专利汇可以提供一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法,属于原生质体制备领域,该方法包括以下步骤:(1)取匍匐翦股颖无菌苗,剪取其幼嫩的 叶片 和叶鞘组织,用双面刀将其切成不超过1mm的小段,及时将小段放置于0.6M的甘露醇溶液中,获得匍匐翦股颖样品;(2)将匍匐翦股颖样品加入到酶解液中,先 真空 30min,然后取出在室温条件下酶解3-4h;(3)酶解完成后,离心过滤重悬洗涤,即获得匍匐翦股颖原生质体。本发明提供的制备方法能够获得大量形态正常,杂质少,无破损的匍匐翦股颖原生质体,能够满足后续的实验要求。,下面是一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法专利的具体信息内容。
1.一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取匍匐翦股颖无菌苗,剪取其幼嫩的叶片和叶鞘组织,切成小段,并及时将小段放置于甘露醇溶液中,获得匍匐翦股颖样品;
(2)将匍匐翦股颖样品加入到酶解液中,先真空30min,然后取出在室温条件下酶解3-
4h;
(3)酶解完成后,将酶解液用Miracloth过滤,滤液离心,去除上清;
(4)滤渣用预冷的W5溶液浸泡,缓慢震荡,用Miracloth过滤,滤液离心,去除上清;
(5)滤渣用预冷的W5溶液洗涤,去除上清,再用预冷的W5溶液重悬原生质体,即获得匍匐翦股颖原生质体。
2.根据权利要求1所述的一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法,其特征在于,所述匍匐翦股颖无菌苗通过以下方法获得:
(1)将匍匐翦股颖种子置于84消毒液中消毒30min,无菌水清洗5遍,接种至培养瓶中;
(2)将培养瓶置于无菌组织培养室,培养至幼苗长至10cm即可取样。
3.根据权利要求2所述的一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法,其特征在于,所述培养瓶为MS培养基,所述MS培养基的组分为:MS基础培养基4.43g/L,蔗糖30g/L,pH5.7,植物凝胶3g/L。
4.根据权利要求2所述的一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法,其特征在于,步骤(2)中,培养条件为白天:23℃/14h,光照强度6000lux;夜晚:18℃/10h,光照0lux。
5.根据权利要求1所述的一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法,其特征在于,所述酶解液的成分为:1.5%的纤维素酶,0.75%的离析酶,甘露醇0.6M,10mM MES(pH5.7),1g/L的BSA,头孢噻肟250mg/L,3.4mM的CaCl2,0.1%(v/v)的β-巯基乙醇,溶剂为无菌水。
6.根据权利要求5所述的一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法,其特征在于,所述酶解液的配制方法包括以下步骤:
(1)称取纤维素酶、离析酶、甘露醇,加入1mL 100mM pH5.7的MES,加入7mL的无菌水;
(2)涡旋搅拌至完全溶解,65℃水浴10min;
(3)加入0.01g BSA,250mg/mL的头孢噻肟10μL,1M CaCl2 34μL,β-巯基乙醇10μL,补充无菌水至10mL即可。
7.根据权利要求1所述的一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法,其特征在于,所述缓慢震荡的转速为30r/min。
8.根据权利要求1所述的一种匍匐翦股颖原生质体制备的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述酶解在避光条件下进行,温度23℃。
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