统，将释放的GABA从细胞外间隙除去从而使其灭 活。GABA摄入的抑制剂包括：神经元摄入型：如二氨基丁酸和顺- 2，3-氨基环已烷羧酸；神经胶质摄入型：如B-丙氨酸；其它摄入 型：3-哌啶甲酸、苯并二氮杂类和、neuroleptics和三环抗抑郁 药。

GABA在释放和与受体相互作用后可以重新回到突触前神经元，因 此是一个可再利用的神经递质。GABA在神经末梢和神经胶质组织通过 酶进行代谢和转换，如在A-氧络谷氨酸的存在下由线粒体GABA氨 基转移酶(GABA-T)作用变成琥珀酸半醛。形成的琥珀酸进入三羧 酸(Krebs)循环。GABA-T需要磷酸吡哆醛作为辅因子。琥珀酸半醛 迅速被琥珀酸半醛脱氢酶氧化成为琥珀酸，琥珀酸脱氢酶也要用NAD 和NADH作为辅因子。考虑到这一点，发明者在配方中加入吡哆醛-5- 磷酸作为氧化-还原通路的促进剂。

从这一点来说，在动物和人，给以下的GABA-T抑制剂可以增加 GABA浓度，如乙醇胺-P-磷酸，γ乙炔基GABA，γ乙烯基GABA， gabcuculline，肼基丙酸，二-N-丙基乙酸钠(valproate钠)，氨 基羟乙酸(维生素B6抑制剂)，L-谷氨酰胺(Bloom，1985)。

儿茶酚胺(多巴胺、去甲肾上腺素)的前体儿茶酚胺类多巴胺 (DA)、去甲肾上腺素(NE)和肾上腺素(E)都是神经递质。儿茶 酚胺是在苯环上具有2个相邻的羟基(OH)的化合物。在体内，这类 物质是通过酪氨酸羟化酶将芳香族氨基酸L-酪氨酸羟基化为L-3、 4二羟基苯丙氨酸(L-多巴)而合成的。L-酪氨酸被有效地摄入去肾 上腺素能神经末梢。L-苯丙氨酸是L-酪氨酸的前体(Blum和 Kozlowski，1990；Schwartz等，1992)。

酪氨酸羟化酶位于去甲腺素能神经元的细胞浆，是NE合成的限速 酶。大量研究表明还原型喋啶辅因子、分子氧和亚铁离子对活性是必 需的。在胞浆中，L-多巴通过以磷酸吡哆醛(维生素B6)作为辅因子 的L一芳香族氨基酸脱羧酶脱羧为DA。多巴胺被主动摄入到颗粒状的 贮存囊泡中，在多巴-B羟化酶的作用下将DA羟基化形成去甲肾上腺素 (NE)。该酶需要铜、分子氧和抗坏血酸作为辅因子。在CNS的某些 神经元中，NE进一步通过苯乙醇胺N甲基转移酶转变成肾上腺素 (E)。

酪氨酸羟化酶的活性受下列因素影响：“终产物”抑制，由神经 末梢内NE浓度增加引起，L-酪氨酸转化为L-多巴的速率降低；CNS内交 感神经活性的增加，从而增加NE的合成；血管紧张素II介导的NE合成 的增加；肾上腺受体的激动剂(如可乐定)和阻滞剂(如酚妥拉明) 通过位于突触前神经末梢的肾上腺素能受体改变NE的释放速率。

NE合成酶的抑制剂包括：甲基-P-酪氨酸(抑制酪氨酸羟化 酶)，卡比多巴(抑制在CNS外的组织中的芳香族氨基酸脱羧酶)， 和二硫代碳酸二乙酯，FAI63和解酒硫(多巴胺-B-羟化酶的抑制 剂)

NE以多种贮存复合物的形式贮存在神经末梢的多个解剖部位。一 种NE贮存类型是颗粒状复合物，位于去甲肾上腺素能神经末梢的囊泡 内。颗粒状复合物由结合到ATP上的NE和被统称做嗜铬粒蛋白的几种 蛋白组成，包括多巴胺-B-羟化酶和Mg++，Zn++和Cu++。

将DA和NE摄入贮存囊泡中是一个主动转运过程，需要ATP提供能 量和Mg++激活Mg++依赖性的ATP酶，这一Mg++依赖性的将DA和NE摄入 贮存囊泡的过程与DA和NE穿过神经细胞膜进入神经元的过程是相互 独立的不同的，后者是Na+/K+-ATP酶依赖性的。

NE-ATP-蛋白-离子贮存复合物的稳定性，可以被某些作为Mg++鳌合剂的化合物所破坏。长期可卡因滥用者有时出现的镁缺乏可能与 此有关。就这一点而言，长期给以可卡因可以增加NE的回复。

NE从神经末梢的释放是通过一个钙依赖性的细胞排粒作用完成 的。囊泡膜与原生质膜融合，由NE，ATP，多巴胺-B羟化酶和嗜铬粒蛋 白组成的囊泡内容物释放到突触间隙。一个已知控制NE到突触后受体 的可利用度的机制需要依靠位于释放NE的神经末梢的突触前受体。位 于突触前神经末梢的一个摄入系统可以使NE离开突触间隙，从而使NE 在突触间隙的作用被终止。有两种神经元性NE摄入方式：方式I，方式 II。

方式I是能量依赖性的，需要被钠依赖性的ATP酶降解的ATP。这 是一个高亲和性的过程，也就是说可以有效地清除突触间隙的低浓度 NE。神经元摄入系统将NE运输到神经末梢，在此大多数NE被贮存在囊 泡中，这一过程的抑制剂包括可卡因、三环抗抑郁剂、安非他明和酪 胺。

方式II涉及NE在非神经元组织中的聚集。由于肾上腺髓质的刺激 或静脉注射儿茶酚胺引起的NE血浆高水平，可以被非神经组织如肝、 肌肉、结缔组织所摄取。NE或其它儿茶酚胺物质可以重新扩散到循环 系统，而更多的是在细胞内被单胺氧化酶(MAO)和儿茶酚胺-O-甲基 转移酶(COMT)所破坏。

MAO存在于所有含线粒体的组织中，并且结合在外膜上。肝、脑、 神经、肌肉、和所有代谢活跃组织中都有MAO，它将NE氧化脱氨为 c，4-二羟扁桃酸，后者随后被O-甲基化(被COMT)为3-甲氧基-4- 羟扁桃酸。MAO实际上是一组具有不同组织分布、底物、抑制剂和物 理特性的异构酶。例如，MAO A喜欢以NE和5-HT为底物，可被氯吉兰 选择性抑制。MAO B喜欢以olopamine和苯乙胺为底物，可被 deprenyl(司来吉兰)选择性抑制。其它熟知的MAO抑制剂包括：异 丙烟肼，烟肼酰胺，tranclypromine，和苯乙肼。

人们发现肝细胞中存在大量的COMT，在CNS中，COMT作用于未被 神经元重新摄入而失活的E和NE。抑制剂焦性没食子酸通过阻滞COMT依 赖性的甲基转移过程而起作用，该转移涉及将来自S-腺苷-L-蛋氨酸 的一个甲基转移到NE，E和DA的儿茶酚环3’羟基位置上。多巴胺是E和 NE的前体，并且在CNS和自主神经系统的一些神经节中起重要作用。

神经元内高浓度的DA通过终产物抑制作用抑制酪氨酸羟化酶，从 而减少DA的合成。此外，DA合成的限速步骤是酪氨酸羟化酶作下的酪 氨酸到L-多巴的转化。在正常情况下，酪氨酸羟化酶已完全被L-酪 氨酸饱和，因此，增加循环中酪氨酸水平并不能加快DA合成的速率。 然而，当DA量减少和酪氨酸羟化酶例如受可卡因的影响而遭到破坏时， 这一事实将发生改变。

L-多巴被主动摄入CNS神经元并在此转变为DA。用L-多巴治疗 后，DA合成和贮存的量明显增加。与多巴胺能系统相比，用L-多巴 治疗后，NE合成仅有少量增加。

多巴胺贮存在贮存颗粒中，在此儿茶酚胺和嗜铬粒蛋白、二价金 属离子和ATP复合在一起。DA被认为通过细胞排粒作用释放到突触间 隙。如同NE，这是一个钙依赖性的过程，并且在对到达神经末梢的动 作电位或药物发生反应时产生。下列物质可增加DA释放：可卡因、 (+)-安菲他明、去氧麻黄碱、酪胺、金刚胺、m-芬美曲嗪、芬特明 和诺米芬新。除了引起DA释放，这些化合物还不同程度地抑制神经元 对DA的重摄取。

DA被释放到突触间隙后，其作用被神经元的重摄取系统所终 止，该系统是一个高亲和性、能量依赖性、主动转运过程，与曾经描 述过的NE系统相类似。MAO和COMT分别对DA转化为3-4-二羟苯乙酸 (DOPAC)和高香草酸(HVA，3-甲氧基-4-羟-苯乙酸)负责。可卡 因通过对将DA重新摄入突触前神经末梢的阻滞而延长DA在突触间隙的 作用。

脑酪氨酸水平的升高导致脑L-多巴合成的增加，L-多巴随后代谢 为多巴胺。给以酪氨酸后，多巴胺的合成和释放增加。食物中的酪氨 酸可增加多巴胺和去甲肾上腺素的回复和释放，但并不增加儿茶酚胺 水平。压力、寒冷和某些药物可导致神经消耗增加从而使神经末梢的 儿茶酚胺的水平降低。

L-苯丙氨酸是一个必需氨基酸，它也是多巴胺和去甲肾上腺素神 经递质合成的前体。通过检测这些神经递质的代谢产物HVA、DOPAC和 MHPH，发现它们在剧烈活动和身体疲劳时明显改变。L-苯丙氨酸可 以在可卡因滥用导致多巴胺耗竭后用以代替，或与L-酪氨酪或L- 多巴一起恢复多巴胺贮存。

采用这些前体可以作为以多巴胺能释放剂、阻滞剂、激动剂或拮 抗剂或影响多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素重新摄入或降解的试剂 治疗的各个阶段的适当补充。然而，更重要的是包括合成和释放的全 部多巴胺能活性在某些程度上受某些阿片类多肽的调节(如脑啡肽和 内啡肽)。中枢性给以阿片类多肽在人和动物均可引起血浆儿茶酚胺 水平的升高(Clouet，1982)。实际上，阻滞突触前多巴胺能受体可 以增强B-内啡肽的释放，显示一个独特的互动关系。可以作为前体的 化合物包括L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、pharmaline。

Rhodiola Rhosea提取物(pharmaline).Rhodiola Rhosea或金 根是景天科的一种多年生草本植物，生长在北极和阿尔卑斯山地区。 在阿尔泰山脉、东西伯利亚、Tien-sdhein和远东地区，人们已成功 掌握Rhodiola Rhosea的栽培技术。即可以从种子又可以从植物繁殖 (Polozhy等，1985；Saratikov和Krasnov，1987)。其根茎含有酚 化合物，其中最重要的是p-对羟苯基乙醇(tyrasol)和它的糖苷红 景天苷(salidroside)，其决定了Rhodiola Rhosea制剂的生物活性 (Saratikav等，1968)。Rhodiola具有刺激和致适应性质，它被认为 可以改善从事体力劳动的能力，减轻疲劳，缩短肌肉超负荷后的恢复 时间，使心血管动能正常化。在高强度肌肉工作过程中，通过优化氧 化磷酸化过程防止脑和肌肉中micurgic磷酸的丢失，稳定脂类在肌 肉中的活性，增强骨骼肌代谢的指标(激活对aminacyl-t-RNA-合成 酶)，增加RNA的含量，增加肌肉尤其是脑的供血(Saratikov等， 1968；Saratikov，1974)。Rhodiola能增强注意力范围、记忆、改 善脑力劳动和体力劳动。与这一活性有关的大脑区域为丘脑皮质和下 丘脑后部(Marina等，1973)。Rhodiola还与其他多种作用有关： 防止高血糖和低血糖、白细胞增多和减少、红细胞增多和减少、低 氧，减少应激并起到保护心脏的作用。Rhodiola的应激调节效应与它 使垂体-肾上腺系统和阿片能系统正常化的作用有关。人们还发现 Rhodiola能增强机体的抗肿瘤耐受能力，明显抑制实验性肿瘤的生 长，降低肿瘤转移的频率，延长肿瘤复发动物的生存期，减少自发性 肿瘤的后果(Dementyeva和Yaremenko，1983)。还有证据表明 Rhodiola可以减轻神经官能症，对抗疲劳(Saratikov，1977)。

红景天苷(一种Rhodiola提取物)30mg/kg的红景天苷(SAL)可 以防止解酒硫诱导的动物脑NE降低。红景天苷通过抑制COMT和MAO的 活性而影响脑NE，红景天苷并不降低儿茶酚胺和5-羟色胺前体透过 血脑屏障(BBB)的能力，这一特性使其对本发明组合物，尤其是治 疗注意力障碍的方案非常有用。在无伤的小鼠中给以0.2mg/kg rhodosine(含有红景天苷，糖苷配基对羟苯基乙醇，rosavin)，可 以增加脑新皮质中DOPA、多巴胺(DA)和5-HT的浓度，减少尾状核中NE 水平。另有人证明皮下注射红景天苷30分钟后，肾上腺素(EPI)和 DOPA水平并无改变。在给予30mg/kg剂量时，NE含量减少26％，5-HT含 量减少15％；在给予100mg/kg的剂量时，NE、DA、5-HT的浓度分别 减少20％、28％、23％。在给小鼠服用L-多巴(50mg/kg)和5- HTP(100mg/kg)的试验中表明，与盐水-多巴-5-HT对照相比，服用 红景天苷(30mg/kg)分别可使动物外源性DOPA和5-羟色胺升高26％ 和13％。这些资料揭示该制剂增加了血脑屏障对儿茶酚胺前体的通透 性。此外，Petkov(1981)的研究表明，红景天苷降低了MAO的活 性，抑制了COMT的活性，因此减慢儿茶酚胺以O-甲基化和氧化脱氨 基方式灭活。进一步有试验表明：红景天苷并不改变5-HTP脱羧酶的 活性，因此，它并不影响由5-HTP到5-羟色胺的合成，但通过轻度抑 制MAO，减缓胺的生物转化。显然，涉及联合给予5-HTP和红景天苷 的研究中脑中5-羟色胺的增加，是由红景天苷增强血脑屏障对5-HTP 的通透性而控制的。

文献显示了Rhodiola和神经递质动力学之间的一些相互作用，归 纳起来已经报道的有：多巴胺在伏核中的减少，在海马中NE的增 加，在下丘脑5-HT的增加，以及胆碱能受体的激动剂样活性。在神经 科学中有关各种神经递质在认知问题上起不同作用的某些机制已被接 受。胆硷能神经机制是记忆痕迹固定的基础。脑去甲肾上腺素能系统 增强正性强化作用，5-羟色胺能机制更多地涉及记忆的巩固过程。

有人通过使用几种带有负性和正性强化作用的积极逃避方法研究 Rhodiola对大鼠的效果(Petkov等，1986)。采用带有负性(惩罚 性)强化的迷宫方法，发现给每只大鼠Rhodiola提取物0.1ml后可以 改善学习和记忆。在记忆试验中使用同样剂量连续治疗10天，可以明 显提高长期记忆。采用带有正性强化(食物)的“楼梯”方法，给每 只大鼠0.1ml Rhodiola提取物，也在训练过程中取得了有利的效果。 相反，采用其它方法，给每只大鼠0.01ml Rhodiola提取物并没有对 学习和记忆产生实际的效果，证明这种酒精-水提物的不一致性。

白化病大鼠被用来研究甲氯芬酯和Rhodiola对惊厥性电休克记忆 损害的效果(Lazatova等，1986)。以100mg/kg体重的剂量腹膜内注 射甲氯芬酯5天，在训练后的第3、第24小时，经保持试验证明：它可 预防惊厥性电休克所引起的逆行性遗忘症。相反，尽管Rhodiola提取 物在其它实验中可改善学习和记忆，经口连续10天给每只大鼠服用 Rhodiola提取物0.10ml，并没有产生作用。

石杉碱石杉碱是属于乙酰胆碱酯酶抑制剂的一种化合物，它可 抑制破坏乙酰胆硷的酶类，乙酰胆硷是一种重要的神经递质或脑化学 物质，据信对学习和记忆十分重要。石杉碱是天然存在的化合物，最 早从石松Huperzine Serrala中分离到。被用做中药，最近作为治疗 与年龄有关的记忆障碍的药物已经在中国进行了有限的临床试验。结 果提示在某些病人中可改善学习和记忆。然而这暗示性的结果并未被 临床试验证实。这一天然物质被考虑用于本专利中所要求的组合物中 以影响注意力集中过程。用于增强人的记忆的推荐使用剂量为150ug /天(治疗性用药范围是1.50到1500mcg/天)。

石杉碱甲对由莨菪胺诱发的记忆损伤的效果与E2020和他克林 (tacrine)的效果在体外进行了比较，使用的是辐射状的迷宫作业和 胆碱酯酶抑制方法。莨菪胺(0.2mg/kg)在大鼠中明显地损伤了空 间记忆。石杉碱甲(口服0.1-0.4mg/kg)和E2020(0.5-1.0mg/kg 口服)和他克林(1.0-2.0mg/kg口服)能把这些莨菪胺诱发的记忆 缺乏逆转。由比色法确定的石杉碱甲、E2020和他克林对丁酰胆碱酯 酶：乙酰胆碱酯酶的比率分别是884.57、489.05和0.80。结果证明了 石杉碱甲是最具有选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂，并且，比E2020或 他克林更明显地改善了由莨菪胺诱发的记忆缺乏，这表明它可能是一 种可用于阿耳茨海默氏症患者的认知损伤临床疗法的有希望的药剂 (Cheng等，1996)。

石杉碱甲是一种新的有效的可逆的选择性乙酰胆碱酯酶 (AchE)抑制剂，人们期望它比目前在阿耳茨海默氏症患者中用于记 忆缺乏的治疗的其他乙酰胆碱酯酶抑制剂更优秀。已经测定了石杉碱 甲对被AF64A-处理的大鼠在辐射状迷宫中表现的影响(Zhi等人， 1995)。AF64A(每边2nmol，i.c.v.)对老鼠执行空间工作记忆作 业的能力造成了明显的损伤。这种行为的损伤与胆碱乙酰转移酶 (ChAT)在海马中活性的显著减少有关联。石杉碱甲(0.4-0.5 mg/kg，腹腔注射)明显地改善了由AF64A引起的记忆缺乏。这些结果 暗示AF64A是一种通过改变海马胆碱能功能而破坏工作记忆过程的有 用的试剂，并且，这样的损伤能被石杉碱甲有效地改善(Zhi等.. 1995)。

HuperazonTM的主要的组成部分是石松Huperzia serrata的专有 提取物，用于治疗阿耳茨海默氏症。在中国进行的研究显示：这种提 取物的活性物质石杉碱甲是用于阿耳茨海默氏症的有希望的新治疗 法。其他的研究显示石杉碱甲是一种很好的乙酰胆碱酯酶抑制剂 (AchE)，具有通往CNS的出色的渗透力和值得注意的体内半衰期。 在中国进行的双盲临床试验证明：石杉碱甲是安全的，而且对阿耳茨 海默氏痴呆的长期治疗来说是有效的。除了具有乙酰胆碱酯酶抑制剂 活性，最近的发现显示石杉碱甲还有其他的神经保护性功能：石杉碱 甲在大鼠的新生海马和小脑神经元的培养物中，能抑制由谷氨酸诱导 的细胞毒性；石杉碱甲促进神经元培养物中的树突的分枝。

阿耳茨海默氏症的特点是神经元的异常和退化，这些神经元正 常活动和生存能力是依靠乙酰胆碱和乙酰胆碱酯酶的。这些位于前脑 基底部的神经细胞也与如帕金森病的其他神经疾病有关。石杉碱甲是 在活性上比Cognex和E2020更出色的乙酰胆碱酯酶的有效抑制剂， Cogex是在美国第一个被批准用于治疗阿耳茨海默氏症的药物， E2020是最近被Eisai Pharmaceuticals许可的的药物。另外。石杉 碱甲已经表现出在组织培养中可以保护神经元免于由兴奋性氨基酸谷 氨酸导致的死亡。由于石杉碱甲具有双重的药理学活性， HuperazonTM就为注意缺陷和老年记忆缺乏的治疗提供了一种独特而 重要的活性。石杉碱甲的毒理学和功效的研究表明，即使给予人治疗 剂量50-100倍的剂量，它也不具有毒性。提取物在剂量为2ug/kg 时，可以起效6小时而没有值得注意的副作用。

在阿耳茨海默氏症中，使用Weschler量表进行测量，160个以上 患者的双盲对照研究结果表明：仅仅每天两次150ug的剂量(3-5 ug/kg)就可以使患者获得显著的改善。在由其看管人进行的患者评 估中，把石杉碱甲和安慰剂进行比较，使用安慰剂的11个患者报告了 在头脑清楚方面有改善，而26个使用石杉碱甲患者报告有这种改善， 8个使用安慰剂的患者被证明改善了记忆，而16个使用石杉碱甲的患 者改善了记忆，并且，1个使用安慰剂的患者被证明具有语言上的进 步，而8个使用石杉碱甲的患者有这种进步。

在使用石杉碱甲的患者与使用吡拉西坦的患者之间进行的记忆改 善的比较中，已经证实：50％的使用吡拉西坦的患者和85％的使用石 杉碱甲的患者改善了记忆，也证实了明显地改善了记忆的患者在使用 吡拉西坦患者中有30％，在使用石杉碱甲患者中有70％，并且，仅有 15％的使用石杉碱甲的患者被证明没有记忆的改善，使用吡拉西坦的 患者有50％被证明没有改善。

石杉碱甲有2个重要的特征可以用于区别于Cognex和E2020以 及其他研究中的实验化合物。石杉碱甲对脑乙酰胆碱酯酶(AChE)而 不是在身体别处的乙酰胆碱酯酶具有非常高的特异性。人们认为这种 选择性与提取物的比较低的毒性有关系。另外，与被批准用于治疗阿 耳茨海默氏症的2种药物Cognex和E2020不同，石杉碱甲已经被证明 缺乏对存在于CNS中的受体如毒蕈碱受体M1和M2的结合，这种结合会 引起副作用。

石杉碱甲活性的持续时间(3小时)比Cognex(2小时)和毒扁 豆碱(30分钟)要长。在动物中进行的关于学习和记忆强化的行为研 究中，对记忆和学习来说有效的提取物剂量与非毒性效果剂量(来自 毒性研究)之间的差异是30-100倍。这些数据有力地暗示了石杉碱甲 能有效治疗阿耳茨海默氏症而只有最低限度的副作用。

铬盐(如吡啶甲酸盐、烟酸盐等)食物中的铬是人体必需的营养 物，其在人体营养方面的价值已经有定论。对铬的兴趣来自一种看 法，即因为铬是一种必需的微量矿物以及胰岛素的辅因子，所以，通 过对胰岛素作用的加强效果，它能在葡萄糖、脂类和氨基酸新陈代谢 中起作用。这种议论的支持依据是人们观察到铬缺乏结果是造成葡萄 糖耐量的损害、胰岛素抵抗、血葡萄糖升高和II型糖尿病的症候；另 外，适量的生理学活性的铬能减少人体中胰岛素的需求(Kaats等. 1996)。

国立科学院已经把铬分类作为微量矿物质，并推荐每天摄入50～ 200ug。不过，最可靠的研究报道：在美国人中(对其他的国家来说 也类似)，该摄入量是次佳剂量-仅仅是女子的最低需要量的40％， 男子的60％。25个以上的人体研究指出：补充铬对居家生活的人具有 有益的效果，包括改善葡萄糖、胰岛素和脂类水平，改善受损伤的葡 萄糖耐量；降低成年人已经升高的胆固醇水平；改善胰岛素和低血糖 患者的状况(Mertz，1992)。

为了增加铬的生物利用度，几个研究已经提议使用吡啶甲酸，它 是色氨酸自然代谢产生的派生物。吡啶甲酸看来能与微量金属离子在 肠和血液中结合，促进微量矿物质的收集和利用(Evens和 Bowman，1992)。

因为身体的脂肪沉积看来部分是由胰岛素进行调节，胰岛素利用 情况的改善应该导致脂肪沉积的减少。因为胰岛素指导氨基酸进入肌 肉细胞，所以，改善胰岛素的效果能对肌肉组织有确定的影响；一旦 氨基酸进入肌肉细胞，它们通过胰岛素对细胞遗传物质DNA和核糖核 酸的影响而组装成为蛋白质。铬的这种效果对本发明很重要，因为这 样可以降低某些氨基酸如缬氨酸和亮氨酸的竞争，从而使色氨酸的量 增加(Wurtman，1982)。胰岛素也使身体蛋白质的崩解或分解作用 变慢，并通过网络效果，增加可以用于建造组织的蛋白质的量。铬能 潜在性地促使无脂肪质(FFM)得以维持或增加。已经有人建议：如 果CrP能降低胰岛素耐受，它就能改善身体构成，因为胰岛素耐受或 缺乏导致通往肌肉细胞的葡萄糖和氨基酸的通道损伤，增加了肌肉蛋 白质的分解，以及增强了胰岛素缺乏所具有的加速脂类沉积(Kaates 等人，1996)的潜力。其他的文献显示：胰岛素耐受有利于肥胖患者 稳定身体脂肪，即处于肥胖水平上；起“调定点”作用，预防体重更 进一步的增加(Eckel，1992)。一般来说，尽管动物研究已经支持 了这个主张(Liarn等..1993)，一个人体研究发现了补充CrP在身 体组成上造成的确定的变化(Hasten等人，1992)；另一报告也是肯 定的，尽管从统计学角度看，身体的组成没有显著改变(Hallmark等 人，1993)；而第3个报告没能发现CrP补充作用在身体组成方面能够 产生任何确定的变化(Clancey等人，1994)。这些报告引起争论的 本质在于：绝大多数人体研究使用的受试对象样本量很小，并且，受 试对象经常随后就进入运动或者调节程序，从而增加了铬的需求量， 数量上超过了这些研究中所能提供的量。

先前的观察铬补充作用和运动训练的共同作用的工作被限制在对 身体重量和构成上效果的观察上，结果是互相矛盾的(Clancy等人， 1994；Evans等人，1989；Evans等人，1993；Hallmark等， 1996.Hasten等1992)。

铬的吡啶甲酸盐是使用、研究、和推广最多的铬化合物，但是， 体外研究工作建议烟酸铬可能在减轻体重和身体构成的变化方面是有 活力的。关于这一点，发明者非常近期的工作揭示烟酸盐可能比吡啶 甲酸盐更重要(Grant等..1997)。这里提出的这个数据作为烟酸铬 的有用性的例证，并在本专利申请的具体实施方案中被加入基本组合 物中。

药物组合物  本发明的水性组合物包含本发明公开的用于治疗 RDS有关障碍的有效量的各种化合物，这些障碍包括肥胖、ADHD、抽 动-秽语综合症、PMS、吸烟和在此中阐述的其它行为，这些化合物 溶解或分散在药学上可接受的载体或水介质中。短语“药学或药理学 上可接受的”是指这样的分子实体和成分，即当给动物或人适当给药 的时它不生产不利的、过敏性的或者其他不希望的反应。

在此使用的“药学上可接受的载体”包括任意一种和所有溶剂、 分散介质、包衣物、抗细菌及抗真菌剂、等渗剂或延迟吸收制剂等 等。这样的介质和试剂对药物活性物质的使用方法已经为本领域技术 人员所周知。除非与药物活性成分不相容，传统介质或试剂都可用于 治疗组合物中。补充性的活性成分也可以混合于药物组合物中。在给 人服用时，该制剂必须符合食品和药物管理局生物制剂标准中关于无 菌性、热原、一般安全性和纯化的标准。

生物学材料需要经过大面积透析以除掉不需要的小分子量分子， 和/或按需要进行冷冻干燥以随时准备配制在想要的载体中。活性化 合物一般被制成非肠道给药的剂型，例如通过经静脉内、肌肉内、皮 下、局部甚至腹腔内的注射途径给药。根据本发明的披露，含有活性 成分的水性组合物的制备已经为本领域技术人员众所周知。典型地， 这样的组合物可以被制成液体的溶液或悬浊液形式的注射剂；也可以 制备成在注射之前加入有关液体中制备溶液或悬浊液的合适的固体形 式；另外，制剂也可以是乳化液。

适合于注射使用的药物形式包括：无菌水溶液或分散体；包含 芝麻油、花生油或丙二醇水溶液的制剂；用于当场配制可注射无菌溶 液或分散体的无菌粉剂。在全部例子中，剂型必须无菌，必须是流体 以易于通过注射器针头。它必须在制造和储存条件之下保持稳定，必 须保存在避免类似细菌和真菌等微生物污染的条件下。

作为游离碱或药理学上可接受的盐形式的活性化合物，可以在水 中与表面活性剂例如羟丙基纤维素适当地混合在一起而制成溶液。另 外，也可以在甘油、液体聚乙二醇和它们的混合物和油中制备分散 体。在通常的储存和使用条件下，这些制剂中包括防腐剂以防止微生 物的成长。

本发明的用于治疗RDS相关障碍的化合物可以被制成中性形式或 盐形式的成分。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨 基基团形成)，与无机酸例如盐酸或磷酸，或者与有机酸如醋酸、草 酸、酒石酸、扁桃酸等等所形成的盐。另外，由游离羧基基团所形成 的盐也可以来自无机碱，例如：氢氧化钠、钾、铵、钙或氢氧化铁， 和有机碱如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等等。以肽治疗剂作 为活性成分，作为参考文献这里引用4,608,251；4,599,230； 4,596,792和4,578,770号美国专利，其技术都可以使用。

载体可以是一种溶剂或分散介质，包括例如水、乙醇、多元醇 (例如，甘油，丙二醇，和液体的聚乙二醇等等)以及它们的适当混 合物和植物油。适当的流动性用下列方法得以保持，例如通过使用包 衣物如卵磷脂；通过维持分散相中的颗粒的大小以及通过使用表面活 性剂。对微生物活动的预防可以使用各种抗细菌和抗真菌制剂，例如 对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等等。在很多情 况下，优选含有等渗制剂如糖或氯化钠。可注射组合物的吸收延迟作 用可通过在该组合物中使用延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶而产 生。

无菌可注射溶液的制备过程是：将活性化合物加入到所需量的适 当溶剂中，与上面列举的各种需要的成分混合，继而过滤杀菌。一般 来说，分散体的制备过程是，把各种经过杀菌处理的活性成分加入到 包含基本分散介质和上述列举的那些其他所需成分无菌载体中。对于 用来制备无菌可注射溶液的无菌粉末，优选的制备方法是真空干燥和 冷冻干燥技术，产生活性成分加来自上述过滤灭菌溶液的其它所需成 分的粉末。还预期制备用于直接注射的更浓的溶液，预想把DMSO作为 溶媒使用，可以造成极快的渗透，将高浓度的活性剂输送到一个较小 的区域。

至于药物的配制，溶液将以与剂型相符的形式给药，给药量在治 疗上应是有效的。药物被配制成各种剂型以便于给药：例如可以是上 面阐述的可注射的溶液形式，但也可以是药物释放胶囊等等。

至于水溶液的胃肠外给药方面，例如，溶液应该在必要的情况下 被适当缓冲，并且，稀释液首先要用充足的葡萄糖或生理盐水达到等 渗。这些特别的水溶液尤其适用于静脉内、肌肉内、皮下和腹腔内给 药。关于这一点，将要用到的无菌水介质根据本发明的公开对本领域 技术人员是众所周知的。例如：某个剂量的药物可以分散在1ml的等 渗的NaCI溶液中，或者被加入到1000ml的皮下注射用液体里，或者 在指定的注射部位被注射(参见“雷明顿药物科学”第15版，1035- 1038页和1570-1580页)。根据接受治疗的受试对象的条件，在给药 上会发生一些必要的变化。在任何情况下，负责治疗的人将决定个人 的合适剂量。

在此被阐述的活性成分可能被配制在治疗用的混合物中，含量 为大约0.0001～1.0毫克，或大约0.001～0.1毫克，或者约0.1～1.0 毫克甚至大约10毫克/剂量。另外，也可以服用多个剂量。

除了将化合物配制成用于胃肠外给药形式，如静脉内或肌肉内 注射的剂型以外，其他的药剂学可接受的形式包括：例如：口服给药 的片剂或其他的固体形式；脂质体形式；按时间释放的胶囊形式；以 及任何其它当前使用的形式，包括软膏形式。

另外，在本发明中，也可以使用经鼻吸入的溶液或喷雾剂、烟雾 剂或吸入剂。经鼻吸入的溶液通常是水溶液，是准备经鼻道滴入或喷 雾给药的。经鼻吸入的溶液被制备得在很多方面与鼻子的分泌相似， 这样，正常的纤毛活动得以维持。因而，经鼻吸入的水溶液通常是等 渗的，并且被轻度缓冲，以维持5.5～6.5的pH值。另外，如果需要的 话，类似于在眼制剂中使用的那些抗微生物的防腐剂、和适当的药物 稳定剂也包括在内。各种的商用的鼻制剂已经为人所知，包括例如抗 生素和用于预防哮喘的抗组胺药。

适于其他给药方式的其它剂型包括阴道栓剂和子宫托。另外，直 肠托或栓剂也可以被使用。栓剂是各种重量和形状的固体剂型，通常 加入药物后插入直肠、阴道或尿道。插入后，栓剂柔软起来、融化或 者溶解于腔内流体之中。一般来说，对于栓剂，传统性的粘合剂和载 体可以包括：例如聚亚烷基二醇或甘油三脂；这样的栓剂可以由含有 0.5％-10％的活性成分的混合物所形成，较好的是含有1％-2％的活性成 分。

口服制剂中包括常用的赋形剂，例如，药用级甘露醇，乳糖，淀 粉，硬脂酸镁，糖精钠，纤维素，碳酸镁等等。这些组合物采用溶 液，悬浊液，片剂，丸剂，胶囊，持续释放剂型，或者粉末的形式。 在某些特定的实施方案中，口服药物组合物将包含一种惰性的稀释剂 或者可吸收的食用性载体，或者，它们可被包在硬的或软的明胶胶囊 内，或者，它们可被压成片剂，或者，它们可被直接掺入到日常饮食 的食物之中。对口服治疗药物的给药，活性化合物可以与赋形剂整合 在一起，以可食用的片剂，口含片剂，锭剂，胶囊，酏剂，混悬液， 糖浆，糯米纸囊剂等形式被使用。这样的组合物和制剂应该包括至少 0.1％的活性化合物。当然，成分和制剂的百分比可以被改变，较方 便地是从单位重量的2％到大约75％，或者更合适的是在25-60％之 间。在这种有治疗组合物中的活性化合物的适当量应能获得适当的剂 量。

片剂、锭剂、丸剂、胶囊等可以包括以下成分：粘合剂如西黄蓍 胶、金合欢胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂如磷酸二钙；崩解剂如玉米 淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等等；润滑剂如硬脂酸镁；和甜味剂，象 蔗糖、乳糖或糖精；或者调味剂如薄荷、鹿蹄草油或樱桃调味香料， 它们都可以被加入。当剂量单位形式是胶囊的时候，它不但可以包括 上述类型的材料，还可以包括一种液相的载体。各种其他的材料也可 作为包衣物、或者为了改变剂量单位的物理形式而存在。例如：片 剂、丸剂或胶囊可被虫胶、糖或者这两者所包被。酏剂糖浆可以包括 活性化合物，并用蔗糖作为甜味剂，对羟基苯甲酸甲酯和丙酯作为防 腐剂，还包括染料和调味剂，如樱桃和橘子香料。

试剂盒  本发明的治疗试剂盒包含一种或多种用于治疗RDS和有关 行为的上述试剂或化合物。这样的试剂盒一般将在适当的容器中包 含：一种药学上可接受的配制形式或前述的任何一种药学上可接受的 配制形式。试剂盒可以有单一的容器(包装)，或者，它可以对每个化 合物有各自不同的容器(包装)。

当试剂盒的组份是以一种或多种液体溶液的形式被提供的时候， 液体溶液将是一种水溶液，尤其优选无菌水溶液。另外，用于RDS相 关障碍的治疗化合物(们)也可以被配制成为可注射的组合物。在这 种情况下，容器本身可能就是注射器、吸移管或类似器械，配制好的 成分可以通过它而应用到身体的某个部分，注入动物体内，或者和试 剂盒的其他的组成部分混合应用。

不过，试剂盒的组份也可以作为干粉而被提供。当试剂或成分作 为干粉被提供的时候，干粉可以通过加入适当的溶媒而重构。另外， 可以想象：溶媒也可以以另一种包装手段被提供。

下列实施例是为了证明本发明的优选实施方案而提供的。本领 域技术人员可以认识到在下列实施例中揭示的技术代表由发明者发现 的、在本发明的实践中运作良好的那些技术，并且可以认为这是该技 术实践的优选方式。不过，根据本发明的披露，本领域技术人员应该 认识到：在不脱离本发明的精神实质和范围的情况下，还可以对已经 被披露的具体实施方案进行许多改动依然获得类似或相近结果。

                       实施例1

    对家族性摄食过量患者加载氨基酸并抑制脑啡肽酶 介绍

本发明人认为RSD是对一种或多种神经递质缺乏所产生的反应。通 过药物-受体激活而试图减轻神经递质的失衡将仅仅是对报偿(奖赏) 缺乏的替代，并将只产生暂时的安宁感。出于这个考虑，本发明人已 经表明：通过服用前体氨基酸和脑啡肽酶抑制剂，使用神经营养物质 来修复脑化学物质缺乏，对于某些无法控制的摄食行为(如SUD)的 痊愈是有重要的促进作用的(Blum等，1988a；Blum等，1988b； Brown等，1990)。本发明人决定对加载前体氨基酸和抑制脑啡肽是否 会对门诊病人的体重减轻的维持有增强作用这个问题进行评估，期限 为两年。 方法：

受试对象的选择和程序：本研究的受试对象是在加利福尼亚州萨 格拉门托市的行为医学组诊所(Behavioral Medicine Group Clinic in Sacramento，California)进行一种极低卡路里补充禁食程序治 疗的247名门诊病人。受试对象们使用Optifast作为营养性禁食产 品，直到他们的体重减至与目标体重相差15％的范围内，或者直到患 者选择不再继续禁食时为止。本发明人认为：在内科医生的关照下开 出的其他饮食量食谱可以代替Optifast而同样有效。标准都市居 民人寿保险(Standard Metropolitan Life Insurance)身高/体重表 格被用来决定理想体重。所有受试对象在整个研究期间都服用核心维 生素(Centrum vitamins)。每个受试对象都在被充分告知后表示同意 参加研究，依据一个肥胖研究协议，本草案也得到“行为医学医生组 织临床学会审查委员会”和“位于圣安东尼奥的德克萨斯大学健康科 学中心学会审查委员会”的批准。

关于患者是否要服用PHENCALTMTM的决定在患者禁食结束后作出。 那些抱怨得到最高暴食得分的患者和那些主诉在抵御某些碳水化合 物，如糖果(甜食)、面包、柑橘、意大利面食等食物的诱惑时感到 最为困难的患者，以及那些在减体重方面或实际达到目标体重方面有 困难的患者，被认为是更难治疗的。抱怨最多的患者或不能控制进食 的患者被挑选出来服用PHENCALTM(研究组；N＝130)。如果维持治疗表 现得很容易，对这样的患者就不提供PHENCALTM(对照组；N＝117)。 对于被挑选出来的受试对象，PHENCALTM疗法于禁食的结束时开始并在 维持治疗期间持续进行，直到两年的研究的结束。PHENCALTM是一种氨 基酸和维生素的补充剂，也是特定的PHENCALTM的前身，由1899有限 责任公司(圣安东尼奥，德克萨斯)发展和生产，由Weider营养品集 团(盐湖城，犹他州)销售。挑选出的受试对象每天服用六个 PHENCATM胶囊，每个胶囊含有460毫克DL-苯丙氨酸、25毫克L-色氨 酸、25毫克L-谷氨酰、5毫克吡哆醛-5’-磷酸酯、33微克吡啶甲酸铬 和10毫克L-肉毒碱。

患者们在参加一个教育课程之前和之后要每周称量体重。每个患 者都要参加该课程的学习，由本计划的医学主管和一名注册营养师承 担教学，课程结构包括如下知识：关于肥胖病和它的社会流行，它的 潜在可能性的预防，它对个人健康和福利的影响，它的治疗，家庭的 责任，遗传性障碍的可能性，营养性补充剂的用法，合适的营养品在 饮食中的作用，高蛋白、低脂肪和极低或无碳水化合物饮食的概念， 运动的作用，等等。另外，每周还要对患者们的心理学状况和医学状 况进行监测。心理学状况的监测是按照患者对食物的成瘾性、情绪的 稳定性和暴食的程度分等级计分。食瘾量表上的5分表示完全无法控 制和即使感到不适也要进食。1分表示有内疚感的进食愿望，即他/她 知道自己是得到满足的，而且不应该在生理上对食物成瘾。情绪的稳 定性被用类似的计分方法记录，5分表示是情绪非常不稳定，而1分表 示最低限度的情绪不稳。暴食指标记录的是每周进食超过饱食点的次 数。实验室血液分析和尿样分析隔周进行，以提供有关医学信息。血 样分析检测的是血中的化学物质和SMAC-全血细胞计数，另一方面， 尿样分析主要是检测酮和/或葡萄糖。教育课程是每周进行一小时， 课程强调的是营养、运动、行为的变化和如何处理精神压力的原则， 以支持减轻体重和长时期维持治疗。

受试对象人口学特征：247名受试对象，84％为女人。全部受试对 象都是白种人，平均年龄是40岁。在进入本程序治疗时，受试对象平 均超重74％。

服用PHENCALTM的130名研究受试对象与117名对照受试对象在年 龄、理想体重、开始体重、超重百分比、食物成瘾性、情绪波动、暴 食或肥胖的家族史(见表20-B)方面没有显著差别。不过他们在化学 药物品依赖(CD+)的家族史方面则有区别。研究组里的受试对象中 的65％有化学药物品依赖(CD+)的家族史，而对照受试对象中则只 有30％。(p＜0.005)。因为只有那些抱怨更多或者在体重维持期 间的体重有些失去控制的受试对象才会被选入研究组，所以这些资料 暗示那些CD+的受试对象会有较多抱怨，而且在整个体重维持治疗期 间会表现得更为艰难。

                               表20-B

          受试对

          象序号  年龄(岁)  女性％  理想体重％  超重％  OB％  CD％

总数       247     39.8      84.2   130.2       74.3    68.1  52.3

分组人数

PhenCal组  130     38.9      83.8   129.1       74.4    64.5  65.4   非PhenCal组  117     40.7      84.6   131.4       74.3    71.8  39.3 受试对象特征：各数字代表平均值。％超重＝[开始时体重-理想体重]/ 理想体重；％OB＝报告有肥胖家族史组的百分比。％CD＝报告有化学药 物品依赖家族史组的百分比。PhencalTM是位于得克萨斯州圣安东尼 奥的1899责任有限公司和犹他州盐湖城的Weider营养品公司的产品。

性别差异。在本研究中，208个女人开始时平均超重76％，而39个 男人平均超重66％。标准都市居民人寿保险高度/体重表被用来决定 理想的体重。大约四分之三(73％)的女人是病态肥胖，(即至少超 重50％或更多)，与之相比，男人的病态肥胖人数比例约为一半(49 ％)。本计划中女人与男人人数的比例超过5比1。计划开始时进行的 面谈中，有超过90％的女人报告了渴求食物，另一方面，男人中有略 少于80％的人报告了这种渴望。在暴食方面，男人和女人之间也有相 当明显的差异。80％的女人报告了暴食，而在男人中仅有64％的人有 此种表现。

患者的家族史方面。在进入本计划时，每个受试对象都被询问了 有关化学药物品依赖和肥胖的家族史。略多于70％的女人和56％的男 人报告了具有肥胖家族史。在这些有肥胖家族史的病人中，有肥胖母 亲的人数(占73％)大约是有肥胖父亲的人数(占38％)的两倍，有 肥胖家族史的那些人中有11％的人报告其父母均肥胖。女人和男人中 几乎各有半数的人都报告有化学药物品依赖的家族史。不过在这种情 况下，主要是其父亲具有这一特征。有化学药物品依赖家族史的受试 对象中，整整有86％的人报告他们的父亲是化学药物品成瘾者，而只 有31％的人的母亲是化学药物品成瘾者。大约三分之二(63％)的病 态肥胖(至少超重50％)的受试对象报告说有肥胖的母亲，并且有60 ％的病态肥胖者报告他们的父亲是某种形式的化学药物品成瘾者。由 于男人仅仅占总人数的16％，所以任何有关家族史亚群的陈述最多 只能是初步的。 结果

体重减轻的维持。247受试对象在经过平均20.0星期的禁食后体重 平均减轻了68.4磅。研究组在禁食的最后，以及在开始服用 PHENCALTM之前与对照组有所不同，但是差异并不显著。研究组在禁 食结束时超重22％，对照组超重32％。如果不考虑这种差异，统计分 析证明禁食结束时的体重在2年内对减轻体重没有影响。在2年研究结 束时，服用PHENCALTM的受试对象平均超重23.5％，未服用 PHENCALTM的对照组平均超重52.8％，(p＜0.0001)[见图2]。2 年之后研究组里的受试对象仅恢复了他们失去的体重的14.7％，与之 相比，对照受试对象恢复了他们失去体重的41.7％(p＜0.0001)。

遗传上的影响：根据家族史来分组比较受试对象和对照人群 (OB+/CD+，OB+/CD-，OB-/CD+，和OB-/CD-组)，发现所有服用 PHENCALTM的受试对象在2年之后比任何对照亚组都更少超重(p＜ 0.0001)。就这个例子来说，OB不是指基因，而是指肥胖家族史。所 有有OB+家族史的患者组在2年之后都比有OB-家族史的患者组超重更 多(p＜0.05)。但有化学药物品依赖家族史的受试对象在对 PHENCALTM的良好应答方面与其他人没有统计学上的显著性差异。

遗传与性别：从整体上看，所有有家族史的男性组与女性组相 比，其体重的恢复程度都显著地轻(p＜0.0001)。在情况最好的组 (OB-/CD+)中，在两年的研究结束后，男人实际上完全没有恢复在 禁食期间减掉的体重。因为本研究中女人与男人人数的比例超过5比 1，并且，女人在几个特征方面和男人有所不同，发明者决定进一步 鉴定女人的特点。70％的女人报告了OB+的家族史，54％的女人报告 有CD+的家族史。仅仅12％的女人报告既没有CD-的家族史也没有OB- 的家族史。有OB+和CD+家族史的女人平均比OB-/CD-家族史的女人重 58％。而且，OB+/CD+的女人是超重最多的；超重位居其次的是 OB+/CD-的女人，随后是OB-/CD+的女人，最少的是OB-/CD-女人。类 似的情形出现在渴望食物、暴食、进食和情绪的稳定性计分上，据报 告OB+/CD+女人在食物成瘾、暴食和喜怒无常方面表现得最为突出。

对食物成瘾和暴食：患者的心理学状态和医学状况被跟踪监视。心 理学状态根据临床上对食物成瘾、情绪稳定性和暴食的等级划分量表 被定性地监测记录。食瘾记录上的5分表示完全无法控制和即使感到 不适也要进食。1分表示有内疚感的进食愿望，即他/她知道自己是已 经得到满足的，而且不应该在生理上对食物成瘾。情绪的稳定性被用 类似的计分方法记录，5分表示是情绪非常不稳定，而1分表示最低限 度的情绪不稳。暴食指标记录的是每周进食超过饱食点的次数。患者 对这个实验性的食物疗法的依从性是通过询问来进行评估的。

在研究结束时，服用PHENCALTM的受试对象与对照组相比较，前者 的食瘾减低至三分之一(至少p＜0.0001)。在对照人群中，食瘾完 全没有减少。与不服用PHENCALTM的对照人群相比，暴食事件的次数 在服用PNENCALTM的受试对象中是明显地减少了。在本研究开始时， 受试对象每周报告10.9次暴食事件，而在本研究结束时，受试对象每 周仅报告2.9次暴食事件。与此相比，在本研究的开始时，未服用 PHENCALTM的对照组每周报告8.3次暴食事件，在本研究结束时，对照 组同样每周报告8.3次暴食事件，这表明没有发生显著变化。2年之 后，在对食物的成瘾性和暴食事件方面，服用PHENCALTM组与对照组 相比，前者减少至三分之一。

多元回归和方差分析  逐步多元回归被用来检验在治疗程序的开始 以后的两年来体重回增百分比的预示变量的显著性。该预示变量被分 为阴性(0)或阳性(1)，从而显示患者是否是病态肥胖，是否在经 受暴食和食瘾之苦，是否有化学药物品依赖的家族史，是否有肥胖的 家族史，是否是女性，是否服用PHENCALTM。逐步选择程序(SPSS， 版本6.13(SPSS公司，芝加哥，伊利诺斯州)选择使用过PHENCALTM 治疗、女性、病态肥胖和肥胖家族史作为2年之后体重增加的显著性 预示变量。暴食行为、成瘾行为和化学药物品依赖的家族史不是是统 计学上显著性的预示变量。选择出的预示变量的整体模型是显著性的 (p＜0.0001)，由这些预示变量解释了两年内体重增加变异度的 39.8％。在这个预示变量组中最有影响力的预示变量是PHENCALTM，接 着是病态肥胖、女性和肥胖家族史(见表20-C)。进一步的分析比较 了在服用PHENCALTM组与对照核心组之间在2年实验期间前后的暴食得 分。还应用了一种双因素方差分析方法，一个因素是PHENCALTM治疗 的组间因素，另一个是关于在2年的治疗期前后的暴食得分之间的重 复测度因素，分析发现其间有显著的的相互作用(p＜0.001)。也使 用了成对t-检验分别对服用PHENCALTM组和对照组的暴食得分的变化 进行了检查。从统计学角度看，对照组没有可检测出的变化。而服用 PHENCALTM组在暴食得分上则有明显的降低。

                   表20-C

变量          斜率(B)    B的标准误    β权数    T        P

病态肥胖      0.111      0.050        0.130     2.4      0.180

暴食得分      0.023      0.003        0.420     7.70   ＜0.001 使用PhenCal(是)   0.327      0.003        0.426    -7.80   ＜0.001

  (常数)      0.151      0.045                  3.34   ＜0.001 讨论

在这里展示的2年期开放试验研究的研究数据表明：神经营养物 质PHENCALTM可以在已知的碳水化合物暴食者中抑制异常的进食行 为，并防止恢复已经减轻的体重。发明者认为PHENCALTM的明显有益 的效果可以被解释为是前体氨基酸和脑啡肽酶抑制作用共同作用于中 央边缘系统的报偿回路的结果。发明者此时还不能为这种神经营养物 质混合物的作用提供一个准确的机制，也不能准确指出哪一种成分或 成分的组合能本发明者的研究中最有效地抑制对碳水化合物的暴食行 为。

神经递质5-HT、DA、NE和脑啡肽已经被证明可以减少甜食的摄入 (Leibowitz，1985；Leibowitz等，1982；Kaye等，1984； Riviere等，1987；Blum等，1990)。因而，PHENCALTM被特别设计 为通过加载前体氨基酸，包括1-色氨酸(5-HT前体)、1-苯丙氨酸 (DA和NE前体)，从而增加这些食物中的抑制性神经递质，以及增加 脑啡肽酶抑制剂d-苯丙氨酸，以使脑啡肽升高(Blum等，1986)。在 这些研究中观察到的PHENCALTM效果的一个可肯定的机制包括对某些 不足的单胺如5-MT、NE、EPI的恢复作用和对神经肽甲硫氨酸-脑啡 肽和CCK-8的恢复作用。所有这些被认为是受到葡萄糖或遗传学的影 响的进食(碳水化合物)性物质(Frohman，1983；Fullerton等， 1985；Matsumura等，1984)。

与有相同家族史的男人相比较，PHENCALTM对有OB+和CD+家族史 的女人可以诱发最好的效果，这一点很值得注目。这种差异也许与最 近Comings等(1996b)的发现有关系，他们注意到：仅在女性中，人 类肥胖病(OB)的遗传变体和人类多巴胺D2(DRD2)基因的遗传变体 占身体质量指数(BMI)变异的高达22.8％。在肥胖病人中的OB和 DRD2基因之间的相互作用，可能涉及瘦素与OB受体的结合，这种结合 激活了一种中间神经递质或神经肽，从而对行为以及食欲和新陈代谢 产生影响。关于这一点已经知道Ob/ob老鼠在弓形漏斗中也表现出多 巴胺水平的明显减少(Oltmans，1983)。根据这项工作，发明者认 为：如同以前被提到的那样，葡萄糖结合与其他的化学药物品依赖 (例如：可卡因，酒精，海洛因)是相似的。

在2年时间里，服用PHENCALTM的氨基酸摄入组与未摄入PHENCALTM 的核心维生素组相比，显示出：1)前者组中不论男人和女人，其超 重百分比都减少两倍；2)女人的成瘾性减少70％，而男人成瘾性减 少63％；3)女人的暴食行为减少66％，而男人暴食行为减少41％；

                       实施例2

    VNTR等位基因与抽动-秽语综合症和药物滥用的关联

抽动-秽语综合征是神经精神性障碍的综合征，其特征是慢性的 运动和发音抽动，以及范围广泛的某些相关行为，包括酒精和药物的 滥用、抑郁和强迫、注意缺陷多动障碍、品行、睡眠、学习、性和焦 虑障碍(Comings，1987c；Comings，1990，Comings和Comings 1993；Comings 1995d)。抽动-秽语综合征通常被假定是作为一种 常染色体显性遗传性状即Gts而遗传下来(Comings等，1984，Pauls 和Leckman，1986)，连锁研究实际上已经排查了整个基因组，但没 有发现Gts基因的存在(Fog，1985；Tsui，1994)。然而，最近已经 证明在品行和违抗障碍患者中的Gts和ADHD基因的遗传负荷有非常显 著的增加(Comings，1995a)。一项关于抽动-秽语综合症的遗传学 家系研究显示：这种病症可能涉及多个基因，除非一生中罹患这种病 症的危险低于千分之十二(Comings等，1984)。学龄男孩中发生抽 动-秽语综合征的频率占全部抽动-秽语综合征的九十分之一，可能 的抽动-秽语综合征占四十分之一(Comings等，1990)。类似的结 果在其他的研究中也能见到(Kurlan等.1994)，而以色列士兵中抽 动-秽语综合征或慢性抽动症的频率被确定为2.6％(Zohar 等，1992)。在更近的家系研究中发现：当与抽动-秽语综合征相关 的全部行为谱(Comings，1990，Comings，1995d)都被包括在研究 范围内的时候，很多家庭提供的证据显示这些基因是自父母双方遗传 的，这支持抽动-秽语综合征是多基因障碍(Comings，1990； Comings，Comings，1993；Comings，1994b；Comings，1995b； Kurlan等，1994)。

考虑到抽动-秽语综合征相关障碍的宽范围以及Gts基因是自父 母双方遗传的证据(Kurlan等，1994；Comings，1990)，这提示抽 动-秽语综合征是一种多基因疾病，并且这些基因(MAOACX，DBH， DRD2，DATI等等)涉及到多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素和其他的 神经递质的代谢，每个基因提供的变异仅仅占总变异的1％到10％ (Comings，1996b；Comings，1995a；Comings，1995b； Comings，1996a)。 方法

组I：抽动-秽语综合征组。

研究对象中包括了57名对照者，229名抽动-秽语综合征先证 者，后者中的大多数人都患有多种有关的行为障碍(Comings 1990)，以及90个患病和未患病的抽动-秽语综合征先证者的家属。 全部受试对象都是非西班牙系的白种人。平均年龄、诊断分型(抽动 -秽语综合征或慢性运动抽动)和研究对象的其他的方面特征已经在 别处被描述过(Comings等，1996a)。

行为得分。每个抽动-秽语综合征对照者、先证者、或家属都被要 求填写一张基于诊断会面程序表(Robins等，1981)或DSM-III-R (1987)标准的调查问卷。这提供了一个对宽泛范围内的精神病学症 状的框架性回顾。这些症状被分成27个不同的行为组别，包括ADHD、 物质滥用、心境、焦虑、学校表现、口吃、抽动以及其他类。关于如 何给这些行为计分的问题已经在其他文章中被详细描述过了 (Comings 1995a；Comings 1994a；Comings 1994b：Comings 1995b；Comings等，1996a：Robins等，1981：Comings 1995 c)。两种行为计分方法被用来对ADHD进行评估。第一种叫做ADHD， 它是依据DSM-III和DSM-III-R标准的一个系列22种ADHD变量中最少一 半的变量是否存在来进行评估的。第二种叫做ADHD-R，它是根据DSM- III-R诊断标准进行评估的。三种以前未使用的QTV是无注意力、冲动 和活动过度。它们是三种可以通过累积而产生ADHD计分的小分。QTV 缩写包括：品行障碍(CD)，违抗障碍(ODD)(Comings 1995a)和 重性抑郁发作(MDE)(1995 c Comings)症状。

核查共发病行为的理由是：以前曾经观察到某些基因可能与抽 动-秽语综合征中存在的某些特定的病态行为的关系更为密切，而不 是与诊断本身更为密切(Comings等.1996a)。这份调查问卷并不意 味着提供DSM-III-R或DSM-IV诊断，而是提供一产生不同行为领域的 QTV的非常结构化的方法。连续性状的优点是它们可以对病情的严重 性提供更宽的诊断范围，而不是进行非此即彼的诊断。其他一些同行 (Gadow和Sprafkin，1994；Grayson和Carlson 1991)已经把这 样的问卷的使用情况与用于面谈治疗的同样结构化的问卷的使用情况 进行了比较，证明了这份以对症状评价的途径为基础的问卷的准确 性、实用性和敏感性。对好几百名使用过这份调查问卷的受试对象的 回顾已经显示出它们正确地反映了以往要通过个人面谈才能得到的信 息。

组II：物质滥用组。

患者群由120个非西班牙系的白种男人构成。

评估。全部受试对象都用“密歇根酒精中毒严重性试验”(Davis 等1987)(一个24项目的自我管理调查问卷，经过修订后包括了药 物物滥用(MAST-R))、由临床医生管理的“诊断面谈程序(DSM- III-R版本)(Robins等，1981)”(用于物质依赖性障碍是否存在 的诊断)，和由临床医生管理的“成瘾严重性指数第5版(Hodgins， 和Guebaly，1992)(ASI)”(用于酒精和药物物使用变量的评估) 进行了评估。

本发明人利用了ASI的“药物物/酒精滥用”和“合法地位”部 分。对特定的物质的使用进行了评估，询问了有关下列物质的终生 (多年来)使用情况的问题，如：达到醉酒的酒精使用，海洛因、其 他鸦片药物/止痛剂、巴比妥酸、其他镇静/安眠/镇定剂、可卡因、 安非他明、大麻、迷幻剂和吸入剂的使用。对上述每种物质，相关时 受试对象要被问到有关服用途径的问题。可选择的途径有口服、经 鼻、吸入烟雾和静脉注射。#静脉注射用药的连续变量是通过把经静 脉注射(IV)的不同药物的全部数字累加起来而加以计算的。静脉注 射用药的变量是一种二分变量，0代表没有用过静脉注射药物，使用 过一种或一种以上静脉注射用药物则记为≤1。受试者被问到的与药 物有关的问题包括：“你有过多少次酒精性DT？过量用药呢？” “在过去的30天你有多少天遇到了酒精问题？药物问题呢？”“你在 过去的30天1里在酒精上花了多少钱？在药物上呢？”另外，关于药 物和酒精滥用的各种法律方面的问题也被问到了：“在你的一生中有 多少次被指控为酒后驾车？”“在你的一生中有多少次因为药物指控 而被逮捕和被起诉？“这些指控最终有多少次被定罪？”。当回答可 能用从0到任何数字表示时，“0”就被计为“0”分，任何别的数字 被计为“1”分。那些与酒精使用有关的问题被合计起来计算总的酒 精得分，而那些与药物使用有关的问题被合计起来计算总的药物得 分。面谈者根据对问题的严重性的评估来判定患者是否需要对酒精和 /或药物滥用进行治疗，评定范围从0(不需要治疗)到9(需要治疗 以处理危及生命的情境)。

物质滥用对照组。物质滥用组的对照者是独立于抽动-秽语综合征 患者的对照的。他们由两个小组组成。第一组是来自位于圣贝纳迪诺 的加利福尼亚州立大学的45名年龄较大的男性非西班牙系的白种学生 (平均年龄30.1岁)。那些有显著物质滥用问题的人基于MAST-R试验 被排除。第二组由来自明尼苏达的孪生子家庭研究项目的孪生子的父 亲组成。因为这些人仅仅是根据他们有11岁或17岁的孪生子这个共同 点而被从全州人口中查明确定下来的，他们与大学生相比，更能代表 全部的社会经济群体和教育群体的一种随机的组合。尽管全部对照者 在物质滥用变量上的计分都是阴性，但因为物质滥用评估的结果对孪 生子(父亲)对照者并不可用，某些人的计分实际上可能是阳性。不 过，因为这是一个农业占主导地位的州的随机交叉区域，所以发明者 假定这个组中假阴性数字很小。

PCRTM多态性。实验中利用了MAOA VNTR多态性(Hinds等，1992)。 这种复杂的多态性由一种直接相邻于一种不完整双链新23-bp VNTR基 序的GT微卫星所构成，其等位基因在二核苷酸重复和VNTR重复的数 字上不同。用标准程序从全血中提取DNA。目的DNA经PCRTM扩增 (Mullis等，1986)。为了标记PCRTM产物，在反应中使用了荧光HEX 或FAM Amidite(应用生物系统公司，福斯特城，加利福尼亚州)标 记的每种引物各0.1uM(见表20-D)。2ul经10倍稀释的PCRTM产物 被加入到2.5ul的去离子化甲酰胺和0.5ul标准ROX 500(应用生物 系统公司，福斯特城，加利福尼亚州)中，在92℃变性2分钟，加载 于应用生物系统373型DNA测序仪中的6％聚丙烯酰胺凝胶上。凝胶在 1100伏电压和恒定功率30W的条件下电泳5小时。凝胶经激光扫描，用 内部的ROX 500标准进行分析。根据由碱基对长度决定的彩色片段， 用Genotyper(版本1.1)(应用生物系统公司)识别峰值。从每个凝 胶文件中得到的每个样品的完整信息都被打印出来，并且汇编的数据 也被提交分析。

等位基因组。为了核查MAOA等位基因的长度可能和表型的效果相 关的假说，等位基因被分成了4组(见结果)。它们被标记为1到4， 即从最短到最长，形成了MAOA基因型变量。仅仅在抽动-秽语综合征 组中才有女性参与。只有那些给定等位基因组的纯合子才被包括在分 析内。

统计分析。对于抽动-秽语综合症组，方差分析被用来检验每个 QTV对4个不同的等位基因组的相关程度。线性方差分析用于检查4个 等位基因组之间的显著性累进平均增加量。使用了SPSS(SPSS公司， 芝加哥，伊利诺斯州)的统计软件包。对于线性方差分析，子命令多 项式被设为1。多元方差分析被用来确定当全部变量都同时被核查的 时候，任何一个QTV是否有显著意义。多元线形回归分析被用来作为 第二途径，确定当全部变量都同时被核查的时候，任何一个QTV是否 有显著意义。MAOA基因型被设置为从属变量，27个QTV是作为独立的 变量被逐步输入的。

卡方。上述的研究显示：最长等位基因组对大多数QTV的来说有最 高的均数。在抽动-秽语综合征的4组之间，比较了≤335bp等位基因 组频度的潜在累进性减少量，这4个组的症状逐步减少：ADMD的抽动 -秽语综合征先证者，没有ADHD的抽动-秽语综合征先证者，有抽动 -秽语综合征的亲属和没有抽动-秽语综合征的亲属。

多元方差分析。对物质滥用组，多元方差分析被用来确定在4个 MAOA等位基因组与2个概括变量之间是否存在显著的关联，这两个变 量是酒精和药物得分。方差分析被用来检验4等位基因组的酒精和药 物得分的均数。

线性卡方检验。线性卡方检验被用来检验在3组之间≤335bp组频 度的潜在累进增加量。这三组是：对照组，无行为的(无ATU)物质 滥用者组，和有行为(有ATU)的物质滥用者组。无ATU组之所以被包 括在内是为了排除一种可能性：即由于某个不同行为的共同发病，这 个等位基因组在物质滥用者中的频度可能会增加。为了有助于排除这 个因素，这个等位基因组中的具有某种行为的物质滥用者中的频度至 少要比在没有这种行为的物质滥用者高20％。由于已经假定：在这3 组中这些等位基因的频率将逐渐地增加，故而使用线性卡方检验统计 方法。

回归分析。为了确定能用MAOA基因加以说明的、与药物有关的变 量的方差的最大百分比，本发明人运用了回归分析方法，其中那些携 带≤335bp等位基因的受试对象被计为1分，那些携带≤335bp等位基 因的受试对象被计为2分。因为这是与MAOA基因联系最紧密的卡方变 量，它就被作为药物依赖变量(对照＝1，无ATU行为者计为2，有 ATU行为者计为3)。 结果

等位基因组。两个组的等位基因的分布用图3表示。因为这是复杂 的VNTR，等位基因没有落入奇数或偶数碱基对的一个清晰的模型中。 结果是由基因分型(Genotyper)程序产生的形式。在bp 316和323 bp之间没有等位基因，这样产生了＜320和＞320bp的2个清楚的主组。 不过为了允许对表型的效果可能与碱基长度有关的假说进行检查，较 大的323-339bp组等位基因被分为三个亚组，分别是：短于主峰的 320-333的等位基因亚组，334bp的主峰等位基因亚组，长于主峰的 ≤335bp等位基因亚组。抽动-秽语综合征组里有219个男人和156个 女人，合计有375名受试对象。在女人中，88人是异合子。当她们被 扣除掉以后，本研究中剩下了287受试对象，其中36名是对照者。在 这个最终的组中，在4个等位基因组的频率分布上，女人与男人没有 显著的差异。

抽动-秽语综合征组。4个等位基因组的每个QTV的方差分析结果 如表20-D所示。常规方差分析结果在F-比和p值下面显示。线性方差 分析的F-比率在F2列下面显示，上标1表示这些值是有＜0.05的显著 性的。在F2列中，QTV根据递减的F-比率有规律地排列起来。由α值 设定为≤0.05的Tukey试验确定的，均数显著低于≤335bp组的那些 等位基因组用星号表示。对于除了口吃、购物和惊恐(被给予最低的 F-比率)之外剩下的24个QTVs说，那些携带≤335等位基因的受试对 象的均数是最高的。

统计分析。全部27个QTV的多元方差分析的结果对性别 (p＝0.012)、学习问题(p＝0.023、赌博(p＝0.025)和躁狂 (p＝0.025)来说都有显著性。全部27个QTV都同时用逐步多元回归分 析进行了检查，变量小学问题(p＝0.012)和赌博(p＝0.038)是 具有显著性的。根据r2值，MAOA基因仅仅说明了这些QTV变异的3.9 ％。使用卡方分析可以发现：携带有≤335等位基因的受试对象的百 分比有显著的累进性减少，即从有ADHD的抽动-秽语综合征先证者 (24％，n＝125)；到没有ADHD的抽动-秽语综合征的先证者 (20.0％，n＝50)；到有抽动-秽语综合征的先证者家属(12.5 ％，n＝16)；到无抽动-秽语综合征的先证者家属(5.6％，n＝56) (p＝0.003)。

物质滥用组。对照者比照ATU受试对象。对于160名合并的对照 者，4个等位基因组的分布如下：＜320-34.4％，320-333- 38.1％，334-335-21.3％，≤335-6.3％。对于120名ATU受试对 象，频率如下：＜320-39.2％，320-333-18.3％，334- 20.8％，≤335 -21.7％。存在显著性差异，x2＝22.17，p＝0.00006；≤335 bp组的频率与两个对照组有可比性，San Bemardino组是8.9％，孪生 子的父母组是5.2％(x2＝0.744，p＝0.38)。

多元方差分析。酒精和药物得分的多元方差分析指出：当这两者都 与MAOA基因和VNTR(变数串联重复)有显著性关联的时候，与酒精得 分相比(p＝0.012)，药物得分的显著性更大(p＝0.001)(表 21)。另外，合并的多元方差分析的结果也是显著的(p＝0.007)。 257人这个数字(N)比160名对照者+120名ATU行为者的合计或280人 的数目小，因为仅仅97名有ATU行为的受试对象完成了ASI。相反，所 有120名有ATU行为的人都为酒精和/或药物依赖的DSM诊断的确认完 成了DIS。

方差分析。显示每个等位基因组均数的两项计分的方差分析都用表 22表示。至于抽动-秽语综合征组，最高的均数存在于≤335bp等位 基因组中。对于药物得分来说，根据Tukey试验，3个其他的等位基因 组明显比≤335bp组低。

卡方：为了确定MAO基因是否与某种类型的物质滥用有优势关联， 对14个与这种物质的使用有关的变量进行了核查。对照者中的≤335 bp等位基因组的频率与无行为的ATU(无ATU行为)受试对象中的频率 和有行为的ATU(有ATU行为)受试对象的频率的对比用表23表示。由 于有14类物质滥用变量被核查，只有那些用Bonferroni校正法得出p 值小于0.0036(0.05/14)的变量被认为是显著的。这里只显示那些 p＜0.01的变量。仅有酒精依赖是个例外。展示的资料说明了这样的事 实，即：仅仅在与那些药物依赖的受试对象或酒精与药物双重依赖的 受试对象相比时，在酒精依赖的受试对象中的≤335bp等位基因在频度 上才几乎没有增加。相反，仅仅药物依赖一个变量给出了最高值(x2 ＝17.4，p＝0.00003)。

回归分析。等位基因组(＜335对≤335)对药物依赖诊断的回归分 析结果给出了下列结果：r＝0.25，r2＝0.0625，T＝4.305，p＜ 0.0001。

物质滥用。使用酶水平(Wiberg等，1977；Gottfries等， 1975；Devor等，1994；Vonknorring等，1991)和遗传变体 (Vanyukov等，1993)的先前研究暗示了MAOA基因在物质滥用中的作 用。现在的结果与那些结论一致，尤其是对药物依赖而言更是如此。 多元方差分析显示了MAOA等位基因与酒精和药物得分之间的显著关 联，有许多由这两种形式的物质滥用引起的共发病。如表23所示，当 药物依赖和酒精依赖分开地被检查时，药物依赖与等位基因的关联比 酒精依赖的关联要大得多。

男性优势。ADHD、抽动-秽语综合症、品行障碍、违抗障碍、诵 读困难、学习障碍、口吃、药物依赖和酒精中毒，所有这些都显示出 男性优势。男性优势可能要部分归罪于激素和环境的因素，另外，X 连锁基因可能也是一个因素。在抽动-秽语综合征组，作为回归系 数，对r2的判定显示出：对不同的QTV，MAOA基因最多能够说明任何 一个QTV变异的2.5％或更少，这表明X连锁的MAOA基因不能说明与抽 动-秽语综合征、ADHD或有关障碍有关的男性优势。相反，药物依赖 的诊断与≤335bp等位基因的存在与否是否有关联的r2值显示：最高 可达6.2％的变异可能是由MAOA基因引起的。它能在药物依赖的男性 优势中起到了一定的作用。

更长的小卫星等位基因与抽动-秽语综合症组里的特定的QTV的 关联小，如表21所示，在全部QTV间的趋势上有令人注目的均一性程 度。因为这可能是一种偶然的、随机的关联，发明者试图确定这些结 果是否能在另一个完全独立的受试对象和对照者组中得以重复。这个 组(物质滥用组)的资料显示出：与在抽动-秽语综合征组中观察到 的情况相比，更长的MAOA VNTR等位基因，尤其是≤335bp的等位基 因，与物质滥用之间存在着更紧密的关联。这两组的模式引人注目地 相似，≤335bp等位基因都获得了最高得分，最小的等位基因 (＜320)获得次高的得分给予，334-335bp等位基因获得了中间分。 这种重复等位基因的大小与表型的相互关联与小卫星等位基因自身在 MAO基因的调节中起一定作用的可能性是一致的。

                                       表20-D

         MAOA VNTR多态性：对不同的等位基因组由方差分析进行的不同行为得分的比较

                              由碱基对长度划分的等位基因组 行为      ＜320           320-333              334           ≤335        F-比    p        F2 N               82              43             110              52 躁狂      1.43*    1.8   1.36*   1.9   1.59*  2.27   2.59      2.8    3.59    0.014    6.391 OCD       2.18      2.8   2.18     2.4   2.80     2.8    3.31      3.2    2.16    0.093    5.891 性        0.62*    1.1   0.47*   0.9   0.66*  1.2    1.25      1.6    3.91    0.009    5.821 睡眠      0.36      0.7   0.38     0.8   0.49     0.9    0.76      1.1    2.31    0.075    5.561 小学      2.60      1.7   2.90     2.0   2.98     2.1    3.46      2.1    1.89    0.131    5.141 赌博      0.13*    0.9   0.27     0.8   0.22     0.8    0.61      1.6    2.49    0.060    4.821 口吃      0.13      0.3   0.11     0.3   0.25     0.4    0.23      0.4    2.23    0.084    4.411 学习      0.52*    0.9   0.65     1.0   0.54*   0.9   1.00      1.1    3.32    0.020    4.371 无注意力  6.69      5.2   7.37     4.9   7.67     4.7    8.48      5.3    1.42    0.235    4.151 ADHD      19.43     14.9  20.95    13.5  21.18    13.9   24.80     15.3   1.53    0.206    3.741 ADDR      4.63      4.9   4.84     4.6   5.18     4.7    6.42      5.2    1.57    0.196    3.741 冲动      5.74      4.9   6.30     4.8   6.49     4.7    7.46      5.0    1.35    0.257    3.681 购物      0.58      1.3   1.00     2.2   1.32     2.8    1.09      2.4    1.61    0.186    3.231

                       由bp表示的大小划分的等位基因组 行为        ＜320          320-333              334         ≤335        F-比  p        F2 N                82             43              110            52 MDE         3.00    2.8    3.29     3.1    3.45    3.1    3.92    3.1    1.01  0.385    2.90 CD          2.78    2.4    2.90     2.1    2.97    2.2    3.54    2.6    1.15  0.328    2.54 多动        6.91    5.6    7.27     5.2    7.00    5.4    8.86    5.9    1.59  0.190    2.29 恐怖        2.00    2.7    2.15     3.0    2.45    2.7    2.65    3.3    0.71  0.548    2.10 分裂样      1.31    2.3    0.68*   1.3    1.34    2.2    1.84    2.3    2.26  0.081    1.92 广泛性焦虑  0.21    0.4    0.18     0.3    0.28    0.4    0.29    0.4    0.85  0.463    1.60 躯体化      2.13    3.0    1.58     2.4    2.17    3.0    2.90    3.7    1.16  0.325    1.34 药物        0.36    1.2    0.45     1.6    0.40    1.3    0.75    2.0    0.81  0.489    1.28 阅读        1.86    1.9    1.36     1.8    1.78    2.1    2.34    2.5    1.75  0.156    1.27 ODD         3.07    3.3    3.02     2.7    3.16    3.1    3.73    3.4    0.57  0.633    1.02 抽动        2.81    3.7    3.04     3.4    2.84    3.5    3.57    4.1    0.55  0.642    0.73 酒精        0.51    2.3    0.81     2.9    0.31    1.8    1.11    3.2    1.41  0.241    0.45 惊恐        2.91    2.0    3.09     2.1    3.18    2.2    2.98    2.2    0.27  0.845    0.20 吸烟        0.07    0.3    0.11     0.3    0.05    0.2    0.77    0.3    0.53  0.662    0.10 1显著性，＜0.05，F2＝线性方差分析的F-比 *显著小于≥335，α＝0.05(Tukey检验) (给出均数和标准误) (n＝287)

                        表21 物质滥用组的酒精和药物得分对MAOA等位基因组的多元方差分析

                   (N＝257名男性)

   变量                F-比             P

   酒精得分            3.72             .012

   药物得分            5.85             .001

   总数(Wilks)         2.99             .007

                              表22

      物质滥用组酒精和药物得分对MAOA等位基因组的方差分析 等位基因组      N      均数     标准差    F-比    p 酒精得分 ＜320           94     2.27     3.1 320-333         81     1.49*    3.0 334-335         56     1.94     2.7 ≤335           26     3.73     3.52      3.72    0.012 药物得分 ＜320           94     3.59*    5.2 320-333         81     1.94*    3.8 334-335         56     3.34*    4.9 ≤335           26     6.42     6.2       5.85    0.0007

*显著低于≥335等位基因组均数，Tukey检验中α＝0.05。

                       表23

对照组对无行为的ATU受试对象对有行为的ATU受试对象中

  携带≤335bp等位基因的受试对象人数线性卡方分析

                        对照      无ATU         有ATU

行为        N      ％     N     ％     N     ％      卡方    P 仅有药物依赖    160    6.3    58    15.5   62    27.4    17.4    .00003 静脉注射药物    160    6.3    56    14.3   27    29.6    13.65   .00022   的使用   超剂量        160    6.3    71    12.7   25    28.0    11.00   .0009 巴比妥酸盐      160    6.3    61    13.1   32    25.0    10.56   .0011   的使用

DUI         160    6.3    34    8.8    62    21.0    9.92    .0016 安非他明的使用  160    6.3    19    5.3    77    19.5    9.37    .0022 OSH*的使用      160    6.3    67    14.9   26    23.1    8.96    .0027 可卡因的使用    160    6.3    25    12.0   67    19.4    8.86    .003 大麻的使用      160    6.3    14    7.1    82    18.3    8.35    .004 海洛因的使用    160    6.3    68    14.7   28    21.4    8.05    .004 阿片样物质      160    6.3    58    15.5   38    18.4    6.88    .009   的使用 仅有酒精依赖    160    6.3    98    24.5   22    9.1     非线性

       *OSH＝其他鸦片剂(除海洛因或美沙酮外)，镇静剂和催眠 剂 实施例3 多巴胺D2受体多态性与分裂样/回避障碍行为的关联

受试对象的选择和试验管理。征募到白种自愿者。有58个男人和 71个女人，平均年龄分别是40.9±1.8岁和47.1+1.5岁(平均值±标准 差)。事先都进行了“米龙氏临床多向性调查”第二版(MCMI-II) 的计算机化试验的检查，自愿者经静脉穿刺献出15毫升血。值得 注意的是：由于考虑到种族和人种分层，血是从非西班牙系的北欧和 西欧的白种人身上采集的，也有一些例外，因为关于对照者的最广泛 的数据是来自于这个组。为了进行本研究，总共129名有或没有共发 的药物或酒精滥用的精神疾病患者被挑选出来，进行基因分型，并用 米龙氏临床多向性调查(MCMI-II)计算机化试验进行评估。本组由 以下成员构成：精神抑郁者(22.1％)，广泛性焦虑障碍者(8.4 ％)，单相障碍者(24.5％)，双相障碍者(12.9％)，精神分裂症 患者(5.2％)，注意力缺乏障碍者(21.9％)和物质滥用障碍者 (18.1％)。

米龙氏临床多向性调查(MCMI-II)被用来在每个受试对象中评估 11项已知的人格障碍，包括分裂样/回避障碍群。这项试验包括175个 项目，并且大部分人能用20～30分钟的时间完成它。源于人格和精神 病理学理论构建了22个临床量表作为症状的可操作性测量尺度。这些 临床定向量表是与官方的诊断系统和它的综合征分类(DSM-IV)直接 配合的。根据DSM-IV模型构建了另外的量表，以区别急性临床障碍 (Axis I)和患者的更持久的人格特点(Axis II)。保险统计的基 础估价数据，而不是经过分析的标准得分转换资料，被用用于量表项 目的计算和定量。基础估价为60就暗示着存在某种障碍。在75和83之 间就表示有某种慢性的或者一定严重程度的障碍，而超过或者达到84 就表示存在无法控制的病理性障碍。在本研究中，发明者选择通过在 受试对象中使用米龙氏分裂样/回避障碍群来确定研究组，在这特别 的群体达到84或更高的基础估价的百分法分级。发明者根据受试对象 的MCMI-II得分把他们分类，根据下列分类法，按基础估价值不同把 先证者分成4个小组：(1)得分在60以下；(2)得分从最低等于60 到最高等于73；(3)得分从最低等于74到最高等于83；和(4)得 分最低等于84到最高等于100。全体受试对象的人口统计学资料如表 24所示。

                       表24

      用于实施例3中的精神病群体的诊断特征

        诊断种类                 受试对象百分比

        精神抑郁症                   27.1

        广泛的焦虑障碍               8.4

        单相                         24.5

        双相                         12.9

        精神分裂症                   5.2

        注意力缺乏障碍               21.9

        物质滥用障碍                 18.1

MCMI-II试验评分在不同的住院患者群体中得到了证实，即把104 名患者与明尼苏达多相位人格调查表(MMPI)的人格障碍量表进行比 较。守恒显著性水平被用来保证结论的有效性。分裂样、回避、依 赖、表现欲和自恋的量表显著相关，被动-攻击、分裂型和临界量表 与对应的MCMI-II量表没有相关性，这样就验证了这项试验可用于令 人信赖地测定反常人格性状(Shuler等，1994；Zimmernman等， 1994)，例如象分裂样和回避行为。

本研究中的30个“超级”对照受试对象被筛选，以排除一些报偿 缺乏行为，这些行为包括酒精中毒、多种物质依赖、吸烟行为、碳水 化合物暴食行为、BMI＞25、物质滥用障碍的家族史、ADHD、病理性赌 博和一种Axis II诊断(包括SAB)，并进行DRD2A1和A2等位基因的基 因分型。另一些对照来自3个来源的自愿者：A)抽动-秽语病患者的 收养父母、抚育父母或继父母；B)来自内分泌诊所的，患有甲状腺 癌或非胰岛素依赖性糖尿病的受试者；和C)医院内部人员，包括专业 人员、技师和维修工人。总共142名对照都被筛选，排除ADHD、酒精、 药物和烟草的滥用。发明者把这些对照中的91人按基因分型分为DAT1 9和10等位基因，另51人被分为DβHB1和B2等位基因。需要考虑的一 个重要的警示是：为了评价多巴胺能等位基因与SAB的关联，受试对 象应该加以选择。发明者已经认识到：共发的RDS行为的受试对象 (即在这个群体中有18.1％的人存在物质滥用障碍)可能在资料的统 计学处理方面造成混淆。发明者同时还已经认识到：在存在SAB的患 者中排除所有RDS行为将是非常困难的。因此，发明者必须等候将来 的补充性研究才能解决这一问题。

基因分型。在本研究中，总共271受试对象的基因分型属于一种或 多种多巴胺能基因，全部受试对象都各用一个中立的标识号进行基因 分型和读出结果，而不知道是哪一个被分型。

DRD2多态性。如下列文章(Blum等，1990a：Comings等，1995)所 述，D2A1、D2A2的基因分型使用的是Southern Blot杂交法。另外， 相当数量样品是使用PCRTM技术(Noble等，1994d)进行基因分型 的。

DβH多态性d’Amato和同事(d’Amato等，1989)报道了两种被称 为A和B的TaqI DβH多态性的存在。使用了DβH cDNA克隆AII (Lamouroux等，1987；Lamouroux等1993)，含有一个2.7kb在 EcoRI位点的插入片段。为了改进标记，载体被BamHI和SalI酶消 化，产生5条带。一个3.5kb片段被标记以用于检测β多态性。用 TaqI限制性核酸内切酶消化后，在琼脂糖凝胶中电泳，Southern法转 移到尼龙膜上，与32P标记的探针杂交，再进行放射自显影，确定 2.8kb(B1)和1.4kb(B2)片段。

DAT1重复多态性。在3’UTR的等位基因用PCRTM方法确定，寡核苷 酸PCRTM条件由Vandenberg等报道(1992b)。经PCR扩增后的产物在 8％丙烯酰胺凝胶中与一组用于表明片段长度大小的标志物一起电 泳。

统计。使用皮尔逊(Person)卡方和菲希尔(Fisher)准确检验进行 2X2表的比例分析。更大的表，如2X3表，则使用皮尔逊卡方和线性趋 势Mantel Hensel检验进行统计学检验。均数之间的差异使用学生t- 检验法进行检验。多元逻辑回归被用来分析一个或几个变量的贡献， 以预测在分裂样/回避障碍方面获得高分的可能性。该逻辑模型使用 Hosmer-Lemeshow拟合优度检验、代表接收者操作特性(ROC)曲线下 面积的c统计和由SAS计算机程序Proc Logistic显示的r-方或方差的 存在进行评估。另外，在任何逻辑回归分析法中，用于预示变量的优 势率也经计算机处理(Dunn和Clark，1995)。

结果。对于分裂样/回避障碍，利用了卡方法进行了数据集分析，限 制多巴胺能等位基因与超过84分的MCMI-II分裂样障碍和MCMI-II回避 障碍的可能关联，以保证准备关联的表型的严格性。研究中发现在50 ％的患有分裂样障碍(11/22)和44％的患有回避障碍(12/27)的受 试对象中可以发现DRD2 A1位基因；在72％的分裂样障碍的受试对 象(13/18)和62％回避障碍受试对象(13/21)中可以找到DAT1 480bp(VNTR 10/10等位基因)；在81.3％的分裂样障碍的受试对象 (13/16)和82.4％的回避障碍的受试对象(14/17)中找到了DβH B1等位基因。根据卡方，与DRD2 A2等位基因相比，DRD2 A1等位基因 与分裂样/回避障碍群(MCMI-II得分≥84)的患者之间存在更为显著 的关联(x2＝7.6，df＝1，p＜0.006)。DRD2 A1等位基因的纯合 子显示出：其在SAB群体(＞84)的受试对象中占最高的百分比。在 SAB群体中，杂合子占有的百分比大约是纯合子组的受试对象的一 半。可是仅有DRD2 A2等位基因表达的组则显示：其在SAB群体中占有 最低的百分比(线性趋势分析：p＜0.005，A1/A1＝83％，A1/A2＝ 41％ A2/A2＝23％)。

不过，与DRD2 A1等位基因数据不同，卡方分析没能展现DβHB1 等位基因和DAT1 10/10等位基因与分裂样/回避障碍行为的关联。利 用多个变量与对分的SAB得分进行关联，使用逻辑回归法测验其与 DRD2等位基因、年龄和性别的显著性关系，DRD2 A1等位基因和性别 都是SAB严重性的显著预示变量。发明者发现Hosmer-Lemeshow拟合优 度在p＝0.78时。DRD2A1与SAB的优势率为2.79(p＝0.018)，与性 别的优势率为3.6(p＝0.0031)。在30名筛选的超级对照者中(排 除酒精中毒，多种物质依赖，身体质量指标在25以下，吸烟行为，家 族史，病理性赌博，ADHD，分裂样/回避障碍行为)，DRD2 A1等位基 因的流行率是1/30或3.3％。在91名筛选的对照者中，DAT1 10/10等位 基因的流行率是34/91或37.4％。而在51名筛选过的对照者中，DβH B1等位基因的流行率是27/51或53％。

至于DRD2 A1等位基因(18/37或48.6％)，当与下面两个对照相比时 可以发现显著关联：即文献对照为185/714或26％(x2＝9.2，df`＝ 1，p＝0.0024；OR＝2.71)，超级对照为18/37或48.6％(x2＝ 16.8，df＝1，p＝0.00004；OR＝27.5)，并且SAB＞84。加之，当与 筛选的对照相比较时，在DAT1 480bp(VNTR10/10等位基因)与那些 用SAB诊断的个人(18/28或64.3％)之间发现了显著关联 (x2＝6.3，df＝1，p＝0.012；OR＝3.0)。在被评估为具有SAB的 DβHB1等位基因的携带者(17/23或73.9％)与筛选的对照之间进行 的比较也发现了类似的倾向(x2＝2.89，df＝1，p＝0.09； OR＝2.52)。利用被叫做逻辑回归分析的统计技术，比较了MCMI-II得 分低于84和MCMI-II得分高于84(严重性计分)的全部情况，DRD2 A1 等位基因对这个变异度的贡献率为8.3％，这在统计学方面是有显著 性的(x2＝7.5，df＝1，p＝0.0059)。与此对照，(DAT1 10/10 等位基因)对该变异度的贡献率为1.6％；DβHB1等位基因对该变 异度的贡献率为0.0025％，这不是显著性贡献。

当性别作为单一变量在逻辑回归分析模型中被检验的时候，单独 性别因素对总变异度的贡献率是9.9％(x2＝9.4，df＝1，p＝ 0.0022)。在一个逻辑回归分析模型中，利用DRD2A1等位基因和性别 因素作为预示变量，预测在分裂样/回避障碍的MCMI-II计分上超过84 分的高分，对于这些预示变量，DRD2A1基因的优势率为2.79，男性的 优势率为3.55。Hosmer-Lemeshow拟合优度p值＝0.778，C统计(ROC 曲线下面积)等于0.714，并且，它们对变异度的联合贡献率是17.9 ％。加之，在对67名基因分型属于DRD2A1和A2等位基因的初步研究 中，使用在上面被讨论的过程，发明者没发现它们与使用MCMI-II试 验进行评估的其他的10种人格性状的任何一个没有关联。

作为结论，发明者已经使用MCMI-II自报告型计算机化试验进 行了关联性研究，以揭示3种多巴胺能基因的多态性对称为分裂样/ 回避障碍群的反常人格性状的贡献。由于它不依赖于种族划分、性别 或受试对象的年龄，所以，观察到的关联现象看来不是由于人口的分 层因素。加之，基于在一般人群的分裂样/回避障碍行为的频率是1- 4％。DAT1和DβHB1(10/10重复等位基因)等位基因对总变异度缺 乏显著性贡献由于样本量大小还不能被排除。实际上，在样本量大小 仅为44(由于丢失的值)的情况下，这三种基因多态性在多元回归分 析中对遗传变异的合并贡献率为大约7.6％，这与该复杂行为障碍中涉 及到多个基因和象性别那样的其他的因素的概念是一致的。

                      实施例4

大麻酯受体基因与静脉注射滥用药物的关联 方法：

受试对象。种族因素是一个容易造成混淆的因素，为了把它减少 到最小，全部受试对象都被限定在91名非西班牙系的白种人范围内。 对照组由62个年龄较大的学生(SB对照)和52名受试对象(LL对照) 构成。后者由40％维修人员，43％秘书和职员和，17％的医学博士或 哲学博士们构成。两个组合计共114对照者。

评估。根据单独面谈，存在药物或酒精滥用/依赖的人被排除出LL 对照组。全部对照都被用“密歇根酒精中毒严重性试验”(修订包括 了药物滥用在内)(MAST-R)的24个项目的自我管理调查问卷进行了 评估。所有MAST-R得分超过4分的SB对照者都被排除在外。另外，如 同实施例4所描述的那样，全部ATU受试对象都用临床医生管理的诊断 会面程序(DSM-III-R版本)进行了评估，以诊断是否存在物质依赖 障碍；用临床医生管理的成瘾严重性指标第5版来评估一系列酒精和 药物滥用变量。

基因分型。从全血中按标准的过程提取DNA。DNA样品使用下列如 Dawsom(1995)所述的引物进行扩增：5’-GCTGCTTCTGTTAACCCTGC- 3’(序列编号：第3号)，和5-TACATCTCCGTGTGATGTTCC-3’(序列 编号：第4号)。它识别那些有(AAT)n三个碱基一组的重复序列的 等位基因。用荧光HEX Amidite(应用生物系统公司，福斯特城，加 利福尼亚州)把各0.1uM的每个引物进行标记，以便标记PCRTM产 物。如实施例2中描述的VNTR多态性的PCRTM多态性分析那样，2ul 10倍稀释的PCRTM产物被上载到6％聚丙烯酰胺凝胶里并进行分析。

等位基因和基因型频率的统计学分析。对不同的等位基因在对照 中与在ATU受试对象中的频率进行了检查，使用了由加拿大渥太华 Carleton大学的George Carmody编写的RxC程序，使用回归性蒙特 卡洛检验发检验显著性差异(Roff，和Bentzen，1989)。这种计算 机化方法的优点是：能够以估计的标准误完成卡方模拟，而不将胞腔 与小量观察(尤其是零)折叠。不同的基因型的频率是使用卡方分析 方法进行比较的。

因素分析。为了解决大数目变量分析的统计问题，进行了一种初步 的因素分析，限制条件是只产生两个因素。因素1倾向于联合药物依 赖有关的变量，而因素2倾向于联合酒精依赖有关的变量。

等位基因组和基因分型。尽管发明者已经观察了由1和3～10个重 复序列构成的9个不同的等位基因，在本研究的对照或ATU受试对象 中，没有一个人携带了2等位基因。对照和ATU受试对象中9个等位基 因的分布显示出：最常见的等位基因是#4。它存在于36.4％的对照者 中，31.7％的ATU受试对象和20.2％的静脉注射滥用药物的ATU受试对 象中。发明者的工作假设(Comings，1996b；Comings，1996a) 是：小卫星最初通过Z-DNA的形成(Hamada等，1982；Schroth 等，1992)可能在基因调节中起到直接的作用，并且作用效果的大小 依赖于重复序列的长度。由于主要的等位基因组是4个重复序列，而 且很少有1或者3等位基因，这就允许把9个等位基因自然地划分为两 个组：较短的(＜5)等位基因组和较长的(≤5)等位基因组。这样就 产生了3个基因型：＜5/＜5，杂合子和≤5/≤5。为了消除统计上的复杂 化因素，没有核查别的等位基因、基因型或等位基因的组合。

方差分析。为了进一步消除与大数目变量有关的统计学上的复杂化 因素，通过方差分析，进行了对用于因素1和因素2对上述三个基因型 关系检查的数据的初步试验。这用来确定后来的测验是否能够提出一 个初步的回归模型(＜5/＜5对杂合子+≤5/≤，或≤5/≤5对杂合子+ ＜5/＜5)；或者显性模型(＜5/＜5+杂合子对≤5/≤5，或≤5/≤5+杂合 子对＜5/＜5；或者杂种优势(杂合子对≤5/≤+5≤/≤5))。结果对 ≤5/≤5对杂合子+＜5/＜5方式提出了回归模型。再一次，为了消除统 计复杂化因素，别的任何模型都没有被核查。使用回归模型时，如果 因素1和因素2其中任何一个产生了显著结果，由因素分析暗示的小分 就会被运用方差分析方法进行研究。

卡方分析。具有显著性因素的各个变量被进一步用2×3卡方试验 进行评估。×2维度由两个基因型组所组成：≤5/≤5重复等位基因的纯 合基因型对余下的其他基因型。×3维度组成如下：(1)对照，(2) 在给定变量上计分为0(ATU阴性)的ATU受试对象，和(3)在给定的 变量上计分为≥1(ATU阳性)的ATU受试对象。ATU阴性组有必要被加 进来的原因是为了排除这种可能性：即在ATU受试对象中≥5/≥5基因 型的频率的增加可能实际上是由于它与某个共发障碍或变量的关联， 而不是与正在被核查的那个变量有关。发明者预期有3种模型：

A.显著—线性。如果≥5/≥5基因型和给定变量有关联，发明者预期 在病例百分比方面存在这样一种显著的类似线性的增长，即：≥5/≥5 组，从对照到ATU阴性病例(对那个变量呈消极作用)、到ATU阳性病例 (对那个变量呈积极作用)逐步增加。这种进行性的增长的显著性使用 线性卡方试验(SPSS的统计包的Mantel-Haenzel卡方，SPSS公司，芝 加哥，伊利诺斯州)进行了检验。由于≥5/≥5基因型可能与1种以上物 质或变量发生关联，发明者要求：在ATU阳性组中≥5/≥5携带者的百 分比至少要比在ATU阴性组中高20％。

B.显著-非线性。如果携带≥5/≥5基因型的病例的百分比，在ATU 阴性组中比在ATU阳性组中要高，那么，≥5/≥5基因型就被认为是与 某种给定物质没有关联，即使p值是显著的。

C.不显著-非线性。另外，如果p值是＞0.05的，≥5/≥5基因型也 被认为是与某种给定物质没有关联的。 结果

受试对象特征。ATU受试对象的平均年龄是39.7岁(标准差为7.0， 范围是23～52岁)，对照者平均年龄为38.4岁(标准差为12.6岁，范 围是21～71岁)。它们之间没有显著差异(F-比＝0.76，p＝ 0.38)。全部ATU受试对象都是男人，而有45名(39.5％)对照者是 男人，69名对照者(60.5％)是女人。

等位基因频率。通过静脉用药的ATU受试对象被选中的原因是：临 床经验显示：它代表的是那些具有与药物依赖有关的最严重问题的受 试对象。当进行蒙特卡洛检验的10,000次重述检验时，在对照组对 ATU组中，全部等位基因的频率都被进行了比较，它们之间没有显著 性差异(x2＝7.09，p＝0.54)。当对照者与静脉注射药物滥用 者进行比较的时候，差异是临界值(x2＝14.49，p＝0.065)。

对照中的41人或36.0％是≥5/≥5纯合子，另一方面，ATU受试对 象中的43人或46.7％是≥5/≥5纯合子(p＝NS)。在32名静脉注射药 物滥用者中，有20人或62.5％是≥5/≥5纯合子(x2＝7.23，p＝ 0.007)。

尽管在对照组中有女人，在女性对照者(34.8％，n＝69)与男 性对照者(37.8％，n＝45)之间，在≥5/≥5基因型的流行上没有显 著差异，x2＝0.106，p＝0.74。

因素分析 因素分析被设定为只产生两个因素。因素1倾向于包括 与药物滥用有关联的变量。这些变量包括与药物的静脉注射滥用、药 费的数字、各种药物的使用年限、药物得分和药物依赖的形式的DSM 诊断有关联的变量。因素2倾向于包括例如DUI数、在酒精上消耗掉的 钱、酒精严重性计分、进行酒精解毒的次数、酒精得分和DSM酒精依 赖诊断等与酒精相关变量。

因素1和2的方差分析结果用表25表示。因素1的平均得分在 ≥5/≥5等位基因纯合子的受试对象中是最高的(0.198)，比杂合子 的受试对象(-0.151)或者对＜5/＜5等位基因纯合子的受试对象(- 0.085)都高(F-比＝2.85，p＝0.060)。这意味着存在一个关于 ≥5的重复等位基因的纯合性对≥5的重复等位基因(其他)的杂合性+ 纯合性的回归模型。当这个模型用方差分析检验时，因素1的均数对 于那些具有≥5/≥5基因型的显著大于那些具有‘其他’基因型的人(p ＝0.019)。相反，不论使用3种基因型还是回归模型，因素的2均数 都没有显著差异。

这些最初的结果是与CNRI基因的等位基因与药物依赖有关联但与 酒精依赖无关的观点一致。为了进一步检验这一点，发明者对于酒精 得分、药物得分和静脉注射药物的数字的均数试验了回归模型(表 26)。在具有≥5/≥5基因型的那些人中，药物得分的均数比在那些具 有其基因型的人中的均数明显更大些(p＝0.038)。另外，在≥5/≥5纯 合子的那些人中，通过静脉注射使用药物(#IV)的均数比在那些具 有其他基因型的人中的均数明显更大些(p＝0.005)。当 Bonferroni校正α值为0.5/3或0.016时，结果还是显著的。相反， ≥5纯合子在酒精得分的均数方面与‘其他’基因型相比实质上没有 显著差异。为了排除年龄可能是一个解释结果的隐藏的协变量的可能 性，年龄已经被当作一个协变量。年龄的p值是0.404，而CNRI的主要 效果的p值是0.004，这显示出年龄上的变化不能解释这个结果。

与平均药物得分的关联使得发明者提出CNRI基因是否与某特定的 药物之间显示出更密切的关联。4类药物依赖被使用2×3卡方分析法 进行了试验(表27)，如方法部分所述。在全部3个组间：可卡 因、安非他明和大麻依赖组，3类药物依赖在≥5/≥5基因型的频率上显 示有显著的增加。该等位基因与阿片样物质依赖没有显著关联。 Bonferroni校正α值为0.05/4或0.0125，这些关联没有一个是显著 的。

另外，酒精依赖仅仅为了进行比较目的而被包括进来。携带 ≥5/≥5基因型的但没有酒精依赖的ATU受试对象(50.7％)与有酒精 依赖的受试对象(29.6％)相比，前者具有更高的百分比。

可卡因、安非他明、海洛因的给药途径。表28显示的是这些药物的 给药途径的结果。对于可卡因，≥5/≥5基因型的流行在不同的受试对 象中是有区别的：在不使用可卡因的那些ATU受试对象和对照者中是 36.2％，在那些吸可卡因的人中是32.3％，在那些抽烟吸入可卡因的 人中是55.6％，在那些注射可卡因的人中是68.4％(p＝0.006)。 在安非他明的给药途径方面也得到了类似的结果：在那些携带≥5/≥5 基因型但不使用安非他明的人中的流行度为35.7％，在那些用静脉注 射方法使用安非他明的人中则为65.2％(p＝0.007)。已经注意到 在那些经静脉注射使用海洛因的人中，存在相同高频率的≥5/≥5基因 型。

回归分析。为了得到对可归因于CNRI基因的三种数量计分变异度 的评估百分比，发明者进行了一项回归分析：其中那些具有≥5/≥5基 因型的被计为2分，其他的基因型被计为1分(表29)。CNRI基因实质 上不能说明任何一项酒精得分，它可以说明全部药物得分的2.1％， 和静脉注射药物得分的3.8％(p＝0.005)。

结果显示CNRI基因与一些不同类型的药物依赖(可卡因，安非他 明，大麻)有显著关联，并且在静脉注射药物滥用方面，它与药物依 赖之间存在特别严格形式的关联。现在的结果提供了，特定的基因与 经静脉注射滥用药物之间的第一个明确描述的关联。与此相对的是， 与酒精滥用/依赖有关的变量与基因之间没有显著关联。

一种对结果的潜在的替代性解释是：如果不考虑两个组的受试对象 应该是非西班牙系的白种人这样一种限制，对对于对照者，在ATU受 试对象中隐藏的人种分层因素可以说明这个结果。它一直是在关联性 研究里需要关心的问题，尽管与有ATU药物滥用行为的受试对象有类 似的人口统计学资料，≥5/≥5基因型仅与药物依赖变量存在关联，但 是和酒精依赖的变量缺乏关联，与酒精相比，大多数药物都对多巴胺 能报偿途径有更大的扰乱，在多巴胺和大麻的代谢之间的紧密的相互 作用，这些现象之间是一致的，这使人种的分层因素不太可能对结果 进行说明。另外，年龄作为复杂化的变量也被除外了。

                       表25

ATU受试对象和对照中的CNR1基因型对因素1和2的方差分析

                     (n＝205) 得分     基因型     N     均数      标准差    F-比    p 因素1    ＜5/＜5    32    -0.085    0.97 (药物)   杂合子.    91    -0.151    0.65

     ≥5/≥5    83     0.198    1.26      2.85    0.060

     其他       123   -0.134    0.75

     ≥5/≥5    83     0.198    1.26      5.62    0.019 因素2    ＜5/＜5    32    -0.098    0.95 (酒精)   杂合子.    91    -0.042    1.00

     ≥5/≥5    83     0.084    1.02      0.52    0.593

     其他       123   -0.056    .98

     ≥5/≥5    83     0.084    1.02      0.98    0.32

                         表26 CNR1基因型对静脉注射药物的次数、药物得分和酒精得分的方差分析，

            ATU受试对象和对照(n＝206) 得分           基因型     N      均数    标准差    F-比    p 酒精得分       其他       123    2.52    3.41

           ≥5/≥5    83     2.57    3.02      0.010   0.921 药物得分       其他       123    3.37    4.98

           ≥5/≥5    83     4.95    5.81      4.33    0.038 #静脉注射药物  其他       123    0.16    0.54

           ≥5/≥5    83     0.48    1.05      8.08    0.005

                         表27

对照者、ATU阴性和ATU阳性受试对象中CNR1基因≥5/≥5纯合性

             的百分比的方差分析(n＝155) 行为             对照      ATU-     ATU+

          N    ％    N   ％    N   ％   卡方   p 可卡因        114  36.0  72  38.9  20  70.1  5.36  0.020 安非他明      114  36.0  58  37.9  34  58.8  4.46  0.034 大麻          114  36.0  66  39.4  26  61.5  4.41  0.035 阿片样物质    114  36.0  82  45.8  10  50.0  3.01  0.155 仅有酒精依赖  114  36.0  71  50.7  21  28.6  0.27  0.602

                     表28

          CNR1基因型和药物的给药途径。 8A.可卡因途径    N       ％≥5/≥5    卡方*   p 不使用           1381   36.2 经鼻             31      32.3 烟雾             18      55.6 静脉注射         19      68.4         7.52     0.006 总数             206 8B.安非他明途径  N       ％≥5/≥5    卡方*   P 不使用           1292   35.7 口服             11      9.1 经鼻/烟雾        43      48.8 静脉注射         23      65.2         7.19     0.007 总数             206 8C.海洛因途径    N       ％≥5/≥5    卡方*   P 不使用           1773   37.3 经鼻             6       33.3 烟雾             2       50.0 静脉注射         21      66.7         6.42     0.011 总数             206

*Mantel-Haenzel线性卡方

1 含有114名对照，其中36.0％是≥5/≥5纯合子，

  和24名ATU受试对象，其中37.5％是≥5/≥5纯合子。

2 含有114名对照，其中36.0％是≥5/≥5纯合子，

  和15名ATU受试对象，其中33.3％是≥5/≥5纯合子

3 含有114名对照，其中36.0％是≥5/≥5纯合子，

  和64名ATU受试对象，其中40.6％是≥5/≥5纯合子。

                       表29 CNRI基因型(≥5/≥5＝2，其他＝1)对ATU受试对象和对照的静脉注

 射药物次数、药物得分和酒精得分的回归分析(n＝206) 得分                r        r2       T         P 酒精得分            0.007    0.0000    00.099    0.921 药物得分            0.144    0.0208    20.081    0.038 静脉注射药物得分    0.195    0.0381    20.844    0.005

                     实施例5 人肥胖(OB)基因的遗传变体与身体质量、精神病学的症候和多巴胺 D2受体基因(DRD2)的关联 方法和材料

健康促进组织中心(CHP)。受试对象由来自健康促进组织中心 研究项目的211个非西班牙血统的白种人构成。根据对遗传的多态性 与行为变量关联的其他研究的有效性分析，发明者寻找到200～225名 受试对象的样本量，他们的年龄从29～75岁，平均年龄54岁，标准差 (S.D。)10.2岁。该组中有98个男人和113个女人。每个受试对象都 确定了年龄，性别，体重，身高和腰—髋的比率。总身体脂肪通过在 水中称体重而确定下来。每个受试对象都被要求提供从16岁到他们的 现在年龄的不同年龄间隔中，有关他们的最重体重的数据。为检测血 中的葡萄糖、胆固醇和胰岛素，抽取了空腹血样。编号后的样品用于 进行分析，分析在健康促进组织中心的数据单盲的情况下进行。

每个受试对象都完成了NEO 5-因素人格检验问卷(Costa和 McCrae，1992)以及症候检查一览表-90(SCL-90)。受试对象也答复 了下列一套问题：你因为饿才进食吗？暴食吗？在正餐之间吃零食 吗？因为心情不好而进食吗？由于感到有压力而进食吗？吃早饭吗？ 在正餐时吃得过多吗？对甜食成瘾吗？喜欢蔬菜吗？喜欢含脂肪多的 或者油煎的食物吗？可能的回答是：1：从不；2：偶尔，3：经常， 4：非常频繁，5：总是如此。

遗传研究。发明者用PCRTM方法，扩增了D7S1873、D7S1875、 D7S514和D7S680二核苷酸重复序列，如同以前被描述(Green等 1995)的那样，它们存在于含有人OB基因的YAC中。这些序列中， D7S1875离OB基因最近。发明者将这段序列称为OB1875。DRD2基因Taq Al等位基因也被用前述(Noble等.1994b)引物进行了检验。

OB1875基因型的统计分析。一个先前的假说是：如果比D7S1875 二核苷酸短或长的等位基因重复序列与BMI或其他的变量有关联，具 有短(或者长)等位基因的纯合子的个人将得最高的分数，那些杂合 子将得中间的分数，而那些具有长(短)等位基因的纯合子将得最低 的分数。这样，将不同的等位基因组中的受试对象的行为得分的均数 就进行比较，使用的方法是来自SPSS(SPSS公司，芝加哥，伊利诺斯 州)公司的方差分析统计程序，其中子命令“多项式”被设为1，以 便对进行性线性关系进行检查。当有至少3组的时候，Tukey分析方法 用于检测在任何组之间的显著性个体差异，其中α＝0.05。协方差分 析(ANACOVA)用来检验OB1875基因型对使用BMI、腰-髋比率、年龄 和性别作为协变量的SCL-90焦虑计分方面的影响。另外，对三个 OB1875基因型进行了具有二分断点变量的卡方分析。因为先前假定 是：在这3个OB1875基因型之间，将存在一种进行性的线性增加或 者减少，所以它们用线性卡方检验法进行了检验(SPSS统计软件包中 的Mantel-Haenszel卡方试验)。最终，使用回归分析以确定OB与 DXD2基因型或等位基因之间的相关性(r)。R2提供了有关的基因或 基因的组合给出的对变异度(方差)的部分说明。 结果

BMI平均值为27.9，标准差(S.D)为7.2，范围是17.7～57.6。在 初步研究中，通过把等位基因分成一个长和一个短的组，全部4种多 态性的等位基因都被检验了。受试对象被按基因分型分成：那些短等 位基因的纯合子，长等位基因的纯合子，和短和长等位基因的杂合 子。在3个基因型组中进行的BMI检查显示出D7S1875多态性具有最高 的F-比。这样，后来的研究都用这种多态性对其他的变量进行了研 究。

OB1875等位基因分布。健康促进组织中心受试对象的OB1875多态 性的不同的等位基因，其长度范围为199～225bp。发明者对在精神 病学障碍中进行二核苷酸重复序列检查的已有方法(Comings等， 1996)是，如果存在双峰分布的自然倾向，就首先要把等位基因分 为大致相等的组。OB1875多态性的情况就是这样，分割点定在 208bp。产生的基因型分组情况是：＜208bp/＜208bp，＜208 bp/≥208bp和≥208bp/≥208bp。

肥胖变量。对于包括男人和女人在内的整个组，仅仅与体重有显 著性关联，在3个基因型组间逐步降低(＜208/＜208 n＝47， 183.83kg，标准差(S.D)45.39；杂合子n＝95，177.56kb， 标准差(S.D)44.00；≥208/≥208 n＝39，161.29kg，标准差 (S.D)45.17，F-比＝5.22，p＝0.023)。对于BMI，存在一种累 进性的但不是显著的降低，BMI值从＜208/＜208纯合子的28.92，到杂 合子的27.96，和≥208/≥208纯合子的26.62。在血浆胰岛素、空腹血 葡萄糖、胆固醇和脂肪百分比的均数上，不同基因型造成的差异不显 著。当考虑到每个性别时，对男性而言，倾向是相同的。BMI值接近 显著(p＝0.053)，而体重明显地不同(p＝0.038)。倾向性也是相同 的，没有一个变量仅对女人来说是显著的。

根据年龄的BMI。表30显示在不同年龄的受试对象(包括男人和女 人)内，BMI的均数之间由方差分析进行的比较。对26-30岁的受试对 象来说，不同基因型造成的差异是显著的，对16-20岁的受试对象来 说，差异几乎是显著的。当仅对女性进行检验的时候，同样，仅仅 26-30年龄段显示了显著的结果(p＝0.028)。当仅对男性进行检验 的时候，任何一个年龄组都不显著。受试对象年龄为26～30岁的时 候，他们的BMI被分了为＜25、25～34和≥35的3个组。这3个BMI组 间，OB1875＜208/＜208基因型的频率呈累进性增加，即从24％到33 ％再到56％(线性卡方＝4.46，d.f＝1，p＝0.034。)。

SCL-90。SCL-90的结果如表31所示。＜208/＜208纯合子的分数在 焦虑、抑郁、精神病、敌意、偏执观念、强迫症、症状总和、一般症 候指数和总体总和方面明显更高。上述计分中的7个，p值＜0.025。

协方差分析。为了检验对于体重问题或肥胖的类型(腰-髀比率) 精神病学变量仅居次要地位这种可能性，对SCL-90焦虑计分进行了检 验，使用OB1875基因型作为主效应，BMI、腰-髋比率、年龄和性别 作为协变量(表32)。结果表明：在这5个变量中，只有OB1875基因 型显示与焦虑分数之间存在显著的关联。对抑郁、总的阳性症状和全 部症状的SCL-90分数进行的关联也有同样的结果。

DRD2和BMI年龄组。进行了D2A1等位基因存在与否的方差分析，以 便确定DRD2基因是否也在特定年龄的BMI中起作用。当受试对象是31- 40岁的时候，对于携带A1等位基因的个人来说，其平均BMI值明显更 大些(D2A1+n＝54，28.78，标准差(S.D)＝8.56；D2A1- n＝70，25.67，标准差(S.D)5.21，F-比＝6.04，p＝ 0.015)。与OB基因一样，对更老的年龄组来说F-比率倾向于较低， 尽管样本规模也较小。

合并的OB1875＜208/＜208纯合性和D2A1等位基因。为了确定OB 和DRD2基因的效果是否有累加作用，通过把受试对象分为OB1875 ＜208/＜208等位基因纯合的人和/或携带D2A1等位基因的人，进而对 他们的BMI进行了检验(表33)。这些结果非常显著。那些既是 OB1875＜208等位基因的纯合子并/或携带DXD2 D2A1等位基因的人， 当他们的年龄是16-20，21-25，26-30，31-40和41-50岁时，他们具 有显著更高的平均BMI值。当这2个基因的效果被合并，并且全套肥胖 变量都被进行检查的时候，对腰/髋比率(p＝0.033)、体重(0.013) 和胰岛素水平(0.042)来说，差异是显著的。

回归分析。单变量的回归分析允许对由OB基因或OB+DRD2基因说 明的、特定年龄的BM1的方差(r2)百分比进行检查(表34)。包括 男人和女人都在内，仅对OB基因而言，r和r2仅仅对16-20岁和26-30 岁年龄组的BMI来说是显著的。在这里，OB基因对这2个BMI的方差提 供了大致3％的贡献。然而，当OB和DRD2基因的效果被合并的时候， 在16-20，21-25，26-30和31-40年龄组，它们对这些BMI的方差贡 献达到了8.5-9.9％。当仅对女性进行检验的时候，仅就OB基因而 言，这种关联仅仅对31～40年龄段来说是显著的(p＝0.029)。当OB和 DRD2基因的合并的效果被检验的时候，当受试对象是16-20，21-25， 26-30，31-40和41-50岁的时候，这种关联对受试对象来说是显著 的。最显著的关联是在26～30岁(p＝0.0004)和31～40岁(p＝ 0.0005)年龄组。这2个基因在这里说明了BMI方差的22.8％。

N.E.O，对于令人愉快、认真、外向、神经过敏和开放性这5个 N.E.O因素，仅有神经过敏提高是显著的。这3种OB1875基因型的得 分分别是21.16，17.82和14.86，F-比＝7.29，p＝0.008。认真性 降低是临界显著的(32.97，34.67和35.65，F-比＝3.71，p＝ 0.056)。

进食的原因。在被问到的那些关于进食理由的问题中，仅有2个理 由即：由于感到有压力而进食和吃早饭是与OB1875基因型有显著关联 的。对于这三个基因型，“由于感到有压力而进食”的得分是2.55， 2.32，1.85，F-比＝4.54，p＝0.034。‘吃早饭’的得分是3.50， 4.15，4.14.F-比＝4.89，p＝0.028。

当使用基于受试对象现在体重的BMI时，OB1875基因型的表型效果 没有什么证据。虽然存在一种倾向，即＜208/＜208的纯合子具有最高 的BMI值，杂合子居中，≥208/≥208等位基因纯合子的值较低，但结 果不显著。在腰-髋的比率、脂肪百分比、血浆胰岛素和血葡萄糖上 的差异不显著，但在体重上的差异显著(p＝0.02)。

当受试对象年龄为16～30岁时，OB1875＜208/＜208纯合性与受 试对象的BMI值之间存在有显著性或者几乎显著性关联的倾向。但当 他们是41～70岁时，受试对象的BMI值与OB1875＜208/＜208纯合性 之间就只有极少或没有关联。而这种倾向性在仅仅把女性性别与 OB1875＜208/＜208纯合性进行关联时也是存在的。相反，在仅仅把 男性性别与OB1875＜208/＜208纯合性进行关联时，只能见到非显著 的倾向(表30)。这些结果暗示了OB基因与年轻人的BMI变异之间存 在关联。当年龄在26～30岁的男人和女人的BMI被分为＜25、25到34和 ＜35组的时候，＜208等位基因纯合受试对象的百分比有显著的和累进 性的增加，即从24％到56％。

与基于SCL-90的精神病学变量的关联更显著。2种行为与肥胖之 间最经常发生关联—即焦虑和抑郁，它们与OB1875＜208等位基因的 纯合性具有显著关联(p＝0.003-0.0005)。对于焦虑，＜208等位基 因的纯合的36名受试对象的平均得分(0.85)是那些杂合子 (0.277)或≥208/≥208纯合子(0.203)受试对象平均得分的两倍 以上。OB1875＜208等位基因与焦虑和抑郁之间存在关联的一个合理解 释可能是：这些等位基因导致肥胖，而焦虑和抑郁的作用是次要的。 为了核实这一点，发明者用BMI、腰-髋比、年龄和性别作为协变量， OB1875等位基因作为主效应，进行了协方差分析。对于焦虑，分析 结果表明：与SCL-90焦虑得分显著相关的唯一变量是OB1875≥208等 位基因的存在(表32)，这就表明OB基因对精神病学的症候有主要的 影响，并可能对与肥胖有关联的抑郁和焦虑起到直接诱导的作用。

为了在健康促进组织中心受试对象中检验DRD2基因的作用，方差 分析被用来在各种年龄的具有D2A1等位基因的受试对象和不携带Al等 位基因的受试对象中比较他们的BMI。对OB1875等位基因携带者，更 低年龄的组，例如31-40岁年龄组，其RMI与该等位基因有正好显著的 关联p＝0.015。

为了检验2个或更多基因的累加效果，发明者对OB1875＜208bp等 位基因的纯合子和/或携带D2A1等位基因的受试对象，对不同的特 定年龄的BMI组，进行了方差分析。对于男人和女人合并在一起的情 况，OB1875＜208/＜208或D2A1等位基因的存在与年龄从16～50岁的 所有组的高BMI值之间有显著的关联(表34)。年龄16～40岁的4个组 的全部的p值都是＜0.005。当仅仅检验女人的时候，尽管受试对象的 人数更少，结果却更显著。16～40岁年龄组的p值范围是从0.0017～ 0.0004。携带等位基因或基因型中的任意一个或两者都携带的受试对 象的腰-髋比率、体重和血浆胰岛素水平都与该等位基因或基因型有 显著的关联。

如在先前的研究中(Comings等，1996f；Comings等，1996； Comings等，1997b)，在目前正在讨论的基因型与给定的分数之间的 回归系数r的确定，使得可以确定r2或由正在被研究的基因说明的分 数变异量的比率。这些特定年龄的BMI值的结果用表34表示。在男人 和女人被合并研究的情况下，在16-20和26-30岁年龄组，OB基因分 别独自说明了BMI的变异量的3.2和3.0％。当仅有女人被研究的情况 下，这些值增加到6.2和4.1％。当OB基因和DRD2基因的效果被累加的 时候，在男人和女人被合并研究的情况下，当受试对象是16～40岁的 时候，这些基因说明了BMI的变异的8.5～9.9％。当仅仅女人被检验 的时候，在16～40岁年龄组，这2个基因说明了受试对象的BMI分数变 异量的19.1～22.8％(p＝0.0017～0.0004)。

                      表30

OB1875基因型在CHP受试对象中进行的BMI值的线性方差分析 根据年龄 的BMI       基因型         N     均数     标准差  F-比  p 男性和女性 16-20岁     ＜208/＜208    38    24.26    3.95

        杂合子         63    22.66    3.74

        ≥208/≥208    27    22.50    3.64    3.58  0.061 21-25岁     ＜208/＜208    38    25.20    4.96

        杂合子         65    24.22    4.56

       ≥208/≥208     27    23.54    4.80    2.02  0.139 26-30岁    ＜208/＜208     38    26.83    6.44

       杂合子          65    24.79    4.67

       ≥208/≥208     27    24.22    5.57    4.05  0.046 31-40岁    ＜208/＜208     37    27.83    6.11

       杂合子          65    26.92    6.35

       ≥208/≥208     26    25.79    9.14    1.31  0.275 41-50岁    ＜208/＜208     32    28.51    6.50

       杂合子          60    27.86    8.07

       ≥208/≥208     24    27.38    6.21    0.33  0.564 51-60岁    ＜208/＜208     20    30.19    8.24

       杂合子          43    27.52    6.61

       ≥208/≥208     14    28.40    9.89    0.64  0.424 61-70岁    ＜208/＜208     14    29.35    7.32

       杂合子          23    26.66    3.57

       ≥208/≥208     7     26.61    6.98    1.67  0.202 根据年龄的BMI       基因型        N     均数         标准差       F-比         p 女性 16-20岁           ＜208/＜208     19    24.00        4.09

              杂合子          35    21.78        3.72

              ≥208/≥208     21    21.83        3.48         3.18         0.078 21-25岁           ＜208/＜208     19    25.30        5.73

              杂合子          37    23.17        4.89

              ≥208/≥208     21    22.86        4.86         2.20         0.140 26-30岁           ＜208/＜208     19    28.04        8.00

              杂合子          37    23.93        5.11

              ≥208/≥208     21    23.60        5.87         4.99         0.028 31-40岁           ＜208/＜208     18    28.94        7.28

              杂合子          37    26.35        7.77

              ≥208/≥208     21    25.46        10.08        1.61         0.208 41-50岁           ＜208/＜208     14    28.33        7.00

              杂合子          34    28.28        8.84

              ≥208/≥208     19    27.51        6.85         0.10         0.752 51-60岁           ＜208/＜208     9     30.01        7.90

              杂合子          20    27.11        5.22

              ≥208/≥208     12    29.07        10.26        0.03         0.859 61-70岁           ＜208/＜208     6     26.93        4.55

              杂合子          10    25.23        4.28

              ≥208/≥208     6     26.69        7.65         0.006        0.939 根据年龄的BMI          基因型        N     均数       标准差       F-比         p 男性 16-20岁               ＜208/＜208    19    24.51       3.89

                  杂合子         28    23.77       3.53

                  ≥208/≥208    6     25.27       3.22        0.001        0.973 21-25岁               ＜208/＜208    19    25.09       4.19

                  杂合子         28    25.52       3.79

                  ≥208/≥208    6     25.90       4.07        0.24         0.6 26-30岁               ＜208/＜208    19    25.62       4.25

                  杂合子         28    25.94       3.80

                  ≥208/≥208    6     26.39       4.01        0.18         0.671 31-40岁               ＜208/＜208    19    26.79       4.71

                  杂合子         28    27.67       3.76

                  ≥208/≥208    5     27.19       3.38        0.25         0.619 41-50岁               ＜208/＜208    18    28.64       6.28

                  杂合子         26    27.31       7.07

                  ≥208/≥208    5     26.88       3.74        0.49         0.488 51-60岁               ＜208/＜208    11    30.38       8.89

                  杂合子         23    27.88       7.71

                  ≥208/≥208    2     24.45       0.15        1.21         0.278 61-70岁               ＜208/＜208    8     31.18       3.08

                  杂合子         13    27.74       0.71

                  ≥208/≥208    1     26.11       1.98        0.174

                        表31

     OB1875多态性和SCL-90得分的线性方差分析 SCL-90得分      基因型        N     均数       标准差   F-比      p 焦虑           ＜208/＜208    36    0.850      1.36

           杂合子         65    0.277*     0.33

           ≥208/≥208    29    0.203*     0.29     12.72     0.0005 抑郁           ＜208/＜208    33    0.935      0.79

           杂合子         63    0.552*     0.59

           ≥208/≥208    30    0.453*     0.52     9.14      0.0030 精神病         ＜208/＜208    35    0.426      0.60

           杂合子         65    0.198*     0.28

           ≥208/≥208    30    0.183*     0.24     6.58      0.011 敌意           ＜208/＜208    36    0.509      0.66

           杂合子         66    0.255*     0.36

           ≥208/≥208    30    0.227*     0.38     6.36      0.013 偏执观念      ＜208/＜208     37    0.527      0.56

            杂合子        67    0.335      0.42

           ≥208/≥208    30    0.278      0.38     5.23      0.024 强迫           ＜208/＜208    37    0.876      0.69

           杂合子         64    0.703      1.03

           ≥208/≥208    31    0.443      0.42     4.34      0.035， 躯体化         ＜208/＜208    33    0.715      0.72

           杂合子         65    0.549      0.48

           ≥208/≥208    28    0.467      0.34     3.41      0.067 人际敏感性     ＜208/＜208    34    0.732      0.73

           杂合子         66    0.569      0.84

           ≥208/≥208    30    0.496      0.57     1.55      0.214 SCL-90得分     基因型        N      均数       标准差    F-比      p 恐怖焦虑       ＜208/＜208   37     0.212      0.46

           杂合子        66     0.076      0.18

           ≥208/≥208   30     0.138      0.41      1.05    0.305 得分＞0        ＜208/＜208   29     33.72      21.48 症状总数       杂合子        52     21.23*     15.50

           ≥208/≥208   37     20.85*     18.65     7.33    0.008 得分f0         ＜208/＜208   29     62.51      58.86 症状总数       杂合子        52     36.42*     33.15

           ≥208/≥208   27     31.44*     29.51     8.24    0.005

*Tukey检验结果显著，α＝0.05。

                               表32

SCL-90焦虑变量以OB1875多态性作为主效应，BMI、腰-髋比、年

              龄和性别作为协变量的协方差分析   焦虑     卡方总计           d.f.        卡方均数       F               p 协变量       1.369             4           0.342         0.518           0.677 RMI          0.763             1           0.263         0.447           0.505 腰-髋比      0.046             1           0.046         0.078           0.780 年龄         0.255             1           0.255         0.433           0.512 性别         0.374             1           0.374         0.634           0.427 主效应 OB1875      7.855              2           3.928         6.669           0.002 可说明的     9.495             6           1.58          2.687           0.012 剩余的       71.258            122         0.589 总数         81.345            128         0.636

                         表33    在CHP组中OB1875＜208/＜208纯合性和/或DRD2 D2A1等位基因

           的存在-不同年龄的BMI方差分析 年龄有关的BMI      基因型          N        均数       标准差    F-比          p 男性和女性  16-20岁         OB+和/或D2A1+   51        24.52       4.15

             OB和D2A1-       39        22.03       3.24     9.45       0.0028  21-25岁         OB+和/或D2A1+   51        26.05       5.31

             OB和D2A1-       39        23.00       3.49     9.60       0.0026  26-30岁         OB+和/或D2A1+   53        27.25       6.36

             OB和D2A1-       39        23.69       3.46     9.94       0.0022  31-40岁         OB+和/或D2A1+   52        29.11       7.26

             OB和D2A1-       39        25.29       4.48     8.38       0.0048  41-50岁         OB+和/或D2A1+   44        29.92       8.18

             OB和D2A1-       37        26.34       7.08     4.32       0.0408  51-60岁         OB+和/或D2A1+   51        30.06       7.39

             OB和D2A1-       39        26.77       6.97     2.83       0.0984  61-70岁         OB+和/或D2A1+   16        28.23       5.42

             OB和D2A1-       14        36.49       4.22     0.94       0.339 女性  16-20岁         OB+和/或D2A1+   25        24.50       4.42

             OB和D2A1-       24        20.98       2.74     11.07      0.0017  21-25岁         OB+和/或D2A1+   25        26.32       6.32

             OB和D2A1-       24        21.61       2.76     11.24      0.0016  26-30岁         OB+和/或D2A1+   27        28.53       7.91

             OB和D2A1-       24        22.19       2.12     14.45      0.0004  31-40岁         OB+和/或D2A1+   26        31.09       8.98

             OB和D2A1-       24        23.66       4.06     13.97      0.0005  41-50岁         OB+和/或D2A1+   20        32.05       10.19

             OB和D2A1-       23        25.90       5.73     6.08       0.018  51-60岁         OB+和/或D2A+    9         31.10       7.23

             OB和D2A1-       16        27.01       5.61     2.48       0.128  61-70岁         OB+和/或D2A1+             28.46       4.28

             OB和D2A1-       7         24.56       4.64     2.19       0.169

                     表34 关于在CHP组不同年龄受试对象中OB1875＜208/＜208纯合性和/或

        DRD2 D2A1等位基因的存在情况的单一变量回归分析

               r          r2            T           P OB1875＜208/＜208＝1，其他＝0：包括男性和女性 16-20岁          0.173       0.030          1.98       0.049 21-25岁          0.131       0.017          1.49       0.137 26-30岁          0.181       0.032          2.09       0.038 31-40岁          0.108       0.012          1.22       0.222 41-50岁          0.063       0.004          0.68       0.498 51-60岁          0.103       0.010          0.98       0.366 61-70岁          0.215       0.046          1.45       0.153 OB1875＜208/＜208＝1，其他＝0：女性 16-20岁          0.204       0.041          1.77       0.079 21-25岁          0.171       0.029          1.49       0.141 26-30岁          0.248       0.062          2.22       0.029 31-40岁          0.146       0.021          1.28       0.205 41-50岁          0.039       0.001          0.32       0.751 51-60岁          0.028       0.000          0.18       0.859 61-70岁          0.017       0.000          0.08       0.938 OB1875＜208/＜208和/或D2A1＝1，其它＝0：男性和女性 16-20岁          0.312       0.097          3.07       0.0029 21-25岁          0.313       0.098          3.09       0.0026 26-30岁          0.315       0.099          3.15       0.0022 31-40岁          0.292       0.085          2.89       0.0048 41-50岁          0.228       0.052          2.08       0.041 51-60岁          0.227       0.051          1.68       0.098 61-70岁          0.181       0.032          0.97       0.339

           r             r2            T         p  OB1875＜208/＜208和/或D2A1＝1，其它＝0：女性  BMI 16-20    0.436          0.191          3.32    0.0017  BMI 21-25    0.439          0.193          3.35    0.0016  BMI 26-30    0.477          0.228          3.80    0.0004  BMI 31-40    0.472          0.223          3.72    0.0005  BMI 41-50    0.359          0.129          2.46    0.018  BMI 51-60    0.312          0.097          1.57    0.128  BMI 61-70    0.423          0.179          1.48    0.169

                       实施例6

          同三个多巴胺基因相关的累加效应

在本研究中，通过确定是否遗传有所有这三个基因的特定标志的 受试者倾向于比那些遗传了不到三个的受试者具有较高(较差)的行 为评分来研究这三个影响多巴胺能神经元的重要基因的累加效应。通 过确定是否那些没有遗传这些标志的倾向于具有较低(较好)的行为 评分来检测减性效应，与累加效应相反的效应。通过确定是否那些遗 传有1或2个标志的倾向具有中间的评分来检测这两种效应。这检测了 多基因遗传的本质—需要几个基因的累加效应来产生一表型上临床显 著的效应。 方法

受试者 受试者为对TS进行治疗的患者、或患者的亲属。TS、慢 性运动抽动障碍或慢性发声抽动障碍的诊断基于DSM-III-R标准(美 国精神病联合会，1987)。TS先证者(n＝225)定义为在该诊所寻找 医疗照顾的个体。先证者中，82％具有TS而其余的18％具有慢性运动 抽动障碍或者慢性发声抽动障碍。在非先证者TS亲属(n＝60)中，54 ％患有TS，31％患有慢性运动抽动障碍而15％患有慢性发声抽动障 碍。非TS亲属(n＝132)中没有人具有慢性运动性或发声抽动。对于 所有先证者均个人会见并检查。80％以上的亲属也个人会见。询问每 个先证者和他们的亲属关于他们四位祖父母的种族和人种背景。对于 DRD2研究，仅包括非西班牙白种人先证者、亲属以及具有北部和西部 欧洲背景的对照。所有受试者均超过6岁。

人种分层。在本研究中避免了人种分层。所有受试者均限于北部 或西部欧洲世系的非西班牙白种人。由所有四位祖父母确定每个受试 者的人种背景。不同世系群的数量介于1至12之间，大部分受试者具 有4到6个不同的世系群。对于D2A1等位基因，总共13个不同的研究检 测了714个经筛选排除酒精和药物滥用的对照。在这些研究中D2A1等 位基因的流行率平均为25.9％，范围为12.5％到34.8％，均低于在432个 TS病例中的40.7％。(还见在该申请中前面展示的超级对照研究)。 当在D2A1携带者和非携带者中检测平均行为评分时，几个均值在从分 析中排除对照时还具有显著性。对于所有三个多巴胺基因的联合检测 也是这样。不同受试者倾向于在不同行为评分上评分高。尽管如此， 当检测“对照无”、“病例无”及“病例有”三组时仍有许多显著的 结果。所有这些结果，实际上作为隐含的人种分层而非通过所检测变 量的存在与否分层的结果，其机率似乎很小。利用对照和受试者的相 同多基因群，对所有三个被测的多巴胺基因均获得阳性结果。在所有 这三个基因中涉及隐含的人种分层的可能性似乎很小。这些阳性结果 并非仅仅是由于检测了多个行为变量因此偶然有一些是显著的。发明 者总的已经获得了对于所测的几种其它基因的所有行为变量的非显著 性结果。

对照。对照(n＝67)来自三个来源：a)TS患者的收养、抚养或 继父母，b)来自一内分泌病诊所患有甲状腺癌或非胰岛素依赖型糖 尿病的受试者，以及c)医院人员包括专业人员、技术人员和维修工 人。由于两种情况均易于治疗，具有高的治愈率且对日常生活产生最 小的干扰，在一广泛的年龄范围内存在，以及患者的基础同TS受试者 的相同，所以选择内分泌患者作为对照。筛选所有的对照以排除 ADHD、酒精、药物以及烟草滥用。

结构化调查表。从1987年起，要求所有患者及可找到的一级亲属 填写一个根据诊断性会面程序表(Diagnostic Interview Schedule)(DIS)(Robins等，1991)设计的详细的31页行为调查 表。完整的调查表在别处有提供(Comings，1990a)。除了DIS问题 外，还有许多关于人口统计变量、ADHD诊断所需的全部DSM-III和DSM III-R变量的问题，以及关于运动性和发声抽动的类型、定位、持续 时间和严重性问题(美国精神病联合会，1980；美国精神病联合会， 1987)。然后将对这些问题的回答输入一SPSS数据库。该工具的使用 以及症状群使用的各个方面在别处提供(Comings，1995c； Comings，1994c；Comings，1994a；Comings，1995a)。

血液标本。虽然没有对每个就诊的TS先证者或亲属均采全血标 本，但在下面的考虑范围内，选择基本上是随机的。首先，提供血液 标本是完全自愿的，而且许多受试者特别是年轻些的选择不抽血。其 次，由于关于种族和人种分层的考虑，倾向于从非西班牙的北部和西 部欧洲白种人中抽血，因为对照的大部分资料来自这一群体。第三， 如果两父母均可提供，则优选从这些家庭而非父母之一不提供的家庭 获得血样。

基因分型。对所有的患者均基于一中性身份号进行基因分型，而 且在不知被分型个体情况下读片。按照前面所描述的通过DNA分子印 迹的杂交来进行D2A1基因分型(Comings等，1991)。有些还按照前 文所描述的通过一PCRTM技术进行基因分型(Dawson，1986)。按照 在实施例中所描述的进行DβH基因分型。按照在实施例3中所描述的进 行DAT1重复多态性基因分型。

共发病的标准。结构化调查表允许系列相关症状的检测。在本研 究之前确定了其中每个的标准，包括：酒精滥用(Comings， 1994b)、药物滥用(Comings，1994c)、强迫行为(Comings， 1994a)、重性抑郁发作(Comings，1995c)、燥狂(Comings， 1995b)、躯体化障碍(Comings，1995b)、惊恐发作(Comings， 1995b)、恐怖症(Comings，1995b)、品行障碍(Comings， 1995a)、违抗障碍(ODD)(Comings，1995a)、性障碍 (Comings，1994c)、学习障碍(Comings，1995b)以及抽动严重 性(Comings，1995a)。ADHD评分代表所有22个在调查表中所用的 ADHD变量的总和，其中无或从不＝0、偶尔＝1而经常＝2。基于前期的研 究(Knell和Comings，1993)，将那些具有评分为21或更高的考虑为 患有ADHD。由于发明者在ADHD中的特别的兴趣，发明者还利用另一套 严格基于DSM-III-R诊断的标准检测它，其中至少需要上面22个变量 的14个中的8个(美国精神病联合会，1987)。

一种基于调查表的方法对于症状的准确性、实用性和灵敏性已经 被其他人通过比较均用于相同受试者的这样一种工具的使用和一种会 面者施用的结构化工具如用于情感障碍和精神分裂症的Kiddie程序表 而得到证实(Karp，1994；Grossman等，1994)。

下面是对于一些症状的标准或评分，它们在编写本申请时尚未发 表或者可能需要澄清。为评价在学校中的一般表现(小学症状)，发 明者问下述问题：“从1到6年级，你的学校表现在a)数学、b)阅读 和c)写作中总体表现是低于平均、平均还是高于平均。可能的回答 是低于平均(2)，平均(1)，高于平均(0)。结果为三门科目的 总和，最差分为6，最好为0。对于两分变量，4分或更多被认为是小 学问题阳性。如果他们曾经不得不被置于一个教育不利的、学习不利 的、学习障碍或补救班，则这些个体被考虑具有学习障碍的问题(学 习障碍症状)。受试者被询问在DIS中关于所有16个恐怖症的存在 (恐怖症症状)的问题，而且如果他们在3个或更多项目上有困难， 则被认为具有恐怖症的问题。对于一给定的受试者，恐怖症评分为 DIS所列恐怖症的总数。如果个体对DIS问题“你曾有过在大部分人不 害怕的地方突然感到恐惧、焦虑或非常心神不安的一段时间或发作 (并非由于躯体的疾病)吗？”回答是则认为惊恐发作(惊恐发作症 状)在某些时候已经存在。对一给定个体，惊恐评分代表DIS惊恐发 作症状的总数。为评价阅读问题(阅读问题症状)，个体被询问“你 感到在阅读中落后与你同等人的最大年数，如果有，是多少？例如， 如果当你在6年级，而你仅仅在4年级的水平阅读，那么你可能落后2 年。”那些回答2年或更多的被认为具有阅读问题。口吃(口吃症 状)是通过问题“你曾有过口吃的问题吗？”来评价的。对于已被评 分为广泛焦虑(广泛焦虑症状)阳性的个体，必须回答下面的两个 DIS问题，“你曾有过过度焦虑或担心你生活中各种事情的阶段 吗？”以及“如果是，当它们存在的时间多于不存在时，这些感觉持 续6个月还是更久？”。如果个体对涉及躯体化症状的DIS问题中的3 个或更多回答是则被认为存在躯体化的问题(躯体化症状)。对一给 定个体，躯体化症状评分代表DIS躯体化症状的总数。如果下面中的 任何一个：夜间入睡问题、夜行症、黑夜恐惧、早醒且无法重新入 睡、梦语或恶梦，每天或几乎每天都存在，则被认为具有睡眠问题 (睡眠症状)。睡眠评分代表上述每天或几乎每天发生的睡眠评分症 状的总数。具有性障碍的个体如果存在下面中的任何一个 (Comings，1994a)：1.频繁公开展示、2.性要求大大高于普通人、 3.喜欢同性或两种性别、4.在性事物上具有早熟的兴趣、5.作为一名 儿童，画肮脏的图片大大多于同龄的其他儿童、6.一直感觉他们被生 错了性别、7.象相反的性别一样穿着而并非为了万圣节或化装晚会、 8-11.6个月或更长一段时间由物体、或儿童、或受虐或施虐的幻想而 被性唤起，则被评分为阳性。在一给定的个体中，性行为评分代表上 述性行为问题的总数。具有分裂行为(分裂样行为症状)的个体，如 果他们对关于精神分裂症症状的DIS问题中的2个或更多回答是则被评 分为阳性。给定个体的分裂样行为评分代表DIS分裂样症状的总数。 通过关于8个不同运动抽动以及9个不同发声抽动的存在以及开始的年 龄的问题来对受试者进行抽动(抽动症状)检测。将这种抽动的数量 相加产生一个抽动评分。于是，多种抽动的存在评分高于较少抽动。 上面为卡方分析提供了两分结果，为比较D2A1等位基因携带者和非携 带者中的均值提供了评分。

病例分组。上述的信息使得受试者被置于两种不同类型的分组 中。第一种是基于慢性运动性和/或发声抽动的存在与否。这些组为 TS先证者、具有TS或慢性抽动的TS先证者亲属、没有慢性抽动的TS先 证者亲属以及无抽动的对照。第二种分组由a)无药物、酒精或烟草 滥用且没有所考虑的行为状况的对照(对照无)、b)没有所考虑的 行为状况的TS先证者或他们的亲属(病例无)和c)具有所考虑的行 为状况的TS先证者或他们的亲属(病例有)组成。因此，例如，由于 对照以及受试者都完成了结构化调查表，对于强迫行为可以在没有物 质滥用的且没有强迫行为的对照和没有强迫行为的TS先证者及亲属、 和具有强迫行为的TS先证者及亲属间进行比较。在多基因群的TS先证 者中仅有3％是轻度，74％为中度，而23％为重度。

统计学。当检测个体行为，例如行为x时，与没有行为x的对照相 比在具有行为x的TS先证者中对于某一标志的流行率显著增加有两个 可能的原因：a)所标志的基因可能在行为x中起作用，或者b)所标 志的基因由于其同本身与行为x相关的行为y相关而可能在频率上增加 了。为了区分a)和b)，发明者要求在所有3组间，对照无(无x且极 可能无y)、病例无(无x而通常有y)和病例有(有x且通常有y)， 该标志的流行率存在一个显著的、渐进的、线性增加。使用了SPSS (SPSS公司，芝加哥，IL)统计学软件包。当在对照无、病例无和病 例有的渐进系列间比较两分变量时，利用了对于渐进性线性趋势的 SPSS Manrel-Haenzel卡方统计。对于在携带D2A1等位基因(D2A1A1 或D2A1A2)和不携带A1等位基因(D2A2A2)的受试者中某一给定行为 评分均值的比较利用学生t检验。

为了对每个所研究基因一致，发明者测定了相同组受试者的3个不 同基因的基因型。这组称为多基因群。将受试者在测定其DβH或DAT1 等位基因的基因型前置于该群中。多基因群的筛选标准要求受试者必 须为非西班牙白种人，必须已经填写了结构化调查表，必须已经同意 抽血，必须已经制备了足够量的DNA来进行所有三个基因的基因分 型，而且必须作为一个对照、一个TS先证者或一先证者的亲属。由于 检测了相同的受试者，所以这使得可以对不同的基因比较行为评分的 均值。

在多基因群中有319个受试者。此外，对相当数量的受试者测定了 其中一个基因而非全部三个的基因型。对于每个基因，这称为总群而 且对不同的基因大小不同。在每种情况中，总群包括多基因群加额外 的非多基因群病例。为避免丢失数据或力度，对于每个行为还检测总 群。然而，为了节约空间，对于总群只在合适的表的最后一列给出p 值。对于具有待测等位基因或标志的受试者与不带有该等位基因或标 志的那些个体，t检验分析比较不同行为变量的均值。同样，适当 时，在各表的最后一列中给出总群的p值。

对于不同行为评分均值的定量检验，发明者预想了两个有些对立 的策略。第一个为基于检测的受试者数量越多，II型错误的机会越小 的假设，检验尽可能大量的受试者。对于这个策略，检测对照、亲属 和TS先证者。第二个策略为仅仅比较极端，即对照和TS先证者，这基 于可以比较突变基因具有最小和最大程度表达的个体的假设。对于第 一个策略将给出结果，而第二个的结果如果它们比检测较大的群提供 更多信息，则将被讨论。在适当的表中给出Bonferroni校正的α值， 即对于相互排除分类中受试者的多元比较。

利用线性对比进行ANOVA分析(Dunn和Clark，1995)来确定4组 间，其中存在3个标志中的3个、3个标志中的2个、3个标志中的1个以 及3个标志中的0个，在许多连续行为的均值中是否存在显著的线性降 低。将Tukey检验引入分析中来确定是否各组评分中的任何彼此间是 显著不同的，α＝0.05。为了估计由于三个多巴胺能基因引起的变异的 百分比，同时对三个基因利用1作为标志存在而0为标志不存在对不同 行为评分进行多元线性回归分析。R2给出由于每个基因引起的变异的 比例，而R2的和为所有三个基因的贡献。这提供了对每种特异行为， 由所有三个基因一起来解释的变异的总比例。

结果

对于总群，在四组受试者中受试者的数量、平均年龄以及性别分 布示于表35中。预计TS先证者的平均年龄可能低于其它组，而且这是 事实。还预计TS先证者和具有TS的亲属的男女性别比可能高于非TS 组，而且这也是事实。然而，由于所测试基因均为常染色体的，性别 比本身不应被考虑为一个因素。为研究这个，发明者对不同标志的存 在或缺乏同性别间进行了卡方分析。这些是不显著的。

DRD2基因的Taq A1等位基因。“对照无”同“病例无”同“病例 有”之间。对于多基因群和总群，在TS先证者、有慢性抽动的TS亲 属、无慢性抽动的TS亲属和对照的四组中D2A1等位基因的流行率示于 表36中。在这两种情况下，A1等位基因的流行率从对照(23.5和 26.9％)到TS先证者(41.5和41.7％)通过Mantel-Haenszel线性卡方 分析存在显著的累进性增加。

确定D2A1等位基因在“对照无”、“病例无”和“病例有”中流 行率的结果以及对总群显著相关的p值示于表37中。最显著的相关性 为同燥狂症状，其中同无燥狂症状病例的28.7％、及有症状病例的 52.2％相比，21.2％的从未有过燥狂症状的对照携带D2A1等位基因 (p＝0.00024)。其它显著的变量依次为违抗、性、ADHD-R、分裂 样、ADHD、抽动、重度抑郁以及品行。对于总群，最显著的相关性是 同性(p＝0.0007)、口吃(p＝0.0008)、分裂样(p＝0.0016)以及 燥狂(p＝0.0017)。

对D2A1携带者和D2A2A2携带者均值的T统计。由于大部分的行为评 价涉及连续的评分，因此对所有受试者基于他们携带D2A1等位基因 (D2A1A1和D2A1A2)与否(D2A2A2)检验这些评分的均值也是有用 的。这些对于受试者在多基因群中的结果按照递降的t检验值列于表 38A中。在总群中的显著行为的p值示于最后一列中。显著的变量依次 为ADHD、燥狂、ADHD-R、品行、抽动、违抗、分裂样以及性。对于总 群，三个额外的变量，口吃、强迫以及躯体化症状也是显著的。当删 除对照时，这些中的大部分仍然显著(表38-B)。为了同用于所有三 个多巴胺能基因一起的结果相比较，对照和TS先证者对于多基因群的 显著结果列于表38-C中。此处品行的级别最高，随后依次为燥狂、 ADHD、抽动、分裂样、强迫和违抗。为确定是否D2A1等位基因的纯合 性(D2A1/D2A1)给出高于杂合子(D2A1/D2A2)的行为评分，检测 这两组所有行为评分的均值。对于除了抽动评分以外的每个变量，对 于纯合子的均值低于杂合子。这种显著性仅存在于三个变量中—酒 精、小学和阅读。

DβH基因的Taq B1等位基因在各种精神障碍中的Taq B1等位基 因。在所测试的148个非西班牙白种人对照中，60.8％携带DβH B1等 位基因。在经筛选排除酒精、药物和烟草滥用或依赖的那些中， 52.9％携带B1等位基因(表39)。利用α为0.05，B1等位基因的流行 率存在显著增加，达352例TS先证者中的70.5％(p＝0.012)。为确定 是否TS的严重性发挥作用，将TS先证者按照总体率分为轻度(太轻而 无需治疗TS范围中的任何方面)、中度(某些方面需要治疗)和重度 (TS范围中的一些方面导致他们生活的严重干扰，Comings和 Comings，1985)。B1等位基因的流行率由轻度的54.3％到中度的 72.1％到重度的72.7％具有增加。B1等位基因的流行率对于中度病例是 显著的p＝0.0071。

B1等位基因的流行率对于具有ADHD的78个受试者为73.1％ (p＝0.019)而对104个吸烟者为73.1％(p＝0.012)。B1等位基因的 流行率在其它组中比对照中的没有显著性增加。而B1等位基因同TS和 吸烟的相关性仅仅在没有Bonferroni校正下是显著的，但有些担心这 样一种校正可能不适当地增加了II型错误(Rothman，1990)。在三 个等级的TS中的B1/B1纯合性同B1/B2杂合性的hoc后分析中，注意到 37.1％的轻度、49％的中度以及62％的重度TS病例为B1/B2杂合子 (Mantel-Haenszel线性卡方＝6.25，p＝0.012)。

对照无、病例无、病例有。多基因群中的319个受试者中DβH Taq B1等位基因的流行率的结果示于表40中。ADHD为最显著，B1等位基因 流行率对于无物质滥用无ADHD的对照为47.1％，对于无ADHD的病例为 70.6％，而对具有ADHD的病例为81.9％(p＝0.0001)。其它显著的行为 变量依次为学习、小学、ADHD-R、违抗、抽动、燥狂、酒精、阅读、 药物滥用、睡眠、口吃以及强迫。总群的结果相似，也是ADHD最显 著。当在总群中仅检测男性时，睡眠为最显著(p＝.00005)，然后为 ODD(p＝0.002)和ADHD(p＝0.005)。

对B1携带者同B2B2携带者均值的T统计。表41-A显示当多基因群 限于对照和TS先证者时的结果。ADHD再一次位于列表的顶端而且是显 著的p＝0.020。唯一的其它显著行为是小学，p＝0.029。总群的显著结 果列于表41-B中。违抗行为、睡眠、ADHD和阅读在α＝0.05处是显著 的。为确定是否B1等位基因的纯合性(B1/B1)给出高于杂合子 (B1/B2)的平均行为评分，对于这两组所有行为评分的均值进行检 测。纯合子和杂合子对于任何的行为变量均没有显著的差别。

DAT1基因的10/10基因型。对于所检测的整个群的受试者的不同 DAT1等位基因的频率示于表42中。为简化分析，对Tourette综合征和 孤僻症以及行为障碍的不同种类将10/10基因型的流行率同10/x或x/x 基因型的流行率进行比较。在91个对照者中，37.4％携带10/10基因 型。其对于241个TS先证者增至52.3％(p＝0.015)。在轻度、中度和 重度TS受试者中没有显著性差别(p＝0.031)。对于TS先证者和TS亲 属的结果在经过Bonferroni校正后仍具有显著性。10等位基因频率的 检测给出相当的结果(表42中的最后两列)。

对照无、病例无、病例有。对于多基因群的319个受试者的这些 结果示于表43中。具有最高卡方值的变量为躯体化症状，21.1％的无 躯体化问题的对照携带10/10基因型，无躯体化问题的TS先证者或亲 属为46.8％，而具有躯体化问题的TS先证者或亲属为60.3％ (p＝0.02)。其它显著的变量依照卡方大小的次序为酒精、ADHD-R、 重度抑郁、惊恐、强迫、广泛焦虑以及燥狂。对于357个受试者的适 度增大的总群的显著结果示于表43的最后一列中。主要的差别为违 抗、性、阅读以及ADHD作为显著变量的加入。

对10/10基因型同非10/10基因型均值的T统计。当检测总群时， 那些具有10/10基因型的受试者，躯体化以及重度抑郁变量表现出显 著高的均值(表44-A)。对于多基因群的所有受试者没有变量是显著 的。对于多基因群，只有对照和TS先证者的结果在表44-B中给出。这 是在这三个的累加效应的检验中所用的群。此处下面的变量依次是显 著的：广泛焦虑、重度抑郁、ADHD-R、ADHD以及酒精。

所有三个多巴胺能基因的比较。对于所研究的在所有三个基因间 的每个行为评分的结果示于表45中。分组由那些遗传所有三个标志的 (组1)、3个中的2个(组2)、3个中的1个(组3)、以及3个中无一 (组4)所组成。同4个基因组表现出最显著线性相关的共发行为是 ADHD(p＝0.0002)。例如，ADHD评分对于那些遗传有3个标志中的3个 的为30.03，对于那些遗传有3个中的2个的为24.74，对于3个中1个的 为20.42，而3个中0个的为14.07。组4(3个中无一)的均值显著低于 组1和2的平均评分，而且组3的均值显著低于组1的。其次最显著的为 对口吃的评分—1.17、1.06、0.94和0.46(p＝0.0002)。对于组1到4 的违抗行为的评分分别为5.04、3.91、3.38和1.93(p＝0.023)。对 于品行障碍的评分分别为4.08、3.05、2.87和1.93(p＝0.023)。其 它显著的变量为抽动、强迫、燥狂、酒精以及广泛焦虑。虽然其它的 行为是不显著的，但20个中的16个表现出相同的具有较小遗传学负载 的渐进性线性降低。使用整个多基因群时结果是相似的，但具有略低 的显著性。

为进一步详细检测这些关系，最显著的行为评分ADHD被分为8组， 代表这三个基因标志的所有可能组合(表46)。这证实了累加性和减 性趋势。抽动评分也给出一个类似的分类。这些结果同那些4个基因 种类的相似而且对于相同的变量是显著的。

为检测结果某种程度上可能被对照的一个未知的方面所驱动的可 能性，只利用具有TS的受试者(先证者和亲属)重复分析。虽然变窄 的评分范围以及由此导致的较高的p值，ADHD、ADHD-R、躯体化和重 度抑郁是显著的p＜0.05，而品行、违抗以及燥狂是略微显著p＜0.07。 例如，组1到4对于ADHD评分的值分别为29.9、26.1、23.0和22.9 (p＝0.01)；对于品行评分为5.1、4.0、3.8和3.2；而对于违抗评分 为3.8、3.3、2.9和2.7。对于更显著行为变量的变异比例估计的结果 示于表47中。大体上，DRD2基因对变异贡献最大。对于同TS相关的主 要行为，3.0到7.6％之间的变异由三个多巴胺基因解释。

在本研究中，曾尝试消除可能是由于人种背景或其它相似障碍的 遗传学变异。这涉及下面几点。1.所有的受试者为非西班牙白种 人。2.不仅对对照筛选ADHD、药物、酒精和烟草滥用/依赖，而且通 过用于TS先证者和亲属的同样的结构化的工具对他们进行评价。这使 得具有所研究行为的对照被排除。这样做的巨大效应由以下事实所证 实：对于总群，对照的D2A1等位基因流行率中所得的变异为从35.0％ 到23.8％的范围之间，而在合格对照数目中的变异对于不同行为从67 到40。3.检测大量的受试者来避免II型错误。因此，DRD2座位，在 总群中研究了484个受试者，而对多基因群为319个。4.基于DIS，对 所有受试者给予相同的结构化精神病症状观察。TS为一种复杂谱系障 碍(Comings，1995d，Comings，1990)，而且其允许对许多不同行 为检测来测试D2A1等位基因可能同一些行为强相关而不与其他行为相 关的可能性，而不是依靠单一的两分诊断(TS或非TS)。5.TS先证 者、具有和没有TS的TS亲属以及对照的引入为待测的更宽范围的行为 评分提供了机会。6.为了消除关于不适当选择对照的担心，还在不 包括对照的情况下分析结果。7.由于个体可能具有较大程度的遗传 负载，包括而非有意排除具有共发病症的先证者。8.收集更多严重 患病的先证者而非集中在用于连锁研究类型的大家族，其中非先证者 患者通常更轻度患病。9.检测联合两个或多个基因对表型的效应， 在这种情况下为，DRD2基因的Taq A1等位基因、DβH基因的Taq B1等 位基因以及DAT1基因的10/10基因型。为完成这一步，在相同群的受 试者中检测所有三种基因。

多巴胺D2受体基因在TS先证者对其它组中的D2A1等位基因。如 在表36中所示，对于总群，41.7％的TS先证者携带D2A1等位基因，而 对于具有TS的亲属为35.0％，对于无TS的亲属为28.8％，对于无物质滥 用障碍的对照为26.9％。累进是显著性的，P＝0.0038。使用发明者的 对照的结果(26.9％)同在经筛选排除酒精和药物滥用/依赖的总共 714个非西班牙对照者中25.9％的D2A1等位基因流行率是没有区别的 (Comings等，1996e)。在发明者的TS先证者中的流行率(41.7％) 实际上也同由发明者和他人进行基因分型的总共432个TS受试者中的 40.7％没有区别。虽然这些结果同DRD2基因在TS中的作用一致，但它 们没有确定行为谱中的哪个部分主要受影响。为确定这一点，发明者 在“对照无”、“病例无”和“病例有”所研究行为的三个组中检测 D2A1等位基因的流行率。

检测了涉及冲动、强制、成瘾、情感、焦虑、睡眠以及学习行为 的20个不同的症状群(表37和38)。(21包括ADHD的双重评价)。同 D2A1等位基因显著相关的变量为性、口吃、强迫、分裂样、燥狂、 ADHD-R、抽动、ADHD、行为、违抗、酒精滥用、学习和睡眠问题。表 现出相同趋势的所有其它行为却是不显著的。对于总群，两个最显著 的(口吃和性)和最不显著的(恐怖症)行为的结果。对于多基因群 的卡方研究，燥狂行为是最显著的，而且在表中级别最高。这同发明 者在TS先证者亲属中的行为研究是一致的，其表明燥狂症状代表Gts 基因的最高形式的表达(Comings，1995d)。

当只检测TS先证者时，在D2A1等位基因的存在同抽动的严重性之 间缺少相关性，这同Devor(1992)和Gelernter等(1994b)的结果 一致。然而，当包括对照和非TS亲属时，抽动评分是显著的。此外， 当将病例根据其它行为分层时，D2A1等位基因同它们中的许多相关。

多巴胺β羟化酶。DβH Taq B1等位基因的流行率在352个TS先证 者中(70.5％)显著高于在148个对照中(60.8％)。表现出显著升高 的B1等位基因流行率的受试者的唯一其它组是吸烟者，为73.1％。

对于319个受试者的多基因群，同DβH B1等位基因显著相关的13个 变量依次为ADHD、学习、小学、ADHD-R、违抗、抽动、燥狂、酒精、 阅读、药物滥用、睡眠、口吃以及强迫。然而，对于它们中的几个， 特别是界限显著的那些(酒精、药物滥用、口吃、强迫)，B1等位基 因的流行率在无该行为的TS先证者和亲属中高于那些具有该行为的， 表明在对照中p值被较低的频率驱动。对于较大的455个受试者的总群 除了加入躯体化和重度抑郁以及无显著性的口吃外，结果是相似的。

对于多基因群，B1等位基因的流行率在对照中处于从46.9到56.5％ 的范围中。当对多基因群和总群的对照和TS先证者的行为评分的均值 都进行检测时，ADHD、小学、违抗和睡眠是显著的。发明者的研究证 实，违抗行为一贯比品行障碍同B1等位基因更显著相关。

为检测DAT1基因的可能作用，如在DRD2基因和DβH基因的研究中， 发明者在对照、TS先证者和TS受试者的亲属中对不同行为比较了 10/10基因型的流行率。这显示出同包括躯体化、酒精依赖、ADHD、 重度抑郁、强迫、广泛焦虑、燥狂、性和违抗障碍的共发病行为的多 个变量具有显著关联。

虽然本结果支持表明一种明显的生理学效应同DAT1基因的40bp重 复等位基因相关的Gelernter等(19904a)的那些结果，但发明者的 结果还提示精神病是同10等位基因而不是9等位基因相关。这由发现 在每个表现出显著效应的行为中9基因型的频率存在一个渐进性的降 低而进一步支持。例如，对于躯体化，9等位基因的频率由对照中的 0.37降低至无躯体化的亲属中的0.29，至具有躯体化的亲属中的 0.20，而10等位基因的频率在相同的组间由0.54增至0.70及0.77。有 趣的是，最常见等位基因10的频率在各种群的行为症状存在时似乎仍 然进一步增加。一个可能的解释是9等位基因根源上是正常的等位基 因，而10等位基因由于其同所列行为的一个或多个相关而通过筛选频 率增加了。

所有三个多巴胺能基因。为研究累加性和减性效应，要求发明者 从相当数量的相对严重患病的TS先证者、他们的亲属以及对照获得 DNA标本，而且需要对同一群受试者对所有基因进行分型。对319个样 本这样做了。一个先前的假设是两个策略之一可以提供更多的力度。 第一个策略涉及检测整个多基因群，包括大体未受累的亲属，来增加 力度。第二个策略是检测仅由对照和TS先证者组成的多基因群的亚 群。这可以提供最宽范围的评分以及严重性的更大的两分化。虽然两 种技术均给出阳性结果，但后者被证明更有效。结果表明对于除了4 个(躯体化、重性抑郁、睡眠和阅读)外的所有所检测行为的评分中 均存在一个从携带3个标志中的3的受试者到那些具有3个中2个、3个 中1个以及3个中0个的渐进的线性降低。

发明者推测TS和ADHD基本上是相同的遗传学障碍(Comings和 Comings，1984；Comings和Comings，1987a；Knell和Comings， 1993；Comings和Comings，1993)。当联合这三个多巴胺能基因时最 显著的两个行为是ADHD和抽动，这一证明为在分子遗传学水平上证实 了这种假设。同其它行为的显著相关性支持它们组成了一个遗传学相 互关联的行为谱这样的概念。其它基因的检测可以使表型倾向于较少 被多巴胺能基因所影响的方向上。对5-羟色胺水平有影响的色氨酸 2，3-二氧化酶基因是一个例子(Comings等，1996d)。没有发现三 个基因的线性累加效应以外的证据，即没有上位性的证据。

当通过列出这三个标志的所有可能组合来更详细检测同这三个基 因最显著相关的行为ADHD时，这些结果也同累加性和减性效应一致。 资料表明，三个基因的负载可以解释从无ADHD的诊断到明确的诊断的 一系列临床显著的评分。由于仍有一些受试者具有所有三个标志而无 ADHD症状以及一些没有三个标志中的任何一种却有清楚的ADHD，所以 很清楚还涉及其它基因。因此，对TS和ADHD的筛选可以包括已经被证 明参与这些障碍的其它基因的等位基因变体。

并非所有的行为评分表明同八个置换中每个都有这种程度的相关 性。为证明这一点，对于抽动的评分，同种类型二分化的结果示于表 46中。虽然在抽动的评分中不同的置换均也有一个大致而显著的线性 降低，D2A1等位基因阳性而DβH B1和DAT1 10/10基因型阴性的受试 者表现出明显的不连续性，均值为5.0。这是一个由于在每组中相对 小量的受试者的统计学异常，或者DRD2等位基因对抽动具有比其它基 因强的效应的提示，必须等待进一步的研究。DRD2基因本身的研究表 明同抽动严重性的显著性关联。

目前发现口吃本身排级仅低于ADHD而高于抽动，支持口吃是Gts基 因的另一个表现这个推测。关于品行和违抗障碍的这些观察同通常认 为的这两个行为障碍完全是由于社会心理因素(包括抚养差)的假设 是对立的。虽然没有人能够怀疑合格抚养的非常重要的作用，但当抚 养形式或环境因素没有毛病时，遗传学因素可能在品行和违抗障碍中 发挥重要的作用。

多巴胺基因解释的变异比例。利用多元线性回归分析对相关系数 的计算使得可以对由这三个多巴胺能基因所解释的不同行为变异比例 进行估计。对于所有三个基因，其说明从ADHD评分7.6％的变异到对口 吃1.3％的变异范围(表47)。为获得三个基因的相对重要性的估计， 合计所有行为变量的r2值。这表明三个基因的相对重要性为DRD2、 DAT1和DβH基因大约的比例分别是3∶2∶1。这个结论由这样的事实所 支持：对于DRD2，基因r对八个行为变量(品行、燥狂、分裂样、小 学、抽动、OCD、ODD和恐怖症)是显著的，对于DAT1基因，r对三个 变量(抑郁、广泛焦虑和酒精滥用)是显著的。虽然对于DβH基因r对 任一变量都不是显著的，但具有最高值的三个为ADHD、ODD、品行、 阅读和学习障碍。这些结果还为不同基因和基因的组合在表型将如何 被表达中发挥作用的认识提供支持(Comings，1995a)。例如，所有 三个基因大约均等地参与ADHD和ODD，而在品行障碍中的参与则为 DRD2＞DβH＞DAT1。对于学习和阅读，顺序为DβH＞＞DAT＞DRD2。

由于对于慢性抽动在全等双生儿中的一致率低于100％(Price等， 1985)，所以一部分变异(大约10到20％)是出于环境的因素。用于 DRD2和DβH基因的Taq多态性并不是负责基因功能变化的序列改变，而 仅仅是同功能突变的连锁不平衡，这些变异百分比的估计可能被低估 了，即如果检测了功能突变本身它们可能会更高。最后，这些估计代 表包括所有病例、对照和先证者的平均值，不论他们是否具有所研究 的行为。例如，仅有282个病例中的41个或14.5％具有口吃的问题，而 43.7％具有品行问题。由实际上具有所研究行为的那些所解释的变异 百分比可能高得多。

这些结果同这些障碍的多基因、多因素特性是一致的。虽然对于 “对照无”、“病例无”和“对照有”具有显著的相关性，但由这三 个基因所解释的变异的相对低的比例说明为什么连锁分析是无结果 的，以及这种关联方法对多基因有多敏感。

                        表35

              不同受试者组的年龄和性别 年龄组           N                平均年龄              S.D. TS先证者        225               16.83                 12.11 具有TS的亲属    60                27.72                 14.73 没有TS的亲属    132               38.07                 11.95 对照            67                42.31                 14.86 合计            484 性别细          N男性        N女性        N总数          ％男性 TS先证者        188          37           225            84 具有TS的亲属    37           23           60             62 没有TS的亲属    51           81           132            39 对照            27           40           67             40 合计                                      484

                          表36

       各种受试者分类中D2A1等位基因的流行率 分类                  N    A1A1    A1A2    A2A2    ％A1      频率      x2* A.多基因群(n＝319) TS先证者              142    9      50      83     41.5      0.24 具有TS的亲属          39     0      11      28     28.2      0.14 没有TS的亲属          104    4      24      76     26.9      0.15 对照                  34     1      7       26     23.5      0.14      6.99 B.总群(n＝484) TS先证者              225    13     81      131    41.7      0.24 具有TS的亲属          60     2      19      39     35.0      0.19 没有TS的亲属          132    4      34      94     28.8      0.16 对照                  67     3      15      49     26.9      0.16      8.35 *基于D2A1流行率的Mantel-Haenzel线性卡方

                             表37

     对多基因群，D2A1等位基因同各种共发病行为的相关性 评分             对照         病例           病例

             无           无             有     x2*     p*        总群的p*

             N            ％             N      ％       N          ％ 躁狂             33           21.2           216    28.7     69         52.2    13.47    0.00024    0.0017 违抗             34           23.5           206    29.6     79         46.8    8.31     0.0039     0.0274 性               27           25.9           204    28.4     88         46.6    8.19     0.0042     0.0007 ADHD-R           34           23.5           210    30.5     75         45.3    6.63     0.010      0.0085 分裂样           32           25.0           194    30.4     88         44.3    5.92     0.015      0.0016 ADHD             34           23.5           163    30.1     116        41.4    5.42     0.020      0.0110 抽动             34           23.5           104    26.9     181        38.7    5.27     0.022      0.0088 重性抑郁         25           24.0           176    30.1     109        41.3    4.70     0.030      N.S. 品行             26           23.1           161    30.4     124        39.5    3.93     0.047      0.0135 强迫             32           21.9           216    32.4     69         40.6    3.59     0.059      0.0013 阅读             18           16.7           116    31.0     169        36.7    3.01     0.082      N.S. 学习             29           20.7           190    32.6     95         37.9    2.70     0.100      0.041 睡眠             28           21.4           202    32.7     83         38.6    2.64     0.103      0.049 评分             对照        病例            病例

             无          无              有        x2*     p*        总群的p*

             N           ％              N         ％       N          ％ 惊恐发作         28          21.4            178       32.6     100        38.0       2.58       0.107    N.S. 口吃             33          21.2            241       32.8     41         39.0       2.53       0.111    0.0008 酒精滥用         34          23.5            262       33.6     23         43.5       2.53       0.111    0.037 恐惧症           23          17.4            182       33.0     103        36.9       2.40       0.120    N.S. 药物滥用         34          23.5            258       33.7     27         40.7       2.09       0.147    N.S. 躯体化           19          26.3            154       32.5     78         39.7       1.78       0.182    N.S. 广泛焦虑         26          15.4            226       35.4     67         32.8       0.98       0.322    N.S. 小学             30          23.3            187       34.2     88         34.1       0.60       0.436    N.S.

对照无＝没有酒精或药物或烟草滥用/依赖以及没有所研究行为的对照

病例无＝没有所研究行为的TS先证者和TS亲属

病例有＝具有所研究行为的TS先证者和TS亲属

*Mantel-Haenszel线性卡方或基于Mantel-Haenszel线性卡方的p值。

                      表38

      对D2A1携带者和D2A2A2携带者间平均行为评分的比较 A.多基因群，对照，TS亲属和TS先证者(N＝319，D2A1＝106，D2A2A2＝213) 评分                |-----D2A1-----|    |-----D2A2A2-----|        t       p         总群p*

                 均值      S.D.      均值         S.D. ADHD                 20.77    13.22      15.53       13.60       3.28     0.001     0.003 躁狂                 2.00     2.49       1.16        1.83        3.19     0.002     0.003 ADHD-R               4.97     4.42       3.40        4.30        3.02     0.003     0.012 品行                 3.01     2.39       2.24        1.99        2.87     0.005     N.S. 抽动                 3.05     3.74       1.92        3.00        2.70     0.008     0.042 违抗                 3.11     3.22       2.22        2.79        2.44     0.016     N.S. 分裂样               1.66     2.19       1.11        1.34        2.41     0.017     0.007 性                   0.78     1.33       0.46        0.96        2.19     0.030     0.017 强迫                 2.90     3.05       2.28        2.64        1.79     0.074     0.009 药物                 0.59     1.68       0.34        1.24        1.34     0.181     N.S. 躯体化               2.62     3.31       2.11        2.87        1.24     0.217     0.048 学习                 0.57     0.89       0.45        0.81        1.17     0.245     N.S. 重性抑郁             3.76     3.09       3.35        3.01        1.13     0.260     N.S. 评分           |-----D2A1-----|          |----D2A2A2---|          t         p        总群p*

            均值          S.D.       均值           S.D. 口吃            0.16          0.37       0.11           0.32      1.11    0.268      0.002 恐惧症          2.61          2.82       2.28           2.74      1.00    0.319      N.S. 惊恐            3.17          2.20       2.94           2.07      0.92    0.360      N.S. 阅读            1.78          1.93       1.57           1.99      0.91    0.365      N.S. 睡眠            0.47          0.79       0.39           0.79      0.77    0.443      N.S. 小学            2.75          1.93       2.57           1.95      0.75    0.457      N.S. 酒精            0.60          2.27       0.41           1.93      0.72    0.471      N.S. 广泛焦虑        0.23          0.43       0.21           0.41      0.40    0.692      N.S.

*总群：N＝417，D2A1＝153，D2A2A2＝264 B.只有总群、TS亲属和TS先证者(N＝417，D2A1＝153，D2A2A2＝264) 评分        |-----D2A1-----|           |-----D2A2A2----|        t           p         总群p*

         均值         S.D.         均值         S.D. 躁狂         2.03         2.48         1.37         1.94         2.83      0.005 品行         3.15         2.36         2.50         2.13         2.82      0.005 分裂样       1.81         2.24         1.22         1.74         2.80      0.006 口吃         0.24         0.43         0.13         0.34         2.69      0.008 ADHD         22.26        12.87        18.71        12.94        2.60      0.010 强迫         3.24         3.11         2.48         1.69         2.51      0.013 躯体化       2.93         3.51         2.01         2.70         2.49      0.014 性           0.80         1.29         0.50         1.00         2.44      0.015 ADHD-R       5.28         4.46         4.36         4.62         1.99      0.048 抽动         3.11         3.54         2.52         3.32         1.67      0.096 C.只有多基因群、对照和TS先证者。 评分        |-----D2A1-----|       |-----D2A2A2-----|        t         p      总群p*

        均值        S.D.        均值        S.D. 品行        3.65        2.47        2.64        2.10        2.80     0.006 狂躁        2.31        2.50        1.40        1.95        2.54     0.012 ADHD        25.57       12.16       21.23       14.53       2.12     0.036 抽动        4.25        3.88        3.06        3.44        2.06     0.042 分裂样      1.91        2.58        1.20        1.53        2.02     0.046 强迫        3.40        3.24        2.44        2.80        2.01     0.047 违抗        4.31        3.27        3.30        3.17        2.01     0.046

                       表39

     在各种精神障碍中DβH Taq B等位基因的普遍性 障碍                  N            11          12          22     ％1     O.R.           freq1    x2* 对照                  148          21          69          58     60.8                   0.37 经筛选的对照          51           6           21          24     52.9                   0.32 TS                    352          71          177         104    70.5    1.54           0.45    6.29 轻度                  35           6           13          16     54.3    0.76           0.36    0.014 中度                  251          58          123         70     72.1    1.67           0.48    7.24 重度                  66           7           41          18     72.7    1.72           0.42    4.82 ADHD                  78           18          39          21     73.1    1.75           0.48    5.46 酒精中毒              23           3           13          7      69.6    1.47           0.41    1.77 孤僻症                40           6           21          13     67.5    1.34           0.41    1.95 抑郁                  28           6           8           14     50.0    0.64           0.36    0.06 药物滥用              29           2           17          10     65.5    1.22           0.36    1.18 赌博者                111          11          56          44     60.4    0.98           0.35    0.78 吸烟者                104          29          47          28     73.1    1.75           0.51    6.18 合计                  913 *在筛选的对照(无酒精、药物或烟草滥用/依赖)和所研究障碍间B1等位基因流行率的比较 O.R.＝奇比率 Bonferroni校正的α＝0.05/8＝0.0065。

                      表40

   对多基因群，在对照、TS先证者和亲属中的DβH Taq B1等位基因(11+12基因型) 评分             对照无              病例无          病例有            x2*        p

          N        ％        N         ％      N       ％ ADHD          34       47.1      163       70.6    116     81.9        15.14    0.00010 学习          29       48.3      190       72.6    95      81.1        10.13    0.0014 小学          30       46.7      187       72.2    88      79.5        9.48     0.0021 ADHD-R        34       47.1      210       74.3    75      78.7        8.52     0.0035 违抗          34       47.1      206       74.8    79      77.2        7.21     0.0070 抽动          34       47.1      104       75.0    181     75.7        7.17     0.0074 躁狂          33       48.5      216       75.0    69      76.8        6.02     0.014 酒精          34       47.1      262       76.0    23      69.6        5.92     0.018 阅读          18       44.4      116       73.3    169     76.9        5.42     0.019 药物滥用      34       47.1      258       76.0    27      70.4        5.33     0.021 睡眠          28       53.6      202       74.3    83      78.3        4.63     0.031 口吃          33       48.5      241       76.3    41      73.2        4.56     0.032 强迫          32       46.9      216       75.9    69      73.9        4.33     0.037 分裂样        32       50.0      194       76.8    88      73.9        2.94     0.086 评分            对照无                病例无                病例有           x2*           p

        N           ％        N            ％        N         ％ 躯体化      19        47.4        154        76.0        78      75.6        2.62         0.105 惊恐发作    28        50.0        178        76.4        100     74.0        2.43         0.119 重性抑郁    25        52.0        176        75.6        109     75.2        2.40         0.121 品行        26        50.0        161        77.0        124     73.4        1.61         0.203 性          27        55.6        204        74.5        88      72.7        1.12         0.288 恐惧症      23        56.5        182        76.4        103     73.8        0.70         0.401 广泛焦虑    26        53.8        226        75.2        67      70.1        0.62         0.430

                         表41 DβH Taq B1携带者和B2B2携带者间平均行为评分的比较 评分          |-----B1-----|        |-----B2B2-----|           t          p

          均值          S.D.     均值        S.D. A.多基因群、对照和TS先证者。(N＝176，B1＝124，B2B2＝52) ADHD         24.48         13.57    19.07       12.72        2.37        0.020 小学         3.26          1.96     2.55        1.88         2.22        0.029 B.总群，对照和TS先证者(N＝292，B1＝207，B2B2＝85) 违抗         4.16          3.19     3.08        3.12         2.68        0.008 睡眠         0.63          1.03     0.36        0.70         2.60        0.010 ADHD         25.17         13.73    20.86       14.66        2.31        0.023 阅读         2.14          2.04     1.57        2.09         2.11        0.037

                           表42

       不同患者组中DAT1 40bp重复多态性基因型

               的流行率以及等位基因的频率   受试者          N     6/6       8/9     9/9      8/10  9/10   10/10   9/11   10/11     11/12    ％10/10    O.R.      f9    f10     x2*      p         x2**        p   对照            91    1         0        12       0     40      34      1      3          0      37.4                     0.36     0.61 Tourette综合症    241   2         1        15       0     92      126     0      4          1      52.3      1.84     0.25  0.72     5.89     0.015      7.93       0.0048   轻度            15    0         0        2        0     5       8       0      0          0      55.3      1.92     0.25  0.74     1.37     N.S        1.75       0.184   中度            132   0         1        5        0     56      66      0      3          1      50.0      1.92     0.30  0.70     3.47     0.062      4.27       0.039   重度            94    2         0        8        0     31      52      0      1          0      53.3      2.08     0.25  0.72     5.99     0.014      5.15       0.023   TS亲属          103   0         0        7        0     37      57      0      2          0      55.3      2.08     0.25  0.72     6.27     0.012      5.43       0.019   孤僻症          36    0         0        2        1     12      21      0      0          0      58.3      2.35     0.22  0.75     4.62     0.032      4.63       0.031   合计            471

O.R.＝奇比率

*在对照和所研究受试者间10/10基因型流行率比较的卡方

***在对照和所研究受试者间10等位基因频率比较的卡方

Bonferron；校正的α＝0.05/3＝0.017。

                              表43 多巴胺转运蛋白10/10基因型同各种共发病行为的关联(1＝10/10基因型) 评分         对照无         病例无         病例有       x2*           p*       群的p*

        N      ％1     N      ％1     N     ％1 躯体化     19     21.1    154    46.8    78    60.3    9.51           0.0020      0.0009 酒精       34     35.3    262    50.4    23    69.6    6.37           0.011       0.0027 ADHD-R     34     35.3    210    49.5    75    58.7    5.02           0.024       0.004 重性抑郁   25     24.0    176    50.0    109   55.0    5.39           0.020       0.006 惊恐       28     28.6    178    50.0    100   55.0    4.53           0.033       0.010 强迫       32     31.3    216    50.5    69    56.5    4.59           0.032       0.010 广泛焦虑   26     26.9    226    50.9    67    56.7    4.94           0.026       0.011 躁狂       33     33.3    216    50.5    69    56.5    4.07           0.044       0.012 违抗       34     35.3    206    50.5    79    55.7    3.32           0.068       N.S. 性         27     33.3    204    50.0    88    55.7    3.41           0.064       0.013 阅读       18     38.9    116    49.1    169   53.8    1.63           0.201       0.043 ADHD       34     35.3    163    51.5    116   53.4    2.29           0.129       0.049 睡眠       28     35.7    202    50.5    83    55.4    2.66           0.102       N.S. 口吃       33     33.3    241    52.3    41    51.2    1.96           0.164       N.S. 评分          对照无         病例无        病例有          x2*         p*     群的p*

         N     ％1     N     ％1     N     ％1 药物滥用    34    35.3    258    51.9    27    51.9       1.99          0.158    N.S. 学习        29    37.9    190    51.1    95    53.7       1.56          0.210    N.S. 抽动        34    35.3    104    55.8    181   49.7       0.49          0.482    N.S. 分裂样      32    37.5    194    52.6    88    51.1       0.78          0.370    N.S. 小学        30    36.7    187    52.4    88    47.7       0.19          0.659    N.S. 品行        25    34.6    161    54.0    124   49.2       0.21          0.644    N.S. 恐惧症      23    21.7    182    54.9    103   46.6       0.40          0.525    N.S.

*Mantel-Haenszel线性卡方或基于Mantel-Haenszel线性卡方的p值。

                    表44

       对照和病例中平均行为评分的比较 评分       |-----10/10-----|        |-----10/x x/x-----|          t         p

        均值         S.D.        均值           S.D. A.总群，对照、TS先证者和他们的亲属 (N＝357，10/10＝182，10/x，r/x＝175) 躯体化      2.69         3.30        1.94          2.68         2.11        0.036 重性抑郁    3.87         3.05        3.20          2.98         2.11        0.036 B.多基因群，只有对照和TS先证者 (N＝176，10/10＝85，10/x，x/x＝91) 广泛焦虑    0.33         0.47        0.16          0.37         2.55        0.012 重性抑郁    4.00         3.04        2.87          2.83         2.53        0.012 ADHD-R      6.60         4.75        4.91          4.45         2.43        0.016 ADHD        25.44        13.94       20.42         13.28        2.43        0.016 酒精        0.68         2.46        0.09          0.70         2.11        0.037

                         表45

         对照和TS先证者行为评分均值的比较 行为              组            均值            S.D.        F比        p** ADHD              1             30.04           10.97

              2             24.74           13.53

              3             20.42*         13.77

              4             14.07*#        13.11       14.77      0.0002 口吃              1             1.17            0.49

              2             1.06            0.55

              3             0.94            0.62

              4             0.46*#        ^0.64        14.61      0.0002 ADHD-R            1             7.75            4.18

              2             6.43            4.74 行为           组          均值          S.D.       F比        p**

           3           4.82*        4.53

           4           3.53*        4.12       9.87       0.0020 违抗           1           5.04          3.05

           2           3.91          3.20

           3           3.38          3.25

           4           1.93*        2.84       9.56       0.0023 抽动           1           4.95          4.41

           2           3.71          3.30

           3           3.28          3.65

           4           1.40*        2.97       9.56       0.0023 品行           1           4.08          2.51

           2           3.05          2.35

           3           2.87          2.23

           4           1.93*        1.22       8.61       0.0038 强迫           1           3.37          3.51

           2           3.02          3.03

           3           2.75          2.91

           4           1.13          1.99       5.48       0.020 躁狂           1           2.29          2.52

           2           2.11          2.22

           3           1.40          2.12

           4           0.87          1.59       5.21       0.024 酒精           1           1.21          3.45

           2           0.35          1.70

           3           0.20          1.07

           4           0.00          0.00       4.50       0.035 广泛焦虑       1           0.33          0.48

           2           0.29          0.46

           3           0.20          0.40

           4           0.07          0.25       4.39       0.038 行为         组             均值          S.D.         F比         p** 惊恐          1             3.45          2.39

          2             3.37          2.44

          3             2.97          2.15

          4             2.13          1.12         3.79        0.053 分裂样        1             1.91          2.88

          2             1.66          2.24

          3             1.26          1.45

          4             0.78          1.42         3.41        0.067 睡眠          1             0.83          1.04

          2             0.64          0.86

          3             0.44          0.89

          4             0.46          0.74         2.10        0.149 性            1             1.12          1.96

          2             0.62          1.13

          3             0.58          1.16

          4             0.53          0.99         2.01        0.158 药物          1             0.87          2.29

          2             0.34          1.32

          3             0.34          1.32

          4             0.20          0.77         1.92        0.168 重性抑郁      1             3.83          3.07

          2             2.91          2.10

          3             2.94          2.79

          4             2.80          2.93         1.88        0.173 学习          1             0.87          0.99

          2             0.80          0.90

          3             0.78          1.03

          4             0.47          0.74         1.67        0.197 惊恐          1             2.83          2.82

          2             2.67          2.81 行为            组           均值         S.D.         F比         p**

            3            2.41         2.79

            4            2.00         1.96         1.00        0.318 小学            1            3.33         2.00

            2            3.09         1.97

            3            2.97         2.02

            4            2.80         1.74         0.71        0.399 躯体化          1            3.09         3.02

            2            2.68         3.74

            3            1.69         2.14

            4            2.69         4.02         0.43        .525 阅读            1            2.00         1.88

            2            1.98         1.98

            3            2.10         2.23

            4            1.86         2.41         0.02        .893

组1＝D2A1+，DβHB1+，DAT1 10/10+n＝24

组2＝3个中的2个+n为67

组3＝3个中的1个+n＝70

组4＝D2A1-，DβHB1-，DAT1 10/10-n＝15，合计176

*通过Tukey检验于α＝0.05处同组1显著不同。

#通过Tukey检验于α＝0.05处同组2显著不同。

^通过Tukey检验于α＝0.05处同组3显著不同。

_利用ANOVA对4个基因组的线性对比的F-比

**基于F-检验的p值

                     表46

         通过是否DRD2、DβH和DAT1等位基因的所有、

       一些或无一存在比照一些行为的平均行为评分

基因组合       N               均值               S.D.

ADHD评分 D2+DβH+DAT1+      24              30.04              10.97 D2+DβH+DAT1-      22              25.04              12.72 D2-DβH+DAT1+      34              25.91              14.83 D2+DβH-DAT1+      11              20.54              10.75 D2+DβH-DAT1-      10              21.50              12.90 D2-DβH+DAT1-      43              19.96              13.20 D2-DβH-DAT1+      16              20.94              16.38 D2-DβH-DAT1-      14              14.07              12.10 抽动评分 D2+DβH+DAT1+      24              4.95               4.40 D2+DβH+DAT1-      22              4.00               3.18 D2-DβH+DAT1+      34              3.91               3.59 D2+DβH-DAT1+      11              2.54               2.54 D2+DβH-DAT1-      10              5.00               4.96 D2-DβH+DAT1-      44              2.84               3.31 D2-DβH-DAT1+      16              3.43               3.52 D2-DβH-DAT1-      15              1.40               2.97

                            表47

        多元线性回归分析以及由DRD2、DβH和DAT1

        解释的变异的比例；仅有对照和TS先证者 行为评分              DRD21                DβH            DAT1          合计

                r       r2         r        r2     r      r2     ％* 品行              0.217#    0.047     0.114    0.013   0.030   0.0009    6.0 躁狂              0.197#    0.039     0.055    0.0003  0.084   0.0007    5.0 行为评分        DRD21           DβH             DAT1            合计

        r         r2     r        r2    r        r2      ％* 分裂样     0.169#   0.028   0.046   0.0021   0.048    0.0023     3.3 小学       0.165#   0.026   -0.025  0.0006   0.0004   0.0000     2.9 抽动       0.155#   0.024   0.109   0.0118   0.108    0.0116     4.7 OCD        0.153#   0.023   0.040   0.0016   0.066    0.0043     3.0 ODD        0.149#   0.022   0.136   0.0184   0.108    0.0117     5.2 恐怖症     0.149#   0.022   -0.041  0.0016   0.016    0.0002     2.5 性         0.142    0.020   -0.023  0.0005   0.061    0.003      2.6 广泛焦虑   0.141    0.020   -0.053  0.0028   0.180#   0.032      5.9 ADHD       0.125    0.016   0.166   0.0275   0.186    0.0346     7.6 惊恐       0.123    0.015   0.004   0.0000   0.113    0.0128     3.0 药物       0.104    0.011   0.047   0.0022   0.024    0.0006     1.4 口吃       0.086    0.007   -0.005  0.0000   0.067    0.0045     1.3 躯体化     0.080    0.006   0.035   0.0012   0.075    0.0056     1.4 酒精       0.073    0.005   0.050   0.0025   0.160#   0.025      3.4 抑郁       0.070    0.005   -0.023  0.005    0.183#   0.033      4.1 睡眠       0.041    0.002   0.088   0.0077   0.119    0.014      2.3 学习       -0.013   0.0002  0.125   0.0156   0.040    0.016      1.7 阅读       -0.063   0.004   0.127   0.0161   -0.049   0.002      2.4 合计                0.32            0.11     0.20 *基于来自所有三个基因的多个r的r2。 #p＜0.05

                     实施例7

       在成瘾行为中的多巴胺D1受体基因 方法

所检测的三个组为Tourette综合征(TS)组、戒烟组以及病理性 赌博组。所有三个组中的受试者限于非西班牙白种人。

TS组。这组包括无酒精或药物滥用的对照、其中大部分被多种相 关的行为障碍严重影响的TS先证者(Comings，1995b；Comings， 1990a)以及TS先证者的亲属。所有均符合TS的DSM-IV标准，而且对 所有人均进行个人会见。TS组的对照由TS先证者的养父母和继父母、 具有非精神障碍的受试者以及职业的和非职业的医院工作人员。TS受 试者和对照均在他处被详细描述(Comings等，1996f；Comings， 1995b；Comings，1994b；Comings，1994c；Comings，1995a)。

行为评分。每个对照和TS先证者或亲属均要求填写一个基于诊断 性会面程序表(Robins等，1981)或一系列障碍的DSM-III-R标准 (美国精神病联合会，1987)的调查表。将症状分为23个不同的数量 变量，评价同注意缺陷多动障碍(ADHD)(2分)、酒精、药物、强 迫行为、学习障碍、阅读问题、赌博、燥狂症状、恐怖症、惊恐发 作、违抗行为、品行障碍、小学中的学习问题、吸烟、性行为、分裂 样、躯体化、抑郁、睡眠障碍、广泛焦虑、口吃和抽动相关症状的数 目。用于这些行为评分的问题已经在他处被详细描述(Comings， 1995a；Comings，1994a；Comings，1994b；Comings，1995b； Comings，1996a；Robins等，1981；Comings，1995c)。检测共发 病行为的原则同在实施例2中所描述的相同。

尤其同本研究相关的一些症状涉及烟草、酒精和药物滥用、强迫 进食以及赌博。酒精评分由对于酒精滥用的MAST测试的8个问题的 “不”或“是”回答的总和所组成(Comings，1994b；Comings， 1990a)。药物评分基于对9个关于药物滥用/依赖的诊断性会面程序 表(Robins等，1981；Comings，1994c)的问题的“不”或“是”的 回答。吸烟变量基于如下问题，“你曾每天吸香烟、雪茄或烟斗超过 一个月或更多吗？”其中“是”评分为1而“否”评分为0。对于购物 变量的评分基于对下列问题的回答的总和：“你曾买过多于你真正需 要买来满足你需要的东西吗？你曾由于买超出你能负担的东西而陷入 经济困难吗？你曾加起在你所有信用卡上的总余额而大于你每月净收 入吗？你曾购物来填补一种空虚感吗？你曾购物来获得一种快乐的感 觉吗？你曾拿东西而未付款吗？”。“无”的回答评分为0，“偶 尔”的回答为1，而“经常”的回答为2。赌博评分来自同在前面如 “赌博评分”所描述的赌博严重性相关的九个“是”或“不”问题 (Comings等，1996e)。强迫进食的评价是基于对问题“你曾认为你 自己是一个强迫进食者吗？”的“是”或“不”的回答。

戒烟组。第二组由到戒烟诊所的个体组成。这些受试者以及他们 自身独立的对照群在以前的一个DRD2基因在吸烟中作用的研究中已经 被更详细地描述(Comings等，1996a)。此处对于吸烟评价的变量为 每天所吸香烟的平均包数。筛选对照来排除包括酒精、烟草和其它药 物的所有类型的物质滥用。

病理性赌博。第三组由来自以前的一个关于DRD2基因在病理性赌 博中作用的研究的病理性赌博者组成。患者确证和评价的细节已经在 他处被详细描述(Comings等，1996e)。

基因分型。为检测DRD1基因，发明者利用由在5’UTR中的A到G改 变组成的、通过如前所述的PCRTM步骤检测的DdeI多态性(Cichon 等，1994a)。对于DRD2基因的标志是TaqI A1/A2多态性(Grandy 等，1989)。

统计学分析。在TS组中，利用SPSS统计学软件包(SPSS公司，芝 加哥，伊利诺尹州)的ANOVA统计学程序对具有不同基因型的受试者 的行为评分均值进行比较。当检测两个组以上时，用Turkey分析测试 在任何各组间显著的个体差异。在预期在不同基因型间不同评分的均 值中有渐进性增加的情况下，通过在SPSS统计学软件包中设置子命令 多项式＝1来进行线性ANOVA。基于ANOVA分析的结果，进行卡方分析来 比较在下面的三个不同组中同最高平均行为评分相关的基因型的频 率。第一个由没有被测行为的对照组成。由于对照也需要填写一个或 多个调查表，所以确定是否在对照中存在或缺少特定行为是可能的。 对于TS组，如在前面的研究中所描述的(Comings，1995b)，在对照 和受试者中某种行为的存在或缺少是基于两分断点的。没有给定行为 的对照被称为“对照无”。相同的两分断点使得TS先证者和他们的亲 属被分成两组，没有被测的特定行为的那些和具有那种行为的那些。 这些组被称为“病例无”和“病例有”，并形成第二和第三组。已有 的假设为如果在一给定基因型和所研究行为间有显著的相关性，那么 该基因型的频率在这三组中应有一个渐进性的增加。“病例无”和 “病例有”组的利用控制了那种基因型的频率在TS受试者中可能由于 与所检查行为以外的某一行为相关而增加的可能性。由于发明者推测 在这三组中基因型的频率可能有渐进性的增加，所以使用了线性卡方 检验(在SPSS统计学软件包中的Mantel-Haenszel检验)。为确定结 果在三组中部分符合线性的增加，发明者还要求被测基因型的频率在 “病例有”中比在“病例无”组中至少高20％。如在TS中的多巴胺能 基因研究中一样(Comings等，1996f)，发现回归分析在确定由一特 定基因解释的不同行为评分的变异百分比中是有帮助的。这提供了 r，而r2提供由那个基因解释的一给定数量性状的变异分数。

多元分析的校正。由于在TS组中检测了23个不同的行为，所以在 显著性的水平中进行调整是需要的。虽然0.05的α值可能是太自由 了，但0.05/23或0.002的α值被认为太保守。因此选择一个中间的 0.05/10或0.005的α值。由于利用先前假设的戒烟组的研究基于在TS 组中的结果，并且要检查单一变量：每天抽烟的包数，所以利用了 0.05的α值。最后，由于病理性赌博者的检测只涉及基因型频率的比 较，所以利用了0.05的α值。 结果

TS组。对于对照(n＝61)，DdeI多态性的等位基因频率对1等位基 因为0.34，而对于2等位基因为0.66。对于TS先证者(n＝227)，等位 基因的频率对1等位基因为0.37，而对于2等位基因为0.63。这些没有 显著性差别，x2＝0.43，d.f.＝1，p＝0.51。对于对照和TS组，DdeI多 态性的基因型分布示于表48-A中。11基因型存在于4.9％的对照以及 17.5％的TS组中，x2＝3.75，d.f.＝1，p＝0.053。在携带11或者22基因 型的那些中百分比的差别为在对照中的41.3％以及TS先证者中的 57.3％。这是显著的，x2＝5.08，d.f.＝1，p＝0.024。

在前面DRD2基因的TaqI A1/A2等位基因的研究中，已经观察到很 大范围的定量评分对12杂合子表现出最高的评分，对22纯合子为中等 的评分，而对11纯合子则为最低评分。基于这些研究，检测在三个受 试者组中12杂合子的百分比。这些对于TS组的结果示于表48-B中。73 个对照者中，19.2％为12杂合子，而345个TS先证者中则35.3％为杂合 子，x2＝7.19，d.f.＝1，p＝0.073。

通过检测DRD1 DdeI 11或22等位基因纯合的以及DRD2 TaqI A1/A2 等位基因杂合的受试者的百分比来测试在DRD1和DRD2基因间的相互作 用。各自的数值为对照17.9％而TS先证者为33.2％，x2＝5.71， d.f.＝1，p＝0.016。

通过ANOVA检测在DdeI基因型和23个数量性状变量间的相关性(表 49)。虽然在α＝0.005处无一是显著的，但对于酒精评分的p值为 0.0096。在p值＜0.20的七个评分中，五个同成瘾行为—酒精滥用、吸 烟、强迫进食、赌博和购物相关。那些具有11基因型的具有最高评 分。例如，对于酒精滥用变量，那些具有11基因型的具有1.30的平均 评分，与之相比，那些具有12基因型的为0.23，那些具有22基因型的 为0.42。在总共23个变量中，那些携带有11基因型的除了学习障碍和 躯体化外所有的变量具有最高的均值。

以这些结果为基础，发明者然后检测了在“对照无”、“病例 无”和“病例有”的三个组间对于不同行为11基因型的频率是否存在 渐进性增加(表50)。有三种行为在α≥0.005处线性增加是显著的， 而且其中11基因型的频率在“病例有”中比在“病例无”组中高至少 20％。依照显著性的顺序，这些是赌博、酒精滥用和强迫购物。例 如，对于赌博评分，11基因型的流行率由无赌博问题的对照的4.6％增 加至无赌博问题的病例的15.5％，至有赌博问题的病例的33.3％ (p＝0.00095)。当用α≥0.005时，三个额外的变量—药物滥用、强 迫进食和吸烟均同成瘾行为相关。

对于两种行为—赌博和酒精滥用，单变量回归分析(表51-A)于p ≥0.005处是显著的。α≥0.05，另外四个变量为强迫进食、吸烟、抽 动和阅读。其次最显著的行为是购物。基于对DdeI多态性的r2，DRD1 基因贡献赌博评分的3.6％，酒精评分的2.8％，强迫进食评分的1.9％以 及吸烟评分的1.6％。

通过多变量回归分析检测DRD1和DRD2基因潜在的相互作用之前， 发明者基于TaqI A1/A2多态性，利用单变量回归分析首先检测了DRD2 基因的效应。携带有DRD2 11和22纯合子的受试者评分为1，而12杂合 子评分为2。于α＝≥0.005处，DRD2基因同违抗行为、品行障碍、强迫 进食、吸烟、赌博和ADHD显著相关(表51-B)。于α≥0.05处，额外 的变量为燥狂、口吃、强迫以及分裂样行为。基于r2值，Taq A1等位 基因的杂合性负责违抗评分变异的4.2％，品行障碍评分变异的3.8％， 进食评分的4.1％，吸烟评分的3.3％以及赌博评分的2.9％。

多变量回归分析表明DRD1和DRD2基因对于赌博、强迫进食和吸烟r 值均是显著的(表51-C)。对于这些中的每个，结果是累加性的，当 联合时，DRD1和DRD2基因负责这些评分变异的百分之5.9到4.8。将酒 精评分包括在内以表明DRD1基因的11基因型具有显著的效应，而在该 组中DRD2 A1等位基因的效应是不显著的。

利用单变量回归分析还检测了DRD1和DRD2基因的累加性效应，其 中DRD1 DdeI 11和DRD2 Taq A12基因型的被评分为3，具有其中一种 的那些评分为2，而两种基因型均没有的评分为1(表51D)。那些在α ≥0.005处显著的变量依次为赌博、吸烟、强制进食、违抗、ADHD、品 行障碍、强迫、燥狂和酒精滥用。

还利用对DRD1 DdeI 12或22和DRD2 TaqI 11或22(均无)；DdeI 11或DRD2 TaqI 12(其一)；或DRD1 Dde 11和DRD2 Taq12(均有) 三组的线性ANOVA对DRD1和DRD2基因的累加效应进行了检测。于α≥ 0.005处，对于强制进食、吸烟、违抗、ADHD、品行障碍、强迫、燥 狂以及酒精行为变量，其表现出平均评分从均无、到其一、到均有组 的显著的渐进性增加。

还利用对DRD1 Dde 11基因型、或DRD2 Taq A12基因型或者两者均 有的存在频率的线性卡方来检测DRD1和DRD2基因的累加效应(表 53)。那些在α≥0.005处显著而且对于“病例有”组的均值比“病例 无”组的高至少20％的变量依次为燥狂、酒精、强迫、品行障碍、分 裂样、性、强制进食和重性抑郁发作。对于变量酒精滥用、强制进食 和燥狂的结果。

由于在携带DRD1 DdeI11或22基因型的受试者的百分比方面对照和 TS先证者间存在显著的差别，所以发明者还检测了“对照无”、“病 例无”和“病例有”三组携带11或22基因型受试者的百分比。于α≥ 0.05处下面的变量是显著的，并且均值“病例有”组比对“病例无” 组高至少20％—赌博、酒精滥用以及小学问题。

戒烟组。在61个吸烟的对照中DdeI 1等位基因的频率为0.35，而 在177个吸烟者中其为0.34(表48A)。在对照中，4.9％携带11基因 型，对应吸烟者为17.5％，x2＝5.88，d.f.＝1，p＝0.015。在对照中， 39.3％携带11或22等位基因，对应于66.1％的吸烟者，x2＝13.45， d.f.＝1，p＝0.0002。

对于DRD2基因，在对照中26.2％携带12基因型，对应于42.8％的吸 烟者，x2＝5.69，d.f.＝1，p＝0.017。对于对照，24.1％的同时携带 DRD1 11或22基因型和DRD2 12基因型，对应于45.5％的吸烟者，x 2＝8.25，d.f.＝1，p＝0.0041。

在戒烟组中所检测的变量为每日所吸包数。由于所有的对照均完 成了行为调查表，其包括在TS组中所用的关于吸烟的相同问题，因此 排除那些曾经吸过香烟、雪茄或烟斗等的以及那些具有药物或酒精滥 用的对照是可能的。这些个体组成每天0包组。在戒烟组中的受试者 被分成那些每天吸1到1 1/2和2到2 1/2包的。(由于仅有那些每天至 少吸1包的允许参与研究，所以没有每天吸低于1包的受试者。)对于 DRD1基因的结果示于表54中。携带11基因型的受试者百分比在这三组 间由4.9％增加到16.4％到18.0％，x2＝5.14，p＝0.023。携带或者11或 者22基因型的受试者的百分比在这三组间由39.3％增至61.8％到 68.0％，x2＝12.87，p＝0.00033。DRD2 TaqI A1/A2多态性杂合的受试 者的百分比在这三组间由26.2％增至34.5％到46.3％，x2＝7.99， p＝0.0047。对于同时有纯合的DRD1 11或22和杂合的DRD2 TaqI A1/A2等位基因的受试者的百分比在这三组间由24.1％增至34.5％到 50.4％，x2＝23.48，p＝0.0001。

利用多变量线性回归分析还检测了DRD1和DRD2基因对于吸烟的相 互作用(表55)。这表明，DRD1和DRD2基因，如由这些多态性所标志 的，每个贡献均等。它们的联合负责每天包数变量变异的百分之 10.5。

病理性赌博。同TS和戒烟组不同，病理性赌博组没有其自己的对 照组。因此，为了比较的目的，将TS和戒烟对照结合起来形成总的对 照组，而且将其用于病理性赌博者。对于赌博者，14.1％为DRD1 DdeI 1等位基因纯合的，x2＝5.39，p＝0.020，而55.8％为11或22基因型纯 合的，x2＝6.75，p＝0.009。对于DRD2基因，45.7％的赌博者携带TaqI 12组，x2＝1 8.61，p＜0.0001。赌博者中23.3％为携带DRD1 11或22基 因型和DRD2 TaqI 12基因型的。

尽管许多研究提示在许多精神障碍中多巴胺D1和D2受体间的相互 作用，但仍缺少检测在DRD1基因的遗传学变体和行为之间的潜在相关 性或者DRD1和DRD2基因的遗传学变体间的潜在相关性的研究。发明者 对DRD1基因的变体或DRD1和DRD2基因的累加效应可能在这些行为中也 发挥作用这种可能性感兴趣。发明者选择DRD1 DdeI多态性(Cichon 等，1994a)，因为其为一种基于PCRTM的测试，而且该微效等位基因 在一般人群中是普遍的。由于前面DRD2基因的研究已经表明一个以上 基因相互作用检测的价值，检测了在单独DRD1基因遗传学变体和DRD2 基因的TaqI A多态性的潜在累加效应之间的相关性。为了将人种的效 应最小化，仅研究了非西班牙白种人。为将偶然性的效应最小化，发 明者试图通过检测三个不同组的受试者，其中两个具有它们自己的对 照组，来交叉重复任何发现。

等位基因和基因型频率。等位基因和基因型频率的结果示于表48A 中。对于DRD1变体，DdeI等位基因的频率在对照和受试者中几乎是相 同的。对于TS先证者、吸烟者和赌博者三组，1等位基因的频率分别 为0.37、0.34和0.35。对于TS和吸烟者对照组，频率分别为0.34和 0.35。许多在精神障碍关联性研究的报道将他们自己限制于在对照和 具有一特定障碍的受试者间的基因频率的比较。一个相似的限制将会 表明DRD1基因在这些障碍的任何一种中均不发挥作用。然而，由于基 因型的分布可能是不同的，所以尽管有基因频率的相似性，但发明者 仍检测了基因型频率。研究表明在吸烟者和赌博者中11基因型的流行 率显著增加，而且在TS先证者中为界值显著性(p＝0.053)增加。对 于所有四组，每个等位基因的纯合性存在显著的增加，TS先证者、吸 烟者、赌博者和总体分别具有0.024、0.0002、0.009和0.0001的p 值。如果利用＜0.5/4或0.0125的Bonferroni校正的α值，后三组仍是 显著的。

DRD2基因的Taq A1等位基因的等位基因和基因型的频率示于表48B 中。基于这些结果，在本研究中发明者检测了A1/A2的百分比。在TS 先证者、吸烟者、赌博者和总体的受试者组中，结果分别为百分之 35.3、42.8、45.7和40.0。对于TS、吸烟者和总体对照，结果分别为 百分之19.2、26.2和22.4。在所有四组中，A1/A2杂合子的流行率在 受试者中显著高于对照中的，具有0.0073、0.017、＜0.0001和 0.0001的p值。在四组的三个中，按照Bonferroni校正的α≥0.05/4或 0.0125，结果仍然显著。

上面的结果表明同DRD1等位基因的杂合性的显著性负相关，以及 同DRD2等位基因杂合性的显著性正相关。为检测DRD1和DRD2基因的潜 在的相互作用，发明者将病例分为DRD1等位基因非杂合性的(即为11 或22纯合子)和DRD2等位基因杂合性的那些。由于对两种基因均优化 了这些基因型，这一组被称为“均有”。第二组，称为“其一”，由 那些或者DRD1 11或22纯合子或者DRD2杂合子的那些组成。第三组， 称为“均无”，为DRD1等位基因杂合的，而且对于DRD2等位基因11或 22纯合子。这些结果示于表48-C中。在“均有”组中的受试者的百分 比对于TS先证者(33.2)显著高于TS对照(17.9)，p＝0.016；对于 吸烟者(45.5)显著高于吸烟者对照(24.1)，p＝0.0041，而且对于 总体受试者(34.3)显著高于总体对照(20.8)，p＝0.0033。在“均 有”组中受试者的百分比对于赌博者(23.3)没有显著的增加。

TS组。由于对TS组进行了DRD1基因在行为中潜在作用的初步的探 索性研究，而且由于研究了一个以上的行为，所以将更详细地展示这 些结果。发明者首先利用ANOVA在不同DRD1基因型中比较了23个不同 行为组的均值，所给出的低于0.2的p值的七个行为中，五个为成瘾行 为—酒精滥用、吸烟、强制进食、赌博和购物。虽然酒精滥用变量为 最显著(p＝0.0096)，但在α≥0.05处无一是显著的(见方法)。在 表49中所示的所有的数量性状以及其余16个变量中的14个对于11纯合 子具有最高的均值。虽然在22纯合子中的平均评分通常高于12杂合 子，但对于11和22杂合子，评分的相对大小表明在受试者的TS组中11 等位基因的纯合性表现出同升高的评分的相关性高于22等位基因的纯 合性。

基于ANOVA的结果，发明者检测了在“对照无”、“病例无”和 “病例有”组间携带11基因型的受试者的百分比(表50)。于α ＜0.005处，三种行为，赌博、酒精滥用和购物均是显著的。对于赌 博，这个百分比从百分之4.5增加至15.2到35.2(p＝0.00095)。所有 于α+＜0.05显著的六个性状均为成瘾行为。

利用单变量回归分析获得了相似的结果，其中那些DRD1 DdeI 1等 位基因纯合的评分为2，而那些具有12或22基因型的评分为1。赌博和 酒精滥用变量在α＜0.005处是显著的(表51)。对于DRD2基因的单变 量回归分析，其中A1/A2杂合子评分为2，而纯合子为1，七个不同的 性状于α＜0.005处是显著的(表51B)。这些包括三个成瘾行为，强 制进食、赌博和吸烟。

通过多变量回归分析，仅仅对于三个性状DRD1和DRD2基因均给出 显著结果，即赌博、强制进食和吸烟(表51C)。利用单变量回归分 析获得了相同的结果，其中在“均有”组的那些评分为3，在“其 一”组的那些为2，而在“均无”组的那些为1(表51D)。此处，对 于赌博、吸烟和强制进食的p值为＜0.0001。

为评价评分的大小，发明者通过ANOVA对在“均无”、“其一”或 “均有”组中的那些检测了均值(表52)。此处，包括强制进食、吸 烟和酒精滥用的八个性状在α＜0.005处是显著的。在“均有”组中均 值始终最高。最后的检验是在“对照无”、“病例无”和“病例有” 组间DRD1 11纯合子、或者DRD1 A1/A2杂合子、或者皆有的受试者百 分比的检测(表53)。酒精滥用和强制进食是在八个性状中于α≥ 0.05处是显著的。对于酒精滥用，在三组间百分比从23.9增至46.9到 70.6，p＝0.00005。

联合的结果同DRD1基因在许多成瘾和其它行为中的作用以及在 DRD1和DRD2基因处遗传学变体的累加效应是一致的。虽然在TS组中， 对于DRD1和2等位基因的纯合性均给出高于12杂合性的评分，但对于1 等位基因的纯合性给出同许多性状的最强的相关性。

戒烟组。为确定在另一完全不同的受试者组中发明者是否能够重 复这些发现中的任何一个，发明者利用来自DRD2基因在吸烟者中作用 的前期研究的个体(Comings等，1996a)。在该组中的所有受试者每 天吸至少一包香烟，而且曾不成功地试图停止吸烟。如上面所讨论 的，当作为一组时，吸烟者表现出DRD1 DdeI 11基因型和11或22基因 型流行率的显著增加。为更详细探讨在DRD1基因和吸烟间的相关性， 发明者检测了每天所吸包数这一数量性状(表54和55)。在每天吸0 包的对照和每天吸1-1 1/2包的吸烟者以及每天吸2至2 1/2包的吸烟 者三组间，具有DRD1 11基因型的受试者的百分比存在百分之4.9到 16.4到18.0的渐进性的显著增加，p＝0.023。同TS组相反，对于吸烟 者，11或22纯合子组给出更显著的结果。因此，纯合受试者的百分比 从每天0包的对照的39.3增加到每天吸1-1 1/2包的吸烟者的61.8，到 每天吸2-2 1/2包的吸烟者的68.0，p＝0.00033。DRD2 A1/A2等位基 因杂合的受试者的百分比在三组间从百分之26.2增至34.5至46.3， p＝0.047。如同TS组，DRD1和DRD2基因的效应是累加的。因此，在 “均有”组中受试者的百分比在这三组间由24.1增至34.5至50.4， p＝0.0001。为进一步检测DRD1和DRD2基因在吸烟者中的累加效应，发 明者利用多变量回归分析检测了每天包数变量。两基因存在相当的效 应，而联合它们则负责每天包数变量的变异的百分之10.5。

赌博者。如上面所讨论的，与总体对照相比，在赌博者中DRD1 11 纯合子、或者11或22纯合子的受试者的百分比显著增加，而且DRD2 A1/A2杂合子的受试者的百分比也显著增加。同TS和吸烟者组不同， 这些效应在赌博者中不是累加性的，因为在“均有”组中受试者的百 分比没有比总体对照增高。

杂合性。发明者对许多不同受试者组中的多种行为平均评分的观 察表明，DRD1和DRD2基因的遗传学变体可能也表现出杂种优势。两个 基因中效应是对立的，这一点很有意义。因此，DRD2基因TaqI A1/A2 杂合子对大多数变量具有更多异常的评分，而DRD1基因杂合子具有更 多正常的评分。发明者推测两种多态性都是同影响DRD1和DRD2基因功 能的其它突变连锁不平衡的(Comings等，1991)。这种明显的杂合 优点/缺点的作用机制是未知的。是否两个基因中的对立效应是由于 它们对环AMP具有对立的效应的事实，或简单地因为通过连锁不平衡 而同它们相关的其它突变类型中的偶然变异也是未知的。本结果表明 在成瘾行为中DRD1加DRD2基因的多基因遗传的作用。虽然多基因遗传 的重要部分是基因联合的关键作用，但该研究还证实等位基因联合的 关键作用。

受试者确证的重要性。能够在三个独立的受试者群间证实DRD1基 因的作用，以及在两个独立的受试者群中DRD1和DRD2基因累加效应的 重要性吗？发明者对因首次诊断为酒精中毒或药物成瘾而确证的受试 者的前期研究支持DRD1基因的作用，以及DRD1和DRD2基因在一些而并 非所有的物质滥用中的累加效应。这对于多基因遗传并不是出人预料 的。由于DRD1和DRD2基因各自负责一给定性状不到百分之6的变异， 而且联合后负责一性状不到百分之11的变异，所以这些中度效应可以 很容易地被受试者确证中的差异所超过。例如，很可能许多受体的异 常参与多种类型的物质滥用，包括多巴胺、5-羟色胺、大麻酯、一氧 化氮、烟碱蝇蕈碱、GABA以及其它。Tourette综合征的诊断依赖运动 抽动的存在，而多巴胺在肌肉运动调节中发挥重要的作用。因此，可 以预料在TS中的共发的物质滥用或其它成瘾行为应该比在基于任何类 型的物质滥用而确证的受试者组中更可能涉及多巴胺受体的遗传学缺 陷。

在症状水平而非诊断水平测试的重要性。这些以及以前的研究 (Comings和Comings，1987b)表明单独两分诊断分类可能太广，而 导致在相关研究中力度显著降低。例如，TS受试者可能在从具有略微 温和的抽动且无其它问题的个体到具有破坏性联合抽动、口吃、 ADHD、强迫、品行、焦虑、情绪、物质滥用和学习障碍的个体之间变 化。如果一给定基因对TS有作用但特别同口吃相关，而且口吃在仅仅 20％的病例中存在，则在对照和所有TS先证者的比较中那个基因的作 用可能被忽略，但在无口吃的对照和口吃TS先证者的比较中可能被检 测到。这个概念在本研究中特别重要。在TS组中，同DRD1基因显著相 关的行为变量是涉及成瘾行为的那些。这不可能是一个偶然发现，因 为动物研究也表明DRD1基因在成瘾性状中的作用，而且因为在三个不 同的受试者组中重复了该发现。

关于本研究有几个说明。由于DRD1 DdeI多态性是一个中性碱基改 变，所以发明者推测其同在影响多巴胺D1受体密度的DRD1位点或附近 区域中的突变连锁不平衡。关联研究的一个常见的担心是结果可能是 由于隐藏的人种或种族分层而不是基因本身的可能性。虽然发明者试 图通过局限于对非西班牙白种人的研究并通过在三个独立的受试者组 中重复该发现来将其最小化，但其仍是一个可能的解释。另一个潜在 的问题，特别是在TS组中，是23个不同数量性状的检测。通过利用一 个非常保守的≥0.05的α来对其进行补偿。当检测DRD1和DRD2基因的 联合效应时，许多p值不到0.001，低于0.05/23或0.0022的完全 Bonferroni校正。此外，围绕成瘾行为(酒精中毒、强制进食、赌 博、购物和吸烟)显著性结果的分群提供了一些内部一致性。最后一 个说明是DRD1 11等位基因的纯合性在TS组的表中强调了，而11或22 纯合性在吸烟组的表中强调了。然而，如在表48中所示，11或22纯合 性在所有三个组间是显著的。所有三个组共同具有的特点是对于DRD1 12杂合子平均评分的降低以及对于DRD2 A1/A2杂合子平均评分的增 加。上面讨论的确证偏倚可能也在决定为什么1等位基因的纯合性可 能在一个受试者组中更重要而1和2等位基因的纯合性可能在另一个组 中更重要中发挥作用。

                       表48

      在所有三个受试者组中等位基因和基因型的频率

                   N      11          12            22     p        q      ％11     ％11，22 1A.DRD1 DdeI I.Tourette综合症组 对照                   63      4          37            22     0.34     0.66    6.4      41.3 TS先证者               227     36         97            94     0.37     0.63    15.91   57.32 II.戒烟组 对照                   61      3          37            21     0.35     0.65    4.9      39.3 吸烟者                 177     31         60            86     0.34     0.66    17.53   66.14 III.赌博组 赌博者                 163     23         72            68     0.36     0.64    14.15   55.86 总体对照               124     7          74            43     0.35     0.65    5.7      40.3 总体受试者             567     90         229           248    0.36     0.64    15.87   59.68

1x sq＝3.75   p＝0.053

2x sq＝5.08   p＝0.024

3x sq.5.88    p＝0.015

4x sq.13.45   p＝0.0002

5x sq.5.39    p＝0.020(赌博者和总体对照间)

6x sq.6.75    p＝0.009(赌博者和总体对照间)

7x sq.8.81          p＝0.003

8x sq.15.38         p＝0.0001

                             表48(续)

                N        11          12         22        p        q        ％12 1B.DRD2 TaqI I.Tourette综合症组 对照               73         3          14         56        .15      .85      19.2 TS先证者           345        17         122        206       .23      .77      35.31 II.戒烟组 对照               65         6          17         42        .22      .78      26.2 吸烟者             194        7          83         104       .25      .75      42.82 III.赌博组 赌博者             186        3          85         98        .24      .76      45.73 总体对照           138        9          31         98        .20      .80      22.4 总体受试者         725        27         290        408       .24      .76      40.04

1x sq＝7.19    p＝0.0073

2x sq.＝5.69   p＝0.017

3x sq.18.61    p＝＜.0001(赌博者和总体对照间)

4x sq.15.26    p＝0.0001

                        表48(续)

                N          均无            其一         均有       ％均有 1C.DRD1 DdeI 11，22加DRD2 Taq1 12 I.Tourette综合症组 对照               67           4               51          12         17.9 TS先证者           214          19              124         71         33.21 II.戒烟组 对照               58           17              27          14         24.1 吸烟者             176          64              32          80         45.52 III.赌博组 赌博者             154          32              86          36         23.3 总体对照           125          21              78          26         20.8 总体受试者         544          115             242         187        34.33

1x sq.5.71  p＝0.016

2x sq.8.25  p＝0.0041

3x sq 8.63  p＝0.0033

均无：DRD1 12和DRD2 11，22

其一：DRD1 12和DRD2 12，或者DRD1 11，22和DRD2 11，12

均有：DRD1 11，22和DRD2 12

                         表49

            在TS组中利用ANOVA的DRD1结果

                 |----------等位基因组-------------|

              11              12                   22

              n＝43          n＝136              n＝125 行为           M       S.D.   M       S.D       M         S.D.         F-比*       p 酒精           1.30    3.3    0.23*  1.2       0.42      2.2          4.17       0.0096 吸烟           0.97    0.4    0.77*  0.5       0.81      0.5          2.80       0.062 强迫进食       1.17    0.5    0.94    0.6       0.94      0.5          2.71       0.068 抽动           4.51    4.5    3.17    3.6       3.23      3.8          2.18       0.115 赌博           0.41    1.2    0.12    0.7       0.15      0.8          2.00       0.136 重性抑郁发作   4.27    3.0    3.64    3.1       3.25      2.9          1.88       0.154 购物           1.56    2.9    1.00    2.3       0.78      2.2          1.74       0.177

  *通过Tukey检验在α＝0.05处显著低于基因型11。

                   表50

    在Tourette综合症组中对于DRD1 Dde 11

              基因型的卡方分析 行为          对照无             病例无              病例有           卡方           p

      N          ％     N              ％     N          ％ 赌博     67          4.5    217          15.2    17          35.3    10.91        0.00095 酒精     70          5.7    216          15.3    18          33.3    9.08         0.002 购物     54          7.4    182          13.7    52          26.9    7.85         0.005 药物     70          5.7    209          15.8    25          24.0    6.50         0.011 暴食     49          6.1    185          15.1    43          23.3    5.35         0.020 吸烟     70          5.7    218          16.4    15          20.0    5.02         0.024

                            表51

    在Tourette综合症组中对于DRD1 DdeI 11基因型

          同不同行为评分的单变量回归分析 行为             r              r2              T 行为                r                r2               T 31A.DRD1 DdeI(12，22＝1，11＝2) 赌博             0.190             0.036             3.36 酒精             0.168             0.028             2.97 强迫进食         0.139             0.019             2.33 吸烟             0.129             0.016             2.26 抽动             0.119             0.014             2.98 阅读             0.112             0.012             1.97 购物             0.095             0.009             1.67 31B.DRD2 TaqI(11，22＝1，12＝2) 对立违抗         0.205             0.042             3.59 品行障碍         0.197             0.038             3.43 强迫进食         0.202             0.041             3.37 吸烟             0.184             0.033             3.21 赌博             0.173             0.029             2.98 ADHD             0.163             0.027             2.82 躁狂             0.156             0.024             2.70 口吃             0.148             0.022             2.55 强迫             0.146             0.021             2.53 分裂样           0.136             0.018             2.34 31C.DRD1和DRD2 赌博 DRD1             0.171             0.029             3.00 DRD2             0.168             0.028             2.94 F                0.243             0.059             9.10 强迫进食 DRD1             0.124             0.015             2.8 DRD2             0.201             0.040             3.38 F                0.237             0.056             7.91 吸烟 行为              r                   r2               T DRD1              0.119               0.014             2.09 DRD2              0.181               0.032             3.18 F                 0.219               0.048             7.37 酒精 DRD1              0.189               0.035             3.30 DRD2              0.060               0.000             1.05 F                 0.199               0.040             6.07 31D.DRD1 11和DRD2 12均有＝3；其一＝2，均无＝1(N＝293) 赌博              0.240                0.057            4.21 吸烟              0.219                0.047            3.84 强迫进食          0.236                0.055            3.97 对立违抗          0.196                0.038            3.42 ADHD              0.176                0.031            3.05 品行障碍          0.174                0.030            3.01 强迫              0.172                0.029            2.99 躁狂              0.171                0.029            2.98 酒精滥用          0.162                0.026            2.82 抽动              0.134                0.018            2.32 分裂样            0.118                0.014            2.23

                               表52

  在TS组中利用ANOVA的DRD1+DRD2结果(均无＝DRD1 12，22和

  DRD2 11，22；其一＝DRD1 11或DRD2 12；均有＝DRD1 11和DRD2 12)

                |---------等位基因组----------| 行为                均无                   其一                   均有              F-比       p

               n＝168                  n＝112                 n＝15

          M            S.D.      M             S.D       M           S.D. 强迫进食      0.87～       0.6     1.06            0.5       1.42        0.5       15.76      0.0001 吸烟          0.73～       0.5     0.91            0.4       1.13        0.3       14.71      0.0002 对立违抗      3.05*       3.1     4.21            3.3       5.06        3.7       11.70      0.0007 ADHD          20.31*      14.5    24.63           13.6      28.60       12.7      9.31       0.0025 品行障碍      2.58*       2.1     3.54            2.4       4.26        3.0       9.15       0.0027 强迫          2.47*       3.0     3.40            3.2       4.27        4.1       8.93       0.0030 躁狂          1.43         2.0     2.06            2.4       2.80        2.7       8.89       0.0031 酒精          0.24        ^1.5     0.53           ^2.0       1.93        4.1       7.99       0.0050

#线性ANOVA

*通过Tukey检验于α＝0.05处显著低于其一组

^通过Tukey检验于α0.05处显著低于均有组

～通过Tukey检验于α＝0.05处显著低于其一或均有组

                        表53

               在Tourette综合症组中对于具有

            DRD1 11或DRD2 12基因型或者均有的

                 受试者百分比的卡方分析 行为               对照                病例无               病例有            卡方           p

           N           ％       N           ％       N         ％          squar

                                                                             e 躁狂           63          22.2    153         44.4      75       57.3         16.82       0.00004 酒精           67          23.9    211         46.9      17       70.6         16.51       0.00005 强迫           64          23.4    155         44.5      73       57.5         15.87       0.00007 品行障碍       54          22.2    94          41.5      134      53.7         15.45       0.00008 分裂样         62          25.8    144         44.4      82       57.3         13.94       0.0002 性             52          26.9    158         41.1      85       56.5         11.94       0.0005 强迫进食       46          23.9    181         47.0      41       58.5         10.76       0.0010 MDE            46          28.3    134         44.0      94       55.3         9.12        0.0025

只给出“病例有”至少高于“病例无”20％的受试者

                               表54

                在戒烟组中DRD1和DRD2数(1％)

                        每天所吸包数 基因型           0             1-11/2          2-21/2          合计 DRD1     11      3(4.9)        9(16.4)         22(18.0)        204

     12，22  58            46              100             34

     总计    61            55              122             238       5.14         0.023* DRD1     11，22  24(39.3)      34 (61.8)       83(68.0)        141

     12      37            21              39              97

     总计    61            55              122             238       12.87        0.00033*

                       每天所吸包数 基因型                 0              1-11/2          2-21/2          合计 DRD2         12        17(26.2)       20(34.5)        63(46.3)        100

         11，22    48             38              73              159

         Total     65             58              136             259          7.99         0.0047* DRD1和DRD2   均无      17             23              41              81

         其一      27             13              19              59

         均有      14(24.1)       19(34.5)        61(50.4)        94

         合计      58             55              121             234          23.48        0.0001**

*线性卡方d.f.＝1

**Perason卡方d.f.＝4

                                 表55

                  在戒烟组中DRD1和DRD2基因的

                         多变量线性回归分析

                      r               r2          T          p DRD1 DdeI 12            0.232            0.054        30.73     0.0002 DRD2 TaqI 12            0.220            0.048        30.54     0.0005 F                       0.325            0.105        13.63     ＜0.0001

                  实施例8

      用内啡肽酶抑制剂和释放剂治疗的效果

在本实施例中，检测了d-苯丙氨酸(其它内啡肽酶抑制剂)、 Tyr-D-Arg(一种内啡肽释放剂)和纳曲酮(麻醉拮抗剂)的相互作 用对于多巴胺释放入Lewis(多药喜好)和Fischer(非多药喜好)大 鼠的伏核(Acb)中的效应。Lewis和Fischer大鼠均被分成两组：急 性和慢性。慢性组每日给予三种药物的剂量为：每天早晨500mg/kg的 d-苯丙氨酸(DPA)、1-5mg/kg的Tyr-D-Arg(TDA)以及1-2mg/kg的 纳曲酮(NX)(杜邦，Wilmington，DE)共18天。在第19天，对慢性 治疗或急性组开始进行微量透析采样。药物的联合如下变化：给予所 有三种；任何两种的联合；单独各药。三种药物的急性剂量将如下： DPA＝500mg/kg i.p.，TDA 5mg/kg i.p.，NX i.p.2mg/kg。

微量透析方法在研究之前七天，所有大鼠将在苯巴比妥钠 (50mg/kg)麻醉下通过手术于立体定位协同下(相对于前囟点)在 左侧Acb中植入微量透析探针：A+2.0、L1.2和V-8.0(距颅骨)。探 针设计为同心的并用0.5mm外径不锈钢管制造(Small Parts Company，Roanoake，VA)。每个探针带有250μm外径并基本上覆盖 Acb垂直范围的2mm暴露透析膜(Spectra/Por中空纤维素纤维， MWCO5000，Spectrum Medical Industries，洛杉基，CA)。

透析回收率通过体外研究确定，探针的相对回收率将大约为3.9％ 的多巴胺(DA)、4.1％的3，4-二羟苯乙酸(DOPAC)和3.2％的高香草 酸(HVA)。就在植入后，将开始探针输注并整个研究中持续。将利 用耦联至两个LC-4C检测仪的双重玻璃碳工作电极(生物分析系统公 司，West Lafayette，IN)进行电化学测量，均设在对应于Ag/ACl参 考电极+0.7V处。一个电极用于DA检测而另一个用于DOPAC和HVA检 测。在动物已经从手术中恢复20-24h后开始透析采样。直到透析液的 DA、DOPAC和HVA水平稳定后收集透析标本。然后收集三个20min基线 的注射前标本。在任何慢性注射前，将分析预透析液确定基线量。在 该基线量建立后开始慢性注射。对于急性大鼠组，在收集前以一个根 据研究而改变的预定的间隔开始药物联合给药。给药后收集2h以上总 共六个20min的标本。还将从研究的开始对在慢性和急性组中的大鼠 进行运动和刻板行为的观察。在所有收集完成后，对所有大鼠的脑进 行标准的组织学分析来确证探针的位置。

自我选择还将进行其它涉及药物联合在Lewis和Fischer大鼠间对 自我选择影响的研究来特异性地确定单独DPA以及TDA和NX联合对系统 性地降低对酒精、可卡因、糖溶液、大麻和尼古丁渴望的影响。抑制 GABA传输活动的DPA和TDA的联合对中央脚盖GABA能活性的抑制在显著 增加DA进入Acb的量方面应是最有力的。NX的利用看起来预防酒精诱 导的欣快。

                        实施例9

        DRD2 A1等位基因和身体脂肪百分比的关联 方法

肥胖症受试者。本研究的目标是获得主要而不必绝对地由病态肥 胖受试者组成的受试者组。具有34％或更大的脂肪含量的女性以及具 有28％或更大的脂肪含量的男性被认为是病态肥胖。

对照。对照由来自“明尼苏达双胞胎家庭研究”的双胞胎的父母 组成。由于简单地基于具有11或17岁双胞胎以整个状态来确定这些受 试者，所以他们代表比大学学生更随机的所有社会经济和教育组织的 组。由于物质滥用评价的结果在双胞胎对照中还无法提供，所以发明 者将这些列为“未筛选的对照”。由于也未对肥胖样本中的受试者筛 选物质滥用，所以这使得对照同受试者对于肥胖症的存在是相当的。

结果。肥胖组由91个受试者组成，76个女性和15个男性。女性 中，60或78.9％为病态肥胖，而其余的16或21.1％为超重但具有低于 34％的脂肪％。男性中，12或80％为病态肥胖，而其余的3或20％为超重 但具有低于28％的脂肪％。由于不是病态肥胖的受试者的比例太小而不 允许独立的统计学分析，所以合并两组用于分析。

在肥胖受试者和对照中DRD2 D2A1等位基因的流行率示于表56。对 于男性和女性的总体，肥胖受试者中67.0％携带D2A1等位基因，而未 筛选对照为32.3％，x2＝32.95，p＜0.00001。这个值实际上同自从 1990年的文献中所报道的对于980个未筛选的白种人对照的32.9％值是 相同的(表57)。68.4％的流行率显著高于对照。对于DAT1基因的结 果示于表58中。同DRD2基因相反，同对照相比在肥胖受试者中10/10 基因型的流行率没有显著的增加。

                          表56

          明尼苏达双胞胎对照—未筛选物质滥用

             D2A

             11           12      22       Tot     ％12 M+F N            14           83      203      300 ％               0.047        0.277   0.677    1      0.323 F   N            7            46      99       152 ％               0.046        0.303   0.651    1      0.349 M   N            7            37      104      148 ％               0.047        0.250   0.703    1      0.297 肥胖症样本—％脂肪数及未筛选物质滥用

             D2A

             11           12      22       Tot    ％12 M+F    N         5            58      30       92 ％               0.055        0.615   0.330    1      0.670 F      N         5            47      24       76 ％               0.066        0.618   0.316    1      0.684 M      N         0            9       6        15 ％               0.000        0.600   0.400    1      0.600

                               表57

    对照             11          12           22      合计         ％1

对照—状态未知 Bolos等.，1990           4           17           41       62          33.9 Grandy等.，1989          2           14           27       43          37.2 Comings等.，1995         0           21           67       88          23.9 Gelenter等.，            3           21           44       68          35.3 Uhl，1992                3           27           71       101         29.7 Goldman Finns            4           38           70       112         37.5 Goldman 1993             11          42           114      167         31.7 Nother等.，                       5           26           38         69      44.9 Noble等.，1994                    2           18           38         58      34.5 Jonsson等.，1993                  4           13           38         53      32.1 Hedebrand等.，1993                4           19           38         61      37.7 O′Hara等.，1993(白人非使用者)    6           39           115        160     28.1 合计＝                            44          278          658        980     32.9

                              表58

                         DAT1                其它           合计

                         .10/10 M+F           N              160                 122            282 ％                           0.567               0.433          1 F             N              89                  63             146 ％                           0.568               0.432          1 M             N              77                  59             136 ％                           0.566               0.434          1 M+F           N              44                  47             91 ％                           0.484               0.516          1 F             N              38                  38             76 ％                           0.500               0.500          1 M             N              6                   9              15 ％                           0.400               0.600          1

                        实施例10

       用于RDS的检测的其它多基因等位基因的分析

色氨酸2，3二氧化酶。5-羟色胺代谢的缺陷以及血液5-羟色胺和 色氨酸水平的异常在多种精神障碍中已经被报道。色氨酸2，3-二氧 化酶(TDO2)是色氨酸降解为N-甲酰犬尿氨酸的限速酶。该基因的功 能变体可能负责所观察到的在多种障碍中5-羟色胺和色氨酸的同时增 加或降低。已经鉴定出了人TDO2基因的四种不同的多态性。关联研究 表明这些多态性的一个或多个同Tourette综合征(TS)、注意力缺乏 多动障碍(ADHD)以及药物依赖的显著相关性。内含子6G→T变体是 同血小板5-羟色胺水平显著相关的。经Bonferroni校正时，只有同TS 的相关性是显著的(p＝0.005)。

受试者。TS先证者、TS家族成员、ADHD先证者、三分之二的孤僻 症先证者以及大部分的对照是希望之城国立医学中心(COH)的TS和 其它诊所治疗的患者或患者亲属。TS、慢性运动抽动或慢性发声抽动 障碍、ADHD和孤僻症的诊断是基于DSM-III-R(美国精神病联合会， 1987)标准的。TS先证者被限定为在该TSS-ADHD诊所寻找医学治疗的 TS个体。对所有先证者和大部分的亲属个人会见并通过D.E.C.进行检 查。在先证者中，82％具有TS而其余的18％具有慢性运动抽动障碍或慢 性发声抽动障碍。TS家族成员为TS先证者的父母，无论他们具有TS与 否。三分之一的孤僻受试者来自Sagamore儿童医院，Dix Hills，NY (J.S.)。每个先证者及他们的亲属均被提问关于他们四位祖父母的 人种和种族背景，而且仅包括所有四位祖父母均为非西班牙白种人的 受试者。所有受试者签定了书面协议，而且研究被研究管理委员会 (Institutional Review Board)批准。吸烟者(Comings等， 1996a)和病理性赌博者(Comings等，1996b)以及具有酒精依赖 (Comings等，1994)和药物依赖(Comings等，1994)的个体来自 DRD2基因在这些障碍中作用的研究。这些受试者的筛选和来源在这些 各自的文件中被详细描述。

精神分裂症和抑郁受试者的DNA标本是从来自“国家神经病学研究 库”(V.A.Wadsworth医院，CA)的具有这些诊断的受试者的大脑标 本中分离的。精神分裂症的受试者具有慢性的精神分裂症，通常有长 期精神住院史。具有抑郁的受试者曾自杀并有慢性抑郁史。精神分裂 症和抑郁的诊断是在一个以上精神病医生的同意下基于DSM-III或 DSM-IIIR标准的。同时具有酒精中毒和药物滥用的受试者被排除了。

对照。COH对照来自四个来源：a)来自CEPH(Centre d’Etude du Polymorphisme Humain)家庭的无关祖父母；b)TS患者的收养、抚 养或继父母；c)来自一内分泌病诊所具有甲状腺癌或非胰岛素依赖 性糖尿病的受试者；以及d)包括职业、半职业、技术人员和维护工 人的医院工作人员。这种广泛的对照用来避免当利用更局限的来源时 可能产生的潜在的筛选问题。选择内分泌患者作为对照，因为两种病 态均是可治疗的，具有高的治愈率，而且对日常生活产生最小的干 扰，存在于广泛的年龄范围，以及患者基础同TS受试者的是相同的。 所有对照均被筛选来排除酒精、药物和烟草滥用。

内含子6突变区的PCRTM扩增。扩增TDO2靶序列的PCRTM反应如下： 10mM Tris HCl，pH8.3、50mM KCl、1.5mM MgCl2、0.05％Tween 20、0.05％NP-40、各100μM dATP、dCTP、dTTP、dGTP和0.1μM引 物。引物为116号GACACTTCTGGAATTAGTGGAGG(SEQ ID NO：5)和117 号GAAGTTAAATCCATGTGGCTC(SEQ ID NO：6)。将下列物质加至 20ul：0.5U AmpliTaq(珀金-埃尔默，Foster City，CA)，1μl (250ng)基因组DNA。利用下面的操作在一PE-9600热循环仪(珀金- 埃尔默)或一PTC-100可编程热控制仪(MJ研究公司，Watertown， MA)上进行反应：94℃ 5min，然后30个循环的94℃ 30sec，60℃ 30sec，72℃ 1min，然后72℃ 5min。为确定扩增是否发生，取10μl 的反应混合物在TBE缓冲液中于1.5％的琼脂糖凝胶上电泳。

克隆和测序。将引物116(SEQ ID NO：5)和117(SEQ ID NO： 6)的PCRTM产物用乙醇沉淀，并重悬于TE缓冲液(Tris HCl 10mM， EDTA 1mM)中。将片段克隆到经修饰的Blue Script pBdT(Hoton 和Graham，1991)中。20μl连接反应中含有下面的成分：20μl 10× 连接缓冲液(宝灵曼)，100ng的每种PCRTM产物，pBdT和1μl T4连 接酶。将其在11℃孵育18h。在一Applied Biosystems公司(Foster City，CA)自动测序仪上用末端引物T3、T7以及内部引物129号 GCTGATTTTCAGACTGAGTGTG(SEQ ID NO：7)和130号 CTACAAACATATTTAAACATATGTT(SEQ ID NO：8)测定片段的序列。

变性梯度凝胶电泳。通过PCRTM扩增了在内含子6寡聚物116号 (SEQ ID NO：5)和117号(SEQ ID NO：6)间的DNA，产生一 1359bp的片段。用RasI消化该片段产生816、470和60bp的片段。将其 在20-80％变性的6.5％丙烯酰胺凝胶中于60℃、70V电泳16hr(Grey， 1992)。在10mM Tris HCl、50mM KCl、1.5mM MgCl2、0.05％Tween 20、0.05％NP-40、pH8.3的缓冲液中用0.2μM各种引物和0.2mM的各 种脱氧NTP进行PCRTM。利用2.3μl的10×反应1缓冲液(New England Biolab，Beverly，MA)，用5U酶(在1μl中)进行20μl PCRTM产物 的RsaI消化，在37℃消化过夜来判别片段的大小。

BslI消化。从上面的PCRTM反应中，取10μl的一份用1.5U的限制性 内切酶BslI以及最终1×缓冲液(由New England Biolab，Beverly， MA提供)进行消化，并在55℃孵育过夜。将消化产物中10μl的一份在 1×TBE(Tris-硼酸盐100mM，EDTA 1mM)中于4％的metaphor琼脂糖 (F.M.C.产品，Rockland，ME)凝胶中100V进行电泳1h。将凝胶在溴 化乙锭中染色。预期有三个不同大小的片段。当多态性位点为G/G 时，DNA被完全消化产生673bp和359bp的片段。当多态性位点为A/A 时，1032bp片段未被消化。G/A杂合子具有三个片段，1032bp、673bp 和359bp。

寡核苷酸连接试验(OLA)。在对G→T变体的OLA中所用的寡核苷 酸如下：对于G特异性寡聚物OLA-G CTATTCTTATCCCTCTTTTCTTAA- (HEO)1(SEQ ID NO：9)。对于T特异性寡聚物OLA-T ATATTCTTATCCCTCTTTTCTTAAT-(HEO)3(SEQ ID NO：10)。G特异 性寡聚物具有1个而T特异性寡聚物具有3U的加至5’末端来改变这两个 寡聚物分子量的六环氧乙烷磷酰胺(Grossman等，1994)。通用的寡 聚物为FAM-TATATATTACGGTTTATTACCGT-PO4(SEQ ID NO：11)，其 中FAM为5’羧基荧光素亚磷酰胺(Applied Biosystems公司，Foster City，CA)。当G特异性和通用的寡聚物通过连接反应连接时，预期 大小为50.5bp。当T特异性和通用的寡聚物连接时，预期大小为 56.5bp。OLA反应的反应混合物由下述成分组成：20mM Tris HCl， pH7.6、100mM KCl、10mM MgCl2、10mM二硫苏糖醇、1mM NAD、0.1％ Triton X-100、10nM寡聚物。10U连接酶(New England Biolab)和 1μl的PCRTM产物加至各20μl的反应混合物中。在一PE-9600热循环仪 上利用下面的循环操作进行反应：20个循环的94℃30s，54℃ 2min30s。将每个2μl反应同0.5μl的去离子甲酰胺混合并加热至92℃ 2min来变性。所用2.5μl均上样至一在TBE和8M尿素中的8％丙烯酰胺 凝胶中并电泳3h。通过在Applied Biosystems DNA测序仪中利用荧 光染色的引物进行电泳或通过银染色来鉴定反应产物。后者由双重染 色组成，首先用Stains-All，然后用银染。将凝胶置于在50％的甲酰 胺pH7.5中制备的0.01％的Stains-All(Eastman Kodak， Rochester，NY)溶液中20-30min，然后在2％的甘油中脱色过夜。然 后在10％乙醇和0.5％的乙酸中将凝胶洗两次，每次30min。然后将凝胶 在0.1％的AgNO3溶液中孵育20-30min，用去离子水洗两次，然后置于 新鲜制备的于1升蒸馏水中的1.5％NaOH、0.01％NaBH4、4ml 37％的甲 醛溶液中。在10-20min内显带，然后用0.75％的Na2CO3终止反应，并 在5％的乙酸中固定。

通过DpnII消化对G→T变体的鉴定。紧接G→T 3’的序列为GATA。 GATC是DpnII限制性内切酶的识别位点。设计3’23bp的寡聚物同紧接 G→T变体3’的ATC序列相配如下(寡聚物下划线而且对于变体的两个g 位点下划双线)：5’-TCATTAATCCTCTGGGTATTGTAAATGTGGATTTAGGTT AATGTATTATATATAATGCCAAATAATGGCAGATAAGAATAGGGAGAAAAAGAATTA-3 ’(SEQ ID NO：12)，5’-ATTAATCCTCTGGGTATTGT-3’(SEQ ID NO： 13)，5’-TAGTCTTATCCCTCTT TTTCTTA-3’(SEQ ID NO：14)。这种 在第三个位点上的不相配很少损害其作为PCRTM引物的效果。选择5’ 引物来提供一92bp的产物。当G→T变体为A时，仅有一92bp的片段出 现。

PCRTM反应的条件如下：0.1μM的各种引物，0.2mM的各种dNTP， 50mM KCl，10mM Tris HCl，1.5Mm MgCl2，0.001％(w/v)明胶，每 100μl 2.5U的AmpliTaqDNA聚合酶(珀金-埃尔默，Foster City， CA)，80ng基因组DNA。PCRTM循环为94℃4min，然后30个循环的94 ℃ 30sec，52℃ 90sec，72℃ 120sec，然后72℃ 5min。DpnII消化 的条件为10μl的PCRTM产物，0.05μl的10Uμl-1的DpnII；1.5μl的： 1M NaCl，0.5M Bis HCl，0.1M MgCl2，10mM二硫苏糖醇，pH7.9； 3.5μl H2O，于37℃过夜。将产物在4％的metaphor琼脂糖中电泳。

CCCCT重复的扩增。用于检测内含子5 CCCCT重复的寡聚物为166号 5’-CTCTTACAATAGAAGAAACCATTT-3’(SEQ ID NO：15)以及167号5’- TCTCCTCTCTTTCCCTTCCC-3’(SEQ ID NO：16)的反向互补。扩增条件 为95℃ 5min，然后30个循环的95℃ 1min，50℃ 1min，然后72℃ 1min，随后72℃ 5min。在反应混合物中的终浓度为50mM KCl、 1.5mM MgCl2、10mM Tris HCl，pH8.3、0.1μM引物、各200μM的 dATP、dCTP、dTTP、各100μM的dGTP和7-脱氮-dGTP和0.5μl的模 板。

外显子7A→C突变(Asn→His)多态性的鉴别。用于扩增A→C变体 的PCRTM引物是5’-GCATGGCTGGAAGAACTCC-3’(SEQ ID NO：17)5’引物 和5’-TCTTCCAGGCCTCTGGTCATAT-3’(SEQ ID NO：18)3’引物。产生 的89bp产物在C变体位点被NdeI消化成67和22bp的片段。

关联研究。所用的方法是比较在相同人种群体中先证者和无关对 照间各种等位基因的流行率。在表59、60和61中Bonferroni校正α为 0.05/10或0.005。在几年的时间内完成这些研究。由于鉴定了新的多 态性，如果开始的几百个受试者的研究提示变体同一行为表型并非显 著相关，则无受试者被进一步检测。结果，对于不同的变体所研究受 试者的数量是不同的。

                         表59

            内含子6G→ATDO2多态性的结果 组         n        GG       GA      AA      ％A        OR         CI         x2         p 对照       141      136      4       1       3.5 ADHD       113      110      3       0       2.7        0.74     0.2-3.2      0.16        NS 酒精依赖   65       65       0       0       0.0        0.00     ---          2.36        NS 孤僻症     65       61       2       2       6.2        1.78     0.5-6.8      0.72        NS 抑郁       16       14       1       1       12.6       3.88     0.7-21.9     2.70        NS 药物依赖   71       69       2       0       2.8        0.79     0.2-4.2      0.78        NS 病理性     166      158      8       0       4.8        1.38     0.4-4.3      0.30        NS 赌博 精神分裂症 41       41       0       0       0.0        0.00     ---          1.45        NS 吸烟者     93       92       1       0       1.1        0.30     0.03-2.6     1.37        NS TS         299      268      29      2       10.4       3.15     1.1-7.8      5.93        0.015 TS携带者   151      135      14      2       10.6       3.22     1.1.9.0      5.43        0.020

OR＝奇比率GA，AA/GG

CI＝OR的置信区间

适当处使用Fisher精确检验

                               表60

                   内含子6G→T TDO2多态性的结果 组up           n       GG    GT      TT        ％T         OR        CI       x2       p 对照           197     166   30      1         15.7 ADHD           108     81    25      2         25.0        1.78   1.0-3.2     3.89      0.048 酒精依赖       65      61    3       1         6.1         0.35   0.1-1.0     3.88      0.049 孤僻症         65      58    5       2         10.8        0.65   0.3-1.5     0.97      NS 抑郁           19      16    3       0         15.8        1.00   0.2-3.6     0.00      NS* 药物依赖       73      52    19      2         28.7        2.16   1.1-4.1     5.81      0.016 病理性         165     127   33      5         23.0        1.60   0.9-2.7     3.10      0.078 赌博 精神分裂症     43      33    10      0         23.3        1.62   0.7-3.6     1.41      NS 吸烟者         108     88    18      2         18.6        1.22   0.6-2.2     0.388     NS TS             320     263   52      5         17.7        1.16   0.7-1.9     0.37      NS TS携带者       134     119   14      1         11.1        0.67   0.3-1.3     1.37      NS

OR＝奇比率GT，TT/GG

CI＝OR的置信区间

*Fisher精确检验

                            表61

               内含子6G→T TDO2多态性的结果 组          n     G/G    A或T     A+T      ％A或T   OR       CI      x2       p 对照        135   112     23       0       17.0 ADHD        96    68      27       1       29.1     2.01   1.1-3.7   4.80      0.028 酒精依赖    64    60      4        0       6.3      0.32   0.1-1.0   4.31      0.038 孤僻症      64    53      11       0       17.2     1.01   0.4-2.2   0.01      NS 抑郁        15    10      5        0       33.3     2.43   0.8-7.8   2.36      NS* 药物依赖    70    47      23       0       32.9     2.38   1.2-4.7   6.63      0.010 病理性      165   123     38       4       25.4     1.66   0.9-2.9   3.10      0.078 赌博 精神分裂症  34    26      8        0       23.5     1.50   0.6-3.7   0.76      NS 吸烟者      84    69      15       0       17.9     1.06   0.5-2.1   0.24      NS TS          271   190     80       1       29.9     2.08   1.2-3.5   7.81      0.005 TS携带 者   98    74      21       3       24.5     1.58   0.8-3.0   1.96      NS

OR＝奇比率A或T，A和T/GG GG

CI＝OR的置信区间

*Fisher精确检验

非随机等位基因关联。由于未进行家族研究，所以不能确定阶段 特异性单倍型频率，依次减轻了经典的连锁不平衡分析方法 (Lewontin和Kojima，1960；Lewontin，1964)。通过在受试者中 的交叉列表来估计在所研究的四个不同多态性间非随机等位基因关联 的程度，其中对同一个体进行两个或多个测试。在所有诊断分类中的 所有受试者均包括在这些分析之中。

通过特定行为的分析。在多巴胺D2受体基因DRD2、DβH和DAT1基因 在TS中作用的研究中(Comings等，1996c)，发明者发现通过不同的 行为症状群的分析是可以提供相当信息的。这是检测在没有所研究行 为的对照和TS先证者和具有所研究行为的亲属中特定等位基因的流行 率。

5-羟色胺和色氨酸水平。用于血小板5-羟色胺水平、5-羟色胺/血 小板比率和血浆5-羟色胺水平分析的技术在他处给出(Comings， 1996b)。 结果

对照。无关的CEPH祖父母组成60％的对照。为确定是否发明者自身 对照组的任何一个给出不同的结果，在不同组间比较多态性的频率。 通过卡方分析无显著性差别。

内含子6 DGGE多态性。在聚丙烯酰胺凝胶电泳上判断多态性。原 始内含子6 DGGE多态性的结果示于表62中。在91个对照的12.1％中出 现代表等位基因2的较低频率的条带。在40个TS患者中其显著增加至 27.5％，在10个药物成瘾中至50％，而在8个曾自杀的抑郁受试者中达 37.5％。然而，这些数字均较小，而且发明者意图在发展为一大量受 试者的研究前鉴定所涉及的变体。测序研究鉴定了两个多态性，一个 G→T变体以及另一个G→A变体，不同的两个碱基对(Comings等， 1995)。发明者首先利用连接试验来分别检测这些变体，然后利用经 修饰的引物和限制性内切酶发展了一个更简单的步骤(见方法)。

                      表62

       TDO2内含子6的DGGE多态性的初步结果 组         n          11       12        22      ％2         OR         CI          x2      p 对照       91         80       11        0       12.1 抑郁       8          5        3         0       37.5        4.36     0.91-20.8     3.91     0.083* 药物依赖   10         5        4         1       50.0        7.23     1.8-29.2      9.71     0.008* 病理性     26         16       7         3       38.5        4.55     1.6-12.3      9.55     0.007* 赌博 TS         40         29       9         2       27.5        2.76     1.1-7.0       4.72     0.031

    OR＝奇比率12，22/11

    CI＝OR的可信区间

    *Fisher双尾精确检验

G→A变体。内含子6 G→A变体的结果示于表59中。141个对照中， 只有3.5％携带A等位基因。所检测的10个组中，在α＝0.05处唯一的显 著结果是A等位基因增加至299个TS受试者中的10.4％(奇比率 3.15)，以及在151个TS一级亲属中的10.6％。这些在Bonferroni校 正的p值0.05/10或0.005处均不显著。

G→T变体。G→T变体的结果示于表60中。在197个对照中，15.7％ 携带T等位基因。其增加至在108个具有ADHD的受试者中的25.0％ (p＝0.048)，在73个具有药物或多物质依赖的受试者至28.7％ (p＝0.016)以及在65个具有酒精依赖的受试者中的6.1％ (p＝0.049)。在α＝0.005处这些均不显著。

G→A或G→T变体。发明者检测了G→A或G→T多态性存在的流行率 (表61)。在135个两种检测均进行了的对照中，17％携带任一种等位 基因。其对于96个具有ADHD的受试者增加至29.1％(p＝0.028)，对70 个具有药物依赖的受试者至32.9％(p＝0.01)，以及对271个具有TS的 受试者至29.9％(p＝0.005)。对于64个具有酒精依赖的受试者，其降 至6.3％(p＝0.03)。在α＝0.005处只有具有TS的结果是显著的。

外显子7的A→C，748 Asn→His变体。发明者对Asn→His变体可能 能提供信息充满信心，因为其为一种外显子变体，而且涉及在血红素 结合中重要的氨基酸。C或His等位基因存在于48个对照的6.3％中，而 且这个值对于具有ADHD、孤僻症、精神分裂症以及TS的受试者由些许 变化，但无一显著。

CCCCT多态性。对于所有被测受试者，在内含子5 3’末端GCCCT重 复区域处等位基因的碱基对长度和频率如下：

    等位基因      频率

    大小

    210bp         0.018         240bp            0.838

    215bp         0.053         245bp            0.018

    220bp         0.023         260bp            0.005

    230bp         0.045

迄今，240等位基因和240/240基因型是最常见的。为了分析的目 的，将240/非240和非240/非240基因型的频率同240/240基因型的频 率相比。对于125个对照，31.2％携带240/非240或非240/非240基因 型。对于其它组的流行率几乎相同，在22.1％到30.5％的范围内，而且 无一同对照显著不同。

非随机等位基因关联。表63显示在四个所研究的TDO2变体间非随 机等位基因相关性估计值的结果。虽然对总共1245个受试者测定了G →A和G→T变体，但仅有10个受试者对于A和T等位基因均为杂合的， 一个是TT纯合子和A杂合子，表明两种突变在同一染色体上。每个变 体等位基因相对罕见，18.0％的T等位基因以及24.1％的二者之一。这 些结果表明这两个邻近的突变(2bp距离)存在于不同的染色体上， 而且所观察的分布同独立事件的偶然联合没有区别。312个测试了G→ T和A→C变体的受试者(表63-B)中，没有一个两者均为杂合的。对 于总群，只有7.4％在相同染色体上携带C等位基因(在AA纯合子中AC 杂合)。621个测试了G→A和CCCCT多态性的受试者(表63-D)中，只 有六个为A和非240bp CCCCT等位基因杂合的，以及一个非240/非240 纯合子为GT杂合子。这些分布同偶然性没有不同，表明它们是在完全 分离的染色体上。

最后，696个测试了G→T和CCCCT多态性的受试者中，(表63- E)，169个240/非240杂合子中80个(47.6％)为GT杂合子，非240/ 非240纯合子中19个(70.3％)为GT或TT，而TT纯合子中10个(100％) 为非240/非240纯合子。这个关系是高度显著的(x2＝421.07， p＜0.00001)，表明在非240 CCCCT变体和T等位基因之间存在高度的 非随机等位基因关联。结果表明至少50％的非240等位基因发生在T等 位基因染色体上，而且至少78％的T等位基因发生在非240等位基因染 色体上。

                       表63

           四个不同TDO2变体间非随机等位

           基因相关性的估计(df＝4) 63A.内含子6 T→A和T→G间

         G            GT           TT            合计         x2          p G            944          194          19            1157 GA           70           10           1             81 AA           7            0            0             7            2.74         0.60 合计         1021         204          20            1245 63B.内含子6 G→T和外显子7 A→C(Asn→His)

         G            GT           TT            合计         x2            p A           227           60           6             293 AC          18            0            0             18 CC          1             0            0             1            5.43          0.24 合计        246           60           6             312 63C.内含子6G→A和外显子7A→C(Asn→His)间

        G             GA           AA            合计         x2            p A           254           16           0             270 AC          20            1            1             22 CC          2             0            0             2            9.72          0.045 合计        276           17           1             294 63D.内含子6 G→A和内含子5 CCCCT多态性间

       G       GA           AA            合计          x2        p 240/240    426     17           5             448 240/x      144     6            0             150 x/x        21      1            0             23            1.97       0.74 合计       591     25           5             621 63E.内含子6 G→T和内含子5 CCCCT多态性间

       G       GA           TT            合计          x2        p 240/240    473     28           0             501 240/x      88      80           0             168 x/x        8       9            10            27            421.07     ＜0.00001 合计       569     117          10            696

单个行为的比较。当对于A或T等位基因比较不同行为评分的均值 时，只有多种恐怖症存在的结果是显著的，对于“均无”的那些平均 评分为2.89(p＝0.043)。当在没有恐怖症的对照、没有恐怖症的TS 先证者和亲属以及具有恐怖症的TS先证者和亲属间对各变体的流行率 进行比较时，对于恐怖症的结果具有最高度的线性x2(3.45)，但并 不显著(p＝0.06)。此处每种的流行率在这三组间从18.8％增加至 24.15％到34.1％。各行为中无一同CCCCT多态性的非240bp等位基因显 著相关。

TDO2多态性和5-羟色胺水平。从以前的研究中可获得血小板5-羟 色胺和血液色氨酸水平的资料(Comings，1990b)。由于一些受试者 参与到两个研究之中，所以确定在具有不同TDO2等位基因的受试者中 血小板5-羟色胺或血液色氨酸水平是否存在任何差别是可能的。这些 结果示于表64中。通过ANOVA分析或通过Mann-Whitney非参数检验， 对于G→A变体，同G/G受试者相比，G/A和A/A中5-羟色胺/血小板比率 无显著性改变。5-羟色胺/血小板比率值的分布对于那些具有GG或 GT、TT基因型的。

虽然数值范围是相似的，但分布不同于正态分布。对于携带G→T 多态性的GG基因型的那些，许多值集中在0.5-1.25的范围内。相反， 携带T等位基因的那些很少在这个范围内。对于T等位基因组还有一个 10.9的超偏值。当清除该超偏值时，对于携带T等位基因的那些，平 均5-羟色胺/血小板比率显著较高(p＝0.003)。当该值 当排除该值时，p值降至0.081。然而，用更合适的Mann-Whitney非 参数检验，T等位基因组仍具有显著高的均值。对于CCCCT重复多态 性，如所预期的，携带非240等位基因的那些具有较高的5-羟色胺/ 血小板比。然而，差异不显著。色氨酸水平对任何多态性均不显著。

                      实施例11

               遗传学关联的累加性

PS1基因多态性。早衰素-1(PS-1)多态性时一个双等位基因标 志，定位于14号染色体上，已证明其参与阿尔茨海默氏病。鉴于吸 烟者发展为阿尔茨海默氏病的风险降低的报道，发明者在一系列的 132个已经确定了其酒精和香烟使用模式的非西班牙白种人受试者中 检测了PS-1基因。发明者发现该基因的纯合子(基因型1/1和 2/2)显著更常见为吸烟者(p＜0.05)，而且在“密执安酒精中毒筛 选测试”(MAST)中具有显著升高的评分(p＜0.01)。

通过标准的方法从全血中提取受试者的基因组DNA。用PCRTM方法 (Saiki等，1988)来扩增靶DNA，在不同的反应中利用0.1μM的各 引物(5’CACCCATTTACAAGTTTAGC3’(SEQ ID NO：19)和 5’CACTGATTACTAATTCAGGATC3’(SEQ ID NO：20))。反应首先在94 ℃变性5’，然后进行第二步94℃变性30”，50℃退火30”并在72℃ 延伸30”。将第二步重复34循环，而且最后延伸步骤在72℃ 5’。将 199bp的扩增产物用2.5U的限制性内切酶BamHI在37℃消化过夜。

将所消化的产物在10％的PAGE上于150V跑2h，并用溴化乙锭染 色。基于产生181bp和18bp的两个片段的限制性酶切位点A-C确定 基因型。

ADRA2C二核苷酸重复多态性。ADRA2C二核苷酸重复多态性在染色 体4p上，跨越179-193碱基对。该基因的人基因组数据库登记号为 M94915。发明者在一系列53个非西班牙白种人物质滥用者中检测了 该遗传学标志并发现低碱基对等位基因(≤181bp)的存在同更严重 的药物滥用模式(可卡因、安非他明和海洛因使用)，但较少地同重 度酒精中毒相关。发明者以下面的方式构建了二核苷酸重复等位基因 的基因型：基因型1＝≤181bp的纯合性；基因型2＝杂合性(等位基 因1≤181bp，等位基因2≥183bp)以及基因型3＝≥183bp的纯合 性。基因型1同花费在药物上的高钱量(p＜0.01)、高安非他明使用 年数(p＜0.05)以及高海洛因使用年数(p＜0.05)相关。相反，高碱 基对等位基因(基因型3)同在过去的30天中酒精使用多 (p＜0.01)、高酒精使用年数(p＜0.05)和将酒精中毒(而不是药 物)指定为寻找治疗的首要原因(p＜0.05)相关。

该多态性的人基因组登记号为GDB：196352而序列为M94915。通 过标准的方法从全血中提取受试者的基因组DNA。用PCRTM方法 (Saiki等，1988)扩增靶DNA，在不同的反应中利用0.1μM的各荧 光标记的引物(5’AGTGGGCAGGGCGGGGCAGGT3’(SEQ ID NO：21)和 5’CGCTGCCTCCCTTCCACCTGTTG3’(SEQ ID NO：22))。反应首先在 94℃变性5’，然后进行第二步94℃变性30”，57℃退火30”并在72 ℃延伸30”。在一个循环中将第二步重复29次，而且程序以一在72 ℃ 5’的延伸步骤结束。对于凝胶分析，每个反应由0.5μl稀释的扩 增PCRTM产物(15μl于75μl去离子水中)、2.5μl含有2.0μl去离 子甲酰胺+0.25μl的ROX500标准+0.25μl兰色doxtran染料的混合 物组成，并在92℃变性2’。将变性的样品上样于Applied Biosystems 373 DAN测序仪(GeneScanTM)的6％PAGE中，并于 1500伏特以及300W下将跑胶5h。处理凝胶，并利用内标准 (ROX500)分析。基于颜色和片段的大小通过基因分型仪(genotyper) (1.1版本)识别两个峰。所分配的值是表现其等位基因大小精确性 判断的分数。从每个凝胶文件打印出每个标本完整的信息，并将编辑 过的资料进行分析。

发明者在一系列64个物质滥用者中检测了二核苷酸重复的多态 性，PENK基因的3’末端的CA重复。发明者发现高碱基对等位基因 (≥80个碱基对)纯合的受试者具有显著更严重的酒精中毒和药物 滥用。高碱基对等位基因同高醉酒年数(p＜0.05)、高药物戒毒治疗 次数(p＜0.01)、高海洛因使用年数(p＜0.05)、高药物治疗次数 (p＜0.05)以及美沙酮维持治疗的高频使用(p＜0.05)相关。

                         实施例12

     确定对用PHENCALTM治疗敏感的等位基因多态性

为确定哪种RDS基因、特别是哪种多态性可诊断出对药物干预抑 制特定RDS行为最敏感的个体，对潜在的候选者将检测RDS基因中的 特定多态性，进行各种心理测验来鉴定RDS行为，和/或利用此中所 公布的组合物进行药理学治疗。可以统计学评价特异RDS基因或基因 多态性的存在同通过心理测验鉴定的RDS行为的存在和/或同利用此 中所公布组合物的治疗在RDS行为中的改变的相关性。表现出同被神 经营养组合物抑制的RDS行为有统计学显著(例如p＜0.05)相关性的 RDS基因多态性被鉴定作为诊断更可能利用神经营养组合物成功治疗 个体的标志。在表4中给出了RDS治疗组合物成分的总体配方，而且 考虑所列的一个或多个成分将在治疗表现出此中所描述的一个或多个 RDS行为的人中是有效的。此外，表6-16含有对此中所描述的特定 的RDS行为的治疗中优选的特定配方。而且，对于特定的成分如何影 响由兴奋剂(可卡因等)、阿片剂和镇静-催眠剂所诱导报偿的简要 示意图见表17-19。对于RDS行为的联合遗传学诊断的治疗方法的具 体实例描述于下面：

碳水化合物暴食或抗肥胖。关于同碳水化合物暴食和成功治疗的 遗传学联系，发明者目前正测定许多先证者的基因型，并提供受试者 每天6个PHENCALTM配方的胶囊，而且测定在90天的阶段所失的磅 数，碳水化合物暴食评分，以及在接下来的6-8个月后确定体重的再 增加。这将对照安慰剂组进行。通过研究将确定各种基因型下是否发 生最大的改善。对于肥胖症的研究，发明者将确定下面的基因和可能 其它的以及它们各自的多态性，此中已经提供的同用PHENCALTM成功 治疗有关的有：D1、D2、D4、DAT1、DβH、COMT、MAOA(x)、 TDO2、APO-D、染色体-2标志、UCP-2、CNR1、GABAB3、HTR2A、 HTR1A和nNOSla(见表5)。 具体操作：对PHENCALTM和含有烟酸铬盐的变体的根据基因型不同的 临床反应

研究参与者。在该研究中的参与者将为病态肥胖者而且体重在理 想体重的130-180％之间或者对于女性具有34％的身体脂肪以及对于男 性具有28％的身体脂肪。参与者将在18-65岁的年龄之间。患者如果 具有高血压、糖尿病或其它衰弱性疾病将被排除。

研究设计。该临床实验将是一个受试者的双盲安慰剂对照研究， 同相配的安慰剂(由Weider营养组，盐湖城，Utah制造)相比他们 被给予每天6个PHENCALTM胶囊(对于总体配方见表4，而对特定配 方见表7)。这将是一个14wk研究。前两周包括深入的病情检查， 包括血液筛选和口腔拭子DNA收集以及磅秤体重检测。一旦受试者进 入本研究而且签定了一个标准的书面协议，则将由独立的地方肺实验 室利用Collins Helium稀释肺功能单位(Warren E.Collins公 司，Braintree，Mass.)来测定残余肺容积。将利用同水压称重高度 相关并具有0.96到0.99间的再测试可靠性(Ward等，1978)的 Whitmore容积仪(Whitmore Eenterprises，San Texas)进行水下 测试(替代方法)。将使用一种校准至1/10磅的Deteco商用平台磅 秤(8850型，Deteco Scale公司，Web City，Missouri)来获得磅 秤体重。此外，发明者将利用双能量X线吸光测定法(DE&A)测骨密 度。

在完成所有这些测试的2周期间内，将除了他们的基因型(它们 将保密直至准备对研究进行分析)外的测试结果提供给受试者，并随 机选择预先编码的含有PHENCALTM或其相配的安慰剂的瓶子中的一 个。受试者将被要求每天服用6个胶囊-在早餐、午餐和晚餐吃饭前 大约1小时服两个。制造者将作为管理员，并将在分发前编码每批。 研究者、分发产品的研究技术员或受试者中将无人知道哪个编号对应 PHENCALTM或相配的安慰剂。同其它的一些研究特别是单用或联合d- 氟苯丙胺或芬特明来完成的那些不同，没有提供饮食或锻炼信息而且 受试者只要他们严格地按照所开处方服用补充剂则将被要求在测试期 间进行任何他们希望的活动。(在一特定数量的受试者中，发明者可 能加入由Dr.Gilbert Kaats，San Antonio，Texas发展的“最适 健康饮食计划”)。受试者将每周到中心来选另一瓶补充剂或安慰 剂，并测定磅秤体重。在测试阶段的总结时(从服用胶囊开始的额外 的12wk)，受试者将完成一个最后身体组成测试。将所有资料进行 计算机处理并将由德克萨斯Houston-San-Antonio的德克萨斯大学健 康科学中心的计算机化研究系进行分析。在分析时，管理员将被要求 公布编号。将由他们自己报告的产品使用情况计算所耗PHENCALTM和 安慰剂的实际数量。

在该研究中，主要的结果衡量将是在接受安慰剂或PHENCALTM的 受试者间不同的身体组成平均改变的比较。将评价PHENCALTM而无铬 盐以及含有吡啶甲酸铬盐、烟酸铬盐或两者都有的PHENCALTM。将在 根据基因型划分的小组中比较平均身体组成变化。如上面所描述的， 如早些所讨论的由Comings利用的方法，用标准多基因回归分析来分 析所有检测的基因间的一些单倍型(见关于基因分型细节的 OBKITTM)。

抗吸烟。利用NicorestTM配方，根据发明者的基本计划对许多重 度吸烟者测定基因型。在每天6个NicorestTM胶囊到90天的治疗方 案后，将根据舒服直至戒烟；戒断症状(包括抑郁)；复发来衡量结 果。对应所有上面的基因来评价该资料。根据Comings等(1996)以 前的工作，将采用完整的吸烟史(见关于基因分型细节的 NICOKITTM)。

具体方法：AlcotrolTM和CocotrolTM作为基因型的函数。研究 将包括将被给予抗酒精和抗可卡因配方的门诊病人，而且将根据早期 解毒戒断症状、和通过没有回到治疗方案中或已知回到药物选择来测 定的复发率来衡量结果(见表5)。

受试者。在该研究中，将利用明尼苏达多相人格调查表 (Minnesata Multiphasic Personality Inventory)(MMPI)和经同 意而进行的血液分析(CBC/SMACO24)对所有患者进行评价。在研究 的结束没有采取进一步血液测试。分组为：酒精-AlcotrolTM；酒精- 安慰剂；兴奋剂滥用者(可卡因)-CocotrolTM；兴奋剂滥用者-安慰 剂。

研究设计。对于依赖性评价，将作为可能的协变量测试年龄、体 重、性别、种族和进入BAL。在住院患者治疗处、医生、护士和受试 者中以及资料收集员均无人被提供关于哪个受试者接受AlcotrolTM 或CocotrolTM或相配的安慰剂的信息。剂量为每个配方每天两个胶 囊(见表8和9)，在饭前一小时分剂给予。 测试项目

皮肤电导水平(SCL)。皮肤的电特性已经被广泛地用于情绪反应 的评价中。该技术已经证实作为患者中应激水平(例如，焦虑或发怒 的程度)的一种检测是非常可靠的。如此，这是患者中应激水平的一 个间接的检测。SCL，皮肤电流阻抗(GSR)的倒数，监测由微欧姆测 定的绝对皮肤电导水平(Edelberg，1972)。在定位和通过交感活化 导致皮肤电导率增加的焦虑反应间存在相关性。因此，电导的降低同 自我觉醒的降低相关(Luthe，1969)。为进行这些检测，将 Autogen 3000连接至每个患者的优势手的中间三个指头上，并获得 一个读数。对于每个所选进行研究的患者在非预定的时间进行检测以 便患者不会意识到何时他/她将被检测。

临床检测。身体评分(同酒精的临床研究所戒断评价[CIWA-A]一 致)和BESS评分是在整个这28天留在住院患者治疗中心期间用于每 个患者的主观检测。身体评分和BESS评分均已经描述过(Blum等， 1989)。在治疗过程中，将由临床指导者、医生和临床护理指导者每 天观察这些因素的改变，而且将讨论他们的观察并协调至达成一致。 进入时每个患者均被分配一个5的基线评分值。每天将在一从6-10 的改善范围内和从0-4的倒退范围内注明改善或倒退，而5指同进入 状态无变化。

基因分型。如在本申请的SUDKITTM中所描述的，获准进入临床的 每个患者将被给予DNA-口腔拭子检测。所有基因型将对包括医疗指 导者的所有人员保密。当准备分析资料时，为了统计学的目的将基因 型仅仅提供给德克萨斯-Houston/San-Antonio的德克萨斯大学计算 资源系。待测的基因包括：D1、D2、D4、DAT1(10/10、9/9)、 TDO2、nNOS1α、CNR1、GABAB3、HT2R、MAOA(X)、COMT。

资料的统计学分析。将同安慰剂对比对单独酒精和兴奋剂滥用者 组和联合组分析AlcotrolTM和CocotrolTM治疗的效果。最重要的 是，发明者将评价对应激的治疗反应，临床检测包括身体评分和 Bess评分，作为基因型的函数。 具体操作：在ADHD先证者中HyperGenTM作为基因型的函数

研究参与者。发明者在一个双盲安慰剂对照的研究中给予利用 ADHD量表、TOVA测试和CCPT门诊诊所诊断的ADHD儿童每天6个 HyperGenTM配方的胶囊。发明者然后比较前和后测试的测试评分以及 结果同所研究的各种基因的相关性。该研究包括在两个地点(德克萨 斯和田纳西)的门诊诊所中的ADHD受试者。已经通过大量的心理测 试包括TOVA和ADHD量表(Cull和Blum，1997)以及Wisconsin卡 片分类测试诊断了受试者。参与者具有AxisII诊断的精神病状况排 除的阴性历史。在测试时所有受试者均没有开药，而且每个受试者均 被要求签署一个书面的同意和协议来按照方法服用胶囊。

研究设计。受试者进行两次完整的测试(包括TOVA、Cull/Blum ADHD量表和表现任务(见下面))，其形成一个测试-再测试模型。 在第0天进行最初测试(前测试)然后90天后重复一次(后测 试)。在两次之间，受试者被要求以每天6个胶囊的剂量(在早餐、 午餐和晚餐大约饭前1小时各服2个)服用HyperGenTM或者一种相 配的安慰剂。HyperGenTM的组分示于表12中。这是一个双盲安慰剂 对照研究，而且制造商持有预先编码的信息，其在研究结束时提供给 统计学家。工作人员或受试者中无人知道关于编码的瓶子的信息。

表现任务。使用两个表现模型来诱发电生理反应：

空间定位。这是一个反应时间任务(SOT)，(Posner等， 1988)其中引发提示呈现于左侧或右侧视野。比较当提供或不提供引 发提示时的反应时间。通过反应时件间的比较，其使得可以评价个体 在视野间平滑转移注意力的能力。在本研究中，任务是有结构化的， 所以其允许评价注意力过程的更基本的阶段，其同更深层的注意力操 作相关，而且趋向于在注意的更自动阶段上负载更重(Defrance 等，1993)。

应急持续表现。应急持续表现任务(CCPT)是一经典主题的变 体，其并入选择性和持续性注意力的因素。分析该任务以确保表现的 质量来代表注意力过程的更受控阶段。在屏幕的中心一次出现一个字 母。基本上，要求个体用他优势手通过点鼠标左键(右手人群)对一 特定的字母顺序作出反应：例如，如果立即由另一个“T”跟上上一 个“T”。在一对“T”中的第一个“T”用作一个警告提示，第二个 为“T”为靶。所有其它字母被认为是干扰物，其应被受试者忽略。 资料的基本计算是根据以前的工作(Defrance等，1997)。值得注 意的是，前额皮质似乎是参与持续注意力和努力最重的，关于该任务 上的总的表现其为重要的因素而且对兴奋剂药物非常敏感(Sostek 等，1980)。

记录方案。如所描述的(Defrance等，1996)，参考电极连接在 耳垂(A1-A2)，由28个有效记录位点记录EEG。每个刺激出现的开 始引发800msec。从中构成ERP的EEG采样：在每个信号时间中包括 100msec的刺激前采样，其用于基线校准。

资料分析。基本分析同以前的工作(Defrance等，1997)而且大 体上包括三个参数的评价，其中每个可能根据个体注意力过程的效率 而不同。这些参数为：ERP成分中的潜伏期、幅度、对称性(空间分 布)(Defrance等，1996)。

该工作可能使出于HyperGenTM的注意力过程改变同已经表明同 ADHD相关的等位基因(如前面所讨论的以及在该申请中所描述的 HYPERKITTM中所表明的)关联。至少预期携带DRD2A1等位基因、 DβH B1等位基因、DAT1的VNTR10/10重复以及TDO2、MAOA(X)和 HTR1A基因的多态性的受试者将表现出最强的反应。

抗暴力和攻击。由于已经发现在“病理性暴力”和多巴胺能多态 性(即DRD2和DAT1等位基因)间的相关性以及同分裂样和回避行为 间的相关性，所以评价攻击配方的使用同如在表14和15中所描述的 这些行为是合乎逻辑的。剂量将是每天6个胶囊，标准安慰剂作对 照。结果的衡量将是在各种先证者(即青少年和犯人)中非动机爆发 次数的降低以及敌意降低的大体平静。将结果值在6个月的时间框内 同上面所描述的基因型(见TEMPKIT)关联。在该研究中，发明者将 利用同表14或15相应的配方。该研究将在Larned Kansas的青年中 心中的40个监禁的青年中完成。

                       实施例13 用于多基因障碍中基因鉴定的一种多重累加性关联技术(MAA)：对

               于ADHD和共发病障碍的结果

ADHD是一种由大部分儿科心理学家和精神病学家治疗的最常见的 障碍，据估计存在于百分之2到8的学龄儿童中。有清楚的证据表明 ADHD是一种器官的、神经和/或遗传学障碍。同对照相比，ADHD或多 动儿童的父亲具有较高的ADHD、酒精中毒和反社会人格障碍 (ASPD)的频率，而母亲具有较高的ADHD、酒精中毒和“癔病”或 癔病人格的频率(Morrison和Stewart，1971；Cantwell， 1972)。ADHD儿童的同胞具有较高的ADHD的频率(Augest和 Stewart，1972；Pauls等，1983；Weiner等，1977)，特别是如果 父母中一个具有ADHD或如果儿童是同卵双生(Hechman，1994)。在 同胞与半同胞间这些行为的比率在从2.0到5.2的范围内，同ADHD 的遗传学病因学一致。同正常儿童相比，父母中一个具有ASP的儿童 在ADHD、发怒和发脾气的频率上具有显著增加(Cadoret等， 1978)。

同对照亲属的8％相比，ADHD先证者更多的亲属具有ADHD。对于 重度抑郁障碍、对立违抗障碍(ODD)、品行障碍、反社会人格障 碍、酒精依赖、药物或酒精依赖、包括广泛性焦虑障碍的焦虑障碍也 有显著增高的风险(Biederman等，1990)。ADHD和情绪障碍可能拥 有相同的家族易感性(Biederman等，1990)，具有品行障碍的ADHD 可能是ADHD的一个不同的亚型(Farone等，1993a)，而且ADHD和 焦虑障碍(Hodge等，1986)以及ADHD和学习障碍(LD)(Farone 等，1993b)在家族中独立传递。

很长时间以来已经观察到多巴胺代谢的缺陷参与ADHD的病因学。 边缘系统(腹侧被盖区)的多巴胺能神经元的损伤在啮齿类中导致多 动、反应过度、对应激反应差以及一系列其它障碍(Lemoal等， 1976；Lemoal等，1991)。刚刚出生后额叶多巴胺能神经元的化学 破坏产生一种对刺激剂反应的ADHD的动物模型(Shaywitz等， 1976；Shaywitz等，1991)。在具有Tourette障碍(TD)的儿童中 检测到低水平的HVA(Cohen等，1979k；Butler等，1979k)。在 ADHD的儿童中报道了低CSF HVA(Shaywitz等，1979k)，然而，也 报道了在CSF HVA和ADHD的多动和品行障碍的评分间的正相关性。 大脑影象研究表明在ADHD中富含多巴胺的纹状体中有缺陷(Comings 等，1991k；Noble等，1994k)，以及在ADHD和TD中额叶的功能低 下(Zametkin等，1990)。研究已经表明在缺少多巴胺转运蛋白或 DRD3基因的基因敲除小鼠中的多动症。多巴胺能激动剂已经被成功 地用于ADHD的治疗中。

发明者的总的假设是ADHD为一种由于影响多巴胺、去甲肾上腺 素、5-羟色胺、GABA和其它神经递质的基因的累加效应的多基因障 碍。所涉及的一些特定的基因为多巴胺基因(DRD1、DRD2、DRD3和 DRD4受体基因、多巴胺β羟化酶以及多巴胺转运蛋白)；去甲肾上腺 素(NE)和肾上腺素(EPI)基因(ADRA2A和ADRA2C受体、PNMT、 去甲肾上腺素转运蛋白、MAOA、COMT)；5-羟色胺基因(TDO2、5-羟 色胺转运蛋白、5-羟色胺受体基因)；GABA基因(GABA受体基因 GABRB3及其它)以及还未鉴定的其它基因。

发明者检测了三个多巴胺能基因DRD2、DBH和DAT(Comings等， 1997b)，三个肾上腺素能基因DBH、ADR2C和ADR2C(Comings等， 1998a)，以及雄激素受体基因AR，加上DRD2和5-羟色胺转运蛋白 基因，HTT(Comings等，1998b)对于ADHD和其它共发病障碍的累 加性效应。这些研究证明两个原则：第一，当将受试者分成代表这些 基因的0、1、2、或3个中有变体存在的组时，在QTV的大小上存在 一个渐进性的增加，其比对任何单个基因的相关性更显著。第二，这 些研究表明该技术可以用来鉴定通过增加QTV评分而在表型中发挥作 用的基因，以及由于它们降低QTV评分而在表型中发挥最小的或可忽 略的作用的基因。

发明者已经扩大这些原则来检测在ADHD中的合计29个不同基因 的累加性作用。发明者已经命名这为多重累加性关联(MAA)技术。 发明者已经检验了几个关于MAA技术的假设。由于不同的QTV可能在 评分的范围和大小中变化非常大，为了可以进行在不同QTV上多个基 因大小效应的比较，发明者已经利用回归相关性r、以及所解释的方 差r2的百分比对结果进行分析和绘制。下面是一些假设以及引入这些 研究中的方法。

用于ADHD和其它行为研究的MAA技术是基于这种假设，其认为大 多数精神病障碍是从双亲遗传影响多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺 素、GABA、NMDA和其他神经递质的基因的许多变异等位基因的结果 (Blum等，1990；Comings等，1996a；Comings等，1998a)。在该 报道中发明者选来检测的候选基因是基于该假设的。基于以前表明它 们在行为表型中发挥作用的研究选择同神经递质无关的基因。对于筛 选所添加的一个原则是同必须是可提供的候选基因相关的有用的多态 性。

第二，双胞胎研究表明大多数多基因障碍，包括ADHD和行为障 碍，百分之50到90是遗传的(Sherman等，1997；Slutske等， 1997)。由于每个基因负责仅仅百分之1到2的变异，所以简单的数 学表明必须涉及至少20到40个基因。在一给定的个体中数量可以更 小。第三，为避免环形析因，表明在由发明者或他人所研究的受试者 的一独立的组中对于每个基因的基因型的评分具有有效性是重要的。 发明者所检测的基因列于表65中。“证实的”列指那些在受试者的 一个独立的组中所用的评分已经被证实的基因。第四，用0、1或2 中的一个值对每个基因评分。例如，如果涉及一个双等位基因多态性 而且独立的研究表明1等位基因的显性，则评分为11或12＝2以及 22＝0。如果独立的研究表明基因型为共显性，则评分为11＝2，12＝1 以及22＝0。将一个类似的三个评分技术用于重复多态性。这便于每 个基因的加性效应的测试而且使得可以以一0到2的相似的尺度对每 个基因评分。第五，由于多基因障碍是常见的，所以许多基因被涉及 的事实表明所涉及的遗传学变体本身必须是很常见的。由于此，发明 者希望利用多态性和基因型分群来使评分为1或2的受试者的百分比 最大化。这些结果示于表65中％1，2列之下。注意在大多数病例 中，1+2百分比的总和大于百分之25，而且通常大于百分之50。

  表65

  MAA技术检测的基因

  基因                              多态性                     基因评分                 ％1， 2                  证实

                                                     0           1          2 多巴胺基因 1.DRD1               RFLP DdeI                           12，22      11         -，12                            是(Comings等.，1997b)

                 (Cichon等.，1994) 2.DRD2               RFLP TaqI A(Grandy等.，             11，22      12         -，36                            是(Blum等.，1995；Comings和

                 1989)                                                                                       MacMurray，1998) 3.DRD3               RFLP McsI(Lannfelt等.，1992)        12          11，12     -，47                            是(Crocq等.，1992；Comings

                                                                                                             等.，1993；Asherson等.，1996) 4.DRD4               SS重复(Lichter等.，1993)            其它        任何6-8    -，52                            是(Comings等.，1997a) 5.DRD5               DN重复(Ravindranathan等.，         2151/21513151/3151 25，61                           是(未发表)

                 1994) 6.DAT1               SS重复(Vandenbergh等.，1992)        x/x         10/10      42，51                           是(Cook等.，1995)

                                                                                                             是(Blum等.，1997) 5-羟色胺基因 7.HTT                启动子插入/缺失(Collier             SS           LL        SL                27，47         是(Kauck等.，1997；Lesch等.，1996)

                 等.，1996) 8.HTRIA              MR(Bolos等.，1993)                  127bp                  其它              -，24          是(未发表) 9.HTR1Db             RFLP HincII                         12，22                 11                -，59          是(Lappalainen等.，1995)

基因                多态性                                   基因评分              ％1，2               证实

                                                   0         1          2 10.HTR2A     RFLP Mspl(Arranz等.，1995；             11，22                 12         -，51               是(未发表)

         Williams等；1996) 11.HTR2C     RELP HinfI(Lappalainen等.，             其它                   M1，F11    -，79               是(未发表)

         1994)X 12.TDO2      RFLP BslI(Comings，1995)                GG                     GA，AA     -，5                是(Comings等.，1996) 去甲肾上腺素基因 13.DBH       RFLP TaqI(Wu等.，1997)                  22                     11，12     -，79               是(Wei等.，1997)(未发表) 14.ADRA2A    RFLP MspI(Lario等.，1997)               11          12         22         38，7               是(未发表) 15.ADRA2C    DN(Riess等.，1992)                      杂合                   homo**    -，27               是(未发表) 16.NT        RFLP MnlI***(Stber等.，              22          11         12         45，43

         1995) 儿茶酚胺代谢基因 17.MAOA      SS重复X(Hinds等.，1992)                 其它                  3320****  -，65               是(Gade等.，1998) 18.COMT      RFLP NlaIII(Lachman等.，                22          12         11         51，74              是(Lachman等.，，1996)(未发表)

         1996) GAGA基因 19.GABRAA3   DN(Hicks等.，1992)X                     其它                   3168#      -，67               是(未发表)    基因             多态性                          基因评分                           ％1，2                证实

                                            0          1            2 20.GABRAB3    DN(Mutriangura等.，1992)          het                  ＜188/＜188       39，14         是(Gade等.，1996)(未发表)

                                                                 3188/3188 大麻酯受体基因 21.CNR1       SS重复(Dawson，1995)            25/25    25/其它    其它             43，10         是(Comings等.，1997c；Johnson

                                                                                                  等.，1997) 烟碱胆碱能 22.CHRNA4     SS重复(Weiland和                 x/x        x/9         9/9              32，7          是(未发表)

          Steinlein，1996) NMDA受体基因 23.NMDAR1     RFLP HpalI*(Rupp等.，1997)      11         22          12               10，44         是(未发表) 脑啡肽基因 24.PENK       SS重复(Konig等.，1996)           其它      2178/2178  -，64                           是(Comings等.，1997d) 雄激素受体基因 25.AR         GGC(Sleddens等.，1993；          其它      216###      -，58                           是(Coetzee和Ross，1994；lrvine

           Sleddens等.，1992)                                                                      等.，1995) γ-干扰素基因

基因            多态性                               基因评分                        ％1，2                  证实

                                          0           1              2 26.INFG    RFLP NlaIII(Wu和Comings，         11           12             22              50，27             是(Comings等.，1998c)

       1996) 27.CD8A    SS重复(Polymeropoulos等.，        142/142                     其它            -，73              是(未发表)

       1991) 早衰素-1 28.PS-1    RFLP BamHI(Scott等.，1996)        12                          11，22          -，54              是(未发表) CRF基因 29.CRF     RFLP XmnI(GDB)                    11           12             22              8，2               是(未发表) 表65说明

X＝X-连锁的

*homo 154＝＜154bp纯合性以及3154bp纯合性；hetero＝杂合子

**homo 183＝＜183bp纯合性以及3183bp纯合性；hetoro＝杂合子

***A1970G

****2＝男性3320bp。女性任何3320

#2＝男性中3168，女性中3168/3168，0＝其它

##2＝a-c/a-c或d-g/d-g纯合子，0＝杂合子

###2＝男性216重复而女性216/216，0＝其它

MR-单核苷酸重复；

DN二核苷酸重复；

SS短序列重复；

RFLP-单碱基对多态性(限制性片段长度多态性)

未发表-来自发明者实验室的在一独立的受试者组中该基因和多态性对一个或多个其它表型的效应的未发表的观察。

GDB-基因组数据库

第六，如果在多基因障碍中所涉及的遗传学变体是常见的，它们 必须从根本上同引起单基因障碍的那些不同，即它们必须仅仅导致基 因表达中度的改变，因为如果它们引起基因表达重度的改变则它们可 能引起单基因障碍(Comings，1998b)。基于这些观察，发明者已经 表明通过形成Z-DNA的可变的长度，常见的二核苷酸重复多态性本身 在多基因遗传中发挥一个重要的作用(Comings，1998b)。这些重复 是大量的，等位基因是普遍的，而且所形成的Z-DNA对基因表达发挥 一个适度的作用。一个有意义的表型效应可以仅仅通过将在许多不同 功能相关基因处的变体的效应加到一起来产生。对于本研究其影响为 当存在时发明者特别对利用短的串联的重复多态性感兴趣，而且任何 单碱基对多态性可能同一个或多个与该基因相关的短的串联重复的等 位基因是连锁不平衡的。由于后者，发明者假设任何单核苷酸多态 性，即使其同外显子或启动子无关，可能为MAA技术提供有价值的信 息。第七，为检测影响一给定神经递质或功能组的两个或多个基因的 加性效应，基于每个单个基因评分的简单相加设立一称为多基因 (PG)的虚构变量。检测在一给定功能群中基因的各种联合对方差百 分比的效应使得可以鉴定对一定量评分具有加性效应的基因的亚群。 然后将该群基因用来形成一个在不同功能组间检测基因加性效应的反 式多基因评分(TPG)。PG或TPG评分越高，一个体拥有的表型相关 基因变体的数量越多。

第八，如在以前的研究中(Comings等，1996b；Comings等， 1998a；Comings等，1998b)，线性回归分析用来检测加性的基因评 分。这使得可以计算r2或被检测基因贡献于性状的方差的百分比，只 要F来估计效应的大小，而p是效应的显著性。一个基因解释仅仅一 个性状大约百分之1的方差的事实并不意味着该效应是不重要的。依 因子的数量，其可以提供一表型效应的高达百分之10(r)的可预测 性(Rosenthal和Rubin，1982；Ozer，1985)。第九，由于各种行 为评分具有不同的大小范围，所以将累积的r2值而非行为评分用来提 供在不同表型间29个基因的效应的精确比较。

第十，发明者已经选择来首先检测基于DSM-IV(美国精神病协会 的诊断和统计学手册IV，1994)标准的注意力缺陷多动(ADHD)评 分。发明者已经利用通过比较具有不同群基因型的个体中ADHD评分 的均值来利用全范围评分的方法，而不是强调一个两分的诊断。第十 一，有两个潜在的方法用于回归分析：单变量和多变量。对于单变量 分析，将每个基因的评分相加来产生一个单个的评分，并确定在该评 分和QTV之间的相关性。这是0、1、2、3评分方法的扩展。该方法 的优点是只有当一个或多个基因对QTV具有加性效应时r值才增加。 当加入具有减性效应的基因时，r降低。这对最终r和r2值的确定是 保守的。然而，由于将所有的基因评分合并成一个单个的变量，所以 不管所加基因的数量自由度通常为1。关于p值这是非保守的。

对于第二种方法，在依多变量回归拟合中评价每个单个基因评分 并同分析QTV的相关性。由于随着每个基因的加入自由度增加，所以 其对于p值是保守的。然而，由于加性和减性基因均对r值有贡献， 所以这种方法对于不论基因在其效应上是加性还是减性的而均增加的 r和r2值是非保守的。

发明者由于两个原因而选择了单变量方法。第一，因为当加入对 QTV没有贡献的基因时r和p值均降低，所以其更保守。第二，由于 基因由一单个自由度所代表而不考虑所检测基因的数量，所以其具有 同时检测几百个基因的效应而不丢失一个力的潜力。

第十二，为检测大多数致病性的障碍同ADHD具有相同的基因的假 设，发明者还检测了同一群的29个基因在对对立违抗障碍(ODD)、 行为障碍(CD)、抽搐、学习障碍(LD)和其他QTV的定量评分上的 加性效应。对于大于14岁的受试者，发明者还检测了对酒精滥用/依 赖、药物滥用/依赖和吸烟的QTV。第十三，这些致病性障碍的检测 还使得发明者可以检测这种假设(Comings等，1996b；Comings等， 1996a)，认为除了共用的基因外，不同的致病性障碍利用一些基因 以及对特定表型唯一的基因的组合。第十四，为探索对于在一单个基 因和一给定表型间的相关性，是否一个p＜0.05的显著性水平在是否 那个基因具有一加性效应上具有任何意义，发明者检测了在关于是否 它们在表型评分上具有一加性或减性效应的145个基因-表型相关性 的r2和p值间的关系。最后，在一个利用所有候选基因的最初的操作 鉴定出那些具有加性效应的后，渐进性地将每个加性基因加到一个新 的TPG评分中，并分析同问题中的QTV的相关性。这提供了可以通过 只利用那些被鉴定为对问题中QTV有贡献的基因而获得的总体r2的一 个估计。

一个加性评分的优点。一加性基因评分的利用发掘出许多多基因 遗传的最唯一的方面——不同基因的加性效应、不同基因的减性效 应、杂种优势和上位性的作用以及当在任何给定的个体或个体的群中 许多不同基因可能贡献同一表型时，仅有那些基因的一个亚群可能存 在这个事实。最重要的是，该方法可以补偿在不同个体中不同群基因 的存在。因此，许多次一个相关研究被一些而并非全部的后续研究所 重复。这是因为这样的事实，即该基因仅对一小百分比的方差有贡献 而且基因的一个群可能参与一个受试者组而另一群参与一不同的受试 者组。一个同等有效的结论是不同的基因群在不同的个体群中能够产 生相同的表型，而并非暗示一个或另外的结果是不正确的。由于加性 评分衡量所涉及基因总群的效应，所以MAA技术在不同的受试者组间 可能是更加可重复的。为了给出一个特定的例子，虽然DRD2(TaqI A1等位基因)(Comings等，1996b；Blum等，1998)、DRD4 (48bp7个重复)(Lahost等，1995)、DBH(TaqI B1等位基因) (Comings等，1996b)、和DAT1(10个重复等位基因)基因的变体 (Comings等，1996b；Cook等，1995；Gill等，1997；Waldmaqn 等，1996)均参与ADHD的病因学，但每个可能在一些受试者组而非 其他的中具有一显著的效应。然而，如果对于每个基因的生理学效应 是相似的(在多巴胺代谢中的改变)那么对于所有四个的加性评分应 该证明是在所有ADHD受试者的组中一致而且显著高于对照，表明其 是一个在多巴胺代谢中普遍的遗传学缺陷而不是任何在ADHD病因学 上重要的单个基因。对于在不同神经递质群间的加性基因采用相同的 原理。加性评分的一个最终力度是通过利用基因的不同组合可以将一 个最大信息群优化为一给定表型的鉴定。同单个基因的最小效应不 同，这样一个优化过的群可以提供重要的预测和诊断价值。

假设。第一个假设为，由于多基因障碍涉及多个基因的加性效 应，所以MAA技术将在所涉及基因的鉴定中比在一次一个基因的检测 中提供更大的力量，而且只有那些具有一加性效应的基因的加入才能 使r2和p值最大化。为检验此，发明者检测了在由274个Tourette 综合征和62个衡量了ADHD严重性的对照组成的336个白种人个体中 29个基因的效应。第二个假设为，如果检测两个独立的样本，发明 者推测由于不同的样本可能利用不同的基因群，所以许多而并非全部 的在一个样本中为加性的基因可能在再测试样本中是加性的，许多而 并非全部的在一个样本中为减性的基因可能在再测试样本中是减性 的，一些基因在一个样本中可能是加性的而在再测试样本中是减性 的，以及对于两个样本多个基因的加性效应可能显著大于任何单个基 因的效应。发明者还检测预期具有一个较小的N时r2波动可能更大。 为检验此，将336个受试者随机分成两个独立的168个受试者的组， 在每个组中具有相同的TS和对照受试者的数量以及相同的男性和女 性数量。对于每个组检测了在ADHD的PG和TPG评分间的相关性。第 三个假设为，当检测不同的表型时，发明者假设致病性障碍应该共用 一些ADHD基因，而一些基因和基因的组合坑对于致病性障碍是唯一 的。为检验此，发明者检测了29个基因对不同QTV——对立违抗障 碍、行为障碍、抽搐、学习和其他障碍的加性和减性效应。

测试受试者。研究组由336个无关的、非西班牙白种人受试者组 成。这些中，274个具有一Tourette综合征(TS)的诊断，而62个 为对照。TS受试者来自在希望城医疗中心的Tourette综合征诊所。 所有均符合TS的DSM-IV标准，而且所有均由发明者个人会见。虽然 这些主要是在以前的研究中检测的相同的受试者(Comings，1995a； Comings，1990)，但当在先前的研究中所用的受试者的DNA标本被 清除时，加入了一些新的TS先证者。发明者以前已经将发明者的TS 受试者分成那些具有轻度(1级，慢性抽搐太轻而无须治疗)、中度 (2级，足够严重而需治疗)以及重度(3级，在他们生活的一些方 面上具有非常的效应)(Comings和Comings，1987b)。在TS受试 者中，30％为3级，62％为2级而8％为1级。TS和ADHD为相似的障碍 而且来到诊所的TS受试者的大部分具有致病性ADHD(Comings和 Comings，1987b；Comings和Comings，1984)。TS受试者中，54％ 符合ADHD的DSM-IV标准。对照以及具有和没有ADHD的TS受试者的 存在使得该组特别适合于检测作为一个连续的变量的在不同等位基因 和ADHD间的相关性。TS受试者的年龄平均为18.0岁(S.D. 13.2)。虽然大多数为较大的儿童和青少年，但29％为21岁或更 大。对照的平均年龄为46.3岁(S.D.15.38)。TS受试者和对照均 已经在他处描述过(Comings等，1996b；Comings，  1995a； Comings，1994b；Comings，1994a；Comings，1995b)。

每个对照和TS先证者均被要求填写一个基于诊断会见程序 (Robins等，1981)、DSM-III-R(精神障碍的诊断和统计学手册， 1987)和DSM-IV(美国精神病协会诊断和统计学手册IV，1994)对 于一系列障碍的标准的调查表。问题询问是否在儿童和青少年时期 DSM-IV ADHD症状从未或很少出现(评分＝0)，偶尔出现(评分＝1) 或一直存在(评分＝2)。对立违抗障碍(ODD)和行为障碍(CD)评 价也基于这些障碍DSM-IV标准的数量的合计。为评价具有学习障碍 的问题的存在，询问受试者三个问题。1。你曾被置于一教育受阻 (EH)、学习受阻(LH)或学习障碍(LD)的特殊班吗？2。你曾经 上过游戏班吗？3。你曾经被告知你有学习障碍吗？每一个问题评分 为不＝0或者是＝1而且相加形成LD评分。在加利福尼亚置于上述特殊 班中的任何一个均需要一个或更多的教育心理学家的全面的评估，并 且评价为比其同伴落后两年或两年以上。酒精评分(Comings， 1994b)基于酒精滥用/依赖的DSM-IV症状的总结。抽搐评分基于一 系列运动性和声音性抽搐存在的总结(Comings，1995a)。用于行为 评分的特定的问题在他处已经有详细的描述(Comings等，1996b； Comings等，1998a；Comings等，1995a；Comings，1990； Comings，1994a；Comings，1995b；Robins等，1981；Comings， 1995c；Comings，1994c)。对每个受试者均复查了调查表以保证它 们的精确性。一个基于症状评价方法的调查表其精确性、利用性和敏 感性已经由他人通过比较这样一种工具的使用证实(Gadow和 Sprafkin，1994；Grayson和Carlson，1991)。

为检测在仅利用加性基因时即使随机评分的等位基因群可能表现 出一显著的效应的可能性，根据在一算法中的一循环关闭随机数指定 每个基因0和2的评分，其产生如在表65中所报道的那些的相同的 最终等位基因频率。

发明者利用dstatt10.exe程 (http；//odin.mdacc.tmc.edu/anonftp/)来提供在线性回归分析 中获得的大F值的精确p值。利用线性卡方分析来检验在没有和那些 具有ADHD的受试者间基因数量的显著性差别。利用了来自SPSS， Inc(芝加哥，IL)的SPSS统计学软件。

结果。表65列出29个基因的名字、多态性的类型、一个对于多 态性的参考其包括测定基因型的技术、如何对基因型评分、评分为1 或2的受试者的百分比、是否已经在一独立的受试者组中确证了基因 型评分的方法以及何时提供的，其参考。为检验假设#1，通过线性回 归分析计算渐进性PG和TPG基因评分对应ADHD变量的r、r2、F和p 值(表66)。在目前的结果中，发明者将基因分成基于神经递质或 它们影响的功能的组。

             表66

            单个基因、PG和TPG评分对ADHD QTV的回归分析结果(N＝336)

                                     r            r2       F        p 多巴胺基因 DRD1                       .064        .0041          1.38    .240 DRD2                       .091        .0084          2.83    .093 DRD3                       .016        .0003          0.08    .772 DRD4                       .007        .0000          0.02    .901 DRD5                       .047        .0022          0.74    .388 DAT1                       .090        .0081          2.73    .099 PG：D1+D2                  .111        .0125          4.23    .040 PG：D1+D2+D3               .095        .0092          3.08    .080 PG：D1+D2+D3+D4            .084        .0071          2.39    .122 PG：D1+D2+D3+D4+D5         .096        .0093          3.13    .078 PG：D1+D2+D3+D4+D5+DAT     .117        .0139          4.70    .031 PG：D1+D2+D5+DAT(D)        .144        .0208          7.10    .0081

                                        r                r2               F                 p 5-羟色胺基因 HTT                       .103             .0106             3.57             .059 HTR1A                     .071             .0050             1.68             .20 HTR1Dβ                                        .030             .0009             0.31             .57 H7R2A                     .040             .0016             0.53             .46 H7R2C                     .015             .0002             0.08             .78 TDO2                      .050             .0025             0.73             .39 PG：HTT+1A                .120             .0143             4.84             .028 PG：HTT+1A+1Dβ                        .117             .0137             4.65             .032 PG：HTT+1A+1Dβ+2A        .115             .0145             4.92             .027 PG：HTT+1A+1Dβ+2A+2C     .118             .0139             4.71             .031 PG：HTT+1A+1Dβ+2A+2C+TO  .125             .0158             5.38             .021 PG：HTT+1A++2A+TO(S)      .126             .0167             5.68             .018 TPG：D+S                  .192             .0370             2.83             .0004

                              r         r2        F             p 去甲肾上腺素基因 DBH                      .087     .0077     2.57      .105 ADRA2A                   .110     .0122     4.11      .043 ADRA2C                   .154     .0238     8.14      .0046 NET                      .081     .0066     2.23      .136 PG：DBH+2A               .130     .0170     5.79      .017 PG：DBH+2A+2C            .188     .0355     12.30     .00052 PG：DBH+2A+2C+NET(N)     .205     .0422     14.70     .00015 PG：2A+2C                .185     .0344     11.89     .00064 TPG：D+N                          .249      .0624     22.23          .000036 TPG：S+N                 .231     .0535     18.87     .00025 TPG：D+S+N(DSN)          .272     .0741     26.73     .0000040 儿茶酚胺降解基因 MAOA                     .156     .0244     8.35      .0041 COMT                     .099     .0098     3.32      .069

                             r              r2             F              p PG：MAOA+COMT(C)                 .182           .0333          11.51          .00077 TPG：D+C                         .215           .0465          16.29          .00067 TPG：S+C                         .213           .0453          15.85          .00084 TPG：N+C             .272        .0741          26.71          .0000041 TPG：DSN+C                       .317           .1005          37.31          .000000028 GABA受体 GABRA3               .090        .0082          2.77           .097 GABRB3               .081        .0066          2.21           .14 PG：A3+B3(G)         .119        .0143          4.85           .028 TPG：D+G             .178        .0318          10.97          .0010 TPG：D+N+G           .262        .0686          24.62          .000011 TPG：DSN+G           .281        .0792          28.14          .0000021 TPG：DSN+C+G         .329        .1087          40.72          .000000005

                                      r            r2          F                p 大麻酯受体基因 CNR1                     .041          .0017          0.57          .45 TPG：D+CN                              .149           .0223         7.62             .0061 TPG：DSN+C+G+CN          .333          .1109          41.64         .000000003 烟碱胆能受体基因 CNRA4(NC)                .119          .0143          4.87          .028 TPG：D+NC                .179          .0320          11.06         .0010 TPG：DSN+C+G+CN+NC       .342          .1171          44.31         .000000001 NMDA受体基因 NMDAR1                   .076          .0058          1.96          .16 TPG：D+NM                .163          .0267          9.17          .0027 TPG：DSN+C+G+CN+NC+NM    .350          .1226          46.67         .000000000

                                       r            r2          F           p 脑啡肽 PENK                            .034     .0011         0.39         .53 TPG：PENK+D                     .137     .0187         6.37         .012 TPG：DSN+C+G+CN+NC+NM+PE        .351     .1234         47.03        .000000000 (NT) 雄激素受体基因 AR                              .106     .0111         3.77         .053 TPG：D+AR                       .168     .0284         9.77         .0019 TPG：D+N+AR                     .271     .0731         26.36        .0000048 TPG：DSN+AR                     .287     .0829         30.19        .00000078 TPG：NT+AR                      .364     .1327         51.13        .000000000 免疫基因 CD8A                            .026     .0007         0.23         .63 INFG                            .031     .0009         0.32         .57

                                          r         r2       F                p PG：CD+ING(I)                    .039       .0016      0.52      .47 TPG：NT+AR+I                     .354       .1258      48.08     .000000000 早衰素-1 PSI                                         .071       .0051     1.71             .191 TPG：NT+AR+PS                    .348       .1212      46.06     .000000000 促皮质激素释放因子基因 CRF                                         .071       .0050     1.67             .196 TPG：NT+AR+CF                    .369       .1362      52.67    .000000000

多巴胺基因。检测了所有五个多巴胺受体基因和多巴胺转运子基 因(DAT1)。其中，DRD2(Comings等，1996b；Comings等， 1991)、DRD4(Lahoste等，1996；Swanson等，1998)和DAT1 (Comings等，1996b；Gill等，1997)基因已经表明参与ADHD。 DRD1、DRD2、DRD5和DAT1基因对ADHD评分具有最强的效应，其r2 值在从0.0022到0.0088的范围内。分别的p值在从0.388到0.093 的范围内。在本研究中虽然DRD4基因在ADHD中不发挥作用，但为确 证以前的文献，发明者对该基因进行评分来强调较长的6至8个重复 的等位基因，尽管发明者自己的研究表明这2个等位基因可能也是重 要的(Comings等，1997a)。

PG评分显示DRD1和DRD2基因在它们的效应中是加性的，使得它 们各自r2值的总和(0.0041+0.0084＝0.0125)与观察到的对于D1+D2 的PG评分(0.0125)相同。发明者称这些为加性基因。相反，当将 DRD3基因评分加入到那些D1+D2 PG评分中时，所获的r2(0.0092) 低于对于DRD1加上DRD2基因的。因此，关于ADHD表型，发明者称 这些DRD3为一减性基因。由于加入DRD4基因r2继续降低 (0.0071)，其也被认为时一减性基因。由于在加入DRD5和DAT1基 因后r2值再次增加，这些被认为是加性基因。同加性和减性基因均包 括在PG评分中时的0.0138相比，当在PG评分中仅包括加性基因 时，总的r2为0.0208。

基于这些结果，发明者制定了这个原则，即如果加入一个基因增 加r2、增加F而降低p，则其在表型中起着一种加性作用，然而如果 其逆转这些值，则其对表型具有一个减性效应。在这些研究的剩余部 分中，发明者选择其而非一个武断的p值作为对于在PG或TPG评分 中包括该基因的标准。因此，发明者选择DRD1、DRD2、DRD5和DAT1 作为TPG评分的加性多巴胺能基因(D)群。这些四个多巴胺能基因 一起负责ADHD评分方差的百分之2.08(p+＝+0.0081)。

5-羟色胺基因。对于六个5-羟色胺基因的r2值在从对于5-羟色胺 转运子(HTT)的0.0106到对于HTR2C的0.0002的范围内。当将 HTR1A基因加入到HTT基因时，r2值从0.0106增加至0.0143。当加 入HTR1Dβ时，r2值降低，加入HTR2A基因后r2值增加，加入HTR2C 基因时r2值降低以及加入TDO2基因时r2值增加。这表明HTT、 HTR1A、HTR2A以及TDO2基因可能时加性5-羟色胺基因的最适群。这 些基因的r2为0.0161。然而，由于对于HTR2A基因的r2值 (0.0016)是四个中最低的，所以发明者还确定了对于HTT、HTR1A 和TDO2的r2值。由于其较高(0.0167)所以将HTR2A基因置于5-羟 色胺能基因的加性群之外。排除具有次低r2值的基因并未进一步增加 加性r2。这些四个基因一起负责ADHD评分方差的1.67％ (p+＝0.018)。当加入加性多巴胺能以及5-羟色胺能基因时，它们 负责ADHD评分方差的3.7％(p+＝0.0004)。

去甲肾上腺素基因。对于四个去甲肾上腺素基因的r2值在0.0066 到0.0122范围内。在此情况下，所有四个基因在总的r2值上具有一 个渐进性的加性效应。它们一起负责ADHD评分方差的4.22％ (p+＝0.00015)，表明去甲肾上腺素基因在ADHD中发挥比多巴胺或 5-羟色胺或者多巴胺和5-羟色胺联合更重要的作用。事实上，两个 去甲肾上腺素能α2受体基因本身负责几乎同多巴胺和5-羟色胺基因 联合同样多的ADHD评分的方差(3.44％)。这些肾上腺素能基因在 ADHD中的具体的作用在他处有提供(Comings等，1998a)。当联合 多巴胺能加5-羟色胺能加去甲肾上腺素能基因的效应(DSN TPG评 分)时，它们负责ADHD评分方差的7.41％(p+＝0.0000040)。

儿茶酚胺降解基因。两个儿茶酚胺降解基因对ADHD评分的r2值在 从对于MAOA基因的0.0244到对于COMT基因的0.0098的范围内。当 加入(C)时，它们负责ADHD评分方差的3.33％(p+＝0.00077)。当 加入到DSN评分时，它们负责ADHD评分方差的10.05％(p+＝2.8×10 - 8)。

GABA受体基因。两个GABA受体基因对ADHD评分的r2值在从对于 GABRA3基因的0.0082到对于GABRB3基因的0.0066的范围内。对于 两个联合的r2值是0.0143(p+＝0.028)。当同DSN和C评分联合 时，它们负责ADHD评分方差的10.87％(p+＝5.9×10-9)。

其它神经递质基因。对于四个额外的神经递质基因的r2值为对于 大麻酯受体基因CNR1的0.0017、对于烟碱胆碱能α4基因CHNRA4的 0.0143、对于NMDA受体基因NMDAR1的0.0058、对于内啡肽原基因 PENK的0.0011。当将每个加到前面的基因中时，ADHD评分方差的百 分比渐进性地增加至11.09％、11.78％、12.26％和12.34％。对于整个 神经递质相关基因(NT)群，p+＝3.4×10-10。

雄激素受体基因。由于发明者检测的所有的行为在男性中更常 见，所以发明者还检测了AR基因。在他处提供了该基因在ADHD、 ODD和CD中的具体作用(Comings等，1998b)。AR基因对ADHD评 分的r2值为0.0111。当加到前面的基因中时，它们负责ADHD评分方 差的13.27％(p+＝5.5×10-11)。

免疫基因。由于最近对免疫因子在ADHD(Warren等，1995)和 TS(Swedo等，1998)中潜在作用的兴趣，发明者检测了两个免疫基 因，γ-干扰素和CD8A基因。两者被证明是减性基因而且并未包括在 加性群中。

其它基因。检测了两个其它基因，早衰素-1(PS1)和促皮质激素 释放因子基因(CRF)。虽然对于两者的r2值相似(0.0051和 0.0050)，但仅有CRF基因是加性的。当将所有的加性基因联合时， 它们负责ADHD评分方差的13.62％(p+＝2.8×10-11)。

ADHD评分。图4示增加数量的变体加性基因对ADHD评分的效应。 其表现出一种从对那些仅具有4或5个变体基因的1.0到对那些携带 有15个变体基因的25.0的渐进性增加的趋势。对于在ADHD评分中 一个渐进性增加的线性卡方检验的p值为＜10-8。图5显示对于逐渐加 入所有所测试的29个基因的r2值。紧邻基因标记左侧得曲线斜率提 供了那个基因对ADHD评分的相对贡献的提示。当斜率增加时，该基 因对ADHD评分有贡献。斜率的角度越大，贡献越大。当斜率降低 时，基因为减性的，而且同其它基因相比，在ADHD评分中发挥较小 或不发挥作用，尽管最初的基因评分通常对评分为1或2的基因型表 现一种较大的表型效应。已确定DRD1、DRD2、DRD5和DAT1多巴胺基 因对ADHD评分有贡献而DRD3和DRD4基因则没有。5-羟色胺能基因 中，HTT、HTR1A和TDO2基因对ADHD评分有贡献而HTR2A和HTR2C 基因则没有。四个去甲肾上腺素能基因比任何其它神经递质组的基因 对ADHD评分贡献都大。当包括所有29个累加性和减性基因时，最终 的r2值为0.113，p+＝2.7×10-9。

发明者检验了如果将相同群的基因基于随机指定为等位基因，而 且只利用同ADHD评分产生正相关性的基因，那么所获的r2可能是显 著的这种可能性。结果示于图5的底部。由空的正方形表示出r2值的 渐进性累加性效应，而由含有x的正方形表示出仅利用正相关性的累 加性效应。共同利用累加性和减性基因的最终r2为0.0001。仅使用 累加性随机基因的最终r2为0.0004。两者均不显著。此外，虽然随 机PENK基因处的替代r2高达0.008，但当加入最后一个随机累加性 基因(CD8A)时其降为0.0004。

为检验性别的潜在混淆作用，发明者分别检测了男性和女性。两 组均表现出r2值的显著升高，其基本上被在每组中小数量的受试者的 力度降低所清除。

因此，假设#1的检验表明29个基因的累加性效应产生显著高于任 何单个基因的r2和p值，而且当仅利用累加性基因时r2和p值被最 大化。假设#2的检验结果示于图6中。其表明所观察到的结果同假 设的结果相符。14个基因在两群中均为累加性的，2个在两群中均为 减性的，13个在两群中是不同的。大体上，在总群中累加性最强的 基因，如DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、所有四个肾上腺素能基因 (DBH、ADRA2C、ADRA2C、NT)、MAOA、COMT和AR基因是在两群中 均为累加性的基因，而在总群中减性最强的基因，DRD3、DRD4为在 两群中均为减性的。在两群中最明显不同的基因是CNR1、CNRA4、 NMDAR1和PENK基因。例如，NMDAR1基因在组2中是相当累加性的， 而在组1中则是减性的。然而，在两群中虽然N较小但r2渐进性增 加，其对两组的最终p值＜+5.0×10-4。当只包括累加性基因时，两者 均显著，p＜10-6。在总群中只利用那些对两组均为累加性的基因时， r2＝0.108，F＝40.82，p+＝5.6×10-9。当在总群中利用那些在两组中均 是或仅在一组中是累加性的基因时，r2＝0.11，F＝43.71，p+＝1.5×10-9。 这些结果进而用来展示当检测单个基因时在重复中的常见困难。相 反，MAA技术在一系列条件下产生强的结果。图4、图5和图6显示 共发疾病同ADHD享有相同的基因而且利用一些特异的基因这个假设 #3的检验。

ODD和CD。检测了29个基因在ODD和CD评分的r2值上的效应。 当累加性和减性基因均被包括时，对于ODD评分的最大的r2为 0.0775，p+＝3.1×10-6，而对于CD评分的为0.0225，p＝0.0059。同 样，通过观察易于鉴定对ODD和CD评分有贡献的基因。当仅利用累 加性基因时，对于ODD评分的最大r2为0.10，p+＝3.2×10-8，而对于 CD评分的为0.075，p+＝+3.7×10-6。对于ODD最重要的基因为DRD1、 DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、ADRA2A、 ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、NMDAR1、PENK、 AR和CD8A。对CD最重要的基因为DRD1、DRD2、HTT、HTR1A、 HTR2A、HTR2C、DBH、ADR2C、CHRNA4、AR和CD8A。因此，29个基因 中的20个在ADHD中发挥作用，20个基因在ODD中发挥作用，而10 个基因在CD中发挥作用。ODD基因同ADHD基因是既相似又不同的， 而所有的CD基因均与对于ADHD评分中的相同。

LD和抽动。检测了29个基因对LD和抽动评分r2值的效应。当累 加性和减性基因均被包括时，对于LD评分最大的r2为0.011， p＝0.054，而对于抽动评分的为0.014，p+＝0.029。当仅包括累加性 基因时，对于LD评分最大的r2为0.043，p＝0.0005，而对于抽动评 分的为0.061，p＝0.00005。同样，观察表明参与抽动评分的基因为 DRD1、DRD5、HTR1A、HTR1Dβ、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2C、COMT、 GABRA3、CNR1和CHRNA4。参与LD评分中的基因为DRD1、HTR2C、 TDO2、DBH、ADRA2A、ADR2C、MAOA、CNR1和CNRA4。因此，12个基 因参与抽动，而9个参与学习障碍。

酒精或药物滥用/依赖以及吸烟。检测了在164个14岁以上受试 者中对于酒精滥用/依赖评分的29个基因的测试结果。当N较小时， r2值存在较大的波动。因此，当仅检测成人时，易于区分累加性基因 和减性基因。对于酒精滥用/依赖QTV，利用两群基因的最终r2为 0.049，p+＝0.0044。然而，当只利用累加性基因时，r2值为0.14， p＝+7.5×10-6。如下面所讨论的，以前已经许多表明这些基因或神经递 质系统中在酒精中毒中发挥作用。

药物滥用/依赖QTV(吸烟除外)的结果同酒精滥用/依赖的那些相 似。然而，由于药物滥用比酒精滥用/依赖少见，所以r2值水平的幅 度较低。主要的差别是HTR1Dβ和HTR2A、ADRA2C基因在药物滥用/依 赖中是减性的，但在酒精滥用/依赖中是累加性的，而HTRC和NT基 因在药物滥用中是累加性的，但在酒精滥用/依赖中是减性的，INFG 在酒精滥用是减性的但在药物滥用中是中性的。吸烟更为常见，而且 也检测了这些结果。此处，将QTV评分为曾经吸烟一个月以上＝1，从 未吸过＝0。在受试者的该研究中，DRD2基因发挥重要的作用，其自 己产生0.055的r2值。其它累加性基因为NMDAR1、PENK、AR和 INFG。最终r2＝0.10，p＝0.00038。

其它QTV。发明者还检测了与ADHD常共发病行为的几个其它 QTV。总的r2值、p值和主要的累加性基因如下：躁狂- r2+＝0.0721，p+＝5.8×10-6，DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTR1Dβ、 HTR2C、TDO2、ADR2AC、GABRB3、CNR1、CHRNA4；分裂样- r2＝0.058，p＝8.3×10-5，DRD2、DRD3、HTR1Dβ、HTR1A、HTR2A、 HTR2C、DBH、CNR1、CHRNA4；OCD-0.46，1.0×10-4，DRD1、DRD2、 HTR1Dβ、GABRB3、CNR1、NMDAR1；广泛性焦虑-r2＝0.032， p＝0.001，DRD1、DAT1、HTR1Dβ、CHRNA4、PENK；以及重度抑郁- r2＝0.0271，p＝0.0025，DRD1、DAT1、HTT、HTR1Dβ、TDO2、CNR1、 CHRNA4、NMDAR1。

所涉及基因的数量。为检测在有或无特定两分表型的受试者中变 体基因数量的相对分布，发明者绘制了在不符合ADHD的DSM-IV标准 和那些符合ADHD的DSM-IV标准的受试者间累加性变体基因的数量 (图7)。变体的平均数量在无ADHD症状的那些中大约为10，而在 具有ADHD诊断的那些中大约为12。在那些没有ADHD症状的中，分 布在从3到14的范围内，而在具有ADHD诊断的那些中分布在从7到 18的范围内。

累加性效应和p值。由本研究，发明者绘制了所有29个基因对5 个定量评分(ADHD、ODD、CD、LD和抽动)的145个r2和p值结果， 而且鉴定了对所研究表型为累加性的那些和减性的那些。这显示当一 次一个地检测基因时，一个武断地设为＜0.05的p值与一个基因是累 加性的而且对表型有贡献、或者是减性的对表型没有贡献的判断没有 多少相关性。当单个检测时，大部分累加性基因具有大于0.05的p 值而且许多具有在0.10到0.40之间的p值。虽然一个大于0.45的 p值广泛地鉴定为减性基因，在0.12和0.45之间范围内的p值则一 些为累加性的而一些则不是。

讨论。经常提出关于鉴定参与多基因障碍的基因的困难性的担 心。在本研究中，发明者试图将多基因障碍的单一主要特征、许多不 同基因的累加性效应转变为通过检测多个候选基因的累加性效应的优 点。由于利用了多个关联研究的累加性和减性效应，所以发明者称其 为多重累加关联技术。当利用连锁技术来检测复合障碍时，表明必须 利用特别严格水平的显著性来避免假阳性(Lander和Krugyak， 1996)。由于该建议，在表66以及图5和图6中发明者给出了全长 而非缩减的p值。这表明利用MAA技术，29个基因和仅仅344个受 试者，可以获得高达10-11的p值。

由于这是一种新的技术，所以仔细检查所用的统计学方法是合理 的。其明显地愿意接受几个潜在的批评。第一个为如果仅在一个受试 者组中进行研究，当设定基因评分来最大化其在给定表型上的效应 时，简单地将那些基因评分加到一起可能产生越来越高的r2值。由于 此，发明者在由发明者或文献中的其他人研究的独立的受试者组中 仔细检验基因评分。如在表65中所示，所有的基因均满足该标准。 对于一些基因，仅有一个变量评分。例如，对于具有两个等位基因多 态性的基因，当1等位基因的频率低而因此很少具有11基因型时， 22＝0和11或12＝2的评分是唯一的。

第二个潜在的批评是如果检测了足够的基因而且如果只利用了累 加性基因，那么基于随机的基础获得显著的结果是可能的。为检验这 个可能性，发明者设立了另一套评分，其中对每个个体的每个“虚 拟”基因随机分配一个评分，设置其频率以与在观察到的结果中所发 现的那些相配。逐渐加入阳性和阴性结果的效应示于图5中(空心正 方形)。到第29个基因时为止，阳性和阴性结果彼此抵消而且最终 r2为0.001。更重要的是，当仅利用产生正相关的随机基因时，替代 r2值增加至对于PENK基因0.006的最大值。然而，加入最后两个阳 性随机基因后，r2值回降至0.004，p＞0.25。这种减性效应可能是由 于即使CD8A和CRF随机评分的效应是阳性的，但r2值在0.0000到 0.0003的范围内，而且产生减性效应。虽然仅利用那些具有正r的 相同过程的多重重复无疑可以最终产生一个显著的结果，但重要的一 点是当利用在其它研究中已经独立证实同一表型效应相关的候选基因 时，最终的p值明显高于(10-5到10-11)随机基因。

第三个潜在的批评是即使明显比由随机评分所预期的强，利用单 变量回归以及仅包括累加性基因仍然抬高所获的p值。对于这个相当 合理的批评有两种方法。第一个是所有基因研究的金标准是重复或多 个独立群的检测。发明者建议对于MAA技术的一个合理的标准是累加 性群应该包括在任何具有合理N的研究中被表明为累加性的所有基 因。例如，在发明者自己的测试-再测试研究中，所选择的累加性基 因群可能包括在任何一个群中为加性的那些。由于这些中的一些在一 些研究中可能是减性的，所以这可以帮助来避免r2和p值人为的抬 高。当这样做了时，最终的r2仍较大，0.11，而且高度显著，p＜2.0× 10-9。

减性效应的原因。一个中度的减性效应可能是由于所研究基因负 责的方差百分比相对小。例如，如果基因A的11基因型对ADHD评分 具有非常小的效应，另一基因可能负责ADHD评分高于A11受试者的 非A11受试者。结果，非A11受试者可能仍具有显著的症状，导致基 因的减性效应。当检测许多不同表型时，减性效应的另一个原因可能 出现。例如，基因的11基因型可能同ADHD显著相关，而22基因型 可能同不同的表型如抑郁相关。结果，当评分为11基因型＝2时，这 可能导致对ADHD评分的累加性效应但对抑郁评分为减性效应。

对复合障碍遗传学研究的意义。发明者相信这些研究不仅对精神 病遗传学而且对广义的复合多基因障碍的遗传学具有许多影响。 1.同单个基因相比检测多个基因的力度。这些研究对一次检测一 个基因的关联研究的重复性问题提供了一些了解。其最可能是由于多 个基因参与，没有单个基因是关键的，而且每个基因仅贡献方差的一 小部分。因此，当一次一个检测基因时，一个基因将在一个研究中具 有显著性而在另一个中则不。不能认为这是无尽挫折的来源 (Moldin，1997)，或者甚至认为这些研究无一是正确的，这可以看 作在复合障碍的遗传学中可预期的结果(Comings，1998a)。此处报 道了对于145个利用基因和行为性状的关联研究结果的方差百分比和 p值(除了酒精滥用/依赖)。这显示如果利用对于单个基因p＜0.05 的显著性的常用标准，累加性基因的大部分将被排除。这还证明为何 当利用p＜0.05的界值时对于两个实验室如此难以达成一致。如果产 生0.0008到0.025的r2值的关联是来自不同实验室的事实上独立的 研究，那么仅有6或20％会被认为阳性而其余的24个会被认为是阴 性‘非重复’。然而，通过MAA技术，所有这些关联均被利用了。

由于多基因遗传的单一最显著的特征是多个基因的参与，发明者 建议需要利用这个特征来鉴定参与复合障碍的基因(Comings等， 1996b；Comings，1996a；Comings，1998a；Comings，1998b)。本 研究证实了这个概念而且表明在多基因遗传中的力度来自多个基因累 加性效应的检测。发明者还建议确定一个基因在给定的障碍中是否发 挥作用的合适标准是其对于相关的定量评分具有加性还是减性效应。 这可以通过列出如在表66或图5和图6中所示的结果而很容易鉴 别。 2.作为多基因遗传最佳方法的关联研究。当前，用来鉴定复合障碍 中基因的最流行的方法由利用lod评分连锁的全基因组筛选、患病同 胞对技术或单倍型相对风险技术。虽然这具有强大的内在逻辑，但重 复通常是困难的而且基于这些研究(Pakstis等，1991)发明者基于 累加性基因方法已发现在ADHD或TS中发挥作用的上述基因中有许多 已被排除。虽然利用无关对照和显著受累先证者的关联研究具有检测 多基因遗传的小效应特征的能力(Risch和Merikangas，1996； Comings，1998a)，但它们也苦恼于非重复性的问题。检测多个基因 的累加性效应的MAA技术利用关联研究的能力而且有效地避免了非重 复性的问题。这是因为其用一个对累积r2具有累加性效应的较低严格 的参数来替代单个基因在p＜0.05处的显著性标准。该方法还更实 用，由于利用相同的工具检测，单个无关先证者和无关对照的鉴定比 受累同胞对的鉴定容易得多。在鉴定参与许多不同障碍的基因的努力 中，已经建立了仅由受累的和不受累的同胞对组成的DNA库。通过包 括单个先证者以及相当数量的用相同测试工具筛选的无关对照，病例 确证的速度和这些库的发现基因的能力均可以明显提高。其效率可能 通过允许不同的库共享相同的公开提供的所筛选对照而被最大化。如 对于CEPH(人类多态性研究中心)(Dausset等，1990)样本，其可 以通过要求在一给定时间段以后公开所有基因分型结果以便可以整理 多个研究者的结果而进一步加强。

结果提供一个额外的理由解释为什么关联研究比基于家族的连锁 技术更有力。其显示即使当利用这两个最佳分离群时，变体基因的总 数仅轻度不同(10对12的均值)。这提示当在家族内进行比较时， 同用实际上或内含地比较受累和未受累同胞对的lod评分、同胞对、 单倍型相对风险以及TDT分析(Spielman和Ewens，1996)所发生的 一样，差异甚至将更小。当问题被一次仅检测一个基因复杂化时，需 要检测极大数量的受试者的相关基因，即使在临界lod评分或p值 处。例如，目前即使有很大量的家族和同胞对，但行为障碍的连锁研 究的大部分没有鉴定出特定基因。这同在图5和图6中的结果相反， 其中利用不到350个受试者临时鉴定了20个对于ADHD的特定基因以 及15个对于酒精滥用/依赖的特定基因，而且产生的资料使得可以估 计每个基因对于每个表型的相对重要性。 3.隐藏的人种分层问题。关于关联研究最常提出的考虑之一是隐藏 的人种分层的潜在问题。由于下述原因MAA技术使这种顾虑最小化。 虽然当检测单个基因时隐藏的人种分层可能发挥作用，但所有基因的 频率将在相同的方向上变化是不可能。随着所检测基因数量的增加， 隐藏的人种分层的潜在效应降低。 4.检测许多基因的问题。通常在基因寻找和关联研究中出现的另一 个反对意见是如果一个人关注足够多的基因，那么出于单纯偶然性一 些将是显著的。当一次检测一个基因而且结束点为＜0.05的p值时， 这特别有效。然而，多重累加关联技术是不依赖单个基因的p值的， 而询问在其它基因的背景下一个基因是以累加性还是减性的方式对表 型的r2有贡献。通过强调多基因障碍的这个特征，该技术固有地而且 本质地包含大量候选基因的检测。这在对抽动、LD和酒精滥用/依赖 评分的合计r2值的上下波动中可以看到。这表明可以加入上百的基 因，而最终的r2值可能不断波动。然而，所检测基因越多，所鉴定的 累加性基因数量越多，当利用该亚群的基因时最终的r2越大。因此， 同检测每个额外基因时力度均丢失的一次一个基因的方法相反，累加 性多重关联技术随着越来越多的基因被检测而增加。 5.共发性障碍利用相关的基因群。即使ADHD是首要的表型，但许多 ADHD基因对于相关表型如对立违抗障碍、品行障碍、酒精滥用/依 赖、药物滥用/依赖、吸烟、OCD、躁狂、分裂样行为以及其它RDS行 为的代表具有累加性效应。 6.共发性障碍利用不同的基因群。除了利用相似的基因群外，共发 性障碍可能由于它们利用不同的基因群而具有不同的表型。两个观察 提示后者。第一，即使当仅利用累加性基因时，最终的r2值对于 ODD、CD、LD、抽动和其它评分低于对ADHD的评分。如果发明者假设 对于这些表型的每一个总的遗传学贡献是同对ADHD的相似的，那么 一定涉及此处所检测的那些以外的基因来使r2值达到相当的水平。这 表明除了共享的基因，这些共发性障碍还利用独特的基因。第二，包 括累加性和减性基因的累积r2值线的斜率表明共发性障碍利用不同的 基因群或不同的基因型。例如，MAOA基因对于ADHD评分是累加性 的，但对酒精滥用/依赖评分是减性的。这提示MAOA基因对酒精滥用 /依赖评分比对ADHD评分的重要性小。 7.不同表型可以利用不同基因型。利用不同基因群的一个替代方法 是不同表型可以利用不同基因型。再用MAOA基因作为例子，不是其 在酒精滥用/依赖评分中的重要性小，而是其可能利用不同的基因 型。作为另一个例子，抑郁和攻击通常同低的CNS 5-羟色胺水平相 关联(Brown等，1982；Coccaro等，1989)而强迫行为同增加的 CNS 5-羟色胺或受体敏感性相关(Insel等，1985)。因此，如果一 个给定的基因型同抑郁/攻击正相关，而同强迫行为负相关是不令人 惊奇的。这些观察提出是否基因评分可以对每个表型个体化的问题。 发明者怀疑其应该，但这将需要在独立群的受试者中证实每个这样的 评分。 8. 利用不同的多态性。在该研究中，发明者仅利用每个基因一个 多态性。其它多态性的利用或几种多态性联合成单倍型可以潜在地增 加r2值。因此，此处所观察到的总的r2值可能实际上显著低估这些 基因对各表型的真正的贡献。 9.不同单个基因在不同表型中的比较效应。MAA技术最有力的方面 之一是其能够鉴别不同基因的相对重要性。这可能是因为所有基因是 在相同的受试者组中检测的。一个例子是AR基因的作用。紧邻对于 ADHD(图5)、ODD和CD评分的AR基因左侧的r2曲线的斜率增加表 明该基因在所有三中疾病中的相对重要性。相反，AR基因对于抽动 和LD评分是减性的，没有作用，而对于酒精滥用/依赖评分是中性 的。 10.不同群基因在不同表型中的比较效应。MAA技术的另一个方面是 其能够鉴定影响特定神经递质的基因群对于不同表型的重要作用。因 此，四个肾上腺素基因的群在ADHD评分中发挥显著的作用。它们一 起负责基于累加性基因的总方差r2评分的42％。相比较，5-羟色胺能 基因负责仅仅总的9.5％。这与许多强烈表明在ADHD中去甲肾上腺素 代谢缺陷的研究(Halperin等，1997；Pliszka等，1996；Arnsten 等，1996)一致。相比较，对于品行障碍看到了相反的趋势。此处， 5-羟色胺能基因负责基于累加性基因的总方差r2的30％，而肾上腺素 能基因仅负责13％。这同许多表明在反社会行为中中枢5-羟色胺代谢 缺陷的研究(Brown等，1982；Lidberg等，1985；Coccaro等， 1997)一致。 11.关联研究的多阶段性以及对于单个基因研究公布的影响。MAA技 术的结果表明关联研究应该在多个阶段中进行。在第一阶段，需要进 行一次一个基因的前期研究来确定哪种多态性可能是有用的而且它们 应如何被编码。然而，发明者建议对于单基因研究的重要发现是给定 基因的多态性的基因型应如何被评分。根据样本的大小，即使具有 ＞0.05的p值，该信息也可能是有价值的。由于大部分产生＞0.005的 r2或＞0.07的r的单关联研究是累加性的，所以当N足够时，这可能 是公布的标准，而不是以p＜0.05为标准。

第二阶段应该是利用所有合理的候选基因的MAA技术的使用。这 些结果在图5中由累加性和减性基因的线来代表，而且代表无选择性 地包括所有基因。第三个阶段应该是仅利用累加性基因对给定表型产 生一个‘新模型’。这由在图5中累加性基因的线代表。最后的阶段 应该是独立的重复研究，其鉴定新的累加性基因而且持续测试和再测 试所获的基于积累累加性基因群的‘新模型’。 12.酒精中毒、药物滥用和吸烟的基因。虽然双生子和收养研究清 楚地表明至少一些形式的酒精中毒、药物滥用和吸烟是强烈遗传性 的，但基于一次一个基因的方法对所涉及的特定基因的鉴定还不是显 著有效。事实上，在所报道的DRD2基因的Taq A1等位基因和酒精中 毒之间的关联(Blum等，1990b)的重复和不能重复的联合 (Noble，1993；Blum等，1995b)已成为怀疑关联研究能力的贡献 者之一。对酒精滥用/依赖评分利用MAA技术的结果提供了对许多关 于酒精中毒的分子遗传学问题的了解。第一，DRD2基因左侧r2曲线 的斜率表明在该组受试者中DRD2基因利用Taq A1/A2多态性的确在 酒精评分中发挥作用。然而，其仅负责总r2评分的10％，而且由于总 r2评分仅为0.14，该基因仅负责酒精滥用/依赖评分总方差的1.4％。 在累加性基因中这是相当典型的而且是为何利用一次一个基因方法的 重复如此困难的一个主要原因。第二，多巴胺能、5-羟色胺能和 GABA能基因群在酒精评分中均发挥重要的作用。第三，通过高度显 著的最终r2值(p+＝7.5×10-6)证实了MAA技术的力度。据发明者所 知，对于一个相当的N，其远远超过任何利用一次一个基因方法曾经 报道的结果。第四，虽然研究的焦点是在ADHD上而不是酒精中毒， 但大量被ADHD和酒精中毒共用的基因(DRD1、DRD2、DAT1、HTT、 HTR1A、DBH、ADRA2C、GABRB3、CNR1、NMDA和CRF)同酒精中毒中 高频率的ADHD以及在ADHD中高频率的酒精中毒是一致的(Loney 等，1981；Cantwell，1972；Alterman等，1983；Tarter，1988； Biederman等，1995)。

对于吸烟的结果显示DRD2基因的强效应。然而，由于这些受试者 具有其本身同DRD2基因相关的Tourette综合征(Comings等， 1991)，所以同吸烟的相关性可能被增强而超过其对于仅为吸烟者的 受试者应该有的相关性。尽管对于ADHD的基因是首要的焦点，对于 酒精滥用/依赖评分的结果显示对ADHD鉴定的基因中许多以前在文献 中已经表明为酒精中毒的候选基因。 13.在单个受试者组中研究多个表型。在行为的遗传学研究中的一个 共同的策略是收集具有某一‘纯’障碍、较少或没有共发性病症的个 体，而且两分地将受试者评分为具有或没有那个诊断的那些。这种研 究由于两个原因而可能丢失力度。第一，具有许多共发病症的个体更 可能具有较高的遗传学负担整体水平，从而增加鉴定基因的力度。第 二，筛选一宽范围的行为使得可以在相同的受试者组中检测许多不同 的障碍。这在本研究中被证实。由于TS同许多共发病症相关 (Comings和Comings，1987a；Comings，1995a；Miller等， 1996)，所以在一个受试者组中检测特异性地同许多障碍相关的基因 是可能的。结果表明鉴定对不同表型的独特的基因组合仍是可能的。 这表明在单个具有高共发病率的受试者组中利用结构化会面进行多重 DSM-IV诊断和允许多重数量性状的发展，可能是一种比累积许多每 个对应一特定障碍的DNA数据库更有效的发现一系列障碍的基因的方 法。 14.风险因子以及诊断和可预测性。关于多基因遗传的常见假设之一 是所涉及的基因只作为风险因子，而且同单个基因障碍相反，在诊断 方式中利用遗传学测试将是不可能的。然而，随着由基因的累加性效 应所解释的方差百分比的增加，r也增加，因而在可预测性增加。对 于ADHD评分最终0.37的r值表明通过利用这个基因群，ADHD评分 的可预测性比没有遗传学信息时高出达37％。随着更多基因的加入， 可以获得两倍于此幅度的r值。随着DNA芯片技术的出现，必须进行 的遗传学测试的数量不再是一个问题。如在图7中所示的，虽然对于 没有ADHD症状受试者和满足ADHD的DSM-IV标准的那些之间相关基 因数量的分布曲线表现出很大的重叠，但存在的区别是高度显著的。 将累加性基因数量加倍或三倍可能最终产生大部分非重叠的曲线。发 明者考虑诊断力度将随着所加入的基因而增加。 15.重复。只是由于重复是在连锁和关联研究中的金标准，所以其也 应该是MAA技术重复的标准。应预期受试者数量、先证者严重性的组 成、对照和受试者间比例、定量评分的范围以及其它因素的变化均改 变最终r2值，而不依赖于特定基因本身的效应。除了这些因素，发明 者预计重复的水平会变化。最高的水平是其中相同的基因群在不同的 受试者组中为累加性或减性，而且曲线的斜率相似。由于不同基因产 生相似表型效应的能力是多基因障碍的特征之一，所以发明者预计这 个水平的重复既是不太可能的也是无法预计的，而且不同的研究将 显示涉及不同的基因群和曲线的不同斜率。这由平分的样本检验所证 实(图6)。

另一个而且更现实的重复标准是这样的，其中一个组的大部分而 并非全部的累加性基因对于重复组也是累加性的，而且其中r2值和显 著性水平随着包括更多的基因而逐渐地增加，但曲线的斜率对于不同 基因可能不同。在此水平上，还将预期基因群的相对重要性被重复。 因此，本研究，其表明肾上腺素能基因在ADHD中是相对更重要的， 而5-羟色胺能基因在品行障碍中是相对更重要的，应该能被重复。 这在一平分的样本检验中被证实，其中去甲肾上腺素能基因在ADHD 中的重要性在两个样本中被重复。如果加速了在多基因障碍中所涉及 的基因的鉴定，则MAA技术重复的最终水平将发生。 16.技术问题。虽然已经覆盖了累加性多重关联技术的大部分重要 的方面，但还有几个方面值得强调。发明者感觉由于几个原因数量性 状是优选的。其需要就同受试者相同的性状评价对照。这是重要的因 为在发明者的经验中，对照和受试者可能都具有一宽范围的评分。此 外，在检测全范围的定量性状时，分析的力度是较大的。为了最大的 力度，对照的数量应该接近受试者的数量，或者具有低评分的受试者 的数量应该接近高评分的数量。

虽然最终的r和r2值是不依赖顺序的，但为清楚地鉴定减性基 因，需要改变加入基因进入的顺序以便那些具有最强正相关性的首先 进入。如果起始的基因没有在r或r2值中产生合适的增加，那么鉴定 减性基因将是困难的。

17.治疗和药理学影响。MAA技术基于其鉴别所涉及的基因以及衡 量它们的相对重要性的能力，其最后一个方面是其潜在的指导治疗和 药理学干预的能力。例如，四个肾上腺素能基因负责ADHD评分最终 r2值的40％的观察表明作用于肾上腺素能α2受体的药物在ADHD的治 疗中可能是有价值的。临床研究事实上支持肾上腺素能α2受体激动 剂可乐定和guanifacine在ADHD治疗中的有效性(Hunt等，1985)。

                       实施例14

        吡啶甲酸铬和烟酸铬饮食补充治疗肥胖症

在该研究中，吡啶甲酸铬是首要感兴趣的，但认为在最佳条件下 (结合身体锻炼)所测试的烟酸铬的初步资料也将是有价值的。关于 铬盐补充对年轻肥胖妇女的效应的本研究具有两个目的。第一，来确 定是否单独吡啶甲酸铬补充改变体重和组成、糖耐受以及血浆脂类， 以及是否这些效应可以用身体锻炼来扩大。第二，来提供对于烟酸铬 补充结合身体锻炼的有效性的资料。

方法。受试者为43个健康的惯于久坐的肥胖女性。将各种统计学 界点定义用于肥胖症，但为了该调查的目的，肥胖被定义为高于推荐 的机体脂肪百分比，对于年轻妇女，推荐为20-25％的机体脂肪 (Blackburn等，1994)。发明者发现发明者的群体的一部分仅仅是 轻度肥胖。在接受前，调查表用来确定受试者的健康状态和活动模 式。受试者中无人证明有任何健康问题，也没有对这种状况的治疗。 年龄在从18到35岁的范围内，平均24.4±0.70岁。起始的体重在从 50.8到96.1kg的范围内，平均71.3±1.9kg。通过水压称重测定的 身体脂肪百分比在从25.0％到45.0％的范围内，平均为33.0％±0.91。 起始VO2max值在从1.53到3.30L/min的范围内，平均为 2.38±0.13L/min。在签署书面同意文件前，通知每个受试者同参与相 关的潜在风险和利益。研究经得克萨斯大学的研究管理委员会批准。

实验设计。受试者被随机指定到四个治疗组中的一个：吡啶甲酸 铬补充无身体锻炼(CP)、身体锻炼和安慰剂(E/P)、身体锻炼和 吡啶甲酸铬补充(E/CP)以及身体锻炼和烟酸铬补充(E/CN)。治疗 阶段是9周。没有控制月经周期阶段的影响。虽然在假定的28天月 经周期的不同阶段进行了前测试和后测试，但其影响(如果有)在所有 研究参与者中是随机的而且因此不应该影响数据。

铬盐补充剂和安慰剂药片由美国Shaklee公司(旧金山，CA)制 备，并以每个100片的编码的瓶子运给研究者。每周给予受试者16 片含有吡啶甲酸铬(200μg)、烟酸铬(200μg)、或安慰剂(无效 成分)。给予受试者口头指导在整个治疗和后测试阶段每天早晨和晚 上服用1片，对接受铬盐补充剂的那些形成每天400μg的剂量。要求 受试者每周交还未服用的药片。通过计算归还的药片来衡量顺应性。 顺应性没有问题。

身体锻炼由有几个单元的交叉训练程序组成。第一个单元为步行 需氧运动，这是一类需氧舞蹈，利用弱拍音乐、12到24英寸高的板 凳以及指导者，后者指导参与者进行设计用来提供全身需氧锻炼的一 系列动作。这些1小时的课由每个锻炼的受试者一周参加两次，并由 有资格的指导者教。允许受试者挑选他们自己板凳的高度。随着研究 的进展，指导者逐渐增加运动强度。

第二个单元是骑车。骑车锻炼一周进行两次，在75％-80％最大心率 (在起始的VO2max测试中确定)的目标心下处进行30分钟。利用了 通用的需氧自行车(通用Gym设备公司，Cedar Rapids，Iowa)。在 每个部分开始时将目标心率编入测力计的程序，并在锻炼中进行监 测，用仪器上的计算机调节阻力来维持目标心率。

第三个单元是耐力训练。利用Powercise Fitness系统(TruTrac 治疗产品公司，Temecula，加利福尼亚)进行耐力训练，一周两次。 利用五个独立的机器，其中通过一个电子制动装置设定耐力。这是一 个激发主动肌/对抗肌肌群的同心收缩的“双阳性”系统。所用的五 个机器锻炼上下躯体的所有主要肌群。最初通过抬起每次重复逐渐加 重的重量(10lb.的增加量)直到负载不能再被抬起，来确定每个受 试者的最大力量。一旦最大力量已被确定，锻炼重量便自动设为50％ 的最大力量，指导受试者在每个机器上进行三套15个重复的锻炼。 受试者跟随节律灯，其允许每个同心收缩大约1.5秒钟。套间的休息 时间为25到28秒。在机器间的时间并不严格控制。在整个研究中鼓 励受试者增加所抬的重量但仍然完成三套15个重复，而且记录这些 增加。还指导受试者进行三套二十个“abdominal crunches”(仰卧 起坐)。

由至少一个研究者监督所有锻炼部分。记录出勤、骑车锻炼中的 心率以及耐力训练参数(所抬的重量以及重复和套的完成)。要求受 试者在研究过程中不要改变他们的饮食。

实验操作。在治疗开始前的一个星期中，在两个独立的场合利用 一具有±200g灵敏度的Health-o-Meter磅秤(Continental Scale Corporation，Bridgeview，IL)称量受试者的体重，而且通过水压 称重(Behnke等，1974)对受试者进行身体组成的分析。利用修改 的Burker方法在踏车上用所测定的吸气容积和呼出的气体按照发明 者实验室以前的描述(Yaspelkis等，1993)测定VO2max。在分隔的 两天抽取空腹血样，并按照随后所描述的进行口服糖耐量测试 (OGTT)。

在9周治疗阶段期间，按照上面详细描述的给予营养补充和身体 锻炼。在治疗的第九周，重复所有的测试前检测。不论治疗前还是治 疗后均以相同的顺序给予测试。补充和身体锻炼持续整个测试后阶 段。参与身体锻炼的所有受试者在后OGTT之前两天参与一个步行需 氧运动会，然后在测试前的一天休息，这使在最后一次锻炼和OGTT 间有大约40h。 标本采集和分析。在上午7点和9点空腹12hr后，其包括无咖啡因 和尼古丁，获得用于激素和底物分析的血浆。通过肘前静脉的静脉穿 刺收集血液(10ml)。如同治疗前血样之一，在同一天进行对于口服 葡萄糖负载的葡萄糖和胰岛素反应的测定。受试者摄入室温的含有 100克葡萄糖的饮料(Tru-Glu 100橙汁/碳酸化，10oz.Fischer Scientific，Pittsburgh，PA)，并在摄入前以及摄入后15、30、 60、90、120和180分钟时从肘前静脉中的21号静脉导管(Baxter Healthcare，Deerfield，IL)获得血样(3ml)。

所有的血样均用250ml的乙二胺四乙酸(EDTA)(Sigma化学试 剂公司，St.Louis，MO)抗凝。通过亲合树脂柱、比色仪、终点步 骤(Sigma诊断，St.Louis，MO)将来自基本样品的全血样 (200ml)用于糖基化血红蛋白测定。将其余的样品在1,000×g离心 15分钟；然后移出血浆并冻存在-20℃用于随后的分析。通过放射免 疫分析(ICN Biomedicals公司，Costa Mesa，CA)测定胰岛素的浓 度。通过酶法分析来分析血浆样品葡萄糖、三甘油酯和总胆固醇 (Sigma Diagnostics，St.Louis，MO)。在LDL-C和VLDL-C沉淀 后酶法测定HDL-C(Sigma Diagnostics，St.Louis，MO)。利用以 下等式计算LDL-C：LDL-C＝(总胆固醇)-(HDL-C)-(三甘油酯 /5)(Sigma Diagnostics，St.Louis，MO)。每个分析均测试标 准品来证实一致性。所有样品均双份测试，顺序测试每个受试者的标 本。

统计学分析。在所有治疗组间对每个变量的前后值进行多变量方 差分析。重复操作处理前测量和后测量的值，以及在OGTT中的时间 点。如果观察到一个显著的F值(p＜0.05)，进行进一步分析来确定 这些改变发生在何处。一个预定的显著性(p＜0.05)用作进一步测试 的标准。根据数据的性质，重复Post-hoc检验来衡量方差分析或 Fisher PSLD(p＜0.05)。这些低严谨度用来防止由于样本规模小和 因此统计学设计力度受限而发生II型错误的机会。利用用于苹果机 的社会科学的统计学软件包(SPSS)软件版本6.0来进行分析。

结果。参与身体锻炼的受试者完成90.0％(±2.2)的指定训练课。 在治疗组间顺应性上没有差别。在骑车过程中心率一直在HRmax的 75和80％之间。在步行需氧运动过程中心率非常高，在从每分钟175 到190次(HRmax的85到95％)的范围内。VO2max在任何治疗组中 均没有显著改变。

治疗后，在CP组中体重有显著的增加，而在E/CN组中体重有显 著的降低。在身体脂肪百分比、脂肪质量或无脂肪质量中没有显著的 改变。无脂肪质量不论在治疗前还是治疗后在E/P组中显著高于在所 有其它组中。值得注意的是，在E/P组中非显著性偏高的起始体重可 以几乎完全归因于较大的无脂肪质量。

在前和后基础血浆葡萄糖或胰岛素水平上没有显著的差别。糖基 化血红蛋白在治疗后也未改变。由3小时口服葡萄糖耐量测试绘制每 个治疗组在9周的治疗期间治疗前和后葡萄糖耐量和胰岛素反应曲 线。受试者接受铬盐补充(CP)、身体锻炼和安慰剂(E/P)、吡啶 甲酸铬(E/CP)或者身体锻炼和烟酸铬(E/CN)。

在接受铬盐补充(CP)、身体锻炼和安慰剂(E/P)、身体锻炼和 吡啶甲酸铬(E/CP)或者身体锻炼和烟酸铬(E/CN)的受试者中9周 的治疗阶段前和后的来自3小时口服葡萄糖耐量测试的葡萄糖耐量曲 线或在葡萄糖曲线下区域的比较表明，对于任何组没有显著的治疗效 果。类似的，在CP(p＝0.433)、E/P(p＝0.087)或E/CP (p＝0.110)治疗后在胰岛素反应曲线中没有显著的改善。然而， E/CN治疗后在口服葡萄糖载量后60、90和120分钟处的胰岛素反应 有显著的下降，其导致在总体胰岛素反应曲线中的显著下降 (p＝0.041)。也发现E/CN治疗的胰岛素反应曲线下的区域在锻炼后 显著降低。对于甘油三酯、总胆固醇、LDL-C和HDL-C在治疗前和后 标本间未发现显著的差别。

讨论。发明者的研究比较了吡啶甲酸铬补充、身体锻炼或两者均 有在年轻肥胖妇女中的效应。由于体外工作提示烟酸铬可能在改变这 些风险因子中是也是有效的，还收集了关于烟酸铬补充联合身体锻炼 的效应的资料。

治疗后体重在CP组中显著增加。这是一个重要的发现，由于吡啶 甲酸铬通常被提倡作为一种减轻体重的辅助。发明者的结果表明没有 身体锻炼，吡啶甲酸铬补充不仅在引起体重减轻中可能是无效的而且 可能导致体重增加。以前铬盐补充的研究没有看到体重增加(Kaats 等，1991；Page等，1991；Riales，1979)，可能是由于未控制饮 食和活动模式以及受试者的不同基因型模式(即DRD2 A1及DRD2 A2 等位基因的携带者)。而且，发明者的受试者群(年轻的肥胖妇女) 以前未被研究过；这可能解释在发现中的差别。类似地，在本研究中 所给予的铬盐的量(400μg/d)是以前对女性研究的量的两倍。有可 能在这个浓度下铬盐具有一种有助于体重增加的效应，而在较低的浓 度下其可能具有抑制效应。

在E/P或E/CP组中未看到体重的显著变化，证实了以前的表明经 9周的身体锻炼通常不会看到体重减轻的研究(Stefanick， 1993)。然而，在E/CN组中体重存在显著的降低。据发明者所知， 这是第一次研究表明烟酸铬补充联合身体锻炼可能是一种有效的减轻 体重的方式。

治疗后在相对身体脂肪、脂肪质量或无脂肪质量中没有显著的改 变。如同体重一样，在该研究和以前的研究结果间的分歧可能是由于 在研究人群、未控制饮食以及活动模式和/或所给予的铬盐的量中的 差别。

锻炼后VO2max水平没有显著的增加。这可能是由于测试缺少特异 性：在踏车上进行前和后max测试，而且锻炼由骑车和需氧运动组 成。此外，锻炼程序的耐力项目可能已经掩盖或清除了需氧性改变。

在任何治疗组中基础葡萄糖水平没有显著改变。这个结果同在正 常血糖人群中的其它铬盐补充的研究(Abraham等，1992；Wilson 等，1995)以及身体锻炼(Wallberg-Henriksson，1992)一致。同 E/P组相比时，血浆葡萄糖水平对口服葡萄糖载量的反应在CP组中 不论治疗前和后均明显较高。组的均值提示在无脂肪质量和曲线下葡 萄糖区域间的有一个反向的关系，表明较大的无脂肪质量允许葡萄糖 绝对数量的更快的处理。然而，个体资料表明在这两个因子间相关性 差(r＝-0.26)。

对口服葡萄糖载量的葡萄糖反应未观察到治疗效果。如同基础葡 萄糖水平一样，受试者在口服葡萄糖载量后最初表现出正常的葡萄糖 水平。糖基化血红蛋白，一个6周后血浆葡萄糖水平的指示，在治疗 后没有变化。基础胰岛素水平，最初在正常范围内，治疗后在任何组 中没有显著的改变。

对口服葡萄糖载量的胰岛素反应治疗后在E/CN组中显著降低。以 前用高血糖受试者已经表明在胰岛素反应中的改善(Djordjevic 等，1995)。在其它身体锻炼组中未观察到胰岛素反应的显著改变； 这是未预料到的，因为以前记载了通过身体锻炼可以降低(Heath 等，1983；Mikines等，1989；Sharma，1992；Wallberg- Henriksson，1992)。然而，已经发现这种降低的存在非常短暂 (Heath等，1983；Mikines等，1989)，因此，发明者在这些受试 者中无法检测到对葡萄糖攻击反应而降低的胰岛素反应，可能是由于 胰岛素改善作用的快速衰退。无论在E/P和E/CP组中缺少对胰岛素 作用的身体锻炼效果的原因是什么，结果确实提示身体锻炼和烟酸铬 的联合可能是有益的。

经治疗基础血浆脂类没有变化。有趣的是发现少数具有异常起始 脂类水平的受试者治疗后朝着正常化移动，虽然这些变化不显著。

总之，高水平的吡啶甲酸铬补充而没有同时身体锻炼在年轻的肥 胖女性中引起显著的体重增加，而身体锻炼联合烟酸铬补充导致几种 潜在有益的改变，包括显著的体重减轻和对口服葡萄糖载量的胰岛素 反应降低。发明者的总论为高吡啶甲酸铬补充量(400μg/d)在年轻 的肥胖女性中对于体重减轻是有副作用的，而身体锻炼联合烟酸铬补 充可能比单纯身体锻炼在通过风险因子的调整来提供一些保护防止 CAD和NIDDM中更有益。

铬盐的补充可能影响冠状动脉疾病和非胰岛素糖尿病的多种风险 因子，包括体重和组成、基础血浆激素和底物水平以及对口服葡萄糖 载量的反应。一个研究检测了在年轻的肥胖妇女中铬盐在每天400μg 时，有或没有身体锻炼对这些风险因子的效应(Grant等，医学和科 学运动和锻炼(Med.and Sci.Sports and Exercise)，29：992- 998，1997)。吡啶甲酸铬(CP)的补充在这个人群中导致显著的体 重增加，而身体锻炼联合烟酸铬(CN)的补充导致显著的体重减轻以 及对口服葡萄糖载量的胰岛素反应降低。发明者总结为高水平的吡啶 甲酸铬的补充在年轻的肥胖女性中对于体重减轻是有副作用的。此 外，发明者的结果提示身体锻炼联合烟酸铬补充可能比单纯身体锻炼 对于某些CAD和NIDDM风险因子的调整更有益。

治疗后，在CP组中体重有显著的增加，而在锻炼的CN组中体重 有显著的降低(至少P＝0.05)。在身体脂肪比例、脂肪质量或无脂 肪质量中没有显著的改变。不论治疗前还是后，在锻炼的安慰剂组中 无脂肪质量均显著高于在所有的其它组中。此外，同CP组不同，锻 炼的CN治疗导致在60、90和120分钟处胰岛素反应显著的降低。口 服葡萄糖载量后，其导致在总体胰岛素反应曲线中显著的降低 (P＝0.041)。

来自该研究的资料表明高水平的吡啶甲酸铬补充而没有同时的身 体锻炼在年轻的肥胖女性中引起显著的体重增加，而身体锻炼联合烟 酸铬补充导致几种潜在有益的改变，包括显著的体重减轻和对口服葡 萄糖载量的胰岛素反应降低。该资料提示高吡啶甲酸铬补充量(400μ g d-1)在年轻的肥胖女性中对于体重减轻是有副作用的，而身体锻 炼联合烟酸铬补充可能比单纯身体锻炼对于体重减轻更有益。OB/基 因和DRD2基因联合的等位基因频率在年轻的肥胖妇女中负责多达肥 胖症方差的22％，而且该基因型可能影响铬盐在该特定人群的体重减 轻上的效果，影响铬盐对人类体重减轻的效果(Comings等人， 1997)。可以预期，象在表4中所描述的含有铬盐如烟酸铬和/或吡 啶甲酸铬的治疗RDS相关障碍的补充组合物，尤其是表6中描述的涉 及肥胖的那些，将在保持体重减轻中有帮助作用。

                    实施例15 作为TaqI多巴胺D2受体A2等位基因的函数吡啶甲酸铬诱导身体组

                    成的变化

方法。在本研究中发明者利用标准PCRTM技术(Blum等人， 1997)对100个受试者的多巴胺D2受体(DRD2)和多巴胺转运蛋白 基因(DAT1)进行了基因分型。评估受试者的体重等级并利用密度测 定法评估身体脂肪的比例。根据Kaats等人1998年提出的方法，受 试者被分为安慰剂组和吡啶甲酸铬(CrP)组(400mg每天)。

结果。在文献对照中，714个受试者中的26％(185/714)和已很 好评估的30个超级对照中的3.3％(1/30)有TaqI DRD2 A1等位基 因。卡方分析说明了这两个对照组有显著性差异(p＜0.006)。

DRD2 A1等位基因在67.4％(58/86)的身体脂肪≥28％的肥胖受试 者中出现；在61.5％(8/13)的身体脂肪≥28％的肥胖男性中和68.5％ (50/73)身体脂肪≥28％的肥胖女性中出现。DRD2 A1等位基因在 65.3％(49/75)的身体脂肪≥34％的肥胖受试者中出现；在62.5％ (5/8)的身体脂肪≥34％的肥胖男性中和65.7％(44/67)身体脂肪≥ 34％的肥胖女性中出现。DAT1 10/10等位基因出现在91个对照受试者 (34/91)的37.4％中，47.7％(41/86)身体脂肪≥28％的肥胖受试者 中，在38.5％(5/13)的身体脂肪≥28％的肥胖男性中，和49.3％ (36/73)身体脂肪≥28％的肥胖女性中。DAT1 10/10等位基因出现在 46.7％(35/75)身体脂肪≥34％的肥胖受试者中，在37.5％(3/8)的 身体脂肪≥34％的肥胖男性中，和47.8％(32/67)身体脂肪≥34％的肥 胖女性中。卡方分析说明，当与文献或超级对照相比时，在TaqI DRD2 A1等位基因与病态肥胖显著性相关。表67显示，对于身体脂肪≤ 28％的男性和女性在与文献中的对照相比时(卡方＝62.6，df＝1， p＝＜.0001)和对于超级对照(卡方＝36.6，df＝1，p＝＜.0001)发现 了显著性的相关。发现了对于身体脂肪≤34％的男性和女性在与文献中 的对照相比时(卡方＝50.6，df＝1，p＝＜.0001)和对于超级对照(卡 方＝33.0，df＝1，p＝＜.0001)的显著性相关。对于身体脂肪≤28％的 男性与文献中的对照相比(卡方＝8.31，df＝1，p＝＜.004)，和对于 超级对照(卡方＝18.6，df＝1，p＝＜.0001)的效应；以及对于身体 脂肪≤28％的女性与文献中的对照相比(卡方＝57.34，df＝1， p＝＜.0001)，和对于超级对照(卡方＝36.11，df＝1，p＝＜.0001)的 效应。对于身体脂肪≤34％的男性与文献中的对照相比(卡方＝5.46， df＝1，p＝＜.02)，和对于超级对照(卡方＝16.6，df＝1， p＝＜.0001)的效应；以及对于身体脂肪≤34％的女性与文献中的对照 相比(卡方＝46.73，df＝1，p＝＜.0001)，和对于超级对照 (卡方＝32.38，df＝1，p＝＜.0001)的效应。相反，对于包括 10/10基因型的DAT1基因的任何等位基因组合，在该病态肥胖人群中 没有发现相关。对于身体脂肪≤28％的男性和女性与文献中的对照相比 (卡方＝2.27，df＝1，p＝＜.132)；和对于身体脂肪≤28％的男性与文 献中的对照相比(卡方＝.02，df＝1，p＝＜.89)；和对于身体脂肪≤ 28％的女性与文献中的对照相比(卡方＝2.73，df＝1，p＝＜.098)。 对于身体脂肪≤34％的男性和女性与文献中的对照相比(卡方＝1.75， df＝1，p＝＜.185)；和对于身体脂肪≤34％的男性与文献中的对照相 比(卡方＝.01，df＝1，p＝＜.96)；和对于身体脂肪≤34％的女性与 文献中的对照相比(卡方＝2.02，df＝1，p＝＜.16)。

                           表67 多巴胺转运蛋白基因和身体脂肪 身体脂肪比例             DAT1(％)         卡方b

                     10/10             p值(对照) ＜28                     41                0.132 总人群                   (47.7) (N＝86) ＜28                     5                 0.89 男性                     (38.5) (N＝13) ＜28                     36                0.098 女性                     (49.3) (N＝73) ＜34                     35                0.185 总人群                   (46.7) (N＝75) ＜34                     3                 0.96 男性                     (37.5) (N＝8) ＜34                     32                0.16 女性                     (47.8) (N＝67) a＝括号表示百分比 b＝34/91＝37.4％

                            表68 多巴胺D2受体基因和身体脂肪 身体脂肪比例  DRD2(％)             卡方b          卡方b

          10/10                 p值             p值

                                (文献对照)      (超级对照) ＜28          58                    0.0001          0.0001 总人群        (67.7) (N＝86) ＜28          8                     0.004           0.0001 男性          (61.5) (N＝13) ＜28          50                    0.0001          0.0001 女性          (68.5) (N＝73) ＜34          49                    0.0001          0.0001 总人群        (65.3) (N＝75) ＜34          5                     0.02            0.0001 男性          (62.5) (N＝8) ＜34          44                    0.0001          0.0001 女性          (65.7) (N＝67) a＝括号表示百分比 b＝1/30＝3.3％

利用一种叫做逻辑回归分析的统计技术比较超级对照和所有身体 脂肪超过34％的病例，DRD2 A1等位基因引起45.9％的变异，在统计学 上是显著的(卡方＝43.47，df＝1，p＝＜.0001)。相反，当与文献对 照相比时，DAT1(10/10等位基因)引起3％的方差并且在统计学上对 该研究人群的该方差是不显著的贡献者。

按照CrP数据，样本分成两个独立的组；有A1/A1或A1/A2等位基 因的和只有A2/A2等位基因的。每个组都单独检验在安慰剂和治疗方 法对于体重变化各种不同测量项目的差异。这些测量项目包括计算脂 肪重量变化百分比、脂肪重量的变化、体重的变化、非脂肪质量的变 化、脂肪重量变化百分比、身体组成指数和以公斤数表示的体重变 化。用独立组t检验方法统计检验了安慰剂组和治疗组的平均差异。 通过在p＝0.05上建立α标准评估它们比较时的统计学显著性。任何低 于0.05的p值都被认作在安慰剂组和治疗组的均数上有统计学上的显 著差异。

T检验分析揭示了DRD2 A2等位基因携带者比DRD2 A1等位基因携 带者对CrP效应更敏感。对脂肪重量的变化(p＜0.032)、体重的变化 (p＜0.011)、重量变化百分比(p＜0.035)以及以公斤计的体重变 化(p＜0.012)的评估都是显著的，而那些有DRD2 A1等位基因受试者 的任何参数没有发现显著性变化。

讨论这些结果说明多巴胺能系统，尤其是D2受体的密度，在体 重减轻和身体脂肪变化方面引起显著差别性的CrP治疗效应。当考虑 过食和DRD2基因的A1等位基因的关系时，这呈现出甚至更大的显著性 (Blum等人，1995)。发明者的观点，A2 DRD2携带者的阳性反应性 保持CrP的阳性代谢效应，但是相比之下，A1 DRD2携带者由于碳水化 合物暴食增加掩盖了CrP在体重减轻和身体脂肪变化方面的效应。这 些数据进一步说明，CrP或其他铬盐和氨基酸前体治疗相结合，即使 在A1 DRD2携带者中也会导致减少嗜欲和显著的体重减轻(Blum等 人，1997)。另外发明者建议，现观察到的CrP的服用对身体组成方 面的混合效应可能通过治疗前对预期患者进行基因分型得以解决。烟 酸铬或吡啶甲酸铬具有所观察的效应的原因是，铬盐产生初级的代谢 参数而氨基酸影响次多巴胺缺乏，从而减少对甜食的嗜欲。

                         实施例16

氨基酸和草药成分对于集中注意力的增强：在注意缺陷多动障碍

                         中的潜在效力

发明者观察到多巴胺D2受体基因多态性和人类脑电生理异常之间 的相关性。加权线性趋势分析在该关系中显示，与DRD2 A2基因型和 共发病物质滥用障碍(SUD)相比，在DRD2 A1等位基因存在时，事件 相关电位(EPs)有明显变差的效应[p＜0.0001]。唤醒相关电位 (ERPs)P300波的幅度和潜伏期下降长久以来与酒精和药物依赖相 关。发明者也发现，P300潜伏期的明显延长与三种风险因素相关： (1)双亲SUD，(2)化学依赖(如可卡因依赖)，和(3)碳水化合 物暴食。发明者也发现，与基因的A2形式(A2/A2)相比，两拷贝的 DRD2 A1等位基因(A1/A1)明显与P300波潜伏期的延长相关。另外， P300幅度与酒精中毒和SUD的家族史相关，以及S.Hill(匹茨堡大 学)发现P300幅度与DRD2 A1等位基因也明显相关。这些结果说明， DRD2 A1等位基因在参与包括集中注意力和潜在RDS相关行为(如SUD 和ADD/ADHD)的脑功能非行为性病理生理表型中的作用。必须注意的 是，P300异常已得到很好的证明，但是它并不如一度认为的那样对药 物滥用特异。它们在混合性ADD、精神分裂症、谵妄、肥胖和别的精 神病障碍中也是常见的。

已提出许多治疗性方法和光谱分析以改善激发电位异常，如胆碱 能药，胆碱酯酶抑制剂，多巴胺能和血清素激活剂，兴奋剂，微量元 素，饮食(低度精练碳水化合物)，颅侧刺激，生物反馈和其他特异 与非特异方法。

由于多巴胺能功能可能通过降低D2受体而影响脑电生理异常，治 疗措施可能在于发展增强脑D2受体功能的技术。具有TaqI A1和TaqI B1以及别的等位基因的多巴胺D2受体基因表达产物显著降低，导致多 巴胺能缺陷。从基因修复方面来说，目前没有永久性修复这种受体缺 陷的已知技术，然而本发明中的特定部分提供了克服该遗传引起的D2 Bmax降低的可能性。已经观察到，包括溴环肽和N-正丙基去甲阿扑吗 啡的激动剂引起D2多巴胺受体上调(Fitz等人，1994)。另外，在激 动剂治疗后，mRNA的变化看起来不能说明受体的增加。相反，对一种 蛋白质合成抑制剂放线菌酮的研究表明，蛋白质合成的增加(基因表 达的上调)，以及蛋白质降解没有下降，这是由于多巴胺能激动剂引 起的上调。利用该逻辑，本发明建议，联合利用经由脑啡肽酶抑制 (D-苯丙氨酸)引起的突触多巴胺释放提高以促进D2受体的长期占据 和如转染的HEK-293细胞所示可能使D2受体增殖或上调。这进一步形 成了本发明的基础。

电生理学和神经递质功能。包括QEEG和皮质激发电位在内的脑电 活动定位图，揭示了许多种类的受试者存在精细的神经病学变化 (Porjesz等人，1987)，包括精神分裂症患者(Braverman等人， 1990；Christian等人，1994；Blum等人，1995)，罪犯(Lovinger 等人，1995；Seiden等人，1995)，抑郁(Hudson，1995)， Alzheimer病(Scourfield，1996；Lawford，1995)，爱滋病 (Meiswanger等人，1995)，ADD/ADHD和它们对药物的反应 (Kokkevi等人，1995；Nunes等人，1995；Yoshida等人，1984)， 以及SUD(Gilman等人，1990；Morrow等人，1992；Brown等人， 1994；Comings等人，1996；Neshinge等人，1991)。众所周知，药 物能够诱导在深部边缘结构中的神经递质缺乏(位于颞叶) (Yoshita等人，1984；Gilman等人，1990)，导致灶性电生理异 常。那些局部解剖变化可能是诱导个人物质使用欲望的重要标志或组 成部分。已经说明边缘系统的激动现象可能是SUD受试者嗜欲和脱瘾 的一个因素(Ballenger等人，1980)。另外，SUD样发病前抑郁可能 在发病前就使先证者倾向于随后的Alzheimer脑病、共发的ADD/ADHD 以及别的来自于颞叶精神疾病。大脑定位的颞叶异常与PET扫描的代 谢减退相关，它与同样具有代谢衰退的发作间颞叶癫痫发作相似 (Adams等人，1993)。已经报道DRD2 A1等位基因与额叶PET扫描检 测到的低葡萄糖代谢相关(Noble等人，1997)。这表明代谢衰退与 导致的机能障碍的脑额叶多巴胺D2受体过低相关。许多文章表明， SUD促进了可能诱导异常激发电位和光谱分析异常的激动反应 (Goldstein等人，1994)或电生理不稳定性。此外，可卡因和乙醇 诱导激动反应或电生理不稳定性，并在急性基础上很有可能经由多巴 胺释放矫正激发电位异常。恢复中的物质滥用者即使在物质使用中断 以后仍然有低P300。P300活动只有部分恢复，它也代表先于物质滥用 的遗传特征，导致与酗酒者中观察到的相似的可卡因或海洛因滥用 (Gilman等人，1990)。

发明者推理，物质依赖显著加重了潜在的发病前状态，并且强烈 提示遗传-环境的相互作用。引起伏核多巴胺释放的物质自我给药或 行为动作(即可卡因，酒精，尼古丁，烟，性等等)，尤其是药物， 通常缓解这些电生理紊乱，但是遗憾的导致了脑机能障碍的加重。

不同多巴胺基因的累加效应。发明者对基因分型直到第四代的 ADHD/ADD+RDS家族的三个多巴胺能基因DRD2、DβH和DAT1基因的最 近研究总结于此。综合这些结果，在分子遗传学水平提供了对以下概 念的支持：ADHD、TD和另外的障碍是以多基因方式遗传的，是相关障 碍谱(RDS)的一部分，由共享的基因引起、由人群中常见的等位基因 引起、由累加效应的基因引起、由干扰多巴胺系统(及其他)的基因引 起。

对注意力缺乏多动障碍(ADHD)先证者和直至四代的多个家庭成 员多巴胺基因的世代关联研究。多巴胺D2受体基因多态性与“报偿缺 陷综合症”(RDS)或许多相关的冲动-成瘾-强迫行为相关；多巴胺 转运蛋白基因(DAT1)的VNTR 10/10基因型与ADHD和Tourette障碍 (TD)相关；多巴胺-β-羟化酶基因(DβH)的B1等位基因也与TD和 许多RDS行为亚性状相关。

发明者对51个来自于多重影响家庭多达四代的受试者进行了基因 分型。DNA根据基于PCRTM的方法从口腔拭纸提取(Blum等人， 1997)。两个最初的先证者通过许多标准仪器被细心地诊断为具有 ADHD。随后，另外的家庭成员也对ADHD和别的相关RDS行为进行了诊 断。对所有受试者进行了三个多巴胺能基因(DRD2，DAT1和DβH)的 基因分型。在所有受试者中，百分之八十(40/50)携带DRD2 TaqA1。当与“超级”对照(1/30或3.3％携带DRD2 A1等位基因)相比 时，观察到奇比率为116[95％置信区间13.6-2，575]的显著相关性(卡 方＝41.1，df＝1，p＝0.00000001，Yates修正)。发明者提出这些数 据为了说明高度筛选过的对照的重要性。当发明者利用714个非酗酒 者和非药物滥用的文献对照(185/714或26％的DRD2 A1等位基因携带 者)比较数据时得到了一个相似但稍弱的发现。发现了奇比率为 11.4[95％置信区间5.38-24.93]的显著关联(卡方＝63.2，df＝1， p＝0.00000001，Yates修正)。在91个筛选过的对照中，DAT1 10/10 等位基因的流行率是34/91或37.4％，51个筛选过的对照中，DβH B1 等位基因的流行率是27/51或53％。当与筛选过的对照相比时，在ADHD 来源的两家庭成员(30/50或60％)的DAT1(VNTR 10/10等位基因)间 发现奇比率为2.64[95％置信区间1.31-5.38]的显著相关性(卡方 ＝7.51，df＝1，p＝0.0061)。相比之下，当DβH B1携带者(32/50或 64％)与筛选过的对照相比时，发现奇比率为0.63[95％置信区间0.28- 1.4]的非显著性(卡方＝1.27，df＝1，p＝0.259)。发明者相信，与通 常在单个冲动-成瘾-强迫行为亚性状发现的40％-50％相比，DRD2 A1等 位基因的高比例是由于包含在RDS下的多个行为亚性状。在一个家庭 内，DRD2 A1等位基因出现在100％的诊断为具有ADHD的受试者中。

当对数据进行完全的连锁分析时，利用出现在家庭成员中的至少 一个RDS行为作为共变量。值得注意的是，当RDS行为的数目在受试者 中增加时，DRD2 A1等位基因的出现也增加。第一眼看起来，与另外 两个多巴胺能基因有关的DRD2 A1等位基因至少在目前检验的样本中 预测ADHD和RDS行为是更有用的。目前处理的数据和另外的结果将根 据这些发现对冲动-成瘾-强迫行为(RDS)以及重要的亚性状ADHD的 生物遗传学影响而提出并讨论。

认知、电生理学和神经递质功能。本发明的一个重要方面是注意 力的集中受到神经递质功能改变的影响，尤其是在负责“报偿”和别 的相关行为的脑位置(中央-边缘)。经由遗传或环境因素如药物、 性、和应激在“报偿级链”中的机能障碍可能影响注意力集中。虽然 许多神经递质途径最终参与集中注意力、记忆和认知，本发明中大体 上优选至少四条主要途径：5-羟色胺能、阿片能、GABA能和多巴胺 能。关于认知和神经递质文献的简单回顾将支持多巴胺能系统与注意 力集中的正相关性。该相关性提出了这样一种概念：激活多巴胺能系 统和促进激动剂在多巴胺受体上的相互作用或释放自然多巴胺的化合 物将增强个人集中注意力。

多巴胺D2受体基因多态性与人脑电生理学异常相关。这是发明者 所知对多巴胺D2受体基因多态性与人脑电生理学异常相关提供了证据 的首次研究。在这点上，加权线性趋势分析显示：与DRD2 A2基因型 和共发病物质滥用障碍(SUD)相比，在存在DRD2 A1等位基因时，有 事件相关电位(EPs)显著恶化的效应(p＜0.0001)。Duncan’s区间 检验说明，与DRD A2对照相比，带有或不带有DRD2 A1等位基因的SUD 明显恶化了EPs。此外，相对于发明者的“超级对照”(p＜ 0.0000033)和大量的文献对照(p＜0.0021)，发明者观察到了严重 物质滥用障碍(SUD)和DRD2 A1等位基因的显著相关。唤醒相关电位 (ERP)P300波的幅度和潜伏期降低长期以来与酒精和药物依赖相 关。在本研究中，发明者发现P300潜伏期的明显延长与三个风险因素 相关(1)双亲SUD，(2)化学依赖(如可卡因依赖)，和(3)碳水 化合物暴食(p＜0.03)。在该人群中，发明者也发现P300幅度下降与 酒精中毒和SUD家族史相关(p＜0.049)，但不与DRD2 A1等位基因相 关。这些结果说明了DRD2 A1等位基因在涉及脑功能和潜在成瘾倾向 的非行为性病理生理表型中的作用。

本研究的目的是确定是否多巴胺D2受体基因(DRD2)TaqI A1等 位基因与私人诊所门诊病人的带有或不带有物质滥用障碍(SUD)的 脑电生理异常相关。本发明者的实验室发现D2多巴胺受体基因的A1等 位基因与酒精中毒的强相关(Blum等人，1990)，随后几个研究组没 能重复该观察(Gelernter等人，1997)。发明者提出了两个可能的 原因：第一，对照中酒精、药物和烟草滥用以及别的相关行为的不充 分筛选，第二，按照酗酒者的长期性和疾病严重性特征的取样错误 (Blum等人，1996)。然而，对文献的回顾揭示了DRD2基因不仅与酒 精中毒之间，而且与包括多物质滥用、吸烟、注意力缺乏多动障碍 (ADHD)、碳水化合物暴食、Tourette障碍、病理性赌博、创伤后应 激障碍的一组冲动-成瘾-强迫障碍以及被称为“报偿缺陷综合症” (RDS)的分裂样/回避行为之间的许多阳性关联(Blum等人， 1996)。已有人提出DRD2等位基因变异代表与多巴胺能活动相关的很 常见隐性性状中的变异(酒精中毒是仅有的单个表现)(Hill和 Neiswanger等人，1997)。此外，从对照和患者组中排除“其它疾 病”的工作在San Antonio，Los Angeles，Duarte，和Pittsburgh 完成(Hill等人，1997；Blum等人，1996)。发明者的论点是，没有 发现连锁或家族内关联的原因可能是对适当的供分析表型理解不完 全。

因此，为了减少假结果，发明者决定利用已知为脑电生理异常的 非行为性病理生理学表型作为随后对RDR2 TaqI A1等位基因关联研究 的标志。另外的对人RDR2 TaqI A1等位基因关联的研究也建议该方法 (Noble等人，1994；Blum等人，1994)。迄今为止，在许多行为障 碍包括SUD、ADHD、品行障碍(CD)、病理性暴力行为、阿尔茨海默 氏病和其他分裂行为障碍中，与光谱和激发电位异常都存在关联(美 国精神病协会Task Force，1991)。

由于发明者发现了SUD和肥胖中显著的激发电位异常，发明者决 定系统性的评估Priceton，New Jersey神经精神病学和医学诊所的病 人中异常脑电活动与DRD2 A1等位基因直接相关的可能性。正相关能 够给发病前从遗传学上诊断脑机能障碍提供重要和恰当的临床信息。

对DRD2等位基因变异、SUD、和光谱分析之间的关系进行了检 查。在具有RDR2 TaqI A2/A2等位基因的典型的正常受试者中，确定 了视觉唤醒反应(VER)的显著概率图(SPM)。计算标准差最大值 (0.34)和最小值(-1.00)作为SPM，发明者的对照组与标准化的 BEAMTM(脑电活动作图)对照没有显著性差异。带有RDR2 TaqI A1/A2等位基因的非SUD受试者的特征性VER脑图，带有轻微额颞过度 阴电至2.92 SD，可视化为亮白蓝。由弱白蓝区显示的右额颞异常在 有情绪波动、心悸、焦虑和紧张、有或没有SUD的个人中是典型的。 RDR2 TaqI A1/A2基因型的SUD病人特有的VER脑电活动图，带有左和 右额颞过度阴电至6.13 SD，可视化为亮白光。

发明者也发现P300潜伏期的显著延长与三个风险因素相关(a) 双亲SUD，(b)化学依赖(即可卡因依赖)，和(c)碳水化合物暴 食(p＜0.03)。发明者也发现P300幅度下降与酒精中毒和SUD家族史 相关(p＜0.049)，但不与DRD2 A1等位基因相关。

最重要的是，加权线性趋势表明与DRD2 A2基因型以及共发病SUD 相比时，存在DRD2 A1等位基因时的事件相关电位有显著恶化效应(p ＜0.0001)。Duncan区间检验说明，与DRD A2对照相比，带有或不带 有DRD2 A1等位基因的SUD显著恶化了EPs。

值得注意的是，在本研究中，52％的严重SUD受试者(N＝29)携带 RDR2 TaqI A1等位基因。当与发明者的“超级对照”(排除酒精中 毒，SUD，吸烟行为，ADD/ADHD，碳水化合物暴食，病理性赌博，分 裂样/回避人格障碍行为，暴力行为，以及酒精中毒，SUD，和肥胖的 阳性家族史)相比时，流行率百分比有显著的不同，DRD2 A1等位基 因的流行率是3.3％(1/30)[卡方＝17.47，df＝1，p＜0.0000033]。此 外，在714个非酗酒者、非SUD(除了烟草)的非西班牙白人对照中， 25.9％携带DRD2 A1等位基因。当与非西班牙白人SUD先证者相比时发 现了非常强的相关性(卡方＝9.44，df＝1，p＜0.0021)。

据发明者所知，这是观察DRD2 A1等位基因与参加神经精神病学 治疗的病人中日益增多的VER和听觉唤醒反应(AER)脑电生理异常之 间的显著关联的首次研究。该遗传学证据与关于易于精神兴奋剂滥用 /依赖个人的电生理学失调的另一些研究一起进一步说明多巴胺能基 因与兴奋剂滥用癖性之间的关系。已有报道SUD加重脑图参数 (Braverman等人，1996；Blum等人，1995；Lovinger等人，1995； Seiden等人，1995；Hudson，J.，1995)并且当禁戒时，在大部分病 例中出现由一些药物诱导的脑电生理学损伤的持续(Scourfield等 人，1996；Lawford等人，1995；Neiswanger等人，1995)。发明者 推理精神病先证者的共发SUD显著加重发病前的潜在状态并强烈地提 示基因-环境的相互作用(Kokkevi等人，1995；Nunes等人， 1995)。非法药物的自我用药，例如象可卡因，是用来缓解这些电生 理学失调的，不幸的导致了脑功能障碍的加重，尤其是在长期重复使 用者脑的双颞叶。另外，P300幅度和潜伏期的下降与酒精中毒和药物 成瘾是相关的(Yoshita等人，1984；Gilman等人，1990)。这是与 酒精和药物的急性效应无关的，因为在不使用酒精的酗酒者的儿子中 发现了证据(Morrow等人，1992；Brown等人，1994)。这表明存在 涉及P300波幅度下降和潜伏期延长的单个基因或多个基因并与SUD的 高风险相关。

从总体上讲，发明者相信这些观察资料对进一步了解多巴胺在脑 活动(即报偿)中的作用具有重要神经病理学意义。连锁的DRD2多态 性是与多巴胺受体的功能关联的(Pohjalainen等人，1996)。在33 个芬兰男子志愿者中，与A2/A2受试者相比，DRD2基因的TaqI A1等位 基因与校准的Bmax统计学上显著的降低相关。Kd在组间是不显著的。 这表明当A1/A2受试者的受体数量下降时，受体的功能看起来没有变 化，表明在受体合成中3’介导的多态性的调节作用。另外，DRD2基因 敲除小鼠D2受体Bmax显著降低而Kd没有任何变化(Grandy等人， 1989)。因此调节性基因元件可能与TaqI A多态性连锁不平衡。因此 证明由脑电生理学异常鉴定的特异分子多态性如DRD2 A1等位基因， 可能具有深刻的临床应用价值。逻辑上，从这些研究看起来多巴胺系 统的多态性关系到特异脑电生理学功能障碍(即VER和AER)，它们看 来介导了异常行为(RDS亚性状)。

继续研究这些关联，发明者将够提供更好的预防对策，尤其在高 风险组中。另外，更特异的靶向治疗方式最终将来自于这些研究，按 照发明者的观点，它们显著影响人类行为病理学。

受试者在本发明中总共利用了二百九十四个受试者。所有的受 试者都是非西班牙白人，他们签字表示同意；本研究经过了Path Research Foundation Institutional Review Board的批准。用于 研究的病人是从参加PATH门诊病人私人临床实践超过一年的800例病 人的约5000次访问中随机挑选的。

所有SUD组的受试者都经过临床上鉴定具有完全(DSM IV)早期 SUD缓解(Brown等人，1994)。发明者的一百七十三例人口统计分类 在表69中描述。性别和精神病学诊断在所有组中没有显著性差异。对 所有组的平均年龄进行了评估，没有显著变化(p＜0.00001)。对于 该研究，性别选择包括53.1％男性和46.9％女性，在精神病诊断中发现 年龄差异而在性别中没有发现。

电生理学和基因分型方法.对于确定SUD表型(可卡因滥用，DSM IV代号No.305.60；可卡因依赖，DSM IV代号No.304.20；酒精滥 用；DSM IV代号No.305.00；酒精依赖，DSM IV代号No.303.90)的 选择标准和评估工具，发明者利用发明者以前报告的相同方法 (Braverman等人，1996)。对受试者DRD2等位基因变异(DRD2 TaqI A1和A2)进行了基因分型，与Comings等人相一致(1996)。 Nicolette BEAMTM用于评估：总体脑异常、总体光谱异常、激发电位 (EP，AER，VER)和P300。对评估脑电生理异常的该方法的详细描述 见Braverman和Blum，1996。发明者为了相配比较的目的在该研究中 也包括了一个没有基因分型的P300对照组。P300对照组包括15个男性 志愿受试者，他们没有药物、酒精、和食物成瘾，也没有精神疾病。

统计学分析。为了进行统计学分析，所有脑图数据分为异常和正 常。尤其是EEG分为正常和异常两类，光谱分析按标准化BEAMTM对照 的2.5 SD分为两类，其中在三个独立的尖峰后有重复出现缺陷(在同 一位点)。P300电压以确立的正常电压10dv分为两类(Neshinge等 人，1991)，P300潜伏期以350ms分为两类。该值是基于300ms和对照 组平均年龄的估计得来的，这是由Lexicor，Inc.，Boulder， Colorado制定的标准，并且在18岁以后P300每年增加大约1.25ms。 统计方法学的完全描述以前已经发表(Braverman等人，1996)。此 外，发明者使用Duncan’s区间检验进行成对的平均数比较。显著性的 α水平设置为0.05。

KantrollTM对健康人注意力集中的增强：具有脑啡肽酶抑制特性 的可卡因代用品。这是关于每天摄入特异氨基酸混合物KantrollTM在 人体中对认知性事件相关电位(ERPs)效应的首例报道。在正常的年 轻成年志愿者中，认知ERPs通过对两个计算机化的视觉注意力工作的 反应而产生，空间定位项目(SOT)和应急持续表现项目(CCPT)， 每个受试者在28-30天氨基酸摄入的前后分别检验做自身对照。在摄 入KantrollTM以后，对于两个项目都见到了ERPs的P300成分在统计学 上显著的幅度增强。本研究在正常对照中观察到的变化强烈说明，在 氨基酸添加剂KantrollTM摄入以后，神经生理活动的增强可能是报偿 缺陷综合症行为(如ADD/ADHD，物质滥用障碍，碳水化合物暴食，尼 古丁滥用，等等)加速恢复的基础。

神经生物学最有吸引力的发现之一是，大量神经递质(如多巴 胺，去甲肾上腺素，5-羟色胺，褪黑激素和甘氨酸)(它们在脑活动 和情绪调节中起重要作用)能够受到循环中其前体氨基酸营养物水平 的显著影响(如，Wurtman，1983)。各自的前体氨基酸是L-酪氨酸 (或L-苯丙氨酸)，L-色氨酸和L-苏氨酸。所有这些神经递质合成系 统具有两个决定性的特征。第一，它们合成的来源氨基酸是九个必需 氨基酸：组氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨 酸，苏氨酸，色氨酸和缬氨酸(酪氨酸是由苯丙氨酸合成的)。第 二，在合成途径的第一步利用的酶是不饱和的。这两个特征的结果是 这些氨基酸的食物摄取能够推动特异神经递质的合成。由于许多调节 性反馈机理，这并不一定是线性关系；但已经表明它是一个高度显著 性的调节性途径(Hernandez-Rodriques和Chagoya，1986；Wurtman 和Fernstrom，1976；Wurtman等人，1981)。

动物中脑化学转变的复杂测定，包括显微透析，已证明了在前体 氨基酸引入后神经递质产量的变化(Hernandez等人，1988)。在动 物中，氨基酸在全身性和中枢神经系统直接输入后，报偿行为变化已 得到说明(Blum等人，1972)。当L-氨基酸是神经递质和神经调节物 的前体时，它们的消旋物、D-氨基酸也有生物学活性。尤其是D-苯丙 氨酸和D-亮氨酸降低了情绪和行为的重要调节物阿片样肽的分解 (Blum等人，1987；Carenzie等人，1980；Della Bella等人， 1979；Ehrenpreis等人，1979)。

神经递质活动形成了行为的神经化学基础，它们的紊乱可能对许 多精神病和行为障碍来说是主要的。它们对成瘾性障碍的贡献也一直 是相当多评论的焦点(Koob和Bloom，1988；Wise和Bozart，1985； Blum等人，1990；Blum和Kozlowski，1990；Amit和Brown， 1982)。尤其是多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、γ-氨基丁酸 (GABA)、谷氨酰胺和阿片样肽被认为在成瘾性障碍中起决定性作 用，特别是关于酒精、海洛因和可卡因滥用(Blum等人，1977； Geller等人，1972)。这些观察随之产生了这样的观点：选择性营养 物摄入能够影响人类的情绪并因此影响行为。

虽然以前运用了几次营养方案(即Williams，1959)，但明确的 量化证明受到了明显的限制。然而最近的临床数据说明了氨基酸前体 和脑啡肽抑制剂对酒精、可卡因和食物成瘾恢复的明显效应(Blum等 人，1988；Halikas等人，1989)。一个有关的研究(Blum等人， 1988)检验了氨基酸添加剂KantrollTM在30天的可卡因成瘾住院病人 治疗项目中的使用。实验组和对照组的唯一区别是该添加剂的使用。 使用了两个重要的测评项目：在完成前离开该项目或者不服从医学建 议(AMA)和药物饥饿。药物饥饿是清晰的可卡因相关幻想、躯体反 应、请求用药、药物相关对抗反应、项目顺从、激动和暴力或者威胁 离开AMA的测评。氨基酸添加剂组在两种测评方面都比对照组明显地 好。AMA比率降低了九倍并且测到的药物饥饿也显著地减低。此外， 工作人员报告了激动、外向注意和嗜欲的明显降低。然而，评估是复 杂的，经常是定性的，并且依赖许多输入因素(Brown等人， 1990)。

本发明试图弥补临床经验和对KantrollTM的神经生物学重要性的 基础认识之间的差距。在这里，该方法评估与KantrollTM治疗相关的 数量神经生理学变化。电生理学部分重点在于认知事件相关电位 (ERP)的P300成分，由两种视觉注意力项目引起。与更传统的EEG分 析相比，这种电生理学方法的优点在于：由于固定于表现项目，对注 意力加工重要的特异系统被激活。这些注意力探针产生了一系列ERPs 成分，每个都代表信息加工的一个阶段。然而，ERP分析在这里重点 在于认知ERPs，尤其是P300成分。最近表明数量性ERP变化对于许多 临床障碍是非常具有预见性的；如，注意力障碍(Buschbaum等人， 1973；Halliday等人，1976；Prichep等人，1976)，精神分裂症 (Braverman，1990)，抑郁(DeFrance等人，1995a；Vasile等 人，1992)，痴呆症(Duffy等人，1984)，和物质滥用障碍 (Braverman等人，1990；以及Braverman和Blum，1996)。

该初步报告的重点是注意力加工过程，部分由于注意力/或集中 精力的改变都先于并应急持续的物质滥用(Begleiter和Projesz， 1988；Whipple等人，1988；Parsons，1990)，并且由于许多被认 为对注意力重要的递质底物是KantrollTM控制的目标。本研究的另外 一个目的是弄清楚作为神经递质前体或调节物的氨基酸是否影响中枢 神经系统。然后该研究弄清楚了在正常受试者长期使用KantrollTM时 的电生理学与表现的相关性，特别是由认知ERP的P300成分变化所指 示的。

受试者。本研究包括20个正常的志愿受试者；由委员会授权的精 神病学家通过DSM IV标准评估没有心理学、神经病学和精神病学疾 病。所有受试者签名同意并且每位都对他们在本研究中的参与得到了 补偿。每位受试者都施行了两次检验，作为检验-复检验模式，因此 作为自身对照。最初的检验在第零天(前检验)进行然后在28-30天 后重复(后检验)。受试者每天服用六粒KantrollTM胶囊共28-30 天。组成见表6。由于前检验和后检验记录的质量低两位受试者的数 据没有包括在内。

表现工作。两个表现参数用作电生理学研究的行为探针。第一个 探针是空间定位。这是基于反应时间的项目(Posner等人，1988)， 其中priming cues出现在视野的不同部分。当有或无priming crues 时对于右和左视野的反应时间进行了比较。通过反应时间的比较，可 以评估个人平稳转换注意力的能力。指示是，集中于监视屏中心的十 字并且当(*)出现在右框时按鼠标右键，当(*)出现在左框时按鼠 标左键。根据亮度转换两个框。将反应时间记录下来，ERPs构成四个 类别：(1)对于右视野的强化，(2)对于右视野没有强化，(3) 对于左视野的强化，和(4)对于左视野没有强化。出现形式是随机 的，但对四种条件有均等的概率。强化框在目标出现前500msec被加 亮。记录左右视野的精确评分和反应时间，以及各自的A′(标准信号 检测参数)值。该模式示范了对刺激的定位、注意力流动性以及认知 加工速度的例子。

第二个探针是应急持续表现。该项目是传统方法(Rosvold等 人，1956)的变体。要求个体这样作出反应，出现特定的字母顺序按 鼠标左键：如，一个′T′之后出现另一′T′。本版本的项目有恒定的0.8 秒的刺激间歇(ISI)并包括500个实验。非′T′的概率设定为50％，预告 性′T′的概率设定为30％，目标′T′的概率设定为20％。平均的ERPs根据 三个条件之一构成：干扰信号(除了′T′以外的任何字母)，预告性信 号(一对中的第一个′T′)，和目的(一对中的第二个′T′)。首要的表 现测评是不一致性指数(Ringholz等人，1989)，它是表现一致性的 度量。值得注意的是，前额叶皮质看来最大程度地参与了持续性注意 力和努力，导致在该类工作中有好的表现(Cohen等人，1987； Corbetta等人，1991)，并且这些项目对兴奋性药物是非常敏感的。

记录方案。参照电极在相联的耳垂(A1-A2)，从28个有效记录位 点记录EEG。基于国际10-20系统进行剪接，附加电极置于前颞 (FTC1，FTC2)、中颞(CP1，CP2)、颞壁(TCP1，TCP2)和壁枕部 (PO1，PO2)区。电极阻抗维持在少于5KOhm。附加电极用于检测眼 外人工信号。眼睛垂直移动和眨眼(即VEOG)经由直接置于左眼框上 下的电极来记录。眼睛水平移动(即HEOG)用位于外眼角的一对附加 电极监视。

EEG和EOG用32通道神经科学脑图象仪(0.1-40Hz，6dB/频程低 通滤波器，36dB/频程高通滤波器)放大。粗的EEG通过16bit模拟- 数字转换器(TECMAR labmaster DMA)在SCAN EP/EEG收集和分析系 统(NeuroScan，Inc.)的控制下取样2.56秒。为了建立事件相关电 位(ERPs)，平均波形从800msec以上区间的256点来建立。取样在刺 激出现100msec前进行以建立刺激前基线，用作矫正方法的一部分。 单扫描数据通过从均数减去进行基线矫正。记录的扫描次数根据行为 探针而变化。空间定位中记录了总共200个扫描，应急持续表现试验 中记录了500个扫描。行为模型的每个节段。检验了三个参数，每一 个可能根据个体注意力工作效率变化。这些参数是：ERPs成分的潜伏 期、幅度和对称性(空间分布)。

数据分析。首先，对28个电极位点创建了T检验统计图。这是 Duffy等人(1981)的统计学概率图的一个变化形式。虽然是探索性 的，该方法确实产生了一个容易可视化的图，说明了那一个电极位点 应当进一步分析。由于P300是目标成分，Pz被选作统计学分析的位 点，由于从该图来看，这是这些视觉项目中该成分的焦点所在。然 后，评估了峰潜伏期和峰幅度(275-325msec的间隔内)。统计分析 的第二阶段运用了成对T检验模型(Statgraphics，1988)，比较基 线和治疗条件。表现项目的数据用同样的模型进行分析。

用于说明，给出了对于CCPT项目ERPs的置于28scalp记录位点的 电极排列图解。也包括了用于人工信号矫正和排除的垂直眼外电图 (VEOG)和水平眼外电图(HEOG)记录。

将首先讨论来自SOT的结果。而且，该具体模型产生了许多有趣 的成分(DeFrance等人，1993)，包括在100-200msec的间隔中产 生的N2否定性。N2成分是一种加工否定性，是定位反应的一个早期阶 段(DeFrance等人，1993)。发现该成分在治疗后增强，但是幅度的 变化没有超过发明者预先建立的显著性阈值 [F(1，17)＝2.30，p＝0.0259]。然而，发现后检验条件中的顶点正性 (即P300成分)在幅度上显著高于左[F(1，17)＝8.531，p＝0.0095]和 右[F(1，17)＝16.31，p＝0.009]强化条件。因此，当定位于左及右视野 时，使用KantrollTM组平均P300成分显著增强。

对局部解剖图检查了关于左视野强化(即′primed′)条件的底线 和治疗条件。右视野的模式与左见区域的对应，因此这里不再给出。 在100-200msec的间隔中，N2否定性出现在右颞壁区。而且， KantrollTM对该成分的效应接近统计学显著性，但是更大的变化与 P300成分相关并通过比较300-400msec间隔容易看出。实质上，P300 成分的局部解剖特征仍旧相同，但峰幅度通过KantrollTM治疗得到增 强。关于表现的数据，左右视野刺激的联合反应时间在治疗后以232± 0.03msec对238±0.03msec而加快[F(1，17)＝8.62，p＝0.001]。总之， 对P300成分有显著的效应，对N2成分有界线的增强。也可以看到对与 警惕项目CCPT相关的P300成分的显著效应。

与应急持续表现项目(CCPT)相关的认知ERPs的不同成分与由其 他持续表现项目产生的有许多相似之处，特征是显著的P300成分(即 DeFrance等人，1995b；Hillyard等人，1973)。建立了三组波形用 于分析-干扰信号、预告性信号和目标-但只有目标波形需要进行讨 论。前检验和后检验条件的比较发现P300幅度的显著 [F(1，16)＝7.422，p＝0.015]增强。为了确定该效应，比较了底线和 治疗条件的Pz平均目标波形。约300msec时达到峰值的大的正向电位 是典型的P300成分。P300波形是当受试者对一对中的第二个′T′(作为 指示)反应时采取的那些。测定了KantrollTM前(底线)后(治疗) 的目标条件在300-400msec间隔中的局部解剖图，并且P300成分的局 部解剖特征仍旧相同，但是当比较前检验和后检验条件时幅度呈现增 强。那就是说，在底线和治疗条件下，P300成分占据了后中心位点并 同SOT一样是对称的。然而，P300成分的幅度在治疗条件下增强了。 虽然治疗约四个星期后有局部解刨学差异，但该行为探针的主要表现 变量-不一致性指数没有显著性区别。可能的原因是这些正常受试者 已经接近他们精确性的最佳表现。然而，也可能在临床人群中出现表 现差异。

KantrollTM被设计用作可卡因滥用的潜在治疗，因为认识到可卡 因滥用的表现之一是改变了注意力加工(Robledo等人，1993)。此 外，人类注意力加工和认知ERP的P300成分经常是关联的(即， Hillyard等人，1973)。在这点上，有必要回顾一下P300成分的神经 病学，因为它提供了重要发现的环境。众所周知，P300是几个内源性 认知ERP成分之一，其潜伏期、形态学和空间分布高度依赖于植入刺 激的心理学环境(Sutton等人，1965)。因此，由于P300成分在注意 力和记忆中推定的作用，它是许多研究的主题。人类深层记录的证据 表明前叶(如，杏仁状复合体)和中颞叶(如，海马结构)以及额叶 结构可能参与P300成分的调节，并可能实际上引起它在颞区的显示 (Halgren和Smith，1987；Wood等人，1980)。然而，由于颞叶切 除术没有消除P300成分，因此以前研究者所确信的深部颞结构是P300 成分的唯一产生者的说法是不大可能的(Johnson和Fedio，1986； Smith等人，1985)。不过，颞叶的深部看起来对P300成分有清楚的 调节作用(Halgren和Smith，1987)，前额区(Simon等人，1977) 也如此。

由于任何认知ERP的特性是非常固定于诱发性行为模型的，因此 记住本研究中运用的表现探针具有持续的和选择性注意力工作的成分 是重要的。因此，ERP的特定成分(如，P300)应当与注意力的两个 方面有关。有趣的是，最近的PET研究(Corbetta等人，1991)已经 说明框额皮质高度参与注意力的选择性方面，而持续性方面看起来更 可能是前额皮质中部的范围(Cohen等人，1987)，右半球部分起到 了更重要的作用(Pardo等人，1991；Wilkins等人，1987)。由于框 额皮质经由钩状束调节前颞区的活性，那么杏仁状损伤也影响选择性 注意力不应当是令人吃惊的。已经说明，杏仁状损伤确实损害了选择 性注意力，可能是由于不能对刺激分配充分的感情值(LeDoux， 1993)。也已知注意力表现受到传入信息的特点和区别性的影响。有 重要的证据说明海马在选择性注意力全面过程中起到的就是这种作用 (如，Salzmann等人，1993；White，1993)。因此，框额-杏仁状复 合体-海马结构轴看起来在选择性注意力的调节中是重要的，其中杏 仁状复合体可能分配特性值给刺激复合体，海马结构在刺激间比较特 性值。在该框架内，P300作为选择性注意力加工过程的不依赖于模式 的副产品起作用-随后的情感、记忆、和认知过程的必需基础。这些 表现探针因此挑战了额-颞轴路径的功能。正是这些前脑区域参与脑 对可卡因的反应。

也已说明注意力加工依赖生物胺的调节(Stanzione等人， 1990；Scatton等人，1982)。由于合成这些胺所需的前体依赖饮食 摄入，饮食补充有可能改变脑中有效的生物胺储存。这已导致致力于 脑化学的营养改善的不同临床方案以治疗特异的障碍(Blum， 1989c)。该方法利用了正常细胞的控制机理并能够导致心理学前 景、行为表现以及防止复发的明确改善。这种营养改善依靠运用关键 神经递质的氨基酸前体以及维生素和对这些神经递质合成重要的矿物 质。值得注意的是，所有这些化学物质(递质，维生素和矿物质)已 发现不仅在酒精和药物滥用者体内缺陷而且经常在恢复期持续缺陷 (Blum，1991a)。

本研究因此证明，营养补充能够增强正常对照的神经生理功能， 这可能对于氨基酸添加物在可卡因恢复中的利用具有重要结果(Blum 等人，1988；Trachtenberg和Blum，1988)。以后的计划将研究恢 复中的可卡因滥用者的注意力和记忆功能是怎样受到影响的。由于在 注意力中重要的不同神经递质依赖营养来源的前体，有可能通过选择 性增加前体以使注意力缺陷减低至最少，和/或加速恢复。与报偿级 联模型的意义在于，可证明由于药物滥用和/或遗传异常而功能性改 变的这些神经递质中每一个(Blum等人，1990；Noble等人，1991a； Noble等人，1991b；Blum等人，1991a；Blum等人，1991b；Blum等 人，1992；Noble等人，1992；Blum等人，1994a；Blum等人， 1994b；Blum等人，1995b；Blum等人，1995a；Noble等人， 1995)，都应该被调节以促进改善脑活动并因此潜在地改善感觉、情 绪和行为。该常见疾病，首先由Blum等人(1995a；1996a)命名为 “报偿缺陷综合症”，是“报偿级联”的一种机能障碍。发明者的结 果说明可以通过氨基酸引入技术和脑啡肽酶抑制特性至少部分完成对 “报偿缺陷综合症”的治疗。

                            表69

                        可卡因滥用者分类

                   A型                      B型 滥用问题的原因        更多环境的            更多遗传的 性别                  男女相同              更多的男性 人格                  低冲动和              高冲动，寻求刺激

                  寻求刺激，

                  高伤害回避 童年因素              很少的早期            品行障碍

                  危险因素 起始年龄              晚                    早 物质滥用              较不严重，更多        更长期和严重 严重性                发作性                多药物 病理心理学            低严重性，            高严重性，

                  更多情感性            更反社会

数年的研究后，研究者能够鉴定将酗酒者分类为A型和B型的因 素。NIDA资助的最近研究说明，大体上，同样的多个标准在对可卡因 滥用者分类时也是有效的。结果可以证明在解释滥用的不同原因时和 在设计特异的预防和治疗方法时是有用的。

                          实施例17

MAA技术用于其他的多态性性状—胆固醇和低密度脂蛋白水平。

在发明者关于不同的基因在心血管疾病中作用的研究中，发明者 已经鉴定了四个与胆固醇和脂蛋白代谢相关的基因。它们是5-羟色胺 转运蛋白(HTT)、催产素受体(OXYR)、多巴胺DRD2受体(DRD2) 和早衰素基因(PS1)基因。各自的多态性是在HTT基因的启动子插入 缺失(Collier等人，1996)，OXYR基因的二核苷酸多态性 (Mechelini等人，1995)，DRD2基因的启动子插入/缺失多态性 (Arinami等人，1997)，以及PS1基因的RFLP(Higuchi等人， 1996)。基于受试者的分组研究，评分如下：HTT基因-O＝SS，LL， 2＝SL；OXYR基因278/278＝0，278/267＝1，276/276＝2；DRD2 11＝0， 12＝1，22＝2；以及PS1基因22＝0，12＝1，11＝2。

图8说明了运用MAA技术评价这四个基因在胆固醇和LDL代谢中的 作用。

这些结果说明MAA技术可以推广到任何多基因障碍或性状。这四 个基因分别揭示了胆固醇和LDL水平变异的16.2和11.5％。胆固醇的p 值是0.0002，LDL的是0.002。

                         实施例18

多巴胺基因、暴力和分裂样/回避行为.关于“病理性暴力”。 发明者对年龄在12-19的十一个青少年进行了对DRD2和DAT1基因变体 的基因分型，他们参加了San Marcos，Texas的居民治疗项目。这些 受试者根据一个小时的结构化交谈诊断具有冲动攻击暴力行为而被挑 选出来。所选的用于研究的每个受试者具有由授权精神病学家解释的 Nicolett(TM)测定的2.5 SD异常脑电活动图。11个受试者中6个具有 D2A1等位基因(56％)，11个携带DAT1(VNTR10等位基因)。当受试 者中的D2A1等位基因与“超级对照”(1/30或3.3％)相比时，观察到 了显著的相关性(X2＝14.9，df＝1，p＜0.0001)。当与文献对相比 时，也发现了DAT1 10等位基因的显著相关性(34/91或37.4％， X2＝7.6，df＝1，p＜0.006)，但没有发现10/10等位基因的相关性 (p＝0.093)。

本发明描述了不同多巴胺基因与SAB之间的关联。对于SAB数据 组，发明者总共对参加Princeton门诊诊所109个受试者的三个多巴胺 基因(DRD2，DAT1，DβB)以及72个筛选对照进行了基因分型。根据 卡方检验，发明者发现，与D2A2等位基因相比，D2A1等位基因与 Millon Clinical Multi-Axial Inventory计算机化检验所鉴定的带 有SAB(评分＞84)的病人显著相关(X2＝7.6，df＝1，p＝0.006)。当 与超级对照相比时，发现D2A1等位基因携带者在11/22或50％的分裂样 和12/27或44％的回避受试者中显著相关(X2＝16.75，df＝1， p＝0.000044)。而利用该方法，卡方检验分析不能够揭示DβHB1等位 基因和DAT110/10等位基因与SAB的关联，当与对照相比时，在诊断带 有SAB的受试者(18/28或68％)中发现了DAT1 480bp VNTR 10/10等 位基因之间的显著关联(X2＝6.3，df＝1，p＝0.012)。在与筛选对照 (而不是超级对照)相比时发现了DβHB1等位基因(17/23或76％)的 相似趋势(X2＝2.9，df＝1，p＜0.09)。线性趋势分析说明了D2A1等 位基因的频率随SAB严重性增加而增加(A1/A1＝83％；A1/A2＝41％；和 A2/A2＝23％；p＝0.0.005)。利用多重变量关联，D2A1等位基因和性都 是SAB严重性的预示变量。发明者发现D2A1等位基因的奇比率为2.79 (p＝0.0186)和性别的为3.6(p＝0.007)。Hosmer-Lemeshow拟合 优度在p＝0.778，和对变异的联合贡献是17.9％。对SAB，看起来DRD2 基因比DAT1基因更重要。

                         实施例19

              遗传多态性特异分析的实例

下面是本发明中建议的用于诊断RDS相关行为和其他多基因性状 易感性的不同基因的具体检测方法。许多这些具体分析与文献中的相 同，并举例说明这种分析在MAA技术中对于多态性的应用。本领域技 术人员将会认识到能够用对检测特异等位基因多态性的这些分析方法 进行修饰，以及除本文中描述的以外其他基因和分析方法能够在MAA 技术中应用。

DRD1.检查DRD1基因的方法利用包括在5’UTR中A到G改变的Ddel 多态性，通过由Cichon等人(1994)描述的PCRTM方法处理。

DRD2.该基因的检测包括获得受试者的DNA，通过Taq I限制性内 切酶对上述的受试者DNA酶切，分离产生的DNA片段，上述分离的DNA 片段与标记的重组噬菌体-hD2G1(ATCC#61354和61355)或其特异结合 人多巴胺D2受体6.6KbA1等位基因的片段杂交，并确定上述的人D2受 体A1等位基因的出现。尤其重组噬菌体-hD2G1(ATCC#61354和 61355)的片段可以是约1.7kb长度的BamHI片段。检测的替代方法包 括PCRTM技术(Noble等人，1994)。

DRD4.提取DNA并利用VENT聚合酶以及高变性温度(98℃1分 钟)，复性和延伸联合起来在70℃5分钟进行PCRTM扩增(Sommer等 人，1993)。使用的引物是(Nanko等人，1993)，5’-AGG TGG CAC GTC GCG CCA AGG TGC A-3’(SEQ ID NO：23)和D4＝42：5’-TCT GCG GTG GAG TCT GGG GTC GGA G-3’(SEQ ID NO：24)。

DAT1.DAT1重复多态性的检测包括VNTR基因分型。提取基因组 DNA并通过PCRTM扩增DAT1 40-bp VNTR。3’UTR的等位基因利用 Vandenbergh等人，1992a报告的寡聚引物和PCRTM条件通过PCRTM鉴 定。PCRTM扩增以后，产物在具有分子量标记的情况下在8％的聚丙烯 酰胺凝胶中电泳。

DβH. D’Amato等人(1989)报告了命名为A和B的两个Taq DβH多 态性的出现。运用的DβH cDNA克隆AII(Lamouroux等人，1987)含 有EcoR I位点2.7Kb的插入。为了改善标记，载体用BamHI和SalI酶 切成五段。为检测B多态性，标记了3.5kb的片段。用TaqI限制性内切 酶、琼脂糖凝胶电泳、Southern转移至尼龙膜、与32P标记的探针杂 交，放射自显影显示了2.8Kb(B1)和1.4Kb(B2)的片段。

MAOA.利用MAOA VNTR多态性(Hinds等人，1992)。该复杂的 多态性含有GT微卫星，后者直接相邻于不完全双份新23-bp VNTR基 序，等位基因在二核苷酸重复数和VNTR重复中都有差别。DNA用标准 的方法提取，然后通过PCRTM扩增，每一条引物都用荧光HEX或FAM Amidite(应用生物系统，Foster City，CA)标记，引物[＜320； 320-333；334；≥335]。将两μl经过10倍稀释的PCRTM产物加入2.5μl 的去离子甲酰胺和0.5μl的ROX500标准中，并在92℃变性2分钟，然 后上样至应用生物系统373 DNA测序仪的6％聚丙烯酰胺凝胶中。凝胶 在1100伏特和恒定的30W下电泳5小时。然后激光扫描凝胶并利用内 部ROX 500标准分析。峰由基因分型仪(Genotyper，版本1.1)[应 用生物系统]基于碱基对长度的彩色片段进行识别。

PCRTM扩增色氨酸2，3二氧化酶的内含子6突变区。扩增靶序列的 PCRTM反应如下：10mM Tris HCL，pH 8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl2，0.05％Tween 20，0.05％NP-40，100μM的dATP，dCTP， dTTP，dGTP，0.1μM引物。引物是：#116 GACACTTCTGGAATT AGTGGAGG(SEQ ID NO：25)，以及#117 GAAGTTAAATCCATG TGGCTC (SEQ ID NO：26)。在20μL中加入下列物质：0.5U AmpliTAq(珀金 -埃尔默，Foster City，CA)，1μl(250ng)基因组DNA。反应在PE- 9600热循环仪(珀金-埃尔默)或PTC-100程序化热控仪(MJ Research，Inc.，Wastertown，MA)上进行，利用以下条件：94℃5 分钟，然后30个循环94℃30秒，60℃30秒，72℃1分钟，然后72℃5分 钟。为了检测是否发生了扩增，10μl的反应混合物在TBE缓冲液中 1.5％的琼脂糖凝胶上电泳。

每份10μl的上述反应产物用1.5单位的限制性内切酶bsl I和终 浓度为1×的缓冲液(由New England BioLabs，Beverly，MA提供) 酶切并在55℃中孵育过夜。10μl的酶切产物在100VV和1×的TBE中 4％metaphor琼脂糖(F.M.C.产品，Rockland，ME)中电泳1小时。凝 胶用溴化乙锭染色。可得到三种长度的片段。当多态性位点是G/G 时，DNA完全酶切为673bp和359bp的片段。当多态性位点是A/A时， 1032bp的片段没有被切开。G/A杂合体有三种片段，1032bp，673bp和 359bp。

紧接G-＞T突变3’的序列是GATA。GATC是DpnII限制性内切酶的识 别位点。如下设计3’23bp的寡聚物以配合紧接G-＞T突变3’的ATC序 列(寡引物有下划线和突变的两个g位点有双下划线) 5’TCATTAATCCTCTGGGTATTGTAAATGTGGATTTAGGTTAAT ATATTATATATAATGCCAAATAATGGCATAGATAAGGAATAGG GAGAAAAAGGGAATTA-3’(SEQ ID NO：27)

TAGTCTTATATCCCTCTTTTTCTTA(SEQ ID NO：28)

在第三位置的不配对很少损害它作为PCRTM引物的效力。

挑选5’的引物以提供29个碱基对的产物。当G-＞T突变是G时， GATC位点被切开产生22和70bp的片段。当G-＞T突变是A时，只出现 92bp的片段。PCRTM反应的条件如下：1μM各种引物，0.2mM的各种 dNTP，50mM KCl，10mM Tris HCL，1.5mM MgCl2，0.001％(w/v)的 明胶，2.5U/100μL AmpliTAq(R)DNA聚合酶，80ng基因组DNA。 PCRTM循环是94℃4分钟：30循环的94℃30秒、52℃90秒、72℃120 秒，然后72℃5分钟。DpnII酶切的条件是10μL的PCRTM产物，0.05μL 10U/μL的DpnII；1.5μL：1M NaCl，0.5M Bis HCL，0.1M MgCl2， 10mM二硫苏糖醇，pH 7.9：3.5μL H2O，37℃过夜。产物在4％的 Metaphor琼脂糖中电泳。

HTR1A重复多态性。用于检测该复杂多态性的方法已由Bolos等 人，1993描述。为了标记PCRTM产物，0.1μM的每种荧光标记引物用于 反应中。荧光染料是FAM amidite(应用生物系统，Foater City， CA)。两μl经10倍稀释的PCRTM产物加入到2.5μl的去离子甲酰胺和 0.5μl标记的ROX 500标准，92℃变性2分钟，上样至应用生物系统 373 DNA测序仪6％的聚丙烯酰胺凝胶中。凝胶在1100伏特和恒定30W 情况下电泳5小时，利用内部ROX 500标记的标准进行激光扫描和分 析。每一泳道都含有内部标准可以进行非常精确的长度确定。峰由基 因分型仪(1.1版本，应用生物系统)分析并通过碱基对长度确定大 小。如果计算机检测到两个相似高度的峰，矮峰总是置于a等位基因 列中，高峰置于h等位基因列中。如果计算机推断具有单个的峰，受 试者则是a等位基因纯合体。

HTR2A基因。利用由Williams等人，1996描述的单碱基对多态性 评估HTR2A。利用应用生物系统DNA测序仪的方法如上所述。

OB基因。含有人Ob基因的YAC重叠群中二核苷酸重复的出现已由 Green等人，1995描述：D7S1873、D7S1875、D7S514和D7S780。 D7S1875与OB基因最密切。Comings称其为OB1875。

大麻酯受体基因。DNA样品利用如Dawson 1995所述的下列引物扩 增，5’-GCTGCTTCTGTTAACCCTGC-3’(SEQ ID NO：29)和5’- TACATCTCCGTGTGATGTTCC-3’(SEQ ID NO：30)。这样鉴定了一种 (AAT)n三联体重复等位基因。用标准方法标记PCRTM产物并鉴定产物 多态性(见上述)。

GABRB3基因。DNA样品利用如Mutirangura等人，1992所述的下 列引物扩增。CA链：5’-CTCTTGTTCCTGTTGCTTTCAATACAC-3’(SEQ ID NO：31)和GT链：5’-CACTGTGCTAGTTTAGA TTCAGCTC-3’(SEQ ID NO：32)。它鉴定了长度在181-202bp之间变化的(CA)n重复的11个等 位基因。用标准方法标记PCRTM产物并鉴定产物多态性(见上述)

神经元氧化氮合成酶基因。氧化氮合成酶基因最近发现与小鼠攻 击行为有关(Nelson等人，1995)。利用Hall等人(1994)的方法。 发明者检查了神经氮合成酶基因(nNosla)的二核苷酸重复多态性的 相关性。利用应用生物系统DNA测序仪的方法如上所述。

COMT基因。对于COMT基因的分析，单碱基对多态性由Lachman等 人，1996描述。该多态性已表明与COMT活性的不同水平相关(见 Daniels等人，1995)。

载脂蛋白-D基因。提取DNA并用限制性内切酶TaqI酶切。在琼脂 糖凝胶电泳后，转移至尼龙膜上(Hybrid N，Amersham，UK)并利用 标准方法与32P-标记的APO-D探针杂交。两个等位基因，2.2和2.7kb 得以鉴定。

人第2染色体。已鉴定了微卫星多态性D2S1788，其定位于2p21 (离短壁的末端约74cM)(Comuzzie等人，1997)。从淋巴细胞制备 的DNA用于PCRTM，使用的荧光标记引物，其来自MapParis 6a Linkage Screening Set(Research Genetics)，含有隔开约20cM的 169高度多态性微卫星标志。

UCP-2基因。定位于人第11染色体和小鼠第7染色体的该基因已被 鉴定与肥胖和血胰岛素过多连锁。该基因的正向引物是5’- CATCTCCTGGGACGTAGC-3’(SEQ ID NO：33)以及反向引物是5’- AGAGAAGGGAAGGAGGGAAG-3’(SEQ ID NO：34)。人UCP2编码序列的 GenBank号是U76367。

                         实施例20

            MAA技术在遗传多态性中的实例

该实施例提出了许多非精神病障碍的多基因性状并说明MAA技术 能够推广到所有多基因障碍和所有多基因性状。下文讲授怎样利用 MAA技术研究不同多基因障碍够的一系列实例。 骨关节炎

第1步。鉴定要研究的多基因障碍或性状。全身化骨关节炎 (GOA)是关节疾病中最常见的。它是残废的主要原因并在发达国家 中列为头三种健康问题的一种。GOA在10％到15％超过45岁以及高达70％ 超过60岁的男性和女性中导致疼痛和功能丧失。GOA的病因学是复杂 的，包括环境和遗传因素。对女性双胞胎的研究估计，累加性基因引 起了54％的GOA(Kaprio等人，1996)。单发性GOA是作为多基因障碍 遗传的。

第2步。建立评估多基因障碍严重性的尺度。OA的严重性是利用 Kellgen评分在X射线的基础上鉴定的(Kellgen和Lawrence， 1957)。

第3步。鉴定要检验的候选基因。OA非常有可能是由于在软骨合 成和降解中起作用的阈数量变异基因的出现。该概念和部分潜在的候 选基因列在表70中。OA的候选基因基于他们在调节软骨合成和降解的 作用。

第4步。鉴定与每个基因相关的一个或多个多态性。下面是能够 用于OA的MAA技术的部分多态性列表。

                     表70 基因               染色体             多态性类型      参考文献 胶原蛋白基因 COL2A1             12q12              VNTR-1          Wu等人，1990 COL2A1             12q12              VNTR-2          Priestley等人，1990 COL2A1             12q12              Mae II RFLP     Loughlin等人，1995 COL9A1             6q12               DN-1            Warmen等人，1993 COL9A1             6q12               DN-2            Warmen等人，1993 聚集蛋白聚糖(硫酸软骨素蛋白聚糖I) AGC1               15q26              RFLP            Finkelstein等人，1989 胰岛素样生长因子和受体 IGF1               15q22              DN-1            Weber等人(Weber和May，1989) IGF1               15q22              DN-2            Polymeropoulos等人，1991 IGF1R              15q25              TN              Meloni等人，1992 IGF1R              15q25              插入            Poduslo等人，1991 IGF2               11p15              DN              Rainer等人，1993 IGF2R              6q25               TN              Ogawa等人，1993 转化生长因子β TGFB1              19q13.2            Leu-＞Pro RFLP  Cambien等人，1996 TGFB2              1q41               DN              Westson等人，1991 白介素1 IL1A               2q13               TN              Zulini和Hobbs，1990 IL1B               2q13               C-＞T RFLP      DiGiovine等人，1992 IL1R               2q12               DN              GDB IL1RN              2q14               VNTR            GDB 金属蛋白酶 MMP9               20p11.2            DN              St Jean等人，1995 MMP1的MMP组织抑制因子 TIMP1              Xp11.3             RFLP-1          Allred和Wright，1991 TIMP1              Xp11.3             RFLP-2          Allred和Wright，1991 维生素D3           12q                                Uitterman RFLP等，1997

VNTR＝可变串联重复。

DN  ＝二核苷酸重复。

TN  ＝三核苷酸重复。

RFLP＝限制性片段长度多态性。

第6步。建立虚拟多基因或PG变量。不同候选基因的评分相加得 到PG评分。

第7步。进行PG对QT或DV的单变量回归分析。应用任何统计程序 对具有第一个OA(oa)候选基因(cg)(PG+PG oacg1)评分的PG进 行单变量回归分析，然后加入第二个候选基因后进行(PG+oacg2)。 继续该过程直到“n”个OA候选基因加入(PG+oacgn)，n是加入的基 因数量。

第8步。对结果作图。然后如图4所示对ADHD评分的累加性或减性 基因那样对结果绘图。

第9步。只利用累加性基因重复该过程。只有累加性基因进行了 如图5所示对ADHD评分的累加性基因那样的作图。 胆固醇水平

第1步。鉴定要研究的多基因障碍或性状。多年的研究已表明在 血液胆固醇水平升高与冠状动脉疾病和中风之间的关联。由于遗传因 素和饮食对胆固醇水平起作用，鉴定涉及的基因可能对于鉴定风险个 体以及发展降低胆固醇水平的新药是重要的。

第2步。建立评价多基因障碍严重性的尺度。空腹样品的血液胆 固醇水平将提供最好的严重性尺度。

第3步。鉴定要检验的候选基因。许多直接参与胆固醇合成途径 的基因据推测在胆固醇代谢中起作用。为了说明MAA技术的能力，发 明者用它来评估胆固醇途径以外的数个基因的作用，以鉴定它们在胆 固醇水平调节中的可能作用。发明者鉴定了四个与胆固醇和脂蛋白代 谢相关的基因。它们是5-羟色胺转运蛋白(HTT)、催产素受体 (OXYR)、多巴胺DRD2受体(DRD2)和早衰素(presenilin)基因 (PS1)。

第4步。鉴定与每个基因相关的一个或多个多态性。各自的多态 性是HTT基因的启动子插入缺失(Collier等人，1996)，OXYR基因的 二核苷酸多态性(Machelini等人，1995)，DRD2基因的启动子插入/ 缺失多态性(Arinami等人，1997)，和PS1基因的RFLP(Higuchi等 人，1996)。

第5步。给基因型指定评分。基于受试者的分组研究，评分如 下：HTT基因-O＝SS，LL，2＝SL；OXYR基因278/278＝0，278/267＝1， 276/276＝2；DRD2 11＝0，12＝1，22＝2；以及PS1基因22＝0，12＝1， 11＝2。

第6步。建立虚拟多基因或PG变量。不同候选基因的评分相加得 到PG评分。

第7步。进行PG对QT或DV的单变量回归分析。应用任何统计方 程，对具有第一个胆固醇(c)候选基因(PG+ccg1)评分的PG进行单 变量回归分析，然后加入第二个候选基因(PG+ccg2)再进行。继续 该过程直到所有胆固醇候选基因加入(PG+ccgn)。

第8步。对结果作图。然后如图5所示对ADHD评分那样绘图。图8 说明MAA技术在评估这四个基因在胆固醇和脂蛋白代谢中作用的应 用。

第9步。只利用累加性基因重复该过程。只有累加性基因进行了 如图所示对ADHD评分那样的累加性基因作图。在该例中，所有四个基 因都是累加性的。 寿命

第1步。鉴定要研究的多基因障碍或性状。当人类存活的平均年 龄增加以及人群中超过65岁的个人数量增加时，衰老成了更有意义的 主题。鉴定能够预测个人生命长短的许多基因在鉴定具有早期死亡风 险的个人时具有价值。针对特定关键基因效应的治疗，在提高生命的 质量和延长生命方面能够有相当的益处。

第2步。建立评价多基因障碍严重性的尺度。自然的严重性尺度 是年龄。然而，在该例中，评分越高(更老的年龄)，基因型越好。

第3步。鉴定要检查的候选基因。虽然某些基因如超氧化物岐化 酶(一种自由基清除剂)已知参与衰老的动物模型以及胆固醇代谢， MAA技术具有鉴定许多以前未猜测到的对寿命起作用的新基因的潜 力。由于胆固醇水平与心血管疾病造成的死亡相关，发明者选择鉴定 对胆固醇水平起主要作用的两个基因。发明者也包括了APOE基因。

第4步。鉴定与每个基因相关的一个或多个多态性。这些基因以 以下的方式评分。候选基因的不同基因型频率通过不同年龄受试者组 间的卡方分析进行比较。如果特定的基因型频率在这些年龄组间累进 性增加，该基因型评分＝2。保持不变的基因型根据在不同年龄受试者 中的相对频率评分＝0或1。

第5步。给基因型指定评分。不同候选基因的评分相加得到PG评 分。每个基因逐渐加入到多基因评分中。

第6步。建立模拟多基因或PG变异。不同候选基因的评分相加得 到PG评分。

第7步。进行PG对QT或DV的单变量回归分析。应用任何统计程 序，对带有第一个寿命(1)候选基因(PG+lcg1)的PG进行单变量回 归分析，然后加入第二个候选基因(PG+lcg2)再进行。继续该过程 直到所有寿命候选基因加入(PG+lcgn)。

第8步。对结果作图。然后如图5所示对ADHD评分那样绘图。当对 基因相对寿命的数据作图时，MAA技术鉴定的三个基因与208个受试者 的研究相结合时，得到高度显著的结果p＝1.5×10-7。

第9步。只利用累加性基因重复该过程。只有累加性基因进行了 如图5所示对ADHD评分那样的累加性基因作图。

这些仅仅是MAA技术如何能够推广到任何多基因障碍或性状的三 个实例，利用任何与研究的障碍或性状相关的人类基因研究。当基因 组计划在下一个十年接近于结束时，预期将鉴定出人类每一个基因的 多态性，以便于对每一个多基因障碍或性状进行全面检查。发明者预 期，MAA技术也将应用于其它动物、植物的多基因性状，并且该技术 在另外的生物种类中的应用包括在本发明中。

                        实施例21

抗成瘾组合物的实例和在阿片剂硬核成瘾快速解毒疗法后对

                    TREXAN顺应性增强

前言。在过去的十年中，利用麻醉剂纳曲酮(Trexan， Dupont，Delaware)对美沙酮或海洛因成瘾解毒的快速新方法引起了 美国、加拿大以及世界范围内的许多国家的许多治疗中心的兴趣。硬 核阿片剂成瘾中退出率即使在今天还接近百分之90。该快速疗法的基 本概念是给病人提供纯的麻醉拮抗剂以阻断阿片剂诱导的欣快效应。 利用该方法，大部分病人不再遵从并且重犯率超过99％(S.Hall， San Antonio Methadone Clinic)。发明者的论点认为，不再遵从 的主要原因是由于当麻醉拮抗剂(Trexan)阻断了阿片剂或酒精诱 导的欣快时(O’Malley等人，1992；Volpicelli等人，1992)，药物 对嗜欲行为几乎没有效应。由于发明者发现氨基酸治疗减少了对许多 致欣快物的成瘾行为，他们决定检查是否TREXAN和氨基酸治疗相结 合会延长已使用致欣快物高达30年的硬核成瘾者对Trexan的顺应 性。

方法。本研究在San Antonio Methadone Clinic完成。进入本 研究的标准是，利用DSM III对海洛因/阿片剂依赖诊断为硬核成瘾男 性和女性病人。为进行预评估，每个病人首先注射0.4-0.8mg Narcan 并评估了和他们的脱瘾(如果太严重的话，他们就不能进入本研 究)。如果他们通过了第一项试验，然后口服剂量为12.5mg的Dupont ’s Trexan并在一或一个半小时后评估他们的脱瘾症状。如果病人通 过该试验，他们每天服用50mg的Trexan。在本研究中，总共评估 了12个病人。在该研究中，病人除了根据上述接受麻醉拮抗剂以外， 也每天接受下列的氨基酸：DL-苯丙氨酸(2,700mg)，L-色氨酸 (450mg)，L-酪氨酸(300mg)，L-谷胺酰胺(150mg)，铬(吡啶 甲酸盐-200mcg)，以及吡哆醛-5-磷酸(30mg)。计算没有复发的或 自我报告拒绝服用Trexan或与氨基酸联合剂的天数。经由电话或个 人接触每天评估每个病人(一定程度的接触失败)。

结果。在对持续服用Trexan的顺应性显著增强方面，结果是戏 剧性的。San Antonio Methadone Clinic计算的无氨基酸治疗，接 受该快速解毒疗法的数百个病人遵从的平均天数接近37天。令人吃惊 的是，本研究中的12个受试者接受了Trexan和氨基酸疗法没有复 发，或者报告采用联合疗法平均262天(p至少p＜0.05)。

结论。结果表明该抗成瘾制剂的加入显著减少了对阿片剂的嗜 欲，因此在协助那些硬核阿片剂成瘾者防止复发方面是重要的-尤其 是与麻醉拮抗剂Trexan联合使用。

                  实施例22

    D2多巴胺受体基因作为报偿缺陷综合征的决定因素

摘要。多巴胺能系统，尤其是多巴胺D2受体，与脑的报偿机理有 深刻的关联。D2多巴胺受体的机能障碍导致异常的物质追求行为(酒 精，药物，烟草和食物)以及其它相关行为(病理性赌博，Tourette 综合症，以及注意缺陷多动障碍)。发明者推测，D2多巴胺受体基因 的变异是“报偿缺陷综合症”重要的常见遗传决定因素。

发明者已经运用Bays(Rosner，1986)定理作为数学方法评估 DRD2基因A1等位基因在冲动-成瘾-强迫障碍中的预测值。

Bays’s定理在医学上广泛用于预测特定事件(缺陷)会导致另一 事件(疾病)的可能性，例如，拥有DRD2基因A1等位基因将引起异常 的药物和酒精寻求行为(表72)。

当评估筛选检验时，敏感性是检验在患所研究疾病的个人时阳性 的概率；特异性是检验不患该疾病的个人时阴性的概率。对于Bays’s 定理，发明者运用下列方程：

                         表71

     多巴胺D2受体基因变异和物质滥用/依赖的总结

                           ％流行率 物质滥用     等位基因       滥用者          对照       P值＜      参考文献 酒精中毒     DRD2A1       69              20         0.001      Blum等人，1990i 酒精中毒     DRD2A1       30              19         NS         Nakajima，1989i 酒精中毒     DRD2B1       17              13         NS         Blum等人，1993i (低严重性) 酒精中毒     DRD2C1       57              33         0.002      Suarez等人，1994i (低严重性) 严重酒精中毒 DRD2A1       47              17         0.001      Blum等人，1991i 严重酒精中毒 DRD2B1 严重酒精中毒 DRD2In6-Ex7     39              16         0.02       Zhang等人，1994i

         单倍型1 可卡因依赖   DRD2A1       51              18         0.0001     Noble等人，1993i 可卡因依赖   DRD2B1       39              13         0.01       Noble等人，1993i 多物质滥用   DRD2A1       44              28         0.25       Comings等人，1994i 多物质滥用   DRD2B1       33              20         0.001      Smith等人，1992i *C1等位基因表示只关于纯合体基因型。 酗酒者(47/82)；对照(29/87)：(X2＝9.8，df＝1，p＝0.002)

                         表72

       多巴胺D2受体基因作为强迫性疾病的预示变量 风险行为                            预测值(％) 酒精中毒(严重)                      14.3 可卡因依赖(严重)                    12.3 多物质滥用                          12.8 化学依赖                            28.3 过食(严重)                          18.6 摄食行为                            35.0 ADHD                                16.0 抽烟                                41.5 病理性赌博                           4.6 Tourette，综合症                     5.5 总体冲动-成瘾-强迫行为              74.4

支持数据的假设在Blum等人，1995中解释

为了计算特异性，发明者运用已经充分鉴定的对照，在某些样本 中筛选酒精、药物和烟草滥用(表71)。没有任何以前的研究对于对 照用严格排除标准(Blum等人，1995a)，由于酒精中毒并不是与 DRD2基因多态性真正相关的表型，这种努力是必需的(Blum等人， 1995b；Neiswagner等人，1995；Comings等人，1991)。此外，为 了计算基因分型的敏感性，发明者采用了先证者被确定有慢性或严重 疾病的研究数据(表72)。

检验的阳性预测值(PV+)是当检验用于含有健康以及疾病个体 的群体时，真正阳性的阳性结果百分率(Galen等人，1975)。Taq I A1基因型的PV+是0.744或74％；也就是说，阳性预测值是高的；但是 PV-只有0.548或54.8％。当与冲动-成瘾-强迫行为相关的个体从对照 组中排除时，发明者预计会有更好的阴性预测值。这些障碍病人的混 合数据表明了与DRD2基因变异的强阳性相关(Yates卡方 ＝63.38，df＝1，p＜10-7)。

                   实施例23

    注意缺陷多动障碍症状评测价量表(ADHD SAS)

背景：近期的文献(过去15年)表明注意缺陷障碍(ADD)和多动障碍 的诊断标准经常变化。在儿童精神病理学的研究中对ADD的本质仍有 争论(McGee等，1989)。

虽然父母、老师、少年、儿科医生、家庭医生、心理医生、学校 顾问等人了解并且已经在少年身上观察到注意缺陷障碍和多动障碍症 状，但在北美，我们在描述这些现象时感到困难。文献中很多研究表 明临床医生在决定多动和注意缺陷障碍作为诊断条件是否实际存在、 是否共存的诊断条件、还是独立的诊断实体时还有困难。

伴随多动的注意缺陷障碍(ADHD)和不伴随多动的注意缺陷障碍 (ADD)分布很广。在美国有三百万到四百万儿童患者以及为数众多的 成年患者。

ADHD患者承受着过重的负荷，也就是说他们对受到的刺激，尤其 是光、声音和触觉刺激有很高的反应性。他们对环境中正常的刺激反 应也很剧烈，以致于不能滤除环境的“噪音”干扰，集中精力于他们 面前的工作。他们对集中精力于一个问题或者一项任务有困难。由于 注意力不集中，他们会忘记约会、忘记付帐、错过期限，还经常因在 问题出现时不能注意到而遇到法律困难。经常匆匆忙忙，他们对固定 于一个目标或目的有困难。

患有ADHD的患者生活倾向于无组织，儿童患者的房间杂乱无章， 成年患者的桌子混乱无序，日常活动也是杂乱无序。无论在什么年 龄，他们对于制定计划都有困难，在按次序实行计划时遇到的麻烦更 大。由于不能集中注意力，ADHD患者在完成他们已经开始的工作时， 会遇到麻烦。他们不能完成任务，不能实现计划。阁楼和地下室中经 常堆着未完成的缝纫品、木工品、修理品及笔记本等物品；书桌上经 常散乱的放着未写完的信、提纲及项目计划。

ADHD患者的智力没有问题。许多患病的人还有很高的智力，但是 他们的成绩通常达不到智商所显示的程度，因为他们不能集中或持续 某一兴趣。随之而来的是家庭、朋友、老师和同事对他们失去耐心并 预期他们失败。

ADHD患者难以适应变化，他们的生活充满了混乱，即使在日常生 活中发生了很小的变化，他们也会感到心烦意乱。父母去旅游、学校 里来了新老师、家搬到了一个新的城市以及宠物死了，这些均会给 ADHD患者带来一场危机。

受ADHD折磨的病人生活在高度的压力之下，他们不能承受失败， 当遇到挫折时容易发怒。他们的愤怒通常突然发作，如摔门、尖叫及 大发脾气等。在儿童中常引起打架，在成人则为怒气冲冲、丢失工作 及与朋友疏远。之后，他们能表示道歉，但伤害已经造成了。

由于ADHD患者经常受到挫折，他们变得失去耐心，憎恨排队等候 和任何使他们发疯的耽搁。无论干什么——一次旅游、一场电影、一 节课、一次讨论——他们都希望进行得快些，尽快结束。

性急使得ADHD患者容易冲动，儿童会不考虑后果而盲目行事，成 人表现为开快车，使用电工工具不小心，插入正通着电的物体里而不 考虑后果，其结果是常使他们自己或其他人受伤。

ADHD患者的时间感和方位感比较差。他们不得不停下来思考哪个 是左手，哪个是右手；他们对依照指令行事、看地图及断定时间等事 感到有困难。

许多ADHD患者表现为多动。在儿童或婴儿表现为不停地运动、扭 动及翻转等，在成人表现为不安、容易厌烦，当被要求按安排行事时 表现为反抗，经常处于活动之中。

ADHD患者的另一个差异是他们的脑电波波形不同。他们的β波— —与注意力相关的脑电波——较低，而θ波——与松弛相关的脑电波 ——较高，该波形与瞌睡和白日梦有关。因而，ADHD患者难以承受与 β波有关的预见性及解决问题的活动，这并不奇怪。他们喜欢那种 容许他们处于θ波的状态，且外界刺激很小的活动(Lubar 等，1991)。

如果将这些症状连在一起来看，会浮现出这样一幅图：一个人承 受着过度的负荷，试图与一个太明亮、太嘈杂、太摩擦及变化太快的 世界相适应。

早期推测ADHD的起因主要集中在如下的方面：家庭里婚姻失调， 父母的养育不当，心理疾病及酗酒或药物滥用等。相关的行为包括品 行障碍及反社会的人格，后来这些行为被表明与遗传性的物质利用障 碍(SUD)相关。最近的研究已经开始表明这些行为障碍(ADHD)与 特异的基因异常有关。

ADHD的起因或其本质是什么？它是由神经递质失衡引起的强迫性 疾病，由遗传因素起始。它是在儿童时期就有表现，并延续到成年。 它的影响可以通过治疗和咨询缓解。这种疾病的生物学基础被许多研 究者所确定(Biederman等，1992)

用非常简单的话来说，直接的原因是ADHD患者承受着一个缺陷的 过滤系统，换句话来说，他们的大脑网络不能阻止无关的刺激。这些 人可以注意到每一种声音、每一个物体及每一次接触，并且他们都处 在无组织、不可忍受的混乱中。无关的刺激得到和工作或与其他人相 关的那些必要的刺激引起他们相同的注意。

在较深的层次上来说，ADHD是病人的脑细胞或神经元之间的联络 出现了问题，也许还包括携带神经间信息的神经递质。这些大脑信使 供应不足。如果抑制传入刺激的信使缺乏，太多的信号就可以通过并 产生混乱。

在更深的水平上看，问题出现在制定神经递质制造蓝图的基因 上。ADHD患者至少存在一个基因缺陷——DRD2基因，这使得神经元对 多巴胺的应答出现障碍，多巴胺是与高兴的情绪和调节注意力有关的 神经递质。其他的关于基因异常的研究提示其它的多巴胺能基因，如 DRD4受体基因、多巴胺β羟化酶基因和多巴胺转运蛋白基因，都可成 为ADHD的原因(Cook等1995；Waldman等，1996)

遗传学检测由于ADD和ADHD病因的遗传复杂性，发明者考虑通 过利用多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测(Multi-Plex DNA Based Reward Deficiency Gene Test)评估ADD和ADHD的存在，这种检测多 态性的遗传检测方法可呈现被检测人的DNA结构。多重DNA为基础的报 偿缺陷基因检测可提示是否存在多态性，如果存在，为哪一个基因， 它们是纯合体还是杂合体。因为ADHD损伤和症状的严重程度与上面提 及的等位基因有联系，所以多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测法能 够预测ADHD症状的严重性和一个人的行为。

多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测法是对专业治疗是非常有价 值的工具。虽然它的缺点在现在还无法纠正，但是在这里公开的作为 抗成瘾药物的化合物在临床上被证实对抑制由刺激(大脑多巴胺的产 量和多巴胺受体部位的活性水平)引起的渴望有效果；并且它们已经 显示出在如下方面有作用：增加一个人更快的集中注意力的能力，促 进焦点转换，增加“在工作”行为和增加注意力集中的范围。

虽然报偿缺陷综合症行为(ADHD是一种遗传基础的疾病，落入该 综合征的范围)的检查对RDS具有很高的可靠性和有效性，区别性诊 断是有挑战性的。多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测将给出非常确 证的资料和广泛的区别性诊断；然而发明人和北得克萨斯大学健康科 学中心DNA鉴定实验室及田纳西大学目前提出了一个完整的(相当快 速完成的)研究轮廓。该研究将是连锁研究，而不是关联研究。发明 人相信目前这个研究的结果将使发明人可以：作出确定的区别诊断， 减少ADHD诊断的假阳性(用目前的心理测试和精神检查技术诊断时都 有许多假阳性)，提高真阳性率。减少患者和家属的抗拒，减少误诊 (错误地对ADHD的焦虑等)并因此改变错误地开出利他林的状况，改 进治疗方案及正确的区别诊断ADD和ADHD。

多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测试剂盒已做出，用来检测多 巴胺能遗传学缺陷。这种检测有99.9％的正确率并且是非侵入性的， 需要利用一个口腔拭子，作这项检测不需要特殊的训练，不需要采血 (其他DNA检测需要)。拭子用邮递或急差送到指定的DNA实验室检 测。针对这项特殊的DNA检测，发明人与北得克萨斯大学健康科学中 心DNA鉴定实验室有排他性合同，结果在72或96小时之内可以得到 (如果需要“状态”的评估还需要24到48小时)。

在美国精神病学协会出版的第二版《精神疾病诊断和统计手册》 (Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders) (DSM-II)(1968)中，诊断的目录是“儿童的多动反应”，在1980 年出版的该书的第三版中，这部分被分成二部分，拌有多动的注意缺 陷障碍(ADD-H)和不拌有多动的注意缺陷障碍(ADD)。

第三版《精神疾病诊断和统计手册》的修订本1989年出版，在这 个版本中，美国精神病学协会又将这两部分目录合并，诊断目录为 “注意缺陷——多动障碍”(ADHD)。

在1994年出版的第四版《精神疾病诊断和统计手册》中，列出了 三个诊断程式：“注意缺陷/多动障碍合并型”；“注意缺陷/多动障 碍无注意力优势型”；“注意缺陷/多动障碍多动-冲动优势型”。

第三版的“拌有多动的注意缺陷障碍”和第三版修订本的“注意 缺陷多动障碍”之间在“拟合优度”上有重大的区别。《精神疾病诊 断和统计手册》的不同的版本或修订本中诊断标准不断变化，在各个 诊断标准中缺乏显著的一致性，这似乎表明了在任何版本或修订本中 构成诊断标准的评估指标的适用性是有限的。这点在其他的诊断手段 中也同样，例如“儿童诊断会面程序”(Costello等，1983)和“儿 童和青少年诊断会面”(Herjanic和Campbell，1997)，是以第三版 《精神疾病诊断和统计手册》为基础的，在新的诊断体系中对主体的 选择考虑的不够充分(Newcorn等，1989)。

注意缺陷障碍是被最广泛地诊断的儿童疾病。在表面上看，这种 情况的诊断描述经历了这么多的变化是比较奇怪的，然而这种疾病的 症状不是在所有时间或环境下都出现的(Brown，1986)。仅有百分之二 十的ADHD少年患者在儿科检查时出现症状(Sleator和 Karowe，1969)。许多儿童由于被咨询的心理医生报告为多动，在检测 环境中接受心理评估时变得安静并且合作(Tobissen和 Karowe，1969)。如果有一个注意或认知相关性的独特模式，其可以 将ADD同其他疾病区分开，那么ADD状态作为一种疾病将被进一步确证 (McGee等，1989)。

由于表现的症状的可变性，ADHD SAS最初是针对父母、老师及其 他熟悉儿童行为举止的人的回答来设计的。因而这些与儿童接触最紧 密最频繁的人是处在一个最佳的位置来评估和报告儿童的行为举止 的。文献的报道显示老师对儿童和少年的等级评定同临床评定、神经 生理学评估及课堂的直接观察资料高度相关。

ADHD SAS是为了提供一个快速的ADHD症状水平的评估而发展起 来的，并在一个儿童身上经一段时间的验证。这个评价量表不是用来 诊断儿童高度兴奋或运动过多的决定性的诊断工具。作出一个准确 的、明确的ADHD的诊断，包括程度、表现和界限，需要有几个职业领 域的医生参加的深层次的会诊，包括发育儿科学、儿科神经学、临床 心理学、神经心理学、语言、特殊教育及职业治疗等领域。这个量表 也不是用来替代深层次的诊断检查的，这种诊断检查需要有上述各领 域的职业医生的共同努力。所以这个量表不是心理、神经、精神、神 经心理和儿科学等的评价。

许多经常参与儿童和青少年工作的专业人员需要一个可快速执 行、评分及解释的标准，它可以表明ADHD的存在及其水平。由于有已 经报道的发病率数据，这种需要的一部分是显然的。这种病情的发病 率从不到所有学龄儿童的百分之一到百分之二十(August和 Garfinkel，1989)。按《精神疾病诊断和统计手册》第四版，ADHD的 流行估计约占学龄儿童的3％到5％，青少年和成人的资料有限。

在许多情况中，父母和老师注意到了ADHD的特征性的行为举止， 这被解释为懒惰、固执、缺乏兴趣、发怒及不成熟等。有时侯老师 们、咨询医生、主要保健医生和其他卫生和教育领域的人员，解释 ADHD儿童的行为时，认为是一种不守纪律或是源于部分父母的纪律性 差的表现。由于ADHD儿童并不是持续一致的表现症状，所以父母描述 的症状被解释为源自有过度父母责任心的父母，而不是孩子的功能障 碍(因为在医生的办公室里儿童表现得很安静，行为也很得当)。当 父母或老师按这些假设或解释行事时，他们恶化了儿童对潜在问题的 反应。ADHD SAS的一个重要价值是它的方便经济的实用性，使顾问、 老师、家庭医生、儿科医生、神经科医生及其他的职业医生，快速容 易地决定儿童注意缺陷和/或多动的水平。因而，职业医生能够确认 或拒绝父母或其他人作出的与儿童行为有关的假设或解释。

ADHD SAS是一个包括43个项目的量表，它可以被老师或父母回 答，在15分钟内评分、分析及解释。这个量表是一个客观的评分工 具，它让父母或其他熟悉儿童行为的人回答儿童行为、态度或情绪的 表现及频率。这个量表要求在一个四点Likert量表上客观地回答问 题。在量表上的选择范围是从“没有或很少的时间”到“大部分或全 部的时间”。

ADHD SAS是一个高效低花费的筛查设计，它容易执行和评分， 在专业人员的监督下，可以被经训练的技术人员和辅助专业人员利 用。然而ADHD SAS不能取代对儿童的完整的熟练的临床评价，因为 这个评价设计的格式是父母报告的形式，它尤其容易受有意识的或无 意识的曲解。因为这个原因及将在下面详细叙述的其他特殊的限制， ADHD SAS应当仅仅被用作注意力缺乏多运症状的提示，它不应该单 独地用来指导制定治疗方案或治疗路线。这个筛查设计是作为临床熟 练判断的补充，而不是替代它们。

拌有多动的注意缺陷障碍和不拌有多动的注意缺陷障碍患者的核 心注意缺陷可能有差异(Lahey，等，1985)。在综合地谈及注意力集 中时间、易忘性、按规定行事的困难及不成熟等方面时，老师们认为 同对照组相比二者显示了同样的注意力缺乏。然而，在他们的研究 中，比较不拌有多动的注意缺陷障碍和对照组，ADHD被描述为不负 责的、不专心的、冲动的、不想就回答问题的及不整洁的。考虑到他 们的发现(DeLamater和Lahey，1983；Cahey 1994)，可以描绘出一 副有注意力问题的两组不同的儿童群体的图画。

ADHD SAS的构成适于评价ADHD的优势类型(August和 Garfinkel，1989)，还可评价ADHD疾病症状的总体水平。ADHD SAS 的结果反映出总体注意力缺乏-多动症状(ADHD，联合型)、注意缺 陷症状及多动症状的存在和程度。

当该量表检测出ADHD症状时，结果也可提示这些症状的程度如 何，是很轻、轻度、中度、严重还是极严重。

ADHD SAS用于让父母来描述4岁以上的儿童和青少年的行为。这 个量表设计用于内科医生的办公室内、心理治疗医生与父母的会见或 者是父母-老师-顾问的会议等场所。很多环境中这种筛查方法都有价 值。

然而，在父母不合作、怀有敌意、不能沟通、易曲解或者是他或 她的思想太混乱以至于回答不能正确反映父母的感受时，ADHD SAS 不能应用。另外，由于缺乏四年级阅读水平而语言表达能力较低的 人、将英语作为第二语言且水平有限的人、神经心理受损的人、中度 到高度精神迟钝的人，对完成量表有困难。

ADHD SYS可以被经训练的辅助专业人员和技术员容易地执行和评 分。然而ADHD SYS应用和解释的最终责任应由具有高级临床经验和技 术的人承担。在执行ADHD SAS之前，使用者应当全面熟悉了解量表 的理论原理、构造的方法、心理测试学的特点以及在这本手册中详细 说明的特殊限制。另外使用者还应当准备做出关于在某种环境中的量 表结果有效性的临床判断，在这种环境中，它的使用需要补充检测材 料，包括关于儿童的医疗状态、在学校的行为及和同学的相处时的行 为信息。

为了帮助确保适当的使用，ADHD SAS使用者还应熟悉并遵守由美 国精神病学协会规定(1994)的检测的使用标准，或者复习检测和评估 领域的基础教科书。缺乏关于注意缺陷多动障碍年轻人的评价和病例 处置的临床训练的人，在使用这个量表之前，应当阅读在这个领域中 的相关文献。有几篇相当好的关于注意缺陷多动障碍的文章(例如， Rourke，1985；Rourke，1989；Rourke等，1983；Rourke等，1986)。

无论在临床还是研究中应用ADHD SAS都应当遵守美国心理协会 提出的职业和道德准则(1981)。同集中于儿童的任何评价程序一 样，ADHD SAS在没有得到儿童的父母之一同意之前不能使用。另 外，使用者还应注意保证结果的真实性和将它们的使用限定于专业人 员“需要知道的”。就量表结果同儿童或其家长交流时应当集中于注 意缺陷多动障碍的性质方面的内容，而不应集中于或报告就特殊项目 回答的分析。任何时候解释量表的结果时都应帮助父母理解并详细叙 述结果，还要考虑到个人对注意缺陷多动障碍的认识和他或她当前的 情绪状况。

鉴定注意缺陷多动障碍是一项复杂的任务，需要临床的敏感性和 完整的关于神经心理学和学习无能的临床和研究的知识。ADHD SAS 不能独立应用，其他的诊断方法，例如儿科学评价、儿科神经学评 价、电子脑造影术评价、计算机辅助的E.E.G.或者脑电活动图、神经 心理学评价、语言评价、精神病学评价等，应该用来补充、确证和研 究检测结果。ADHD SAS还有许多特殊的限制，在解释检测结果时应 当记住这些。首先，这个量表的目的没有被特别掩盖，因而，在个人 完成量表时，评分会遭到有意或无意的曲解。第二，量表评估的是父 母报告的她或他的孩子在某一时间点行为的评估。

注意缺陷-多动障碍的症状不是持续地出现，也不是在所有的环 境中均出现，因而ADHD SYS可能不能准确地预测ADHD症状水平的短暂 变化(Brown，1986)。

ADHD SAS的施行施行ADHD SAS所需要的全部物品是一只钢笔 或铅笔以及量表单。量表单由儿童的父亲或母亲或由二人共同填写， 它要求确定的信息，包括选择的社会人口统计学的因素。在这个单子 的前面和后面包含有43个检测项目，并附有回答这些项目的说明和填 写答案的地方。

在确定人口统计学的信息完全填入ADHD SAS量表单的上部之后， 检测者应当做如下的说明：这里有一些陈述，它可以帮助我更好地了 解你的孩子的行为举止。我想让你读一读每一项陈述，指出每一项陈 述的时间总量哪一个是真实的，并用“X”符号在适当的栏目中标出 来。例如，想一想这个问题，  “是手脚乱动坐立不安吗？”，你的孩 子适合哪一项，是“没有或很少的时间”、“有些时间”、“相当长 的一段时间”，还是“大部分时间”？

当检测者大声做这些说明时，还应指出这个项目和四个回答栏目 中的每一项。在孩子的父母回答完之后，检测者在适当的空格处标出 “X”并说：“现在请你完成剩下的项目，如果有问题，一定要让我 知道。”

有时做测试的人可能不理解一个词或一个概念。如果父母对理解 某个特殊的项目有困难，检测者应当尽可能的作出中立的解释。例 如，如果父母不理解“是手脚乱动坐立不安吗”这句话中的“坐立不 安”这个词，检测者应当说：“这一项是在问你认为你的孩子有多长 时间难以保持手脚安静。”

同完成量表的人发展和维持感情和谐是非常重要的。从心理学的 观点来看，建立足够的和谐关系对减少回答故意曲解的总量是必要 的，尤其拒绝困难时。回答者所做的任何评论都可能对评估填写量表 时的态度都有帮助，无论它是否对他或她孩子行动解释的有用陈述。

ADHD SAS的评分ADHD SAS需要评分和解释的仅仅是量表单。 给ADHD SAS评分首先要注意在ADHD SAS量表单中每个项目均有项目 号，并附有指示是检测注意缺陷还是多动的代码。例如，H01是检测 多动的第一项；D04是检测注意缺陷的第四项；还有大约20％的项目的 代码前标有“*”号。这些项目的评分模式是平衡的，目的是防止回 答者进入一种评分模式。除带有“*”的项目之外，所有的项目按如 下的方式评分：“没有或很少的时间”得1分，“有些时间”得2分， “相当长的时间”得3分，“大部分或全部的时间”得4分。那些带有 “*”的项目得分与之相反，即“没有或很少的时间”得4分，“有些 时间”得3分，“相当长的时间”得2分，“大部分或全部的时间”得 1分。下一步将代码为“D”的项目的得分相加，决定注意缺陷障碍的 分量表的总分，然后将这些原始得分填入“注意缺陷障碍量表原始总 分”后的空白处。

将代码为“H”的项目的得分相加，决定多动障碍分量表的总 分，然后将这些原始得分填入“多动障碍量表原始总分”后的空白 处。在简表ADHD症状水平下标绘你记录的得分。标绘原始数据后， 可以自动将原始得分转换为转换得分，使你能够直接看到注意缺陷障 碍、多动障碍和注意缺陷多动障碍的水平。在评论和建议部分可以记 录下你对特殊患者或家庭的印象或对其行动的指导。

ADHD SAS的原理和理论基础已经出版的或现有的注意缺陷评估 量表仅仅引用由美国精神病学协会出版的最新版本《精神疾病诊断和 统计手册》上的诊断标准。然而，这种方法适用性有限，因为它是有 时间限制的。应当注意的是不但随着时间的过去最初症状的解释发生 了显著的变化，而且这里实际上有问题：这种障碍是否存在？如果存 在，是仅仅作为注意缺陷存在吗？或者有时注意缺陷与多动相联系 吗？上面的文献回顾中应该注意的是目前理解状况是不断变化的。发 明人相信这个表的有效性，并且相信这种障碍是普遍的、广泛分布的 及有点流行的青少年的状况。这里有一个首选的诊断ADHD的方法。

在过去的30年中已经就注意缺陷-多动障碍的各种症状及其重要 性作了相当多的讨论。有些人将他对注意缺陷-多动障碍的诊断和理 解同美国精神病学协会出版的《精神疾病诊断和统计手册》联系起 来，由于概念的不断变化，他们多少有点容易受到影响，在检测的构 造程序中更是这样。按照(Newcorn等，1989)，为适应《精神疾病 诊断和统计手册》的任何版本或修订本的诊断标准而构成的测评量表 的适用性是有限的。关于以最新版本的《精神疾病诊断和统计手册》 的诊断标准为基础的测评设计，(Newcorn等，1989)强调“构建的 诊断工具，例如‘对儿童的诊断会面程序’(DIDC) (Costello，1983)和‘对儿童和青少年的诊断会面’(DICA) (Herjanic和Campbell，1977)，是以第三版《精神疾病诊断和统计手 册》的标准为基础的，不能在新的诊断系统中充分考虑到主体的选 择。”

ADHD SAS的项目选择和有效性考虑ADHD SAS的项目是从过去 二十年间专业文献叙述的原理中得来的。回顾专业文献之后，所有的 被支持和赞同的原理和理论结构-它们解释或描述注意缺陷或多动的 基础-被转换成行为陈述。例如，注意力分散是一个被广泛提及的主 要的因素，因而就有关于注意力分散的项目有，如“是否容易分 心”、“完成已开始的工作”。

ADHD SAS的标准化  确定ADHD SAS量表同其它量表的相关性， 或者用老师的、或心理学家的、或内科医生的、或父母的判断作为一 个可比较的标准，这些传统的标准化方法似乎没有必要。发明人没有 找到好的检测标准用来检测ADHD SAS的有效性。量表构建的方法是 建立在评分的有效性上，因为这个评分衡量在过去二十多年中的专业 文献中所提出结构的操作定义。

ADHD SAS是用来检测已经用于定义注意力障碍的构成因素。评分 是用来检测被个体证明的症状学总量与被量表的上限证明的总量之间 的关系。

按照下面的尺度评价个体。如果一个人不足该量表检测的注意缺 陷症状总量的40％，那么就被解释为“未表明有注意缺陷障碍的症 状”；如果其值在41％到51％之间，那么就解释为“表明有极轻微的注 意缺陷症状”；如果其值在52％到64％之间，那么就解释为“表明有轻 度的注意缺陷症状”如果其值在65％到77％之间，那么就被解释为“表 明有中度注意缺陷症状”；如果其值在78％到90％之间，那么就被解释 为“表明有重度注意缺陷症状”；如果其值在91％到100％之间，那么 就被解释为“表明有极重度注意缺陷症状”。

还可以按照下面的尺度评价个体。如果一个人不足该量表检测的 多动障碍症状总量的40％，那么就解释为“未表明有多动障碍症 状”；如果其值在41％到51％之间，那么就解释为“表明有极轻微的 多动障碍症状”；如果其值在52％到64％之间，那么就解释为“表明有 轻度的多动障碍症状”如果其值在65％到77％之间，那么就被解释为 “表明有中度多动障碍症状”；如果其值在78％到90％之间，那么就被 解释为“表明有重度多动障碍症状”；如果其值在91％到100％之间， 那么就被解释为“表明有极重度多动障碍症状”。

最终按如下的尺度评价个体。如果一个人不足该量表检测的注意 缺陷—多动障碍症状总量的40％，那么就解释为“未表明有注意缺陷 —多动障碍症状”；如果其值在41％到51％之间，那么就解释为“表明 有极轻微的注意缺陷—多动障碍症状”；如果其值在52％到64％之间， 那么就解释为“表明有轻度的注意缺陷—多动障碍症状”如果其值在 65％到77％之间，那么就被解释为“表明有中度注意缺陷—多动障碍症 状”；如果其值在78％到90％之间，那么就被解释为“表明有重度注意 缺陷—多动障碍症状”；如果其值在91％到100％之间，那么就被解释 为“表明有极重度注意缺陷—多动障碍的症状”。

注意缺陷—多动障碍症状测评量表的解释和临床应用

ADHD SAS结果的解释

病例研究     AD.HD症状测评量表    John G.Cull.Ph.D.和Kenneth Blum.Ph.D. 儿童姓名：                                                            性别：                        年龄：           年级： 父母姓名：                                                            学校 地址：                                                                电话 完成量表回答者的姓名： 请在右侧的一列中划对号(√)以表明你表现或被认为表 现每种行为的程度 无或很少的 时间 一段时间 大量的时间 大部或全部 时间 1.坐立不安，手脚乱动                       H01 2.易分心                                   D01 3.坐着时扭动                               H02 4.完成已开始的事                           *D02 5.持续的坐着有困难                         H03             ADHD症状测评量表(续) 无或很少的 时间 一段时间 大量的时间 大部或全部 时间  6.按指令做事有困难                        D03  7.在游戏中等轮流有困难                    H04  8.在接着另一个活动前完成一个活动          *D04  9.排队等候有困难                          H05  10.在问题问完之前抢着回答                 H06  11.安静的玩有困难                         H07  12.容易适应新情况                         *D05  13.似乎不能阻止过多的谈话                 H08  14.打扰或打断其他人(谈话中插嘴，插手别人的游戏)                                            H09  15.看起来不像听或看来没有听进所说的       D06  16.记录重要的事(书、铅笔、家庭杂务、学校的委派等)                                            *D07  17.没想好就行动                           H10               ADHD症状测评量表(续) 无或很少的 时间 一段时间 大量的时间 大部或全部 时间 18.完成家庭杂务或委派时需要直接监督           D08  19.逃避阅读(包括学校要求的和娱乐阅读)        D09  20.仅仅因困难感到挫折                        *D10  21.极易兴奋                                  H11  22.混淆细节                                  D11  23.说不适当的话                              H12  24.在家中和学校里安排得非常好                *D12  25.不能按时间表行事                          D13  26.逃避写作                                  D14  27.痛苦且缓慢地做事和工作(不是由于智力低下)  D15  28.反复问或需要反复的指导或建议              D16  29.不听话                                    D17  30.安静地坐着活动                            *H13  31.是否(或曾经)毁坏玩具等                    H14  32.睡觉时过多的动作                          H15               ADHD症状测评量表(续) 无或很少的 时间 一段时间 大量的时间 大部或全部 时间  33.过多地跑或爬到一些物体上                  H16  34.情绪变化迅速剧烈                          D18  35.制造不适当的躁音或评论                    H17  36.变得极易怒                                H18  37.对适应新情况有困难                        D19  38.你喜欢的2项活动同时进行时，行为举止很得当*H19  39.在吵闹、忙碌的场所不能很好的调节，倾向于“疯 狂”                                                                                             H20  40.非常努力，但工作仍然粗心                  H21  41.没有安静平和的环境，不能集中注意力        D20  42.没有井然有序的环境，不能集中精力          D21  43.由于太活跃，不能和保姆留在家里            H22 44．当访问朋友或亲属时，(曾经)太活跃，以致于不能安 静                                           H23                                        请不要在下面的空中填写 注意力缺乏障碍量表原始得分总计：________________________________     多动障碍量表原始得分总计：___________________________ ADHD症状测量袁原始得分总计：______________________________                                   ADHD症状测评量表廓图                                    ADHD症状水平    最轻    轻度    中度    重度    极度 注意力缺陷 30++++++38 39++++++50 51++++++65 66++++++76 77++++++84 多动障碍 34++++++42 43++++++56 57++++++71 72++++++83 84++++++92 总体ADHD症状 63++++++80 81++++++106 107++++++136 137++++++159 160++++++176     评论和建议                                                   自评量表                                             请在服用POLYTROL前填写 姓名：                                                            年龄：      DOB：    性别： 地址：                                                            电话：      传真                                                                   电子邮件：  日期： 身体特征：    身高：    体重：      血压：    /    静息心率 婚姻状况：    已婚＿＿，离异＿＿，  寡居＿＿，分居＿＿，指出多久了： 教育(填最高水平)：高中学历＿＿，学院＿＿，商业或技术学校＿＿，大学学位＿＿，研究生学位＿＿， 博士学位＿＿               在下面的表格中，请在所有适合的描述中做出记号             表格从“1”(表示没有或不适用)到“5”(表示问题相当严重)                             现在适合或已经适合你的行为 现在适合或已经适合于你的家庭成员的行为      1     2    3    4    5                            1     2     3     4     5 酗酒＿＿ ＿＿ ＿＿ ＿＿ ＿＿ 酗酒                       ＿＿  ＿＿  ＿＿  ＿＿  ＿＿ 克赖克/可卡因成瘾     ＿  ＿  ＿  ＿  ＿       克赖克/可卡因成瘾             ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 碳水化合物暴食        ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 碳水化合物暴食                ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 尼古丁应用或滥用      ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 尼古丁应用或滥用              ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 多动                  ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 多动                          ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 性活动过多            ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 性活动过多                    ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 病理性暴力            ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 病理性暴力                    ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 病理性赌博            ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 病理性赌博                    ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ Tourette障碍          ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ Tourette障碍                  ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 孤独症                ＿  ＿  ＿  ＿  ＿ 孤独症                        ＿  ＿  ＿  ＿  ＿    我选择买这个产品因为我的： 酗酒或饮酒问题＿＿，克赖克/可卡因成瘾＿＿，碳水化合物暴食＿＿，吸烟历史＿＿，多动＿＿， 高度精神压力＿＿，性活动过多＿＿，病理性暴力＿＿，病理性赌博＿＿，Tourette障碍＿＿ 仔细阅读每一项，然后在适合你的空中做出标记 从来不 较少的时 间 一些时间 相当长 的时间 几乎全部 时间 我渴望一种物质或活动或行为 我用象食物、酒等物来改变我的情绪或放松 为调节压力和问题，我假装没有什么问题；我无视问题 我滥用咖啡、阿斯匹林、药物等来试图使我更好地对付(一 些事) 我有一种明智的态度，我抱怨和批评 情绪 远低于平 均 低于平均   平均 高于平 均 远高于平 均 我处理事物的技巧 我的恢复能力(从压力和麻烦中摆脱的能力) 我控制其他人或形势的渴望或需求 我的自发性(没有被“监视”或防守时行动的能力) 我做事平稳和沉着的能力 我在压力和紧急状态时沉着行动的能力 我在压力或紧急状态下对其他人的耐心能力 我对周围的噪音和混乱的忍受力 我对周围闪耀的光和混乱状态的忍受力 我情绪感觉不好的次数 我在所有类型的环境中均能集中精力的能力 生理 远低于平 均 低于平均   平均 高于平 均 远高于平 均 我入睡的能力 我整个晚上都在睡觉的能力 我睡得好和沉的能力 我做愉快的梦的次数 我记住我所做梦的能力 我觉醒时清醒和精力充沛的次数 我一整天的精力水平 在一天结束时我的精力水平 我的性能力 我的性欲 我不可控制地发怒的水平 我平静放松的水平 我的冲动性 我头疼的次数 我肌肉痛、疼痛、痛苦、关节发软的次数 我疼痛的总背景水平 我食欲的稳定性(天天有大约相同的食欲) 我神经性胃痛的次数 我出事故的倾向 我感觉身体不适的量 精神 远低于平 均 低于平均   平均 高于平 均 远高于平 均 我空虚的感觉 我失去了生活的意义的感觉 我怀疑我自已和我所做的事的意义的感觉 我感觉我象个殉难者(感觉像个牲品)的次数 我发现我自已希望或寻找一个有“魔力”的解决(方法)的 次数 我对其他人有点“生硬”和无情的次数 我失去方向的感觉 需要证明我自己 我玩世不恭(厌烦、悲观、怀疑) 我冷漠(冷淡、缺乏关心) 记忆 远低于平 均 低于平均   平均 高于平 均 远高于平 均 我的短期记忆 我迅速回忆(回忆起一个单词、一个姓名、事件、日期等的 能力) 我集中精力和学习的能力 我记住我所读到或听到的事的能力 我轻松学习的能力 我对看书的兴趣 我对研究我们的作业或工作的兴趣                                                R.D.S.                                                评分表                                John G.Cull，Ph.D.和Kenneth Blum，Ph.D.                                             (成年人表格) 姓名： 出生日期： 地址： 性别： 婚姻状况：    已婚＿＿，离异＿＿，寡居＿＿，分居＿＿，指出多长时间了： 教育(填最高水平)：高中学历＿＿，学院＿＿，商业或技术学校＿＿，大学学位＿＿，研究生学位＿＿，                          请指出适合你和你的家庭成员的所有的描述                                 在表示强度的数字上画圈    “1”＝没有不适合，“2”＝轻微强度，“3”＝中等强度，“4”＝严重强度，“5”＝极强       现在或已经适合于你的行为         现在或已经适合于你母亲的行为 饮酒或酗酒              1  2  3  4  5 饮酒或酗酒              1   2   3   4   5 孤独癖                  1  2  3  4  5 孤独癖                  1   2   3   4   5 碳水化合物暴食          1  2  3  4  5 碳水化合物暴食          1   2   3   4   5 被控有攻击性的犯罪行为  1  2  3  4  5 被控有攻击性的犯罪行为  1   2   3   4   5 长期下背部痛            1  2  3  4  5 长期下背部痛            1   2   3   4   5 应用或滥用可卡因        1  2  3  4  5 应用或滥用可卡因        1   2   3   4   5 因攻击性的犯罪行为被定罪1  2  3  4  5 因攻击性的犯罪行为被定罪1   2   3   4   5 家庭暴力的煽动者        1  2  3  4  5 家庭暴力的煽动者        1   2   3   4   5 家庭暴力的受害者        1  2  3  4  5 家庭暴力的受害者        1   2   3   4   5 多动                    1  2  3  4  5 多动                    1   2   3   4   5 精神上受虐待            1  2  3  4  5 精神上受虐待            1   2   3   4   5 应用或滥用尼古丁        1  2  3  4  5 应用或滥用尼古丁        1   2   3   4   5 病理性赌博              1  2  3  4  5 病理性赌博              1   2   3   4   5 病理性暴力    1  2  3  4  5 病理性暴力    1  2  3  4  5 身体上受虐待  1  2  3  4  5 身体上受虐待  1  2  3  4  5 创伤后应激    1  2  3  4  5 创伤后应激    1  2  3  4  5 月经前综合症  1  2  3  4  5 月经前综合症  1  2  3  4  5 性活动过多    1  2  3  4  5 性活动过多    1  2  3  4  5 性受虐        1  2  3  4  5 性受虐        1  2  3  4  5 Tourette障碍  1  2  3  4  5 Tourette障碍  1  2  3  4  5     适用或已经适用于你父亲的行为       适用或已经适用于同胞的行为 饮酒或酗酒              1  2  3  4  5 饮酒或酗酒              1  2  3  4  5 孤独癖                  1  2  3  4  5 孤独癖                  1  2  3  4  5 碳水化合物暴食          1  2  3  4  5 碳水化合物暴食          1  2  3  4  5 被控有攻击性的犯罪行为  1  2  3  4  5 被控有攻击性的犯罪行为  1  2  3  4  5 长期下背部痛            1  2  3  4  5 长期下背部痛            1  2  3  4  5 应用或滥用可卡因        1  2  3  4  5 应用或滥用可卡因        1  2  3  4  5 因攻击性的犯罪行为被定罪1  2  3  4  5 因攻击性的犯罪行为被定罪1  2  3  4  5 家庭暴力的煽动者    1   2   3   4   5 家庭暴力的煽动者     1  2  3  4  5 家庭暴力的受害者    1   2   3   4   5 家庭暴力的受害者     1  2  3  4  5 多动                1   2   3   4   5 多动                 1  2  3  4  5 精神上受虐待        1   2   3   4   5 精神上受虐待         1  2  3  4  5 应用或滥用尼古丁    1   2   3   4   5 应用或滥用尼古丁     1  2  3  4  5 病理性赌博          1   2   3   4   5 病理性赌博           1  2  3  4  5 病理性暴力          1   2   3   4   5 病理性暴力           1  2  3  4  5 身体上受虐待        1   2   3   4   5 身体上受虐待         1  2  3  4  5 创伤后应激          1   2   3   4   5 创伤后应激           1  2  3  4  5 月经前综合症        1   2   3   4   5 月经前综合症         1  2  3  4  5 性活动过多          1   2   3   4   5 性活动过多           1  2  3  4  5 性受虐              1   2   3   4   5 性受虐               1  2  3  4  5 性施虐者            1   2   3   4   5 性施虐者             1  2  3  4  5 Tourette障碍        1   2   3   4   5 Tourette障碍         1  2  3  4  5 我渴望一种物质或活动或行为 我用象食物、酒等物来改变我的情绪或放松 为调节压力和问题，我假装没有什么问题； 我滥用咖啡、阿斯匹林、药物等来试图使我更好地对付 (一些事) 我有一种明智的态度，我抱怨和批评 情绪 远低于平 均 低于平均   平均 高于平 均 远高于平 均 我处理事物的技巧 我的恢复能力(从压力和麻烦中摆脱的能力) 我控制其他人或形势的渴望或需求 我的自发性(没有被“监视”或防守时行动的能力) 我做事平稳和沉着的能力 我在压力和紧急状态时沉着行动的能力 我在压力或紧急状态下对其他人的耐心能力 我对周围的噪音和混乱的忍受力 我对周围闪耀的光和混乱状态的忍受力 我情绪感觉不好的次数 我在所有类型的环境中均能集中精力的能力 我入睡的能力 我整个晚上均睡觉的能力 我睡得好和沉的能力 我做愉快的梦的次数 我记住我所做梦的能力 我觉醒时清醒和精力充沛的次数 我一整天的精力水平 我在一天结束时的精力水平 我的性能力 我的性欲 我不可控制地发怒的水平 我平静放松的水平 我的冲动性 我头疼的次数 我肌肉痛、疼痛、痛苦、关节发软的次数 我疼痛的总背景水平 我食欲的稳定性(天天有大约相同的食欲) 我神经性胃痛的次数 我出事故的倾向 我感觉身体不适的量 精神 远低于平 均 低于平均   平均 高于平 均 远高于平 均 我空虚的感觉 我失去了生活的意义的感觉 我怀疑我自已和我所做的事的意义的感觉 我感觉我象个殉难者(感觉像个牲品)的次数 我发现我自已希望或寻找一个有“魔力”的解决(方法)的 次数 我对其他人有点“生硬”和无情的次数 我失去方向的感觉 我要证明我自已的需求 我玩世不恭(厌烦、悲观、怀疑)的态度 我冷漠(淡漠、缺乏关心)的态度 记忆 远低于平 均 低于平均   平均 高于平均 远高于平 均 我的短期记忆 我迅速回忆(回忆起一个单词、一个姓名、事件、日期等 的能力) 我集中精力和学习的能力 我记住我所读到或听到的事的能力 我轻松学习的能力 我对看书的兴趣 我对研究我们的作业或工作的兴趣 请仔细阅读下面的陈述     如果陈述正确，用“T”符号指出它正确的时间程度     如果它从来都不正确，在“没有或很少时间”下标出“T”号 在过去6个月时间 没有或很少 时间   一些时间   相当长的   时间  大部分或  全部时间 1.在工作或其它活动中我曾注意不到细节或我犯过粗心大 意的错误 adhd无注意力优势型 2.我对在工作任务中持续保持注意力集中有困难 adhd无注意力优势型 3.当直接跟我说话时，我理解有困难 adhd无注意力优势型 4.我不能按指令行事，并且不能完成家中的杂务和工作中 的职责 adhd无注意力优势型 5.我对组织事务和活动有困难 adhd无注意力优势型 6.我逃避、不喜欢或免强的去作需要持续的脑力劳动的任 务 adhd无注意力优势型 7.我乱放对任务或活动必须的东西(如，钥匙、眼镜、文 件、铅笔、书或工具) adhd无注意力优势型 8.我容易被外界的刺激打扰 adhd无注意力优势型 9.我在日常活动中易忘事 adhd无注意力优势型 10.在开会时，我手脚乱动坐立不安或坐在椅子上扭动 adhd多动优势型 11.我离开过需要一直坐着的会议或其它场合 adhd多动优势型 12.我有过不安的感觉 adhd多动优势型 13.我对平静及镇静地玩或从事业余活动有困难 adhd多动优势型 14.其他人感觉我好象总是忙个不停或做事时好象有马达 驱动着我 adhd多动优势型 15.在有些场合我谈话过多 adhd多动优势型 16.在问题问完之前，我曾抢着回答 adhd冲动优势型 17.我曾对排队等候有过困难 adhd冲动优势型 18.在其他人说完他/她的话之前，我抢着回答 adhd冲动优势型 19.我有过明显的运动性抽动(一种突然、快速、反复、无 节律、刻板的运动性活动或发声) Tourette障碍 20.我有过发声性抽动 Tourette障碍 21.在社交、工作或其它重要的场合运动性或发声性抽动 曾使我很痛苦或受到很大的伤害 Tourette障碍 22.我欺弱、威胁或胁迫其他人 品行障碍—攻击人和动物 23.我发动打架 品行障碍—攻击人和动物 24.我使用可能对其他人人身安全造成严重危害的武器 品行障碍—攻击人和动物 25.当遇到受害者时，我侵占其财物(如抢劫，偷钱包，敲诈， 武装抢劫等) 品行障碍—攻击人和动物 26.我曾经对人残忍(在行为上) 品行障碍—攻击人和动物 27.我曾对动物残忍(在行为上) 品行障碍—攻击人和动物 28.我强迫他人进行性活动 品行障碍—攻击人和动物 29.带着造成破坏的目的，我故意从事纵火 品行障碍—破坏财物 30.我故意损坏其他人的财物 品行障碍—破坏财物 31.我闯进他人的房子、建筑或汽车内 品行障碍—欺骗或行窃 32.为了得到物品或好处，或为了逃避责任，我说谎(例如， 我“哄骗”其他人) 品行障碍—欺骗或行窃 33.在没有遇到受害者时，我偷一些有价值的东西(如，冒充 顾客进商店行窃) 品行障碍—欺骗或行窃 34.我发脾气 对立违抗障碍 35.我同其他成年人争论 对立违抗障碍 36.我主动反抗或拒绝遵守其他人的要求或规则 对立违抗障碍 37.我故意惹人烦 对立违抗障碍 38.我为自已的错误或行为失当指责其他人 对立违抗障碍 39.我易被其他人惹怒或发火 对立违抗障碍 40.我发怒和怨恨 对立违抗障碍 41.我有恶意或有报仇心 对立违抗障碍 42.我不能抵抗寻衅的冲动 间歇性冲动障碍 43.我表现出的寻衅程度已经超出了引起我寻衅的事 间歇性冲动障碍 44.我寻衅仅仅因为我对一些话或事生气 间歇性冲动障碍 45.我渴望或喜欢亲密的关系，包括作为家庭的一部分 分裂症样/回避人格障碍 46.我选择过单独的活动 分裂症样/回避人格障碍 47.我对和另一人进行性活动一点儿也没有兴趣 分裂症样/回避人格障碍 48.几乎没有活动能使我高兴 分裂症样/回避人格障碍 49.在我家庭之外，我缺少亲密的朋友 分裂症样/回避人格障碍 50.我对别人的表扬和批评漠不关心 分裂症样/回避人格障碍 51.我表现得感情冷酷、不合群或无感情 分裂症样/回避人格障碍 52.我不会自责 分裂症样/回避人格障碍 53.我逃避有大量的人际交往的工作 分裂症样/回避人格障碍 54.我不愿意去交往，除非我确定我是非常受喜欢的人 分裂症样/回避人格障碍 55.我抑制亲密的交往，因为我怕被羞辱或嘲笑 分裂症样/回避人格障碍 56.我担心社交场合被批评或被拒绝 分裂症样/回避人格障碍 57.在新的人际交往的场合我受拘束，因为我感觉不能应付 分裂症样/回避人格障碍 58.我觉得自己在社会上无能，在人格上不吸引人或不如其 他人 分裂症样/回避人格障碍 59.我不愿冒险或从事任何新的活动，因为它们可能是令人 为难的 分裂症样/回避人格障碍 60.我一直暴食碳水化合物(如，donuts、甜面圈、面糊、 面条、面包、糖等) 61.我对我暴食的感觉很不好以致于为了感觉好些而再一 次暴食 62.当我暴食时我吃的比我打算要吃得多 63.我一直想戒掉或控制我的暴食 64.我试图戒掉或控制我的暴食，但不成功 65.我花费时间来考虑、得到或准备我将要暴食的碳水化 合物 66.我为在社交或工作场合我吃东西的量而窘迫 67.我因为我的暴食而逃避重要的社交、工作或娱乐活动 68.尽管我知道这对我的身体和精神意味什么，但我还继续 暴食 69.我暴食或吃的太多    1×每月或更少；＿＿2×每月；＿＿1×每周；＿＿3×每周；＿＿5×每周＿＿7×每周 70.一旦我开始暴食，无论在哪里即便有危险(如开车时)我 也不在乎 71.尽管我的朋友、家属、医生及其他专业人员告诫过我 不要暴食，但我还是继续暴食 72.我沉迷于暴食碳水化合物 73.为了控制、减少或戒掉暴食我做过不成功的努力 74.尽管由于暴食的影响引起了社会及人际关系的问题(如 与配偶就过度暴食的后果争吵，健康状况表明变化，打架) 我仍暴食 75.为了达到理想的感觉我需要增加碳水化合物的用量 76.当我试图减少或停止暴食时，我无法安静或易怒 77.我曾以暴食来逃避问题或缓解压抑的心情(如无助、罪 恶、焦虑、压抑等感觉) 78.为了隐瞒我暴食，我向家属及其他人说过谎 60b.我放纵地饮酒(如啤酒、威士忌、杜松子酒、伏特加 酒、葡萄酒等) 61b.我对我喝酒感觉很不好以致于为了感觉好些而再一次 喝酒 62b.当我喝酒时，我喝的比我打算的要多 63b.我一直想戒酒或控制我的酒量 64b.我试图戒酒或控制我的酒量但不成功 65b.我花费时间来思考、获得或混合我要喝的酒 66b.在社会或工作场合我为我喝酒的量而窘迫 67b.我因为我的饮酒而逃避重要的社交、工作或娱乐活动 68b.尽管我知道这对我的精神和身体意味着什么，但我还 继续饮酒 69b.我喝酒太多    1×每月或更少；＿＿2×每月；＿＿1×每周；＿＿3×每周；＿＿5×每周；＿＿7×每周 70b.一旦我开始饮酒，无论在哪里即便有危险(如开车时) 我也不在乎 71b.尽管我的朋友、家庭成员、医生及其他专业人员告诫 过我不要饮酒，但我还是继续饮酒 72b.我沉迷于饮酒 73b.为了控制、减少或戒酒我做过不成功的努力 74b.尽管由于酒的影响引起了社会及人际关系的问题(如 与配偶就过度饮酒的后果争论，健康状况的表明变化，打 架)我仍继续饮酒 75b.为了达到理想的感觉我需要增加我饮酒的量 76b.当我试图减少或停止饮酒时，我无法安静或易怒 77b.我曾以饮酒来逃避问题或缓解压抑的心情(如无助、 罪恶、焦虑、压抑等感觉) 78b.为了隐瞒我喝酒，我向家庭成员及其他人说谎 60c.我吸食可卡因(如吸可卡因、抽克赖克等) 61c.关于我吸毒我感觉非常不好，以致于为了使感觉更好， 我又一次吸毒(可卡因) 62c.当我吸毒时，比我打算的量要多 63c.我曾想戒掉或控制吸毒 64c.我不成功地努力去戒掉或控制吸毒 65c.我花费时间来思考、获得或安装我要吸的毒品 66c.在社交或工作场合我因为我吸的毒品的量而窘迫 67b.我因为吸毒而逃避重要的社交、工作或娱乐活动 68b.尽管我知道这对我的精神和身体意味着什么，但我还 继续吸毒 69c.我吸毒是    1×每月或更少；＿＿2×每月；＿＿1×每周；＿＿3×每周；＿＿5×每周；＿＿7×每周 70c.一旦我开始吸毒，无论在哪里即便有危险(如开车时) 我也不在乎 71c.尽管我的朋友、家庭成员、医生及其他专业人员告诫 过我不要吸毒，但我还是继续吸毒 72c.我沉迷于吸毒 73c.为了控制、减少或戒毒我做过不成功的努力 74b.尽管由于吸毒的影响引起了社会及人际关系的问题 (如与配偶就过度吸毒的后果进行争论，健康状况的表明变 化，打架)我仍继续吸毒 75c.为了达到理想的感觉我需要增加我吸毒的量 76c.当我试图减少或停止吸毒时，我无法安静或易怒 77c.我曾以吸毒来逃避问题或缓解压抑的心情(如无助、 罪恶、焦虑、压抑等感觉) 78c.为了隐瞒我吸毒，我向家庭成员及其他人说谎 60d.我过度地赌博 61d.关于我赌博的感觉非常不好，以致于为了使感觉更好， 我又一次赌博 62d.我赌博时，我赌的比我打算的更多 63d.我一直想戒掉或控制赌博 64d.我不成功地努力去戒掉或控制赌博 65d.我花费时间来思考、安排，建立我要参加的赌博 66d.在社交或工作场合我因为我赌博的量而窘迫 67d.我因为赌博而逃避重要的社交、工作或娱乐活动 68d.尽管我知道这对我的精神和身体意味着什么，但我还 继续赌博 69d.我赌博    1×每月或更少；＿＿2×每月；＿＿1×每周；＿＿3×每周；＿＿5×每周；＿＿7×每周 70d.一旦我开始赌博，无论在哪里即便有危险我也不在乎 71d.尽管我的朋友、家庭成员、医生及其他专业人员告诫 过我不要赌博，但我还是继续赌博 72d.我沉迷于赌博 73d.为了控制、减少或戒赌我做过不成功的努力 74d.尽管由于赌博的影响引起了社会及人际关系的问题 (如与配偶就过度赌博的后果进行争论，健康状况的表明变 化，打架)我仍继续赌博 75d.为了达到理想的感觉，我需要增加我赌博的量 76d.当我试图减少或停止赌博时，我无法安静或易怒 77d.我以赌博来逃避问题或缓解压抑的心情(如无助、罪 恶、焦虑、压抑等感觉) 78d.为了隐瞒我赌博，我向家庭成员及其他人说谎 60e.我过度放纵我的性生活 61e.关于我的性行为感觉非常不好，以致于为了使感觉更 好，我又一次进行性活动 62e. 63e.我一直想减少或控制我的性行为 64d.我不成功地试图减少或控制我的性活动 65e.我花费时间来思考、安排、建立我的性机遇 66e.在社会或工作场合我因为我的性行为而窘迫 67e.我因为我的性行为而逃避重要的社交、工作或娱乐活 动 68e.尽管我知道这对我的精神和身体意味着什么，但我还 继续我的性活动 69e.我从事性活动    2×每月或更少；＿＿4×每月；＿＿2×每周；＿＿6×每周；＿＿10×每周；＿＿更多 70e.一旦我开始一次性机遇，无论在哪里即便有危险(如开 车时)我也不在乎 71e.尽管我的朋友、家庭成员、医生及其他专业人员告诫 过我此事，但我还是继续我的性活动 72e.我沉迷于性活动 73e.为了控制、减少或停止我的性活动，我做过不成功的 努力 74e.尽管由于性活动的影响引起了社会及人际关系的问题 (如与配偶就性行为后果进行争论，健康状况的表明变化， 打架)我仍继续我的性活动 75e.为了达到理想的感觉，我需要增加我性机遇的量 76e.当我试图减少或停止我的性行为时，我无法安静或易 怒 77e.我曾以性交来逃避问题或缓解压抑的心情(如无助、 罪恶、焦虑、压抑等感觉) 78e.为了隐瞒我的性行为，我曾向家庭成员及其他人说谎 79.我有过一些事情的痛苦的记忆，包括图像，想法或感觉 创伤后应激障碍 80.我有过一些事情的痛苦的梦 创伤后应激障碍 81.我感觉似乎一些创伤事件正在重演(包括重温经历、错 觉、幻觉和一些片断的回映，包括那些在清醒时和不清醒 时发生的) 创伤后应激障碍 82.在暴露于象征或同一些创伤事件相似的暗示时，我有强 烈的心理压力 创伤后应激障碍 83.暴露于有象征或相似的创伤事件暗示的场所，我感觉有 身体上的反应 创伤后应激障碍 84.我努力避免与过去不愉快的事件有关的想法、感觉或 谈话 创伤后应激障碍 85我努力避免能引起我对过去不愉快事件的记忆的活动、 地点、或人 创伤后应激障碍 86.我对入睡或持续睡觉有困难 创伤后应激障碍 87.我表现的烦燥或发怒 创伤后应激障碍 88.我对集中精力有困难 创伤后应激障碍 89.我一直是“警惕”的 创伤后应激障碍 90.我有一种夸张地吃惊的反应(我是“神经过敏的”) 创伤后应激障碍 91.我一直是安静和安宁的 创伤后应激障碍 92.我有健康的感觉 创伤后应激障碍 93.我容易入睡 创伤后应激障碍 94.我可以睡整个晚上的觉 创伤后应激障碍 95.我感觉对其他人和蔼 创伤后应激障碍 96.我感觉文雅了 创伤后应激障碍 97.我感觉我对自已友好了 创伤后应激障碍 98.我喜欢我自已 创伤后应激障碍 99.我感觉我能控制我自已 创伤后应激障碍 100.我感觉我能控制我的环境 创伤后应激障碍 注释：                                                 RDS测评量表                                              冲动/成瘾/强迫行为                                                 I.注意缺乏障碍 请仔细阅读下面的陈述如果陈述正确，用“T”符号标出并 指明时间，如不正确，在“没有或很少的时间”下用“T” 符号标出 没有或很少 时间   一些时间   经常或相当   长的时间  大部分或  全部时间                                                  无注意力优势型 1.不能注意到细节或在学习工作或其他活动中犯粗心大意 的错误 2.在工作或进行其它活动时，对保持注意力集中有困难 3.别人与你直接谈话时，好象未听 4.不能按指令行事或不能完成学习、家庭杂活或工作场所 的职责 5.对组织任务和活动有困难 6.逃避、不喜欢或不愿从事需要付出持续精力的工作 7.丢失对工作或活动必须的事物(如玩具、学校的委派、 铅笔、书或工具) 8.容易被外界的刺激打扰 9.在日常活动中是易忘事的                                                              多动优势型 1.手脚乱动坐立不安或坐着时身体乱扭 2.离开教室或其它需要持续坐着的场合 3.在不适当的场合过度地来回跑或爬(在青少年，可能限于 无法安静的主观感觉) 4.对安静地玩或从事业余活动有困难 5.总是“忙个不停”或行动时象“被发动机驱动”一样 6.过度的讲话                                                              冲动优势型 1.问题问完之前抢着回答 2.对等侯次序有困难 3.打断或介入其他人的活动(如介入别人的谈话或游戏)                                                              pII.Toureete障碍 1.虽然不一定是在同时，但有些时候常发生多次运动性和 一次或多次发声性抽动(抽动是一种突然、快速、反复、 非节律性及呆板运动肌活动或发声) 2.一天发生多次抽动(通常是一阵)，几乎每天或超过一年 的时间里间断性发生，没有抽动的时间不超过3个月 3.在社会、工作或其它的重要场合，这些麻烦引起明显的 痛苦或伤害                                                              III.品行障碍                                                              攻击人或动物 1.欺弱，恫吓或胁迫其他人 2.发动打架 3.曾使用可以对其他人引起严重的身体伤害的武器 4.遇到受害者时行窃过(如抢动、偷钱包、敲诈、武装抢 劫) 5.对人残忍(在身体上) 6.对动物残忍(在身体上) 7.强迫他人进行性活动                                                              破坏财产 8.带着引起严重毁坏的目的，故意从事纵火 9.故意破坏别人的财产                                                              欺骗或盗窃 10.闯入他人的家、建筑或汽车 11.为了获得财物或好处或逃避义务而说谎(如欺骗别人) 12.在没有遇到受害者时偷窃价值不小的东西(如冒充顾客 进商店行窃，但是没有破门而入，伪造)                                                              严重违抗规定 13.尽管父母反对，13岁前开始晚上出门在外 14.生活在父母或父母代理人的家里时，至少有2次整个晚 上离家出走(或者曾经很长一段时间没有回家) 15.13岁前开始逃学                                                              IV.对立违抗障碍 1.发脾气 2.同成人争执 3.有意对抗或拒绝遵守成人的要求或规则 4.故意惹怒其他人 5.对他或她的错误或不适行为，责怪其他人 6.易被别人惹怒 7.发怒和忿恨的 8.恶意或怀恨                                                 V.间歇性冲动障碍 1.间歇性地发生不能抵抗寻衅冲动的事，其结果是引起严 重的攻击行为和破坏财产 2.在冲动期间，表现的寻衅程度大大超出了任何突发生社 会心理应激物的比例 3.寻衅事件不能用其他的精神障碍较好地解释并且不是 由于一种物质或躯体状况的直接生理效应                                                 VI.分裂样/回避人格障碍 1.既不愿意也不喜欢亲密关系，包括作为一个家庭的一部 分 2.选择单独活动 3.对与其他人进行性活动毫无兴趣 4.很少有活动能带来愉快 5.除了最亲的亲属外，缺少亲密的朋友或密友 6.对别人的表扬或批评显得漠不关心 7.表现出感情冷淡，不合群或没有感情 8.缺乏懊悔，对受伤、受虐待、被别人偷了东西时感觉无 所谓或认为是合理的 9.逃避涉及需很多人际交往的工作活动，因为害怕批评、 反对或拒绝 10.不愿意同人来往，除非确定受喜欢 11.表现出限制亲密关系，因为害怕被羞辱或取笑 12.在社会场合因被批评或拒绝而心事重重 13.因感觉不能应付，在新的人际交往的场合受拘束 14.认为自已在社会上无能，在人格上没有吸引力或不如 其他人 15.不愿冒险或从事任何新的活动，因为它们可能证明是窘 迫的                                                            VII.物质监用障碍 1.出现耐受，即为了达到陶醉的效果或渴望的作用，需要明 显增加物质的用量，或者持续用同数量的物质时，作用显著 减小 2.有戒断综合症的症状，因为为了缓解或逃避它的症状，应 用某种物质或相同的物质，说明有戒断症状 3.使用物质时，比打算的量要多或时间更长 4.一直希望或做过不成功的努力来戒除或控制某物质的使 用 5.在获得某物质、服用它或从它的影响中恢复等的活动上 花费时间 6.由于某物质使用的缘故，放弃或减少参加重要的社会或 娱乐活动 7.尽管知道有持续的或反复的生理及心理问题，仍持续使 用某物质 符合上述描述的物质是什么类型物质(将所有符合的物质均标出来)酒精＿＿安非他明(或安非他明样物质)＿＿碳水化合 物＿＿克赖克/可卡因＿＿海洛因＿＿大麻＿＿尼古丁＿＿其他刺激物 ＿＿                                                 物质滥用                                      (行为不一定符合物质依赖的标准) 1.经常发生的物质使用导致在工作，学校或家里不能履行 主要的义务(如反复的缺席或工作表现差，这与物质使用有 关；与物质使用有关的旷课，暂时停学或被学校开除；疏忽 孩子和家务) 2.在对身体有危险的场所反复使用物质(如当被物质应用 损伤时，正在开车或运行机器) 3.涉及了法律问题的物质反复使用(如，因某物质相关的不 合法规的行为被捕) 4.尽管有由某物质的作用引起或恶化的持续或反复的社会 或人际交往的问题(如同配偶就过量应用某物的后果争吵； 健康状况的明显变化；打架)，但仍持续应用某物质 符合上述描述的物质是什么类型物质(将所有符合的物质均标出来)酒精＿＿安非他明(或安非他明样物质)＿＿碳水化合 物＿＿克赖克/可卡因＿＿海洛因＿＿大麻＿＿尼古丁＿＿其他刺激物＿＿                                                         VIII.病理性赌博 1.沉迷于赌博(如沉迷于体验上次赌博的经历，阻止或计划 下一次冒险或者思考筹集赌资的方法) 2.为了达到所希望的刺激，须要增加赌注 3.有过多次不成功的努力试图控制、减少或戒除赌博 4.当试图戒赌时，坐立不字或易被惹怒 5.将赌博作为逃避问题或缓解压抑心情(如无助的感觉、 罪恶感、焦虑、压抑)的一种方法 6.为了达到所希望的刺激，须要增加赌注 7.在赌博中输钱后，下次来时带得更多(“寻回”他失去的) 8.为隐瞒涉赌的范畴，对家属、医生或其他人说谎 9.为了赌资干过非法的行为如伪造、诈骗、偷窃或贪污 10.由于赌博，使得重要的关系、工作、教育或就业机会变 得受损或丢失 11.依靠别人提供钱来缓解因赌博引起的糟糕的经济状况                                            IX.创伤后应激障碍 如果这个人曾经历过一次创伤性的事故，在这个事故中他/她经历、见证或遇见过一些事件，包括真的死亡，或受到死亡 威胁、或严重受伤、或自已或别人身体完整性受到威胁，这个人的反应包括极度害怕，无助或恐怖以及下面的一项 1.反复地突然的想起关于那件事的痛苦回忆，包括图象，想 法或感觉 2.经常出现关于那件事的痛苦的梦 3.感觉创伤性事件正在重演(包括重温经历、错觉、幻觉 和一些片断的回映，包括那些在清醒时和不清醒发生的事 件) 4.当直接或间接暴露于象征或象创伤事件的某一方面的暗 示时，有强烈的心理痛苦 5.当直接或间接接触到象征或象创伤事件的某一方面的暗 示时，有生理反应 持续逃避与创伤事件有关的刺激并且一般反应性麻木(在创伤之前不存在)，象如下的三个(或更多)的陈述指出的那样 1.努力回避与创伤有关的思想、感觉或谈话 2.努力回避可以引起关于创伤的回忆的活动、场所或人 3.不能回忆起创伤事件的重要方面 4.对重要活动的兴趣或参加次数明显减少 5.感觉同其他人疏远 6.限制感情的范围(如不能有爱的感觉) 7.感觉前途渺茫(如不期望会有工作、结婚、孩子或正常 寿命) 觉醒提高的持续症状(在创伤前未出现)象下列叙述的两个(或更多) 1.入睡或保持睡觉困难 2.易怒或大发脾气 3.集中精力有困难 4.高度失眠症 5.过分的吃惊反应 意见和注释                 RDS测评量表                I.注意缺乏障碍                无注意力优势型 总分(最高六项的) 诊断需要的分(6×2.5)     15 RDS水平：15-20  中度  21-24重度                 多动优势型 总分 诊断需要的分(6×2.5)     15 RDS水平：15-20  中度  21-24重度                  冲动优势型 总分 诊断需要的分(3×2.5)     15 RDS水平：7-9  中度  10-12重度               II Tourette障碍 总分 诊断需要的分(3×2.5)     15 RDS水平：7-9  中度  10-12重度                III品行障碍 总分 诊断需要的分(3×2.5)     15 RDS水平：7-9  中度  10-12重度               IV对立违抗障碍 总分 诊断需要的分(4×2.5)     15 RDS水平：10-13  中度  14-16重度              V间歇性冲动障碍 总分 诊断需要的分(3×2.5)     7  RDS水平：7-9  中度  10-12重度           VI分裂样/回避人格障碍 总分(每一部分最高的4项) 诊断需要的分(8×2.5)     20 RDS水平：(分裂样+回避)20-26  中度  27-32重度                               VII物质使用障碍                                  物质依赖 总分(最高的3项) 诊断需要的分(3×2.5)     7 RDS水平：7-9  中度  10-12重度 标出依赖物质的类型：酒精G、与安非他明相关物G、碳水化合物G、克赖克/可卡因 G、海洛因G、大麻G、尼古丁G                                      物质滥用 总分(4项中最高的) 诊断需要的分(1×3)     3 RDS水平：3中度  4重度 标出滥用的物质的类型：酒精G、与安非他明相关物G、碳水化合物G克赖克/可卡因 G、海洛因G、大麻G、尼古丁G                                VIII病理性赌博 总分(最高的的5项) 诊断需要的分(5×2.5)     12 RDS水平：12-16中度   17-20重度                                IX创伤后应激障碍 总分(第一部分第1项，第二部分3项，第三部分2项中最高的) 诊断需要的分(1×3)+(3×2.5)+(2×2.5)     13 RDS水平：13-18中度   19-24重度                                                  R.D.S.                                            RDS测评量表(成人用)                                 John G.Cull，Ph.D.和Kenneth Blum，Ph.D. 姓名：                                            日期 出生日期： 地址： 性别： 婚姻状况：＿＿已婚＿＿，离异＿＿，寡居＿＿，分居＿＿，指出多长时间了： 教育(标出最高学历)：高中文凭＿＿，一些学院＿＿，商业或技术学校＿＿，大学学历＿＿，研究生学位＿＿，                              请指出所有符合你或你的家庭成员的描述                                     在表示强度的数字上画圈           “1”＝没有或不适合，“2”＝轻微强度，“3”＝中等强度，“4”＝严重，以及“5”＝极强     现在或已经适合于你的行为                   现在或已经适合于你母亲的行为 饮酒或酗酒          1  2  3  4  5 饮酒或酗酒                 1   2   3   4   5 孤独癖              1  2  3  4  5 孤独癖                     1   2   3   4   5 碳水化合物暴食      1  2  3  4  5 碳水化合物暴食             1   2   3   4   5 被控有攻击性犯罪行为1  2  3  4  5 被控有攻击性犯罪行为       1   2   3   4   5 长期下背部痛          1  2  3  4  5 长期下背部痛          1  2  3  4  5 应用或滥用可卡因      1  2  3  4  5 应用或滥用可卡因      1  2  3  4  5 因攻击性犯罪行为被定罪1  2  3  4  5 因攻击性犯罪行为被定罪1  2  3  4  5 家庭暴力煽动者        1  2  3  4  5 家庭暴力煽动者        1  2  3  4  5 家庭暴力受害者        1  2  3  4  5 家庭暴力受害者        1  2  3  4  5 多动                  1  2  3  4  5 多动                  1  2  3  4  5 精神受虐              1  2  3  4  5 精神受虐              1  2  3  4  5 应用或滥用尼古丁      1  2  3  4  5 应用或滥用尼古丁      1  2  3  4  5 病理性赌博            1  2  3  4  5 病理性赌博            1  2  3  4  5 病理性暴力            1  2  3  4  5 病理性暴力            1  2  3  4  5 身体受虐              1  2  3  4  5 身体受虐              1  2  3  4  5 创伤后应激            1  2  3  4  5 创伤后应激            1  2  3  4  5 月经前综合症          1  2  3  4  5 月经前综合症          1  2  3  4  5 性活动过多            1  2  3  4  5 性活动过多            1  2  3  4  5 性滥                  1  2  3  4  5 性滥                  1  2  3  4  5 Tourette障碍          1  2  3  4  5 Tourette障碍          1  2  3  4  5     适用或已经适用于你父亲的行为      适用或已经适用于同胞的行为 饮酒或酗酒              1  2  3  4  5 饮酒或酗酒              1  2  3  4  5 孤独癖                  1  2  3  4  5 孤独癖                  1  2  3  4  5 碳水化合物暴食          1  2  3  4  5 碳水化合物暴食          1  2  3  4  5 被控为有攻击性的犯罪行为1  2  3  4  5 被控为有攻击性的犯罪行为1  2  3  4  5 慢性下背部痛            1  2  3  4  5 慢性下背部痛            1  2  3  4  5 应用或滥用可卡因        1  2  3  4  5 应用或滥用可卡因        1  2  3  4  5 因攻击性犯罪行为被定罪  1  2  3  4  5 因攻击性犯罪行为被定罪  1  2  3  4  5 家庭暴力煽动者          1  2  3  4  5 家庭暴力煽动者          1  2  3  4  5 家庭暴力受害者          1  2  3  4  5 家庭暴力受害者          1  2  3  4  5 多动                    1  2  3  4  5 多动                    1  2  3  4  5 精神受虐                1  2  3  4  5 精神受虐                1  2  3  4  5 应用或滥用尼古丁        1  2  3  4  5 应用或滥用尼古丁        1  2  3  4  5 病理性赌博              1  2  3  4  5 病理性赌博              1  2  3  4  5 病理性暴力              1  2  3  4  5 病理性暴力              1  2  3  4  5 身体受虐                1  2  3  4  5 身体受虐                1  2  3  4  5 创伤后应激             1   2   3   4   5 创伤后应激                1   2   3   4   5 性活动过多             1   2   3   4   5 性活动过多                1   2   3   4   5 性受虐                 1   2   3   4   5 性受虐                    1   2   3   4   5 性施虐者               1   2   3   4   5 性施虐者                  1   2   3   4   5 Tourette障碍           1   2   3   4   5 Tourette障碍              1   2   3   4   5 我渴望一种物质或活动或行为 我用食物、酒等物来改变我的情绪或放松 为调节压力和问题，我假装没什么问题 我滥用咖啡、阿斯匹林、药物等来试图使我更好地处理事 我有明智的态度，我抱怨和批评(一些事) 感情 远低于平 均 低于平均   平均 高于平 均 远高于平 均 我处理事物的技巧 我从压力和麻烦中摆脱的能力 我控制其他人或形势的愿望或需求 我的自觉性是(在没有被监督和防卫下做事的能力) 我平静沉着行事的能力 我在压力和紧急状态下沉着行事的能力 我在压力或紧急状态下对其他人的耐心能力 我对周围的噪音和混乱状态的耐受性 我对周围闪耀的光和混乱状态的耐受性 我情绪感觉不好的次数 我在各利环境中集中精力的能力 我入睡的能力 我整个晚上均睡觉的能力 我睡觉得好和沉的能力 我做高兴的梦的次数 我记住我所做梦的能力 我觉醒时清醒和精力充沛的次数 我一整天的精力水平 我的性精力水平 我的性欲 我不可控制地发怒的水平 我平静放松的水平 我的冲动性 我头疼的次数 我肌肉痛、疼痛、痛苦、关节发软的次数 我疼痛的总体背景水平 我食欲的稳定性(每天的食欲大约相同) 我神经性胃痛的次数 我容易出事故的倾向 我感觉身体不适的量 精神 远低于平 均 低于平均 平均 高于平 均 远高于平 均 我空虚的感觉 我失去生活的意义的感觉 我怀疑自已和我所做的事的意义的感觉 我感觉我象个殉难者(感觉像受害者)的次数 我发现我自已希望或寻找一个有“有魔力”的解决(方法) 的次数 我对其他人有点“生硬”和无情次数 我失去方向的感觉 我证明我自已的需求 我玩世不恭(厌烦、悲观、怀疑)的态度 我冷漠(淡漠、缺乏关心)的态度 记忆 远低于平 均 低于平均 平均 高于平均 远高于平 均 我的短期记忆 我迅速回忆(回忆起一个单词、一个姓名、事件、日期等 的能力)是 我集中精力和学习的能力 我记住我看到或听到的事的能力 我轻松地学习的能力 我对看书的兴趣 我对研究我的学校课程或我的工作的兴趣

                     实施例24

雄激素受体基因(ARO)的三核苷酸(GGC)重复多态性与抽动-

秽语综合症中ADHD、品行障碍和对立违抗障碍的关联

许多行为和认知障碍，包括ADHD、CD、ODD、反社会人格障碍、 阅读困难、其它的合作障碍、孤独癖等，在男性中更为常见，是女性 的三到五倍(DSM-IV，1994)。虽然通常认为是由于激素和环境因 素的原因，但可能也包括遗传因素。如果某个基因是X染色体连锁 的，这个特殊基因的功能就非常容易了解。这样，依靠相关等位基因 的频率和基因引起的变异的百分率，并假设一个隐性遗传占优势的遗 传模式，这样一个X连锁的基因在男性中可能占过量的比例。如果基 因在对睾酮的应答中也起重要的作用，那么它非常适合在男性/女性 的比率中起作用。雄激素受体基因(AR)就是这样的基因。它定位于 X染色体的Xq 11-12(Migeon等1981，Brown等1989)。

AR CAG和GGC重复序列的正常等位基因中较短的，与雄激素受体 水平和对睾酮的敏感性的增关联，发明人假设它可能与儿童的一个或 几个破坏性行为障碍关联，尤其是品行障碍和对立违抗障碍；还可能 解释这些疾病在男性中占优势的原因，为了检测这个假说，发明人检 测了267个抽动-秽语综合症患者和59个正常人(共326人)AR基因第 一个外显子中的GGC三核苷酸重复多态性(Sleddens等，1992， 1993)。因为多巴胺和5-羟色胺常与攻击性行为相关，发明人对AR基 因对品行障碍和ODD的影响与多巴胺D2受体基因(DRD2)和5-羟色胺 转运蛋白基因(HTT)的影响进行了比较。这个研究的进行是为了决 定人类的雄激素受体基因(AR)中CAG和GGC重复多态性的较短的等 位基因是否与品行障碍(CD)、对立违抗障碍(ODD)或注意缺陷多 动障碍(ADHD)关联。

方法  在326个受试者中确定等位基因的频率。这326人中，患抽 动-秽语综合症的人为267，正常对照的59人，237人为男性，89人为 女性，均为非西班牙的白种人。用多元方差分析同时检测了男性较短 等位基因的杂合体或女性较短等位基因的纯合体与数量行为变量的相 关性。用线性回归分析决定由AR基因引起的差异的百分率。并同由多 巴胺D2受体基因(DRD2)和5-羟色胺转运蛋白基因(HTT)引起(二 者单独和共同引起)的差异百分率进行了比较。

受试者由59个正常对照和267个抽动-秽语综合症患者组成。涉 及病人和对照组的细节和行为的评价已在文中给出。在那些研究中发 明人检测了如下的数量性状：无注意力、冲动性、多动、CD、ODD、 学习障碍(LD)和小学学习表现(GSAP)。在目前的研究和一个伴随研 究中，发明人增加了一个数量性抽动评分。

AR基因的GGC重复多态性用Sleddens等1992、1993年所述的聚合 酶链式反应技术进行扩增。Irvine等于1995年发现16重复(0.57)是最 常见的等位基因，随后是17重复(0.32)和15重复(0.08)。仅有的 其它等位基因是10重复。为了研究AR等位基因和个人数量行为评分之 间的可能关联，AR基因按如下方式打分：对男性：＞16重复＝0，≥16重 复＝1；对女性，＞16/＞16重复＝0；杂合体＝0；≥16/≥16重复＝1。

在品行障碍中，多巴胺D2受体基因(DRD2)的Taq A多态性 (Grandy等，1989)被用来将这个基因座的作用同AR基因比较。以在 这个多态性中阳性杂种优势的证据为基础(Comings和 MacMurray，1998)，它的评分如下，11，22＝0，12＝1。

在5-羟色胺转运蛋白基因启动子区中利用了插入/删除多态性 (Hells等.1995，1996)。HTT基因的评分如下，SS＝0，SL，LL＝1 (Kauck等，1997；Lesch等，1996)。

在TS病人和正常对照中，AR等位基因或等位基因组频率的可能的 差异用卡方检验进行分析。为了避免Bonferroni校正，用多元方差分 析法同时检验八个行为评分。为了检验三个基因的累加效应，生成了 AR+DRD2+HTT评分，在此处将每个个体的每个单个基因的评分加起 来，这样其范围为从0(没有这三个基因的任何相关基因型)到3(所 有三个基因的相关基因型)。用线性回归分析AR、DRD2和HTT基因 (单独或联合)占CD、ODD和ADHD得分变异的百分率。为了检验这三 个基因有累加作用的假说，用线性方差分析检验了每个得分的均数， 包括一个总计ADHD得分。

结果  检测了AR等位基因的频率。在59个正常对照中，不同重复 等位基因的频率如下：10-0.01，12-0.09，15-0.03，16-0.47，17- 0.36，18-0.01，19-0.01，20-0.01。比较了正常对照组的频率和TS 组的频率，包括所有等位基因的对照组和TS组的卡方值＝19.69， d.f.＝11，p＝0.0731。在重复等位基因长度与表型作用的潜在关联的 研究中，发明人发现最节俭的方法是将等位基因分成一个短组和一个 长组，并尽可能地使两个组在大小上相同。按照这种方法，发明人将 AR等位基因分成≥16重复组和＞16重复组，在TS病人中，≥16等位基 因的频率(0.66)同对照组(0.60)相比没有显著的趋势，x 2＝1.06，d.f.＝1，p＝30。因而当对照组和TS组比较时，在α＝0.05时 没有差异。

多元方差分析的结果，按照显著性递减的顺序排列，列于表I。 CD得分的差异显著性最大p＝0.005，ODD的得分的显著性次之 (p＝0.022)，多动的得分也有显著性(p＝0.032)。抽动、GSAP和LD得 分的差异显著性最低(p＞0.6)。为了检验这种优先相关是否仅存在于 男性中，发明人比较了男性(n＝237)和女性(n＝89)的结果，由于样 本量太小，失去了检验的能力，二者差异不显著。然而，当按p值排 序时，在两种性别中CD的差异都是最显著的。

因为AR基因的变异与性行为有潜在的相关性，发明人在14岁以上 的人中用post hoc分析法检验了AR基因同性行为得分 (Comings，1994)的可能相关性，发现没有显著性。还用post hoc分 析法在女性中测定了较短的等位基因是隐性的还是显形的。由于杂合 体所有得分的平均数相似于或小于＞16/＞16纯合体，表明≥16重复等位 基因的作用是隐性的，在女性中只有≥16/≥16纯合体才能显示作用。

回归分析的结果列于表74。对CD的评分，AR基因占差异的2.4％ (p＝0.005)，DRD2基因占1.3％(p＝0.005)，HTT占0.5％。AR基因 和DRD2基因联合占差异的3.3％(p＝0.0009)，再加上HTT时占3.5％ (p＝0.0007)。AR基因在ODD得分的差异中占1.6％(p＝0.022)。此 处，AR基因与解释1.4％方差的DRD2基因和0.7％的HTT更具可比性。所 有三个基因占ODD得分方差异的3.2％(p＝0.001)，AR基因占ADHD得分 方差的1.1％(p＝0.053)。所有三个基因占方差的2.7％ (p＝0.0027)。

用线性方差分析法检验累加AR+DRD2+HTT得分的线性结果，测定 得分是否随着相关基因型数目的增加而增加。在α＝0.05时，无注意 力、冲动、多动、ADHD、ODD和CD的得分均有显著的统计学意义。在 Bonferroni校正后，多动、冲动、ADHD、ODD和CD得分仍具有显著的 统计学意义。

经多元方差分析检验，AR基因的短GGC等位基因的存在和CD (p＝0.005)、ODD(p＝0.022)和多动(p＝0.023)的症状之间有显 著的相关性。在男性和女性中，CD的相关性均最大。AR基因占CD得分 差异的2.4％。AR、DRD2和HTT基因联合起来占品行障碍得分差异的 3.5％(p＝0.0007)，占ODD的3.2％(p＝0.001)，占ADHD的2.7％ (p＝0.0027)。

                        表73

                行为评分的多元方差分析

                       (n＝326)

A.所有的8个行为得分

评分                       F值                        p

CD                        8.03                      .005

ODD                       5.32                      .022 多动                          5.20                      0.23 冲动性                        3.18                      .075 无注意力                      1.76                      .181 抽动                          0.22                      .634

GSAP                      0.22                      .643

LD                        0.95                      .923

合计(Wilkes)              1.48                      .171

B.只有男性(m＝237)

评分                       F值                        p

CD                        2.57                      .110

多动                      1.50                      .221

抽动                      1.18                      .277

ODD                       1.13                      .288

GSAP                      0.38                      .534

学习                      0.34                      .559 冲动性                        0.15                      .695 无注意力                      0.11                      .736

合计(Wilkes)              1.14                      .334 C.只有女性(n＝89)

评分                       F值                        p

CD                        1.63                      .205

ODD                   0.61                  .433

无注意力              0.54                  .463

冲动性                0.48                  .489

GSAP                  0.41                  .523

多动                  0.15                  .703

抽动                  0.13                  .712

学习                  0.03                  .853

总计(wilkes)          0.38                  .929

                        表74

         对CD，ODD和ADHD评分的线性回归分析

                      (n＝326) 评分 CD      AR               .155      .024      2.83      .005

    DRD2             .113      .013      2.05      .041

    HTT              .073      .005      1.34      .183

    AR+DRD2          .182      .033      3.35      .0009

    AR+HTT           .158      .025      2.89      .0041

    AR+DRD2+HTT      .187      .035      3.43      .0007 ODD     AR               .127      .016      2.31      .022

    DRD2             .119      .014      2.17      .031

    HTT              .086      .007      1.57      .118

    AR+DRD2          .167      .028      3.06      .0024

    AR+HTT           .146      .021      2.66      .0081

    AR+DRD2+HTT      .181      .032      3.32      .0010 评分 ADHD      AR             .106    .011    1.93    .053

      DRD2           .091    .008    1.64    .101

      HTT            .109    .012    1.97    .049

      AR+DRD2        .134    .018    2.44    .015

      AR+HTT         .146    .021    2.66    .0081

      AR+DRD2+HTT    .165    .027    3.02    .0027

                         实施例25

吡啶甲酸铬补充对机体组成的影响：一个以安慰剂为对照的随机

                        双盲实验

前言：发明人还试图回答几个方法学的问题。首先，补充CrP能 通过影响食欲而影响热量的摄入及通过增加代谢或日常活动水平而增 加热量的消耗吗？第二，如果发明人控制并排除实验组和对照组的热 量摄入和/或能量消耗的差异，还能得到同样的结果吗？第三，用比 水下测试更精确并且更少依赖于受试者表现的其它检测身体组成的方 法(如双能量X射线吸收测量法)进行测试时，这些结果能重复吗？ 第四，尽管三个研究小组关于人体组成的所有基本测试均相似，但在 其它的研究中所见到的相对高的退出率(Anderson，1995)(29.7％)通 过选择性损耗使结果偏移吗？如果用某种方法减少退出率或如果用 “故意处理”的统计分析，这些同样的结果还能出现吗？

为了回答这些问题，发明人采取了一些措施来控制身体活动和热 量摄入的差异，应用DEXA法测定身体的组成，应用一种方法来达到近 乎完美的顺应性最终完成试验。

材料和方法  在本研究中总共研究了130名患者，有122名 (93.8％)完成了所有的检测，其中男性为17名，女性为105名，平均 年龄为42.3岁。研究中患者是由健美教练和推销人员从得克萨斯州的 圣安东尼奥和修斯顿的健康和运动俱乐部中招募来的，这些教练和推 销人员将有关研究的信息提供给俱乐部会员，他们或亲自参加或介绍 其朋友和亲属参加。在大多数的情况下，在研究的进行中，雇用健美 教练来监督受试者，以确保他们在每周跟踪材料中记录他们的活动水 平和热量摄入的量，并完成最终的测试。在填写同意书之前，所有的 受试者均被要求咨询他们的私人医生。

大量的研究表明DEXA能准确测量肉中和动物尸体中的脂肪和瘦 肉的含量(Evans，1989；Evans和Meyer，1992；McCarty， 1993)，同中子活性分析法测定的实际骨骼重量和全身钙的总含量具 有高度的相关性，用中子分析法测量全身骨骼矿物质含量，其错误率 不到1％(Felig，1975)。同时还表明，对评估肥胖和非肥胖患者的 身体组成这是一种精确的方法(Page等.1993；Eckel等，1992)。 关于DEXA法精确性的最初研究是在1990年被报道的(Mooney和 Cromwell，1993)并被随后的三个研究证实(Page等，1993；Hasten 等，1994；Evans，1989)，表明虽然DEXA与水下称重、重氢稀释和全 身总钾有高度的相关性(Page等，1992)，在DEXA检测中的错误不 到应用全部身体水份或水下检测的错误的一半。对Lunar Corporation的DEXA的变异系数(CV％)有如下的报道：脂肪的质量＝ 500g±2.5g；FFM＝600±1.3g；总组织质量＝400g±0.6g。除了被用 来评价临床疾病的变化，DEXA的可靠性使得它可以监测短期限食和/ 或运动对局部和全身组成的影响(Page等，1993；Eckel，1992)。在 最近的一篇关于DEXA的综述中，作者得出结论认为DEXA是迄今最精确 地分析身体组成的工具之一(Lindemann等，1993)。

DEXA提供了身体组成的三室模型：脂肪、瘦肉组织质量和骨骼无 机质含量。方法是用78kVp的恒压能源和K-edge滤器(铈)得到一束 稳定的、双能量的一致光束，其有效能量达到40keV到70keV。这束光 从头到脚进行一系列的横向扫描，间隔为1厘米；扫描的面积大约是 60厘米×200厘米。每一个横断面收集120个象素元件，每一个象素大 约5×10min。扫描速度为16厘米/秒时全身测量在10-20分钟内完成， 扫描速度为8厘米/秒时需要20分钟。R值(在软组织中低能衰减与高 能衰减的比率)的范围为从1.2到1.4(Lindemann等，1993)。

除了比较体重、身体脂肪百分率、脂肪质量和FFM的变化外，发 明人还应用了在发明人以前的研究中描述的身体组成改善指数 (BCI)(Glinsmann和Mertz，1966)。BCI的基础是如下的假设， 即身体脂肪的丢失和FFM的获得是阳性治疗结果，而脂肪的获得和FFM 的丢失是阴性治疗结果。因而脂肪质量的减少和/或FFM的获得在评分 时为正，脂肪的获得和/或FFM的丢失为负，BCI值是综合这些得分的 净结果。BCI作为变化量度比体重的优势已经在参加监督锻炼项目期 间检测身体组成的研究中以及在患者同时接受或不接受行为修正程序 的药物治疗研究中被证实。两组间进行比较，在安慰剂组中假设方差 相同，进行双尾t检验，在实验组中用协方差分析来使各组在热量摄 入和消耗上平衡。

作为减少退出率的一种方法，患者被要求提供100美元的支票， 如果患者不能完成最终的DEXA测试和研究终末的调查表，支票不能被 返还，这个要求附在签署的同意表中。患者被告知反还他们支票的唯 一条件是完成测试，无论他们是多好或多不好的按照研究方案做，只 要如实报告就行。完成最初的DEXA测试后，患者将得到一份测试结果 的报告并被随机编号，范围为从1到130，每一个编号对应于一个外形 一样的可能装有400mcg吡啶甲酸铬也可能是安慰剂的胶囊。调查者、 分发药物的研究技术人员和患者均不知道哪一个患者号对应的是安慰 剂或哪一个患者号是有活性的药物。一个独立的地方药剂师作为研究 的受托管理人并随机将药瓶分配给受试者，这些药瓶事先用“X”或 “Y”标记，分别对应于有活性的药和安慰剂。在研究完成并将所有 的材料收集和计算完毕后，受托管理人拆开由制造商提供的表明哪一 个是活性药的信封并通知高级调查者(GRK)。所有的信息均在第二 作者(KB)的监督下由得克萨斯大学健康科学中心的计算资源系进行分 析。测试的总结期间，完成最终测试者将得到测试结果和抵押的支票 并被要求回答每天实际服用胶囊的量，以交叉核对所用药物的量。对 这些资料的随后分析表明受试者每天服用的CrP平均为357mcg。

提供给患者一个工作手册，其中概括了评估热量摄入的一般程 序、普通食物的营养信息和计算及记录日常热量平衡的日志。为了监 测和调整身体活动时能量消耗的差异，在走路时，所有的患者均配带 在以前的研究中用过的计步器(Evans和Press，1989；Kitchalong 等，1993)，这些计步器可以反映在每一天中他们行走的步数，或者 反映在无法用这些器具的活动中的步数等量值。患者在用来记录他们 的热量摄入的相同日志中记录每天他们行走的总步数，随后用来调节 患者的身体脂肪的净变化，即身体脂肪每变化1磅+或-3500卡。

结果  表75中提供了对完成研究的122名患者的基线描述的统计 表。未完成研究者与完成研究者的比较表明任何身体组成的参数均无 显著性差异。

                       表75

   122个患者随机筛选进入接受安慰剂或每天400 MCG

   吡啶甲酸铬组，这些患者的基线人口统计资料的比较  Y

                                                       身体质量指数

              年龄(y)*    体重(kg)*   ％身体脂肪*    (kg/m2)* 有活性的(n＝62)   41.1+-10.5   85.5+23.0     42.4％+8.3％     30.2+7.1 安慰剂(n＝60)     43.5＝-7.6   79.9＝-20.4   41.8％＝-6.7％   28.4+5.4 p水平(双尾检验))  p＝0.24      p＝0.16       p＝0.65          p＝0.13 *均值±SD

表76提供了一个在90天测试期间发生的变化的比较。

                              表77

在90-天测试期间，接受安慰剂或400 mcg的吡啶甲酸铬的参与者之间身体

  组成参数平均变化的比较。所有资料均控制热量摄入和消耗的差异

        体重                                      无脂肪

        (kg)*       ％身体脂肪      脂肪质量*  质量*       BCI* 有活性的   -7.8+-9.7    -6.3％＝8.5％    -7.7+-9.5    -0.1+-2.2    +7.6+-4.5 (N＝62) 安慰剂     -1.9+-4.0    -1.2％+-5.7％    -3.4+-6.8    -0.3+-2.0    +3.1+-7.6 (n＝60) P水平**   p＝＜.001    p＝＜.001        p＝.004      p＝.568      p＝.004

*均值+-SD

**双尾学生t-检验

讨论表76的基线资料表明两组的任何身体组成参数在统计学上 差异不显著，说明随机分组是成功的，提供了患者数相同的两个分 组。表77的资料表明校正两组的热量摄入和能量消耗使两组相当后， 服用CrP可以显著影响体重、身体脂肪的百分率和BCI。还值得注意是 即使没有校正热量吸收和能量消耗，用药组的变化同发明人先前的研 究结果是一致的，包括身体脂肪的显著减少(p＝0.02)。

值得注意的是在本项研究中身体组成的主要改善是身体脂肪的 减少。DEXA检测法是少数几种直接检测身体脂肪组织的身体组成检测 技术之一，水压检测以及其它许多身体组成的检测方法评估患者身体 的脂肪均依赖于一个假设，即假设他们的身体密度反映的脂肪百分率 同在一些尸体的研究中发现的结果是相同的。而且，水压检测不能实 际测量用来计算身体密度的身体体积—其从在水内及水外得到的体重 推测它。因而即使是用水压法检测的身体脂肪组织的重量也是由两种 不同的推测而得到的，而不是从身体脂肪组织的测量中得到的。当 然，由水压检测得到评估还受受试者在水下时持续呼气能力的影响， 即使呼气是一致的也还要受到肺体积差异的影响。DEXA检测法解决了 这些困难，因为这种检测仅仅需要在身体被扫描时在开放的检测台上 静止15到20分钟。发明人认为在试图检测引起身体组成很小变化的物 质的功效时，控制检测技术的易变性是绝对必要的。

要求患者提供按条件返还的抵押金对完成最终测试的受试者人数 产生了很大的影响，不再需要设立统计学的对照，如“故意处理”。 研究后的评论揭示受试者认为交纳抵押金(并没有施行)的要求是合 理的。在参与本研究的130位受试者中只有8人没有完成最终的测试。 其中一人怀孕并被要求退出实验；三人从本地搬走；一人在后期测试 期间生病；三人原因不清楚。因而，对所有的意图和目的来说，在研 究中没有可以偏移结果的退出。虽然发明人的材料不是决定性的，但 要求抵押金看来值得进一步研究。

由于要求患者交的抵押金完全是以受试者完成研究和研究结束时 的调查表为基础的，并且不考虑患者是多大程度地按着原方案去做 的，在安慰剂组和活性药组中的未服药患者的相等人数不能平衡组间 影响。安慰剂组中未服药的患者对结果检测无影响，因为安慰剂中不 含有活性的组分。然而，在活性药组中不服药的患者将减少药物原本 应该起到的作用。实际上，完全不服从实验方案的活性药组的患者实 际上是安慰剂组患者。因而，缺乏顺应性将很自然的减小两组间的差 异，所以要强调获得受试者实际服用药量的准确材料。每周登记和人 员监督为发明人提供了更全面的资料并且减少了由于缺少顺应性而造 成的对结果的偏移。

结论  这些资料表明，当身体组成指数(BCI)被用作结果标准 代表非脂肪组织中的净增加值加上身体脂肪的丢失值时，服用吡啶甲 酸铬可以显著改善身体组成。

                       实施例26

                 多基因遗传和微/小卫星

精神遗传学中的微/小卫星多态性  小卫星被定义为长度达65个 碱基对的重复序列(Wright，1994)。微卫星由更短的重复序列组成， 其长度为2-5 bp不等。在本实施例中，除非特别说明发明人用微/小 卫星这个术语来统称二者。

由于在整个基因组中微/小卫星重复序列的高频率，发明人和其 他人经常在关联研究中利用这些多态性。发明人最初的假设是象中性 和沉默单个碱基对的多态性一样，微小卫星等位基因应该同其它影响 基因功能的“关键”突变是连锁不平衡的。然而经过多年的研究之 后，发明人开始怀疑微小卫星本身可能就是“关键”突变。虽然发明 人的研究没有包括极长三联体重复的多基因遗传，但是这些研究中的 确给出了这样的概念，即重复等位基因的长度变化，即使是在“正 常”范围之内，可以通过广泛的机制影响基因的功能。与微/小卫星 的多态性相关的两个方面是他们的突变率和大小。

微/小卫星的突变率比非重复序列的突变率更高(Jeffreys 等，1987)。缺少侧翼标记的交换表明新的突变可能是由于复制滑动 或复合体转换样事件(Wolff等，1989)。高突变率使得这些多态性对 关联研究的价值变小，因为数代之后连锁不平衡关系中混入了太多的 混杂因素，而这种连锁不平衡关系要求在许多代中同相中保持两种不 同的多态性。然而，如果微/小卫星突变本身是“关键”等位基因， 在关联研究中它们可能实际上起到更大的作用，尽管突变率较高。

如果连锁不平衡牵涉在微/小卫星等位基因与具体表型的相互关 联，那么每一次发生卫星序列新的突变，应该有特定的几率与“关 键”的等位基因发生在相同的染色体上。然而，平均来说，在带有这 些“关键”等位基因的连锁不平衡中，不应该存在较长的突变等位基 因对较短的突变等位基因的优势倾向。然而，如果重复序列的大小在 基因的调节中起作用(见下文)，那么各组中不同大小的等位基因，而 不是具体的等位基因或等位基因的序列，与数量性状的相关性就应当 有一定的倾向性。如果存在一个重复基因频率的主峰，那么较长和较 短的等位基因均可能与表型效应相关。

存在长度和序列均被涉及的可能性，并且不同长度的微/小卫星 等位基因可能对基因的功能有影响。如果不同的微/小卫星等位基因 被表明对基因的转录效率或翻译起作用，这个假说可能会更有意义。 实际上有许多这样的例子。

多基因遗传的一般假说  多基因遗传的微/小卫星假说的各个方 面如下：许多微/小卫星对与之相关的基因的表达起作用；很多基因 同一个或更多的微/小卫星相关联；结果，很多基因以一定范围的功 能等位基因多态性变体出现。那些与几个微/小卫星多态性(每一个 具有多个等位基因)相关的基因，将呈现尤其大数目的功能单倍型。 虽然大部分基因与基因活性平均水平的±10-15％相联系，但是它的范 围可以高到±40％，并且如果涉及到多个微/小卫星多态性它们的作用 可以是累加性的。

另外，重要的功能变体在普通人群中是普遍的，其流行率范围为 1％到100％。如果存在一个完全由高功能等位基因(＞平均的10％)和低 功能等位基因(＜平均的10％)组成的等位基因的二分分配形式， 100％的流行率便可能出现。这些功能变体对表型仅起轻度的作用(变 异的0.5-8％)，很少引起疾病，即，它们通常不是典型的“一个基因 -一个疾病”的常染色体的显性或隐性遗传疾病。因为大部分的微/小 卫星多态性是在外显子中，多基因疾病中的突变常是在外显子外并且 经常在转录序列之外。当给定的疾病涉及六个以上的基因时，Log评 分连锁研究将失去效力(Risch和Merkangas，1996；Weeks和 Lathrop，1995)。连锁研究是以如下的假设为基础的，即一个给定的 等位基因的出现是与某种疾病相关联的，一个给定等位基因的缺失是 与某种疾病的缺失相关联的。相反，在多基因遗传中疾病是与几个不 同基因的等位基因数目的阈值关联。如此，一个家系中的许多成员可 能携带一个突变基因，但是并没有患病，因为缺少必要的其它突变基 因的阈数目。因而，一个家庭的许多成员可能携带有一个特殊的基因 而且没有患病，其他患病的成员可能没有携带该突变的等位基因 (Comings，1996f，l，m)。

高功能和低功能等位基因均可影响表型。例如，在精神病遗传学 中，一个给定的受体基因的表达增加导致受体高敏感性或者一个受体 基因表达下降导致的受体低敏感性均与表型的变化有关联。当一个人 遗传了影响相同表型的低或高功能基因的阈数目时，一种多基因疾病 便可发生。这样，如果在一个给定的数量变量中有20种不同的多基因 起作用，任何带有10个或10个以上这些低或高功能变体的人将出现明 显的表型变化。阈数目的值将根据等位基因的低或高功能性的程度而 变化，表型变化的严重程度依赖于多基因的数目超出关键阈数目的范 围。

因为微/小卫星非常普遍，所以多基因疾病发生的可能性也相当 高。因而多基因疾病比单基因疾病更为常见。在普通人群中，很多多 基因的频率范围是从25％到超过50％，遗传阈数目的机会比单基因疾病 的机会高的多，对一个给定的微/小卫星，等位基因对表型可能起阳 性作用或阴性作用，这依赖于其它基因的遗传背景和表型的特性。一 个实际的例子是被Gelernter等(1994)观察到的可卡因引致的妄想 狂与多巴胺受体转运蛋白基因(DAT1)的9等位基因之间的关联。相 反，Cook等(1995)和Comings等(1996j)观察到DAT1基因的10等 位基因与注意缺陷多动障碍关联。有人可能从这些分散的报道中得出 结论认为一个或其它的观察结果一定是不正确的。然而，这里存在二 者均正确的合理的可能性，一个给定微/小卫星的不同等位基因可能 与不同的表型相关。研究多基因疾病的合理方法是选择一个侯选基因 并检测最近的微/小卫星多态性等位基因对相关数量特性的影响。

上面提出的多基因遗传的特性还有很多另外的含义。如果许多微 /小卫星多态性具有改变与其最近的基因的转录或翻译率的可能性， 如果很多基因至少同一个微/小卫星相关，那么很多基因或是大部分 基因有可能在一定程度上对它们所控制的表型的多基因遗传起作用。

许多关于在精神病及其它疾病中特殊基因潜在作用的研究中，均 以研究侯选基因外显子的突变开始。当这个研究出现阴性结果时，这 个基因常常被认为对被检测的疾病没有作用。如果复杂多基因性状中 涉及的大多数突变是在非外显子内，这样的结论将是无效的。目前的 假说不排除对基因功能仅起很小作用的外显子突变的作用，而只是强 调尽管存在那个基因的功能上重要的变体，这些研究仍可能出现阴性 结果。

如果每一个侯选基因对一个给定的数量性状的差异仅起0.5-8％的 作用，根据研究的表型和大小，结果可能是轻微的、界线的或阴性的 显著性。然而，检测两个或多个侯选基因的累加作用可能会显示一个 更显著的效应。

许多关联研究仅简单地检测患者的某种特殊等位基因的频率同对 照组比较。然而，当诊断是以一套复杂的症状为基础时，一个特定的 等位基因可能与这个诊断涉及的几个数量性状显著相关，但不是诊断 本身。例如，如果精神分裂症是一种多基因疾病，特定的侯选基因的 等位基因可能显示与阴性症状(如感情淡漠)显著相关，这在有些病 例中会出现但并不是在所有的病例中都会出现，但是并不与阳性症状 (如幻觉或错觉)或精神分裂症的诊断本身相关。对简单的两分行＝ 性诊断进行有限的分析，而不是检测次级症状数量性状，可能会错过 一些对多基因疾病起重要作用的基因。在正常对照和患者中单个等位 基因的频率没有差别时，杂种优势也可能会使一个基因对表型起重要 作用(Comings和MacMurray，1977)。

如果一种假说有直接启发价值，它就非常有用。当大量的甚至是 可能基因型的更大数目的等位基因中的每一个等位基因被检测时，研 究的有效性可能严重受损而使其无用，这是在关联研究中使用高度多 态的微/小卫星多态性的一个缺点。然而，如果重复序列的大小是关 键变量，即便是最复杂的多态性也可被归纳为三个基因型，较短等位 基因的纯合体、较长等位基因的纯合体和杂合体。在研究一些基因 (OB，MAOA，MAOB，CNR1，GABRA3，GABRB3，DBH，FRAXA和NOS1)在 行为性状中的作用时，发明人建立了这个有价值的方法。

虽然许多潜在的有意义的基因已被克隆和测序，但对大部分来 说，在基因组数据库中均未报告其多态性，使得关联研究不可能。基 于目前的假说，如果序列是已知的，一种鉴定有用的微/小卫星的方 法是从商业渠道得到携带有感兴趣基因的大的基因组克隆。在这些克 隆中筛选可能为关联研究提供较多信息的重复序列。

目前的模型表明在多基因遗传的研究中，形成Z-DNA的重复序列 被证明是最有价值的。这表明用Z-hunt-II程序(Schroth 等，1992)筛查已知序列，可以提供关于最有用多态性区域定位的重 要线索。为了验证这一点，发明人利用这个程序检测了NOS1的序列 (Hall等，1994)。以对NOS1基因敲除小鼠(Nelson等，1995)攻击行 为的研究为基础，发明人用重复多态性检测了人的各种行为性状，发 明人通过实际检测NOS1基因的序列鉴定了重复多态性(Hall 等，1994)。由于观察到了一些关联，发明人想知到：发明人利用的 多态性是否可以被Z-hunt-II程序鉴定；在这个基因中是否还有其他 区域含有有用多态性。这两个预测都是正确的。基于不同长度的NOS1 (CA)n等位基因可能在NOS1基因的功能中起作用的假说，发明人将 等位基因分成两组，包含等位基因的最短的50％(＜199bp)组和最长 的50％(≥199bp)组。最初的研究提示与行为表型的一些相关性。随后 发明人用Z-hunt-II规则系统(Wang等，1997)筛查了公布的NOS1 基因序列的Z-DNA区，结果表明发明人应用的多态性是三个高Z-DNA含 量区之一。第二个Z得分更高的区域是以前未曾发现的新的多态性区 域。

这三个例子实际上说明了这个模型的预测是怎样导致加快鉴定涉 及多基因疾病的基因的。这个模型与不久就可以利用的人类基因组计 划的材料结合起来应用，通过提高鉴定已知侯选基因附近的微/小卫 星的能力，对发明人了解多基因疾病的知识有很大的作用。

单氨氧化酶A基因(MAOA)和VNTR多态性等位基因分成四组，与 特殊症状有关的许多数量变量有显著的关联。显示了对351名抽动秽 语综合征的先证者及他们的亲属和正常对照的狂燥症状的评分结果。 携带有最长等位基因的受试者的得分显著提高(Gade等，1997)。 (b)在物质滥用者组和对照组应用相同的多态性。携带最长等位基因 与药物滥用得分之间也有显著的关联(Gade等，1997)。(c)基于 SCL-90测试的焦虑的数量得分和肥胖基因微卫星多态性等位基因的相 关性分成＜208bp等位基因(左)纯合的受试者和≥208bp(右)等位基 因纯合或杂合的个体。(d)事件相关电位(ERP)P300波(以微伏计) 与CNR1大麻酯受体基因微/小卫星多态性等位基因的关联分为≥5重复 等位基因(右)纯合的受试者和＜5bp(左)重复等位基因纯合或杂合 的个体(Johnson等，1997)。(e)Brown成人ADD评分和GABAA，B3 (GABRB3)受体基因微卫星多态性等位基因的关联分为≥185bp等位基 因(左)纯合的受试者和＜185bp等位基因(右)纯合或杂合的受试 者。(f)在评估IQ的随机成年人中，行为IQ与FRAXA基因座的正常等 位基因间的关联(Comings等，1997a，b或c)。

                       实施例27

三个肾上腺素能基因(ADRA2A、ADRA2C、DHB)对伴随及不伴随

           学习不能的ADHD患者的累加性效应

发明人检测了三个肾上腺素能基因，肾上腺素α2A受体 (ADRA2A)基因、肾上腺素(ADRA2C)受体α2C基因和多巴胺β羟化 酶基因(DBH)与伴随及不伴随学习不能(LD)的ADHD的相关性或对 它的累加性效应。

两种类型的ADHD和发明人指定的可能侯选基因归纳于表78。

                           表79

               伴随及不伴随认知不能(CD)的ADHD

                     不伴随CD的ADHD           伴随CD的ADHD 认知障碍                 无                       存在 语言IQ                   正常                     低 涉及的大脑区域           前额叶                   前额叶/颞叶 涉及的大脑神经核         盖区腹侧                 蓝斑 初级神经递质             多巴胺                   去甲肾上腺素 次级神经递质             NA、GABA、5羟色胺及其它  多巴胺、GABA、

                                              5羟色胺及其它 功能                     分析信息和起始应答       适应和处理新刺激 注意缺陷型               广泛                     选择性 执行功能障碍             存在                     通常不存在 侯选基因                 DRD2、DRD4、DRD5、       ADRA1A-ID、ADRA2A、ADRA2C、

                           DAT1、DBH          DBH、NT、PNMT

Halperin等(1997)报道，血浆MHPG与语言IQ(但不是行为IQ) 之间的相关性同因暴力或重大的犯罪而被捕的少年犯的语言IQ较低的 发现非常相似(Hirschi和Hindelang，1977；Miller，1988； Shulman，1951；Moffitt和Silva，1988)。血浆MHPG水平与低语言 IQ之间的负相关说明在反社会行为中可能涉及NA基因。

因为肾上腺素α2受体是可乐定的作用部位，富含于前额和颅顶 部的注意力中心，并且在突触的NA转换中起调节作用，因而发明人试 图证实肾上腺素α2A(ADRA2A)基因、或肾上腺素α2C(ADRA2C)基 因或多巴胺β羟化酶基因的基因型的差异是否与ADHD本身相关，以及 是否与ADHD+认知障碍亚型优先相关。发明人应用了ADRD2A基因启动 子区域中的MspI多态性(Lario等，1997)、ARDA2C基因的二核苷酸 重复多态性(Riess等，1992)和DBH基因的TaqIB1/12多态性(d’Amato 等，1989；Wu等，1997)。

方法  在325名受试者中决定ADRA2A和DBH中的单碱基对多态性 和ADRA2C中的二核苷酸重复多态性的基因型频率，其中267人为抽动 秽语综合征患者，58人为正常对照。ADHD和LD行为变量通过父母或自 己填写的调查表和直接会面的方式评价。为了评估与反社会行为的可 能联系，还评价了品行障碍和对立违抗障碍的症状。

研究组由325名不相关的受试者组成。其中267人符合DSM-III-R 和DSM-IV的抽动秽语综合征的诊断标准且均按D.E.C.直接会面。剩下 的58人为对照。所有人均为非西班牙裔白种人。TS患者来自希望医疗 中心城(City of Hope Medical Center)抽动秽语综合征诊所。发明 人先前将TS患者分成了以下几组，轻度(一级，慢性抽动，很轻不用 治疗)、中度(二级，需要治疗)和重度(三级，对他们生活中的某 些方面有很严重的影响)(Comings，1990；Comings和Comings 1987b；Comings和Comings，1984)。在TS患者中，25％为三级，12％ 为一级，剩下的71％为二级。TS和ADHD是相似的障碍，大多数到诊所 就诊的患者同时患有ADHD(Comings，1990；Coming和 Comings，1987b；Comings和Comings，1984)。对照、不伴随ADHD的 TS患者和伴随ADHD的TS患者的存在，使得这组研究尤其适合于检测不 同基因的等位基因与ADHD(作为连续性状变量)的相关性。TS患者和对 照在其它地方均有详细的描述(Comings等，1996j； Comings，1994a；Comings 1994b；Comings，1995a； Comings，1995b)。TS患者的平均年龄为18.0岁(S.D.13.2)。但 是，大多数为较大的儿童和青少年，29％为21及21岁以上。对照组的 平均年龄为46.3岁(S.D.15.38)。

对照组和TS组的每一位均需要填写一张调查表，其中包括所有的 DSM-III、DSM-III-R和DSM-IV对ADHD的诊断标准。对较大的受试者 要求对他们小时侯的情况回答。ADHD评分是以DSM-IV(1994)中对 ADHD的诊断标准为基础的。问题是问在儿童及青少年时代是否存在这 些症状，是没有或很少发生(评分＝0)，偶尔存在(评分＝1)，还是 一直存在(评分＝2)？所有这三个回答被用来完全区别三个严重程度 的患者。ADHD评分是DSM-IV中无注意力、冲动和多动症状的总和。

如果孩子不到14岁，由父母填写调查表，14岁或14岁以上的受试 者由本人填写或在父母的帮助下填写。亲自同受试者及其家属一起看 调查表以确保其正确性。

为了评价合作障碍问题的存在，受试者被要求回答下面三个问 题：1)你曾被分到过教育困难(EH)、学习困难(LH)或学习障碍 (LD)特殊班吗？2)你曾被分到过智力班吗？3)你曾经被告知你有 学习障碍吗？每一个问题得分为：不，得0分；是，得1分。将得分相 加形成LD的得分。在加利福尼亚参加上述特殊班中的任何一个均需要 一个或更多的教育心理学家的全面的评估，即评价该学生比其同伴落 后两年或两年以上。

为了评价在小学的学习成绩，受试者被要求回答“从一年级到六 年级你的a)数学、b)阅读、c)写作成绩在总体上是平均、平均以 下、还是平均以上？”，平均以上得0分，平均得1分，平均以下得2 分，将各科得分相加得到GSAP得分。

使用了相似的品行障碍和对立违抗障碍DSM-IV诊断标准的0、1和 2分级。

如果受试者符合DSM-IV对注意缺陷/多动障碍联合型、无注意力 优势型或多动优势型的诊断标准，则被认为有严重的ADHD问题。如果 受试者被分到过上述的特殊教育班或曾被告知有学习障碍，则被认为 有严重的学习障碍。符合ADHD和学习障碍诊断标准的受试者被分为 A+LD+组；不符合ADHD而符合学习障碍的诊断标准的受试者被分为A- LD+组；符合ADHD而不符合学习障碍的诊断标准的受试者被分为A+LD- 组；对二者均不符合的受试者分为A-LD-组。相似的分组在GSAP得分 中应用，得分0-4者为GS-，得分为5-6者为GS+。

调查表(Comings，1990)还提供了一个高度结构化的方法，该方 法可提供与ADHD相关的数量性状：ADHD量表的次级得分，学习、小学 学习成绩、品行障碍和对立行为等问题。通过比较这种工具和接诊者 使用相同结构化工具的情况，作为症状评估方法基础的该调查表的准 确性、实用性和敏感性已经被其他人证实(Gadow和Sprafkin，1994； Grayson和Carlson，1991)。发明人查阅了每一个受试者得调查 表，表明它们可以准确反映那些通过亲自接诊所得到的信息。

ADRA2A是利用启动子区的单碱基对MspI多态性确定基因型的 (Lario等.1997)。利用了它们的PCRTM条件和引物。ADRA2C是利用 二核苷酸重复多态性和PCRTM程序(Riess等，1992)。用0.1uM荧光标 记的引物，通过聚合酶链式反应(PCRTM)扩增靶DNA。PCRTM产物用 100ul去离子水稀释，取0.5ul加入到2.5ul的75ul甲酰胺+9.5ul ROX 标准液+9.5ul蓝糊精染料的混合物中。在92℃变性2秒钟，将样品加 入Applied Biosystem 373 DNA测序仪(Applied Biosystem，Inc.，(ABI)Forster City，CA)的6％PAGE中，并在1200 伏特和恒定30W的条件下跑胶4小时。凝胶用内部标准(ROX 500)处 理和分析。根据颜色和片段大小，峰被Genotyper(1.1版)(Applied Biosystem，Inc.)识别.在183bp和185bp产生主要等位基因，较小频 率的181bp等位基因，另外还有几个非常小量的等位基因。这些被分 成三个基因型：≤183/≤183bp＝1，杂合体＝2，≤183/≤183bp＝3。

用TaqIB1/B2多态性确定DBH基因的基因型(d’Amato 等，1989)。但这原先需要与标记的DBH克隆进行DNA印迹分析，发明 人采取了以PCRTM为基础的检测(Wu等，1997)。

多巴胺基因(DRD2和DAT1)的基因分型在先前已被描述(Comings 等，1996)，发明人用微卫星多态性及其技术确定DRD5基因的基因型 (Sherrington等，1994)。

进行了三种类型的统计分析。首先，为了评价ADRA2A和ADRA2C基 因型的作用，对ADHD得分(每个基因得分为11＝1，12＝2，22＝3)进行 了方差分析。一旦基因型分组法被选定，每一个基因被指定为一个两 分性变量来表明相关基因型的存在与否。A2A+A2C得分被用来评价两 个基因的累加性效应。在这里，ADRA2A得分为0和ADRDA2C得分为0的 受试者记为0分。ADRA2A得分为1和ADRA2C得分为1的受试者记为2分， 任何一个基因的得分为1分者记为1分。NA基因的得分是由所有三个基 因的单个得分相加而得。

为了避免Bonferroni校正，将六个行为的得分作为一个组用多元 方差分析法进行检查。每个基因单独及各个基因联合起来进行这种检 查。为了评估每个基因单独及联合起来占得分差异的百分率，进行了 单个基因得分、A2A+A2C得分和NA基因得分与行为得分之间的线性回 归分析。基于先前各个NA基因的作用有累加性效应的假设，为了评估 这种作用的大小，对ADRA2A和ADRA2C或ADRA2A、ADRA2C和DBH的累加 性效应的结果进行了线性方差分析(多项式子命令＝1)。对在α为 0.5时有显著性差异的均数进行了post hoc分析。所有的统计分析均 用SPSS统计软件包进行处理(SPSS，Inc，Chicago，IL)。

结果为了检查ADRA2A基因型对ADHD得分的作用，进行了方差分 析。携带11基因型的受试者的平均得分为17.4(n＝180，SD＝11.1)， 12基因型为19.05(n＝125，SD＝10.52)，20基因型为22.05(n＝20， SD＝11.67)，F比＝2.05，p＝0.13。在多元方差分析中，ADRA2A基因 的得分如下：11＝1，12＝2，22＝3；在回归分析中，它的得分为：11， 12＝0，22＝1。

对六个得分进行了多元方差分析(表80A)。ADRA2A基因与LD、 GSAP、冲动性和总的MANOVA有显著性关联。对ADHD、LD、GSAP、CD和 ODD得分进行了线性回归分析(表3)。它与LD和GSAP得分有显著性关 联，如果经Bonferroni校正(α为0.05/5或0.01)，LD得分仍有显著 性。

                 表80

  ADRA2A、ADRA2C和DBH基因的多元方差分析

               (N＝325)

   评分                   F-比                  p A.ADRA2A基因   无注意力            1.45                 .236   冲动性              3.67                 .027   多动                1.23                 .295   GSAP                3.42                 .034   LD                  3.80                 .023   品行                0.27                 .763   ODD                 1.21                 .299   总和                1.81                 .034 B.ADRA2C基因   无注意力            5.18                 .006   冲动性              4.11                 .017   多动                2.82                 .061   GSAP                1.91                 .149   LD                  1.78                 .169   品行                1.44                 .239   ODD                 1.64                 .194   总和(Wilkes)        1.09                 .360 C.DBH基因   无注意力            2.02                 .134   冲动性              1.28                 .278   多动                1.12                 .325   GSAP                2.48                 .086   LD                  1.40                 .506   品行                        1.40                  .247   ODD                         1.71                  .182

     Scores                 F-ratio              p   总合(Wilkes)                   0.53               .915 D.ADRA24+ADRA2C基因   无注意力                       5.20               .006   冲动性                         5.51               .004   多动                           3.73               .025   GSAP                           5.26               .006   LD                             5.40               .005   品行                           0.35               .709   ODD                            3.06               .050   总和(Wilkes)                   1.62               .070 E.ADRA2A+ADRA2C+DBH基因   无注意力                       5.25               .002   冲动性                         4.21               .006   多动                           3.76               .011   GSAP                           5.01               .002   LD                             3.62               .013   品行                           0.85               .465   ODD                            3.38               .018   总和(wilkes)                   1.49               .070 F.ADRA2A+ADRA2C+DBH基因+DRD2+DAT1+DRD5   无注意力                       4.81             ＜.001   冲动性                         5.31             ＜.001   多动                           4.44             ＜.010   GSAP                           4.41             ＜.001   LD                             2.91               .009   品行                           2.80               .011   ODD                            4.73             ＜.001   总和(Wilkes)                   1.58               .01

                      表81

      ADRA2A，ADRA2C和DHB基因的线性回归分析

                   (N＝325)

                r        r2       T          p ADHD得分   ADRA2A基因       .086      .007      1.57      .117   ADRA2C基因       .161      .026      2.94      .0035   DBH基因          .107      .011      1.94      .054   A2A+A2基因       .181      .033      3.32      .0010   All3NA基因       .200      .040      3.67      .0003   All3DA基因       .157      .025      2.85      .0047   NA+DA基因        .247      .061      4.56    ＜.0001 LD得分   ADRA2A基因       .152      .023      2.78      .0056   ADRA2C基因       .077      .006      1.40      .162   DBH基因          .057      .003      1.04      .291   A2A+A2C          .136      .019      2.49      .013   All3NA基因       .136      .018      2.48      .0135   All3DA基因       .028      .001      0.51      .61   NA+DA基因        .111      .012      1.97      .049 GSAP得分   ADRA2A基因       .128      .016      2.32      .020   ADRA2C基因       .102      .010      1.86      .065   DBH基因          .122      .015      2.22      .027   A2A+A2C          .148      .022      2.70      .007   All3NA基因       .185      .034      3.40      .0008   All3DA基因       .097      .009      1.73      .085

                  r          r2        T           p

  NA+DA基因       .203       .042       3.66       .0003

品行得分

  ADRA2A基因      .0008      .0000      0.01       .989

  ADRA2C基因      .045       .002       0.83       .409

  DBH基因         .088       .008       1.59       .113

  A2A+A2C         .041       .002       0.74       .462

  All3NA基因      .085       .007       1.54       .125

  All3DA基因      .071       .005       1.25       .211

  NA+DA基因       .109       .012       1.92       .054

ODD得分

  ADRA2A基因      .085       .007       1.55       .122

  ADRA2C基因      .093       .009       1.70       .091

  DBH基因         .100       .010       1.81       .070

  A2A+A2C         .121       .015       2.20       .028

  All3NA基因      .151       .023       2.77       .006

  All3DA基因      .162       .026       2.89       .004

  NA+DA基因       .221       .049       4.00       .0001

为了检测ADRA2C基因型对ADHD得分的作用，进行了方差分析。携 带11基因型的受试者的平均得分为18.9(n＝122，SD＝10.41)，12基因 型为15.90(n＝112，SD＝10.99)，22基因型为20.54(n＝91， SD＝11.1)，F比＝4.90，p＝0.0080。通过post hoc Tukey检测12杂合 体的均数显著低于11和22纯合体，说明存在负性杂种优势(Commings 和MacMurray，1998)。因而，在线性回归分析中，ADRA2C基因的得分 如下：12＝0，11或22＝1。

对ADRA2C基因得分与六个行为得分的关系进行了的多元方差分析 (表80-B)。ADRA2C与无注意力和冲动性有显著的相关性。在线性回 归分析中(表81)，与ADHD有显著的相关性，在α为0.01时，仍具有 显著性。

发明人先前在TS-ADHD患者中研究了多巴胺-B羟化酶基因 (Comings等，1996j)，并发现TaqB1等位基因的存在与ADHD相关(d’ Amato等，1989)。因而，发明人对DBH基因得分规定为：22＝0，11或 12＝1。通过多元方差分析(表80-C)，发现没有一个得分具有显著 性。在线性回归分析中，DBH基因与GSAP得分呈显著相关，α为0.01 时则无显著性。

为了检测两个肾上腺素α2受体基因的累加性效应，将两个单个 基因的得分相加得到A2A+A2C得分。在325个受试者中，得分为0的有 106人(32.6％)，得分为1的有205人(63.1％)，得分为2的有14人 (4.3％)。对A2A+A2C得分与六个行为得分的多元方差分析的结果列 于表80-D。结果对无注意力、冲动性、多动、GSAP、LD和ODD得分有 显著性。在α为0.01时，ADHD和GSAP得分仍有显著性。对除了CD得分 以外的其它行为得分的线性方差分析表明，携带有0、1或2个变异基 因的受试者的得分是逐渐增加的。ADHD、无注意力、冲动性、多动和 GSAP的得分均具有显著性，p＜0.01。

为检查三个肾上腺素基因的可能的累加性效应，将ADRA2A、 ADRA2C和DBH基因的得分相加得到NA基因得分。在325个受试者中，得 分为0的有36人(11.1％)，得分为1的有132人(40.6％)，得分为2的 有145人(44.6％)，得分为3的有12人(3.7％)。对NA基因的得分与 六个行为得分的多元方差分析的结果列于表80-E。无注意力、冲动 性、多动、GSAP、LD及ODD的得分均有显著性。在线性回归分析中 (表81)，ADHD、LD、GSAP和ODD得分均有显著性，在α为0.01时， ADHD、GSAP和ODD仍有显著性。

ADHD的次级得分、LD、GSAP和ODD得分的线性方差分析表明，携 带有0、1、2或3个变异基因的患者的得分是逐渐增加的。ADHD、多 动、无注意力、GSAP和ODD的得分具有显著性，p＜0.01。

发明人用线性方差分析对NA基因得分与ADHD-LD-、ADHD+LD-、 ADHD-LD+、ADHD+LD+四个组之间的关系进行了卡方检验，结果列于 表82。结果表明携带所有三个NA基因变体的患者频率在上述四个组中 是逐渐增加的：在ADHD-LD-组中为0.6％、在ADHD+LD-组中为5.4％、 在ADHD-LD+组中为7.7％、在ADHD+LD+组中为11.4％。在上述四个组 中，没有携带NA变异基因的患者的频率是逐渐减少的，分别为 14.4％、8.9％、7.7％、2.9％。当对完全4×4表格进行线性趋势卡方检 验(Cohran，1954)时，p＝0.0005。如果将A-LD+和A+LD+合并， Pearson卡方值＝17.6，d.f.＝6，p＝0.007，线性趋势卡方值 ＝12.9，d.f.＝1，p＝0.0003。

                             表82

     NA基因评分对ADHD-LD-、ADHD+LD-、ADHD-LD+、ADHD+LD+组

                        的卡方检验分析

                         [病例数(％)]

NA得分    A-LD+         A+LD-       A-LD+      A+LD-       T

0         24(14.5)      10(8.9)     1(7.7)     1(2.9)      36(11.1)

1         73(44.2)      41(36.6)    4(30.8)    13(37.1)    131(40.3)

2         67(40.6)      55(49.1)    7(53.8)    17(48.6)    146(44.9)

3         1(0.6)        6(5.4)      1(7.7)     4(11.4)     12(3.7)

T         165(51.1)     112(34.3)   13(4.0)    35(10.7)    325(100.0)

Pearson卡方18.3，df＝9，p＝0.03

线性趋势卡方12.0，df＝1，p＝0.0005

因为NA基因与GSAP得分的相关性比与LD得分的相关性更大，发明 人还检测了GSAP得分和NA基因得分的交叉表格。结果表明NA基因得分 为3分的患者的频率范围是：GSAP得分为0到2的患者是1.6％，GSAP得 分为3到4的患者是0.8％，GSAP得分为5到6的患者是11.8％。在二者得 分的整个范围内，线性趋势卡方检验有显著性，p＝0.004。因而，不 依赖于ADHD的存在或不存在，那些2或3个科目的成绩低于平均值的儿 童最有可能携带变异的NA基因。

为了检测ADHD存在与否的作用，受试者再一次被分为四组，在这 里GS+是GSAP得分为5到6，GS-是GSAP得分为0到4，四个组分别是A- GS-、A+GS-、A-GS+和A+GS+。与NA得分的卡方检验的结果列于表83。 在这四个组中，NA基因得分为3的受试者的频率是逐渐增加的，分别 为0.6％、2.4％、4.8％、12.5％。4×4表格的线性趋势卡方检验有显著 性，p＝0.0003。

                             表83

    NA基因评分对A-GS-、A+GS-、A-GS+和A+GS+组的卡方检验分析

                          [病例数(％)]

NA得分    A-GS+        A+GS-       A-GS+      A+GS-       T

0         23(14.7)     7(8.4)      2(9.5)     4(6.3)      36(11.1)

1         71(45.2)     31(37.3)    6(28.6)    23(35.9)    131(40.3)

2         62(39.5)     43(51.8)    12(57.1)   29(45.3)    146(44.9)

3         1(0.6)       2(2.4)      1(4.8)     8(12.5)     12(3.7)

T         157(48.3)    83(25.5)    21(6.5)    64(19.7)    325(100.0)

Pearson卡方25.89，df＝9，p＝0.002

线性趋势卡方12.97，df＝1，p＝0.0003。

发明人分别检测了低于平均成绩的数学、阅读和写作，对NA基因 得分与三个科目的得分进行了卡方检验，三个科目的得分标准为：平 均或平均以上＝0，平均以下＝1。在数学科目中，Pearson X2＝9.17，p＝0.027，线性X2＝4.18，p＝0.04。在阅读科目中，Pearson X2＝15.14，p＝0.0017，线性X2＝13.14，p＝0.0003。在写作科 目中，Pearson X2＝13.18，p＝0.004，线性X2＝10.54，p ＝0.001。因而，虽然在这三个科目中低于平均成绩与NA基因的得分 有显著的相关性，但对阅读的作用最强，写作次之，数学最小。

为了比较，发明人还检测了多巴胺基因得分对各个科目成绩的作 用。在阅读科目中，Pearson X2＝12.08，p＝0.007，线性 X2＝8.24，p＝0.004。在数学科目中，Pearson X2＝2.90，p＝0.41， 线性X2＝2.21，p＝0.137。在写作科目中，Pearson X2＝ 11.11，p＝0.011，线性X2＝0.02。因而，多巴胺基因在阅读成绩 中也起作用，但在阅读和数学中起的作用较小。

为了检测NA基因相对多巴胺(DA)基因的重要性，发明人将在多 元方差分析中包括了DA的得分(表80-F)。对所有六个基因，无注意 力、冲动性、多动、GSAP、LD、品行和ODD得分均有显著性。在对所 有六个基因的线性回归分析中(表81)，ADHD、LD、GSAP和ODD得分 有显著的相关性。象先前已经表明的那样(Comings等，1996)，多 巴胺基因在ADHD中起重要的作用。这被在此应用的三个基因证实。它 们占ADHD得分差异的2.5％，当与NA基因相加时，所有的六个基因占差 异的6.1％(p＜0.0001)。与之相反，AD基因在LD和GSAP中起的作用很 小。然而，从GSAP得分来看，差异的百分率从三个NA基因独自起作用 时3.4％增加到与DA基因共同作用时的4.2％。虽然DA基因在行为得分中 起的作用很小，但在ODD得分中起重要作用，占差异的2.6％ (p＝0.004)，所有六个基因占ODD得分差异的4.9％(p＝0.0001)。

发明人检测了四个ADHD：LD组的三个DA基因的频率，所有三个基 因在10％的ADHD-LD-组中、19.8％ADHD+LD-组中、15.48％ADHD-LD+组 中和17.1％ADHD+LD+组中存在。因而，与NA基因相反，在四个组之间 没有逐渐增加的现象出现。在完全4×4表格中，Pearson卡方值 ＝10.48，d.f.＝9，p＝0.31，线性卡方值＝0.90，d.f.＝1，p＝0.34。

多元方差分析表明了在无注意力、冲动性、多动、学习障碍、小 学学习成绩和对立违抗行为的数量得分与被检测的三个基因之间有显 著的相关性。相关性最大的是三个基因的累加效应(p＝0.0003)。变 异NA基因的数目在下列患者分组中依次显著增加：无ADHD(A-)或无 学习障碍(LD-)、A+LD-、A-LD+、A+LD+(p＝0.0005)，但在多巴 胺基因中并无可比较的作用。

讨论  两个ADHD亚型-伴随或不伴随认知缺陷，涉及到大脑的不 同区域、不同的神经递质和不同的几组基因(表80)-的鉴别可能对 ADHD儿童的诊断和治疗有相当大的价值。然而，必须记住的是ADHD是 多基因性疾病(Comings，1996a)，从双亲中遗传了多个变异基因 (Comings，1996b)。在有这两种类型成分的多数儿童和成年人中存在 相当大的重叠。

然而，象在表82和表83中显示的那样，NA代谢缺陷和变异NA基因 同无认知缺陷的ADHD儿童相比可能更多地涉及有认知缺陷的ADHD儿 童。

观察累加性得分还有这样的优点，如果一个基因在给定的受试者 或一组受试者中不起作用，但是另一个具有相似功能的基因起作用， 这可能包括了二者的效应。这在本研究中被很好地证明。例如，当三 个NA基因的表型作用被单个独立检测时，多元方差分析的显著性水平 是较低的(表80-A、表80-B、表80-C)，并且在用线性回归分析检验 五个得分时，相关系数并不能支持Bonferroni校正。然而，当将 ADR2A、ADR2C基因或ADR2A、ADR2CD、DBH基因相加时，其结果就更 可靠。当用线性方差分析检测累进作用时，也是如此。用ADHD得分作 为一个例子，单因素回归分析表明，每一个基因单独作用仅占数量得 分差异的0.7％到2.6％，而当ADR2A和ADR2C基因相加时，占差异的3.3％ (p＝0.001)，当将三个NA基因相加时，则占差异的4.0％ (p＝0.0003)。三个多巴胺基因占ADHD得分差异的2.5％，当将所有六 个基因相加时，则占差异的6.1％(p＜0.0001)。这说明NA和AD基因在 ADHD中起累加性效应。

双生子研究表明累加遗传效应占ADHD的70％或更多(Sherman 等，1997a；Sherman等，1997b；Gillis等，1992)。这说明三个NA 基因大约占ADHD遗传成分的6％，NA加DA基因大约占10％。虽然这看起 来小了点，但当越来越多的基因被累加时，百分比就会持续升高 (Comings，等，1998)。值得注意的是，尽管这六个基因仅占ADHD得 分差异的6.1％，基于0.25的相关系数，依靠其它变量，这六个基因对 ADHD的预测性达25％。

NA基因对GSAP的累加性效应也给人以深刻印象，单个基因占差异 的百分率为1.0％到1.6％，而三个基因的累加性效应占3.4％。

表83的结果表明，在A-LD-、A+LD-、A-LD+和A+LD+组中，携带2 个或更多的变异NA基因的患者频率是逐渐增加的。然而，另一种假说 认为，ADHD+LD或ADHD+其它共发障碍组仅仅是代表带有更多的ADHD基 因的遗传负荷的一组。发明人通过检测三个不同的多巴胺能基因在三 个组中是否有同样的累加性效应，可以检验这种假说。在受试者中， 发明人观察到六个不同的多巴胺基因(DRD1、DRD2、DRD3、DRD4、 DRD5和DAT)中，DRD2、DAT和DRD5对ADHD得分有非常明显的累加性效 应，它们单独作用时占差异的0.5％到1.0％，而加在一起时占差异的 2.5％。因而，发明人制订了一个多巴胺基因评分指标，范围也是从0 到3。携带所有三个变异基因的患者的频率范围从A-LD-组的10％， A+LD-组的19.8％，A-LD+组的15.4％到A+LD+组的17.1％。这样，同这 种假说相反，A+LD+组与A+LD-组比较，没有增加对三个多巴胺基因的 遗传负荷。另外，对整个多巴胺基因的得分范围来说，Pearson和线 性趋势卡方检验的结果均无显著性。这同NA得分的线性卡方检验 p＝0.0005明显不同。这些结果进一步支持Halerin-Pliszka假说b， 即在ADHD+LD个体中NA基因更易被涉及，而在无论有无认知障碍的 ADHD个体中，对多巴胺基因的涉及是平等的。

另一个特征是在由变异NA基因的数目决定的区分上，简单地询问 个人在学校的数学、阅读和写作的成绩同询问他们是否上过特殊LD学 习班的效果是一样好的。当单独检测时，对阅读成绩的作用最大，对 写作成绩的作用几乎相同，对数学成绩的作用最小。这些结果说明在 小学，阅读、写作和数学成绩低于平均成绩的患有ADHD的儿童最有可 能携带变异的NA基因。这还表明需要做长期的双盲实验，验证可乐定 对这些儿童学习问题的治疗功效。在发明人之一(D.E.C)进行的为 期几个月的临床实验中，学习成绩不好的儿童皮下单独应用可乐定可 以显著地提高学习成绩。

低语言IQ和青少年的攻击性反社会行为的相关性在许多研究中被 重复(Hirschi和Hindelang，1977；Miller，1988；Shulman，1951； Moffitt和Silva，1988；Moffitt，1990)。在控制了社会经济状况、 种族、学习成绩和动机等因素之后，低语言IQ和少年犯罪的相关性依 然存在(Moffitt，1993)。Moffitt和Silva(Moffitt和Silva 1988) 的研究还显示了低IQ和少年犯罪的相关性不是一个较容易被警察抓到 的低智谋犯罪的假象，因为通过面谈确认的未被发现的少年罪犯也有 较低的IQ。发明人为发现同品行障碍和对立违抗障碍的相关性，检测 了NA基因。虽然三个NA基因的任何一个均同品行障碍没有明显的相关 性，但同对立违抗障碍有轻度的相关性。

用患有TS的患者研究ADHD的可能性即有优点又有缺点。一个实用 的优点是发明人在TS患者中收集了1500份DNA样品，他们均完成了一 个广泛的高度结构化的调查表，这些调查表是以“诊断接诊程序” (Robins等，1981)和DSM-IIIR标准为基础的。这使得发明人可以选 择症状相对严重的研究对象，他们比那些症状轻者更有可能有较高的 遗传负荷。较极端表型的应用在遗传学研究中被广泛评论(Risch和 Zhang，1996；Plomin等，1994)。既然在临床上，大多数(但并不是 全部)TS患者还患有ADHD，这提供了一组患有和不患有ADHD的患者。 这对发明人检测完整的ADHD数量性状范围的方法尤其有用，因为它与 仅研究ADHD患者相比提供了更为广泛的评分范围(Comings 等，1996j)。TS患者的人数也是有用的，因为在先证者和他们的亲 属中共患的疾病如ADHD、品行障碍、对立违抗障碍和学习障碍等的频 率是高的(Knell和Comings，1993；Comings和Comings，1987； Comings，1995a，Comings 1995b)。Biederman和同事报道ADHD先证 者和他们的亲属有同样高程度的共发病程度(Biederman等，1990a，b； Biederman等1993)。应用TS患者的一个潜在的缺点是尽管在临床 和遗传方面中有相当大的重叠，但带有抽动的ADHD患者与不带有抽动 的ADHD患者相比，可能携带略微不同的变异基因群。因而，在不带有 ADHD的患者中重复这些发现是重要的。这个研究的更进一步的限制是 依赖于父母和自己报告的调查表，应用WISC-R、WRAT-R和其它直接的 检测是最理想的。但基于亲自接诊所有被研究的患者得出的经验，这 些调查表准确地反映了患者各自的行为。另外，因为发明人从未观察 到实际上没有显著的学习问题的孩子曾被分到过EH、LD、LD或特殊教 育班的例子，发明人相信以这种方式对LD得分的评估表现了对认知不 能的可靠的测试。有意思的是对一个儿童的两个或更多科目(数学、 阅读、写作)的成绩是否低于平均成绩的评估与是否上过LD班相比， 提供了一个更好的NA基因得分的区别。这表明实际的学习成绩能提供 认知不能的可靠评估，并且说明许多学习有障碍的儿童从未被放入特 殊班。

因为ADRA2A基因的22纯合体很少，并且同时携带两个肾上腺素α 2基因或三个NA基因的患者人数也很少，有人可能会认为目前的结果 是从这些少数纯合体的高得分存在的偶然性中得来的。为了检验这 点，发明人还将ADRA2A基因进行了如下的评分：11＝0，12或22＝1。当 用这种评分方法将两个α2基因联合时，多元方差分析对无注意力 (p＝0.010)、冲动性(p＜0.001)和多动(p＝0.021)仍有显著性，当 用线性回归分析检测时，这种联合占差异的3.1％(p＝0.004)。当以这 种方式评分的ADRA2A基因被加到ADRA2C和DBH基因时，则有66个患者 的NA基因的得分为3。多元方差分析对无注意力(p＝0.001)、冲动性 (p＝0.001)和多动(p＝0.004)得分有显著性，线性回归分析中，NA得 分占差异的4.1％(p＝0.0002)。这些结果说明目前的发现并不是由于 少数ADRD2A 22患者的高得分的偶然出现。

发明人推测增加在本研究中未被涉及的几个另外的NA基因，可能 会使本结果被进一步证实。这些基因包括去甲肾上腺素转运蛋白 (NT)、肾上腺素α1受体(ADRA1A到ADRA1D)和PNMT基因，所有这 些均在突触的NA水平调节中起作用。

                     实施例28

神经元的烟碱样乙酰胆碱受体α4(CHRNA4)基因与注意缺陷多

            动障碍和抽动-秽语综合征的关联

前言  尼古丁是一种成瘾性药物，它刺激多巴胺报偿通路，提高 注意力、觉醒、学习和记忆，在抽动-秽语综合征和ADHD的治疗中被 成功地皮下应用。最突出的烟碱样乙酰胆碱受体的神经元形式是α4 β2。发明人提出假说认为神经元烟碱样α4受体CHRNA4基因可能与 ADHD或抽动-秽语综合征有关。

神经元烟碱样受体由α(α2-α9)和β亚单位(β2-β4)组 成，它们围绕一个中央通道排列(Unwin，1993)。α亚单位拥有一对 半胱氨酸，这与烟碱样乙酰胆碱受体的肌肉型α1亚单位相似，β亚 单位没有这对半胱氨酸。主要的神经元烟碱样受体亚型由α4和β2组 成(Whiting等，1991；Schoepfer等1988)。因为α4和β2是在脑中 最广泛表达的亚单位(Wada等，1989；Whiting和Lindstrom，1988； Whiting等，1991)，发明人试图在抽动-秽语综合征和ADHD中检测 CHRNA4基因的等位基因与CHRNB2基因的等位基因之间的相关性。因为 只有CHRNA4基因有可利用的适合的多态性(Weiland和 Steinlein，1996)，所以发明人检测的基因是CHRNA4。

方法在282个非相关的非西班牙裔白种人抽动-秽语综合征患者 和63个对照中，发明人检测了CHRNA4基因的染色体组VNTR多态性等位 基因的相关性。研究组由345个非相关的患者组成，其中282人符合 DSM-IV诊断标准并均由D.E.C.亲自接诊，剩下的63人为正常对照。TS 患者来自希望医疗中心城的抽动-秽语综合征诊所。这些人与在实施 例27中叙述的用于研究去甲肾上腺素基因在ADHD和学习障碍中的作用 的患者是来自同一组。行为评分和ADHD与学习障碍存在与否的区分同 在那篇文章中叙述的一样。ADHD评分是以DSM-IV(诊断，1994)中ADHD 的标准为基础的。问题是问在儿童及青少年时代是否存在这些症状， 是没有或很少发生(评分＝0)，偶尔存在(评分＝1)，还是一直存在 (评分＝2)？所有这三个回答被用来完全区别三个严重程度。ADHD评 分是DSM-IV中无注意力、冲动性和多动症状的总和。

应用由Welland和Steinlein描述的CHRNA4基因第一个内含子的 多态性(Welland和Steinlein，1996)，并应用他们报道的PCRTM引 物和反应条件。在88个不相关的白种人的研究中，确定有14个等位基 因，长度范围为196到264bp(见表84)。

用聚合酶链式反应扩增靶DNA，所用的每种荧光标记引物的量为 0.2uM。PCTTM产物用去离子水稀释10倍，取0.5ul稀释液加到2.5ul的 混合液中，后者是由75ul甲酰胺+9.5ulROX标准液+9.5ul蓝糊精染料 配置成。在92℃变性2分钟，将样品加到Applied Biosystems 373 DNA序列仪(Applied Biosystems，Inc.，(ABI)Foster City，CA) 的6％PAGE上，在1200伏特和稳定的30W条件下跑胶5小时。凝胶用内部 标准(ROX 500)进行分析。依据片段的颜色和大小，峰用基因分型 仪识别(Applied Biosystems，Inc.)。

结果发明人在本研究中鉴定了345个个体的基因型，在其它的研 究中也鉴定了几百个个体。除了Welland和Steinlein报道的以外 (Welland和Steinlein，1996)，发明人在所有的研究中还发现了许 多另外的等位基因，共21个。在本研究的受试者中17个被观察到。因 为Welland和Steinlein(Welland和Steinlein，1996)利用了银 染，并从胶的顶部开始计数等位基因，直到底部，所以他们的低编号 等位基因的bp数是最高的，而编号最大的等位基因是最低的。因为 ABI序列仪是在它们到达胶的底部时开始扫描区带的，所以在发明人 的程序中，低编号等位基因代表最低bp数的等位基因而最高编号等位 基因代表最大的等位基因。虽然发明人最初作了很多努力试图应用同 Welland和Steinlein(Welland和Steinlein，1996)一样的编号，但由 于测序的结果表明等位基因的bp数大小不同(尤其在末端)，这是很 困难的。因而，发明人应用了ABI编号系统，为了比较，发明人将两 种命名法列于表84。

表85列出了四种PCRTM产物的测序结果。这证实了这种VNTR多态 性的复杂性。

在主要等位基因中，9、12、14和16等位基因的频率在TS患者中 较高，在对照组中13、15和18等位基因的频率较高。用卡方检验分析 17个等位基因的结果为：X2＝33.65，d.f.＝16 p＝0.0061。当分析被限 定于对照组或TS组中的频率为0.05或更大的患者时，结果为： X2＝71.6，d.f.＝6，p＜0.0000001。等位基因频率差别最大的是#9等位 基因。

为了保持分析的简便，为了检验数量变量和纯合体与杂合体的效 应，为了产生回归分析变量，CNRNA4基因的评分标准如下：x/x基因 型(非-9/非-9)＝0，9/x＝2，9/9＝3。

除了在实施例28中对去甲肾上腺素基因(Comings等，1998)检 测的一组行为变量以外，发明人检测了总的抽动得分(Comings 等，1996)。用多元方差分析法同时检测CNRNA4基因得分与这些变量的 相关性。结果表明CNRNA4基因与小学的学习表现(GSAP)、学习障碍 (LD)、对立违抗障碍(ODD)及多动得分的相关性是显著的。

为了评价不同基因型对这些得分的影响，进行了总ADHD得分的方 差检验和检测每个差异显著性的多元方差检验(在p＜0.1)(表87)。 结果说明对9/9纯合体每个得分都是最高的。

因为还有另外一个问题即CNRNA4基因与吸烟是否有一些相关性， 发明人在17岁以上的患者中检测了两个变量：“吸过烟”和“每天7 包”，这没有显著性，9/9纯合体患者每天吸烟量是0.5包，其它基因 型是0.10到0.20包。在这里仅有9个9/9纯合体的患者，较大的样本数 可能会得到显著性结果。

当用卡方检验分析CNRNA4基因型与ADHD-LD-、ADHD+LD-、ADHD- LD+及ADHD+LD+四组的关系时，9/9基因型在上述四组中的频率是增加 的，依次为5.6％、6.0％、7.1％和13.5％。Pearson卡方检验时，总的 相关性是不显著的(p＝0.385)，线性卡方检验时为临界相关 (p＝0.051)。因而不象被检测的去甲肾上腺素那样(Comings 等，1998)，CNRNA4基因在与大脑颅顶叶相关的ADHD-LD型中起作用的 证据很少。

基因型变量对总ADHD得分的单因素回归分析的结果为： r＝0.123，r2＝0.015，T＝2.30，p＝0.022。在TS患者中，9、12、14和 16等位基因的频率增加，9等位基因增加最大；在对照组中13、15和 18等位基因的频率增加，13等位基因频率增加最大。当用卡方检验对 所有的等位基因进行比较时，它们具有显著的差异，p＝0.002。当仅 比较频率大于0.05的等位基因时，各组间有显著的差异， X2＝71.6，d.f.＝6，p＜0.0000001。用多元方差分析法检验了ADHD、抽 动、品行和学习相关的八个数量得分同基于9等位基因的基因型分组 (9/9、9/x、x/x)之间的关系，在小学学习表现、学习障碍、对立 违抗和多动得分中有显著的相关性。方差检验表明在所有的得分中 9/9纯合体的得分是最高的。基因型得分的线性回归分析表明CNRNA4 基因占ADHD得分差异的1.5％(p＝0.022)。

结论  这些结果说明CHRNA4基因座是与ADHD和TS危险有关的多种 基因中的一个。

在本研究中应用的PCRTM扩增片段的序列分析表明，这是一个非 常复杂的多态性，涉及大小的不同和序列的差异。重复多态性本身可 能在与它们相关的基因的调节中起作用。这是以这些重复序列形成Z- DNA的倾向性为基础的。重复序列的长度和序列的变化均在Z-DNA总量 的决定中起作用，Z-DNA通过数种途径参与基因的调节 (Comings，1997)。在此检测的复杂多态性表明在大小和序列上均发 生了显著的变化。因此它可能独特地适合于关联研究。

为了避免对许多其它得分的独立评估能力的降低，发明人将他们 的分析限定于在实施例27中检测的同样的行为得分加上一个总的抽动 得分。由于尼古丁已经被用来治疗抽动，又增加研究了这个基因是否 与抽动本身有关。多元方差分析用来评价作为一个组的得分，避免 Bonferroni校正。这表明在八个行为得分中四个有显著的相关性(表 86)。当对每个变量进行post hoc方差研究时，9/9纯合体的得分最 高。合并的结果说明CHNRA4是在ADHD和ST中起作用的遗传危险因素基 因之一。回归分析结果说明它占ADHD得分差异的百分率可能达到 1.5％。

虽然CHRNA4基因显示与学习障碍和小学学习表现的相关性比与 ADHD次级得分的相关性要大些，但不象检测的去甲肾上腺素基因那 样，在带有或不带有ADHD和带有或不带有学习障碍的四个组中，9/9 基因型的频率并没有逐渐增高的迹象。

虽然发明人还不知道在此叙述的基因型分组是与CHRNA4基因表达 的增加或减少有关，但本研究支持尼古丁对ADHD和TS症状的临床有效 性。在其它的人群中，对照和TS或ADHD间的差异也有可能涉及9等位 基因以外的其它等位基因。在多个样本检测时，最可重复的结果可能 是用卡方检验分析的在对照组与TS组或ADHD组患者中常见等位基因频 率的比较。

                          表84    Comings和Wu的以Applied Biosystems，Inc DNA序列仪为基础的：

      等位基因同Welland和Steinlein等位基因的比较

               (Weiland和Steinlein，1996)

         Comings和Wu                Welland和Steinlein 等位基因  相合  不相合    频率    等位基因   相合   不相合    频率

                                 14              196      .04

                                 13              198      .01 1                203      .008 2         207             .000       12      208              .01 3                215      .024 4                217      .063 5         221             .000       11      208              .01 6         223             .008       10      220              .04 7         225             .238       9       222              .01 8                227      .024 9         231             .015       8       228              .06 10               233      .008 11               235      .032 12               237      .063 13        239             .302       7       236              .45 14        241             .024 15        243             .238       6       240              .19 16        245             .008       5       242              .01 17        253             .000       4       248              .01 18        255             .063       3       250              .11 19        257             .024       2       252              .03 20        259             .000

                                 1                264     .01 21        272             .008

              表85CHRNA4 VNTR重复的4个PCRTM产物的序列 等位基因ABI  序列   序列 #            大小 9      231.6  231  CCGGGCGTGCGC(TG)8(CG)0CCGGGCGTGCGC(TG)8 CCGGGCGTGCGC(TG)11 13     239.5  239  CCGGGCGTGCGC(TG)8(CG)2CCGGGCGTGCGC(TG)8 CCGGGCGTGCGC(TG)13 15     243.8  243  CCGGGCGTGCGC(TG)8(CG)2CCGGGCGTGCGC(TG)10CCGGGCGTGCGC(TG)13 18     254.9  254  CCGGGCGTGCGC(TG)9(CG)1CCGGGCGTGCGC(TG)10CCGGGCGTGCGC(GTG)1CCGGGCGTGCGC(T(

                表86

     8个行为得分的多元方差分析

     CHRNA4 9/9＝3，9/x＝2，x/x＝1

              F-比                      p GSAP                     3.60             .028 LD                       3.60             .028 ODD                      3.46             .033 多动                     3.10             .046 无注意力                 2.92             .055 抽动                     1.63             .198 冲动性                   0.92             .401 CD                       0.55             .573 总和(Wilks)              1.22             .246

                           表87

               对ADHD因素个体得分的方差分析

                        CHRNA4(n＝345) 评分      基因型    N      均数     S.D.      F       p      F1     p1 ADHD        x/x     204    17.28    11.12

        13/x    113    18.94    11.05

        9/9     23     22.61*  9.09     2.83    .060    5.27    .022 多动        x/x     209    5.75     4.43

        9/x     113    6.18     4.18

        9/9     23     8.08*   3.86     3.11    .045    4.85    .028 无注意力    x/x     209    8.72     5.53

        9/x     112    9.73     5.55

        9/9     23     11.08    4.88     2.69    .069    5.34    .021 ODD         x/x     209    3.45     3.21

        9/x     113    3.83     3.19

        9/9     23     5.26*   2.87     3.46    .032    5.60    .0185 LD          x/x     209    0.61     0.93

        9/x     113    0.84     1.03 评分          基因型    N     均数    S.D.     F        p     F1    p1

           9/9      23    1.04    1.10    3.61    .028   7.21   .0076 GSAP           x/x      209   2.78    1.99

           9/x      113   3.35*  1.90

           9/9      23    3.40    1.92    3.61    .028   6.49   .011 基他 曾抽过烟       x/x      91    1.39    0.49 (年龄＞17岁)   9/x      49    1.31    0.46

           9/9      6     1.66    0.52   1.66     .192   0.000  .995 包/天          x/x      91    0.12    0.44

           9/x      49    0.10    0.37

           9/9      6     0.50    0.84   2.24     .110   1.02   .314

*Tukey检验在α＝0.05时，同x/x有显著的差别

F1＝线性方差分析，

P1线性方差分析的p

                实施例29

X连锁的MAOA基因VNTR等位基因长度与TOURETTE

    综合症和药物滥用的表型效应的相关性

前言.单氨氧化酶(MAO)水平的异常与许多精神病障碍有关。 发明者检测了X连锁的MOA基因VNTR的多态性以检验两种假设：(1) MAOA基因的变异在部分与Tourette综合症或药物滥用相关的行为障碍 中起作用吗？(2)如果是这样，在等位基因长度与表型效应之间存 在相关性吗？发明者检测了两个独立的组：375个TS病人、亲属和对 照，以及280个物质滥用者和对照。等位基因分为长度不断增加的四 个组。MAOA基因与两个组的行为表型之间存在显著的相关性，并且在 两个组中最长的等位基因与最强的表型效应相关。最强的效应是药物 依赖的诊断(p＝0.00003)。VNTR等位基因的这些组和以前表明的与 MAO-A活性相关的Fnu4H1多态性显著的连锁不平衡。这些结果与短重 复多态性的不同长度等位基因本身可能在基因调节中起作用的可能性 是相一致的。

由于年龄(Devor等，1994)、酒精、抗抑郁药、药物、性别、 实验技术、饮食、和其它变量对血小板酶水平(Fowler等，1982)的 潜在效应，MAO基因遗传多态性的应用比酶水平可能提供更多可重复 的结果。MAOA和MAO-B基因的克隆和测序以及相关多态性的鉴定使得 现在可以进行这种遗传学研究。

为了明确是否MAOA基因的遗传变异与TA或ADHD相关，发明者利用 TS中DRD2、DβH和DAT1基因已报道的技术(Comings等，1996a)，检 测了在一系列对照、TS先证者和它们亲属中的MAOA VNTR多态性 (Hinds等，1992)。由于对照相对于TS先证者不同等位基因频率的 简单比较可能遗漏MAO基因只与在所有例子中未出现的一些特异行为 相关的可能性，发明者检验了这些基因在27个不同行为变量中的可能 作用。

发明者对等位基因长度可能与表型效应相关的假设产生了兴趣。 它的理论基础是大部分简单重复的序列导致了Z-DNA的形成并且其数 量依赖于重复的长度(Schroth等，1992)。Z-DNA结构打开了DNA双 螺旋并暴露了单个碱基，使它能够与核蛋白相互作用(Rich等， 1984)。由于这些和别的原因，Z-DNA与基因调节有关(Comings， 1996 a；1996b)。如果小或微卫星多态性确实在涉及多基因遗传的 基因功能变异中起作用，它们能够导致单个基因而不是多基因障碍。

X-连锁的基因形成了一个独特的载体以检验该假设并研究精细的 效应，这是由于至少在男性中，每个等位基因以半合子状态出现，这 样就消除了杂合体的复杂因素，而当多个不同大小的等位基因出现时 杂合体的数量是很多的。为了检验重复长度可能与表型效应相关的假 设，发明者将VNTR等位基因分为长度不断增加的四个组。这让发明者 可以明确是否更短的或更长的等位基因优先与更大的表型效应相关。

方法.受试者包括57个对照、229个TS先证者，先证者大部分受 到与多个行为相关障碍的严重影响(Comings等，1990)，以及90个 患病的和未患病的TS先证者亲属。所有受试者是非西班牙白人并且 90％以上是来源于西欧的。TS组的对照含有TS先证者的养父母和继父 母，来自于希望城其他诊所的非精神病障碍受试者、以及希望城医学 中心职业和非职业医院员工。TS受试者和对照都在别处有详细的描述 (Comings等，1995b；Comings等，1996a；1997b)。

每个TS对照和TS先证者或亲属都被要求填一张基于诊断会面程序 (Robins等，1981)或DSM-III-R(精神障碍诊断和统计手册， 1987)标准的调查表。这提供了关于大量精神病症状的结构化描述。 这些症状分为27个不同的行为，包括ADHD、物质滥用、情绪、焦虑、 学校表现、口吃、抽动和其它。用于这些行为评分的问题已在别处详 细描述(Comings，1995a；1994a；1994b；1995b；Comings等， 1996a；Rubins等，1981；Comings，1995c)。两种行为评分用于评 估ADHD。首先，之所以称之为ADHD，是基于至少出现DSM-III和DSM- III-R标准的22个ADHD变量系列的一半。第二，ADHD-R是基于DSM- III-R诊断标准。以前未用的三个QTV是无注意力、冲动性和多动障 碍。有这三个亚评分的积累可以得到ADHD评分。QTV缩写包括品行障 碍的CD、对立违抗障碍的ODD(Comings等，1995a)、和重性抑郁发 作的MDE(Comings，1995c)症状。

检测共发病行为的理论基础是以前的观察，特定的基因可能与TS 中出现的特异共发病行为比诊断本身有更强的相关(Comings等， 1996a)。该调查表并不意味着提供DSM-III-R或DSM-IV诊断而是提供 产生行为不同方面QTV的高度结构化方法。连续性状的优点是可以提 供比二歧诊断更大的严重性等级划分。调查表途径的症状评估方法的 精确性、实用性和敏感性已由其他人(Gadow和Sprafkin，1994； Grayson和Carlson，1991)通过比较应用这样的工具和接诊者使用相 同结构化工具的情况得以说明。发明者对于数百个受试者调查表的查 阅说明它们精确地反映了通过个人交谈获得的信息。

第二组受试者含有120个非西班牙白人男性，他们来自于1994年 十月以来的California，Loma Linda，Jerry L Pettis Veterrans Administration Hospital住院病人成瘾治疗单位(ATU)，所有表 示同意进入ATU的新入院者，参加了国家药物滥用研究所主办的关于 药物滥用/依赖遗传因素的研究。

所有ATU受试者通过Michigan酒精中毒等级评估(Davis等， 1987)(修订的24项自我执行调查表，包括药物滥用(MAST-R))、临 床医师执行的诊断会面程序(DSM-III-R版本)(Robins等，1981) 来诊断物质依赖障碍的出现，用临床医师执行的成瘾严重性指数第五 版(ASI)(Hodgins和Guebaly，1992)来评估一系列酒精和药物使 用变量。

发明者利用药物/酒精使用和ASI的法律状态部分。该方面包含了 以下部分：

a)使用的具体物质.为了评估具体物质的使用，问了关于喝醉 酒、海洛因、其他鸦片/止痛药、巴比妥酸盐、别的镇痛药/催眠药/ 安定药、可卡因、安非他明、大麻、致幻觉剂、和吸入剂的一生使用 (年数)。

b)使用的途径.对于上述的每个药物，在适当的时候，受试者 被请问了关于使用途径问题。选择有口、鼻、吸烟、和IV注射。#IV 药物使用这一连续变量通过将不同的IV注射药物数相加进行计算。变 量IV药物使用是二歧变量，0是没有药物使用，≤1是使用一种或多种 药物IV。

c)问题.你有酒精DT多少次了？过量用药吗？在过去的30天里 有多少天遇到了酒精问题？药物问题呢？

d)花费的钱.在过去的30天里你花了多少钱在酒精上？在药物 上呢？

e)严重性.基于交谈者对治疗需要程度的等级评估，从0(没有 必要治疗)至9(在危及生命的情况下需要治疗干预)。酒精滥用？ 药物滥用？

f)法律状态.也问了关于药物和酒精滥用的不同法律方面。在 你的一生中有多少次被控酒后驾车？在你的一生种有多少次因为毒品 问题被逮捕并指控？有多少次这样的指控导致了定罪？

g)概括的评分.当回答能够从0到任何数变化时，它们是0则被 评分为‘0’是其它任何数则评分为‘1’。与酒精使用相关的问题计 入总的酒精评分，与药物使用相关的问题计入总的药物评分。

物质滥用组的对照与TS病人的对照无关。它们包括两个部分。第 一部分是45个年龄较大的男性，来自San Bernardino的加利福尼亚州 立大学非西班牙学生(平均年龄30.1岁)。那些具有显著的物质滥用 问题的在MAST-R检验的基础上得以排除。第二部分包括Minnesota双 生子家庭研究项目中双生子的父亲。由于这些人明确地来自于一个 州，单纯基于具有11或17岁的双生子，他们比大学的学生代表了所有 社会经济和教育群体中更为随机的部分。虽然所有的对照在物质滥用 变量方面的评分是阴性，但由于对双生子的对照进行物质滥用评估的 结果是无效的，所以部分可能是阳性的。然而，由于这是农业州为主 的随机交叉实验，发明者设想，在该组中假阴性的数量是很小的。

选择MAOA基因VNTR多态性的理论基础如下。挑选一个短的串联重 复多态性用来特异检测这个假设：重复的长度可能与表型效应相关。 选择X连锁的基因是由于至少在研究男性时，避免了解释杂合体的复 杂性。选择MAO基因是因为它是X连锁的。选择MAOA基因是因为已报道 了两个不同的重复多态性与它相关。发明者选择VNTR多态性(Hinds 等，1992)因为它在等位基因的长度(40+bp)上比(CA)n重复 (16bp)范围宽得多。

该复杂的多态性含有直接与不完全二倍重复新23-bp VNTR基序 相邻的GT微卫星，其中等位基因中二核苷酸重复和VNTR重复的数目均 不同。VNTR多态性出现在含有MAOA基因第一外显子的噬菌体6.12的 2.9-Kb SalI-EcoRI片段上(Hinds等，1992)。通过标准方法从全 血中提取DNA。目的DNA通过PCRTM扩增(Mullis等，1986)。为了标 记PCRTM产物，标记了荧光HEX或FAM Amidite(应用生物系统， Foster City，CA，USA)的每条引物0.1μM用于反应(表88)。两微 升10倍稀释的PCRTM产物加入2.5μl去离子甲酰胺和0.5μl的ROX 500标 准(应用生物系统)并在92℃变性2分钟，然后上样至应用生物系统 373测序仪6％的聚丙烯酰胺凝胶中。凝胶在1100V和恒定30W下电泳5小 时。利用内部ROX500标准对凝胶进行激光扫描和分析。峰由基因分型 仪(1.1版本)(应用生物系统)基于由碱基对长度决定的彩色片段 大小进行识别。每个样品的全部信息从每块凝胶的文件中打印出来， 汇编的数据进行分析。

                            表88

MAOA VNTR多态性：通过方差分析不同的等位基因分组比较不同的行

               为评分。(均数和标准差)(n＝287) 行为      通过bp大小分组的等位基因                         F比    P     F2

       ＜320       320-333        334          ≥335

      (n＝82)      (n＝43)     (n＝110)      (n＝52) 躁狂     1.43* 1.8    1.36* 1.9   1.59* 2.27  2.59  2.8   3.59  0.014 6.39a OCD      2.18  2.8    2.18  2.4   2.80  2.8   3.31  3.2   2.16  0.093 5.89a 性       0.62* 1.1    0.47* 0.9   0.66* 1.2   1.25  1.6   3.91  0.009 5.82

                                                                  a 睡眠     0.36  0.7    0.38  0.8   0.49  0.9   0.76  1.1   2.31  0.075 5.56a 小学     2.60  1.7    2.90  2.0   2.98  2.1   3.46  2.1   1.89  0.131 5.14a 赌博     0.13* 0.9    0.27  0.8   0.22  0.8   0.61  1.6   2.49  0.060 4.82a 口吃     0.13  0.3    0.11  0.3   0.25  0.4   0.23  0.4   2.33  0.084 4.41a 学习     0.52* 0.9    0.65  1.0   0.54* 0.9   1.00  1.1   3.32  0.020 4.37a 无注意力 6.69  5.2    7.37  4.9   7.67  4.7   8.48  5.3   1.42  0.235 4.15 ADHD     19.43 14.9   20.95 13.5  21.18 13.9  24.80 15.3  1.53  0.206 3.74a ADDR     4.63  4.9    4.84  4.6   5.18  4.7   6.42  5.2   1.57  0.196 3.74a 表88(续) 行为      通过bp大小分组的等位基因                         F比   P     F2

      ＜320        320-333        334         ≥335

      (n＝82)      (n＝43)     (n＝110)      (n＝52) 冲动      5.74  4.9   6.30  4.8   6.49  4.7   7.46  5.0   1.35  0.257 3.68a 购物      0.58  1.3   1.00  2.2   1.32  2.8   1.09  2.4   1.61  0.186 3.23 MDE       3.00  2.8   3.29  3.1   3.45  3.1   3.92  3.1   1.01  0.385 2.90 CD        2.78  2.4   2.90  2.1   2.97  2.2   3.54  2.6   1.15  0.328 2.54 多动      6.91  5.6   7.27  5.2   7.00  5.4   8.86  5.9   1.59  0.190 2.29 恐怖症    2.00  2.7   2.15  3.0   2.45  2.7   2.65  3.3   0.71  0.548 2.10 分裂样    1.31  2.3   0.68* 1.3   1.34  2.2   1.84  2.3   2.26  0.081 1.92 广泛焦虑  0.21  0.4   0.18  0.3   0.28  0.4   0.29  0.4   0.85  0.463 1.60 躯体化    2.13  3.0   1.58  2.4   2.17  3.0   2.90  3.7   1.16  0.325 1.34 药物      0.36  1.2   0.45  1.6   0.40  1.3   0.75  2.0   0.81  0.489 1.28 阅读      1.86  1.9   1.36  1.8   1.78  2.1   2.34  2.5   1.75  0.156 1.27 0DD       3.07  3.3   3.02  2.7   3.16  3.1   3.73  3.4   0.57  0.633 1.02 抽动      2.81  3.7   3.04  3.4   2.84  3.5   3.57  4.1   0.55  0.642 0.73 酒精      0.51  2.3   0.81  2.9   0.31  1.8   1.11  3.2   1.41  0.241 0.45 惊恐      2.91  2.0   3.09  2.1   3.18  2.2   2.98  2.2   0.27  0.845 0.20 吸烟      0.07  0.3   0.11  0.3   0.05  0.2   0.77  0.3   0.53  0.662 0.10 a显著性＜0.05，F2＝线性方差的F比。 *显著性低于＞335，在α＝0.05水平通过Tukey。

为了检验MAOA等位基因长度可能与表型效应相关的假设，等位基 因分成四组(见结果)。有1到4的标记，最短的到最长的形成MAOA基 因型变量。只有在TS组中用到女性。只有在给定的等位基因分组里纯 合的那些才包括在分析中。

发明者利用了两条原则进行分组：a)必须有足够的组以检测一 系列长度；b)为了将统计的能力最大化，受试者在每组中的数量必 须相似。这样，如果等位基因频率只有单一的峰，就应当分为最短的 1/3、中等的1/3、最长的1/3。然而，MAOA VNTR等位基因的大小分布 为两个峰。对于只有男性，小峰含有32％的等位基因，大小是从299到 314bp长。大峰含有68％的等位基因，大小从323到338bp。由于等位基 因的主体在该峰里，发明者将其作为存在单个峰进行分离(即短的、 中等、长的等位基因分组)。该峰的中心含有单个的334bp组，它包 含不能再分组的31％的等位基因。这些规定的应用导致了四个组＜ 320bp、320-333bp、334bp、≥335bp分别含有32、23、31、14％的等位 基因。

利用Hinds等(1992)描述的分组是不可能的，由于他们五个组 中三个的基因频率很低。实际上，发明者在这三个次要的组里没有受 试者。

Fnu4H1多态性  对该多态性的检验基于Hotamisligil和 Breakefield(1994)的方法。发明者将他们的‘-’命名为发明者的 ‘1’等位基因，他们的‘+’命名为发明者的‘2’等位基因。在他 们研究中，+等位基因具有更高的MAOA活性。

对于Tourette综合症组，用方差分析检验四个不同等位基因的分 组里每个QTV的相对大小。用线性方差分析检验四个组间平均数的显 著累进性增加。应用SPSS(SPSS，Inc，Chicago，IL，USA)统计软 件包。对于线性方差分析，子命令多项式设定为1。用多元方差分析 检验当所有的变量同时检验时这些QTV是否是显著的。用多变量线性 回归分析作为检验当所有的变量同时检验时QTV显著与否的第二个方 法。MAOA基因型设定为非独立变量并且27个QTV作为独立变量逐步进 入。

卡方分析说明最长等位基因的组对主要QTV有最高的平均值。≥ 335bp等位基因组频率的潜在累进性下降在TS的症状累进性减少的四 个组间进行了比较：有ADHD的TS先证者、无ADHD的TS先证者、有TS的 亲属和无TS的亲属。

对于物质滥用组，多元方差分析用于检验是否在四个MAOA等位基 因的分组与两个简单化的变量酒精和药物评分之间存在显著的相关。 用方差分析检验四个等位基因分组酒精和药物评分的平均数。

用线性卡方检验≥335bp等位基因组的频率在三个组间的潜在累进 性增加：对照、没有行为的物质滥用者(ATU无)、以及有行为的物 质滥用者(ATU有)。ATU无组包括在内以排除由于不同行为的共发病 而造成的该等位基因组在物质滥用者中的频率增加的可能性。为了帮 助排除它，在有行为的物质滥用者中等位基因组的频率要至少比无行 为的高出20％。由于假设这些等位基因的频率在这三个组里逐步增 加，因此应用了线性卡方统计。

为了检测MAOA基因引起的药物相关变量的最大变异比例，在评分 为1的携带＜335bp等位基因的受试者和评分为2的携带≥335bp等位基因 的受试者进行了回归分析。该分析是对于药物依赖变量进行的，因为 这是与MAOA基因最相关的卡方变量(对照评分为1，ATU无评分为2， ATU有评分为3)。

结果.MAOA VNTR多态性等位基因的分布(等位基因总数＝768)。 由于这是复杂的VNTR，等位基因不能成为碱基对偶数或奇数的划分方 式。结果与基因分型仪程序产生的那样。在316bp和323bp之间没有等 位基因，这样就产生了两个明确的重要的组＜320bp和＞320bp。然而， 为了检验表性效应可能与大小相关的假设，等位基因的较大分组323- 339bp分为三个亚组，包括比主峰短的等位基因320-333bp、334bp的 主峰、和比主峰长的等位基因≥335bp。在TS组有219个男性和156个女 性总共375个受试者。女性中88个是杂合体。当把这些排除了以后， 研究中剩下了287个受试者，其中36个是对照。在最后的组，男性与 女性相比四个等位基因分组的频率分布没有显著性差异。

TS组QTV的每一个相对于四个等位基因分组的方差分析结果见表 88。常规方差分析结果在F比和P值下面。线性方差分析的F比在F2栏 下面，上标a表示显著性＜0.05。QTV通过F2栏的F比率大小递降来安 排。由Tukey检验在≤0.05的水平检测，均数显著低于≥335bp组的那些 等位基因分组用星号标明。除了口吃、购物和惊恐(有最低的F比 率)以外，剩下的24个QTV在那些携带≥335等位基因的受试者中均数 是最高的。

所有27个QTV的多元方差分析结果对于性(P＝0.012)、学习问题 (P＝0.023)、赌博(P＝0.025)、和躁狂(P＝0.025)是显著的。

当所有27个QTV同时由逐步多元回归分析检测时，变量小学问题 (P＝0.012)和赌博(P＝0.038)是显著的。基于r2值，MAOA基因只引起 了这些QTV变异的3.9％。

利用卡方分析，携带≥335bp等位基因受试者的比例存在显著的累 进性降低，从有ADHD的TS先证者(24％，n＝129)，到无ADHD的TS先证 者(20.0％，n＝50)，到TS亲属(12.5％，n＝16)到非TS亲属 (5.6％，n＝56)(P＝0.003)。

在物质滥用组比较了对照与ATU受试者。对于160个联合对照，四 个等位基因分组的分布如下：＜320 34.4％、320-333 38.1％、334-335 21.3％、≥335 6.3％。对于120个ATU受试者，频率如下：＜320 39.2％、 320-333 18.3％、334 20.8％、≥335 21.7％。存在显著性差异，x 2＝22.17，P＝0.00006。≥335bp组的频率在两个对照组是类似的，San Bernardino组的8.9％和双生子父母的5.2％(x2＝0.774，P＝0.38)。

酒精和药物评分的多元方差分析说明，虽然都与MAOA基因VNTR等 位基因显著相关，药物评分(P＝0.001)比酒精评分(P＝0.012)更显 著(表89)。联合多元方差分析的结果也是显著的(P＝0.007)。257 的n比160个对照+120个ATU的总数或280要小，因为只有97个受试者完 成了ASI。相比之下，所有120个都完成了用于酒精和/或药物依赖DSM 诊断验证的DIS。

                    表89 物质滥用组酒精和药物评分对MAO等位基因分组的多元方差分析

             (n＝257，只有男性) 变量           F比率        P 酒精评分       3.72        0.012 药物评分       5.85        0.001 总数(Wilks)    2.99        0.007

表示每个等位基因分组均数的两组评分的方差分析，见表90。对 于TS组，最高的均数出现在≥335bp等位基因的分组里。对于药物评 分，通过Tukey检验，另外三个等位基因组显著地比≥335bp等位基因 组要低。

                       表90

物质滥用组的酒精和药物评分对MAOA等位基因分组的方差分析 等位基因n       均数    标准差   F比率    P 分组 酒精评分 ＜320     94    2.27     3.1 320-333   81    1.49a   3.0 334       56    1.94     2.7 ≥335     26    3.73     3.52    3.72    0.012 药物评分 ＜320     94    3.59a   5.2 320-333   81    1.94a   3.8 334       56    3.34a   4.9 ≥335     26    6.42     6.2     5.85    0.0007

a通过Tukey检验在α＝0.05显著低于≤335等位基因分组的均数。

为了检测MAO基因是否优先与物质滥用的特定类型相关，利用卡方 分析检测了与用到的物质类型相关的14个变量。对照相对无行为ATU 的受试者(ATU无)相对有行为ATU的受试者(ATU有)≥335bp等位基 因分组的频率见表91。由于检验了物质使用变量的14种类型，只有那 些P值低于0.0036(0.05/14)的按Bonferroni矫正被认为显著的。 只有那些P值＜0.01的列在表上。只有酒精依赖是例外。这说明了与药 物依赖、或药物和酒精依赖的相比，酒精依赖受试者的≥335bp等位基 因频率只存在少量的增加。相比之下，只有药物依赖的变量得到了最 高值(x2＝17.4，P＝0.00003)。

                         表91   对照相对于没有行为的ATU受试者相对于有行为的ATU受试者携带≥

          335bp等位基因受试者数量的线性卡方分析 行为         对照        ATU无       ATU有       卡方    P

         n      ％   n     ％    n     ％    n      ％ 只有药物依赖 160   6.3   58   15.5   62   27.4   17.4   0.0000

                                                    3 IV药物使用   160   6.3   56   14.3   27   29.6   13.5   0.0002

                                                    2 ODed         160   6.3   71   12.7   25   28.0   11.00  0.0009 巴比妥使用   160   6.3   61   13.1   32   25.0   11.56  0.0011 DUIs         160   6.3   34   8.8    62   21.0   9.92   0.0016 安非他明使用 160   6.3   19   5.3    77   19.5   9.37   0.0022 OSH使用”          160   6.3   67   14.9   26   23.1   8.96   0.0027 可卡因使用   160   6.3   25   12.0   67   19.4   8.86   0.003 大麻使用     160   6.3   14   7.1    82   18.3   8.35   0.004 海洛因使用   160   6.3   68   14.7   28   21.4   8.05   0.004 鸦片使用     160   6.3   58   15.5   38   18.4   6.88   0.009 只有酒精依赖 160   6.3   98   24.5   22   9.1    非线性

aOSH＝其他鸦片剂(非海洛因或美沙酮)、镇静药和安眠药。

等位基因分组(＜335对≥335)相对于药物依赖诊断的回归分析得到 了以下结果：r＝0.25，r2＝0.0625，T＝4.305，和P＝0.0001。

为了检测VNTR与Fnu4H1等位基因的潜在连锁不平衡，发明者对已 经基因分型的273个男性也进行了VNTR多态性基因分型。发明者将分 析限定为男性是由于比女性的结果清楚。两个多态性存在非常显著的 非随机相关(x2＝132.91，P＜0.000001)。＜320的VNTR等位基因分组 与不常见的Fnu4H1 2等位基因相关，而其余的三个VNTR分组与Fnu4H1 1等位基因相关。

基于数据的比较，可以预测，如果VNTR等位基因分为＜320bp和＞ 320bp，就能得到与Fnu4H1多态性相似的结果，Fnu4H1 2≈＜320和 Fnu4H1 1≈＞320。TS组有71个受试者对两种多态性进行了基因分型。 由于躁狂得到了最显著的结果(表88)，因此该变量用于比较。携带 Fnu4H1 1等位基因的53个受试者得均数是2.01(标准差2.17)，2等 位基因是1.55(标准差)。VNTR类似的数据是＞320bp的1.94(标准差 2.12)，和＜320bp的1.75(标准差1.98)。(16个≥335的受试者的均 数是2.43(标准差2.42))。因为数量相对少，没有一个组是显著 的。由于Hotamisligil和Breakefield的研究(1994)表明Fnu4H1等 位基因(发明者的I等位基因)与低MAOA活性相关，发明者设想≥335 VNTR等位基因的分组与最低的MAOA活性相关。

由于Tourette综合症是高度可遗传的并且常常与大量的冲动、攻 击、情感、性过度和其他行为相关，它是非常适合这种研究的。目前 的结果表明MAOA基因是在许多TS相关行为的病因学中起少量作用基因 中的一个。

虽然多元方差分析说明了MAOA等位基因与酒精和药物评分都显著 相关，存在这两种物质滥用形式的大量共发病性。如表91所示，当药 物依赖和酒精依赖分别检测时，与酒精依赖的相关比与药物依赖的相 关更强。

虽然男性的突出可能部分由于激素和环境因素，X连锁的基因也可 能是一个因素。对于TS组，利用回归系数确定的r2说明，对于不同的 QTV，MAOA基因最多引起2.5％或者更少的QTV变异，表明X连锁的MAOA 基因不能引起男性中TS、ADHD和相关障碍的突出。相比之下，≥335bp 等位基因缺乏或出现相对药物依赖诊断的r2说明，高达6.2％的变异可 能是因为MAOA基因。这可能在药物依赖的男性突出中起中度的作用。

发明者开始猜想微卫星和小卫星多态性的不同长度等位基因可能 在与它们相关的基因调节中起作用。虽然较长的小卫星等位基因与 Tourette综合症组的特异QTV的相关性不强，如表89所示，但在所有 QTV之间的趋势存在显著的一致性。由于这可能是偶然的随机相关， 发明者试图确证他们是否能够在完全独立德受试者和对照组中重复这 些结果。该组(物质滥用组)与MAOA VNTR较长的等位基因，尤其是≥ 335bp等位基因，比在TS组中观察到的呈现出更强的相关性。这两组 的模式是非常相似的，≥335bp等位基因有最高的评分，最小等位基因 (＜320)有较高的评分，334-335bp等位基因有中间评分。

为了洞察是否≥335bp等位基因可能与较高或较低的MAO-A活性相 关，发明者也对发明者的273个男性受试者进行了Fnu4H1多态性基因 分型。与VNTR等位基因分组的连锁不平衡是非常显著的(p＜ 0.000001)。不常见的Fnu4H1 2等位基因与＜320 VNTR分组相关，而 更常见的I等位基因与320-333、334和＞335 VNTR组相关。由于有人已 经说明一系列行为障碍与低MAO-A活性相关，并且由于发明者观察到 VNTR多态性的最大表型效应与≥335bp组相关，这表明该组也与最低 MAO-A活性相关。这些结果说明，当携带Fnu4H1 1等位基因的受试者 置于根据VNTR多态性的亚组时，是携带≥335bp等位基因的受试者推动 Fnu4H1结果。虽然这些建议的最后论证需要VNTR等位基因对受试者中 血清或成纤维细胞MAO-A活性的研究，这些发现与以下可能性一致： Fnu4H1多态性与MAO-A活性差异相关的原因是：1等位基因与≥335 VNTR等位基因连锁不平衡，＜320等位基因(与高MAO-A活性相关)相 对≥335bp等位基因(推测与最低MAO-A活性相关)的重复数目的大的 差别在MAO-A基因的调节中起作用。

与重复等位基因大小的这种相关性与小卫星本身可能在MAO基因的 调节中起作用的可能性相一致。然而，很清楚的是，这不能证明该假 设，因为与未鉴定的另一位点的连锁不平衡仍可能发生。需要对表达 载体以及较长等位基因与转录因子的可能相互作用的研究，来证明 MAOA基因的该假设。

TS组的结果说明，MAOA基因对一系列的行为有相对低量的效应。 虽然多元方差分析说明四个变量是显著的，多变量回归分析说明两个 是显著的，线性方差分析说明27个中的12个是显著的，但有人会提 出当完全Bonferroni矫正用于方差分析结果时没有一个在0.05/27或 0.0018处是显著的。然而，这恰恰正是要点，即尽管大量文献中MAO 与不同的行为相关，当在特异的基因多态性水平检测时，MAOA基因看 起来只对许多行为变量起少量作用。虽然在药物滥用中效应强的多， 甚至这样MAOA等位基因引起的变异比例仍然是少量的。重复实验是关 联研究的一个重要方面，这些结果出现在两个完全不同的受试者组 里。这些发现与这一概念相一致：多基因遗传中许多基因参与不同的 行为，每个基因只起较小的作用；也与这一假设相一致：小卫星多态 性本身可能在提供对多基因遗传很重要的功能性等位多态性变异中起 作用。

                  实施例30

有关氨基酸治疗和月经前焦虑障碍(PMDD)的预示性方案

月经前焦虑障碍(PMDD)是一种在大部分月经周期循环发生的月 经前情绪障碍。在DSM-IV中它包括在”非特异抑郁障碍”的范畴内。然 而，许多因素(生物学和认知研究，治疗反应)使PMDD同其余情绪障 碍相区别(Yonkers，1977)。

尽管存在黄体期症状表现的预示，该障碍的病因学并没有确立。 关于激素和维生素缺陷与PMS相关的理论可能与PMDD有关或无关。然 而，孕酮、雌激素、前列腺素、胰岛素、维生素B6、或甲状腺激素 (Severino，和Moline，1989；Rickels等，1990；Bancroft和 Rennie，1993)的绝对和相对缺陷都没有在PMS或PMDD病人组中确 立。相似地，功能性激素试验如对甲状腺刺激激素反应的甲状腺释放 激素和葡萄糖耐受试验的结果在PMDD病人中并不异常(Casper等， 1989；Girdler等，1995；Haskett等，1984；Roy-Byrne等， 1987)。

对于月经前症状是由内源性阿片物戒断引起的这一假设，几个研 究小组已经评价了有症状妇女和对照的β内啡肽的水平。在一项包括 回顾性报告存在月经前症状妇女的研究中，Giannini及其合作者们发 现，在月经周期的黄体期存在β内啡肽水平的下降(Giannini等， 1984)；然而，在该研究中没有对照组。不过，四项另外的研究发 现，与对照相比，有症状病人的黄体期β内啡肽水平更低 (Tulenheimo等，1987；Facchinetti等，1987；Chuong等，1985； 和Giannini等，1990)。上述的一项研究发现在滤泡期和黄体期都有 低水平(Tulenheimo等，1987)，在另一研究中，卵周期有症状的妇 女β内啡肽水平低(Chuong等，1994)。值得注意的是，以前提到的 研究中只有两项包括了预期确定了症状的人群，这种确定可能符合或 不符合PMDD诊断的严格标准。病人群体间的差异、小样本的大小或者 两者可能是导致最近的研究得出不同结论的基础，他们不能发现在月 经周期的两个阶段任何一个中PMDD病人与对照的区别(Bloch等， 1996)。然而在本研究中，两组的月经前期β内啡肽水平都下降了。 月经周期中β内啡肽水平在门静脉的变化也在灵长目动物中发现，虽 然在卵周期差异最显著(Wehrenberg等，1982)。

在月经周期中急速下降的β内啡肽的波动能够增加PMDD妇女肾上 腺素能的活性并可以解释对肾上腺素能受体结合研究的结果。 Halbreich及其合作者(Halbreich等，1993)发现月经前症状妇女在 月经周期的黄体期咪唑啉受体结合的增加。根据Grunhaus及其合作者 (1990)综述，肾上腺素能受体结合的改变也与MDD和惊恐障碍相 关，虽然改变的方向(增加及降低亲和力)依赖于在分析中血小板的 准备和使用的配基。

此外，β内啡肽和雌激素的水平已经表明是变化的。在产后和月 经前期间，两者的水平变化迅速并且显著(Halbreich和Endicott， 1981)，其他人说明麻醉药拮抗剂降低了PMS症状。

Halbreich及其合作者发现血清γ氨基丁酸(GABA)的水平在月经 前焦虑症状的妇女黄体期下降(Halbreich等，1996)。也在MDD病人 中发现了血清GABA低水平(Petty等，1992)，虽然它是怎样与上述 的发现相关还是未知的。

PMS病因学的理论几乎全部集中在雌激素、孕酮、或催乳素的分 泌。相比之下，Labrum(1983)在80年代中期首次提议，发生于PMS 的症状有着共同的病因学基础，包括5-羟色氨、GABA、和相互联系的 内分泌过程的脑水平的异常波动。雌激素反馈可能是过度波动的一个 因素，尤其是5-羟色氨。

关于5-羟色氨，许多不同的方法已经用于评估PMS+PMDD妇女的该 系统，包括检测全血中5-羟色氨、血小板5-HT的摄入以及神经内分泌 挑战。基于灵长类动物和另外的证据：低5-羟色氨与睡眠、食欲、以 及应激性的变化相关，Rankin(1992)研究了严重月经前焦虑妇女的 全血中的5-羟色氨发现，与无症状对照相比，有症状妇女的5-羟色氨 水平更低。部分研究者(Ashby等，1988；Taylor等，1984；Ashby 等，1990)而并非所有的研究小组(Mahngren等，1987；Rojansky 等，1991)发现，与对照相比，PMS或PMDD妇女黄体期血小板对5-HT 的摄入下降了。与对照相比，明确评估为PMDD妇女的丙咪嗪结合位点 在早黄体期(Rojansky等，1991)和月经周期的两个阶段(Steege 等，1992)都减少了。在后一研究中，只在滤泡期达到了统计学显著 性。

对PMDD妇女应用色氨酸在月经周期的两个阶段产生了减弱的生长 激素和皮质醇反应(Bancroft等，1991)，说明了PMDD病人与对照之 间的性状差异。然而，在同样的两个组里，相对色氨酸的催乳素反应 只在月经周期的月经前阶段减弱了(Bancroft等，1991)。另一方 面，当5-HT1A不完全兴奋剂丁螺环酮用于滤泡期PMDD病人及健康对照 时，产生了减弱的催乳素反应(Yotham，1993)。关于对氟苯丙胺减 弱催乳素反应的数据，与一组与对照相比明确鉴定的PMDD受试者发现 减弱的反应(FitzGerald等，1996)以及另外一组发现没有区别的 (Bancroft和Cook，1995)相混合。最后，与无症状妇女相比较，耗 尽5-羟色氨的前体色氨酸明显更有可能引起PMDD病人黄体期和滤泡期 的月经前症状(Menkas等，1994)。

许多最近的研究评估了某些精神活性药物对于PMDD的缓解和抗抑 郁，包括clonipramine(Sunblad等，1993)、氟西汀(Stone等， 1991；Wood等，1992；Steiner等，1995；Brandenberg等，； Pearlstein和Stone，1994)、安非他酮(Pearlatein等，1995)、 帕罗西汀(Eriksson等，1995；Yonkers等，1996a)、马普替林 (Eriksson等，1995)、舍曲林(Yonkers等，1996b)、奈法唑酮 (Girdler等，1995)、和氟苯丙胺(Brzezinski等，1990)。

发明者预期，对单个或者甚至两个个别的神经递质只有有限效应 的单个药物对于克服在女性月经前期、期间、和月经以后由激素变化 引起的“报偿”系统异常状态是不够的。此外，虽然上述的生物学证 据不能明确地归于任何单个的神经生物学系统，但肾上腺素能受体结 合、GABA水平和5-HT系统的变化提示神经生物学异常与PMDD表达相 关。也在单相MDD中发现了这些标志的变化。没有关于脑啡肽酶抑制 剂对PMDD阳性效应的研究报道。实际上，麻醉药拮抗剂的使用如 Trexan(Dupont，Delaware)已经表明减少而不是增强PMDD，与发 明者在本发明中做的相反。

这与Figuerola及其协作者最近的发现(deLourdes-Figuerola 等，1997)表明了月经偏头痛组在第22天血浆ME的增加和血浆去甲肾 上腺素(NE)水平的下降以及血浆ME、NE在疼痛期间的增加。作者推 断，变化发生于血浆ME和交感神经肾上腺功能上，不仅在疼痛期间也 在中黄体期。

发明者提出，氨基酸治疗的应用将对遭受PMDD痛苦者有益。利用 表11中特异对该障碍建议的组合物在许多酗酒病人中完成的工作显著 减少了典型的PMS症状，包括易怒、紧张、乳腺疼痛、头痛、和抑 郁。利用的具体实例在列于表11的PMXTM配方中详细说明。

双盲安慰剂对照研究将在Dallas，Texas诊所的PMDD门诊病人中实 施。将研究总共100个病人。发明者将提出PMDD尺度并提供给所有的 100个参与者。该尺度将先于接受任何疗法(安慰剂或PMXTM)进行评 分。对于该研究，至少三个周期是进入本研究的最低限度。病人必须 是育龄妇女并且没有怀孕。将得到两组之间的比较，统计分析通过 Texas大学健康学中心计算资源系在Robert Wood的指导下进行。只有 经由DSM-IV标准评估的病态PMDD候选者才能进行研究。在三个月时间 以后，每个病人将利用本发明中提出的MAA技术进行基因分型。因此 将至少评估29个基因。

预期DRD2 A1等位基因以及本文公开的其他RDS相关等位基因的携 带者，将对PMXTM有良好反应，在安慰剂情况下将会特别难受。进一 步预期，个人的基因分型将对预测靶向治疗结果提供额外的信息。

                          参考文献

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                      序列表 一般信息： (i)申请者：

(A)名称：City of Hope National Medical Center(希望城 国家医学中心)

(B)街道：1500 East Duarte Road

(C)城市：Duarte

(D)州：加利福尼亚

(E)国家：美国

(F)邮政编码(ZIP)：91010-0269

(A)名称：Board of Regents，The University of Texas System(得克萨斯系统大学董事会)

(B)街道：201 West 7th street(第七大街西201号)

(C)城市：Austin(奥斯汀)

(D)州：得克萨斯

(E)国家：美国

(F)邮政编码(ZIP)：78701

(A)名称：Kenneth Blum Inc.

(B)街道：1211 Lost Stone

(C)城市：San Antonio(圣安东尼奥)

(D)州：得克萨斯

(E)国家：美国

(F)邮政编码(ZIP)：78258

(A)姓名：Kenneth Blum

(B)街道：1211 Lost Stone

(C)城市：San Antonio(圣安东尼奥)

(D)州：得克萨斯

(E)国家：美国

(F)邮政编码(ZIP)：78258

(A)姓名：David E.Comings

(B)街道：59 Crestview Court

(C)城市：Duarte

(D)州：加利福尼亚

(E)国家：美国

(F)邮政编码(ZIP)：91010

(A)姓名：John L.Ivy

(B)街道：10405 Skyline Drive

(C)城市：Austin(奥斯汀)

(D)州：得克萨斯

(E)国家：美国

(F)邮政编码(ZIP)：78759 (ii)发明名称：报偿缺陷综合征的等位基因多基因诊断和治疗 (iii)序列数：34： (iv)电脑可读形式：

(A)媒体类型：软盘

(B)电脑：IBM PC兼容

(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS

(D)软件：PatentIn Release#1.0，版本#1.30(EPO)   (v)当前申请资料：

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