技术领域
[0001] 本
发明涉及食品检测领域，特别涉及一种月饼中食品添加剂的检测方法。
背景技术
[0002] 月饼是久负盛名的中国传统糕点之一，中秋节节
日食俗。月饼圆又圆，又是合家分吃，象征着团圆和睦。古代月饼被作为祭品于中秋节所食。据说中秋节吃月饼的习俗始于唐朝。北宋之时在宫廷内流行，后流传到民间，当时俗称“小饼”和“月团”。发展至明朝则成为全民共同买过的饮食习俗。月饼与各地饮食习俗相融合，又发展出广式、京式、苏式、潮式，滇式等月饼，被中国南北各地的人们所喜爱。
[0003] 如今，月饼是时令性很强,消费期较短的食品。生产厂家要在短时间内集中生产大量的月饼应市，有一定的难度,而往往要提前生产以供商业流通。同时随着生活
水平的提高，人们对月饼
质量的要求也越来越高。商家们为了使月饼色、香、味俱全以满足人们的需求，都会在生产月饼时加入
防腐剂、
甜味剂、色素等食品添加剂在月饼中都有一定的应用。加入的食品添加剂能增强食品的感官性状，防止腐败变质，延长保质期，但若使用不当也会对人体健康产生一定的安全隐患。
[0004] 由于月饼中的防腐剂、甜味剂以及色素的品种越来越多，目前检测方法又不一致、比较繁琐，尚无一次性能同时测定多种食品添加剂的色谱检测方法。食品添加剂的检测方法目前主要有高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管
电泳法、薄层色谱法、以及液相色谱-质谱联用法。但使用国家标准方法不能同时测定多种防腐剂、色素以及甜味剂，而且国家标准中只规定了汽水、果汁类、酒类等饮品中的测定方法，该方法只用
氨水调节至中性，过滤后直接用于HPLC测定，故该方法不适合应用于高蛋白，高油脂的月饼，并且能同时测定月饼中多种食品添加剂的方法至今尚未见报道。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于提供一种月饼中食品添加剂的检测方法，此检测方法能够一次性同时测定月饼中的多种食品添加剂，成本低、速度快、结果可靠、重现性好。
[0006] 解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种月饼中食品添加剂的检测方法，包括以下步骤：
[0007] (1)混合标准溶液配制：
[0008] 将脱氢乙酸、苯
甲酸、山梨酸、对羟基
苯甲酸甲脂、对羟基苯甲酸乙脂、对羟基苯甲酸丙脂、对羟基苯甲酸丁脂标准品混合配制在纯甲醇中；
[0009]
安赛蜜、糖精钠、柠檬黄、新红、苋菜红、糖精钠、胭脂红、日落黄、诱惑红、赤藓红标准品混合配制在纯水中；
[0010] 将上述溶液按比例混合，得到17种添加剂混合标准储备液；
[0011] 再用甲醇-水溶液逐步稀释，配制得17种添加剂混合标准工作液；
[0012] (2)样品提取：称取
磨碎后的月饼于离心管管中，先加入甲醇-水溶液提取，然后加入氢
氧化钠溶液，混合均匀；
[0013] 加入
硫酸锌溶液，混匀，再加入氢氧化钠溶液，摇匀，最后用纯水定容，得样品提取液；
[0014] (3)样品
净化：将样品提取液离心，用
滤纸过滤，去除上层油脂；滤液经滤膜再次过滤，得待测液；
[0015] (4)上机检测：将步骤(3)中得到的待测液和步骤(1)中的混合标准溶液置于配有紫外检测器的液相色谱仪进行检测，采用外标法定量，通过梯度洗脱、
波长切换，上机同时测得17种食品添加剂的含量。
[0016] 优选的，步骤(1)中混合标准储备液为100mg/L混合标准储备液。
[0017] 优选的，步骤(1)、步骤(2)中甲醇-水溶液为体积比为1：1的甲醇-水溶液。
[0018] 优选的，步骤(1)中脱氢乙酸、苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸甲脂、对羟基苯甲酸乙脂、对羟基苯甲酸丙脂、对羟基苯甲酸丁脂标准品用色谱纯级甲醇完全溶解后配置成200-400mg/L的
混合液；
[0019] 安赛蜜、糖精钠和柠檬黄、新红、苋菜红、糖精钠、胭脂红、日落黄、诱惑红、赤藓红标准品用实验室一级水完全溶解后配置成200-400mg/L的混合液，然后等量混合得到100mg/L混合标准储备液；再用体积比为1:1的甲醇水溶液逐步稀释配制，分别得到质量浓度为0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0mg/L的17种添加剂混合标准工作液。
[0020] 优选的，步骤(2)为准确称取5.0g磨碎后的月饼于50.0ml离心管管中，先加入30.0ml体积比为1：1甲醇水溶液提取，然后加入0.5mol/L氢氧化钠溶液1.0ml，于漩涡混匀仪上涡旋1min后，加入0.42mol/L硫酸锌溶液1.5ml，混匀，再加入0.5mol/L氢氧化钠溶液
1.4～1.8ml，摇匀，最后用纯水定容至50.0ml，得样品提取液。
[0021] 优选的，步骤(3)为将样品提取液在
温度为4.0～6.0℃，转速为4000～5000r/min的离心机中离心3～5min，用中速定量滤纸过滤，去掉上层油脂，滤液经0.22μm滤
膜过滤，得待测液；
[0022] 优选的，步骤(4)中液相色谱仪的条件为：色谱柱：预柱为C18柱(4.6mm×4.5cm)；分析柱为Eclipse Plus C18反向色谱柱(250mm×4.6mm，5.0μm)；流动相为0.02mol/L乙酸铵水溶液(A)+甲醇(B)；检测器波长为223～629nm；进样量为5.0～10.0uL，流速为0.8～
1.0mL/min,柱温箱为40℃。
[0023] 进一步优选的，步骤(4)流动相的梯度洗脱程序为：0～12min，5％B；12～20min，5％～30％B；20～35min，30％～68％B；35～44min，68％B。
[0024] 优选的，步骤(4)波长切换程序为：初始检测波长254nm，2.00min：226nm6.00min：223nm，11.00min：267nm，14.50min：293nm，20.00min：254nm，34.50min：629nm，35.50min：
256nm。
[0025] 与
现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0026] (1)本发明使用液相色谱法一次性同时检测月饼中常用的17种食品添加剂，其中包括2种甜味剂、7种防腐剂和8种人工合成色素，成本低、速度快、结果可靠、重现性好。
[0027] (2)根据相似相容原理，先使用纯甲醇和纯水分别配置对应的标准母液，然后混合配制成混合储备液，再用体积比为1：1的甲醇-水配置成混合标准工作液，解决了8种色素以及糖精钠、安赛蜜易溶于水不易溶于
有机溶剂，而4种对羟基苯甲酸酯类以及苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸易溶于
有机溶剂不易溶于水的问题。
[0028] (3)选择氢氧化钠-硫酸锌作为沉淀剂，能使提取样品杂质少，回收率高。
[0029] (4)流动相选用甲醇+乙酸铵水溶液，与乙腈+乙酸铵溶液、乙腈+
柠檬酸铵溶液作为流动相比，所有各个物质的分离度和分析时间都较为理想，当乙酸铵0.02mol/L时，各组分的峰形，分离度较好，解决了赤藓红与对羟基苯甲酸丁酯重叠、脱氢乙酸拖尾严重情况。乙酸铵的作用主要就是调节PH,防止样品解离,便于分离,改善峰形,抑制拖尾等现象,提高样品保留值的重现性。
[0030] (5)采用梯度洗脱程序，改善了峰型、提高了灵敏度和
稳定性、缩短了测定时间，使整个分析过程能同时满足17种食品添加剂检测的需要。
[0031] (6)依据17食品添加剂紫外吸收
光谱特征，选择最合适的波长；并根据其出峰顺序和时间差，通过波长切换方式，实现17食品添加剂同时一次性测定。
[0032] (7)本发明的17种食品添加剂检测方法最低检出限为0.013～0.055mg/kg，加标回收率为82.3％～109.2％，精
密度为0.75～8.73％，具有很好的灵敏度、准确度和重现性。
[0033] (8)本发明提供了一种月饼中多种混合食品添加剂的一次性检测方法，本发明通过对标准溶液配置方法和前处理沉淀剂进行有效的改变，改进流动相以及采用梯度洗脱程序和检测波长切换技术达到一次性快速、准确测定17种食品添加剂目的。
附图说明
[0034] 图1为本发明月饼中17种食品添加剂液相色谱出峰顺序图。
[0035] 图中：1-安赛蜜(Acesulfame Potassium),2-苯甲酸(Benzoic Acid),3-山梨酸(Sorbic Acid),4-脱氢乙酸(Dehydroacetic),5-柠檬黄(Tartrazine),6-新红(New red),7-苋菜红(Amaranthus Red),8-糖精钠(Sodium Saccharin),9-胭脂红(Ponceau 4R),10-日落黄(Sunset Yellow),11-诱惑红(Allura Red),12-对羟基苯甲酸甲脂(Methyl paraben),13-亮蓝(Brilliant Blue),14-对羟基苯甲酸乙脂(Ethyl paraben),15-对羟基苯甲酸丙脂(Propyl paraben),16-赤藓红(Erythrosine),17-对羟基苯甲酸丁脂(Butyl paraben)。
具体实施方式
[0036] 下面的
实施例对本发明作进一步说明，以使本领域技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0037] 在实施例中，4种对羟基苯甲酸脂类是指对羟基苯甲酸甲脂、对羟基苯甲酸乙脂、对羟基苯甲酸丙脂、对羟基苯甲酸丁脂。8钟色素是指柠檬黄、新红、苋菜红、糖精钠、胭脂红、日落黄、诱惑红、赤藓红。
[0038] 实施例一
[0039] (1)混合标准溶液制备：
[0040] 将脱氢乙酸、苯甲酸、山梨酸和4种对羟基苯甲酸脂类标准品混合配制在甲醇中，安赛蜜、糖精钠和8种色素标准品混合配制在纯水中，将上述溶液按比例混合，得到100mg/L标准溶液的储备液。再用体积比为1:1的甲醇-水溶液逐步稀释配制，分别得到质量浓度为0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0mg/L的混合标准工作液。
[0041] (2)样品提取：本实施例的实验材料为莲蓉月饼，将莲蓉月饼磨碎后称取5.0g样品于50.0ml离心管管中，先加入30.0ml体积比为1：1甲醇水溶液提取，然后加入0.5mol/LNaOH溶液1.0ml，于漩涡混匀仪上涡旋1min，再加入0.42mol/L硫酸锌溶液1.5ml混匀，再加入0.5mol/L氢氧化钠溶液1.5ml，摇匀，最后用纯水定容至50.0ml。
[0042] (3)样品净化：将上述提取液混匀后，在温度为4.0℃，转速为5000r/min的离心机中离心4min，中速定量滤纸过滤，去掉上层油脂，滤液经0.22μm滤膜过滤，滤液供液相色谱待测。
[0043] (4)液相色谱测定：将步骤(3)中得到的待测液和步骤(1)中的混合标准溶液置于配有紫外检测器的液相色谱仪进行检测，采用外标法定量，其中标准溶液的液相色谱图如图1所示。
[0044] 液相色谱仪的条件为：
[0045] ①色谱柱：预柱为C18柱(4.6mm×4.5cm)；分析柱为Agilent Eclipse Plus C18柱(250mm×4.6mm，5.0μm)。
[0046] ②流动相：0.02mol/L乙酸铵水溶液(A)+甲醇(B)，详见表1。
[0047] 表1 色谱分析梯度洗脱程序
[0048]时间/min A：乙酸铵水溶液(％) B：甲醇(％)
0～12min 95％ 5％
12～20min 95％～70％ 5％～30％
20～35min 70％～32％ 30％～68％
35～44min 32％ 68％
[0049] ③检测波长与波长切换时间表，详见表2。
[0050] 表2 17种食品添加剂的检测波长和保留时间表
[0051]
[0052]
[0053] ④流速为0.8mL/min,柱温箱为40℃；进样量为10uL。
[0054] (5)回收率：按上述步骤进行检测，食品添加剂样品回收率数据见表3。
[0055] 表3 17种食品添加剂样品的回收率
[0056]
[0057]
[0058] (6)精密度：按上述步骤进行检测，17种食品添加剂的RSD(相对标准偏差)数据见表4。
[0059] 表4 17种食品添加剂样品的RSD
[0060]
[0061] (7)试验材料为从市面上
采样5份不同公司出品的莲蓉月饼，按上述步骤进行检测，测得峰面积结果并结算其食品添加剂含量，检测结果如表5所示。
[0062] 表5 市售莲蓉月饼中17种食品添加剂的残留检测结果
[0063]
[0064] 表5中检测结果含量单位为mg/kg，ND表示未检出。本方法的检出限，安赛蜜﹤0.026mg/kg，苯甲酸﹤0.032mg/kg，山梨酸﹤0.025mg/kg，脱氢乙酸﹤0.055mg/kg，柠檬黄﹤
0.036mg/kg，新红﹤0.023mg/kg，苋菜红﹤0.039mg/kg，糖精钠﹤0.049mg/kg，胭脂红﹤
0.037mg/kg，日落黄﹤0.013mg/kg，诱惑红﹤0.027mg/kg，对羟基苯甲酸甲脂﹤0.015mg/kg，亮蓝﹤0.017mg/kg，对羟基苯甲酸乙脂﹤0.015mg/kg，对羟基苯甲酸丙脂﹤0.016mg/kg，赤藓红﹤
0.021mg/kg，对羟基苯甲酸丁脂﹤0.019mg/kg。
[0065] 实施例二
[0066] 实施例二的实验材料为水果月饼，其余步骤与实施例一相同。
[0067] 本实施例的食品添加剂样品回收率数据见表6，17种食品添加剂样品的RSD数据见表7，以市售水果月饼采5份样品，测得峰面积结果并计算食品添加剂含量，检测结果见表8。
[0068] 表6 水果月饼中17种食品添加剂样品的回收率
[0069]
[0070]
[0071] 表7 水果月饼中17种食品添加剂样品的RSD
[0072]
[0073]
[0074] 表8 市售水果月饼中17种食品添加剂的残留检测结果
[0075]
[0076] 检测结果含量单位为mg/kg，ND表示未检出。本表8的检出限同表5。
[0077] 实施例三
[0078] 实施例三的实验材料为果仁月饼，其余步骤与实施例一相同。
[0079] 本实施例的食品添加剂样品回收率数据见表9，17种食品添加剂样品的RSD数据见表10，以市售果仁月饼采5份样品，测得峰面积结果并计算食品添加剂含量，检测结果见表11。
[0080] 表9 果仁月饼中17种食品添加剂样品的回收率
[0081]
[0082] 表10 果仁月饼中17种食品添加剂样品的RSD
[0083]
[0084] 表11 市售果仁月饼中17种食品添加剂的残留检测结果
[0085]
[0086]
[0087] 检测结果含量单位为mg/kg，ND表示未检出。表11的检出限同表5。
[0088] 实施例四
[0089] 实施例四的实验材料为除莲蓉、水果、果仁馅料外的其他月饼，其余步骤与实施例一相同。
[0090] 本实施例以市售其他馅月饼采5份样品，测得峰面积结果并计算食品添加剂含量，检测结果见表12。
[0091] 表12 市售其他馅月饼中17种食品添加剂的残留检测结果
[0092]
[0093]
[0094] 检测结果含量单位为mg/kg，ND表示未检出。表12的检出限同表5。
[0095] 本发明的上述实施例并不是对本发明保护范围的限定，本发明的实施方式不限于此，凡此种种根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，对本发明上述结构做出的其它多种形式的
修改、替换或变更，均应落在本发明的保护范围之内。
