芽孢菌株及应用
阅读：971发布：2020-05-13
专利汇可以提供芽孢菌株及应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于 微 生物 技术领域，具体公开了一株芽孢菌株及其应用。本发明首先获得了一株芽孢菌株，该芽孢菌株的保藏编号为CGMCC No.18773。该芽孢菌株能够利用餐厨垃圾作为 碳 源产生生物 表面活性剂 。由该芽孢菌株制成的培养物能够显著促进番茄和玉米的生长，表现出兼具药效和肥效的双重生物调节功能。并且还发现，由该芽孢菌株制成的培养物可以应用于 植物 病原菌的 生物防治 ，能够对多种植物病原菌表现出良好的抑菌活性，进一步拓展了生物表面活性剂在农业生产领域的应用。此外，本发明还提供了一种制备生物表面活性剂的新工艺，采用餐厨垃圾为碳源，降低了生产成本，实现了资源的循环利用。，下面是芽孢菌株及应用专利的具体信息内容。
1.芽孢菌株，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.18773。
2.芽孢菌株，其特征在于，所述菌株的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示。
3.权利要求1或2所述的芽孢菌株，其特征在于，所述芽孢菌株能够利用餐厨垃圾作为碳源产生生物表面活性剂。
4.由权利要求1或2所述的芽孢菌株制成的培养物，所述培养物由芽孢菌株以餐厨垃圾为碳源制得。
5.权利要求4所述的培养物作为植物促生剂的应用；优选地，作为番茄和/或玉米促生剂的应用。
6.权利要求4所述的培养物作为生物表面活性剂的应用。
7.权利要求4所述的培养物在防治植物病害中的应用，优选地，所述植物病害为圆斑病病原菌、小斑病病原菌、尖孢镰刀菌、木贼镰刀菌、禾谷镰孢菌、拟轮枝镰孢菌和/或层出镰孢菌引起的病害。
8.一种培养物，其特征在于，由权利要求1或2所述的芽孢菌株制备的发酵培养液制得，所述发酵培养液采用的发酵培养基以餐厨垃圾为碳源。
9.根据权利要求8所述的培养物，其特征在于，所述发酵培养液采用的发酵培养基按质量体积比计，其成分组成为：K2HPO4 0.08～0.12％，KH2PO4 0.08～0.12％，MgSO4﹒7H2O 0.01～0.03％，NaNO30.04～0.06％，(NH4)2SO4 0.04～0.06％，CaCl2 0.0008～0.0012％，FeSO40.0004～0.0006％，酵母粉0.01～0.03％，餐厨垃圾5～8％，pH为6.0～7.5；优选地，所述发酵培养液采用的发酵培养基按质量体积比计，其成分组成为：K2HPO4 0.1％，KH2PO4
0.1％，MgSO4﹒7H2O 0.02％，NaNO3 0.05％，(NH4)2SO4 0.05％，CaCl2 0.001％，FeSO4
0.0005％，酵母粉0.02％，餐厨垃圾6％，pH为7.0。
10.根据权利要求8或9所述的培养物，其特征在于，所述培养物通过以下步骤制得：
(1)将所述芽孢菌株接种于液体种子培养基，培养获得种子培养液，之后将所述种子培养液离心，收集得到的菌体用无菌生理盐水悬浮，制成种子悬液；
(2)将所述种子悬液接种到发酵培养基中，接种后控制发酵培养基中菌液的起始OD600＝1，之后培养制得发酵培养液；
(3)将所述发酵培养液离心，取上清液，之后调节所述上清液pH值至1.5～3，然后离心收集沉淀，所得沉淀用去离子水悬浮得到沉淀悬浮液，调节所述沉淀悬浮液pH值至7.5～
8.5，得到弱碱性液体，所述弱碱性液体经冻干获得所述培养物。
芽孢菌株及应用
技术领域
背景技术
[0002] 生物表面活性剂是一种由微生物或动植物产生的天然表面活性剂，它不仅具有可以媲美化学表面活性剂的增溶和乳化性能，还具有许多化学表面活性剂所不具有的优势：如更好的稳定性、生物可降解性，以及环境安全性。因此，生物表面活性剂也被广泛应用于石油化工，医药和食品等多个领域。越来越多的研究关注表面活性剂产生菌的挖掘，芽孢杆菌(Bacillus spp.)作为生物表面活性剂产生菌的重要来源菌，目前也受到科研人员的高度重视。
[0003] 但是，目前生物表面活性剂的产生都需要菌株通过发酵高浓度的葡萄糖来获得，这就提高了生物表面活性剂的生产成本，使其在农业上的应用受到限制。因此，利用廉价底物如餐厨垃圾等廉价发酵基质替代葡萄糖作为碳源，进一步降低生物表面活性剂的生产成本将是推动其应用的关键，但是目前仍未见有相关报道。此外，目前科研人员对生物表面活性剂产生菌的应用侧重于工业和环境修复领域，极少关注其在农业生产领域中的应用。
发明内容
[0004] 本发明主要解决的技术问题是提供一株芽孢菌株，同时还提供了芽孢杆菌的应用。
[0005] 首先，本发明提供了一株芽孢菌株，该芽孢菌株的保藏编号为CGMCC No.18773。
[0006] 所述保藏编号为CGMCC No.18773的芽孢菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General Microbiological Culture Collection Center，CGMCC)，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.18773，保藏日期2019年10月31日，分类命名为：芽孢杆菌(Bacillus sp.)。
[0007] 本发明提供的芽孢菌株，所述菌株的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示。
[0008] 本发明提供的上述芽孢菌株能够利用餐厨垃圾作为碳源产生生物表面活性剂。
[0009] 本发明还提供了由上述的芽孢菌株制成的培养物，所述培养物由芽孢菌株以餐厨垃圾为碳源制得。
[0010] 本发明提供了上述培养物作为植物促生剂的应用；优选地，作为番茄和/或玉米促生剂的应用。
[0011] 本发明还提供了上述培养物作为生物表面活性剂的应用。
[0012] 本发明还提供了上述培养物在防治植物病害中的应用，优选地，所述植物病害为圆斑病病原菌、小斑病病原菌、尖孢镰刀菌、木贼镰刀菌、禾谷镰孢菌、拟轮枝镰孢菌和/或层出镰孢菌引起的病害。
[0013] 本发明提供的培养物，由上述芽孢菌株制备的发酵培养液制得，所述发酵培养液采用的发酵培养基以餐厨垃圾为碳源。
[0014] 进一步地，本发明提供的培养物，由上述芽孢菌株制备的发酵培养液制得，所述发酵培养液采用的发酵培养基按质量体积比计，其成分组成为：K2HPO4 0.08～0.12％，KH2PO4 0.08～0.12％，MgSO4﹒7H2O 0.01～0.03％，NaNO3 0.04～0.06％，(NH4)2SO4 0.04～0.06％，CaCl2 0.0008～0.0012％，FeSO4 0.0004～0.0006％，酵母粉0.01～0.03％，餐厨垃圾5～
8％，pH为6.0～7.5。
8％，pH为6.0～7.5。
[0015] 更优选地，所述发酵培养液采用的发酵培养基按质量体积比计，其成分组成为：K2HPO4 0.1％，KH2PO4 0.1％，MgSO4﹒7H2O 0.02％，NaNO3 0.05％，(NH4)2SO4 0.05％，CaCl2
0.001％，FeSO4 0.0005％，酵母粉0.02％，餐厨垃圾6％，pH为7.0。
0.001％，FeSO4 0.0005％，酵母粉0.02％，餐厨垃圾6％，pH为7.0。
[0016] 进一步优选地，所述培养物通过以下步骤制得：
[0018] (2)将所述种子悬液接种到发酵培养基中，接种后控制发酵培养基中菌液的起始OD600＝1，之后培养制得发酵培养液；
[0019] (3)将所述发酵培养液离心，取上清液，之后调节所述上清液pH值至1.5～3，然后离心收集沉淀，所得沉淀用去离子水悬浮得到沉淀悬浮液，调节所述沉淀悬浮液pH值至7.5～8.5，得到弱碱性液体，所述弱碱性液体经冻干获得所述培养物。
[0020] 制得的培养物可以作为生物表面活性剂使用；并且发现该培养物可以作为植物促生剂使用，在番茄和玉米促生方面具有显著效果；同时还发现，该培养物可以应用于防治植物病害中，在防治由圆斑病病原菌、小斑病病原菌、尖孢镰刀菌、木贼镰刀菌、禾谷镰孢菌、拟轮枝镰孢菌以及层出镰孢菌引起的病害中取得了很好的效果。
[0021] 本发明的有益效果是：
[0022] (1)本发明提供的芽孢菌株是一株高产生物表面活性剂菌株，可以用于生产生物表面活性剂，并且经实验证明，该芽孢菌株在促进植物生长方面也有显著效果，尤其对番茄和玉米幼苗的生长具有明显的促进作用；
[0023] (2)采用本发明的芽孢菌株制备生物表面活性剂时，使用的发酵培养基可以餐厨垃圾为碳源，餐厨垃圾可以是食堂、饭店和日常家庭生活所产生的剩菜剩饭，用餐厨垃圾代替高浓度的葡萄糖，不仅能够实现资源的回收利用，同时显著降低了生物表面活性剂的生产成本；
[0024] (3)本发明芽孢菌株制备得到的生物表面活性剂具有良好的表面活性剂性能，并且对多种植物病原菌，如圆斑病病原菌、小斑病病原菌、尖孢镰刀菌、木贼镰刀菌、禾谷镰孢菌、拟轮枝镰孢菌和层出镰孢菌均具有良好的抑制作用，这是生物表面活性剂可作为活性物质拮抗多种病原真菌的首次发现。
[0025] 本发明提供了一株新的芽孢菌株，该芽孢菌株能够显著促进番茄和玉米的生长，表现出兼具药效和肥效的双重生物调节功能。由该芽孢菌株生产的表面活性剂可以应用于植物病原菌的生物防治，能够对多种植物病原菌表现出良好的抑菌活性，进一步拓展了生物表面活性剂在农业生产领域的应用。此外，本发明还提供了一种制备生物表面活性剂的新工艺，采用餐厨垃圾为碳源，降低了生产成本，实现了资源的循环利用。
[0026] 发酵使用餐厨垃圾为碳源，餐厨垃圾俗称泔脚，又称泔水、潲水。根据来源不同，餐厨垃圾主要分为餐饮垃圾和厨余垃圾。前者产生自饭店、食堂等餐饮业的残羹剩饭，具有产生量大、来源多、分布广的特点，后者主要指居民日常烹调中废弃的下脚料，数量不及餐饮垃圾庞大。餐厨垃圾水分含量高、易腐烂变质，散发恶臭，且容易滋长病原微生物、霉菌毒素等有害物质，对环境卫生造成恶劣影响；但餐厨垃圾有机物含量丰富，餐厨垃圾主要成分包括米和面粉类食物残余、蔬菜、动植物油、肉骨等，从化学组成上，有淀粉、纤维素、蛋白质、脂类和无机盐，营养丰富的餐厨垃圾也是宝贵的可再生资源。本发明通过提供一株新的芽孢菌株，该芽孢菌株能够利用餐厨垃圾为碳源生产生物表面活性剂，并且该生物表面活性剂在植物促生和植物病害防治中都具有显著效果，在农业中具有广泛的应用前景，因此，本发明为餐厨垃圾的资源化利用提供了一种新的途径，并且具有显著的经济效益和环保效益。附图说明
[0027] 图1是本发明实验例1中检测得到的表面活性剂对多种疏水性物质的乳化值图；
[0028] 图2是本发明实验例2中分别培养3天后、4天后和5天后测定的番茄苗的根长比较图；
[0029] 图3是本发明实验例2中继续生长20天后玉米幼苗地上和地下部分的长势图；
[0030] 图4是本发明实验例2中继续生长20天后玉米幼苗的地上部干重图(图中*表示：*＜0.05，**＜0.01，***＜0.001)；
[0031] 图5是本发明实验例2中继续生长20天后玉米幼苗的地下部干重图(图中*表示：*＜0.05，**＜0.01，***＜0.001)。
具体实施方式
[0032] 下面对本发明的技术方案进行详细说明。
[0034] 若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0035] 实施例1芽孢菌株的制备
[0036] 本发明的芽孢菌株是对采集于辽河油田附近的植物根际土样品进行梯度稀释、涂布、纯化和筛选得到，具体步骤为：
[0037] (1)取10g从辽河油田附近采集的植物根际土样品，加入到90ml无菌水中，在200rpm、37℃条件下振荡培养30min，得到10-1浓度的土壤稀释液，将该土壤稀释液依次稀释-4 -8
到10 ～10 浓度，得到各级浓度梯度的土壤悬液；各取100μl土壤悬液，涂布到LB固体培养基上(LB固体培养基的组成为：酵母粉5g、胰蛋白胨10g、NaCl 10g、琼脂20g，去离子水
1000ml，pH＝7.0)；每个梯度3个重复，30℃培养24h后开始挑取单菌落纯化；
到10 ～10 浓度，得到各级浓度梯度的土壤悬液；各取100μl土壤悬液，涂布到LB固体培养基上(LB固体培养基的组成为：酵母粉5g、胰蛋白胨10g、NaCl 10g、琼脂20g，去离子水
1000ml，pH＝7.0)；每个梯度3个重复，30℃培养24h后开始挑取单菌落纯化；
[0038] (2)将纯化后的菌株在25ml的LB液体培养基中进行扩大培养，于30℃、200rpm条件下培养12h；收集菌株发酵液进行产表面活性剂测定，测定内容包括：溶血实验、液滴坍塌实验、排油圈实验和表面张力测定；
[0039] (3)对产表面活性剂的菌株连续传代多次后，按上述步骤(2)方法再次测量菌株产表面活性剂的能力，确定性状稳定性；最终获得了一株高产生物表面活性剂的菌株，编号为ZR19。
[0040] 采用16S rRNA基因序列分析对该菌株进行菌种种类鉴定，其鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.)，该芽孢菌株的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示：
[0041] GCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTCTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCG(SEQ ID NO:1)。
[0042] 将筛选得到的该菌株进行了菌种保藏，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General Microbiological Culture Collection Center，CGMCC)，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.18773，保藏日期2019年10月31日，分类命名为：芽孢杆菌(Bacillus sp.)。
[0043] 实施例2生物表面活性剂的制备
[0044] 本发明还提供了一种生物表面活性剂，该生物表面活性剂由上述芽孢菌株制得的发酵培养液制得，采用餐厨垃圾为碳源，具体通过以下步骤制得：
[0045] (1)将上述芽孢菌株接种于液体种子培养基，于37℃条件下，200rpm培养10h，获得种子培养液，其中所用的液体种子培养基组成为(w/v，质量体积比)：胰蛋白胨1％、酵母粉0.5％、NaCl 1％，pH为7.0；将得到的种子培养液离心，12000rpm离心3min，之后收集菌体，再用无菌的生理盐水将收集的菌体悬浮，制成种子悬液；
[0046] (2)将种子悬液接种到发酵培养基中，接种后控制发酵培养基中菌液的起始OD600＝1，于37℃条件下，200rpm培养3天，制得发酵培养液，其中发酵培养基组成为(w/v，质量体积比)：K2HPO4 0.1％，KH2PO4 0.1％，MgSO4﹒7H2O 0.02％，NaNO3 0.05％，(NH4)2SO4 0.05％，CaCl2 0.001％，FeSO4 0.0005％，酵母粉0.02％，餐厨垃圾6％，pH为7.0；其中餐厨垃圾为食堂、饭店和日常家庭生活所产生的剩菜剩饭；
[0047] (3)将上述发酵培养液离心，12000rpm离心10min，取上清液，之后向上清液中加入6M HCl调节pH至2.0，并在4℃过夜放置；之后于4℃，12000rpm离心30min，收集沉淀，并用少量去离子水将沉淀悬浮，得到沉淀悬浮液；用1M NaOH调节该沉淀悬浮液pH至8.0，然后冻干，即获得生物表面活性剂，产量能够达到8.11±0.18g/L。
[0048] 对比例生物表面活性剂的制备
[0049] 本发明还提供了另一种生物表面活性剂，该生物表面活性剂由上述芽孢菌株制得的发酵培养液制得，采用葡萄糖为碳源，具体通过以下步骤制得：
[0050] (1)将上述芽孢菌株接种于液体种子培养基，于37℃条件下，200rpm培养10h，获得种子培养液，其中所用的液体种子培养基组成为(w/v，质量体积比)：胰蛋白胨1％、酵母粉0.5％、NaCl 1％，pH为7.0；将得到的种子培养液离心，12000rpm离心3min，之后收集菌体，再用无菌的生理盐水将收集的菌体悬浮，制成种子悬液；
[0051] (2)将种子悬液接种到发酵培养基中，接种后控制发酵培养基中菌液的起始OD600＝1，于37℃条件下，200rpm培养3天，制得发酵培养液，其中发酵培养基组成为(w/v，质量体积比)：葡萄糖4％，酵母粉0.1％，NaNO3 0.3％，KH2PO4 0.025％，NaCl 0.03％，K2HPO4·3H2O 0.001％，MgCl2·6H2O 0.001％，NH4Cl 0.0003％，KCl 0.0003％，pH 7.0；
[0052] (3)将上述发酵培养液离心，12000rpm离心10min，取上清液，之后向上清液中加入6M HCl调节pH至2.0，并在4℃过夜放置；之后于4℃，12000rpm离心30min，收集沉淀，并用少量去离子水将沉淀悬浮，得到沉淀悬浮液；用1M NaOH调节该沉淀悬浮液pH至8.0，然后冻干，即获得生物表面活性剂，产量为4.03±0.21g/L。
[0053] 通过实施例2和对比例制备生物表面活性剂的实验，可以说明本发明提供的芽孢菌株可以葡萄糖为碳源制备生物表面活性剂，也可以餐厨垃圾为碳源制备生物表面活性剂，并且以餐厨垃圾为碳源制备生物表面活性剂产量更高。
[0054] 实验例1实施例2及对比例制得的生物表面活性剂的性能测定
[0055] 通过表面活性剂对疏水物质的乳化能力测定了表面活性剂的性能。
[0056] 将实施例2制得的生物表面活性剂溶于去离子水中，保证表面活性剂的终浓度为200mg/L，在10ml离心管中加入3ml表面活性剂溶液，并分别加入不同种类的等体积的疏水性物质，疏水性物质具体为：正十六烷，花生油，橄榄油，大豆油，石蜡和正己烷。将加入疏水性物质后得到的混合物置于涡旋振荡器上震荡2min后静置24h，测定乳化层高度在混合物总高度中所占比例。本发明实施例2所制备的表面活性剂对上述多种疏水性物质的乳化能力(即乳化系数E24值)分别达到69％、62％、68％、62％、66％、60％，表面活性剂对多种疏水性物质的乳化值图见图1所示。
[0057] 将对比例制得的生物表面活性剂溶于去离子水中，保证表面活性剂的终浓度为200mg/L，在10ml离心管中加入3ml表面活性剂溶液，并分别加入不同种类的等体积的疏水性物质，疏水性物质具体为：正十六烷，花生油，橄榄油，大豆油，石蜡和正己烷。将加入疏水性物质后得到的混合物置于涡旋振荡器上震荡2min后静置24h，测定乳化层高度在混合物总高度中所占比例。本发明对比例所制备的表面活性剂对上述多种疏水性物质的乳化能力(即乳化系数E24值)分别达到65％、61％、63％、58％、65％、58％，表面活性剂对多种疏水性物质的乳化值图见图1所示。
[0058] 实验例2芽孢菌株ZR19的促生实验
[0059] 将芽孢菌株ZR19接种于LB液体培养基中，于30℃条件下，200rpm培养12h。之后12000rpm离心5min收集ZR19菌体，并用无菌水将收集的菌体重悬，控制重悬后菌液的OD600＝0.5。
[0060] 一、对番茄的促生实验
[0061] 将番茄种子浸泡到重悬后的菌液中，浸泡2h后，将番茄种子铺在水琼脂培养基上(琼脂0.9％(w/v))，28℃避光发芽48h，之后将种子转移到1/2MS固体培养基上，MS培养基组成为(w/v，质量体积比)：KNO3 0.19％，NH4NO3 0.16％，KH2PO4 0.017％，MgSO4﹒7H2O 0.037％，CaCl2﹒2H2O 0.044％，KI 0.000083％，H3BO3 0.00062％，MnSO4﹒4H2O 0.00223％，ZnSO4﹒7H2O 0.00086％，NaMoO4﹒2H2O 0.000025％，CuSO4﹒5H2O 0.0000025％，CoCl2
0.0000025％，EDTA-2Na 0.00373％，FeSO4﹒7H2O 0.00278％，肌醇(Inositol)0.01％，甘氨酸(Glycine)0.0002％，VB1 0.00001％，VB6 0.00005％，VB5 0.00005％，琼脂0.9％；于28℃条件下，在1/2MS培养基上培养3、4和5天后测定根长。
0.0000025％，EDTA-2Na 0.00373％，FeSO4﹒7H2O 0.00278％，肌醇(Inositol)0.01％，甘氨酸(Glycine)0.0002％，VB1 0.00001％，VB6 0.00005％，VB5 0.00005％，琼脂0.9％；于28℃条件下，在1/2MS培养基上培养3、4和5天后测定根长。
[0062] 图2为培养3天后、4天后和5天后测定的番茄苗的根长比较图。
[0063] 图2结果表明，用上述重悬后的菌液处理后的番茄种子(处理组)相比未处理的番茄种子(对照组)，在3天后和4天后，根长增长分别为41.6％和12.2％。以上说明芽孢菌株ZR19能够显著促进番茄幼苗的根长，对番茄幼苗有促生效果。
[0064] 二、对玉米的促生实验
[0065] 将玉米种子进行消毒(消毒方法为：用1％的NaClO浸泡10min后用无菌水洗涤3次)，将消毒后的玉米种子铺在水琼脂培养基上(琼脂0.9％(w/v))，28℃避光发芽48h后转移到土壤中种植(蛭石：土＝1：9)，种植20天后每盆玉米幼苗中加入50ml重悬后的菌液，继续生长20天后测定玉米地上和地下部分干重。
[0066] 图3为继续生长20天后玉米幼苗地上和地下部分的长势图。从图中可以看出，用上述重悬后的菌液处理后的玉米幼苗(处理组)相比未处理的玉米幼苗(对照组)，根系和苗势均长势更旺。
[0067] 图4为继续生长20天后玉米幼苗的地上部干重图，图5为继续生长20天后玉米幼苗的地下部干重图。从图4和图5可以看出，处理组相比对照组，玉米幼苗地上和地下干重分别提高了40.7％和42.4％。
[0068] 以上说明芽孢菌株ZR19能够显著促进玉米幼苗的根系和苗体生长，对玉米幼苗有促生效果。
[0069] 实验例3生物表面活性剂的抑菌实验
[0070] 采用菌丝生长速度法测定了芽孢菌种ZR19制备的生物表面活性剂对7种植物病原真菌：圆斑病病原菌、小斑病病原菌、尖孢镰刀菌、木贼镰刀菌、禾谷镰孢菌、拟轮枝镰孢菌和层出镰孢菌的抑制情况。
[0071] 将实施例2制备的生物表面活性剂加入到PDA固体培养基中，加入量为1％，并制成PDA药敏平板；在平板中心接种病原菌菌丝块，直径5mm，以不加入该生物表面活性剂的PDA平板作为对照；28℃培养5d，测定病原真菌直径，按如下公式计算抑菌率：
[0072] 抑菌率％＝(菌落直径对照组-菌落直径实验组)/菌落直径对照组×100％。
[0073] 测定结果见表1。
[0074] 表1
[0075]
[0076] 从表1可以看出，由芽孢菌种ZR19所产生物表面活性剂对7种病原真菌都具有很好的抑制效果，抑制率达到60.9～77.8％，抑菌谱广，抑菌能力强。
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