脱氢乙酸的协同组合物以及减少各种终端组合物中的黄变的
方法
发明领域
[0001] 本
申请涉及减少和/或防止脱氢乙酸(DHA)黄变的方法。更特别地，本文公开了包含脱氢乙酸和至少一种非质子
溶剂的稳定、协同而且不黄变/减少黄变的
防腐剂组合物，以及其在各种
水基和非水基的终端(end-user)应用中的用途。
[0002] 发明背景
[0003] 防腐剂或防腐剂系统用于各种工业应用，包括个人护理、家务、涂料、
金属加工液、纸、木材、塑料、消毒、
化妆品、化妆用具、药物、食品、饮料、
口腔护理、漆或
水处理，以便克服基于霉、霉菌、
真菌、细菌的微
生物污染问题。
[0004] 特别地，个人护理、药物、食品、饮料、营养护理产品、
香味产品、药妆品、保健食品、化妆品、
治疗、
皮肤护理和抗衰老产品通常加入支持
微生物生长和增殖的成分，因此，这些产品需要大量防腐剂，因为它们直接影响消费者。此外，无论它们的用途，这些产品一般包括水性介质作为一种重要组分。这种水相有利于其中微生物可以存活和/或增殖的介质。因此，这些产品由于其本身性质而产生微生物增殖的环境和可存活介质。不添加一些防腐剂，这些类型的产品易受微生物污染和增殖影响。
[0005] 个人护理或化妆品组合物和
稳定性在我们日常生活中特别相关，因为这些产品可以应用于人体，用于清洁、美化、提升吸引
力或改变外貌的目的。因此，防止微生物生长的抗微生物化学品起到关键作用。这些个人护理产品的配方非常复杂和多样。它们常包括用来满足消费者的审美需要的各种天然和/或合成成分。不幸的是，这些成分也提供支持微生物生长的pH、水分和营养条件。由于这种潜在弱点，许多个人护理产品采用天然或合成防腐剂以防止变质。
[0006] 因此，可以在制造时将防腐剂添加至这类产品以便长期保护产品免受微生物污染。防腐剂的类型和水平的特别选择通常由配制者基于许多因素进行，包括例如产品的微生物要求、成本、产品的pH、与其他配方成分的相容性和监管限制。防腐剂选择和测试中使用的因素的指南可以在Marcel Dekker Inc出版的“Cosmetic and Drug Preservation,Vol.I,Principles and Practice”中找到。
[0007] 但是，最近，对天然消费品的需求在全球是非常重要的。这样的天然行业已成为北美基于个人护理和化妆品的工业领域中增长最快的之一。进一步地，预计在未来几年中对于化妆品和化妆用具产品，天然和有机产品的健康市场增长率会增加。对这类天然产品的需求在为消费者提供健康益处和对社会提供环境益处中起直接作用，并且这些产品会属于以下任何一类，包括：天然、绿色、有机、可持续、整体、生物可降解、天然等同、地球友好、监管友好、环境安全、不含防腐剂和无毒。
[0008] 基于自然的产品的需求和重要性已引起许多配制者和消费者远离传统防腐剂或防腐剂系统，主要是由于目前适用于全球的严格的管理规范。这类传统防腐剂包括对羟基苯
甲酸酯、三氯生、异噻唑啉
酮、季铵化合物、甲
醛和甲醛供体、
氨基甲酸酯、IPBC、氯苯甘醚(chlorophenisin)。根据目前的监管准则，传统防腐剂的允许使用水平不能保护终端产品。关于这些防腐剂的强烈、负面的消费者看法驱使需要新的防腐剂或防腐剂系统。
[0009] 脱氢乙酸(DHA)是绿色、天然和可持续的防腐剂，通过监管认证机构的正式批准，例如，天然产品协会、Oasis、EcoCert、NaTrue和
土壤协会。此外，DHA与广泛的
皮肤护理组合物相容，并且能够在3-7的pH范围(这是大多数皮肤护理应用的理想范围)中递送良好效力。在制备包含DHA的成品组合物或基于终端的制剂中遇到的一个重要问题是这类制剂随着时间、
温度和/或与相关成分相互作用而变色，部分是由
颜色从白色无色透明性质变黄的DHA引起的。为了审美原因以及涉及所得的基于终端的组合物中不需要的颜色的功能原因，这样的黄色是不期望的。特别地，由于其生态认证的和天然的性质，皮肤护理产品采用DHA作为它们优选的防腐剂；但是，由于这样的变色，其仅限于有颜色的制剂。终端产品的美学是非常重要的，并且这类产品的配制者竭尽全力达到终端产品的这类独特颜色效果，因此使组合物不同于期望的白色或无色
色调的任何原因或其他成分可能使开发人员的任务非常困难。特别地，采用DHA作为终端产品中的抗微生物剂的尝试产生不需要的黄色并且不利地影响所配制的产品的颜色或改变成品终端产品的预期颜色。结果，这种不期望的颜色使制剂不适合期望的使用。
[0010] DHA是明显不稳定的分子，并且在包含极性或质子溶剂如水、
乙醇、甲醇、丙醇等的水基和非水基的终端产品中
水解。DHA的变色程度分别根据非水性和水性产品中存在的质子溶剂和/或DHA的量变化。此外，DHA在水解时的黄色
染色强度可以根据对紫外(UV)光的暴露、对热的暴露于或储存时间而变化。
申请人确定，在DHA水解期间，其产生
氧中心或
碳中心自由基，所述自由基可以进行氧化或还原偶联以形成UV吸收化合物或杂质(具有高ε的痕量水平)，所述UV吸收化合物或杂质具有独特的发色团结构，所述结构负责包含不同浓度水平的质子溶剂和DHA的任何质子溶剂或水基/非水基终端产品中存在的DHA的黄色染色的形成。DHA水解期间衍生的非限制性发色团包括但不限于1-(2,4-二羟基-3-甲基苯基)丙酮、2,5-二甲基-7-羟基色酮、3,5-二羟基
甲苯、3,5-二甲基酚、2,4,6-庚三酮(2,4,6-hepatnetrione)、2-乙酰基-4,5-二甲基酚、2,6-二甲基-4H-吡喃-4-酮、3,3,5-三甲基-2-环己烯-1-酮、2,6-二甲基-4H-吡喃-4-酮、2-乙酰基-4,5-二甲基酚、4,5,7-三甲基香豆素、
2,4-二甲基-7-羟基色酮、3,5-二甲基酚和/或3,3,5-三甲基-2-环己烯-1-酮。
[0011] 授予Larry Kent Hall等人的美国公开第20120015986号公开了一种防止包含羟基吡啶硫酮的材料变色的方法，特别是塑料材料或者暴露于外部环境的其他材料如漆、涂料、
粘合剂或纺织品。所述方法适合防止其他包含羟基吡啶硫酮的材料的变色，例如个人护理组合物如洗发水。将包含脱氢乙酸或其盐的变色
抑制剂添加至包含羟基吡啶硫酮的材料。变色得以防止而不添加环状有机
磷酸酯或有机
亚磷酸酯。变色抑制剂的使用不干扰羟基吡啶硫酮的抗微生物效果。
[0012] 美国
专利第6096122号公开了一种抑制选自水性漆、粘合剂、填缝和
密封胶组合物以及它们的组合的水性组合物中的变色形成的方法，其中所述变色是由组合物中
铁离子或
铜离子连同羟基吡啶硫酮的存在引起的。所述方法包括使组合物与变色抑制量的锌化合物
接触，所述锌化合物选自
有机酸的锌盐、
无机酸的锌盐、氢氧化锌、氧化锌和它们的组合。还公开了一种水性抗微生物组合物，其防止可归因于其中铁离子或铜离子的存在的变色。
[0013] 授予Arch Chemicals的WO2014022369A1公开了一种通过添加吡喃酮化合物和进一步至包含羟基吡啶硫酮化合物的组合物、吡喃酮化合物和共螯合剂(优选HEDP、EDTA和它们的盐或其混合物)来减少包含羟基吡啶硫酮化合物的组合物变色的方法。
[0014] 授予Kyoeisha Chemical的JP2047371A公开了一种应用于纺织产品的组合物，其通过利用特定
硅油作为主要组分赋予纺织品优秀的柔软性和拉伸性而不引起
纤维的黄变和变色。与常规柔软剂相比，所述组合物表现出优秀的柔软性和拉伸性以及较低的热黄变趋势。所述组合物可以包含碳酸乙烯酯和碳酸丙烯酯作为其成分之一。
[0015] WO2012068455A1公开了一种水性、稳定、高度浓缩的防腐剂组合物，其包含(i)约5-50wt％的脱氢乙酸(DHA)或其盐；(ii)约1-20wt％的2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MIT)；
(iii)约0.1-10wt％的至少一种嵌段共聚物；(iv)任选存在的约0.01-5.0wt％的至少一种磺基
琥珀酸盐
表面活性剂；(v)任选存在的约0.01-5.0wt％的至少一种掩蔽剂；以及(vi)任选存在的约0.01-5.0wt％的一种或多种添加剂。还公开了一种制备所述防腐剂组合物的方法。
[0016] 对颜色稳定或不黄变/减少黄变的DHA仍有需要，以便解决生态友好的、天然和服从监管的防腐剂用于各种终端应用的必要性。因此，本申请的目的是提供一种稳定、协同和不黄变/减少黄变的DHA，当添加至水基或非水基终端产品时其能够保持天然颜色。
[0017] 发明概述
[0018] 本申请提供稳定、协同、减少黄变和/或不黄变的DHA，当添加至水基或非水基终端产品时其能够保持天然颜色。
[0019] 本申请还提供稳定和不黄变/减少黄变的协同防腐剂组合物，其包含(i)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)；以及约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种
非质子溶剂。
[0020] 本申请进一步提供DHA(特别是与期望的非质子溶剂组合)的协同防腐剂组合物，并且其中，所述DHA溶解于所述非质子溶剂中。非质子溶剂对协同效应的贡献允许采用比没有这类非质子溶剂的组合时所需要的量少得多的量的DHA。因此，当用于终端产品时，采用的较少量的DHA能够产生较低的黄色强度。
[0021] 本申请的另一方面是防腐剂组合物，其能够抑制或杀灭热带假丝
酵母(Candida tropicalis)、白色念珠菌(Candida albicans)、异常汉逊酵母(Hansenula anomala)、
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、德尔布有孢圆酵母(Torulaspora delbreuckii)、拜
耳接合酵母(Zygosaccharomyces bailii)、鲁氏接合酵母(Zygosaccharomyces rouxii)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococus epidermidis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鼠伤寒沙
门氏菌(Salmonella typhimurium)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、黑曲霉(Aspergillus niger)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、岛青霉(Penicillium
islandicum)、桔青霉(Penicillium citrinum)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、链格孢(Alternaria alternata)、巴西曲霉(Aspergillus
brasiliensis)、洋葱伯克霍尔德菌(Burkhodelia cepacia)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、日沟维肠杆菌(Enterobacter gergoviae)、
肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、普通
变形杆菌(Proteus vulgaris)、
荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、嗜松青霉(Penicillium pinophilum)和/或总状毛霉(Mucor racemosus)。
[0022] 本发明的防腐剂组合物可以用于各种水基和非水基终端应用，包括化妆品、化妆用具产品、个人护理产品、口腔护理产品、皮肤护理产品、毛发护理产品、家用消费品和清洁产品、工业和机构清洁产品、消毒产品、接触镜、酶系制剂、伤口护理、卫生产品、农业组合物、纺织工业、涂料行业和/或洗衣产品。所述防腐剂组合物可以作为乳剂、微乳剂、
纳米乳剂、溶液、分散剂(dispersion)、混悬剂、复合团聚体(complex coacervate)或浓缩剂等递送。
[0023] 根据本申请的另一方面，提供非水基终端组合物，其包含：(a)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)(b)约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂，(ii)约
0.01wt.％-约5wt.％的至少一种抗
氧化剂或自由基灭活剂(radical quencher)；(iii)约
0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，并且其中所述组合物是稳定的并且能够减少脱氢乙酸的黄变。
[0024] 本申请的另一重要方面提供水基终端组合物，其包含：(i)防腐剂组合物，其包含：(a)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)，(b)约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂；(ii)约0.01wt.％-约5wt.％的至少一种抗氧化剂或自由基灭活剂；以及(iii)约
0.01wt.％-约5wt.％的至少一种螯合剂或掩蔽剂；(iv)约0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，并且其中所述组合物是稳定的并且能够减少脱氢乙酸的黄变。
附图说明
[0025] 本发明的进一步的实施方案可以参考附图理解。
[0026] 图1示出在-25℃下进行的有或无PVP K-30和K-90的DHA的碳酸丙烯酯溶液的冻融稳定性。
[0027] 图2示出在-25℃下进行的具有的0.7％K-90和1％K-90的DHA的碳酸丙烯酯溶液的比较冻融稳定性研究。
[0028] 图3示出层状凝胶和非离子乳液组合物中稳定化的DHA的流变稳定性。
[0029] 发明详述
[0030] 虽然本
说明书提出
权利要求，特别指出并明确要求认为是发明的，但是预期通过阅读本发明的以下详细描述和包括的
实施例的研究可以更容易地理解本发明。
[0031] 本文中术语“包含”表示各种任选存在的、相容的组分可以用于本文的组合物，只要重要成分以合适的形式和浓度存在。因此术语“包含”涵盖并包括更限制性的术语“由...组成”和“基本上由...组成”，术语“由...组成”和“基本上由...组成”可以用来表征所述防腐剂组合物的主要成分如防腐剂、非质子溶剂、抗氧化剂、螯合剂、自由基灭活剂和添加剂(如果有的话)。
[0032] 除非另有说明，如本文所用的所有百分比、部分、比例和比率均以总组合物的重量计。除非另有说明，所有这类重量，当它们关乎所列出的成分时，均基于活性水平，因此不包括可能包含在可商购材料中的溶剂或副产物。
[0033] 对本发明的单数特征或限制的所有引用均应当包括相应的复数特征或限制，反之亦然，除非另有说明或者其中引用的上下文明确暗示相反。
[0034] 如本文所用的数值范围意图包括该范围内包含的每个数字和数字的子集，无论是否具体公开。此外，这些数值范围应当理解成为涉及该范围中的任何数字或数字的子集的权利要求提供支持。
[0035] 如本文所用，词语“优选的”、“优选地”和变体是指在某些情况下提供某些益处的本发明的实施方案。但是，在相同或其他情况下，其他实施方案也可以是优选的。此外，列举一个或多个优选实施方案并不表示其他实施方案不可用，并且不是试图从本发明的范围排除其他实施方案。
[0036] 除非上下文另有明确规定，在本文中提到本发明的“一个实施方案”、“一个方面”或“一个版本”或“一个目的”包括一个或多个这样的实施方案、方面、版本或目的。
[0037] 为了与本文的公开一致的程度的所有目的，本文引用的所有出版物、文章、论文、专利、专利申请和其他参考文献均整体援引加入本文。
[0038] 如本文所用的术语“防腐剂”或“抗微生物剂”理解为是指药剂如
杀菌剂、杀真菌剂、杀藻剂、aquaticide、
除草剂、
杀虫剂、
农药、
植物生长调节剂等，使用它们是因为它们抑制生物和/或微生物物种的生长和/或破坏生物和/或微生物物种的能力，如细菌、真菌、藻类、毛虫、昆虫、幼虫、霉菌、啮齿动物、蜘蛛、蠕虫等。
[0039] 脱氢乙酸(DHA)的术语“不黄变”或“抗黄变”在本申请中同义使用，并且其表示包含DHA的防腐剂组合物在储存或加热时不变黄，并且当将它们添加至期望的终端产品时不变黄。此外，术语“略黄”或“减少的黄变”表示防腐剂组合物的DHA的颜色变成非常浅的黄色，与没有碳酸丙烯酯的DHA相比黄变强度显著较低。
[0040] 如本说明书和权利要求书中所用的术语“掩蔽剂”或“螯合剂”涉及这样的化合物，其能够键合或络合化合物的两个或更多个
原子之间的
金属离子，从而中和或控制这类金属离子的有害影响，其中金属离子的保持或键合是通过包括配位键和/或离子键在内的一种或多种不同类型的键的组合。
[0041] 如本文所用，“稳定”和“稳定性”是指在暴露于运输、储存和它们在终端应用中的使用中合理预期发生的条件下时化学性质、物理同质性和/或颜色明显不受影响的组合物。稳定性可以通过经验观察或者通过本领域技术人员已知的化学和/或物理检测的合适方法确定。
[0042] 本文描述了稳定和不黄变/减少黄变的协同防腐剂组合物，其包含(i)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)；以及约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂。
[0043] 本申请的具体实施方案中采用的防腐剂通常称作脱氢乙酸(DHA)。DHA的IUPAC名为3-乙酰基-2-羟基-6-甲基-4H-吡喃-4-酮[CAS注册号为520-45-6]。此外，本申请的可选实施方案考虑采用相关领域技术人员已知的DHA、DHA盐、DHA异构体、DHA互变异构体或DHA衍生物形式的所述DHA。本申请中采用的DHA量为约0.1wt.％-约5wt.％、约6wt.％-约10wt.％、约11wt.％-约15wt.％、约16wt.％-约20wt.％、约21wt.％-约25wt.％、约
26wt.％-约30wt.％、约31wt.％-约35wt.％或约36wt.％-约40wt.％。
[0044]
[0045] 本申请的合适的非质子溶剂选自极性非质子
有机溶剂、低极性非质子溶剂和非极性非质子溶剂，并且其中，所述非质子溶剂的性质可以是水混溶的、部分水混溶的或难以水混溶的。非质子溶剂可以包括但不限于单独的脂族和芳基醚、环醚、C1-20烷取代的C1-20卤代烷、C1-20卤代烷、C1-20硝基烷、卤代苯、C1-20二烷基酰胺、环烷基吡咯烷酮、C1-20环酰胺、乙酸C1-20烷基酯、乙酸苯酯、
苯甲酸苯酯、乙酸C1-20烷基酯、肉豆蔻酸的C1-20酯、乳酸的C1-20酯、碳酸C1-20亚烷基酯、C1-20酮、内酯、二烷基亚砜、甲酸的C1-20二烷基酰胺、C1-20腈、苯甲酸C1-20烷基酯、C1-20二烷基异山梨醇、邻/间/对甲苯甲酸C1-20烷基酯、或它们的组合。
[0046] 根据另一实施方案，所述非质子溶剂选自组，所述组包括但不限于：单独的全氟己烷、α-α-α-三氟甲苯、戊烷、己烷、环己烷、甲基环己烷、
萘烷、二噁烷、四氯化碳、氟里昂-11、甲苯、三乙胺、二硫化碳、二甲基醚、二异丙基醚、二乙基醚(乙醚)、叔丁基甲基醚(MTBE)、氯仿、乙酸乙酯、1,2-二甲氧基乙烷(GLYME)、2-甲氧基乙基醚(DIGLYME)、四氢呋喃(THF)、二氯甲烷、吡啶(Py)、2-丁酮(MEK)、丙酮、六甲基磷酰胺、N-甲基吡咯烷酮、2-吡咯烷酮、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、n-乙基-2-吡咯烷酮、N-环己基-2-吡咯烷酮、硝基甲烷、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺、乙腈、环丁砜、二甲基亚砜(DMSO)、癸基甲基亚砜、碳酸乙烯酯、碳酸丙烯酯、4-甲基-1,3-二氧戊环-2-酮(4-methyl-1,3-diololan-2-one)、碳酸丁烯酯、己内酰胺(环酰胺)、酯-己内酯、乙酸乙酯、乙酸甲酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸乙酯、乳酸甲酯、乳酸乙酯、苯甲酸苄酯、异山梨醇二甲基醚(DMI)、丁内酯、或它们的组合。本申请的一重要实施方案采用至少一种碳酸亚烷基酯作为所述非质子溶剂。
[0047] 本申请的另一非限制性实施方案公开：本申请的合适的非质子溶剂在性质上应当是非极性或较低极性的并且是高度可极化的。因此，已发现最合适的非质子溶剂包括碳酸乙烯酯、碳酸丙烯酯、碳酸丁烯酯、异山梨醇二甲基醚(DMI)或4,5-二甲基-1,3,-二氧戊环-2-酮或它们的混合物。
[0048] 按照本申请的另一实施方案，本申请中采用的非质子溶剂的量可以为约0.1wt.％-约10wt.％、约11wt.％-约20wt.％、约21wt.％-约30wt.％、约31wt.％-约
40wt.％、约41wt.％-约50wt.％、约51wt.％-约60wt.％、约61wt.％-约70wt.％、约
71wt.％-约80wt.％、约81wt.％-约90wt.％、约91wt.％-约99.9wt.％。
[0049] 在本申请的另一实施方案中，包含DHA和至少一种非质子溶剂的防腐剂组合物能够抑制或杀灭热带假丝酵母、白色念珠菌、异常汉逊酵母、酿酒酵母、德尔布有孢圆酵母、拜耳接合酵母、鲁氏接合酵母、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、铜绿假单胞菌、黑曲霉、黄曲霉、岛青霉、桔青霉、产黄青霉、尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌、腐皮镰刀菌、链格孢、巴西曲霉、洋葱伯克霍尔德菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、日沟维肠杆菌、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、嗜松青霉和/或总状毛霉。
[0050] 本申请的另一实施方案提供DHA的协同防腐剂组合物，特别是所述DHA与期望的非质子溶剂组合，并且其中，所述DHA溶解于所述非质子溶剂中。非质子溶剂对协同效应的贡献允许采用比没有这类非质子溶剂的组合时所需要的量少得多的量的DHA。因此，当用于终端产品时，采用的较少量的DHA能够产生较低的黄色强度。因此，包含DHA和至少一种非质子溶剂的防腐剂组合物能够提供针对细菌和真菌菌株的协同抗微生物活性。证实显著协同效应的一些非限制性细菌和真菌菌株包括大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)和巴西曲霉(A.brasilensisi)。用来提供协同活性的DHA和非质子溶剂之间的比例可以为约0.1-2:约2-10、约0.5-1.5:约2.5-7.5或约1:约5。
[0051] 根据本申请的一重要实施方案，所述防腐剂组合物能够提供稳定的组合物，其中所述DHA在储存和运输条件下，在室温/
环境温度下、在50℃下不变色。特别地，所述DHA在储存和运输条件下，在室温/环境温度下以及在50℃下不发生黄色染色。此外，在室温/环境温度下，所述防腐剂组合物在储存时稳定至少2年。
[0052] 一具体实施方案公开包含DHA和至少一种非质子溶剂的防腐剂组合物能够防止DHA的主要杂质的形成，如果它们与质子溶剂联合则由于水解而产生所述杂质。这类杂质负责DHA的变色或黄变。因此，将DHA添加至期望的终端产品中容易引起黄色染色。此外，在DHA水解期间，形成许多独特的发色团作为它们的主要杂质，所述发色团对UV-可见光敏感且能够吸收UV
辐射以产生某些颜色。而且，可能的是，当它们存在于终端应用中时，主要杂质的发色团可以与酚类和酮类物质形成产色氢键复合物。
[0053] 具有独特的发色团结构的主要杂质包括1-(2,4-二羟基-3-甲基苯基)丙酮、2,5-二甲基-7-羟基色酮、3,5-二羟基甲苯、3,5-二甲基酚、2,4,6-庚三酮、2-乙酰基-4,5-二甲基酚、2,6-二甲基-4H-吡喃-4-酮、3,3,5-三甲基-2-环己烯-1-酮、2,6-二甲基-4H-吡喃-4-酮、2-乙酰基-4,5-二甲基酚、4,5,7-三甲基香豆素、2,4-二甲基-7-羟基色酮、3,5-二甲基酚和/或3,3,5-三甲基-2-环己烯-1-酮。此外，形成的杂质的量不同,取决于它们的(i)温度–室温、环境温度或在50℃下加热老化1-4周的时间，(ii)纯DHA，1％-5％的NaOH水溶液，以及(iii)采用的DHA的百分比量。这类具有发色团结构的产生黄色的杂质可以通过采用如本申请所述的正确抗氧化剂、自由基灭活剂和技术掩蔽剂来控制或消除。根据另一实施方案，可以将本申请的防腐剂组合物掺入水基或非水基产品，并且其中，所述水基或非水基组合物可以是乳剂、微乳剂、溶液、分散剂、混悬剂、复合团聚体、喷雾剂或浓缩剂。
[0054] 本申请的非限制性实施方案采用蜡系材料作为悬浮剂或
增稠剂用于制备包含非质子溶剂(优选碳酸丙烯酯)的DHA组合物，其中蜡组分能够稠化非质子溶剂或碳酸丙烯酯介质，从而允许高％水平的DHA而在储存和运输期间没有沉积。这类包含蜡的DHA分散组合物可以有利地用于各种基于个人护理和化妆品的终端应用以提供更好的结果。可以分散在这类组合物中的DHA的量是总组合物的约0.1wt.％-约60wt.％。
[0055] 包含DHA和至少一种非质子溶剂的防腐剂组合物可以用于水基和非水基终端应用,如化妆品、化妆用具产品、个人护理产品、口腔护理产品、皮肤护理产品、毛发护理产品、家用消费品和清洁产品、工业和机构清洁产品、消毒产品、接触镜、酶系制剂、伤口护理、卫生产品、农业组合物、纺织工业、涂料行业和/或洗衣产品。
[0056] 根据本申请的一重要实施方案，常规和非常规防腐剂或防腐剂系统可以用作额外的防腐剂与DHA的非质子溶液组合以获得广谱防腐剂，其中常规和非常规防腐剂的非限制性列表包括但不限于对羟基苯甲酸酯，(甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等)，氯苯甘醚(chlorophenisin)，苄醇，有机酸如山梨酸、苯甲酸、水杨酸和它们的盐，山梨酸
钾，苯甲酸钠，苯氧基乙醇，尿素醛(diazolidinyl urea)，咪唑烷基脲，羟甲基甘氨酸钠，乙内酰脲(DMDMH)，吡硫钠，辛二醇(capryl glycol)，苯基乙醇，苯基丙醇，乙基己基甘油，苄醇，三氯生，2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MIT)，1,2-苯并异噻唑啉-3-酮(BIT)，5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMIT)，2-辛基-4-异噻唑啉-3-酮(OIT)，3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯(IPBC)，吡硫锌(ZnPy)，季铵化合物等。常规和非常规防腐剂的量可以为约0.1wt.％-约
30wt.％，以及可选地基于各个组分的限制使用水平，并且还包括用于本申请的这类
杀生物剂或防腐剂的其他可能范围，为约0.1wt.％-约5wt.％、约6wt.％-约10wt.％、约11wt.％-约15wt.％、约16wt.％-约20wt.％、约21wt.％-约25wt.％、约26wt.％-约30wt.％。
[0057] 本申请的另一实施方案公开各种水基和非水基终端产品/组合物中采用的防腐剂组合物的量为总组合物的约0.01wt.％-约5.0wt.％。但是，各种终端应用中采用的组合物的其他可能范围可以包括但不限于约0.01wt.％-约0.1wt.％、约0.1wt.％-约0.5wt.％、约0.6wt.％-约1.0wt.％、约1.1wt.％-约1.5wt.％、约1.6wt.％-约2.0wt.％、约2.1wt.％-约
2.5wt.％、约2.6wt.％-约3.0wt.％、约3.1wt.％-约3.5wt.％、约3.6wt.％-约4.0wt.％、约
4.1wt.％-约4.5wt.％或约4.6wt.％-约5.0wt.％。
[0058] 本申请的一特定实施方案提供一种非水基终端组合物，其包含：(a)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)(b)约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂，(ii)约0.01wt.％-约5wt.％的至少一种抗氧化剂或自由基灭活剂，(iii)约0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，并且其中所述组合物是稳定的并且能够减少脱氢乙酸的黄变。
[0059] 本申请的另一非限制性实施方案采用至少一种抗氧化剂用于制备非水基终端组合物，其包括酚、受阻酚、烷基化单酚、烷基甲硫基
苯酚(alkylthiomethylphenols)、氢醌和烷基化氢醌、生育酚、羟基化硫代二苯基醚(hydroxylated thiodiphenyl ethers)、亚烷基双酚、O-、N-和S-苄基化合物、羟基苄基化
丙二酸酯(hydroxybenzylated malonates)、
芳香性羟基苄基化合物、三嗪化合物、苄基膦酸酯、酰基氨基酚、酯、受阻酯、叔丁醇(TBA)、苯并呋喃酮、羟胺、β-胡萝卜素、天然抗氧化剂、分离自草本植物的抗氧化剂、
植物提取物和/或绿支安抗氧化剂，并且其中用来制备非水基终端组合物的抗氧化剂能够溶解或混溶于所述组合物的非水性介质中。
[0060] 本申请的另一实施方案提供减少非水基终端组合物中存在的脱氢乙酸(DHA)黄变的方法，所述方法包括添加以下的均质混合物：(a)约0.1wt.％-99.9wt.％的至少一种非质子溶剂，(b)0.01wt.％-40.0wt.％的脱氢乙酸(DHA)，以及(c)约0.1wt.％-约5wt.％的至少一种抗氧化剂，(c)约0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，并且其中，所述非水基终端组合物可以包括化妆品、化妆用具产品、个人护理产品、口腔护理产品、皮肤护理产品、毛发护理产品、家用消费品和清洁产品、工业和机构清洁产品、消毒产品、接触镜、酶系制剂、伤口护理、卫生产品、农业组合物、纺织工业、涂料行业和/或洗衣产品。
[0061] 本申请的另一实施方案提供水基终端组合物，其包含：(i)防腐剂组合物，其包含：(a)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)，(b)约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂；(ii)约0.01wt.％-约5wt.％的至少一种抗氧化剂；以及(iii)约0.01wt.％-约
5wt.％的至少一种螯合剂或掩蔽剂，(iv)约0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，并且其中所述组合物是稳定的并且能够减少脱氢乙酸的黄变。
[0062] 本申请公开了减少水基终端组合物中存在的脱氢乙酸(DHA)黄变的方法，所述方法包括添加(a)约0.1wt.％-99.9wt.％的至少一种非质子溶剂，(b)0.1wt.％-40.0wt.％的脱氢乙酸(DHA)，(c)0.01wt.％-约5wt.％的至少一种
水溶性抗氧化剂，以及(d)0.01wt.％-约5wt.％的至少一种螯合剂或掩蔽剂，(e)约0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，并且其中，所述水基终端组合物的pH为约3.5-约8.5，并且其他合适的pH范围可以包括约3.5-约4.0、约4.1-约4.5、约4.6-约5.0、约5.1-约5.5、约5.6-约6.0、约6.1-约6.5、约6.6-约7.0、约7.1-约7.5、约7.6-约8.0。
[0063] 用于本申请的水基终端组合物的合适的螯合剂或掩蔽剂包括单独的多元醇、葡糖酸盐、山梨糖醇、甘露醇、碳酸盐、氧肟酸盐、儿茶酚、α-氨基
羧酸酯(α-amino carboxylates)、链烷醇胺、金属离子多价螯合剂、羟基羧酸、氨基羧酸、氨基
聚羧酸(amino polycarboxylic acids)、多胺、聚
磷酸盐、膦酸、冠醚、氨基酸、聚羧酸、环糊精、膦酸盐、聚
丙烯酸酯、聚合聚羧酸盐、缩聚磷酸盐、
乙二胺四乙酸(EDTA)、谷氨酸二乙酸(GLDA)、GLDA盐、GLDA衍生物、GLDA的四钠盐或铵盐、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、S,S-乙二胺二琥珀酸(EDDS)、乙二胺-N,N'-二琥珀酸、或者
碱金属盐或碱土金属盐、乙二胺-N,N-二琥珀酸三钠(EDDS)、(S,S)-亚氨基二琥珀酸、(S,R)-亚氨基二琥珀酸、羟基亚氨基二琥珀酸(HIDS)、甲基甘氨酸-N,N-二乙酸三钠、磺基丙氨酸-N,N-二乙酸、磺基丙氨酸-N-单乙酸、丙氨酸-N-单乙酸、β-丙氨酸-N,N-二乙酸、(S)-α-丙氨酸-N,N-二乙酸、N-[2-(3-羟基琥珀酰)]-L-丝氨酸、甲基亚氨基二乙酸和它们的碱金属盐、(S)-天冬氨酸-单乙酸、(S)-天冬氨酸-N,N-二乙酸、(S)-天冬氨酸单丙酸、N-(3-羟基琥珀酰)天冬氨酸、(S)-2-磺基甲基天冬氨酸、(S)-2-磺基乙基天冬氨酸、(S)-谷氨酸-N,N-二乙酸、(S)-2-磺基甲基谷氨酸、(S)-2-磺基乙基谷氨酸、(S)-丝氨酸-N,N-二乙酸、(S)-苯基丙氨酸-N,N-二乙酸和碱金属盐、聚氨基二琥珀酸、N-双-[2-(1,2-二羧基乙氧基)乙基]甘氨酸(BCA6)、N-双-[2-(1,2-二羧基乙氧基)乙基]天冬氨酸(BCA5)、N-双-[2-(1,2-二羧基乙氧基)乙基]甲基甘氨酸(MCBA5)、N-三-[(1,2-二羧基乙氧基)乙基]胺(TCA6)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、亚氨基二乙酸(IDA)、N-(2-乙酰氨基)亚氨基二乙酸(ADA)、羟基甲基亚氨基二乙酸、2-(2-羧基乙基氨基)琥珀酸(CEAA)、2-(2-羧基甲基氨基)琥珀酸(CMAA)、二亚乙基三胺-N,N”-二琥珀酸、三亚乙基四胺-N,N”'-二琥珀酸、1,6-六亚甲基二胺-N,N'-二琥珀酸、四亚乙基五胺-N,N””-二琥珀酸、
2-羟基亚丙基-1,3-二胺-N,N'-二琥珀酸、1,2-丙二胺-N,N'-二琥珀酸、1,3-丙二胺-N,N'-二琥珀酸、顺式-环己烷二胺-N,N'-二琥珀酸、反式-环己烷二胺-N,N'-二琥珀酸、亚乙基-双-(氧基亚乙基次氮基)-N,N'-二琥珀酸(Ethylene-bis-(oxyethylenenitrilo)-N,N'-disuccinic acid)、葡庚糖酸(Glucoheptanoic acid)、乳酸亚铁、甘氨酸亚铁、
柠檬酸亚铁、乙酸亚铁、富
马酸亚铁、琥珀酸亚铁、糖酸亚铁(ferrous sacchrate)、
酒石酸亚铁、甘氨酸
硫酸亚铁、谷氨酸亚铁、葡糖酸亚铁、
抗坏血酸亚铁、多聚麦芽糖亚铁、柠檬酸三甲酯/柠檬酸、柠檬酸锌/柠檬酸、或它们的组合。添加期望量的螯合剂不仅减少DHA的黄变，而且其还可以为DHA组合物带来协同效应，因此减少为了提供期望的保护而需要的DHA的量。
[0064] 所述水基终端组合物包含：(i)防腐剂组合物，其包含：(a)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)，(b)约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂；(ii)约0.01wt.％-约5wt.％的至少一种抗氧化剂；(iii)约0.01wt.％-约5wt.％的至少一种螯合剂或掩蔽剂；(iv)约0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。终端应用或组合物的非限制性实例包括化妆品、化妆用具产品、个人护理产品、口腔护理产品、皮肤护理产品、毛发护理产品、家用消费品和清洁产品、工业和机构清洁产品、消毒产品、接触镜、酶系制剂、伤口护理、卫生产品、农业组合物、纺织工业、涂料行业和洗衣产品。
[0065] 用于水基终端组合物的合适的抗氧化剂或自由基灭活剂包括在水性介质中可溶的抗氧化剂和/或自由基灭活剂，并且可以选自酚、受阻酚、烷基化单酚、烷基甲硫基苯酚、氢醌和烷基化氢醌、生育酚、羟基化硫代二苯基醚、亚烷基双酚、O-、N-和S-苄基化合物、羟基苄基化丙二酸酯、芳香性羟基苄基化合物、三嗪化合物、苄基膦酸酯、酰基氨基酚、酯、受阻酯、叔丁醇(TBA)、苯并呋喃酮、羟胺、β-胡萝卜素和/或绿支安抗氧化剂。
[0066] 根据本申请的一实施方案，提供制备非水基终端组合物的方法，所述方法包括制备以下的溶液：(i)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)；(ii)约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂；(iii)0.01wt.％-约5.0wt.％的至少一种非水溶性或混溶的抗氧化剂和/或自由基灭活剂；以及(iv)约0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
[0067] 根据本申请的另一实施方案，提供制备水基终端组合物的方法，所述方法包括制备以下的溶液：(i)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)；(ii)约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂；(iii)约0.01wt.％-约5.0wt.％的至少一种掩蔽剂或螯合剂；(iv)0.01wt.％-约5.0wt.％的至少一种水溶性或混溶的抗氧化剂；以及(iv)约
0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
[0068] 在本申请的一可选实施方案中，考虑在添加规定量的上述防腐剂组合物，即(i)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)；以及(ii)约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂之后，单独将所述抗氧化剂和/或螯合剂单独掺入所述终端应用或组合物。非限制性的终端组合物包括化妆品、化妆用具产品、个人护理产品、口腔护理产品、皮肤护理产品、毛发护理产品、家用消费品和清洁产品、工业和机构清洁产品、消毒产品、接触镜、酶系制剂、伤口护理、卫生产品、农业组合物、纺织工业、涂料行业和洗衣产品。此外，终端应用的pH范围一般为约3.5-约8.5。
[0069] 根据本申请的另一实施方案，考虑将期望量的抗氧化剂或螯合剂以额外的量单独掺入各种终端产品以减少或消除DHA黄变的存在(若有的话)，并且其中，在添加包含(a)约0.1wt.％-约40wt.％的脱氢乙酸(DHA)，(b)约0.1wt.％-约99.9wt.％的至少一种非质子溶剂；(ii)约0.01wt.％-约5wt.％的至少一种抗氧化剂；(iii)约0.01wt.％-约5wt.％的至少一种螯合剂或掩蔽剂；以及(iv)约0.5wt.％-约2.0wt.％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的防腐剂组合物之后掺入这样额外的量。
[0070] 按照本申请的另一实施方案，提供包含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的防腐剂组合物。这样的组合物能够承受热和冷暴露，其中所述组合物在室温下稳定至少2年，或者在温度每24小时从50℃至-24℃循环时稳定至少5个冻/融循环，或者在约50℃下稳定至少4周。掺入PVP防止在冻融循环过程中在温度回到室温之后形成沉淀。可以采用不同商业等级的PVP，包括但不限于PVP K-30、PVP K-90、PVP K120等。掺入的PVP的百分比水平为总组合物的约0.1wt.％-约2wt.％。
[0071] 此外，通过以下实施例详细说明本发明的某些方面。本文中给出实施例用于说明本发明且不是为了限制本发明。
[0072] 实施例1:具有添加剂的防腐剂系统的评价
[0073] 为了建立与DHA联合的添加剂的影响，进行了几个实验，并且发现通过掺入防腐剂系统中或通过添加至终产物，添加剂，诸如螯合剂、自由基灭活剂、抗氧化剂、自由基灭活剂和粘合剂如PVP，使防腐剂系统更有效。
[0074] 表1:DHA的黄变指数测量
[0075]
[0076] 通过Hunter
色温计(color meter)测量的黄变指数证实与没有碳酸丙烯酯的DHA相比，将DHA溶解于碳酸丙烯酯(PC)中有明显益处。此外，观察到与DHA的碳酸丙烯酯溶液相比，添加螯合剂(如EDTA三钠和EDTA二钠)能够减少或减缓DHA的黄变。
[0077] 实施例2:防腐剂效力测试(PET)
[0078] 在对DHA的碳酸丙烯酯溶液表现出良好的显著结果和协同效应的5种不同终端产品中进行了PET(防腐剂效力测试)和稳定性研究，样品包括(i)商业晚霜，(ii)Prolipid层状组合物，(iii)干性青春精华素(Stemness Youth Serum)，(iv)标准筛选乳液，以及(v)婴儿湿巾液。下文详细描述了包含溶解DHA的碳酸丙烯酯的这些终端产品的详细组成。PET的结果在表1a中提供，并且其清楚地证实采用各种量的稳定化的DHA和粉末DHA的差异以及它们杀灭细菌、真菌或酵母的能力。
[0079] 表1a:各种终端产品中的防腐剂效力测试
[0080]
[0081] 实施例3:包含DHA的碳酸丙烯酯溶液的商业晚霜组合物：
[0082]
[0083] 实施例4:包含DHA的碳酸丙烯酯溶液的Prolipid层状组合物：
[0084]
[0085] 实施例4A:包含DHA的碳酸丙烯酯溶液的洗发水组合物：
[0086]
[0087] 表1b:层状Prolipid制剂中的防腐剂效力测试
[0088]
[0089] ·如果在28天之后进行的重新接种上看到任何恢复，则在第35天进行效力测试。
[0090] 表1c:洗发水组合物中的防腐剂效力测试
[0091]
[0092] ·如果在28天之后进行的重新接种上看到任何恢复，则在第35天进行效力测试。
[0093] 实施例5:包含DHA的碳酸丙烯酯溶液的干性青春精华素组合物：
[0094]
[0095] 实施例6:包含DHA的碳酸丙烯酯溶液的标准筛选乳液组合物：
[0096]
[0097] 实施例7:包含DHA的碳酸丙烯酯溶液的婴儿湿巾液组合物：
[0098]
[0099] 实施例8:制备DHA在PC中的溶液的方法：
[0100] 将脱氢乙酸(DHA)和碳酸丙烯酯(PC)在烧杯中用磁力搅拌器混合在一起，然后添加至少一种适当的添加剂如谷氨酸N,N-二乙酸四钠盐(GL-PD-S)、丁羟甲苯(BHT)、叔丁醇(TBA)以形成包含DHA、PC和至少一种添加剂的均质溶液，并且其中，这些制剂的pH从约6至约7变化。表2中公开了各种制剂。
[0101] 表2:具有添加剂的实验组合物：
[0102]
[0103] 实施例9:防腐剂系统的稳定性研究
[0104] 本申请的表3证明在一个月中观察的实施例8和表2中描述的防腐剂样品的颜色稳定性。
[0105] 表3:实施例8的防腐剂组合物的颜色稳定性测试
[0106]
[0107] 实施例10:实验制剂中DHA的定量
[0108] 通过HPLC方法进行DHA定量研究，其证实防腐剂系统即使在50℃下热老化1个月后仍然稳定。相应的HPLC结构在表4中示出。
[0109] 表4：实施例8的组合物中DHA定量的HPLC结果
[0110]
[0111] 实施例11:终端产品婴儿湿巾液中DHA的定量
[0112] 表5显示即使在50℃下热老化1个月之后，与没有添加剂的样品相比，诸如PC、螯合剂和自由基灭活剂的添加剂更加帮助保持DHA水平。
[0113] 表5：婴儿湿巾液中DHA定量的HPLC结果
[0114]
[0115] 实施例12:冻融稳定性研究
[0116] 进行冻融稳定性研究以评价防腐剂组合物的稳定性，并且在评价的过程中，在样品返回室温后观察到微量沉淀。该沉淀需要更长时间以回到溶液中。为了解决这个问题，尝试了几种防冻剂产品，并且发现PVP(聚乙烯吡咯烷酮)有效改善这些组合物的冻融过程和解冻时间。
[0117] 在4℃下，在有或无PVP的情况下，对包含碳酸丙烯酯和DHA的组合物进行冻融实验。观察到使用PVP K-30(样品#12580-17-2中)和K-90(样品#12580-17-3中)在冻融稳定性方面非常有帮助。特别地，与K-30在室温下返回其正常状态的解冻时间相比，PVP K-90表现出10-15分钟内的更快解冻时间。在-25℃下对组合物记录了相似的观察。
[0118] 此外，进行1％PVP K-90与约0.1％-约0.7％的较低百分比的比较研究以优化PVP K-90的水平。观察到0.7％K-90在4℃下进行的冻融实验中具有相对于其他浓度提高的稳定性，但是，0.7％K-90浓度对-25℃的冻融条件不足，因此，在-25℃下的组合物需要较长时间返回其正常状态，即大约24hr。发现1％K-90浓度对于在-25℃下进行的冻融实验是非常适宜的％。
[0119] 从上文详述的实验以及图1和2，清楚表明1％PVP K-90对于在4℃和-25℃下进行的冻融稳定性研究是最好的。
[0120] 此外，具有1％PVP K-90、有和无添加剂、有和无PVP的防腐剂组合物系统的比较研究在进行中，额外地，评价了有和无添加剂的1％PVPK-120、有和无PVP的相似类型的实验并发现比PVP K-120好。
[0121] 实施例13:包含PVP的防腐剂组合物(PC中8％DHA)
[0122] 通过在碳酸丙烯酯中混合8％的DHA形成溶液来制备防腐剂组合物，然后将需要量的特定等级的PVP添加至溶液中形成均质系统用于进一步评价。表6中详细公开了各种组合物。
[0123] 表6：包含在PC和PVP中的DHA(8％)的组合物
[0124]
[0125] 实施例14:碳酸丙烯酯和DHA对抗微生物剂的协同活性
[0126] 通过如下测试广泛浓度和比例的化合物来证明双组分组合物的协同效应：
[0127] 胰蛋白酶大豆肉汤(TSB)培养基用于细菌评价，并且酵母麦芽肉汤(YMB)用于真菌评价。将化合物DHA或非质子溶剂添加至培养基并系列稀释。系列稀释培养基之后，添加100μl的测试细菌或真菌的悬浮液至约106-5CFU/ml的终浓度。对于细菌，将接种的培养基在32℃下温育2-5天，或者对于真菌，将接种的培养基在28℃下温育3–7天。
[0128] 将抑制可见生长的最低浓度的每种化合物或混合物当作最小抑制浓度(MIC)。将MIC当作活性的终点。将化合物A(DHA)和化合物B(非质子溶剂)的混合物的终点与单独纯活性成分的终点进行比较。
[0129] 通过Kull A.C.；Eisman,P.C.；Sylwestrowicz,H.D.and Mayer,R.L.1961.Applied Microbiology,9:538–541描述的通常使用和接受的方法确定协同效应，利用以下比例确定：
[0130] Qa/QA+Qb/QB＝协同
[0131] 其中：
[0132] -QA是单独作用的化合物A的浓度(以PPM计)，其产生终点。
[0133] -Qa是在混合物中的化合物A的浓度(以PPM计)，其产生终点。
[0134] -QB是单独作用的化合物B的浓度(以PPM计)，其产生终点。
[0135] -Qb是在混合物中的化合物B的浓度(以PPM计)，其产生终点。
[0136] 当Qa/QA+Qb/QB的总和大于1时，表示拮抗。当总和等于1时，表示相加，而当少于1时，表明协同。
[0137] 表明DHA和不同非质子溶剂之间的协同效应的结果在表7中示出。该表示出：(1)测试生物体(细菌或真菌)，(2)单独化合物A(QA)、混合物中的化合物A(Qa)、单独化合物B(QB)、混合物中的化合物B(Qb)的通过MIC测量的以PPM计的终点活性，(3)特定组合中DHA(化合物A)比溶剂(化合物B)的ppm比例以及基于式SI＝Qa/QA+Qb/QB的协同指数(SI)。
[0138] 此外，从表7a的结果表明DHA的协同效应，并且其中，包含非质子溶剂的各种DHA稳定化组合物证实DHA抗微生物特别是真菌菌株的显著增强效应。此外，观察到组合物的
粘度在期望水平的范围内，这对组合物的稳定性至关重要，其中粘度测试是利用Brookfield DVe RV TC spindle#93@10rpm进行的。对所有组合均看到0.5％稳定化的DHA对效力的增强或协同效应。发现0.7％稳定化的DHA与1％辛二醇的混合物或组合即使在较高的pH～6.7下仍非常有效，然而DHA在高于pH 5.8时无效。
[0139] 表7：DHA与非质子溶剂针对抗微生物剂的协同研究
[0140]
[0141] 表7a：包含稳定化的DHA与非质子溶剂的防晒组合物的粘度
[0142]
[0143] 上表表明包含碳酸丙烯酯和DHA的组合物对细菌和真菌生物体的协同效应。
[0144] 实施例15:用于制备不黄变的DHA组合物的溶剂的选择
[0145] 为了选择合适的溶剂用于制备不黄变的DHA组合物，选择不同可能的质子溶剂、非质子溶剂，并单独以及作为它们合适的混合物进行评价。
[0146] 在非质子溶剂的情况下，基于其与终端产品中存在的其他成分的相容性进行选择。此外，在选择用于制备本申请的不黄变/减少黄变的DHA组合物的优选非质子溶剂时，也将监管要求作为重要元素。通过在它们相应的非质子溶剂中分散或溶解DHA，可以将高含量的DHA引入溶剂中。此外，确定了在某些情况下，终端产品中较高的金属含量增加DHA的黄变，因此，对溶剂加以选择用于本申请。表8中公开了选择的各种溶剂。
[0147] 表8：所评价的用于开发不黄变的DHA组合物的非质子溶剂的列表
[0148]
[0149]
[0150] 此外，申请人已评价了各种质子溶剂以理解它们产生不黄变/减少黄变的DHA组合物以用于性质上为水性的各种终端产品的能力。
[0151] DHA在质子溶剂中的黄变取决于它在其中的
溶解度，并且其中，从约pH 5至pH 7注意到强黄变，然后黄变在低和高pH下以渐近方式减少。当非质子芳香化合物与DHA一起存在时，DHA的黄变大幅增加，这是由于DHA和包含芳香化合物的这类溶剂之间的自由基偶联。表9中列出了所评价的质子溶剂。还评价了许多酯，并且发现这些酯在许多溶剂中显示非常低的溶解度，并且在溶解度相对好的许多溶剂中强黄变。
[0152] 此外，通过将终端产品暴露于光和热持续一段期望的时间来通过实验证明黄变的机制。DHA的分解在室温(RT)和高温下很低，其中，少量DHA分解形成自由基并且它们自身偶联以形成痕量高的ε发色产物，并且如果芳香非质子溶剂与DHA一起存在于溶液中，它们偶联形成在水中具有高强度黄色的较长发色团。我们详细的发色产物评价显示无论引起黄变的是热或光，偶联的产物相同，但是，发色团杂质的浓度根据热或光的暴露水平而变化。
[0153] 表9：作为DHA组合物的溶剂进行评价的质子极性溶剂的列表
[0154]
[0155] 实施例16:在碳酸丙烯酯中的60％DHA分散液
[0156]
[0157] 实施例17:在碳酸丙烯酯中的50％DHA分散液
[0158]
[0159] 实施例18:消费品中黄变的评价：
[0160] 使各种可商购的消费品接受评价以发现它们在50℃下承受一个月的储存的能力。从表10清楚地看出，消费品在pH 5.5和7.0之间显示最大黄变，并且随着pH的增加或减少大幅减少。此外，黄变随着消费组合物中存在的水含量以及DHA在所述消费组合物这样的水含量中的溶解的增加而增加。
[0161] 表10：消费品中黄变效应的研究
[0162]
[0163] 表10a：消费品中黄变效应的研究
[0164]
[0165] *表2的组合物#202-5用于测试消费品。
[0166] 实施例19：皮肤护理乳液的流变测量
[0167] 设计流变测试以利用Brookfield
粘度计测定皮肤护理乳液的粘度。在基于层状凝胶和非离子乳液的组合物中进行流变实验。证明本申请的稳定化的DHA能够维持组合物的粘度与对照读数一样，然而，对于包含DHA、苯甲酸和苯氧基乙醇的混合物，粘度测量值显著减少。实验结果在图3中适当示出。
[0168] 虽然已参考某些优选实施方案详细描述了本发明，但是应当理解本发明并不限于那些确切的实施方案。相反，鉴于本公开，许多
修改和变化会对本领域技术人员展示它们自己而不背离本发明的范围和精神。
