一种化合物在治疗弱精症中的用途
阅读：2发布：2020-08-30
专利汇可以提供一种化合物在治疗弱精症中的用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种化合物在 治疗 弱精症中的用途，是如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备促进精子运 动能 力 、延长精子运动时间、和/或延长精子解冻后生存时间的药物或药盒中的应用，或在制备用于辅助生殖的药物或药盒中的应用，或在制备治疗弱精症的药物或药盒中的应用。，下面是一种化合物在治疗弱精症中的用途专利的具体信息内容。
1.一种如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备促进精子运动能力、延长精子运动时间、和/或延长精子解冻后生存时间的药物或药盒中的应用，或在制备用于辅助生殖的药物或药盒中的应用，或在制备治疗弱精症的药物或药盒中的应用；
。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物或药盒中还含有其它Ⅰ类、Ⅱb类和/或Ⅳ类去乙酰化酶(HDAC)抑制剂。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物或药盒中还含有其它HDAC1、HDAC2、HDAC6和/或HDAC11抑制剂。
4.如权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐制成的剂型为缓释剂、凝胶剂或透皮贴剂。
5.如权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐制成的剂型为适于口服、阴道使用、或精子运动途径使用。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述延长精子解冻后生存时间的药盒中还含有冻存液和/或复苏液。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药盒中含有涂层。
8.一种体外促进精子运动能力、延长精子运动时间、和/或延长解冻复苏精子生存时间的方法，或体外提高精卵结合和受精能力的方法，所述方法包括使精液或精子与如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐接触的步骤；
。
9.一种精子冻存方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将精子与如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐混合后进行冻存。
10.一种如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在精子冻存中的应用。
11.如权利要求10所述的应用，其特征在于，使所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐与精液或分离后的精子混合。
12.如权利要求10所述的应用，其特征在于，所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐与精液或分离后的精子混合后进行冻存。
13.一种用于接触精液或精子的器具的涂层，其特征在于，所述涂层中含有如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐。
14.如权利要求11所述的涂层，其特征在于，所述器具包括容器、器皿、器械。
15.一种如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备接触精液或精子的器具中的应用。
16.如权利要求15所述的应用，其特征在于，所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐用于制作所述器具的涂层。
17.如权利要求15或16所述的应用，其特征在于，所述器具包括容器、器皿、器械。
18.一种培养体系，其特征在于，所述培养体系含有用于精子培养的基础培养体系和如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐。
19.如权利要求18所述的培养体系，其特征在于，所述培养体系包括培养基和培养液。
20.一种试剂盒，所述试剂盒用于促进精子运动能力、延长精子运动时间、和/或延长精子解冻后生存时间，或用于辅助生殖，或用于治疗弱精症，其特征在于，所述试剂盒含有如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐和任选的用于精子培养的培养体系；优选地，所述试剂盒含有权利要求18或19所述的培养体系。
一种化合物在治疗弱精症中的用途
技术领域
背景技术
[0002] 目前治疗不孕不育有多种辅助生殖手段，如人工授精(Artificial Insemination，AI)、体外受精-胚胎移植(IVF)和卵浆内单精子注射(ICSI)等。这些技术均涉及到精子的体外培养和操作，在体外培养和操作的过程中，维持甚至提高精子的受精能力对于提高辅助生殖的成功率有着重要的作用。在体内受精时，需要具有良好运动能力的精子，能够迅速上游至输卵管与卵子受精；在体外受精时运动能力良好的精子具有足够动力穿透卵子的卵丘和透明带也是必不可少的，如此才能顺利进入卵质中完成受精。对于临床上常见的运动能力低下的精子，提高精子活力具有非常重要的意义。所以发现能提高精子运动能力的化合物是生殖医学工作者的研究重点之一。
[0003] 对于临床上常见的少、弱精症的精子通常要进行冷冻保存。在女方需要接受辅助生殖技术治疗时，确保在取卵当天有可使用的精子，是整个治疗过程中的重要环节。通常将事先冷冻保存的精子复苏后进行体外受精(IVF)而获得子代。虽然精液冷冻保存技术应用广泛，但经冷冻-解冻过程后的精液，其精子活力远不及新鲜精液，受精率往往低于自然交配。实验证明，冷冻精液妊娠率低的主要原因是精子运动能力下降，并且精子体外存活时间短。在人类生殖中，通过精子体外生存时间可以判断宫腔内人工授精妊娠率，具有重要的临床价值。因此，只要能够提高冷冻精子的运动能力，延长其解冻后的生存时间，就会增加受精率。
[0004] 研究发现，精子的运动功能还受到环境因素、人类体外辅助生殖技术用医疗器械中与精子直接接触的培养液类及器具/耗材类产品材质质量，毒性溶出物等的干扰和影响，可以通过改变容器化学组分降低影响，也可以通过涂层及添加的成分抵消或者对抗不良的影响，提高精子质量和改善辅助生殖结局。
[0005] 因此，本领域迫切需要能够促进精子运动、提高精子活力的化合物。
发明内容
[0006] 本发明旨在提供一类新的化合物，作为促进精子运动能力、延长和维持精子运动时间、治疗弱精子症等用途使用。该化合物具有很好的促精子运动活性并且有提高受精率和促进胚胎发育的作用。
[0007] 在本发明的第一方面，在本发明的第一方面，提供一种如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备促进精子运动能力、延长精子运动时间、和/或延长精子解冻后生存时间的药物或药盒中的应用，或在制备用于辅助生殖的药物或药盒中的应用，或在制备治疗弱精症的药物或药盒中的应用；
[0008] 。
[0009] 在另一优选例中，所述药物或药盒中还含有其它Ⅰ类、Ⅱb类和/或Ⅳ类去乙酰化酶(HDAC)抑制剂；更佳地，所述药物或药盒中还含有其它HDAC1、HDAC2、HDAC6和/或HDAC11抑制剂。
[0010] 在另一优选例中，所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐制成的剂型为缓释剂、凝胶剂或透皮贴剂。
[0011] 在另一优选例中，所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐制成的剂型为适于口服、阴道使用、或精子运动途径使用。
[0012] 在另一优选例中，所述延长精子解冻后生存时间的药盒中还含有冻存液和/或冻存复苏液。
[0013] 在另一优选例中，所述药盒中含有涂层；所述涂层位于接触精液的器具。
[0014] 在另一优选例中，所述药盒中含有用于接触精液的器具，器具上含有涂层，所述涂层中含有如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐；所述器具包括容器、器皿、器械。
[0015] 在本发明的第二方面，提供一种体外促进精子运动能力、延长精子运动时间、和/或延长解冻复苏精子生存时间的方法，或体外提高精卵结合和受精能力的方法，所述方法包括使精液或精子与如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐接触的步骤；
[0016] 。
[0017] 在本发明的第三方面，提供一种精子冻存方法，所述方法包括步骤：将精子与如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐混合后进行冻存。
[0018] 在本发明的第四方面，提供一种如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在精子冻存中的应用。
[0019] 在另一优选例中，所述应用包括使所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐与精液或分离后的精子混合；更佳地，所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐与精液或分离后的精子混合后进行冻存。
[0020] 在本发明的第五方面，提供一种用于接触精液或精子的器具的涂层，所述涂层中含有如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐；所述器具包括容器、器皿、器械。
[0021] 在本发明的第六方面，提供一种如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备接触精液或精子的器具中的应用；所述如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐用于制作所述器具的涂层；所述器具包括容器、器皿、器械。
[0022] 在本发明的第七方面，提供一种培养体系，所述培养体系含有用于精子培养的基础培养体系和如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐；所述培养体系包括培养基和培养液。
[0023] 在本发明的第八方面，提供一种试剂盒，所述试剂盒用于促进精子运动能力、延长精子运动时间、和/或延长精子解冻后生存时间，或用于辅助生殖，或用于治疗弱精症，所述试剂盒含有如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐和任选的用于精子培养的培养体系；优选地，所述试剂盒含有如上所述的本发明提供的培养体系。
[0025] 图1显示实施例1中关于精子活力，前向运动，直线速度，平均路径速度，精子头侧摆幅度，直线性，前向性，鞭打频率等方面的评估结果；SC表示去乙酰化酶抑制剂Scriptaid，即本发明如结构式Ⅰ所示的化合物。
[0026] 其中A关于精子活力SM；B关于前向运动PR；C关于平均路径速度VAP；D关于直线速度VSL；E关于精子头侧摆幅度ALH；F关于鞭打频率BCF；G关于前向性STR；H关于直线性LIN。
[0027] 图2显示如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐对冻存精子的活力及前向运动率的影响。
[0028] 图3显示不同浓度的如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐，在精子冻存复苏后加入，对精子活力的影响；图上的0小时和1小时表示复苏后时间。
[0029] 图4显示人精子透明质酸结合实验结果；SC表示去乙酰化酶抑制剂Scriptaid，即本发明如结构式Ⅰ所示的化合物。
具体实施方式
[0030] 发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现去乙酰化酶抑制剂(HDACi)Scriptaid(简称SC)，即本发明的结构如式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐具有促进精子运动能力、延长精子运动时间、延长解冻后精子生存时间，以及辅助生殖等作用。在此基础上，完成了本发明。
[0031] 具体而言，本发明结构如式I所示的化合物具有以下结构：
[0032]
[0033] 本发明式I化合物CAS号:287383-59-9,可参照Gerova M S,Petrov O I.Cheminform,2014,45(23):76-79记载的方法制备得到，也可通过商业渠道购置。
[0034] 应理解的是，本文所述的“药学上可接受的盐”包括本领域周知的各种可药用盐。
[0035] 如本文所用，“弱精症”是指精子运动力差甚至无活动能力。是临床上最常见的导致男性不育的原因之一。
[0036] 根据本发明化合物的特性，本领域的专业技术人员均理解，其应用并不局限于人类精子，也可以是动物的精子。
[0037] 根据本发明化合物的特性，本领域的专业技术人员均理解，其应用并不局限于不育，也可以是在低于平均能力或平均能力的基础上进一步提高/促进精子受精和生育能力。
[0038] 本发明提供结构如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备促进精子运动能力、延长精子运动时间、和/或延长精子解冻后生存时间的药物或药盒中的应用，以及在制备用于辅助生殖的药物或药盒中的应用，并且在制备治疗弱精症的药物或药盒中的应用。
[0039] 根据本发明化合物的特性，本领域的技术人员均理解，其应用也适合于ICSI技术中精子的优选。即应用本发明化合物的特性，激活临床ICSI技术中使用的少量的(单条或者多条)不运动或者弱运动精子，帮助技术人员从中挑选质量好的精子应用于后续的单精子注射。
[0040] 根据本发明化合物的特性，本领域的技术人员均理解，其应用也适合于不育病人的睾丸或附睾取精(单精子和/或少量精子)的冻存和/或后续的精子复苏及辅助生殖用途。
[0041] 本发明提供的药物或药盒中还可以含有其它Ⅰ类、Ⅱb类和/或Ⅳ类去乙酰化酶(HDAC)抑制剂，例如但不限于，分别或共同作用于HDAC1、HDAC2、HDAC6和/或HDAC11的化合物；这些化合物包括但不限于，Entinostat,Mocetinostat,Romidepsin,CUDC-101,Tubastatin A HCl,Quisinostat,Pracinostat,Droxinostat,Abexinostat,Ricolinostat,Tacedinaline,CUDC-907,Tubacin,RG2833,Resminostat,Tubastatin A,WT161,Valproic acid，ACY-738，Tucidinostat，Citarinostat，BRD73954，BG45，4SC-202，CAY10603，Santacruzamate A，Nexturastat A，HPOB。
[0042] 本发明提供的药物或药盒可通过透皮、阴道或子宫给药等可选的方式预置于精子运动的路途中，与精子作用而发挥效果；例如但不限于，口服、阴道环等可选的方式。
[0043] 本发明还提供一种体外促进精子运动能力和/或延长精子运动时间的方法，所述方法包括使精液与本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐接触的步骤。
[0044] 本发明中，精子运动能力包括但不限于精子活力、前向运动、直线速度、平均路径速度、精子头侧摆幅度、直线性、前向性和鞭打频率中的一种或多种。在某些实施方案中，本发明尤其涉及精子活力、前向运动、平均路径速度和鞭打频率中的一种或多种的改善或提高。
[0045] 通常，获取精液后，将精液与常规的精子细胞培养液如BWW培养基混合，离心后重悬，然后加入本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐培养合适的时间。通常，式I化合物或其药学上可接受的盐加入后其终浓度在100μM以内，例如1-100μM，精子终浓度在1-50*10^6个/ml。培养可在常规的培养条件下进行，例如在37℃、5％CO2的培养箱中进行。精液可来自任何有需要的个体，尤其是来自少弱精症患者。或者，在某些实施方案中，使用本文所述的含有本文所述式I化合物或药学上可接受的盐的培养基重悬上述离心后获得的精子细胞。
[0046] 本发明还提供一种延长解冻复苏精子生存时间的方法，所述方法包括使精液与本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐接触的步骤。在本发明的一种实施方式中，在冻存前使精液与本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐接触，例如但不限于，将精液与冻存液的混合液中加入本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，室温放置后进行冻存。通常，上述精液与冻存液的混合液中加入的式I化合物或其药学上可接受的盐的终浓度范围是5-20μM。在本发明的另一种实施方式中，将经冻存的含有精液与冻存液的混合液室温融化复苏，然后加入本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐。
[0047] 本发明还提供一种体外提高精卵结合和受精能力的方法，所述方法包括使精液与本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐接触的步骤。在本发明的一种实施方式中，可以通过上述体外促进精子运动能力和/或延长精子运动时间的方法得到获能的精子，再将获能的精子与卵母细胞一起培养。培养可在常规的培养条件下进行，例如在37℃、5％CO2的培养箱中进行。
[0048] 在某些方面，本发明还提供一种培养体系，包括培养基和培养液。所述培养体系中含有式I化合物或其药学上可接受的盐。在本发明的一种实施方式中，所述培养基含有用于精子培养的基础培养基，并添加有式I化合物或其药学上可接受的盐。用于精子培养的基础培养基可以是本领域周知的各种适用于精子培养的培养基，如BWW。式I化合物或其药学上可接受的盐在该基础培养基中的浓度可以在1-100μM的范围内，例如，式I化合物或其药学上可接受的盐可在1-50μM、1-20μM或5-15μM的范围内。
[0049] 在某些方面，本发明还提供一种试剂盒，所述试剂盒含有式I化合物或其药学上可接受的盐。该试剂盒可用于促进精子运动能力、延长精子运动时间、和/或延长精子解冻后生存时间，或用于辅助生殖。试剂盒中还可含有其它合适的试剂，例如用于精子培养的培养基或培养液。式I化合物或其药学上可接受的盐和培养基可独立包装或以混合物的形式提供。因此，在某些实施方案中，所述试剂盒含有本文所述的培养基。
[0050] 在某些方面，本发明还提供一种用于接触精液或精子的器具的涂层，所述涂层中含有如结构式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐；该涂层可中和不利于精子运动力维持的一些影响因素，例如但不限于，环境、取精杯材质等。适用于这样的涂层的器具包括容器、器皿、器械；所述涂层至少涂覆于使用中会与精子接触的地方。
[0051] 本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
[0052] 本发明的主要优点在于：
[0053] 本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐可以显著增强精子的运动活力，包括冷冻后精子的复苏率，并且已有研究表明对于胚胎的体外和体内发育具有稳定作用，因此，本化合物在治疗男性弱精子方面具有很大潜力。
[0054] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，是指在100毫升的溶剂中溶质的重量。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0055] 实施例1
[0056] 体外促进弱精子症精子运动
[0057] 精液样本来源于医院门诊就诊的30例少弱精症患者的精子，禁欲48小时-7天，手淫方式取精于干燥无菌的取精杯内，37℃60min内完全液化。每份精液按照精液：培养基(BWW)＝1:1的比例置于离心管中，300g,15min离心后重悬(终浓度为5×10^6个/ml)，重悬液等分为药物组及对照组，药物组加入终浓度为10μM的Scriptaid(购自Selleck(中国，上海蓝木化工有限公司))，对照组加入等体积灭菌水。在37℃、5％二氧化碳培养箱中孵育1h，3h，5h后用全自动精子质量分析仪CASA(IVOS,Hamilton-Thorn Research,Inc.Beverly,MA,USA)对精子参数(具体的，精子活力SM％，前向运动PR％，直线速度VSL，平均路径速度VAP，精子头侧摆幅度ALH，直线性LIN，前向性STR，鞭打频率BCF)进行评估。对于每个标本，选取6-10个视野，计数到的精子数不少于800个。
[0058] 详细结果见图1。
[0059] 结果表明，Scriptaid具有提高弱精子症患者的精子运动能力的作用。
[0060] 实施例2
[0061] 提升精子在培养液中的存活时间(至丧失活动性的时间)
[0062] 同实施例1中样本采集过程及分组，在37℃、5％二氧化碳培养箱中孵育，每5小时，采用全自动精子质量分析仪测定培养物中的游动精子百分数。当前向运动的精子少于5％时，样本被视为不再有活力。样本分别来自三位不同的弱精子症病人。详细结果见表1。
[0063] 表1
[0064]
[0065] 结果表明，药物组的精子存活时间显著高于正常组，Scriptaid可延长精子运动时间。
[0066] 实施例3
[0067] 提高弱精子症的精卵结合和受精能力
[0068] 未性成熟雌性仓鼠腹腔注射血促性素PMSG(60IU/只)，48小时后注射绒促性素HCG(100IU/只)促排卵，12-15小时后处死促排卵雌鼠，打开腹腔取出输卵管，置于平衡后的BWW中，将输卵管壶腹部撕开使卵丘-卵母细胞复合物流出，去除输卵管和组织碎片，按10％的比例加入透明质酸酶(HY)，待卵丘细胞脱落后，在BWW中洗3次，移入台式液中去透明带，再在BWW中洗3次，置于37℃，5％二氧化碳培养箱中备用。雄鼠处死后取其附睾尾部，用眼科镊挤压附并放在BWW中让精液游出，用精子分析仪进行检测，前向运动小于50％为弱精子，大于50％的为正常精子。在弱精子中加入SC，使其终浓度为10μM，将正常精子组、弱精子组合弱精子+SC组放入平衡的HTF管，在37℃、5％二氧化碳培养箱中孵育1h使其获能，将获能的精子与去透明带的仓鼠卵母细胞再在37℃、5％二氧化碳培养箱孵育3小时。用醋酸-地衣红染色剂进行染色，并用显微镜计数穿透每一卵母细胞的精子数目及被穿透的卵母细胞数目，详细结果见表2。
[0069] 表2
[0070]
[0071] 结果表明，Scriptaid作用于弱精子后穿透卵细胞的穿透率、受精指数与弱精子组相比能提高150％以上，可使其接近正常精子组的水平。
[0072] 实施例4
[0073] 体外受精率及桑椹胚、囊胚生成率
[0074] 未性成熟雌性小鼠腹腔注射血促性素PMSG(10IU/只)，48h后注射绒促性素HCG(10IU/只)，12-15小时后处死促排卵雌鼠，打开腹腔取出输卵管置于H-CZB液滴内，将输卵管壶腹部撕开，使卵丘-卵母细胞复合物流出。去除输卵管和组织碎片，将团状复合物转移至预先平衡好的H-CZB中，每滴1-2团复合物。置于37℃，5％二氧化碳培养箱中备用。雄鼠处死后取其附睾尾部，用眼科镊挤压附并放在BWW中让精液游出。在获能液中加入SC，使其终浓度为1μM,2μM,5μM,10μM，放入平衡的HTF管中使其获能1h。受精时用移液枪吸取10μl精子到含有卵丘-卵母细胞复合物的100μl HTF受精滴中，精子终浓度控制在1-2×10^6个/ml，此时SC浓度为90nM，180nM，450nM，900nM。培养8-10h，再将卵子转移至KSOM小滴中并继续在37℃，5％二氧化碳中培养。此过程中计算受精率(受精卵子数/总卵子数)，受精24小时后观察2-细胞率(2-细胞/受精卵数)，48小时候观察4-细胞率(4-细胞/受精卵数)，72小时观察桑椹胚率(桑椹胚数/受精卵数)，96小时观察囊胚率(囊胚数/受精卵数)，详细结果见表3。
[0075] 表3
[0076]
[0077] 结果表明，Scriptaid在一定浓度范围内(小于5μM)处理正常小鼠精子对于IVF的受精率以及桑椹胚、囊胚生成率无不利影响；在体内受精时对受精过程及胚胎发生有积极影响，从表中比率看出Scriptaid处理使受精率和囊胚率有提高。
[0078] 实施例5
[0079] 毒性实验
[0080] 同实施例1中样本采集过程，按照精液：培养基(BWW)＝1:1的比例置于离心管中，300g,15min离心后重悬，重悬液设置SC浓度梯度100μM，50μM，25μM，12.5μM，6.25μM及对照组，将各组样本在25摄氏度下放置24h后，用全自动精子质量分析仪测定培养物中的游动精子百分数。样本分别来自三位不同的弱精子症病人。结果列于表4。
[0081] 表4
[0082] 100μM 50μM 25μM 12.5μM 6.25μM 0μM
样本1 46％ 40％ 42％ 39％ 36％ 35％
样本2 50％ 46％ 47％ 47％ 43％ 39％
样本3 55％ 53％ 49％ 49％ 47％ 43％
样本1 46％ 40％ 42％ 39％ 36％ 35％
样本2 50％ 46％ 47％ 47％ 43％ 39％
样本3 55％ 53％ 49％ 49％ 47％ 43％
[0083] 结果表明，Scriptaid在100μM以下浓度对于精子均无毒性作用。
[0084] 实施例6
[0085] 人精子冻存试验
[0086] 同实施例1中样本采集过程，冻存前精子活力及前向运动率分别为40％和34％。按照精液：冻存液(origin,1067)＝1:1的比例混匀置于离心管中，在混合液中分别加入5μM，10μM，20μM SC，室温放置10min后，放入麦式管中，在液氮蒸汽中熏蒸30min后，放入液氮保存。24h后从液氮中取出，室温融化复苏，用全自动精子质量分析仪测定游动精子百分数，结果如图2。
[0087] 结果显示，5μM的Scriptaid能使精子活力及前向运动率恢复至冻存前的状态；10μM和20μM的Scriptaid甚至能使精子活力及前向运动率比冻存前的状态更佳，表明Scriptaid具有促进精子运动能力的作用。
[0088] 结果表明，在精子冻存液中添加Scriptaid可以提高精子的冻存复苏率。
[0089] 实施例7
[0090] 人精子复苏试验
[0091] 同实施例1中样本采集过程，按照精液：冻存液(origin,1067)＝1:1的比例混匀置于离心管中，室温放置10min后，放入麦式管中，在液氮蒸汽中熏蒸30min后，放入液氮保存。24h后从液氮中取出，室温融化复苏，离心后用精子培养基重悬并等分为4份，其中一份作为正常对照，其余分别加入5μM，10μM，20μM SC，37℃孵育15分钟后用全自动精子质量分析仪测定游动精子百分数，结果如图3。
[0092] 结果表明，Scriptaid具有增进解冻后精子运动能力恢复的作用。
[0093] 实施例8
[0094] 人精子透明质酸结合实验
[0095] 同实施例1中样本采集过程，选取弱精患者精子样本，按照精液:培养基(BWW)＝1:1的比例置于离心管中，300g,15min离心后重悬，重悬液设置对照组和添加5μM SC组，37℃
1h后用精子-透明质酸结合试剂盒(HBA)进行检测，结果如图4。
1h后用精子-透明质酸结合试剂盒(HBA)进行检测，结果如图4。
[0096] 结果表明，Scriptaid可使弱精子症患者的精子的HA结合能力恢复至正常者的60％，比弱精子症患者精子的相应能力提高了5倍；显示Scriptaid可有效提高精子的质量。
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