技术领域
[0001] 本
发明属于
植物有效活性成分提取技术领域,尤其是涉及一种从樟树中制备山奈酚-3-O- 芸香糖苷的方法。
背景技术
[0002] 樟树(Cinnamomum camphora(L.)Presl.)又名香樟、乌樟、樟木、芳樟等,是樟科 (Lauraceae)樟属(Cinnamomum)常绿高大阔叶乔木,又细分为香樟(C.camphora)、油樟(C.longepaniculatum)、黄樟(C.parthenoxylon)、尾叶樟(C.caudiferum)、细毛樟(C. tenuipilum)、阔叶樟(C.platyphyllum)、毛叶樟(C.mollifolium)以及菲律宾樟(C. philippinense)等多个品种,樟树是我国重要的经济树种和绿化树种,是江南四大名木之一,被誉为“江南宝树”。中国台湾、海南、福建、江西、广东、广西、湖北、湖南、四川、重庆、
云南、贵州、浙江等省都有分布,目前,对樟树的开发利用中,很重要的一方面是对它的芳香资源的开发利用,主要是根据其根、茎、叶、果实等部位含有丰富精油,国内外学者做过大量研究分析,其成分多的有几百种,少的也有十几种,复杂的樟树叶精油中有大约300种的化学成分已被确定。芳樟醇、黄樟油素、樟脑、龙脑、橙花叔醇、异橙花叔醇、柠檬
醛、香叶醇等化合物是樟树叶精油的主要成分。
[0003] 目前,樟树挥发油多通过
水蒸气蒸馏法从樟枝叶中提取,途中产生大量剩余物:樟树去油根枝叶。这些剩余物要么晾干后用作
锅炉燃料,要么还田作
肥料,资源利用率不高。关于天然产物剩余物相关利用的文献研究也有报道,但对于樟树去油根枝叶中的单一物质的制备尤其是山奈酚-3-O-芸香糖苷的制备鲜有文献报道。
发明内容
[0004] 本发明的目的提供一种从樟树中制备山奈酚-3-O-芸香糖苷的方法,该方法是以樟科樟属的樟树为原料,该原料为香精香料公司提取挥发油的剩余物,采用超声循环提取、
有机溶剂萃取、柱色谱分离以及结晶等方式得到,所得山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度达到98.50%。
[0005] 为实现上述目的,本发明所采取的技术方案为;
[0006] 一种从樟树中制备山奈酚-3-O-芸香糖苷的方法,其特征是:樟树原料
粉碎,经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取进行柱色谱分离,收集特征流份,减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用结晶方式得到山奈酚-3-O-芸香糖苷。
[0007] 更特别的是,结晶溶剂采用正丁醇、石油醚、氯仿、
乙醇、甲醇、乙酸乙酯或丙
酮中的两种或三种的混合物。
[0008] 更特别的是,特征流份的收集先采用10%-30%甲醇洗脱去除杂质,然后收集60%-90%甲醇的洗脱流份经TLC检测。山奈酚-3-O-芸香糖苷属于黄酮苷类物质,选用的色谱填料和对应的洗脱剂一般在甲醇比例较大时会流出,TLC检测后经显色为黄色说明为含有山奈酚-3-O-芸香糖苷的黄酮类物质。
[0009] 更特别的是,所述樟树原料为去油樟树根、茎和叶中的一种或几种。
[0010] 更特别的是,提取方式采用超声循环提取,其中提取
温度在30℃-60℃,超声功率为 600w-1000w,搅拌速度为100-200r/min;
[0011] 更特别的是,提取溶剂采用40%-100%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为1:5-1:20(g/mL)。
[0012] 更特别的是,萃取溶剂采用石油醚萃取
脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取。传统的纯化方式提取过后直接上柱,一方面分离效果达不到预期的效果,另一方面会增加柱色谱填料的负载。采用先萃取再上柱的方式,对于特征化合物的分离纯化效果效果更显著。
[0013] 更特别的是,柱色谱分离所用色谱填料为大孔
树脂、聚酰胺树脂、MIC、葡聚糖凝胶和反相ODS中的一种或两种以上组合。本发明所用柱色谱填料选择一些能够重复利用的反向或者
吸附填料,舍弃传统的正向
硅胶柱色谱。
[0014] 由于采用如上所述的技术方案,本发明具有如下优越性:
[0015] 以去油樟树根枝叶为原料,解决樟树精油加工目前存在的资源浪费、污染等问题,采用正丁醇、石油醚、氯仿、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或丙酮作为结晶溶剂,所选用的结晶的溶剂以及比例是本发明的关键,结晶过程中采用常温减压的方式。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷得率为1~3%,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度达到98.50%,另外本方法操作简单,过程重复性高,所选用
试剂皆可回收、重复利用,同时去油樟树根枝叶原料丰富,适合大规模生产。
附图说明
[0016] 图1是本发明山奈酚-3-O-芸香糖苷质谱图。
[0017] 图2是本发明山奈酚-3-O-芸香糖苷核磁氢谱图。
[0018] 图3是本发明山奈酚-3-O-芸香糖苷核磁
碳谱图。
具体实施方式
[0019] 参照以下
实施例可以对本发明作进一步详细说明;但是,以下实施例仅仅是例证,本发明并不局限于这些实施例。
[0020] 一种从樟树中制备山奈酚-3-O-芸香糖苷的方法,包括以下步骤:
[0021] 樟树枝粉碎经超声循环提取,提取溶剂采用40%-100%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为1:5-1:20(g/mL),提取温度在30℃-60℃,超声功率为600w-1000w,搅拌速度为100-200r/min;经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取,萃取溶剂先采用石油醚萃取脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取进行柱色谱分离,柱色谱分离所用色谱填料为大孔树脂、聚酰胺树脂、MIC、葡聚糖凝胶和反相ODS中的一种或两种以上组合。先采用10%-
30%甲醇洗脱去除杂质,然后收集60%-90%甲醇的洗脱流份经TLC检测为黄色,合并相同流份即为所要的特征流份。减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用结晶方式得到山奈酚-3-O-芸香糖苷。结晶溶剂采用正丁醇、石油醚、氯仿、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或丙酮中的两种或三种的混合物。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷得率为1~3%,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度为
98.50%~99.95%。
[0022] 实施例1
[0023] 取樟树枝粉500g,经超声循环提取,提取溶剂采用50%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为 1:10(g/mL),提取温度在40℃,超声功率为600w,搅拌速度为100r/min;经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取,萃取溶剂先采用石油醚萃取脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取进行柱色谱分离,柱色谱分离所用色谱填料为大孔树脂。特征流份的收集,先采用20%甲醇洗脱去除杂质,然后收集60%甲醇的洗脱流份经TLC检测为黄色斑点。减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用乙酸乙酯:丙酮(3:1=v/v)结晶方式得到山奈酚-3-O-芸香糖苷。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷为5.43g,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度为98.72%。山奈酚-3-O- 芸香糖苷的质谱、
核磁共振氢谱和碳谱如图1、2和3所示。
[0024] 实施例2
[0025] 取樟树根枝叶粉500g,经超声循环提取,提取溶剂采用60%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为1:15(g/mL),提取温度在50℃,超声功率为700w,搅拌速度为150r/min;经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取,萃取溶剂先采用石油醚萃取脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取进行柱色谱分离,柱色谱分离所用色谱填料为聚酰胺树脂。特征流份的收集先采用30%甲醇洗脱去除杂质,然后收集70%甲醇的洗脱流份经TLC检测为黄色斑点。减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用乙酸乙酯:甲醇(1:1=v/v)结晶方式得到山奈酚-3-O- 芸香糖苷。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷为5.98g,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度为98.62%。
[0026] 实施例3
[0027] 取樟树叶粉500g,经超声循环提取,提取溶剂采用50%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为1:20(g/mL),提取温度在60℃,超声功率为600w,搅拌速度为200r/min;经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取,萃取溶剂先采用石油醚萃取脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取进行柱色谱分离,柱色谱分离所用色谱填料为大孔树脂。特征流份的收集先采用20%甲醇洗脱去除杂质,然后收集80%甲醇的洗脱流份经TLC检测为黄色斑点。减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用乙酸乙酯:甲醇:丙酮(3:1:1=v/v)结晶方式得到山奈酚-3-O- 芸香糖苷。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷为5.88g,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度为97.88%。
[0028] 实施例4
[0029] 取樟树根粉500g,经超声循环提取,提取溶剂采用50%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为 1:10(g/mL),提取温度在60℃,超声功率为600w,搅拌速度为180r/min;经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取,萃取溶剂先采用石油醚萃取脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取进行柱色谱分离,柱色谱分离所用色谱填料为大孔树脂。特征流份的收集先采用20%甲醇洗脱去除杂质,然后收集75%甲醇的洗脱流份经TLC检测为黄色斑点。减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用氯仿:乙酸乙酯:丙酮:甲醇(1:3:1:1=v/v/v/v)结晶方式得到山奈酚-3-O-芸香糖苷。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷为5.41g,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度为 99.12%。
[0030] 实施例5
[0031] 取樟树枝粉500g,经超声循环提取,提取溶剂采用50%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为 1:10(g/mL),提取温度在55℃,超声功率为600w,搅拌速度为200r/min;经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取,萃取溶剂先采用石油醚萃取脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取进行柱色谱分离,柱色谱分离所用色谱填料为大孔树脂。特征流份的收集先采用20%甲醇洗脱去除杂质,然后收集85%甲醇的洗脱流份经TLC检测为黄色斑点。减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用石油醚:氯仿:丙酮(2:3:1=v/v/v)结晶方式得到山奈酚-3-O- 芸香糖苷。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷为5.87g,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度为
97.62%。
[0032] 实施例5
[0033] 取樟树根枝粉500g,经超声循环提取,提取溶剂采用60%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为1:20(g/mL),提取温度在50℃,超声功率为600w,搅拌速度为160r/min;经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取,萃取溶剂先采用石油醚萃取脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取进行柱色谱分离,柱色谱分离所用色谱填料为大孔树脂。特征流份的收集先采用20%甲醇洗脱去除杂质,然后收集90%甲醇的洗脱流份经TLC检测为黄色斑点。减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用正丁醇:甲醇(3:1=v/v)结晶方式得到山奈酚-3-O-芸香糖苷。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷为4.58g,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度为95.32%。
[0034] 实施例6
[0035] 取樟树枝叶粉500g,经超声循环提取,提取溶剂采用60%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为1:20(g/mL),提取温度在40℃,超声功率为600w,搅拌速度为160r/min;经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取,萃取溶剂先采用石油醚萃取脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取进行柱色谱分离,柱色谱分离所用色谱填料为大孔树脂。特征流份的收集先采用20%甲醇洗脱去除杂质,然后收集70%甲醇的洗脱流份经TLC检测为黄色斑点。减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用氯仿:乙醇(4:1=v/v)结晶方式得到山奈酚-3-O-芸香糖苷。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷为3.24g,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度为94.65%。
[0036] 对比例7
[0037] 取樟树枝粉500g,经超声循环提取,提取溶剂采用60%(v/v)的乙醇水溶液,料液比为 1:20(g/mL),提取温度在40℃,超声功率为600w,搅拌速度为160r/min;经提取、减压浓缩成粗浸膏,粗浸膏用水打散后经溶剂萃取,萃取溶剂先采用石油醚萃取脱脂,然后采用乙酸乙酯进行萃取进行柱色谱分离,柱色谱分离所用色谱填料为大孔树脂。特征流份的收集先采用20%甲醇洗脱去除杂质,然后收集70%甲醇的洗脱流份经TLC检测为黄色斑点。减压浓缩,得到粗品,粗品最后采用二氯甲烷:甲醇:水(1:4:1=v/v/v)结晶方式得到山奈酚-3-O- 芸香糖苷。所得山奈酚-3-O-芸香糖苷为:0.12g,山奈酚-3-O-芸香糖苷纯度为10%。
[0038] 本发明以去油樟树根枝叶为原料,采用超声循环提取、
有机溶剂萃取、柱色谱分离以及结晶等方式得到山奈酚-3-O-芸香糖苷,所得山奈酚-3-O-芸香糖苷得率为1~3%,山奈酚-3-O- 芸香糖苷纯度为98.50%~99.95%;结晶溶剂采用正丁醇、石油醚、氯仿、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或丙酮中的两种或三种的混合物,相比二氯甲烷:甲醇:水作为结晶溶剂,所得产品的纯度有很大差别,解决樟树精油加工目前存在的资源浪费、污染等问题。同时对去油枝叶等剩余物的有效利用尤其是山奈酚-3-O-芸香糖苷的产品开发提供了成熟的技术路线和工艺参数。
[0039] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何
修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。