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一种获取苔草无菌组培苗的方法

阅读：192发布：2020-05-11

专利汇可以提供一种获取苔草无菌组培苗的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种获取苔草无菌组培苗的方法，涉及苔草培苗技术领域，选择健康的优良植株，高度控制在3毫米到6毫米，去除植株的顶部叶尖，预处理后，用70％以上的酒精擦拭植体表面，将擦拭后的植体使用清水冲洗20到30分钟，然后使用无菌水冲洗1到3次，将冲洗后的植体种入初代培养基，每瓶接种2株，获得苔草无菌苗，初代培养基内部添加9-12mg/L的6-BA、20-30g/L的蔗糖，培养30-40天后转入下一阶段，将幼芽种入继代培养基，在继代培养基的内部添加初代培养基的养料，培养20天成苗，将炼苗后的生根组培苗移栽于移栽基质中，培育1-2个月至成苗。该获取苔草无菌组培苗的方法，具备感染几率低和高萌发率的优点。，下面是一种获取苔草无菌组培苗的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.获取苔草无菌组培苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，采集外植体：选择远离地面的植物材料；
S2，消毒：包括流水冲洗1-2小时、在含有抗生素的水中预先水培养、乙醇消毒、次氯酸钠消毒、升汞消毒中的一种或多种的组合；
S3，抑菌培养：培养基包括羧苄青霉素、头孢霉素、氨中噻肟头孢菌素、四环素、利福平或多粘菌素B中的一种或两者以上的组合；
S4，将步骤S3培养的幼苗炼苗后获得的生根组培苗移栽于移栽基质中，培育。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：该方法具体按以下步骤进行：
S1，采集外植体：选择健康的优良植株，高度控制在3毫米到6毫米，去除植株的顶部叶尖；
S2，消毒：将擦拭后的植体使用清水冲洗60-80分钟，在含有抗生素的水中预先水培养
2-3天，然后再使用70％乙醇消毒2分钟，5％次氯酸钠消毒20分钟或1‰的升汞消毒10分钟，然后使用无菌水冲洗3-5次；
S3，抑菌培养：将冲洗后的植体种入浓度为250mg/L羧苄青霉素或头孢霉素的培养基进行培养，在培养基中分别加入浓度为25mg/L的氨中噻肟头孢菌素、浓度为25mg/L的四环素、浓度为6mg/L的利福平、浓度为6mg/L的多粘菌素B、浓度为9-12mg/L的6-BA、浓度为20-30g/L的蔗糖培养30-40天后转入下一阶段；
S4，苔草芽分化培养：分化培养的培养基为MS+6-BA浓度1.5-2mg/L+NAA浓度0.1-
0.2mg/L或MS+6-BA浓度3.5-4mg/L+IAA浓度0.2-0.3mg/L，培养20-25天；
S5，将炼苗后的生根组培苗移栽于移栽基质中，培育1-2个月成苗。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S4中所述分化培养的培养基为MS+6-BA1.5 mg/L+NAA 0.1mg/L或MS+6-BA3.5 mg/L+IAA 0.2mg/L。
4.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于：所述抑菌培养光照至少12个小时/天光照，光照强度2000-3100Lx，培养温度在25-28℃，Ph5.8～6。
5.如权利要求4所述的一种获取苔草无菌组培苗的方法，其特征在于：所述S2消毒可采用如下方式：将擦拭后的植体使用清水冲洗60-80分钟，在含有抗生素的水中预先水培养2-
3天，然后再使用70％乙醇消毒2分钟，1‰的汞消毒10分钟，然后使用无菌水冲洗3-5次。
6.如权利要求1至4任一项所述的方法，其特征在于，所述抑菌培养光照为12个小时/天光照，光照强度为2000Lx，培养温度为25℃，Ph5.8。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述移栽基质由泥炭、珍珠岩、草炭、和蛭石按照1:2:1:2配制而成。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤S1中所述植物材料包括幼穗幼胚、茎尖、侧芽或幼根中的一种或多种。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：所述炼苗为：所述幼苗根长2-4cm时解除密封，炼苗5-7天。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述分化培养的培养基内部PH值控制在
5.8-6之间。

说明书全文

一种获取苔草无菌组培苗的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及苔草培苗技术领域，具体为一种获取苔草无菌组培苗的方法。

背景技术

[0002] 苔草，即薹草，是莎草科薹草属植物。多年生草本植物，具地下根状茎，秆丛生或散生，三棱形，叶片线形，稀为披针形，小坚果三棱形包于果囊内，全球约2000种，我国苔草属植物约500种。

[0003] 薹草属植物主要观赏部位为叶片和株型，叶片颜色和形状丰富多彩，是理想的草坪草种和环境保护植物，对恢复与改善生态环境有重要作用，同时在水土保持、公路绿化、城市园林绿化和运动场草坪建设中具有较高的应用价值，但由于苔草主要为外植体贴近地，极易跟土壤等接触带来很多污染源，苔草种子容易感染造，外植体消毒很困难，常规消毒方式污染率极高，培养过程中还会出现内生菌的污染等问题，造成低萌发率，为此我们推出了一种获取苔草无菌组培苗的方法。

发明内容

[0004] 本发明的目的是提供一种获取苔草无菌组培苗的方法，具备感染几率低和高萌发率的优点，解决了苔草种子具有容易感染和低萌发率的问题。

[0005] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种获取苔草无菌组培苗的方法，该方法按以下步骤进行：

[0006] S1，采集外植体：选择远离地面的植物材料；

[0007] S2，消毒：包括流水冲洗1-2小时、在含有抗生素的水中预先水培养、乙醇消毒、次氯酸钠消毒、升汞消毒中的一种或多种的组合；

[0008] S3，抑菌培养：培养基包括羧苄青霉素、头孢霉素、氨中噻肟头孢菌素、四环素、利福平或多粘菌素B中的一种或两者以上的组合；

[0009] S4，将步骤S3培养的幼苗炼苗后获得的生根组培苗移栽于移栽基质中，培育。

[0010] 进一步的，S1，采集外植体：选择健康的优良植株，高度控制在3毫米到6毫米，去除植株的顶部叶尖；

[0011] S2，消毒：将擦拭后的植体使用清水冲洗60-80分钟，在含有抗生素的水中预先水培养2-3天，然后再使用70％乙醇消毒2分钟，5％次氯酸钠消毒20分钟或1‰的升汞消毒10分钟，然后使用无菌水冲洗3-5次；

[0012] S3，抑菌培养：将冲洗后的植体种入浓度为250mg/L羧苄青霉素或头孢霉素的培养基进行培养，在培养基中分别加入浓度为25mg/L的氨中噻肟头孢菌素、浓度为25mg/L的四环素、浓度为6mg/L的利福平、浓度为6mg/L的多粘菌素B、浓度为9-12mg/L的6-BA、浓度为20-30g/L的蔗糖培养30-40天后转入下一阶段；

[0013] S4，苔草芽分化培养：分化培养的培养基为MS+6-BA浓度1.5-2mg/L+NAA浓度0.1-0.2mg/L或MS+6-BA浓度3.5-4mg/L+IAA浓度0.2-0.3mg/L，培养20-25天；

[0014] S5，将炼苗后的生根组培苗移栽于移栽基质中，培育1-2个月成苗。

[0015] 进一步的，步骤S3中所述分化培养的培养基为MS+6-BA1.5 mg/L+NAA 0.1mg/L或MS+6-BA3.5 mg/L+IAA 0.2mg/L。

[0016] 进一步的，所述抑菌培养光照至少12个小时/天光照，光照强度2000-3100Lx，培养温度在25-28℃，Ph5.8～6。

[0017] 进一步的，所述S2消毒可采用如下方式：将擦拭后的植体使用清水冲洗60-80分钟，在含有抗生素的水中预先水培养2-3天，然后再使用70％乙醇消毒2分钟，1‰的汞消毒10分钟，然后使用无菌水冲洗3-5次。

[0018] 进一步的，所述抑菌培养光照为12个小时/天光照，光照强度为2000Lx，培养温度为25℃，Ph5.8。

[0019] 进一步的，所述移栽基质由泥炭、珍珠岩、草炭、和蛭石按照1:2:1:2配制而成。

[0020] 进一步的，步骤S1中所述植物材料包括幼穗幼胚、茎尖、侧芽或幼根中的一种或多种。

[0021] 进一步的，所述炼苗为：所述幼苗根长2-4cm时解除密封，炼苗5-7天。

[0022] 进一步的，所述分化培养的培养基内部PH值控制在5.8-6之间。

[0023] 1、该获取苔草无菌组培苗的方法，通过使用无菌水法有效地防止了外植体接种污染率，接种成功率达85％，生根的比例达90％以上，降低了生产成本，工厂化生产的苔草根苗数量与可扩苗数量比值应大于0.82。

[0024] 2、该获取苔草无菌组培苗的方法，通过将苔草种子在培养基上培养，为苔草的快速繁殖提供了大量的外植体来源，经过初代培养和继代培养生成大量的苔草原球茎，然后经常规的炼苗和移栽培养实现了苔草的快速繁殖，比现有技术方法的繁殖速率提高50％，成活率提高70％。附图说明

[0025] 图1是现有技术中贴地苔草萌发情况示意图；

[0026] 图2是本发明实施例提供苔草萌发情况示意图；

[0027] 图3是本发明实施例完全消毒后开始进行抑菌培养示意图；

[0028] 图4是本发明实施例抑菌培养过程的苔草成长示意图。

具体实施方式

[0029] 实施例1

[0030] S1，采集外植体：选择健康的优良植株，优先选择顺序是幼穗幼胚、茎尖、侧芽、幼根，高度控制在3毫米到6毫米，采用灭过菌的手术刀去除植株的顶部叶尖；

[0031] S2，消毒：将擦拭后的植体使用清水冲洗60-80分钟，在含有抗生素的水中预先水培养2-3天，然后再使用70％乙醇消毒2分钟，5％次氯酸钠消毒20分钟，然后使用无菌水冲洗3-5次；

[0032] S3，如图3所示，完全消毒后进行抑菌培养：将冲洗后的植体种入浓度为250mg/L羧苄青霉素或浓度为头孢霉素的培养基进行培养，在培养基中分别加入浓度为25mg/L的氨中噻肟头孢菌素、浓度为25mg/L的四环素、浓度为6mg/L的利福平、浓度为6mg/L的多粘菌素B、浓度为9-12mg/L的6-BA、浓度为20-30g/L的蔗糖培养30-40天后转入下一阶段；经过S3步骤后的成长情况如图4所示，可以发现苔草外植体污染问题已经初步解决，无菌苗系也已经初步得到。

[0033] S4，苔草芽分化培养：分化培养的培养基为MS+6-BA浓度1.5mg/L+NAA浓度0.1mg/L或MS+6-BA浓度3.5mg/L+IAA浓度0.2/L，PH值控制在5.8-6之间，培养20-25天，当幼苗根长2-4cm时将培养瓶的封口膜打开，炼苗5-7天；

[0034] S5，将炼苗后的生根组培苗移栽于移栽基质中，培育1-2个月成苗。移栽基质由泥炭、珍珠岩、草炭、和蛭石按照1:2:1:2配制而成。

[0035] 需要说明的是，抑菌培养光照需满足12个小时/天光照，光照强度2000-3100Lx，培养温度在25-28摄氏度，Ph5.8。

[0036] 实施例2

[0037] S1，采集外植体：选择健康的优良植株，优先选择顺序是幼穗幼胚、茎尖、侧芽、幼根，高度控制在3毫米到6毫米，采用灭过菌的手术刀去除植株的顶部叶尖；

[0038] S2，消毒：将擦拭后的植体使用清水冲洗60-80分钟，在含有抗生素的水中预先水培养2-3天，然后再使用70％乙醇消毒2分钟，1‰的汞消毒10分钟，然后使用无菌水冲洗3-5次；

[0039] S3，抑菌培养：将冲洗后的植体种入浓度为250mg/L羧苄青霉素或浓度为头孢霉素的培养基进行培养，在培养基中分别加入浓度为25mg/L的氨中噻肟头孢菌素、浓度为25mg/L的四环素、浓度为6mg/L的利福平、浓度为6mg/L的多粘菌素B、浓度为9-12mg/L的6-BA、浓度为20-30g/L的蔗糖培养30-40天后转入下一阶段；

[0040] S4，苔草芽分化培养：分化培养的培养基为MS+6-BA浓度2mg/L+NAA浓度0.2mg/L或MS+6-BA浓度4mg/L+IAA浓度0.3mg/L，PH值控制在5.8-6之间，培养20-25天，当幼苗根长2-4cm时将培养瓶的封口膜打开，炼苗5-7天；

[0041] S5，将炼苗后的生根组培苗移栽于移栽基质中，培育1-2个月成苗。移栽基质由泥炭、珍珠岩、草炭、和蛭石按照1:2:1:2配制而成。

[0042] 需要说明的是，抑菌培养光照需满足12个小时/天光照，光照强度2000-3100Lx，培养温度在25-28摄氏度，Ph5.8。

[0043] 具体的，本发明通过使用无菌水法有效地防止了外植体接种污染率，接种成功率达85％，生根的比例达90％以上，降低了生产成本，工厂化生产的苔草根苗数量与可扩苗数量比值应大于0.82，通过将苔草种子在培养基上培养，为苔草的快速繁殖提供了大量的外植体来源，经过初代培养和继代培养生成大量的苔草原球茎，然后经常规的炼苗和移栽培养实现了苔草的快速繁殖，比现有技术方法的繁殖速率提高50％，成活率提高70％。

[0044] 具体的如图1所示，为贴地苔草，消毒非常困难，遭受细菌感染后，造成萌发率低，叶片小，生长速度慢。

[0045] 图2为用本方案进行培苗的苔草，枝叶茂盛，相同时间内，生长更迅速，且未发生黄叶病。

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