马铃薯核酸提取装置及方法
专利汇可以提供马铃薯核酸提取装置及方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了 马 铃薯核酸提取装置，其结构包括震荡 研磨 器和多级离心管。震荡研磨器结构包括：安装在顶盖内部中央得的 电机 ，电机的 转轴 连接 转子 ，转子外周设有放置研磨管的孔，顶盖放置在液氮槽内，并卡在突圈上， 吸盘 安装在液氮槽， 钢 珠放置在研磨管内。多级离心管结构包括：收集管内放置 吸附 柱，吸附柱内设有一圈卡凸，附柱设有密封盖，洗涤液柱放入附柱内卡凸上方，附柱内部下方设有滤网。本发明还提供了结合上述装置改进的核酸提取方法。本发明液氮不 接触 样品，避免污染，液氮挥发少。滤网直接让入离心管中溶解核酸，能够最大限度的减少核酸损失。提取过程减少了离心的次数，简化了实验过程，减少了劳动强度。，下面是马铃薯核酸提取装置及方法专利的具体信息内容。
1.马铃薯核酸提取装置，其特征在于，所述核酸提取装置包括震荡研磨器和多级离心管，震荡研磨器结构包括：顶盖的顶部设有把手，电机安装在顶盖内部中央，电机的转轴连接转子，转子外周设有放置研磨管的孔，顶盖放置在液氮槽内，并卡在突圈上，吸盘安装在液氮槽，钢珠放置在研磨管内；多级离心管结构包括：收集管内放置吸附柱，吸附柱内设有一圈卡凸，附柱设有密封盖，洗涤液柱放入附柱内卡凸上方，附柱内部下方设有滤网，洗涤液柱内有橡皮塞的底面上设有小孔。
2.根据权利要求1所述的马铃薯核酸提取装置，其特征在于，所述顶盖为圆形，中空，通过螺丝可以拆卸上表面，电机的转轴通过设有橡皮圈的轴承穿过顶盖下表面，转子为一圆盘，电机的转轴连接转子中心以外1-15cm，形成偏心转子。
3.根据权利要求1所述的马铃薯核酸提取装置，其特征在于，所述转子上放置研磨管的孔内设有弹簧，能够卡住研磨管，液氮槽为圆形桶装，由后1-5cm钢材制成，厚重而使电机转动时稳定，液氮槽还可以设置螺栓，顶盖对应螺栓位置设有一圈凹槽，向内拧紧固定顶盖，避免转动时顶盖脱落。
4.根据权利要求1所述的马铃薯核酸提取装置，其特征在于，所述吸盘为橡胶制成，碗状，可以吸附在实验台或地面上，减少装置振动，研磨管为金属制成，大小和形状如2mL离心管，由螺纹连接的两部分组成，内部空间呈圆形弧面；钢珠分为两种，适用于不同的试验方案，一种是表面光滑的普通普通钢柱，只具有研磨功能；另一种是设有许多钢珠孔，珠孔内填塞核酸吸附材料，能够在研磨的同时吸附核酸。
5.根据权利要求1所述的马铃薯核酸提取装置，其特征在于，所述吸附柱外檐直径大于收集管直径，而避免落入收集管内；滤网为圆台形，外周为一圈橡皮，中央为核酸吸附材料制成的滤网，滤网能够与吸附柱密封，并通过镊子能够取出。
6.根据权利要求1所述的马铃薯核酸提取装置，其特征在于，所述洗涤液柱用于储存洗涤液，内部设有隔板，隔板中央设有圆形孔，圆台形橡皮塞堵住小孔；橡皮塞设有不同规格，在较小离心力的作用下橡皮塞堵住小孔，在较大离心力的作用下橡皮塞从小孔脱出，落在底面上，装在洗涤液柱内的液体流出进入吸附柱。
7.一种DNA提取方法，包括如下步骤：
（1）将约300mg样品加入研磨管中，放入3-6粒钢珠，拧紧研磨管，放入转子的孔里；
（2）液氮槽加入液氮，顶盖3放入其中，拧紧螺栓；液氮高度低于转子5的高度，即不淹没转子；
（3）启动电机，转子偏心转动，研磨管内的钢珠往复运动进行研磨，根据样品种类不同，调节研磨时间，植物样品应当适当延长研磨时间；
（4）研磨结束后，取出研磨管，拧开并加入400 ul 2% CTAB抽提缓冲液，上下颠倒数次后加入400 ul 氯仿-异戊醇（24：1），再上下颠倒数次，放入离心机中12000 rpm离心5 min；
（5）吸附柱放入收集管中，吸取离心后的上清液300ul加入吸附柱内，再加入300 ul异丙醇，盖上吸附柱的密封盖上下颠倒数次；再将洗涤液柱放入吸附柱中，加入400 ul 75%乙醇，放入离心机中8000 rpm离心5 min后，离心机不开盖紧接着再12000 rpm离心5 min，加入异丙醇后DNA沉淀，8000 rpm离心去除异丙醇，12000 rpm离心使橡皮塞脱出，75%乙醇进入吸附柱，对DNA进行漂洗；
（6）用镊子将滤网夹出，直接放入另一普通离心管内，超净工作台风干2min，加入50 ul水震荡溶解DNA，后续实验取用DNA溶液时，直接从离心管中吸取，无需将滤网取出。
8.一种RNA提取方法，包括如下步骤：
（1）提取前多级离心管、普通离心管、镊子等均用DEPC水溶液浸泡，并121℃高温灭活
30min；
（2）将约300mg样品加入研磨管中，放入3-6粒钢珠，拧紧研磨管，放入转子的孔里；
（3）液氮槽加入液氮，顶盖放入其中，拧紧螺栓，液氮高度低于转子的高度，即不淹没转子；
（4）启动电机，转子偏心转动，研磨管内的钢珠往复运动进行研磨，根据样品种类不同，调节研磨时间，植物样品应当适当延长研磨时间；
（5）研磨结束后，取出研磨管，拧开并加入300 ul Trizol，上下颠倒数次后加入300 ul氯仿，振荡混匀后室温放置15min，放入离心机中12000 rpm离心5 min；
（6）吸附柱放入收集管中，吸取离心后的上清液300ul加入吸附柱内，再加入300 ul异丙醇，盖上吸附柱的密封盖上下颠倒数次；再将洗涤液柱放入吸附柱中，加入400 ul 75%乙醇，放入离心机中8000 rpm离心5 min后，离心机不开盖紧接着再12000 rpm离心5 min，加入异丙醇后RNA沉淀，8000 rpm离心去除异丙醇，12000 rpm离心使橡皮塞脱出，75%乙醇进入吸附柱，对RNA进行漂洗；
（7）用镊子将滤网夹出，直接放入另一普通离心管内，超净工作台风干2min，加入50 ul水震荡溶解RNA，后续实验取用RNA溶液时，直接从离心管中吸取，无需将滤网取出。
9.一种DNA提取方法，包括如下步骤：
（1）按如下比例混合：纸纤维：3％～15％，硅粉：3％～20％，羧甲基纤维素：5％～15％，余量为水；上述材料加热溶解形成混合物，然后搅拌匀浆；将含有小孔的钢珠让入混合物中搅拌30min，取出放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，得到含核酸吸附材料的钢珠；
（2）将约300mg样品加入研磨管中，放入3-6粒上述带孔钢珠，拧紧研磨管，放入转子的孔里；
（3）液氮槽加入液氮，顶盖放入其中，拧紧螺栓，液氮高度低于转子的高度，即不淹没转子；
（4）启动电机，转子偏心转动，研磨管内的钢珠往复运动进行研磨，根据样品种类不同，调节研磨时间，植物样品应当适当延长研磨时间；
（5）研磨结束后，取出研磨管，拧开并加入400 ul 2% CTAB抽提缓冲液，上下颠倒数次后加入400 ul 氯仿-异戊醇（24：1），再上下颠倒数次，用磁棒将钢珠吸出，并用移液枪吸取
75%乙醇冲洗数次；
（6）钢珠放入普通离心管中，加入200 ul水震荡溶解DNA，后续实验取用DNA溶液时，直接从离心管中吸取，无需将钢珠取出。
10.一种RNA提取方法，包括如下步骤：
（1）按如下比例混合：纸纤维：3％～15％，硅粉：3％～20％，羧甲基纤维素：5％～15％，余量为水，上述材料加热溶解形成混合物，然后搅拌匀浆；将含有小孔的钢珠让入混合物中搅拌30min，取出放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，得到含核酸吸附材料的钢珠；
（2）多级离心管、普通离心管、镊子等均用DEPC水溶液浸泡，并121℃高温灭活30min；
（2）将约300mg样品加入研磨管中，放入3-6粒上述带孔钢珠，拧紧研磨管，放入转子的孔里；
（3）液氮槽加入液氮，顶盖放入其中，拧紧螺栓，液氮高度低于转子的高度，即不淹没转子；
（4）启动电机，转子偏心转动，研磨管内的钢珠往复运动进行研磨，根据样品种类不同，调节研磨时间，植物样品应当适当延长研磨时间；
（5）研磨结束后，取出研磨管，拧开并加入300 ul Trizol，上下颠倒数次后加入300 ul氯仿，再上下颠倒数次，用磁棒将钢珠吸出，并用移液枪吸取75%乙醇冲洗数次；
（6）钢珠放入普通离心管中，加入200 ul水震荡溶解RNA，后续实验取用RNA溶液时，直接从离心管中吸取，无需将钢珠取出。
马铃薯核酸提取装置及方法
技术领域
背景技术
发明内容
30min。
图3为研磨管结构示意图；
图4为研磨管安装示意图；
图5为带孔钢珠结构示意图；
图6为多级离心管结构示意图；
图7为多级离心管一级滤芯结构示意图；
图8为多级离心管二级滤芯结构示意图；
其中，把手1，电机2，顶盖3，研磨管4，转子5，突圈6，液氮槽7，吸盘8，转轴9，钢珠10，密封盖11，洗涤液柱12，卡凸13，吸附柱14，收集管15，橡皮塞16，底面17，滤网18，弹簧19，螺栓
20，钢珠孔21，核酸吸附材料22。
具体实施方式
（1）2% CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热；
（2）取少量实验材料（约300mg）置于研钵中，用液氮磨至粉状；
（3）加入700 ul的2% CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动；
（4）将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二；
（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30 60min后取出；
~
（6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2 3 min（若提取的是总基~
因组，则不能剧烈震荡），使两者混合均匀；
（7）放入离心机中12000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中；
（8）12000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物；
（9）12000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；
（10）60 sec后，直立离心管，加入720 ul的75%乙醇及80 ul 5 M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；
（11）放置30 min，使DNA块状物的不纯物溶解；
（12）10000 rpm离心1 min后，倒掉液体，再加入800 ul 75%的乙醇，将DNA再洗30 min；
（13）12000 rpm离心30 sec后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）；
（14）加入50 ul 0.5×TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使RNA消解；
实施例2
该实施例提供一种优化的RNA提取Trizol法，包括如下步骤：
（1）液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml加入Trizol，转入离心管。
进一步地，转子5为一圆盘，电机2的转轴9连接转子5中心以外1-15cm，形成偏心转子。
14，吸附柱14内设有一圈卡凸13，附柱14设有密封盖11，洗涤液柱12放入附柱14内卡凸13上方，附柱14内部下方设有滤网18，洗涤液柱12内有橡皮塞16的底面17上设有小孔。
（1）将约300mg样品加入研磨管4中，放入3-6粒钢珠10，拧紧研磨管4，放入转子5的孔里。
（1）按如下比例混合：纸纤维：3％～15％，硅粉：3％～20％，羧甲基纤维素：5％～15％，余量为水。上述材料加热溶解形成混合物，然后搅拌匀浆；将含有小孔的钢珠10让入混合物中搅拌30min，取出放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，得到含核酸吸附材料的钢珠10，如附图5所示。
（1）提取前多级离心管、普通离心管、镊子等均用DEPC水溶液浸泡，并121℃高温灭活
30min。
（1）按如下比例混合：纸纤维：3％～15％，硅粉：3％～20％，羧甲基纤维素：5％～15％，余量为水。上述材料加热溶解形成混合物，然后搅拌匀浆；将含有小孔的钢珠10让入混合物中搅拌30min，取出放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，得到含核酸吸附材料的钢珠10，如附图5所示。
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