用于产生视黄酸的试剂
阅读：2发布：2020-10-18
专利汇可以提供用于产生视黄酸的试剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供一种能够通过新机制诱导 生物 防御功能的 试剂 ，特别是一种包含乳杆菌作为活性成分的产生视黄酸的试剂和一种包含所述产生视黄酸的试剂的免疫增强剂。，下面是用于产生视黄酸的试剂专利的具体信息内容。
用于产生视黄酸的试剂
技术领域
背景技术
[0002] 当病原性细菌、真菌、病毒或类似物入侵并在包括人的哺乳动物体内生长时，发展症状诸如腹泻、胃肠疾病或发烧。严重的症状有时可以导致死亡。尽管现代社会拥有先进的药物，但此类传染性哺乳动物疾病还没有被完全清除。对传染性疾病的防御是追求过健康生活的人类主要关切的问题。
[0003] 比健康的成人具有更低抵抗力(包括关于防御感染的能力)的年龄的人们，诸如老年人、婴儿和儿童，更有可能被此类传染性疾病影响。由于抗感染的自身防御功能的降低与衰老相关，例如，老年人被常在菌(indigenous bacteria)感染,而健康成年人不会被其感染(例如存在于鼻粘膜内的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus))。如果在老年人中观察到传染性疾病的发展，则将患有传染性疾病的患者物理隔离并关闭发展传染性疾病的患者曾停留其中或拜访的设施，以防止传染性疾病传播。此外，婴儿和/或儿童具有不成熟的免疫系统，并且因此，由于他们自身抗感染的防御的能力低，因此他们比健康的成年人更容易被传染性疾病影响。
[0004] 通常，为了应对传染性疾病，首先鉴定此类传染性疾病的起因，然后施用具有抗微生物活性的药物进行治疗。然而，当向患者施用具有抗微生物活性的药物时，具有抗微生物活性的药物除引起传染性疾病的特定细菌或病毒外还攻击不引起传染性疾病并且天然定殖于体内的肠道细菌，诸如所谓的非病原性双歧杆菌。因此，副作用诸如腹泻可以由于被其他病原体感染而发展。此外，由于重复施用或长期施用具有抗微生物活性的相同药物，引起传染性疾病的病原性细菌、真菌和病毒可以逐渐获得对该药物的耐受性，并且抗微生物作用可能偶尔下降。如果病原体获得药物耐受性，那么传染性疾病的治疗变得困难。因此，期待开发基于新机制的能够预防或治疗传染性疾病的物质。
[0005] 一直以来，生物体发挥免疫功能来预防引起传染性疾病的病原性细菌、真菌和病毒的侵入和定殖是基本知识。例如，已知是免疫功能的指示物的视黄酸参与调节性T细胞的分化、细胞迁移和IgA产生的诱导。此外，视黄酸已经被用于治疗多种皮肤状况，诸如痤疮、皱纹、银屑病、老年斑和暗沉(stains)(专利文献1)。
[0006] 引用列表
[0007] 专利文献
[0008] 专利文献1：JP专利公开号10-036249A(1998)
[0009] 发明概述
[0010] 本发明待解决的问题
[0011] 本发明的目的是提供一种能够基于新机制在体内诱导身体本身的生物防御功能的试剂。
[0012] 解决问题的方式
[0013] 考虑到以上目的，本发明的发明人已经进行了集中的研究。结果是，他们已经获得了以下发现。具体地，本发明的发明人已经发现，某个类型的乳酸菌的摄入和/或作用增强是免疫功能指示物的视黄醛脱氢酶的基因表达，并且从而促进也是免疫功能指示物的视黄酸产生，这可以解决上述问题。在本发明中用作活性成分的乳酸菌已经以，例如发酵食品的形式被食用很长时期。因此，用于产生视黄酸的试剂和用于增强免疫功能的试剂是高度安全的并且具有低副作用的风险。
[0014] 本发明的用于产生视黄酸的试剂或用于增强免疫功能的试剂被受试者摄入和/或作用于受试者，从而在体内更强地诱导利用视黄醇脱氢酶从视黄醇生成视黄酸，并因此增强免疫功能。根据本发明，例如，可以预期对由机会致病菌引起的传染性疾病、由病原性细菌或真菌引起的传染性疾病、幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)感染、由病毒引起的传染性疾病、细菌移位、长期肠粘膜炎症、肠道菌群平衡的改变(例如，肠道菌群平衡的破坏)、由上述炎症引起的疾病、炎性肠病诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎、严重炎症和过敏症状的预防性和/或治疗性作用。此外，可以预期根据本发明通过乳酸菌促进视黄酸产生在具有不成熟的免疫功能的婴儿和儿童中、具有降低的免疫功能的老年人和患有各种疾病的病人中导致感染风险的降低、炎症的抑制和抗过敏作用。根据本发明，可以预期这样的作用，特别是对于老年人或年老的哺乳动物。
[0015] 具体地，本发明包括以下方面：
[0016] [1]一种用于产生视黄酸的试剂，所述用于产生视黄酸的试剂包含乳酸菌作为活性成分。
[0017] [2]根据[1]所述的用于产生视黄酸的试剂，其中所述乳酸菌是乳杆菌属细菌。
[0018] [3]根据[1]或[2]所述的用于产生视黄酸的试剂，其中所述乳酸菌是德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus)。
[0019] [4]根据[1]至[3]中任一项所述的用于产生视黄酸的试剂，其中所述乳酸菌是德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1(登录号FERM BP-10741)。
[0021] [6]一种用于增强免疫功能的试剂，所述用于增强免疫功能的试剂包含根据[1]至[5]中任一项所述的用于产生视黄酸的试剂。
[0022] [7]一种用于增强免疫功能的试剂，所述用于增强免疫功能的试剂包含乳酸菌作为活性成分。
[0023] [8]根据[7]所述的用于增强免疫功能的试剂，其中所述乳酸菌属于乳杆菌属。
[0024] [9]根据[7]或[8]所述的用于增强免疫功能的试剂，其中所述乳酸菌以100,000,000或更多细胞/单位包装存在。
[0025] [10]根据[7]至[9]中任一项所述的用于增强免疫功能的试剂，其中所述乳酸菌是德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1073R-1(FERM BP-10741)。
[0027] 本发明的效果
[0028] 本发明可以提供一种能够通过促进视黄酸产生而强烈诱导身体自身的生物防御功能的试剂。
[0029] 实施本发明的实施方案
[0030] 以下对本发明进行更详细的描述，但本发明并不限于以下描述的实施方案。
[0031] 在本发明中，术语“乳酸菌”总体指分类学上承认的乳酸菌或也指与其密切相关的全部细菌，诸如双歧杆菌，不限于任何种类或菌株。在本发明中，可以使用具有提高视黄酸产生的活性，诸如增强视黄醛脱氢酶基因的表达的活性的任何乳酸菌。尽管乳酸菌可以被分类为植物源或动物源乳酸菌，植物源或动物源乳酸菌都可以在本发明中使用。特别地，本发明中使用的乳酸菌优选为乳杆菌属(乳杆菌细菌)的乳酸菌，并且，例如，选自乳杆菌属的乳酸菌的一种或更多种菌株是优选的，因为它们拥有以发酵乳诸如酸奶的形式被摄入的历史。并且，本发明使用的乳杆菌属的乳酸菌更优选为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii ssp.bulgaricus)，其被称为保加利亚乳杆菌
(Lactobacillus bulgaricus)，更优选地且进一步优选地为德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1(登录号FERM BP-10741)。德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1根据布达佩斯条约于1999年2月22日(原始保藏日期)以登录号FERM BP-10741在国际专利生物保藏单位，日本评价技术研究所特许生物寄存中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足
2-5-8,120室)国际保藏。此菌株于2006年11月29日从国内保藏转为国际保藏。
(Lactobacillus bulgaricus)，更优选地且进一步优选地为德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1(登录号FERM BP-10741)。德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1根据布达佩斯条约于1999年2月22日(原始保藏日期)以登录号FERM BP-10741在国际专利生物保藏单位，日本评价技术研究所特许生物寄存中心(NITE-IPOD)(日本千叶县木更津市上总镰足
2-5-8,120室)国际保藏。此菌株于2006年11月29日从国内保藏转为国际保藏。
[0032] 本发明中使用的乳酸菌可以是有活力的或死亡的细胞。并且，本发明中使用的乳酸菌可以是冷冻的或冻干的细胞。此外，本发明中使用的乳酸菌可以是单独的乳酸菌细胞，或者它们可以呈除乳酸菌细胞以外包含其他组分(例如，低温保护剂、冻干保护剂或类似物)的形式，或者它们可以是分散于不同已经被用作药物或食品材料的介质，诸如水或淀粉中。
[0033] 本发明中使用的乳酸菌可以包括可通过常规技术获得的源自细菌细胞或其代谢物的任何物质，所述细菌细胞或其代谢物诸如被破坏的细胞或由培养或发酵产生的细胞代谢物，以及细菌细胞本身(有活力的或死亡的细胞)。例如，乳酸菌诸如德氏乳酸杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1(登录号FERM BP-10741)在培养期间产生胞外多糖(EPS)。使用乳酸菌或包含产生的胞外多糖的乳酸菌培养物在根据本发明使用乳酸菌的范围内。
[0034] 本发明提供一种用于产生视黄酸的试剂(或一种用于促进视黄酸产生的试剂)，所述试剂包含如上描述的乳酸菌作为活性成分。在一个优选的实施方案中，本发明中使用的乳酸菌(具有提高视黄酸生产的活性的乳酸菌)和包含乳酸菌作为活性成分的用于产生视黄酸的试剂，能够在动物细胞中增强视黄醛脱氢酶基因的表达，从而在动物细胞中促进由视黄醛脱氢酶催化的视黄醛向视黄酸的转化(视黄酸的产生)。本发明中使用的乳酸菌是否具有增强视黄醛脱氢酶基因的表达的活性可以如以下实施例描述的确定。即，在乳酸菌的存在下，培养动物细胞(优选肠系膜淋巴结细胞或源自肠系膜淋巴结细胞的树突细胞)一段给定的时期(例如，在37℃，24小时)，然后从细胞提取mRNA，用实时RT-PCR定量动物细胞中视黄醛脱氢酶(例如，RALDH2)基因的mRNA，并确定mRNA水平是否相对于对照(通过在不存在该乳酸菌下培养动物细胞而获得的样品)的mRNA水平显著增加。与对照相比，使用根据本发明的用于产生视黄酸的试剂，视黄醛脱氢酶基因的mRNA水平通常可以增加20％或更多，优选地40％或更多。
[0035] 根据本发明的用于产生视黄酸的试剂能够通过促进视黄酸产生赋予动物(优选哺乳动物)或其细胞不同生理活性。例如，已知视黄酸赋予肠相关的淋巴器官中的T细胞或B细胞至小肠组织的归巢特异性，从而诱导细胞(淋巴细胞)在小肠组织中的分配，并且视黄酸诱导IgA的产生，IgA对于在肠相关的淋巴器官中防御传染性疾病是重要的。因此，视黄酸被认为是肠免疫系统的免疫功能的指示物。还已知视黄酸抑制促炎性T细胞分化的诱导并促进抑炎性调节性T细胞分化的诱导,从而抑制炎症应答诸如自身免疫应答。因此，根据本发明的用于产生视黄酸的试剂加强对传染性疾病的防御，以发挥对传染性疾病的预防作用，并且它可以通过抑制炎症应答发挥预防、治疗或改善炎症性疾病诸如自身免疫疾病的作用。传染性疾病的实例包括由机会致病菌或病原性细菌、真菌或病毒引起的那些。炎症性疾病的实例，诸如自身免疫疾病，包括但不限于，炎性肠病，诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎，以及过敏症状。根据本发明的用于产生视黄酸的试剂可以用于通过促进皮肤中的视黄酸产生来改善各种皮肤状况，诸如痤疮、皱纹、银屑病、老年斑和暗沉。视黄酸的多种其他生理活性也是已知的。待被施用根据本发明的用于产生视黄酸的试剂的受试者可以是动物，优选哺乳动物，并且特别优选老年人或年老的哺乳动物。出于促进细胞中视黄酸生产的目的，根据本发明的用于产生视黄酸的试剂可被用于处理动物诸如哺乳动物的细胞或组织(例如肠相关的淋巴器官或其树突状细胞，或皮肤细胞诸如表皮细胞或真皮细胞)。
[0036] 本发明中使用的乳酸菌能够基于在肠相关的淋巴器官并且特别是其树突状细胞中产生的增加量的视黄酸而增强免疫功能。本发明还提供了用于增强免疫功能的试剂，所述用于增强免疫功能的试剂包含根据本发明的用于产生视黄酸的试剂。此外，本发明提供了用于增强免疫功能的试剂，所述用于增强免疫功能的试剂包含如上所述的乳酸菌。
[0037] 根据本发明的用于增强免疫功能的试剂指能够通过由生物体摄入该试剂和/或该试剂作用于生物体而在体内诱导基因或类似物，从而产生源自该基因的免疫指示物的试剂，所述生物体诸如哺乳动物，包括人。特别地，根据本发明的用于增强免疫功能的试剂能够增强视黄醇脱氢酶基因的表达，从而改善生物体诸如哺乳动物的免疫功能。在本发明中，术语“摄入”指向生物体包括人体内的胃肠道中引入活性成分。在本发明中，“施用”包括摄入和肠胃外应用(例如，局部应用至皮肤和类似物)。对施用方式没有特别的限制，并且包括任何已知的施用方式，诸如口服、经管、经肠、透皮(例如，擦涂、贴片或喷雾)和皮下施用。
[0038] 根据本发明的免疫功能的改善的实例包括预防和/或治疗由机会致病菌引起的传染性疾病、由病原性细菌或真菌引起的传染性疾病、幽门螺旋杆菌感染、由病毒引起的传染性疾病、细菌移位、长期肠粘膜炎症、肠道菌群平衡的改变(例如，肠道菌群平衡的破坏)、由这些炎症引起的疾病以及炎性肠病诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎。实例还包括通过诱导调节性T细胞分化来预防和/或治疗严重炎症和过敏症状。此外，免疫功能的改善的实例还包括在具有不成熟的免疫功能的婴儿和儿童中、具有降低的免疫功能的老年人中和患各种疾病的患者中降低感染风险、抑制炎症和抗过敏作用。特别地，待被施用根据本发明的用于增强免疫功能的试剂的受试者优选是老年人或年老的哺乳动物。
[0039] 根据本发明的增强免疫功能的作用可以通过使用充当体内的免疫功能的指示物(即，免疫指示物)的任何物质的产量的增加作为指示来评价。例如，视黄酸参与调节性T细胞的分化、细胞迁移和IgA产生的诱导，并且免疫功能是否增强可以通过使用在体内引起视黄酸产生的反应性作为指示来评价。免疫指示物可以是视黄酸，或其可以是所谓的视黄酸前体，诸如视黄醛，视黄醛在其特定位点经水解被活化。免疫指示物可以是诱导免疫指示物诸如视黄酸的产生的不同物质，例如，催化免疫指示物诸如视黄酸的合成的蛋白质或编码该蛋白质的基因的mRNA。即，本发明的免疫指示物的产生的诱导可以是编码为体内的免疫指示物的蛋白质的基因的增加的表达，从而表达免疫指示物，或通过免疫指示物的活性产生其他免疫指示物。尽管对编码免疫指示物的基因没有特别的限制，优选的基因的实例是视黄醛脱氢酶(例如，RALDH2)基因。
[0040] 本发明还提供一种用于预防和/或治疗与视黄酸的降低或缺乏相关的各种疾病的试剂。此外，本发明提供了一种使用用于产生视黄酸的试剂预防和/或治疗与视黄酸的降低或缺乏相关的各种疾病的方法。所述各种疾病的实例包括与视黄酸的降低或缺乏相关的任何疾病、症状和综合征，包括由机会致病菌引起的传染性疾病、由病原性细菌或真菌引起的传染性疾病、幽门螺旋杆菌感染、由病毒引起的传染性疾病、细菌移位、长期肠粘膜炎症、肠道菌群平衡的改变(例如，肠道菌群平衡的破坏)、由这些炎症引起的疾病、炎性肠病诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎、严重炎症和过敏症状；以及被怀疑是疾病、症状和综合征的任何状况，无论在本发明的递交日期和/或优先权日期之前还是之后。另外，本发明提供了一种美白的方法，所述方法包括基于例如专利文献1中公开的美白作用向皮肤或其类似物肠胃外施用根据本发明的用于产生视黄酸的试剂(一种预防、治疗或美容方法)。待被施用根据本发明用于产生视黄酸的试剂的受试者可以是动物，诸如哺乳动物，并且特别优选老年人或年老的哺乳动物。
[0041] 根据本发明的用于产生视黄酸的试剂和用于增强免疫功能的试剂可以包含用前述乳酸菌(具有提高视黄酸产生的活性的乳酸菌)发酵的材料。用前述乳酸菌发酵的材料没有特别的限制，条件是该材料通过用乳酸菌发酵已经被哺乳动物包括人摄入的材料制备。材料的实例特别包括通过用前述乳酸菌发酵乳、大豆、赤豆、谷物、蔬菜、肉、鱼或其任何混合物制备的材料。
[0042] 通过用乳酸菌发酵乳制备的材料的实例是如下获得的材料：将原料乳、乳制品和原料水合并以获得脂肪含量为以重量计3.0％且非脂肪固体含量为以重量计9.2％的乳，任选地将其匀质化以按需要调节乳脂肪球，然后将所得物在等价于在65℃保持30分钟的无菌条件下加热灭菌，冷却至40℃至45℃，添加包含德氏乳杆菌保加利亚亚种(例如，德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1)和唾液链球菌嗜热亚种(Steptococcus salivarius subsp.thermophiles)的混合起始物作为乳杆菌乳酸菌，将其在40℃至45℃发酵2至12小时，并调节乳酸的酸度至以重量计0.6％至1.2％。在此情况下，德氏乳杆菌保加利亚亚种和唾液链球菌嗜热亚种的菌株没有特别的限制，并且可以任选地添加除了所述两种细菌物种以外的乳酸菌(例如，乳杆菌、双歧杆菌、乳球菌(Lactococcus)或明串珠菌(Leuconostoc))和对发酵或健康有用的其他微生物、材料或添加剂。本文使用的术语“原料乳(milk as meterial)”指，但不限于来自奶牛、山羊、绵羊、水牛等的所谓的鲜乳或生乳，或具有与鲜乳或生乳相同的组成的重构乳；并且也可以是通过添加(或富集)乳脂肪和/或非脂肪固体(例如乳蛋白、乳糖或灰分)制备的乳、通过除去乳脂肪制备的低脂乳或非脂肪乳，或用于对乳糖低耐受的人个体的除去乳糖的乳或降解乳糖的乳。另外，原料乳也可以是为限制摄入矿物质诸如钠的患者制备的和/或为调节摄入期间感觉到的咸味而制备的去除矿物质的乳，或为需要摄入矿物质诸如钙的患者制备的富含钙的乳。当使用乳酸菌发酵的此类材料时，根据本发明的用于产生视黄酸的试剂和用于增强免疫功能的试剂除前述具有提高视黄酸产生的活性的乳酸菌以外，可以包含其它乳酸菌，诸如链球菌细菌。
[0043] 对包含于根据本发明的用于产生视黄酸的试剂和用于增强免疫功能的试剂中的乳酸菌的数量没有特别的限制，条件是该试剂包含乳酸菌。在试剂中，乳酸菌优选以100,000,000或更多细胞/单位包装存在，更优选地500,000,000或更多细胞/单位包装，并且进一步优选地1,000,000,000或更多细胞/单位包装。尽管可以预期，本发明的效果随着乳酸菌的数量升高变得更强，从一般乳酸菌生长的角度考虑，乳酸菌的数量的典型上限为10,
000,000,000,000细胞。
000,000,000,000细胞。
[0044] 对每单位包装的根据本发明的用于产生视黄酸的试剂和用于增强免疫功能的试剂的重量没有特别的限制。当乳酸菌以100,000,000或更多细胞/1g用于产生视黄酸的试剂和用于增强免疫功能的试剂存在时，用于产生视黄酸的试剂和用于增强免疫功能的试剂的重量优选为10g至500g/单位包装，更优选25g至250g/单位包装，进一步优选50g至200g/单位包装，并且仍进一步优选75g至150g/单位包装。本发明中使用的术语“单位包装”不仅指包装袋、盒或容器本身，也指此类包装袋、盒或容器中的单剂量单位包装形式或一日剂量单位包装形式。
[0045] 当根据本发明的用于产生视黄酸的试剂或用于增强免疫功能的试剂经口施用时，例如，乳酸菌或用乳酸菌发酵的材料可以以未改变的形式施用(或摄入)。可选择地，乳酸菌或材料可以以例如片剂、颗粒、粉末制剂、胶囊或粉末的形式施用(或摄入)。根据本发明的用于产生视黄酸的试剂和用于增强免疫功能的试剂可以以溶液、乳剂、凝胶、粉末或霜剂的形式经肠胃外地施用至皮肤或类似物(例如通过涂擦、贴片或喷雾经由透皮应用)。
[0046] 本发明中增强免疫功能的作用在摄入本发明的乳酸菌后在体内的胃肠道发挥。胃肠道的实例包括一组器官，包括口腔、咽、食道、胃、十二指肠、小肠、大肠、盲肠，直到肛门。尽管代表性的胃肠道部分在本文中列举，但例如，已知的或本领域一般技术知识范围内的任何胃肠道的部分，诸如结肠(小肠的下部)、回肠、空肠(小肠的上部)、上腹部的胃肠道、下腹部的胃肠道、大肠上部和大肠下部也属于根据本发明的“胃肠道”的范围。
[0047] 在使本发明的乳杆菌起效后(例如，经涂擦、喷雾或注射)，根据本发明的增强免疫功能的作用可以在体内和体外的不同部位发挥。体内和体外的部位的实例包括皮肤、毛发、眼球、鼻粘膜、外耳、中耳、指甲和各种器官的表面。
[0048] 根据本发明的用于增强免疫功能的试剂对各种动物，并且优选哺乳动物，包括人，发挥增强免疫功能的作用。因此本发明提供一种用于治疗和/或预防各种疾病的方法，所述方法包括使动物摄入用于增强免疫功能的试剂或向动物施用增强免疫功能的试剂。在本发明中，哺乳动物可以是任何已知的家畜、宠物动物、观赏动物、野生动物或被分类为哺乳动物的类似物。其实例包括人、奶牛、猪、绵羊、海豚、鲸、老虎、狮子、猎豹、河马、长颈鹿、骆驼、羊驼、狗、猫、猴子、狐狸、貉、熊、松鼠、白熊、海狮、大熊猫、野猪、鹿、马、猩猩和袋鼠。本发明的用于增强免疫功能的试剂还可以被用于增强除哺乳动物以外的具有胃肠道的动物的免疫功能，所述除哺乳动物以外的具有胃肠道的动物诸如昆虫、爬行动物、鸟、鱼、两栖动物和软体动物。各种疾病包括由机会致病菌引起的传染性疾病、病原性细菌或真菌引起的传染性疾病、幽门螺旋杆菌感染、细菌移位、长期小肠黏膜炎症、小肠菌群平衡的改变(例如，小肠菌群平衡的破坏)、由这些炎症引起的疾病、炎性肠病、诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎、严重感染和过敏症状，尽管它们不特别限制，只要这些疾病可以通过诱导免疫指示物诸如视黄酸的产生来治疗、预防或改善即可。实施例
[0049] 以下参考实施例对本发明进行更详细的说明，但本发明并不限于这些实施例。
[0050] 使用12月龄至13月龄的BALB/c小鼠(老年小鼠)作为受试者。肠系膜淋巴结细胞和源自肠系膜淋巴结的CD11c+树突细胞从小鼠的小肠取出。
[0051] 将取出的肠系膜淋巴结细胞和源自肠系膜淋巴结的CD11c+树突细胞分别与德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1(登录号FERM BP-10741)在37℃在96孔板中共培养，该96孔板上已经以100μg细胞重量/ml接种了菌株OLL1073R-1的死细胞。肠系膜淋巴结细胞以500,000细胞/孔接种，并且源自肠系膜淋巴结的CD11c+树突细胞以100,000细胞/孔接种。在完成共培养24小时后，从所得培养物回收肠系膜淋巴结细胞或CD11c+树突细胞，按照常规技术从回收的细胞提取mRNA，并通过实时RT-PCR法测量视黄醛脱氢酶RALDH2(Aldh1a2)基因(GenBank登录号NM_009022)的mRNA的表达水平。
[0052] 作为对照，培养和基因表达水平的测量与以上描述的相同方式进行，除了不接种德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1(登录号FERM BP-10741)。
[0053] 在由与乳酸菌共培养获得的RALDH2基因的表达水平的基础上，确定相对于设置为1.0的对照的基因表达水平的这些细胞的基因表达水平的比。
[0054] 结果，与对照(1.00±0.52；计算的值中“±”之后的值表示标准差(S.D.))相比，当与德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1(登录号FERM BP-10741)共培养时，肠系膜淋巴结细胞中的RALDH2基因的mRNA表达水平增加至3.05±0.56。并且，与对照(1.00±0.62)相比，当与德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1(登录号FERM BP-10741)共培养时，源自肠系膜淋巴结的CD11c+树突细胞中的RALDH2基因的mRNA表达水平增加至7.91±1.43。应注意，计算的值中“±”之后的值表示标准差(S.D.)。
[0055] 结果证明了德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1(登录号FERM BP-10741)显著增强细胞中视黄醛脱氢酶RALDH2基因的表达水平。视黄酸通过视黄醛的氧化产生，并且视黄醛脱氢酶RALDH2催化视黄醛氧化反应。因此，视黄醛脱氢酶基因的表达的增强可以促进细胞中视黄酸的产生。
[0056] 结果证明了施用德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株OLL1073R-1的乳酸菌可以在体内引起能够充当增强的免疫功能的指示物的视黄酸的量的增加。
[0057] 工业实用性
[0058] 根据本发明的用于产生视黄酸的试剂可以被用于增加细胞中视黄酸的产生。本发明可以提供用于增强免疫功能的新试剂，该试剂以更大的安全性和更少的副作用诱导人自身生物防御功能。根据本发明的用于产生视黄酸的试剂和用于增强免疫功能的试剂的摄入和作用能够在体内诱导作为免疫指示物的视黄酸。因此，该试剂可被用于增强各种传染性疾病的防御和炎症反应的治疗、预防或改善。
[0059] 本文引用的所有出版物、专利和专利申请通过引用以其整体被并入本文。
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