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一种复方花解毒药物及其制备方法

阅读:0发布:2020-07-29

专利汇可以提供一种复方花解毒药物及其制备方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及中药领域,具体涉及一种复方 银 花解毒药物及其制备方法。该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿10~20重量份、山银花10~15重量份、荆芥5~15重量份、薄荷1~5重量份、野菊花10~20重量份、大青叶10~20重量份、连翘5~15重量份、鸭跖草15~25重量份、淡豆豉5~15重量份、前胡5~15重量份。本发明提供了采用高效液相色谱法同时测定复方银花解毒药物活性成分含量的方法,本发明还提供了复方银花解毒药物在制备 治疗 手足口病中的新用途。,下面是一种复方花解毒药物及其制备方法专利的具体信息内容。

1.一种复方花解毒药物,其特征在于,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿10~20重量份、山银花10~15重量份、荆芥5~15重量份、薄荷1~5重量份、野菊花10~20重量份、大青叶10~20重量份、连翘5~15重量份、鸭跖草15~25重量份、淡豆豉5~15重量份、前胡5~15重量份。
2.如权利要求1所述的复方银花解毒药物,其特征在于,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿15重量份、山银花12重量份、荆芥10重量份、薄荷3重量份、野菊花15重量份、大青叶15重量份、连翘10重量份、鸭跖草20重量份、淡豆豉10重量份、前胡10重量份。
3.一种复方银花解毒药物的制备方法,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿10~20重量份、山银花10~15重量份、荆芥5~15重量份、薄荷1~5重量份、野菊花10~20重量份、大青叶10~20重量份、连翘5~15重量份、鸭跖草15~25重量份、淡豆豉
5~15重量份、前胡5~15重量份,其特征在于,该复方银花解毒药物是采用如下方法制备的:
S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加5~13倍量水,煎煮1~3次,每次1~2小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为60~65%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得。
4.如权利要求3所述复方银花解毒药物的制备方法,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿15重量份、山银花12重量份、荆芥10重量份、薄荷3重量份、野菊花15重量份、大青叶15重量份、连翘10重量份、鸭跖草20重量份、淡豆豉10重量份、前胡10重量份,其特征在于,该复方银花解毒药物是采用如下方法制备的:
S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加9倍量水,煎煮2次,每次
1.5小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为63%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得。
5.如权利要求4所述的复方银花解毒药物的制备方法,其特征在于,将复方银花解毒药物制成颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、丸剂。
6.一种复方银花解毒药物的检测方法,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿15重量份、山银花12重量份、荆芥10重量份、薄荷3重量份、野菊花15重量份、大青叶15重量份、连翘10重量份、鸭跖草20重量份、淡豆豉10重量份、前胡10重量份,该复方银花解毒药物是采用如下方法制备的:
S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加9倍量水,煎煮2次,每次
1.5小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为63%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得;
其特征在于,采用HPLC法同时测定复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲、紫花牡荆素、色胺、8,8-羟基蓟黄素的含量,步骤如下:
(1)色谱条件:C18柱,规格:250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液,线性梯度洗脱,顺序为:从0min至10min,乙腈保持在10%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠-1
水溶液90%;从11min至20min,乙腈从10%线性上升至15%,0.25moL·L 磷酸二氢钠水溶液从90%线性下降至85%;从21min至30min,乙腈从15%线性上升至25%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至75%;从31min至40min,乙腈从25%线性上升至30%,
0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从75%线性下降至70%;从41min至45min,乙腈从30%线性-1
上升至40%,0.25moL·L 磷酸二氢钠水溶液从70%线性下降至60%;从46min至50min,乙腈从40%线性上升至60%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从60%线性下降至40%;从
51min至55min,乙腈从60%线性上升至65%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从40%线性下降至35%;流速0.5~1.5mL·min-1;检测波长:0min至30min,检测波长为240~250nm,用于测定刺槐素苷和谷甾醇;31min至50min,检测波长为265~270nm,用于测定羟基苯甲醛和紫花牡荆素;51min至55min,检测波长为290~295nm,用于测定色胺酮和8,8-羟基蓟黄素;柱温43~49℃;进样量:2~10μL;
(2)对照品储备液的制备:精密称取各对照品,加入甲醇,制成浓度为0.4100~
0.6100mg·mL-1的刺槐素苷对照品储备液,浓度为0.1000~0.2000mg·mL-1的谷甾醇对照品储备液,浓度为0.4000~0.5000mg·mL-1的羟基苯甲醛对照品储备液,浓度为0.1000~
0.2000mg·mL-1的紫花牡荆素对照品储备液,浓度为0.0200~0.0300mg·mL-1的色胺酮对照品储备液,浓度为0.2000~0.2500mg·mL-1的8,8-羟基蓟黄素对照品储备液;
(3)混合对照品溶液制备:精密量取各对照品储备液,加入甲醇,制成含刺槐素苷
0.1000~0.1050mg·mL-1、谷甾醇0.0400~0.0600mg·mL-1、羟基苯甲醛0.0400~
0.0500mg·mL-1、紫花牡荆素0.0100~0.0200mg·mL-1、色胺酮0.0040~0.0060mg·mL-1、8,
8-羟基蓟黄素0.0040~0.0060mg·mL-1的混合对照品溶液;
(4)供试品溶液制备:取复方银花解毒药物,研细、混匀,精密称取1g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20~30mL,密塞,称定重量,在250~350W,35~45kHz的条件下,超声提取20~
30min,放冷,再称定,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
(5)取混合对照品溶液、供试品溶液各2~10μL注入高效液相色谱仪,进行测定。
7.如权利要求6所述的复方银花解毒药物的检测方法,其特征在于,采用HPLC法同时测定复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量,步骤如下:
(1)色谱条件:C18柱,规格:250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液,线性梯度洗脱,顺序为:从0min至10min,乙腈保持在10%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠-1
水溶液90%;从11min至20min,乙腈从10%线性上升至15%,0.25moL·L 磷酸二氢钠水溶液从90%线性下降至85%;从21min至30min,乙腈从15%线性上升至25%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至75%;从31min至40min,乙腈从25%线性上升至30%,
0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从75%线性下降至70%;从41min至45min,乙腈从30%线性上升至40%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从70%线性下降至60%;从46min至50min,乙腈从40%线性上升至60%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从60%线性下降至40%;从
51min至55min,乙腈从60%线性上升至65%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从40%线性下降至35%;流速1.0mL·min-1;检测波长:0min至30min,检测波长为245nm,用于测定刺槐素苷和谷甾醇;31min至50min,检测波长为268nm,用于测定羟基苯甲醛和紫花牡荆素;51min至55min,检测波长为293nm,用于测定色胺酮和8,8-羟基蓟黄素;柱温46℃;进样量:5μL;
-1
(2)对照品储备液的制备:精密称取各对照品,加入甲醇,制成浓度为0.5100mg·mL 的刺槐素苷对照品储备液,浓度为0.1500mg·mL-1的谷甾醇对照品储备液,浓度为0.4500mg·mL-1的羟基苯甲醛对照品储备液,浓度为0.1800mg·mL-1的紫花牡荆素对照品储备液,浓度为0.0250mg·mL-1的色胺酮对照品储备液,浓度为0.2200mg·mL-1的8,8-羟基蓟黄素对照品储备液;
(3)混合对照品溶液制备:精密量取各对照品储备液,加入甲醇,制成含刺槐素苷
0.1020mg·mL-1、谷甾醇0.0500mg·mL-1、羟基苯甲醛0.0450mg·mL-1、紫花牡荆素
0.0180mg·mL-1、色胺酮0.0050mg·mL-1、8,8-羟基蓟黄素0.0050mg·mL-1的混合对照品溶液;
(4)供试品溶液制备:取复方银花解毒药物,研细、混匀,精密称取1g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,在300W,40kHz的条件下,超声提取25min,放冷,再称定,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
(5)取混合对照品溶液、供试品溶液各5μL注入高效液相色谱仪,进行测定。
8.一种复方银花解毒药物在制备治疗手足口病药物中的应用,其特征在于,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿15重量份、山银花12重量份、荆芥10重量份、薄荷3重量份、野菊花15重量份、大青叶15重量份、连翘10重量份、鸭跖草20重量份、淡豆豉10重量份、前胡10重量份,该复方银花解毒药物是采用如下方法制备的:
S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加9倍量水,煎煮2次,每次
1.5小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为63%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得;
采用HPLC法同时测定复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量,步骤如下:
-1
(1)色谱条件:C18柱,规格:250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.25moL·L 磷酸二氢钠水溶液,线性梯度洗脱,顺序为:从0min至10min,乙腈保持在10%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液90%;从11min至20min,乙腈从10%线性上升至15%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从90%线性下降至85%;从21min至30min,乙腈从15%线性上升至25%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至75%;从31min至40min,乙腈从25%线性上升至30%,
0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从75%线性下降至70%;从41min至45min,乙腈从30%线性上升至40%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从70%线性下降至60%;从46min至50min,乙腈从40%线性上升至60%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从60%线性下降至40%;从
51min至55min,乙腈从60%线性上升至65%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从40%线性下降至35%;流速1.0mL·min-1;检测波长:0min至30min,检测波长为245nm,用于测定刺槐素苷和谷甾醇;31min至50min,检测波长为268nm,用于测定羟基苯甲醛和紫花牡荆素;51min至55min,检测波长为293nm,用于测定色胺酮和8,8-羟基蓟黄素;柱温46℃;进样量:5μL;
(2)对照品储备液的制备:精密称取各对照品,加入甲醇,制成浓度为0.5100mg·mL-1的刺槐素苷对照品储备液,浓度为0.1500mg·mL-1的谷甾醇对照品储备液,浓度为0.4500mg·-1 -1
mL 的羟基苯甲醛对照品储备液,浓度为0.1800mg·mL 的紫花牡荆素对照品储备液,浓度为0.0250mg·mL-1的色胺酮对照品储备液,浓度为0.2200mg·mL-1的8,8-羟基蓟黄素对照品储备液;
(3)混合对照品溶液制备:精密量取各对照品储备液,加入甲醇,制成含刺槐素苷-1 -1 -1
0.1020mg·mL 、谷甾醇0.0500mg·mL 、羟基苯甲醛0.0450mg·mL 、紫花牡荆素
0.0180mg·mL-1、色胺酮0.0050mg·mL-1、8,8-羟基蓟黄素0.0050mg·mL-1的混合对照品溶液;
(4)供试品溶液制备:取复方银花解毒药物,研细、混匀,精密称取1g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,在300W,40kHz的条件下,超声提取25min,放冷,再称定,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
(5)取混合对照品溶液、供试品溶液各5μL注入高效液相色谱仪,进行测定。

说明书全文

一种复方花解毒药物及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及中药领域,具体涉及一种复方银花解毒药物及其制备方法。

背景技术

[0002] 手足口病是由肠道病毒引起的传染病,引发手足口病的肠道病毒有20多种(型),其中以柯萨奇病毒A16型(CoxA16)和肠道病毒71型(EV 71)最为常见。多发生于5岁以下儿童,表现口痛、厌食、低热、手、足、口腔等部位出现小疱疹或小溃疡,多数患儿一周左右自愈,少数患儿可引起心肌炎、肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。目前缺乏有效治疗药物,主要是对症治疗。
[0003] 本发明提供一种复方银花解毒药物及其制备方法。该药物对于发热,微恶,鼻塞流涕,咳嗽,咽痛,头痛,全身酸痛有较好的治疗效果,同时对于手足口病也具有良好的治疗作用。
[0004] 复方银花解毒药物,主要成分含青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、大青叶、连翘、鸭跖草、前胡和淡豆豉。青蒿主要有清透虚热,凉血除蒸,解暑,截疟的作用。山银花是忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬或黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花,具有清热解毒,疏散风热的功效,用于痈肿疗疮,喉痹,丹毒,热毒血痢,风热感冒,温热发病。荆芥,具有祛风,解表,透疹,止血的功效。野菊花性微寒,具疏散风热、消肿解毒,能治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、风火赤眼、头痛眩晕等病证。大青叶,主治热毒发斑、丹毒、咽喉肿痛、口舌生疮、疮痈肿毒等症。连翘,具有清热解毒、消肿散结、消炎的功效。淡豆豉,其性味苦寒,具有解表,除烦,宣郁,解毒之功效,用于伤寒热病,寒热,头痛,烦躁,胸闷。前胡,具有降气化痰,散风清热的功效,用于痰热喘满,咳痰黄稠,风热咳嗽痰多。以上十味药,均有清热、解毒作用,但单独使用药效不明显,组合后的药物具有较强的疏风解表,清热解毒的作用,对于手足口病具有良好的治疗效果。
[0005] 申请人在研究中发现,野菊花中含有刺槐素苷、鸭跖草中含有谷甾醇、山银花中含有羟基苯甲、青蒿中含有紫花牡荆素、大青叶中含有色胺、荆芥中含有8,8-羟基蓟黄素是本发明复方银花解毒药物中重要活性成分,所以,申请人对此进行了反复的实验研究,提出并建立了同时对刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量进行检测的方法。

发明内容

[0006] 基于背景技术存在的技术问题,本发明提出了一种复方银花解毒药物及其制备方法与检测方法及制药用途。
[0007] 本发明的目的是提供一种复方银花解毒药物药物及其制备方法。
[0008] 本发明的另一目的是提供复方银花解毒药物的药物检测方法。
[0009] 本发明还提供了复方银花解毒药物的新的制药用途。
[0010] 本发明的目的是通过以下方式实现的:
[0011] 一种复方银花解毒药物,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿10~20重量份、山银花10~15重量份、荆芥5~15重量份、薄荷1~5重量份、野菊花10~
20重量份、大青叶10~20重量份、连翘5~15重量份、鸭跖草15~25重量份、淡豆豉5~15重量份、前胡5~15重量份。
[0012] 所述的复方银花解毒药物,优选是由以下重量份的药味原料制成:青蒿15重量份、山银花12重量份、荆芥10重量份、薄荷3重量份、野菊花15重量份、大青叶15重量份、连翘10重量份、鸭跖草20重量份、淡豆豉10重量份、前胡10重量份。
[0013] 一种复方银花解毒药物的制备方法,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿10~20重量份、山银花10~15重量份、荆芥5~15重量份、薄荷1~5重量份、野菊花10~20重量份、大青叶10~20重量份、连翘5~15重量份、鸭跖草15~25重量份、淡豆豉5~15重量份、前胡5~15重量份,该复方银花解毒药物是采用如下方法制备的:
[0014] S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
[0015] S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加5~13倍量水,煎煮1~3次,每次1~2小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为60~65%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
[0016] S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得。
[0017] 所述一种复方银花解毒药物的制备方法,该复方银花解毒药物优选是由以下重量份的药味原料制成:青蒿15重量份、山银花12重量份、荆芥10重量份、薄荷3重量份、野菊花15重量份、大青叶15重量份、连翘10重量份、鸭跖草20重量份、淡豆豉10重量份、前胡10重量份,该复方银花解毒药物优选是采用如下方法制备的:
[0018] S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
[0019] S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加9倍量水,煎煮2次,每次1.5小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为63%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
[0020] S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得。
[0021] 可以采用中药药剂学中常规的制备方法,将复方银花解毒药物制成颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、丸剂。
[0022] 一种复方银花解毒药物的检测方法,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:青蒿15重量份、山银花12重量份、荆芥10重量份、薄荷3重量份、野菊花15重量份、大青叶15重量份、连翘10重量份、鸭跖草20重量份、淡豆豉10重量份、前胡10重量份,该复方银花解毒药物是采用如下方法制备的:
[0023] S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
[0024] S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加9倍量水,煎煮2次,每次1.5小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为63%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
[0025] S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得;
[0026] 采用HPLC法同时测定复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量,步骤如下:
[0027] (1)色谱条件:C18柱,规格:250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.25moL·L-1磷酸二-1氢钠水溶液,线性梯度洗脱,顺序为:从0min至10min,乙腈保持在10%,0.25moL·L 磷酸二氢钠水溶液90%;从11min至20min,乙腈从10%线性上升至15%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从90%线性下降至85%;从21min至30min,乙腈从15%线性上升至25%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至75%;从31min至40min,乙腈从25%线性上升至-1
30%,0.25moL·L 磷酸二氢钠水溶液从75%线性下降至70%;从41min至45min,乙腈从
30%线性上升至40%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从70%线性下降至60%;从46min至
50min,乙腈从40%线性上升至60%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从60%线性下降至
40%;从51min至55min,乙腈从60%线性上升至65%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从-1
40%线性下降至35%;流速0.5~1.5mL·min ;检测波长:0min至30min,检测波长为240~
250nm,用于测定刺槐素苷和谷甾醇;31min至50min,检测波长为265~270nm,用于测定羟基苯甲醛和紫花牡荆素;51min至55min,检测波长为290~295nm,用于测定色胺酮和8,8-羟基蓟黄素;柱温43~49℃;进样量:2~10μL;
[0028] (2)对照品储备液的制备:精密称取各对照品,加入甲醇,制成浓度为0.4100~0.6100mg·mL-1的刺槐素苷对照品储备液,浓度为0.1000~0.2000mg·mL-1的谷甾醇对照品储备液,浓度为0.4000~0.5000mg·mL-1的羟基苯甲醛对照品储备液,浓度为0.1000~
0.2000mg·mL-1的紫花牡荆素对照品储备液,浓度为0.0200~0.0300mg·mL-1的色胺酮对照品储备液,浓度为0.2000~0.2500mg·mL-1的8,8-羟基蓟黄素对照品储备液;
[0029] (3)混合对照品溶液制备:精密量取各对照品储备液,加入甲醇,制成含刺槐素苷0.1000~0.1050mg·mL-1、谷甾醇0.0400~0.0600mg·mL-1、羟基苯甲醛0.0400~
0.0500mg·mL-1、紫花牡荆素0.0100~0.0200mg·mL-1、色胺酮0.0040~0.0060mg·mL-1、8,
8-羟基蓟黄素0.0040~0.0060mg·mL-1的混合对照品溶液;
[0030] (4)供试品溶液制备:取复方银花解毒药物,研细、混匀,精密称取1g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20~30mL,密塞,称定重量,在250~350W,35~45kHz的条件下,超声提取20~30min,放冷,再称定,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
[0031] (5)取混合对照品溶液、供试品溶液各2~10μL注入高效液相色谱仪,进行测定;
[0032] 所述的复方银花解毒药物的检测方法,采用HPLC法同时测定复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量,优选步骤如下:
[0033] (1)色谱条件:C18柱,规格:250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.25moL·L-1磷酸二-1氢钠水溶液,线性梯度洗脱,顺序为:从0min至10min,乙腈保持在10%,0.25moL·L 磷酸二氢钠水溶液90%;从11min至20min,乙腈从10%线性上升至15%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从90%线性下降至85%;从21min至30min,乙腈从15%线性上升至25%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至75%;从31min至40min,乙腈从25%线性上升至
30%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从75%线性下降至70%;从41min至45min,乙腈从
30%线性上升至40%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从70%线性下降至60%;从46min至
50min,乙腈从40%线性上升至60%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从60%线性下降至
40%;从51min至55min,乙腈从60%线性上升至65%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从
40%线性下降至35%;流速1.0mL·min-1;检测波长:0min至30min,检测波长为245nm,用于测定刺槐素苷和谷甾醇;31min至50min,检测波长为268nm,用于测定羟基苯甲醛和紫花牡荆素;51min至55min,检测波长为293nm,用于测定色胺酮和8,8-羟基蓟黄素;柱温46℃;进样量:5μL;
[0034] (2)对照品储备液的制备:精密称取各对照品,加入甲醇,制成浓度为0.5100mg·mL-1的刺槐素苷对照品储备液,浓度为0.1500mg·mL-1的谷甾醇对照品储备液,浓度为-1 -10.4500mg·mL 的羟基苯甲醛对照品储备液,浓度为0.1800mg·mL 的紫花牡荆素对照品储备液,浓度为0.0250mg·mL-1的色胺酮对照品储备液,浓度为0.2200mg·mL-1的8,8-羟基蓟黄素对照品储备液;
[0035] (3)混合对照品溶液制备:精密量取各对照品储备液,加入甲醇,制成含刺槐素苷-1 -1 -10.1020mg·mL 、谷甾醇0.0500mg·mL 、羟基苯甲醛0.0450mg·mL 、紫花牡荆素
0.0180mg·mL-1、色胺酮0.0050mg·mL-1、8,8-羟基蓟黄素0.0050mg·mL-1的混合对照品溶液;
[0036] (4)供试品溶液制备:取复方银花解毒药物,研细、混匀,精密称取1g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,在300W,40kHz的条件下,超声提取25min,放冷,再称定,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
[0037] (5)取混合对照品溶液、供试品溶液各5μL注入高效液相色谱仪,进行测定。
[0038] 一种复方银花解毒药物在制备治疗手足口病药物中的应用,该复方银花解毒药物是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份,该复方银花解毒药物是采用如下方法制备的:
[0039] S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
[0040] S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加9倍量水,煎煮2次,每次1.5小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为63%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
[0041] S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得;
[0042] 采用HPLC法同时测定复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量,步骤如下:
[0043] (1)色谱条件:C18柱,规格:250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.25moL·L-1磷酸二-1氢钠水溶液,线性梯度洗脱,顺序为:从0min至10min,乙腈保持在10%,0.25moL·L 磷酸二氢钠水溶液90%;从11min至20min,乙腈从10%线性上升至15%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从90%线性下降至85%;从21min至30min,乙腈从15%线性上升至25%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至75%;从31min至40min,乙腈从25%线性上升至
30%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从75%线性下降至70%;从41min至45min,乙腈从
30%线性上升至40%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从70%线性下降至60%;从46min至
50min,乙腈从40%线性上升至60%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从60%线性下降至
40%;从51min至55min,乙腈从60%线性上升至65%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从
40%线性下降至35%;流速1.0mL·min-1;检测波长:0min至30min,检测波长为245nm,用于测定刺槐素苷和谷甾醇;31min至50min,检测波长为268nm,用于测定羟基苯甲醛和紫花牡荆素;51min至55min,检测波长为293nm,用于测定色胺酮和8,8-羟基蓟黄素;柱温46℃;进样量:5μL;
[0044] (2)对照品储备液的制备:精密称取各对照品,加入甲醇,制成浓度为0.5100mg·mL-1的刺槐素苷对照品储备液,浓度为0.1500mg·mL-1的谷甾醇对照品储备液,浓度为-1 -10.4500mg·mL 的羟基苯甲醛对照品储备液,浓度为0.1800mg·mL 的紫花牡荆素对照品储备液,浓度为0.0250mg·mL-1的色胺酮对照品储备液,浓度为0.2200mg·mL-1的8,8-羟基蓟黄素对照品储备液;
[0045] (3)混合对照品溶液制备:精密量取各对照品储备液,加入甲醇,制成含刺槐素苷-1 -1 -10.1020mg·mL 、谷甾醇0.0500mg·mL 、羟基苯甲醛0.0450mg·mL 、紫花牡荆素
0.0180mg·mL-1、色胺酮0.0050mg·mL-1、8,8-羟基蓟黄素0.0050mg·mL-1的混合对照品溶液;
[0046] (4)供试品溶液制备:取复方银花解毒药物,研细、混匀,精密称取1g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,在300W,40kHz的条件下,超声提取25min,放冷,再称定,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
[0047] (5)取混合对照品溶液、供试品溶液各5μL注入高效液相色谱仪,进行测定。
[0048] 以下实验研究用于验证本发明的技术方案的技术内容和技术效果,但并不限制本发明的保护范围。
[0049] 实验一:复方银花解毒颗粒对小儿手足口病的治疗效果分析
[0050] 本试验共选取22例手足口病患儿,将复方银花解毒颗粒应用于其中11例患儿临床治疗,效果明显。下文为具体试验过程。
[0051] 1资料与方法
[0052] 1.1一般资料
[0053] 参与本试验的手足口病患儿共22例,均为天长市人民医院2016年4月至2016年8月收治,将所有患儿分成对照组和研究组。对照组11例患儿中,男性5例,女性6例,年龄1~6岁,平均年龄为(3.2±1.2)岁;研究组11例患儿中,男性5例,女性6例,年龄1~6岁,平均年龄为(3.3±1.1)岁。对于本试验两组患儿家属均知晓予以支持。对两组患儿一般资料如性别、平均年龄等指标比较差异无统计学意义(P>0.05),两组患儿具备试验条件。
[0054] 1.2药物
[0055] 1.2.1利巴韦林注射液,由成都平原药业有限公司生产,国药准字H20043330。
[0056] 1.2.2复方银花解毒颗粒:处方:青蒿300g,山银花240g,荆芥200g,薄荷60g,野菊花300g,大青叶300g,连翘200g,鸭跖草400g,淡豆豉200g,前胡200g。
[0057] 制备方法:S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
[0058] S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加9倍量水,煎煮2次,每次1.5小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为63%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
[0059] S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入适量蔗糖、糊精和乙醇,混匀,制成颗粒,制成1000g,干燥,加入S1步骤所得的挥发油D1,混匀,即得。
[0060] 1.3方法
[0061] 本试验对照组11例患儿临床治疗中应用利巴韦林注射液,医护人员将其与5%葡萄糖注射液相互融合,两种药物具体用药剂量分别为10mg/(kg·d)和100ml,安抚患儿情绪,每天上午为患儿用药一次即可,治疗过程中,医护人员密切观察患儿临床症状表现,一旦出现异常情况立即上报主治医生。该组患儿治疗三天最适宜。
[0062] 研究组11例患儿应用本发明的复方银花解毒颗粒,该药物不同年龄段儿童服用剂量不同,主要分成三个梯度,分别为<1岁、1~3岁和4岁以上,医护人员嘱咐家长以不同年龄段为参考确定用药剂量,每天分早中晚和睡前四次服药,口服即可,三个年龄段儿童具体服药剂量分别为2g、4g和6g。该组患儿临床治疗时间与对照组相同。
[0063] 1.4疗效判定标准
[0064] 患儿接受临床治疗后,用药三天患儿精神状态改善明显,患儿手部、口腔及足部的皮疹完全消失,同时患儿食欲较好、各项生命体征均处于正常范围内,即判定患儿临床治疗显效;临床治疗后,用药三天后患儿皮疹基本消失,安排患儿进行体温测量,趋近于正常,同时患儿食欲状态改善,即判定患儿临床治疗有效;对患儿用药治疗,给药三天左右,患儿临床症状皮症没有任何消失迹象,持续发热,精神状态不佳,即判定患儿临床治疗无效。
[0065] 1.5统计学处理
[0066] 本试验22例手足口病患儿所产生的试验指标数据均用SPSS12.0统计学软件处理,两组患儿临床治疗总有效率用%表示,用χ2检验,两组患儿症状消退时间指标均用表示,用t检验,P<0.05,差异具有统计学意义。
[0067] 2结果
[0068] 2.1对比分析两组患儿临床治疗总有效率情况
[0069] 试验结果显示,相比于对照组,研究组患儿临床治疗总有效率更高,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。
[0070] 表1两组患儿临床治疗总有效率对比[n(%)]
[0071]
[0072] 2.2对比分析两组患儿症状消退情况
[0073] 两组患儿采取不同方案治疗,研究组患儿口腔溃疡愈合时间,退热时间,皮疹消退时间更短,差异具有统计学意义(P<0.05),见表2。
[0074] 表2两组患儿症状消退情况比较[ d]
[0075]
[0076] 3结论
[0077] 试验结果显示,研究组患儿临床治疗总有效率更高,症状消退时间更短(P<0.05),研究组患者临床治疗效果更明显。手足口病患儿在临床治疗过程中应用复方银花解毒颗粒药物,以中医的视对该病症进行治疗,用药后能够达到清热解毒、抗病毒消炎的作用,能够在最短时间内发挥药效,改善患者临床症状情况,控制病情发展,达到预期临床效果。
[0078] 实验二:HPLC法同时测定复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量
[0079] 申请人在前期研究中发现,野菊花中含有刺槐素苷、鸭跖草中含有谷甾醇、山银花中含有羟基苯甲醛、青蒿中含有紫花牡荆素、大青叶中含有色胺酮、荆芥中含有8,8-羟基蓟黄素是本发明复方银花解毒药物中重要活性成分,所以,申请人对此进行了反复的实验研究,提出并建立了同时对刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量进行检测的方法,研究如下。
[0080] 1仪器与试药
[0081] 1.1仪器Agilent1200型高效液相色谱仪;Shimadzu高效液相色谱仪。电子天平,由常州万泰天平仪器有限公司制造。
[0082] 1.2对照品刺槐素苷对照品,购于北京北化恒信生物技术有限公司,批号120323-201602;谷甾醇对照品,购于上海江莱生物科技有限公司,批号111203-201603;羟基苯甲醛对照品,购于常州市金坛金冠化工有限公司,批号101221-201512;紫花牡荆素对照品,购于生工生物工程(上海)股份有限公司,批号120319-201410;色胺酮对照品,购于成都思天德生物科技有限公司,批号111015-201601;8,8-羟基蓟黄素对照品,购于上海乔羽生物科技有限公司,批号120214-201603。
[0083] 1.3试剂甲醇、乙腈为色谱纯,水为超纯水,磷酸为分析纯。
[0084] 1.4试药复方银花解毒药物:处方:青蒿300g,山银花240g,荆芥200g,薄荷60g,野菊花300g,大青叶300g,连翘200g,鸭跖草400g,淡豆豉200g,前胡200g。
[0085] 制备方法:S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
[0086] S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加9倍量水,煎煮2次,每次1.5小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为63%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
[0087] S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得。
[0088] 2方法与结果
[0089] 2.1溶液制备
[0090] 2.1.1对照品储备液的制备
[0091] 精密称取各对照品,加入甲醇,制成浓度为0.5100mg·mL-1的刺槐素苷对照品储备液,浓度为0.1500mg·mL-1的谷甾醇对照品储备液,浓度为0.4500mg·mL-1的羟基苯甲醛对-1 -1照品储备液,浓度为0.1800mg·mL 的紫花牡荆素对照品储备液,浓度为0.0250mg·mL 的色胺酮对照品储备液,浓度为0.2200mg·mL-1的8,8-羟基蓟黄素对照品储备液。
[0092] 2.1.2混合对照品溶液制备
[0093] 精密量取各对照品储备液,加入甲醇,制成含刺槐素苷0.1020mg·mL-1、谷甾醇-1 -1 -10.0500mg·mL 、羟基苯甲醛0.0450mg·mL 、紫花牡荆素0.0180mg·mL 、色胺酮
0.0050mg·mL-1、8,8-羟基蓟黄素0.0050mg·mL-1的混合对照品溶液。
[0094] 2.1.3供试品溶液制备
[0095] 取复方银花解毒药物,研细、混匀,精密称取1g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,在300W,40kHz的条件下,超声提取25min,放冷,再称定,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,取滤液,即得。
[0096] 2.1.4阴性对照溶液
[0097] 按处方中药味的比例制成缺野菊花、鸭跖草、山银花、青蒿、大青叶、荆芥的阴性对照样品100g,按本发明提供的方法制成阴性对照溶液。
[0098] 2.2色谱条件
[0099] 色谱柱:Agilent ZORBAXSB-C18柱,规格:250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液,线性梯度洗脱,顺序为:从0min至10min,乙腈保持在10%,
0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液90%;从11min至20min,乙腈从10%线性上升至15%,
0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从90%线性下降至85%;从21min至30min,乙腈从15%线性上升至25%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至75%;从31min至40min,乙腈从25%线性上升至30%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从75%线性下降至70%;从
41min至45min,乙腈从30%线性上升至40%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从70%线性下降至60%;从46min至50min,乙腈从40%线性上升至60%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从60%线性下降至40%;从51min至55min,乙腈从60%线性上升至65%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从40%线性下降至35%;流速1.0mL·min-1;检测波长:0min至30min,检测波长为245nm,用于测定刺槐素苷和谷甾醇;31min至50min,检测波长为268nm,用于测定羟基苯甲醛和紫花牡荆素;51min至55min,检测波长为293nm,用于测定色胺酮和8,8-羟基蓟黄素;柱温46℃;进样量:5μL。
[0100] 在上述色谱条件下,复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素6个成分分离良好,理论塔板数大于3000,分离度大于1.6,见附图1、附图2、附图3。
[0101] 2.3线性关系考察
[0102] 精密吸取混合对照品溶液0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8μL,分别注入液相色谱仪,测定峰面积。结果以峰面积Y为纵坐标,进样量X(μg)为横坐标,绘制标准曲线。刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的回归方程分别为:
[0103] Y(刺槐素苷)=4.268×107X+4.268×104,r=0.9997;
[0104] 线性范围为:0.0104~3.1263μg。
[0105] Y(谷甾醇)=2.698×107X+8.168×102,r=0.9996;
[0106] 线性范围为:0.0039~0.9654μg。
[0107] Y(羟基苯甲醛)=3.265×107X+2.124×104,r=0.9995;
[0108] 线性范围为:0.0048~1.2346μg。
[0109] Y(紫花牡荆素)=2.368×107X+4.125×103,r=0.9994;
[0110] 线性范围为:0.0016~0.3984μg。
[0111] Y(色胺酮)=8.165×107X+4.265×103,r=0.9995;
[0112] 线性范围为:0.0012~0.0854μg。
[0113] Y(8,8-羟基蓟黄素)=4.125×107X+2.368×103,r=0.9999;
[0114] 线性范围为:0.0011~0.1852μg。
[0115] 2.4精密度考察
[0116] 分别精密吸取混合对照品溶液5μL,连续进样5次,考察方法的精密度。结果显示,刺槐素苷峰面积的RSD为0.24%,谷甾醇峰面积的RSD为0.36%,羟基苯甲醛峰面积的RSD为0.65%,紫花牡荆素峰面积的RSD为0.29%,色胺酮峰面积的RSD为0.38%,8,8-羟基蓟黄素峰面积的RSD为0.52%,表明仪器精密度良好。
[0117] 2.6重复性考察
[0118] 取样品,按“2.1.3”项下方法平行制备5份供试品溶液,进样测定6个成分的峰面积,计算含量。结果样品中刺槐素苷的平均含量为3.2654mg·g-1,RSD为1.3%;谷甾醇的平均含量为0.3942mg·g-1,RSD为0.85%;羟基苯甲醛的平均含量为0.7585mg·g-1,RSD为1.6%;紫花牡荆素的平均含量为0.1562mg·g-1,RSD为0.95%;色胺酮的平均含量为
0.2241mg·g-1,RSD为1.2%;8,8-羟基蓟黄素的平均含量为0.0042mg·g-1mg·g-1,RSD为
1.3%;表明方法的重复性好。
[0119] 2.7稳定性考察
[0120] 取供试品溶液分别于0、3、6、12、24、36h进样分析,测定6个成分的峰面积,结果刺槐素苷峰面积的RSD为0.43%、谷甾醇峰面积的RSD为0.43%、羟基苯甲醛峰面积的RSD为0.43%、紫花牡荆素峰面积的RSD为0.43%、色胺酮峰面积的RSD为0.43%、8,8-羟基蓟黄素峰面积的RSD为0.43%,表明供试品溶液在36h内稳定性好。
[0121] 2.8加样回收试验
[0122] 精密称取含量(刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素含量分别为3.5265mg·g-1、0.5428mg·g-1、1.8560mg·g-1、0.1565mg·g-1、0.0226mg·g-1、0.0355mg·g-1)的样品0.5g共6份,加入混合对照品溶液5m,按照“2.1.3”项下方法制备供试品溶液,进样测定。结果刺槐素苷的平均回收率为102.0%、RSD为1.12%;谷甾醇的平均回收率为99.8%、RSD为0.95%;羟基苯甲醛的平均回收率为102.3%、RSD为1.22%;紫花牡荆素的平均回收率为98.6%、RSD为2.11%;色胺酮的平均回收率为102.6%、RSD为1.85%;8,8-羟基蓟黄素的平均回收率为100.5%,RSD为0.85%。
[0123] 2.9含量测定
[0124] 将本发明提供的方法制备的供试品溶液,按本发明提供的色谱条件进行测定,分别用外标法计算5个批次样品中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素6个成分的含量,结果见表3。
[0125] 表3样品含量(mg·g-1,n=6)
[0126]
[0127]
[0128] 3结论
[0129] 本研究所建立的HPLC法同时测定复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量,该方法具有简单、快速、稳定和重复性好的特点,可作为复方银花解毒药物的检测手段之一。附图说明:
[0130] 图1为:对照品溶液高效液相色谱图,其中:1号峰为刺槐素苷,2号峰为谷甾醇,3号峰为羟基苯甲醛,4号峰为紫花牡荆素,5号峰为色胺酮,6号峰为8,8-羟基蓟黄素。
[0131] 图2为:供试品溶液高效液相色谱图,其中:1号峰为刺槐素苷,2号峰为谷甾醇,3号峰为羟基苯甲醛,4号峰为紫花牡荆素,5号峰为色胺酮,6号峰为8,8-羟基蓟黄素。
[0132] 图3为:阴性对照品溶液高效液相色谱图。

具体实施方式

[0133] 下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
[0134] 实施例1:复方银花解毒药物
[0135] 处方:青蒿300g,山银花240g,荆芥200g,薄荷60g,野菊花300g,大青叶300g,连翘200g,鸭跖草400g,淡豆豉200g,前胡200g。
[0136] 制备方法:S1:取青蒿、山银花、荆芥、薄荷、野菊花、连翘、前胡,水蒸气蒸馏提取挥发油,得到挥发油D1,备用;水蒸气蒸馏后的水溶液D2保留,备用;水蒸气蒸馏后的药渣D3保留,备用;
[0137] S2:取S1步骤所得的药渣D3与大青叶、鸭跖草、淡豆豉混合,加9倍量水,煎煮2次,每次1.5小时,得到水煎液D4,与S1步骤所得的水溶液D2合并,滤过,滤液浓缩,得到浸膏D5;向浸膏D5加乙醇使含醇量为63%,搅匀,静置,取上清液回收乙醇,并浓缩,得到浸膏D6;
[0138] S3:取S2步骤所得的浸膏D6,加入辅料和S1步骤所得的挥发油D1,混匀,干燥,即得。
[0139] 采用HPLC法同时测定复方银花解毒药物中刺槐素苷、谷甾醇、羟基苯甲醛、紫花牡荆素、色胺酮、8,8-羟基蓟黄素的含量,步骤如下:
[0140] (1)色谱条件:C18柱,规格:250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液,线性梯度洗脱,顺序为:从0min至10min,乙腈保持在10%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液90%;从11min至20min,乙腈从10%线性上升至15%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从90%线性下降至85%;从21min至30min,乙腈从15%线性上升至25%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从85%线性下降至75%;从31min至40min,乙腈从25%线性上升至30%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从75%线性下降至70%;从41min至45min,乙腈从-1
30%线性上升至40%,0.25moL·L 磷酸二氢钠水溶液从70%线性下降至60%;从46min至
50min,乙腈从40%线性上升至60%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从60%线性下降至
40%;从51min至55min,乙腈从60%线性上升至65%,0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液从
40%线性下降至35%;流速1.0mL·min-1;检测波长:0min至30min,检测波长为245nm,用于测定刺槐素苷和谷甾醇;31min至50min,检测波长为268nm,用于测定羟基苯甲醛和紫花牡荆素;51min至55min,检测波长为293nm,用于测定色胺酮和8,8-羟基蓟黄素;柱温46℃;进样量:5μL;
[0141] (2)对照品储备液的制备:精密称取各对照品,加入甲醇,制成浓度为0.5100mg·-1 -1mL 的刺槐素苷对照品储备液,浓度为0.1500mg·mL 的谷甾醇对照品储备液,浓度为
0.4500mg·mL-1的羟基苯甲醛对照品储备液,浓度为0.1800mg·mL-1的紫花牡荆素对照品储备液,浓度为0.0250mg·mL-1的色胺酮对照品储备液,浓度为0.2200mg·mL-1的8,8-羟基蓟黄素对照品储备液;
[0142] (3)混合对照品溶液制备:精密量取各对照品储备液,加入甲醇,制成含刺槐素苷0.1020mg·mL-1、谷甾醇0.0500mg·mL-1、羟基苯甲醛0.0450mg·mL-1、紫花牡荆素
0.0180mg·mL-1、色胺酮0.0050mg·mL-1、8,8-羟基蓟黄素0.0050mg·mL-1的混合对照品溶液;
[0143] (4)供试品溶液制备:取复方银花解毒药物,研细、混匀,精密称取1g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,在300W,40kHz的条件下,超声提取25min,放冷,再称定,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
[0144] (5)取混合对照品溶液、供试品溶液各5μL注入高效液相色谱仪,进行测定。
[0145] (5)测定结果:每克复方银花解毒药物刺槐素苷4.472mg、谷甾醇0.422mg、羟基苯甲醛2.621mg、紫花牡荆素0.158mg、色胺酮0.072mg、8,8-羟基蓟黄素0.150mg。
[0146] 以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
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