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一种治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法

阅读：1023发布：2020-06-26

专利汇可以提供一种治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法，包括鉴别和含量测定项目；鉴别是对虎杖、赤芍、香附的薄层色谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中丹参中丹酚酸 B的含量。本发明的治疗子宫肌瘤的中药制剂检测方法，专属性强，精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，可有效控制药品质量，从而确保产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。，下面是一种治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法，其特征在于：该中药制剂按重量份数计，由以下原料药制成：丹参90～450份、当归90～360份、赤芍90～360份、菟丝子90～360份、淫羊藿90～300份、三棱60～300份、莪术90～360份、水蛭40～120份、土鳖虫60～300份、牡丹皮90～360份、虎杖90～360份、茯苓120～450份、火炭母120～900份、桂枝60～300份、延胡索60～300份、桃仁80～300份、香附90-300份、党参120～900份和黄芪120～900份；该中药制剂的检测方法包括鉴别和含量测定项目；鉴别是对虎杖、赤芍、香附的薄层色谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法测定制剂丹参的含量。
2.根据权利要求1所述的治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法，其特征在于：虎杖的薄层色谱鉴别方法是以虎杖对照药材、大黄素对照品为对照，以石油醚(30℃～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂的薄层色谱法；赤芍的薄层色谱鉴别方法是以赤勺对照药材、芍药苷对照品为对照，以三氯甲烷－乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20：2.5：5：0.1)为展开剂的薄层色谱法；香附的薄层色谱鉴别方法是以香附对照药材，以正已烷-乙酸乙酯-二乙胺(20：6：1)为展开剂的薄层色谱法。
3.根据权利要求2所述的治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法，其特征在于：丹参的含量测定方法是以丹酚酸B对照品为对照，以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)为流动相的高效液相色谱法。
4.根据权利要求3所述的治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法，其特征在于：色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:
59)为流动相；检测波长为286nm；理论塔板数按丹酚酸B峰计算不低于4000。

说明书全文

一种治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及中医药技术领域，具体涉及治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法背景技术

[0002] 子宫肌瘤是由增生的子宫平滑肌组织和少量纤维结缔组织形成的良形肿瘤，为女性生殖器中最常见的肿瘤。发生年龄多在30岁～50岁之间，尤其多见于不孕的妇女。子宫肌瘤的患者绝大多数无症状，少数可表现为月经过多，经期延长，下腹包块，压迫症状(尿频、尿急、尿储留等)，下腹坠胀甚至导致不孕及流产等，严重影响妇女的生活质量和生育能力。往往在普查或因其他疾病检查中发现，临床报道的子宫肌瘤发生率远较真实的发生率低。
其主要症状有：月经改变，压迫症状，阴道分泌物增多，不孕等。据统计，至少有20％育龄妇女有子宫肌瘤。

[0003] 子宫肌瘤属于祖国医学“癓瘕”范畴，《素问·骨空论》及《灵枢·水胀》篇中有“瘕聚”、“肠覃”、“石瘕”等癓瘕疾患的较早记载。后世的中医书中，又有比较详细的记载，《景岳全书·妇人规》载有“瘀血留之作癓，惟妇人有这其证，……总由血动之时，余血未净，而一有所逆，则留滞日积，而渐以成癓矣。”癓者，坚硬不移，痛有定处，瘕者，推之可移，痛无定处。大抵癓属血病，瘕属气病，彼此密切相连，难于分割。本病的形成，多与正气虚弱，血气失调有关。或由经期产后，内伤生冷，或外受风寒，或恚怒伤肝，气逆而血留，或忧思伤脾，气虚而血滞，或积劳积弱，气弱而不行所致。常以气滞血阏，痰湿内阻等因素结聚而成。且正气虚弱为形成本病的主要病机，一旦形成，邪气愈甚，正气愈伤，故后期则形成正气虚，邪气实，虚实错杂之痼疾。病在气则理气行滞为主，佐以理血；病在血则活血破瘀散结为主，佐以理气。

[0004] 目前临床治疗子宫肌瘤多以手术治疗为主，但手术治疗往往具有一定的适应证，且患者的接受程度也限制了其应用，常规的药物治疗大多疗效欠佳。中医治疗子宫肌瘤多采用活血、化瘀、消癥的治法，具有一定治疗效果，甚至可以使子宫肌瘤明显缩小。过分活血化瘀可损伤人体正气，甚至引起子宫出血过多，加重贫血。因此中医治疗子宫肌瘤宜标本兼顾，益气以扶正，化瘀以祛邪。近年来，研究表明，核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)与心肌素可相互作用影响平滑肌细胞的生长、增殖、分化和转化。中医药在治疗子宫肌瘤上有其独到的优势，中医药对子宫肌瘤的认识及探索也已逐步深化，中医药对子宫肌瘤不仅仅是发挥其治疗作用，同时也能较好的调节机体的内分泌及免疫等多个方面。因此选用中医药，采取现代优选的提取工艺与制备工艺，制得药品，将为子宫肌瘤的治疗提供一个确有疗效的中药新品种，为该病患者提供新的治疗药物。因此，对治疗子宫肌瘤的中药制剂进行检测，控制药品质量，保障用药安全，显得尤为必要。

发明内容

[0005] 为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法，使该药品的检测结果准确，可有效控制药品质量。

[0006] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

[0007] 首先，本发明的治疗子宫肌瘤的中药制剂为：按重量份数计，由丹参90～450份、当归90～360份、赤芍90～360份、菟丝子90～360份、淫羊藿90～300份、三棱60～300份、莪术90～360份、水蛭40～120份、土鳖虫(土别)60～300份、牡丹皮90～360份、虎杖90～360份、茯苓120～450份、火炭母120～900份、桂枝60～300份、延胡索(元胡)60～300份、桃仁80～
300份、香附90-300份、党参120～900份和黄芪120～900份制成。其制备方法为：量称取取丹参、当归、赤芍、菟丝子、淫羊藿、三棱、莪术、水蛭、土鳖虫虫(土别)、牡丹皮、虎杖、茯苓、火炭母、桂枝、延胡索(元胡)、桃仁、香附、党参和黄芪，加水提取，滤过，滤液减压浓缩至一定相对密度，加入乙醇，搅拌，静置，取上清液，回收乙醇，减压浓缩至一定相对密度，干燥，干膏粉碎过80目筛，得到药粉，再加入辅料制成各种药物制剂。

[0008] 在以上基础上，本发明的治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法，包括鉴别和含量测定项目；鉴别是对赤芍、香附、虎杖的薄层色谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中丹参的丹酚酸B含量。

[0009] 前述治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法中，虎杖的薄层色谱鉴别方法是以虎杖对照药材、大黄素对照品为对照，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂的薄层色谱法；赤芍的薄层色谱鉴别方法是以赤勺对照药材、芍药苷对照品为对照，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(20：2.5：5：0.1)为展开剂的薄层色谱法；香附的薄层色谱鉴别方法是以香附对照药材为对照，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：
1)为展开剂的薄层色谱法。

[0010] 进一步地，前述治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法中，具体鉴别方法包括下述项目中的至少一项：

[0011] (1)虎杖的薄层色谱鉴别取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液5ml，水浴加热30分钟，放冷，用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点,阴性无干扰；

[0012] (2)赤芍的薄层色谱鉴别取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加水30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液加10％氢氧化钠溶液，调节pH值至8～9，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取赤勺对照药材
1g，同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；

[0013] (3)香附的薄层色谱鉴别取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加三氯甲烷30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在80℃加热1分钟，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。

[0014] 进一步地，前述治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法中，丹参的含量测定方法是以丹酚酸B对照品为对照，以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)为流动相的高效液相色谱法。

[0015] 具体的含量测定方法包括下述项目中的至少一项：

[0016] 含量测定：照高效液相色谱法《( 中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。

[0017] 色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)为流动相；检测波长为286nm。理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于4000。

[0018] 对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。

[0019] 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，混匀，取适量，研细，取约0.3g，精密称定，置50ml量瓶中，加入水适量，超声(功率300W，频率50Hz)30分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液,用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液，即得。

[0020] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[0021] 本品每袋(5g)含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不得少于38mg。

[0022] 本发明的治疗子宫肌瘤的中药制剂检测方法，专属性强，精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，可有效控制药品质量，从而确保产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。

具体实施方式

[0023] 下面结合试验例和实施例对本发明作进一步的详细说明。

[0024] 为了确保本发明方案的科学、合理、可行，通过以下一系列试验研究和考察，从而确定本发明的方案。以下试验例中以本发明的治疗子宫肌瘤的中药颗粒剂为研究对象。

[0025] 试验例1：

[0026] 1、性状

[0027] 本发明的产品为棕色至棕褐色颗粒；味甜、微苦。

[0028] 2、鉴别

[0029] 2.1材料

[0030] 仪器电子分析天平(METTLER TOLEDO AB204-S)；HH-4数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)；YHG-600-S-II型红外快速干燥箱(贺德试器有限公司)；超声波清洗器(宁波新芝生物科技有限公司)；DHG9070A-电热鼓风干燥箱(上海精宏试验设备有限公司)；ZF三用紫外分析仪；薄层层析用硅胶为化学纯，试剂均为分析纯。

[0031] 试药虎杖对照药材(批号120980-201202)，大黄素对照品(批号110756-201110)，赤勺对照药材(批号121092-201202)，芍药苷对照品(批号110736-201324)，香附对照药材(批号121059-201204)，均由中国药品生物制品检定所提供；薄层色谱用硅胶G(青岛海洋化工有限公司)；石油醚、甲酸乙酯、甲酸、三氯甲烷、甲醇、正已烷、二乙胺等均为分析纯。

[0032] 2.2虎杖的鉴别：

[0033] 按《中国药典(2010版)一部》中虎杖药材的鉴别方法，进行鉴别，分离效果理想，且阴性无干扰。

[0034] 取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液5ml，水浴加热30分钟，放冷，用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30℃～
60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0035] 2.3赤芍的鉴别：

[0036] 在选择鉴别方法时，首先采用了《中国药典(2010版)一部》中赤芍药材的鉴别方法，TLC法展开后，在与芍药苷对照品色谱相应的位置上，显不同颜色斑点，有干扰，经调整展开剂后，也无法消除干扰。继而选择以下四种方法进行试验。其试验方法及结果见表1：

[0037] 表1 该中药制剂中赤芍的TLC鉴别试验方法比较

[0038]

[0039]

[0040] 从表1可知，方法四可得预期效果：

[0041] 取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加水30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液加10％氢氧化钠溶液，调节pH值至8～9，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取赤勺对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[0042] 2.4香附的鉴别：

[0043] 先按《中国药典(2010版)一部》香附药材的鉴别方法进行试验，但供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点。进一步调整TLC法的展开剂，效果也不理想。参考相关文献，进行以下五种方法试验。其方法及结果见表2：

[0044] 表2 该中药制剂中香附的TLC鉴别试验方法比较

[0045]

[0046]

[0047] 从上表看出方五较为理想：

[0048] 取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加三氯甲烷30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在80℃加热1分钟，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0049] 3检查

[0050] 应符合颗粒剂项下有关的各项规定《( 中国药典》2010年版一部附录IL)。

[0051] 3.1粒度1、粒度：除另有规定外，照粒度测定法(中国药典2010年版一部附录ⅪB第二法，双筛分法)测定，不能通过一号筛与能通过五号筛之和，不得过15％。粒度测定结果见表3。

[0052] 表3 粒度测定结果表

[0053]

[0054] 3.2水分：照水分测定法(中国药典2010年版一部附录ⅨH)测定，不得过6.0％，水分测定结果见表4。

[0055] 表4 水分测定结果表

[0056]

[0057] 3.3溶化性：取供试品1袋，加热水200ml，搅拌5分钟，立即观察，应全部溶化或呈混悬状。可溶性颗粒应全部溶化，允许有轻微浑浊。三批样品试验结果，三批颗粒全部溶化，符合规定。

[0058] 3.4装量差异：除另有规定外,取供试品10袋,分别称定每袋内容物的重量,每袋装量与标示装量(10.0g)相比较，装量差异限度应在标示装量(10.0g)的±5％以内，超出装量差异限度的不得多于2袋，并不得有1袋超出限度的1倍。结果见表5。

[0059] 表5 装量差异测定结果表

[0060]

[0061] 3.5微生物限度：照微生物限度检查法(中国药典2010年版一部附录XIII C) 检查，本发明的产品三批样品微生物限度检查，结果见表6，均符合规定。

[0062] 表6 三批样品微生物限度检查表

[0063]

[0064] 3.6重金属及有害元素：照铅、镉、砷、汞、铜测定法测定。结果见表7

[0065] 表7 重金属及有害元素测定结果

[0066]

[0067] 如上表所示，所测数据均未超过10ppm，故不作为质量检测的技术方案。

[0068] 试验例2：

[0069] 1含量测定

[0070] 1.1仪器及试药

[0071] 仪器：高效液相色谱仪(LC-10ATVP型)；ANASTAR色谱数据工作站；SPD-10Avp紫外检测器；TG332A(十万分之一)微量分析天平(上海天平仪器厂)；超声波清洗器(250W，35KHz，北京创新德仪器设备厂)。

[0072] 试剂：乙腈为色谱纯，甲醇为色谱纯，水为姓哈哈纯净水。

[0073] 丹酚酸B对照品(批号111562-201302)。

[0074] 2样品制备

[0075] (1)对照品溶液的制备：精密称取丹酸酸B对照品适量，加水使其溶解制成每1ml含丹酸酸B60μg的溶液，即得。

[0076] (2)供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，混匀，取适量，研细，取约0.3g，精密称定，置50ml量瓶中，加入水适量，超声(功率300W，频率50Hz)30分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液,用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液，即得。

[0077] (3)阴性对照溶液的制备：按处方取除丹参以外的各药材，按本品制备工艺制备阴性样品，称取1g,按供试品溶液的制备方法操作，制得阴性对照溶液。

[0078] 3色谱条件的选择

[0079] 在进行丹酚酸B色谱条件选择时，参考中国药典2010年版一部丹参项下的丹酚酸B含量测定色谱条件，丹酚酸B的色谱条件为：汉邦-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)；乙腈-甲醇-甲酸-水(10：30：1：59)为流动相；流速1.0ml/分钟；检测波长为286nm，柱温25℃。试验结果表明，样品中丹酚酸B分离较好，该色谱条件可作为丹酚酸B含测色谱条件。

[0080] 4系统适应性试验

[0081] 系统适用性试验经过试验，在乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)条件下，样品中丹酚酸B主峰对称性良好，与相邻峰分离度较好，色谱柱的理论板数按丹酚酸B峰计为6587，阴性对照无干扰，故确定流动相组成和比例，确定色谱主的理论板数按丹酚酸B峰计应不低于4000。

[0082] 5线性关系的考察

[0083] 配制274ug/ml的丹酚酸B对照品溶液,精密吸取2、4、8、15、25、40ml置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含丹酚酸B:10.96μg、21.92μg、43.84μg、82.2μg、137μg、219.2μg的系列对照品溶液，分别进样10μl测定,测定峰面积,绘制标准曲线。结果见表8。

[0084] 表8 线性关系考察试验结果

[0085]

[0086] 结果表明丹酚酸B在0.01096-0.2192μg范围内有良好的线性关系，回归方程：y＝11418x-6460.2，r＝0.9996。

[0087] 6重复性试验

[0088] 取同一批样品(20150301)6份,按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液,按色谱条件测定样品中丹酚酸B含量。结果RSD＝1.83％。

[0089] 7精密度试验

[0090] 精密吸取对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按色谱条件测定峰面积，重复进样6次,以丹酚酸B的峰面积进行计算，求出相对标准偏差RSD(％)，结果见表9。

[0091] 表9 精密度考察试验结果

[0092]

[0093] 试验结果表明：相对标准偏差RSD(％)为1.21％(n＝6)，小于3％，表明重复性良好。

[0094] 8稳定性试验

[0095] 称取样品按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h精密吸取供试品溶液10μl注入高效液相色谱仪，按色谱条件测定样品中丹酚酸B含量，求出相对标准偏差RSD(％)，结果见表10。

[0096] 表10 稳定性试验结果

[0097]

[0098] 结果，供试品溶液在设定的时间内注入色谱仪，测得平均峰面积为544525.7，RSD为0.99％(n＝6)，表明制备的供试品液在24h内稳定。

[0099] 9加样回收率试验

[0100] 精密称取已知含量的样品(8.33mg/g)约0.15g，共6份，置50ml量瓶中，分别精确加入丹酚酸B对照品溶液(质量浓度为0.262mg/ml)各5ml；按供试品的制备方法制备供试品溶液，按色谱条件吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定丹酚酸B的含量,按下式计算出回收率，计算式如下，结果见表11。

[0101] 回收率＝(C-A)/B×100％

[0102] A:样品中丹酚酸B的量(mg)

[0103] B：丹酚酸B对照品加入量(mg)

[0104] C：测得量(mg)

[0105] 表11 加样回收率试验结果(n＝6)

[0106]

[0107] 结果：平均回收率为98.678％，RSD为1.37％(n＝6)，表明丹酚酸B的回收率良好。

[0108] 10样品测定

[0109] 取3个批号的本品供试品溶液制备方法操作制备供试品溶液，按色谱条件测定峰面积，计算出各样品中丹酚酸B含量(mg/g),试验结果见表12。

[0110] 每袋含量(mg/袋)＝含量×每袋袋重注：每袋袋重为10g

[0111] 表12 3批样品含量测定结果

[0112]

[0113] 上述3批样品测得的分别为65.6mg/袋、67.7mg/袋、73.1mg/袋。

[0114] 下面给出几个用于详细说明本发明的实施方式的实施例。

[0115] 实施例1 治疗子宫肌瘤的中药制剂中虎杖的鉴别：

[0116] 虎杖的鉴别方法是以大黄素对照品、虎杖对照药材为对照，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂的薄层色谱法，具体为：取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液5ml，水浴加热30分钟，放冷，用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0117] 实施例2 治疗子宫肌瘤的中药制剂中赤芍的鉴别：

[0118] 赤芍的鉴别方法是以芍药苷对照品、赤勺对照药材为对照，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)为展开剂的薄层色谱法，具体为：取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加水30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液加10％氢氧化钠溶液，调节pH值至8～9，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取赤勺对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[0119] 实施例3 治疗子宫肌瘤的中药制剂中香附的鉴别：

[0120] 香附的鉴别方法是以香附对照药材为对照，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)为展开剂的薄层色谱法，具体为：取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加三氯甲烷
30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在80℃加热1分钟，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0121] 实施例4 治疗子宫肌瘤的中药制剂中丹参的含量测定：

[0122] 丹参含量测定方法是以丹酚酸B对照品为对照，以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)为流动相的高效液相色谱法，具体的含量测定方法为：

[0123] 含量测定：照高效液相色谱法《( 中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。

[0124] 色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)为流动相；检测波长为286nm。理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于4000。

[0125] 对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。

[0126] 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，混匀，取适量，研细，取约0.3g，精密称定，置50ml量瓶中，加入水适量，超声(功率300W，频率50Hz)30分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液,用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液，即得。

[0127] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[0128] 本发明所述治疗子宫肌瘤的中药制剂的检测方法包括鉴别和含量测定项目，其中鉴别至少包括实施例1～实施例3中任意一项，含量测定包括实施例4中的项目。

[0129] 实施例5 治疗子宫肌瘤的中药颗粒剂的检测方法包括：

[0130] 性状：本制剂为黄褐色颗粒；气微，味微苦；

[0131] 鉴别：

[0132] (1)取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液5ml，水浴加热30分钟，放冷，用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30℃～
60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0133] (2)取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加水30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液加10％氢氧化钠溶液，调节pH值至8～9，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取赤勺对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[0134] (3)取装量差异项下的颗粒研细，称取约3g，加三氯甲烷30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在80℃加热1分钟，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0135] 检查：应符合中国药典2010年版一部附录I C颗粒剂项下有关的各项规定；

[0136] 含量测定：照高效液相色谱法《( 中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。

[0137] 色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)为流动相；检测波长为286nm。理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于4000。

[0138] 对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。

[0139] 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，混匀，取适量，研细，取约0.3g，精密称定，置50ml量瓶中，加入水适量，超声(功率300W，频率50Hz)30分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液,用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液，即得。

[0140] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[0141] 本品每粒(5g)含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不得少于38mg。

[0142] 当然，以上只是本发明的具体应用范例，本发明还有其他的实施方式，凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明所要求的保护范围之内。

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