一种农杆菌介导的辣椒遗传转化方法
专利汇可以提供一种农杆菌介导的辣椒遗传转化方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种农杆菌介导的辣椒遗传转化方法。本发明通过培养基、培养方法等的改进降低了农杆菌侵染液的浓度，减轻了辣椒子叶的超敏反应，有利于后续的再生过程；菌体浸染液中不添加乙酰丁香 酮 Acetosyringone(AS)，子叶和农杆菌固体MS共培养培养基中添加乙酰丁香酮(AS)和二硫苏糖醇Dithiothreitol(DTT)可显著促进转化效率的提高。本发明对部分基因型进行了转化验证，在大部分基因型中可显著促进转化效率的提高。表明该方法可以用于辣椒转基因和基因编辑研究中的遗传转化，进一步促进辣椒转基因植株的获得。，下面是一种农杆菌介导的辣椒遗传转化方法专利的具体信息内容。
1.一种农杆菌介导的辣椒遗传转化方法，其特征在于包含以下步骤：
(1)消毒后的辣椒种子播种于含蔗糖的固体MS培养基，取苗龄14d的幼苗子叶作为外植体，用于农杆菌介导的遗传转化；其中，所述的固体MS培养基配方为含维生素的MS基础培养基4～5g/L，蔗糖30g/L，琼脂粉8g/L；
(2)将含卡纳霉素和利福平抗性标记基因和目的基因的载体转化根癌农杆菌EHA105，
25℃～28℃条件下培养待长出明显的菌落，挑取阳性单克隆菌落，接种在包含卡那霉素和利福平的LB液体培养基中，振荡培养至OD 600＝0.8～1.2，取上述菌液加入包含卡那霉素和利福平的LB液体培养基中，振荡培养至OD 600＝0.5～0.8；
(3)将菌液在4℃，6000rpm条件下离心5min，用液体MS培养基重悬浮菌体并清洗，再次用液体MS培养基重悬菌体，调整菌体侵染液的最终浓度为OD 600＝0.08-0.12；所述的液体MS培养基配方为含维生素的MS基础培养基4～5g/L+蔗糖30g/L，pH5.8；
(4)将子叶外植体在菌体侵染液中浸染15分钟，取出置于灭菌后的滤纸上吸干残留菌液，将子叶背面朝下整齐排布于共培养培养基中,，共培养3d，完成目的基因的遗传转化过程；所述的共培养培养基配方为含维生素的MS基础培养基4～5g/L+蔗糖30g/L+AS 15～
20mg/L+DTT 100～150mg/L+琼脂粉8g/L。
2.根据权利要求1所述的农杆菌介导的辣椒遗传转化方法，其特征在于步骤(1)所述的固体MS培养基配方为MS基础培养基4.43g/L，蔗糖30g/L，琼脂粉8g/L。
3.根据权利要求1所述的农杆菌介导的辣椒遗传转化方法，其特征在于步骤(2)中所述的包含卡那霉素和利福平的LB液体培养基中包含50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平。
4.根据权利要求3所述的农杆菌介导的辣椒遗传转化方法，其特征在于步骤(2)中取上述菌液50ul至包含50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平的50ml LB液体培养基中。
5.根据权利要求3所述的农杆菌介导的辣椒遗传转化方法，其特征在于步骤(3)中所述的液体MS培养基配方为含维生素的MS基础培养基4.43g/L+蔗糖30g/L，pH5.8。
6.根据权利要求3所述的农杆菌介导的辣椒遗传转化方法，其特征在于步骤(2)中所述的振荡培养条件为28℃，200r/min摇床培养。
7.根据权利要求4所述的农杆菌介导的辣椒遗传转化方法，其特征在于步骤(4)中所述的共培养培养基配方为为含维生素的MS基础培养基4.43g/L+蔗糖30g/L+AS 20mg/L+DTT
150mg/L+琼脂粉8g/L。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的农杆菌介导的辣椒遗传转化方法，其特征在于包含以下步骤：
(1)辣椒种子无菌水冲洗3次，75％酒精浸泡2分钟，无菌水冲洗3次，1％的次氯酸钠浸泡30分钟，无菌水浸泡冲洗3次，每次5分钟。消毒后的种子播种于固体MS培养基，苗龄14d的幼苗子叶作为外植体，用于农杆菌介导的遗传转化；
(2)将含卡纳霉素和利福平抗性标记基因和目的基因的载体转化根癌农杆菌EHA105，
28℃条件下培养下36～48h，待长出明显的菌落，挑取阳性单克隆菌落，接种在包含终浓度为50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平的LB液体培养基中。28℃，200r/min摇床中培养24h至OD
600＝0.8～1.2，从上述菌液中取50ul至包含50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平的50ml LB液体培养基中，28℃，200r/min摇床中培养17h～20h至OD 600＝0.5～0.8；
(3)将菌液在4℃，6000rpm条件下离心5min，用所述的液体MS培养基重悬浮菌体，清洗。
在4℃，6000rpm条件下离心5min，弃上清，再次用所述的液体MS培养基重悬菌体，调整菌体侵染液的最终浓度为OD 600＝0.08-0.12；
(4)将子叶外植体在菌体侵染液中浸染15分钟，取出置于灭菌后的滤纸上吸干残留菌液，将子叶背面朝下整齐排布于所述的共培养培养基中，共培养3d，完成目的基因的遗传转化过程。
一种农杆菌介导的辣椒遗传转化方法
技术领域
背景技术
发明内容
具体实施方式
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 棉花种子剥皮加倍的种植方法 | 2020-05-12 | 887 |
| 一种辣椒育苗方法 | 2020-05-13 | 14 |
| 一株降解PAEs的植物内生菌及在修复PAEs污染土壤中的应用 | 2020-05-08 | 121 |
| 一种高效的云锦杜鹃直接体细胞胚胎发生方法 | 2020-05-12 | 816 |
| 安徽羽叶报春无菌苗的培养方法 | 2020-05-12 | 423 |
| 巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用 | 2020-05-08 | 954 |
| 一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法 | 2020-05-11 | 710 |
| 一种大黄幼苗复壮培养的方法 | 2020-05-08 | 566 |
| 提高铁皮石斛拟原球茎分化率的培养基及高效育苗方法 | 2020-05-11 | 292 |
| 一种红芽大戟繁育方法 | 2020-05-13 | 794 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
