提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基及高效育苗方法
专利汇可以提供提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基及高效育苗方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种提高 铁 皮石斛拟原球茎分化率的培养基及高效育苗方法，属于 植物 培育技术领域，本发明所述培养基包括：初代诱导培养基A、增殖培养基B、分化培养基C、壮苗及生根培养基D并应用于铁皮石斛的高效育苗。本发明能够延长组培苗移栽时间，为工厂化育苗提供技术 支撑 。解决目前铁皮石斛无性系品种组培苗生产成本较高，无性系原球茎分化率低等问题。，下面是提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基及高效育苗方法专利的具体信息内容。
1.提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基，其特征在于, 所述培养基包括：
初代诱导培养基A、用于诱导铁皮石斛茎段腋芽萌发并在部分幼芽基部形成拟原球茎；
增殖培养基B、用于转入并培育初代诱导培养基A中幼苗基部萌发形成的拟原球茎，并使得所述拟原球茎不断分裂增殖形成大量拟原球茎；
分化培养基C、用于转入并促使增殖培养基B中的所述大量拟原球茎经过分化形成高度为1-2cm的铁皮石斛小苗；
壮苗及生根培养基D、用于转入所述铁皮石斛小苗并壮苗生根形成高度为3-4cm的大苗。
2.根据权利要求1所述的提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基，其特征在于，所述诱导培养基A在1L培养基中的配方及含量为：KNO3:1900mg、NH4NO3:1650mg、KH2PO4:170mg、MgSO4·7H2O:370mg、CaCl2:440mg、KI:0.83mg、H3BO3:6.2mg、MnSO4·4H2O:22.3mg、ZnSO4·
7H2O:8.6mg、Na2-EDTA:37.3mg、FeSO4·7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸0.2mg、6-苄氨基嘌呤1 2mg、香蕉0g、琼脂4.4g、白砂糖~
20g。
3.根据权利要求1所述的提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基，其特征在于，所述增殖培养基B在1L培养基中的配方及含量为：
KNO3:1267mg、NH4NO3:1100mg、KH2PO4:113mg、MgSO4·7H2O:247mg、CaCl2:293mg、KI:
0.83mg、H3BO3:6.2mg、MnSO4·4H2O:22.3mg、ZnSO4·7H2O:8.6mg、Na2-EDTA:37.3mg、FeSO4·
7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸0.2~
0.3mg、6-苄氨基嘌呤0 0.5mg、香蕉100g、琼脂4.4g、白砂糖30g。
~
4.根据权利要求1所述的提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基，其特征在于，所述分化培养基C在1L培养基中的配方及含量为：
KNO3:1250mg、NH4NO3:225mg、KH2PO4:175mg、MgSO4·7H2O:325mg、CaCl2:165mg、KI:
0.83mg、H3BO3:6.2mg、MnSO4·4H2O:22.3mg、ZnSO4·7H2O:8.6mg、Na2-EDTA:37.3mg、FeSO4·
7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸0.2~
0.5mg、6-苄氨基嘌呤0mg、香蕉70g、琼脂4.4g、白砂糖20g。
5.根据权利要求1所述的提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基，其特征在于，所述壮苗及生根培养基D在1L培养基中的配方及含量为：KNO3:1267mg、NH4NO3:1100mg、KH2PO4:
113mg、MgSO4·7H2O:247mg、CaCl2:293mg、KI:0.83mg、H3BO3:6.2mg、MnSO4·4H2O:22.3mg、ZnSO4·7H2O:8.6mg、Na2-EDTA:37.3mg、FeSO4·7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇
0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸0.2 0.3mg、6-苄氨基嘌呤0 0.1mg、香蕉~ ~
70g、琼脂4.4g、白砂糖30g+活性炭0.5g/L。
6.根据权利要求2或3或4或5所述的提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基，其特征在于，所述培养基各组分配方在1L培养基中的各组分配制过程如下、：
（1）量取约500ml水放入热水锅中并加热；
（2）称取4.4g琼脂粉；
（3）待水温达到80℃时加入琼脂粉，搅拌均匀，加热至沸腾；
（4）加入每种培养基所需要的药品，所述药品包括预先配制的元素母液和微量元素母液；
（5）配制培养基B、C、D时称取70-100g香蕉，将其切成小块并用榨汁机打散榨汁；
（6）将榨好的香蕉汁加至热水锅中；
（7）配制培养基D时加入活性炭0.5g；
（8）加入白砂糖20-30g；
（9）待药品和白砂糖全部溶解后加水定容至1L并搅拌均匀；
（10）用pH试纸调pH值为5.8-6.2；
（11）分装，将配制好的培养基倒入组培瓶，倒入量视组培瓶容量大小而定，一般为容器的1/5左右；
（12）高压蒸汽灭菌，121℃，1.5Mpa，21min；
（13）灭完菌的培养基放入接种室内静置，让其降温后凝固。
7.一种提高铁皮石斛拟原球茎分化率的高效育苗方法，其特征在于，所述高效育苗方法使用如权利要求6所述的培养基，所述高效育苗方法还包括如下：
（1）铁皮石斛优良单株的茎段诱导培养
将成熟铁皮石斛鲜条的茎段用解剖刀每节切成一段，带一个腋芽，用镊子夹住切段平放在培养基A中培育，促使腋芽萌发，部分在幼苗基部形成拟原球茎；
（2）铁皮石斛原球茎的增殖
在超净工作台上用镊子将幼苗基部萌发形成的拟原球茎均匀的转入到培养基B上，培育并促使所述拟原球茎不断分裂增殖形成大量拟原球茎；
（3）铁皮石斛类原球茎的分化
在超净工作台上用勺子将类原球茎挑出并均匀的转入到培养基C上，培育并使得所述类原球茎经过分化形成高约1-2cm的铁皮石斛小苗；
（4）铁皮石斛小苗的壮苗
在超净工作台上用镊子小心的夹出类原球茎分化形成的小苗放置在事先消毒过的不锈钢接种培养盘上分开每株小苗，并把小苗插入壮苗及生根培养基D中，经过壮苗形成整齐度基本一致高约3-4cm的大苗；
（5）铁皮石斛大苗的生根
在超净工作台上用镊子小心的夹出铁皮石斛大苗放置在事先消毒过的不锈钢接种培养盘上分开每株大苗，将大苗一根一根的挑出并插入壮苗及生根培养基D中进行培养60-90天;
（6）铁皮石斛组培苗的炼苗与移栽
分批将组培瓶放置在连栋大棚离地苗床上，在自然光下炼苗三周后取出瓶苗并洗净根部培养基，移栽至松鳞基质中。
8.根据权利要求7所述的一种提高铁皮石斛拟原球茎分化率的高效育苗方法，其特征在于，所述方法具体包括如下：
（1）铁皮石斛优良单株的茎段诱导培养
将成熟铁皮石斛鲜条用自来水冲洗干净以后放入超净工作台中，在超净工作台的无菌条件下，将依次加入75%的酒精溶液中浸泡2min，用无菌水漂洗6次，0.1%砷汞溶液中浸泡
10min，用无菌水漂洗6次，1%的次氯酸钠溶液中浸泡10min，再用无菌水漂洗6次；
将处理好的茎段用解剖刀每节切成一段，带一个腋芽，用镊子夹住切段平放在培养基A中；
将组培瓶置于温度为25℃培养室，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养，并每天对其培养环境紫外线灭菌30min；
大约30天左右，腋芽萌发，部分在幼苗基部形成拟原球茎；
（2）铁皮石斛原球茎的增殖
在超净工作台上用镊子将幼苗基部萌发形成的拟原球茎均匀的转入到培养基B上；
将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养，并每天对其培养环境紫外线灭菌30min；
可观察到组培瓶中的拟原球茎不断分裂增殖形成大量拟原球茎；
（3）铁皮石斛类原球茎的分化
在超净工作台上用勺子将类原球茎挑出并均匀的转入到培养基C上；
将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养，并每天对其培养环境紫外线灭菌30min；
60-90天左右可以观察到组培瓶中的类原球茎经过分化形成高约1-2cm的小苗；
（4）铁皮石斛小苗的壮苗
在超净工作台上用镊子小心的夹出类原球茎分化形成的小苗放置在事先消毒过的不锈钢接种培养盘上分开每株小苗，并把小苗插入壮苗及生根培养基D中；
将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养并每天对其培养环境紫外线灭菌30min；
60-90天左右可以观察到组培瓶中的小苗经过壮苗形成整齐度基本一致高约3-4cm的大苗；
（5）铁皮石斛大苗的生根
在超净工作台上用镊子小心的夹出铁皮石斛大苗放置在事先消毒过的不锈钢接种培养盘上分开每株大苗，将大苗一根一根的挑出并插入壮苗及生根培养基D中；
将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养并每天对其培养环境紫外线灭菌30min；
60-90天左右可以观察到组培瓶中的大苗长势良好，整齐度相当，叶片大而厚，呈长椭圆形，叶色深绿，每棵苗至少有3-4条发达健壮的根系，株高达到6-8cm；
（6）铁皮石斛组培苗的炼苗与移栽
上半年自2月中旬始至6月下旬可分批将组培瓶放置在连栋大棚离地苗床上，在培养瓶盖一层遮光率50%的遮荫网，晴天上午9：00时至下午16：00打开外遮荫网遮荫，阴雨天不需外遮荫遮荫，在自然光下炼苗三周后取出瓶苗并洗净根部培养基，移栽至松鳞基质中，成活率在95%以上；
下半年自9月初至11月初可分批将组培瓶放置在连栋大棚离地苗床上，在培养瓶盖一层遮光率50%的遮荫网，晴天上午10：00时至下午15：00打开外遮荫网遮荫，阴雨天不需外遮荫遮荫，在自然光下炼苗二周后取出瓶苗并洗净根部培养基，移栽至松鳞基质中，成活率在
90%以上。
9.根据权利要求7或8所述的一种提高铁皮石斛拟原球茎分化率的高效育苗方法，其特征在于，所述方法步骤（2）可以重复进行。
10.根据权利要求9所述的一种提高铁皮石斛拟原球茎分化率的高效育苗方法，其特征在于，所述拟原球茎在继代培养过程中可以不断分裂增殖产生新的拟原球茎，但转接代数不超过10次。
提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基及高效育苗方法
技术领域
背景技术
发明内容
增殖培养基B、用于转入并培育初代诱导培养基A中幼苗基部萌发形成的拟原球茎，并使得所述拟原球茎不断分裂增殖形成大量拟原球茎；
分化培养基C、用于转入并促使增殖培养基B中的所述大量拟原球茎经过分化形成高度为1-2cm的铁皮石斛小苗；
壮苗及生根培养基D、用于转入所述铁皮石斛小苗并壮苗生根形成高度为3-4cm的大苗。
7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸
0.2mg、6-苄氨基嘌呤1 2mg、香蕉0g、琼脂4.4g、白砂糖20g。
~
0.83mg、H3BO3:6.2mg、MnSO4·4H2O:22.3mg、ZnSO4·7H2O:8.6mg、Na2-EDTA:37.3mg、FeSO4·
7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸0.2~
0.3mg、6-苄氨基嘌呤0 0.5mg、香蕉100g、琼脂4.4g、白砂糖30g。
~
0.83mg、H3BO3:6.2mg、MnSO4·4H2O:22.3mg、ZnSO4·7H2O:8.6mg、Na2-EDTA:37.3mg、FeSO4·
7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸0.2~
0.5mg、6-苄氨基嘌呤0mg、香蕉70g、琼脂4.4g、白砂糖20g。
（2）称取4.4g琼脂粉；
（3）待水温达到80℃时加入琼脂粉，搅拌均匀，加热至沸腾；
（4）加入每种培养基所需要的药品，所述药品包括预先配制的元素母液和微量元素母液；
（5）配制培养基B、C、D时称取70-100g香蕉，将其切成小块并用榨汁机打散榨汁；
（6）将榨好的香蕉汁加至热水锅中；
（7）配制培养基D时加入活性炭0.5g；
（8）加入白砂糖20-30g；
（9）待药品和白砂糖全部溶解后加水定容至1L并搅拌均匀；
（10）用pH试纸调pH值为5.8-6.2；
（11）分装，将配制好的培养基倒入组培瓶，倒入量视组培瓶容量大小而定，一般为容器的1/5左右；
（12）高压蒸汽灭菌，121℃，1.5Mpa，21min；
（13）灭完菌的培养基放入接种室内静置，让其降温后凝固。
将成熟铁皮石斛鲜条的茎段用解剖刀每节切成一段，带一个腋芽，用镊子夹住切段平放在培养基A中培育，促使腋芽萌发，部分在幼苗基部形成拟原球茎。
将成熟铁皮石斛鲜条用自来水冲洗干净以后放入超净工作台中，在超净工作台的无菌条件下，将依次加入75%的酒精溶液中浸泡2min，用无菌水漂洗6次，0.1%砷汞溶液中浸泡
10min，用无菌水漂洗6次，1%的次氯酸钠溶液中浸泡10min，再用无菌水漂洗6次。将处理好的茎段用解剖刀每节切成一段，带一个腋芽，用镊子夹住切段平放在培养基A中。将组培瓶置于温度为25℃培养室，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养，并每天对其培养环境紫外线灭菌30min。大约30天左右，腋芽萌发，部分在幼苗基部形成拟原球茎。
30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的类原球茎经过分化形成高约1-2cm的小苗。
30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的小苗经过壮苗形成整齐度基本一致高约3-4cm的大苗。
30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的大苗长势良好，整齐度相当，叶片大而厚，呈长椭圆形，叶色深绿，每棵苗至少有3-4条发达健壮的根系，株高达到6-8cm。
下半年自9月初至11月初可分批将组培瓶放置在连栋大棚离地苗床上，在培养瓶盖一层遮光率50%的遮荫网，晴天上午10：00时至下午15：00打开外遮荫网遮荫，阴雨天不需外遮荫遮荫，在自然光下炼苗二周后取出瓶苗并洗净根部培养基，移栽至松鳞基质中，成活率在
90%以上。
具体实施方式
初代诱导培养基A、用于诱导铁皮石斛茎段腋芽萌发并在部分幼芽基部形成拟原球茎；
增殖培养基B、用于转入并培育初代诱导培养基A中幼苗基部萌发形成的拟原球茎，并使得所述拟原球茎不断分裂增殖形成大量拟原球茎；
分化培养基C、用于转入并促使增殖培养基B中的所述大量拟原球茎经过分化形成高度为1-2cm的铁皮石斛小苗；
壮苗及生根培养基D、用于转入所述铁皮石斛小苗并壮苗生根形成高度为3-4cm的大苗。
7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸
0.2mg、6-苄氨基嘌呤1 2mg、香蕉0g、琼脂4.4g、白砂糖20g。
~
0.83mg、H3BO3:6.2mg、MnSO4·4H2O:22.3mg、ZnSO4·7H2O:8.6mg、Na2-EDTA:37.3mg、FeSO4·
7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸0.2~
0.3mg、6-苄氨基嘌呤0 0.5mg、香蕉100g、琼脂4.4g、白砂糖30g。
~
0.83mg、H3BO3:6.2mg、MnSO4·4H2O:22.3mg、ZnSO4·7H2O:8.6mg、Na2-EDTA:37.3mg、FeSO4·
7H2O:27.8mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.1mg、甘氨酸2.0mg、萘乙酸0.2~
0.5mg、6-苄氨基嘌呤0mg、香蕉70g、琼脂4.4g、白砂糖20g。
（2）称取4.4g琼脂粉；
（3）待水温达到80℃时加入琼脂粉，搅拌均匀，加热至沸腾；
（4）加入每种培养基所需要的药品，所述药品包括预先配制的元素母液和微量元素母液；
（5）配制培养基B、C、D时称取70-100g香蕉，将其切成小块并用榨汁机打散榨汁；
（6）将榨好的香蕉汁加至热水锅中；
（7）配制培养基D时加入活性炭0.5g；
（8）加入白砂糖20-30g；
（9）待药品和白砂糖全部溶解后加水定容至1L并搅拌均匀；
（10）用pH试纸调pH值为5.8-6.2；
（11）分装，将配制好的培养基倒入组培瓶，倒入量视组培瓶容量大小而定，一般为容器的1/5左右；
（12）高压蒸汽灭菌，121℃，1.5Mpa，21min；
（13）灭完菌的培养基放入接种室内静置，让其降温后凝固。
将成熟铁皮石斛鲜条的茎段用解剖刀每节切成一段，带一个腋芽，用镊子夹住切段平放在培养基A中培育，促使腋芽萌发，部分在幼苗基部形成拟原球茎。
将成熟铁皮石斛鲜条用自来水冲洗干净以后放入超净工作台中，在超净工作台的无菌条件下，将依次加入75%的酒精溶液中浸泡2min，用无菌水漂洗6次，0.1%砷汞溶液中浸泡
10min，用无菌水漂洗6次，1%的次氯酸钠溶液中浸泡10min，再用无菌水漂洗6次。将处理好的茎段用解剖刀每节切成一段，带一个腋芽，用镊子夹住切段平放在培养基A中。将组培瓶置于温度为25℃培养室，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养，并每天对其培养环境紫外线灭菌30min。大约30天左右，腋芽萌发，部分在幼苗基部形成拟原球茎。
30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的类原球茎经过分化形成高约1-2cm的小苗。
30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的小苗经过壮苗形成整齐度基本一致高约3-4cm的大苗。
30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的大苗长势良好，整齐度相当，叶片大而厚，呈长椭圆形，叶色深绿，每棵苗至少有3-4条发达健壮的根系，株高达到6-8cm。
下半年自9月初至11月初可分批将组培瓶放置在连栋大棚离地苗床上，在培养瓶盖一层遮光率50%的遮荫网，晴天上午10：00时至下午15：00打开外遮荫网遮荫，阴雨天不需外遮荫遮荫，在自然光下炼苗二周后取出瓶苗并洗净根部培养基，移栽至松鳞基质中，成活率在
90%以上。
1、配制培养基A、B、C、D。
0.2mg。将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养，并每天对其培养环境紫外线灭菌30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的类原球茎经过分化形成高约1-2cm的小苗。
6-苄氨基嘌呤0mg。将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养并每天对其培养环境紫外线灭菌30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的大苗长势良好，整齐度相当，叶片大而厚，呈长椭圆形，叶色深绿，每棵苗至少有3-4条发达健壮的根系，株高达到6-8cm。
0.2mg。将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养，并每天对其培养环境紫外线灭菌30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的类原球茎经过分化形成高约1-2cm的小苗。
6-苄氨基嘌呤0.1mg。将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养并每天对其培养环境紫外线灭菌30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的大苗长势良好，整齐度相当，叶片大而厚，呈长椭圆形，叶色深绿，每棵苗至少有3-4条发达健壮的根系，株高达到6-8cm。
0.2mg。将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养，并每天对其培养环境紫外线灭菌30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的类原球茎经过分化形成高约1-2cm的小苗。
6-苄氨基嘌呤0.1mg。将组培瓶置于温度为25℃，光照2000lx，每日光照12h的环境下进行培养并每天对其培养环境紫外线灭菌30min。60-90天左右可以观察到组培瓶中的大苗长势良好，整齐度相当，叶片大而厚，呈长椭圆形，叶色深绿，每棵苗至少有3-4条发达健壮的根系，株高达到6-8cm。
90%以上。
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