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一种大叶蓝玉簪组织培养的培养基及培养方法

阅读:554发布:2020-05-08

专利汇可以提供一种大叶蓝玉簪组织培养的培养基及培养方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 属于 植物 组织培养技术领域,具体涉及一种大叶蓝玉簪组织培养的培养基及培养方法。本发明的组培方法包括无菌材料的获得、芽的诱导、增殖培养、生根培养和炼苗,其中增殖培养时采用高浓度 激素 、低浓度激素交替增殖,并采用高增殖比例扩繁,能够提高增殖比例,同时消除高浓度激素在植物体内积累造成的 玻璃化 ,提高大叶蓝玉簪的增殖率,组培方法易于操作,能够大大降低生产成本,克服现有组培方法采用单一高浓度激素导致的苗玻璃化严重、愈伤组织大、愈伤组织硬难切割等问题。,下面是一种大叶蓝玉簪组织培养的培养基及培养方法专利的具体信息内容。

1.一种大叶蓝玉簪组织培养的培养基,其特征在于,包括腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基,其中,所述腋芽诱导培养基包括 MS+6-BA 2.5 3.5 mg/L+NAA 0.2 0.4 mg/~ ~
L,所述增殖培养基包括1/2MS+6-BA7.5 8.5 mg/L和1/2MS+6-BA 1.5 2.5 mg/L,所述生根~ ~
培养基1/4MS+IBA0.3 0.7 mg/L。
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2.一种大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,其特征在于,采用高低浓度激素交替增殖,高增殖比例扩繁,包括以下步骤:
(1)无菌材料的获得:选取新长出的嫩芽为外植体,去除外植体外面包裹的叶片,洗去表面杂质,切去伤口位置,用配制好的汞和吐温的混合溶液消毒6 10分钟后,用无菌冲洗~
4 6次,将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养5 9天;所述混合溶液中含~ ~
质量分数0.08% 0.12%的汞。
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(2)芽的诱导:将外植体接种到腋芽诱导培养基上7 15天后,腋芽部位开始膨大,出现~
绿色突起,15 25天后芽分生组织,再培养15 25天,小的不定芽长到2 3cm,将不定芽切下转~ ~ ~
入不定芽增殖培养基中进行增殖培养,确保不定芽生长迅速且无玻璃化不良现象,在培养基中生长发育良好;
(3)增殖培养:以MS培养基为基础培养基,将诱导的不定芽接种到增殖培养基上,培养
25 30天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的增殖母苗;将增殖母~
苗转接到以MS培养基为基础培养基的增殖培养基上,培养25 30天后筛选出增殖比例和花~
叶增值率较高的增殖苗;再将得到的增殖苗进行多次增殖培养,整个增殖培养过程中高、低浓度激素交叉循环使用,扩繁增殖系数8 12;
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(4)生根培养:将增殖苗分成单株,高矮分开转接到生根培养基上,4 8天苗长出根原~
基,7 15天根3 4cm长,生根率95% 100%;
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(5)炼苗:生根培养7 15天后,洗苗移栽,栽种在泥炭和珍珠岩的混合基质上,用遮阳率~
40% 75%的遮阳网遮阳5 9天,5 9后撤去遮阳网,从早上8:00到下午18:00,每20 40分钟喷~ ~ ~ ~
水8 10秒钟,连续6 8天,以后每天早上浇水1 2次,每次8 12分钟,一直到商品苗出售。
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3.根据权利要求2所述的大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,其特征在于,所述腋芽诱导培养基包括MS+6-BA2.5 3.5mg/L+NAA0.25 0.35 mg/L。
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4.根据权利要求 2 所述的大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,其特征在于,所述增殖培养基包括MS+6-BA7 9mg/L和MS+6-BA1.5 2.5 mg/L。
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5.根据权利要求2所述的大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,其特征在于,所述生根培养基包括 1/4MS+IBA0.4 0.6 mg/L。
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6.根据权利要求2所述的大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,其特征在于,所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖28 32g/L、琼脂粉4 6g/L,培养基pH为5.6~ ~ ~
5.9,培养温度23 25℃,光照2300 2700lx。
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说明书全文

一种大叶蓝玉簪组织培养的培养基及培养方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域,具体涉及一种大叶蓝玉簪组织培养的培养基及培养方法。技术背景
[0002] 大叶蓝玉簪是多年生草本植物,株高120cm,叶聚生于基部,长而狭,边有细齿,圆锥花序大,羽毛状,白色,国外著名的观赏草,用于园林绿化或岸边栽植。阳性,喜阳光充足、温暖湿润环境,亦耐寒;适应性强,不择土壤,既耐湿,亦耐干旱,现在市场上需求量很大,目前国内关于大叶蓝玉簪组织培养研究的报道很多,但是存在增殖比例不稳定,扩繁转接时叶子长操作难,炼苗清洗难以及栽植难等,生产成本高的缺点。

发明内容

[0003] 本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足,提供了一种大叶蓝玉簪组织培养的培养基及培养方法。本发明采用高、低浓度激素交替增殖,高增殖比例扩繁,能够提高繁殖速度和苗的整齐度,并提高性状稳定性,从而建立更适合大叶蓝玉簪(大叶蓝玉簪花叶遗传不稳定)快速繁殖的工厂化生产体系。
[0004] 为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种大叶蓝玉簪高激素浓度高增值比例的组织培养方法,其特征在于,该大叶蓝玉簪组织培养的培养基及培养方法具有以下特征:一种大叶蓝玉簪组织培养的培养基,包括腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基,其中,所述腋芽诱导培养基包括MS+6-BA2.5 3.5mg/L+NAA0.2 0.4mg/L,所述增殖培养基包~ ~
括1/2MS+6-BA7.5 8.5 mg/L和1/2MS+6-BA 1.5 2.5 mg/L,所述生根培养基1/4MS+IBA0.3~ ~ ~
0.7 mg/L。
[0005] 一种大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,采用高低浓度激素交替增殖,高增殖比例扩繁,包括以下步骤:(1)无菌材料的获得:选取新长出的嫩芽为外植体,去除外植体外面包裹的叶片,洗去表面杂质,切去伤口位置,用配制好的汞和吐温的混合溶液消毒6 10分钟后,用无菌水冲洗~
4 6次,将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养5 9天;所述混合溶液中含~ ~
质量分数0.08% 0.12%的汞。
~
[0006] (2)芽的诱导:将外植体接种到腋芽诱导培养基上7 15天后,腋芽部位开始膨大,~出现绿色突起,15 25天后芽分生组织,再培养15 25天,小的不定芽长到2 3cm,将不定芽切~ ~ ~
下转入不定芽增殖培养基中进行增殖培养,确保不定芽生长迅速且无玻璃化不良现象,在培养基中生长发育良好;
(3)增殖培养:以MS培养基为基础培养基,将诱导的不定芽接种到增殖培养基上,培养
25 30天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的增殖母苗;将增殖母~
苗转接到以MS培养基为基础培养基的增殖培养基上,培养25 30天后筛选出增殖比例和花~
叶增值率较高的增殖苗;再将得到的增殖苗进行多次增殖培养,整个增殖培养过程中高、低浓度激素交叉循环使用,扩繁增殖系数8 12;
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(4)生根培养:将增殖苗分成单株,高矮分开转接到生根培养基上,4 8天苗长出根原~
基,7 15天根3 4cm长,生根率95% 100%;
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(5)炼苗:生根培养7 15天后,洗苗移栽,栽种在泥炭和珍珠岩的混合基质上,用遮阳率~
40% 75%的遮阳网遮阳5 9天,5 9后撤去遮阳网,从早上8:00到下午18:00,每20 40分钟喷~ ~ ~ ~
水8 10秒钟,连续6 8天,以后每天早上浇水1 2次,每次8 12分钟,一直到商品苗出售。
~ ~ ~ ~
[0007] 所述腋芽诱导培养基包括MS+6-BA2.5 3.5mg/L+NAA0.25 0.35 mg/L。~ ~
[0008] 所述增殖培养基包括MS+6-BA7 9mg/L和MS+6-BA1.5 2.5 mg/L。~ ~
[0009] 所述生根培养基包括 1/4MS+IBA0.4 0.6 mg/L。~
[0010] 所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖28 32g/L、琼脂粉4~ ~6g/L,培养基pH为5.6 5.9,培养温度23 25℃,光照2300 2700lx。
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[0011] 与现有技术相比,本发明具有以下优点:现有的组培方法采用单一的高浓度激素提高增殖系数,但是高浓度激素累加会使得苗玻璃化严重,用低浓度激素增殖比例不高,苗叶子长,增殖转接困难,生根炼苗难。本发明采用高、低浓度激素交替增殖,高增殖比例扩繁,能够提高增殖比例,同时消除高浓度激素在植物体内积累造成的玻璃化,能够提高大叶蓝玉簪的增殖率,并且组培方法易于操作,能够大大降低生产成本。
[0012] 实施例 1一种大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,包括以下步骤:
(1)无菌材料的获得:选取新长出的嫩芽为外植体,去除外植体外面包裹的叶片,用洗洁精水浸泡1分钟洗去表面杂质,用流水冲洗干净,在超净工作台上用手术刀切去伤口位置,用配制好的0.08%升汞溶液加一滴吐温消毒10分钟后,用无菌水冲洗4次,将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养9天;
(2)芽的诱导:将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+NAA0.3mg/L+6-BA 2.5mg/L上 15天后,腋芽部位开始膨大,出现绿色突起,25天后芽分生组织,再培养25天,小的不定芽长到2~
3cm,将不定芽切下转入不定芽增殖培养基中进行增殖培养,确保不定芽生长迅速且无玻璃化不良现象,在培养基中生长发育良好;
(3)第一次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将诱导的不定芽接种到不定芽增殖培养基1/2MS+6-BA 7.5 mg/L上,培养30天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖母苗,增殖系数9
(4)第二次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将增殖母苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 1.5 mg/L上,培养30天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增殖系数8;
(5)第三次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第二次增殖培养得到的增殖苗接种到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 7.5 mg/L上,培养30天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖苗,增殖系数9
(6)第四次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第三次增殖培养得到的增殖苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA1.5 mg/L上,培养30天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增殖系数8;
(7)生根培养:将增殖苗分成单株,高矮分开转接到生根培养基1/4MS+IBA0.3mg/L上,8天苗长出根原基,15天根3 4cm长,生根率95%;
~
(8)炼苗:生根培养15天后,洗苗移栽,栽种在进口泥炭和珍珠岩2:1的基质上,用遮阳率40%的遮阳网遮阳7天,保持空气湿度85%,连续7天,撤去遮阳网,以后每天早上浇水一次,保持空气湿度65%以上,一直到商品苗出售。
[0013] 所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖28g/L、琼脂粉4g/L,培养基pH为5.6,培养温度23℃,光照2300lx。
[0014] 实施例2一种大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,包括以下步骤:
(1)无菌材料的获得:选取新长出的嫩芽为外植体,去除外植体外面包裹的叶片,用洗洁精水浸泡1分钟洗去表面杂质,用流水冲洗干净,在超净工作台上用手术刀切去伤口位置,用配制好的0.09%升汞溶液加一滴吐温消毒9分钟后,用无菌水冲洗5次,将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养8天;
(2)芽的诱导:将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+NAA0.3mg/L+6-BA 2.75 mg/L上13天后,腋芽部位开始膨大,出现绿色突起,23天后芽分生组织,再培养23天,小的不定芽长到
2 3cm,将不定芽切下转入不定芽增殖培养基中进行增殖培养,确保不定芽生长迅速且无玻~
璃化不良现象,在培养基中生长发育良好;
(3)第一次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将诱导的不定芽接种到不定芽增殖培养基1/2MS+6-BA 7.75 mg/L上,培养28天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖母苗,增殖系数10;
(4)第二次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将增殖母苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 1.75mg/L上,培养28天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增殖系数8;
(5)第三次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第二次增殖培养得到的增殖苗接种到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 7.75 mg/L上,培养28天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖母苗,增殖系数10;
(6)第四次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第三次增殖培养得到的增殖苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 1.75mg/L上,培养28天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增殖系数8;
(7)生根培养:将增殖苗分成单株,高矮分开转接到生根培养基1/4MS+IBA 0.4mg/L上,
7天苗长出根原基,13天根3 4cm长,生根率95%;
~
(8)炼苗:生根培养13天后,洗苗移栽,栽种在进口泥炭和珍珠岩2:1的基质上,用遮阳率45%的遮阳网遮阳9天,保持空气湿度85%,连续7天,撤去遮阳网,以后每天早上浇水一次,保持空气湿度65%以上,一直到商品苗出售。
[0015] 所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖29g/L、琼脂粉4.5g/L,培养基pH为5.7,培养温度23.5℃,光照2400lx。
[0016] 实施例3一种大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,包括以下步骤:
(1)无菌材料的获得:选取新长出的嫩芽为外植体,去除外植体外面包裹的叶片,用洗洁精水浸泡1分钟洗去表面杂质,用流水冲洗干净,在超净工作台上用手术刀切去伤口位置,用配制好的0.1%升汞溶液加一滴吐温消毒8分钟后,用无菌水冲洗5次,将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养8天;
(2)芽的诱导:将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+NAA0.3mg/L+6-BA 3.0mg/L上 11天后,腋芽部位开始膨大,出现绿色突起,20天后芽分生组织,再培养20天,小的不定芽长到2~
3cm,将不定芽切下转入不定芽增殖培养基中进行增殖培养,确保不定芽生长迅速且无玻璃化不良现象,在培养基中生长发育良好;
(3)第一次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将诱导的不定芽接种到不定芽增殖培养基1/2MS+6-BA 8mg/L上,培养27天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖母苗,增殖系数12;
(4)第二次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将增殖母苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 2 mg/L上,培养27天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增殖系数11;
(5)第三次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第二次增殖培养得到的增殖苗接种到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 8mg/L上,培养27天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖母苗,增殖系数12;
(6)第四次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第三次增殖培养得到的增殖苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 2 mg/L上,培养27天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增殖系数11;
(7)生根培养:将增殖苗分成单株,高矮分开转接到生根培养基1/4MS+IBA 0.50mg/L上,6天苗长出根原基,10天根3 4cm长,生根率100%;
~
(8)炼苗:生根培养10天后,洗苗移栽,栽种在进口泥炭和珍珠岩2:1的基质上,用遮阳率55%的遮阳网遮阳11天,保持空气湿度85%,连续11天,撤去遮阳网,以后每天早上浇水一次,保持空气湿度65%以上,一直到商品苗出售。
[0017] 所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂粉5g/L,培养基pH为5.8,培养温度24℃,光照2500lx。
[0018] 实施例4一种大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,包括以下步骤:
(1)无菌材料的获得:选取新长出的嫩芽为外植体,去除外植体外面包裹的叶片,用洗洁精水浸泡1分钟洗去表面杂质,用流水冲洗干净,在超净工作台上用手术刀切去伤口位置,用配制好的0.11%升汞溶液加一滴吐温消毒7分钟后,用无菌水冲洗5次,将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养6天;
(2)芽的诱导:将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+NAA0.3mg/L+6-BA 3.25 mg/L上 9天后,腋芽部位开始膨大,出现绿色突起,19天后芽分生组织,再培养19天,小的不定芽长到
2 3cm,将不定芽切下转入不定芽增殖培养基中进行增殖培养,确保不定芽生长迅速且无玻~
璃化不良现象,在培养基中生长发育良好;
(3)第一次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将诱导的不定芽接种到不定芽增殖培养基1/2MS+6-BA 8.25 mg/L上,培养26天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖母苗,增值系数11;
(4)第二次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将增殖母苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 2.25 mg/L上,培养26天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增值系数10;
(5)第三次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第二次增殖培养得到的增殖苗接种到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 8.25 mg/L上,培养26天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖母苗,增值系数11;
(6)第四次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第三次增殖培养得到的增殖苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 2.25 mg/L上,培养26天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增值系数10;
(7)生根培养:将增殖苗分成单株,高矮分开转接到生根培养基1/4MS+IBA0.6mg/L上,5天苗长出根原基,9天根3 4cm长,生根率100%;
~
(8)炼苗:生根培养9天后,洗苗移栽,栽种在进口泥炭和珍珠岩2:1的基质上,用遮阳率
65%的遮阳网遮阳13天,保持空气湿度85%,连续13天,撤去遮阳网,以后每天早上浇水一次,保持空气湿度65%以上,一直到商品苗出售。
[0019] 所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖31g/L、琼脂粉5.5g/L,培养基pH为5.9,培养温度24.5℃,光照2600lx。
[0020] 实施例5一种大叶蓝玉簪组织培养的培养方法,包括以下步骤:
(1)无菌材料的获得:选取新长出的嫩芽为外植体,去除外植体外面包裹的叶片,用洗洁精水浸泡1分钟洗去表面杂质,用流水冲洗干净,在超净工作台上用手术刀切去伤口位置,用配制好的0.12%升汞溶液加一滴吐温消毒6分钟后,用无菌水冲洗6次,将消完毒的外植体取小段接种到配制好的培养基上培养5天;
(2)芽的诱导:将外植体接种到腋芽诱导培养基MS+NAA0.3mg/L+6-BA3.5 mg/L上 7天后,腋芽部位开始膨大,出现绿色突起, 15天后芽分生组织,再培养15天,小的不定芽长到2
3cm,将不定芽切下转入不定芽增殖培养基中进行增殖培养,确保不定芽生长迅速且无玻~
璃化不良现象,在培养基中生长发育良好;
(3)第一次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将诱导的不定芽接种到不定芽增殖培养基1/2MS+6-BA 8.5mg/L上,培养25天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖母苗,增值系数11;
(4)第二次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将增殖母苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 2.5mg/L上,培养25天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增值系数11;
(3)第三次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第二次增殖培养得到的增殖苗接种到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 8.5mg/L上,培养25天后筛选出无根、基部从芽多且增殖比例、花叶增殖系数较高的培养基中的增殖母苗,增值系数11;
(4)第四次增殖培养:以1/2MS培养基为基础培养基,将第三次增殖培养得到的增殖苗转接到壮苗增殖培养基1/2MS+6-BA 2.5mg/L上,培养25天后筛选出增殖比例和花叶增值率较高的增殖苗,增值系数11;
(7)生根培养:将增殖苗分成单株,高矮分开转接到生根培养基1/4MS+IBA 0.7mg/L上,
4天苗长出根原基,7天根3 4cm长,生根率100%;
~
(8)炼苗:生根培养7天后,洗苗移栽,栽种在进口泥炭和珍珠岩2:1的基质上,用遮阳率
75%的遮阳网遮阳15天,保持空气湿度85%,连续15天,撤去遮阳网,以后每天早上浇水一次,保持空气湿度65%以上,一直到商品苗出售。
[0021] 所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还包括蔗糖32g/L、琼脂粉6g/L,培养基pH为5.8,培养温度25℃,光照2700lx。
[0022] 以上所述,仅是本发明的较佳实施例,并非对本发明作任何限制。凡是根据本发明实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化,均仍属于本发明技术方案的保护范围内。
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