丹酚酸B在制备抗γ射线辐射的药物中的应用
阅读：479发布：2020-05-08
专利汇可以提供丹酚酸B在制备抗γ射线辐射的药物中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 丹酚酸 B在制备抗γ射线 辐射 的药物中的应用。本发明所述的应用中，所述的丹酚酸B既可以减轻由γ射线辐射诱导的外周WBC，RBC和PLT的减少，又可以减轻DNA和 蛋白质 在骨髓细胞中的损伤，还可以中和小鼠脾脏和胸腺的辐射损伤，抗γ射线辐射的效果显著。，下面是丹酚酸B在制备抗γ射线辐射的药物中的应用专利的具体信息内容。
丹酚酸B在制备抗γ射线辐射的药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及含有杂环化合物的医药配制品，具体涉及含有丹酚酸B的药物，该药物具有抗辐射的用途。
背景技术
[0002] 辐射是影响人类健康的一个非常重要的因素。研究明确表明电离辐射能使DNA链断裂和形成自由基，直接或间接导致细胞死亡。自由基能够破坏含有大量多元不饱和脂肪酸的支持性细胞膜，这种高度敏感的损伤最终将导致细胞程序化死亡。近年来，随着核技术的快速发展以及其在工业，农业，医学上的应用，暴露于电离辐射不仅仅可能发生在核事故，还可能发生在癌症的放射治疗阶段,因此，人们遭受辐射损伤的可能性越来越大。这样有害的环境可能会导致人类造血系统，免疫系统，基因突变，生殖系统，消化系统，神经系统受损。长久以来，人们一直在尝试寻找一种有效、可靠并且廉价的防辐射药物，导致生物药正在吸引越来越多的特别关注。目前，许多天然化合物广泛的分布在植物界，它们被认为有抗电离辐射的潜能。如葛根素，茶多酚，大黄素和槲皮素都可以通过抑制DNA损伤来防止诱发型伽马辐射的毒性。丹参，源于中国古代医书《神农草本经》，是一种使用最广泛的中药。它对具有活血化瘀，通经活络的显著作用等都很有效果，并被用于治疗各种妇科疾病数千年。现代药理研究也显示丹参能够保护血管内皮细胞，抗心律失常，抗动脉粥样硬化，改善微循环，保护心脏，增加冠脉血流量，改善心肌缺血，抗炎和保护肝细胞,抗肺纤维化，并宣称对治疗冠状动脉疾病的和其他心血管疾病有效。
[0003] 丹酚酸B(Salvianolic acid B，Sal B)化学结构如下式(I)所示，分子量为718.62，最早源于唇形科植物丹参(Salviamiltiorrhiza Bunge)的干燥根，味微苦、涩，具引湿性，可溶于水。现有研究表明，丹酚酸B具有抗氧化、保护心脏、保护脑损伤、抗肝纤维化和抗肿瘤等医疗用途。但是，目前尚未见丹酚酸B具有抗γ射线辐射的报导。
[0004]
发明内容
[0005] 本发明要解决的技术问题是提供丹酚酸B的新用途，即丹酚酸B在制药中的新应用。
[0006] 上述在制药中的新应用即为，丹酚酸B在制备抗γ射线辐射的药物中的应用。
[0007] 上述应用中，所述的药物由丹酚酸B和医学上可接受的辅料组成，其中所述的丹酚酸B在药物中的质量百分含量为0.1％～95％。
[0008] 上述应用中，所述的药物为注射液、胶囊剂或片剂。
[0009] 上述应用中，所述的丹酚酸B既可以减轻由γ射线辐射诱导的外周WBC，RBC和PLT的减少，又可以减轻DNA和蛋白质在骨髓细胞中的损伤，还可以中和小鼠脾脏和胸腺的辐射损伤，抗γ射线辐射的效果显著。
[0010] 一、实验材料
[0011] 1.实验动物
[0012] 实验动物为60只SPF级的昆明小鼠，雌雄各半，体重均为18-22g，由广东省医学实验动物中心提供。将小鼠饲养温度为20至25℃，湿度为55±5％，光照和黑暗各12小时的空调房间中，并让小鼠自由获得食物和水。
[0013] 2.药品及试剂
[0014] 丹酚酸B(国家药物和生物制品控制研究所(中国北京)，纯度>98％)[0015] 炔雌醇(Adamas Chemical(中国上海)，纯度>98％)；
[0016] 细胞裂解液(Cell Signaling)；
[0017] 红细胞稀释液(南京建成生物工程研究所有限公司)；
[0018] 白细胞稀释液(南京建成生物工程研究所有限公司)；
[0019] 血小板稀释液(南京建成生物工程研究所有限公司)；
[0020] BCA试剂盒(MERCK)等。
[0021] 3.仪器
[0022] 倒置显微镜(重庆奥特光学仪器有限责任公，型号：BDS200)；
[0023] 酶标仪(北京五洲东方科技有限发展公司，型号：RT-2100C)；
[0024] 低温高速离心机(上海甜美科学仪器有限公司，型号：CT14RD)；
[0025] 血细胞计数板(上海市求精生化试剂仪器有限公司)。
[0026] 二、实验方法
[0027] 1.给药方法
[0028] 经过一周的适应性饲养后，将昆明鼠随机分成6组，分别为正常组、模型组、炔雌醇阳性对照组、丹酚酸B低剂量组、丹酚酸B中剂量组、丹酚酸B高剂量组。阳性组的小鼠通过腹腔注射5mg/kg炔雌醇,分别给予5,7.5,10mg/Kg的丹酚酸B给丹酚酸B组的小鼠，而正常组和模型组的小鼠以0.1ml/10g体重/天的盐水注射。为了抑制骨髓细胞，在给药第7天后，除了正常组中的那些小鼠之外，所有小鼠都被照射亚致死强度的60Co-γ射线(中国佛山塑料集团有限公司)以剂量6Gy(0.1Gy/min，持续185秒)。在照射后继续给药，阳性组和丹酚酸B组的小鼠给予上述剂量的药物，正常组和模型组的小鼠给予蒸馏水，每天一次，持续14天。
[0029] 2.检测方法
[0030] (1)检测周边血液
[0031] 在照射前和照射后第3、7、14天，从所有小鼠的尾静脉抽取血液样品，然后分别与红细胞稀释液，白细胞稀释液，血小板稀释液混合。
[0032] 计算在4个角上的大窗格中外周WBC，RBC和PLT的数目，并在100倍生物显微镜下求和。
[0033] (2)骨髓细胞计数
[0034] 在最后一次给予药物1小时后，通过颈椎脱位处死所有小鼠，并通过用1ml磷酸盐缓冲盐水(PBS)冲洗并从股骨获取骨髓，然后将它们均匀混合以制备细胞悬浮液。将细胞悬浮液加入到60％淋巴细胞分离培养基(密度1.077g/ml)的溶液中，然后通过离心机(Model Biofuge Pico，Heraeus，Germany)在18℃2000rpm条件下离心30分钟。随后仔细分离血浆流体，用无菌移液管分离白环层。用PBS稀释有核细胞后在相同条件下离心，弃去上清液，然后加入PBS到细胞沉淀中制成细胞悬浮液，加少许到细胞计数板上，用显微镜计数。
[0035] (3)骨髓细胞中蛋白质含量的测定
[0036] 取骨髓细胞悬液，加入裂解缓冲液后再冰上孵育30分钟，然后用离心机(德国Heraeus，型号Biofuge Pico)在4℃15000rpm的条件下离心10分钟，分离得到清液并保存于-80℃，用BCA法测定蛋白质浓度。
[0037] (4)胸腺和脾脏指数
[0038] 在辐照后第14天，处死所有的动物，取出脾脏和胸腺并用分析天平称重。分别将器官重量除以体重计算胸腺指数和脾指数。
[0039] 胸腺指数＝胸腺重量(mg)/体重(g)*10
[0040] 脾脏指数＝脾脏重量(mg)/体重(g)*10
[0041] 三、实验结果
[0042] 1.丹酚酸B对被照射小鼠的外周血计数的影响
[0043] 由于骨髓对辐射非常敏感，且辐射诱导骨髓造血细胞的损伤。为了研究丹酚酸B对被照射小鼠的造血功能是否有益，我们选择外周WBC，RBC和PLT的数目作为比较的参考。如图1所示，小鼠外周WBC，RBC和PLT的数量在正常范围内，放射前所有组之间都没有显著差异。然而，在6Gy60Co-γ辐射后，外周WBC，RBC和PLT的计数明显降低(P<0.01)，而丹酚酸B在第3，7,14天显著增加了WBC，RBC和PLT的计数(P<0.01)。这表明ST可以减轻由辐射诱导的外周WBC，RBC和PLT的减少，并对小鼠产生较小伤害。
[0044] 2.丹酚酸B对骨髓成核细胞计数的影响
[0045] 辐射可以损伤或破坏骨髓的微环境，从而影响造血功能，骨髓成核细胞的减少代表身体造血系统出现损坏。图2A显示，与正常组比较，模型组中骨髓成核细胞计数显著降低(P<0.01)。施用三种不同剂量的丹酚酸B明显增加了骨髓成核细胞的计数(P<0.01)，这表明丹酚酸B对骨髓造血细胞具有阳性保护作用。
[0046] 3.丹酚酸B对骨髓细胞中蛋白质合成能力的影响
[0047] 我们首先调查辐射诱导小鼠的蛋白质合成。图2B显示，电离辐射明显降低了骨髓细胞中的蛋白质含量(P<0.01)，而丹酚酸B处理显著提高了骨髓细胞中的蛋白质水平(P<0.01)。这表明丹酚酸B可以减少DNA和蛋白质在骨髓细胞中的氧化损伤。
[0048] 4.丹酚酸B对小鼠免疫功能的影响
[0049] 脾和胸腺是哺乳动物中重要的免疫器官，并且与骨髓相同，二者对辐射损伤非常敏感。损坏脾脏和胸腺将破坏其免疫系统，并很有可能出现并发症。故此，我们通过检测胸腺和脾指数来研究ST对照射的小鼠的免疫器官的影响。如图2C、D所示，胸腺指数和脾指数均显着降低(P<0.01)，而三种不同剂量的丹酚酸B显著增加了小鼠的胸腺和脾指数(P<0.01)。这表明丹酚酸B疗法可以显著中和小鼠脾脏和胸腺的辐射损伤，具有预期的保护作用。
附图说明
附图说明
[0050] 图1为丹酚酸B对外周血WBC、RBC和PLT计数影响的曲线图，其中，A图为WBC，B图为RBC，C图为PLT。
[0051] 图2为丹酚酸B对骨髓细胞计数、骨髓细胞蛋白质含量、胸腺指数和脾脏指数影响的条形图，其中，A图为骨髓细胞计数，B图为骨髓细胞蛋白质含量，C图为胸腺指数，D图为脾脏指数。
具体实施方式
[0052] 例1：(静脉注射剂)
[0053] 取丹酚酸B1000mg，加枸橼酸1000mg，枸橼酸钠500mg，氯化钠1800mg，加1000ml的注射用水，搅拌使溶解，除菌滤过，灌封，经100℃15分钟流通蒸汽灭菌，制成大输液供静脉注射使用。
[0054] 例2：(肌肉注射剂)
[0055] 取丹酚酸B5000mg，加枸橼酸1000mg，枸橼酸钠500mg，氯化钠1800mg，加1000ml的注射用水，搅拌使溶解，除菌滤过，灌封，经100℃15分钟流通蒸汽灭菌，制成每支2mg/2ml的注射液供肌肉注射使用。
[0056] 例3：(胶囊剂)
[0057] 取丹酚酸B4500mg与200mg微晶纤维素、200mg羧甲基淀粉钠、100mg十二烷基硫酸钠等辅料充分混合，采用辊压法进行干法制粒，再与适量硬脂酸镁混匀，填充入3#空心胶囊，制成规格为100mg/粒的胶囊剂供口服使用。
[0058] 例4：(片剂)
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