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一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌 发酵中药制剂、制备工艺与用途

阅读：6发布：2020-05-08

专利汇可以提供一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂、制备工艺与用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂、制备工艺与用途，所述制剂包括焦三仙、豆粕和百里香油；所述制剂通过驯化的枯草芽孢杆菌发酵所述焦三仙与所述豆粕组成的混合物，再将发酵后的所述混合物与百里香油混匀制成。制备工艺包括步骤：驯化枯草芽孢杆菌：用含有百里香油的枯草芽孢杆菌培养基对枯草芽孢杆菌传代培养，得到驯化菌液；发酵：将焦三仙和豆粕的混合物灭菌后，将灭菌的含有百里香油的枯草芽孢杆菌培养基与所述混合物混匀，加入驯化菌液，密闭培养，得到发酵物；将发酵物与百里香油混匀后，得到油菌复合物。本发明制得的油菌复合物不仅能够充分发挥其保健防疫功能，同时油菌复合物尤其适用于家禽和家畜的饲养。，下面是一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂、制备工艺与用途专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂，其特征在于：所述制剂包括焦三仙、豆粕和百里香油；所述制剂通过驯化的枯草芽孢杆菌发酵所述焦三仙与所述豆粕组成的混合物，再将发酵后的所述混合物与百里香油混匀制成。
2.根据权利要求1所述的一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂，其特征在于：所述焦三仙、豆粕和百里香油的重量比为90～99:1～10:2～20。
3.根据权利要求2所述的一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂，其特征在于：所述驯化的枯草芽孢杆菌是采用加入了精油包合粉的培养基传代培养得到的；所述精油包合粉由百里香油和β-环糊精制成；所述驯化的枯草芽孢杆菌为经过传代培养得到的第Ⅰ代-第X代驯化枯草芽孢杆菌。
4.一种权利要求1-3任意一项所述的一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂的制备工艺，其特征在于：包括步骤：
驯化枯草芽孢杆菌：用含有百里香油的枯草芽孢杆菌培养基对枯草芽孢杆菌传代培养，得到驯化菌液；
发酵：将焦三仙和豆粕的混合物灭菌后，将灭菌的含有百里香油的枯草芽孢杆菌培养基与所述混合物混匀，加入驯化菌液，密闭培养，得到发酵物；将发酵物与百里香油混匀后，得到油菌复合物。
5.根据权利要求4所述的一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂的制备工艺，其特征在于：所述驯化菌液为第I代-第X代驯化菌液。
6.根据权利要求5所述的一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂的制备工艺，其特征在于：所述含有百里香油的枯草芽孢杆菌培养基由精油包合粉和枯草芽孢杆菌培养基加水混合而成；所述精油包合粉的制备步骤如下：采用β-环糊精加水溶解，调节pH值为8～11，于40-100℃下，边搅拌边加入百里香油至液面出现油滴后，调节pH值为4～
7，过滤，干燥得到精油包合粉。
7.根据权利要求6所述的一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂的制备工艺，其特征在于：得到第I代-第X代中任意一代驯化菌液的具体步骤如下：取枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉加水溶解，调节pH值为6.5，灭菌凉至室温，加入上一代枯草芽孢杆菌液，振摇，28～37℃培养，得到下一代驯化菌液。
8.根据权利要求7所述的一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂的制备工艺，其特征在于：所述发酵步骤的具体步骤为：焦三仙和豆粕混匀灭菌得到第一混合物；枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉加水混匀灭菌得到第二混合物；将第一混合物和第二混合物混合，室温下加入驯化菌液，密闭，28～37℃培养，阴干，加入百里香油混匀，得到油菌复合物。
9.根据权利要求8所述的一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂的制备工艺，其特征在于：
当上一代枯草芽孢杆菌液为枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第I代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：0.5；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为99:
1:2:30:0.2；
当上一代枯草芽孢杆菌液为第I代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第II代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：
0.4；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为98:2:4:30:0.4；
当上一代枯草芽孢杆菌液为第II代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第III代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为
60.5：0.6；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为97:3:6:30:0.6；
当上一代枯草芽孢杆菌液为第III代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第IV代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为
60.5：0.5；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为96:4:8:30:0.8；
当上一代枯草芽孢杆菌液为第IV代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第V代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：
0.8；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为95:5:10:30:1.0；
当上一代枯草芽孢杆菌液为第V代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第VI代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：
0.7；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为94:6:12:30:1.2；
当上一代枯草芽孢杆菌液为第VI代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第VII代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为
60.5：1；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为93:7:14:30:1.4；
当上一代枯草芽孢杆菌液为第VII代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第VIII代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为
60.5：0.9；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为92:8:16:30:1.6；
当上一代枯草芽孢杆菌液为第VIII代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第IX代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为
60.5：1.2；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为91:9:18:30:1.8；
当上一代枯草芽孢杆菌液为第IX代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第X代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：
1.1；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为90:10:20:30:2.0。
10.权利要求1-4任意一项所述的活菌制剂在制备饲料添加剂中的用途。

说明书全文

一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌 发酵中药制剂、

制备工艺与用途

技术领域

[0001] 本发明属于饲料添加剂技术领域，具体涉及一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂、制备工艺与用途。

背景技术

[0002] 百里香油具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗痉挛、抗氧化活性等作用。研究显示百里香油对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌、寄生曲霉菌等具有明显抑制作用。有研究表明，百里香油具有很强的抗氧化性，抗氧化能力高于维生素E。通过其抗氧化、免疫调节和改善肠道菌群等功能对动物的作用，百里香油能够有效改善动物的生产性能；但是，以作为生长促进剂使用，对畜禽日增重、日采食量、料肉比的影响差异无统计学意义。

[0003] 枯草芽孢杆菌，作为一种安全有效的益生菌，现以被广泛地应用于畜牧生产等方面，并于2013年收录入《饲料添加剂品种目录》，实践证明，其有确切的免疫保健以及促进动物生长功能，主要体现在枯草芽孢杆菌通过占位竞争、产生抗菌物质、溶菌作用、生物夺氧等作用而起抗菌抗感染作用，同时，还能增强畜禽免疫力，促进消化道内其他益生菌生长，促进消化吸收、补充多种维生素等。

[0004] 百里香油与枯草芽孢杆菌，虽为两种不同的饲料添加剂品种，但是，从其在饲料中所起的作用来看，却有相似或相互补的地方。随着限抗减抗政策的发布实施，抗菌药正逐步退出饲料添加剂的队伍，而高度集中饲养条件下的保健需求却一点也不会减少。百里香油与枯草芽孢杆菌，在实际应用中虽然能部分满足畜牧业高度集约化下即提高产量又能保健，同时又满足天然、无公害要求的需求，但也存在这样那样的不足，促生长和保健效果难以和抗菌药水平。因此，需要从目前已初步投入使用的天然产物中去寻找相应的品种或相关产物的组合物。

[0005] 在现有的技术中，百里香油作为一种具有抗菌功能的成分，对枯草芽孢杆菌有明显的抑制作用，因为对枯草芽孢杆菌活菌存活带来不利的影响。但是，就从促进动物生产的功能方向来说，两者分别对动物生长与生产产生具有优良的作用，但是由于两者相互冲突，目前现有技术中还没有一种饲料添加剂同时具有百里香油和枯草芽孢杆菌的功能和作用。

发明内容

[0006] 为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂、制备工艺与用途。

[0007] 本发明所采用的技术方案为：

[0008] 一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂，所述制剂包括焦三仙、豆粕和百里香油；所述制剂通过驯化的枯草芽孢杆菌发酵所述焦三仙与所述豆粕组成的混合物，再将发酵后的所述混合物与百里香油混匀制成。

[0009] 进一步的，所述焦三仙、豆粕和百里香油的重量比为90～99:1～10:2～20。

[0010] 进一步的，所述驯化的枯草芽孢杆菌是采用加入了精油包合粉的培养基传代培养得到的；所述精油包合粉由百里香油和β-环糊精制成；所述驯化的枯草芽孢杆菌为经过传代培养得到的第Ⅰ代-第X代驯化枯草芽孢杆菌。

[0011] 一种含百里香油与中药的枯草芽孢杆菌活菌发酵中药制剂的制备工艺，包括步骤：

[0012] 驯化枯草芽孢杆菌：用含有百里香油的枯草芽孢杆菌培养基对枯草芽孢杆菌传代培养，得到驯化菌液；

[0013] 发酵：将焦三仙和豆粕的混合物灭菌后，将灭菌的含有百里香油的枯草芽孢杆菌培养基与所述混合物混匀，加入驯化菌液，密闭培养，得到发酵物；将发酵物与百里香油混匀后，得到油菌复合物。

[0014] 进一步的，所述驯化菌液为第I代-第X代驯化菌液。

[0015] 进一步的，所述含有百里香油的枯草芽孢杆菌培养基由精油包合粉和枯草芽孢杆菌培养基加水混合而成；所述精油包合粉的制备步骤如下：采用β-环糊精加水溶解，调节pH值为8～11，于40-100℃下，边搅拌边加入百里香油至液面出现油滴后，调节pH值为4～7，过滤，干燥得到精油包合粉。

[0016] 进一步的，得到第I代-第X代中任意一代驯化菌液的具体步骤如下：取枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉加水溶解，调节pH值为6.5，灭菌凉至室温，加入上一代枯草芽孢杆菌液，振摇，28～37℃培养，得到下一代驯化菌液。

[0017] 进一步的，所述发酵步骤的具体步骤为：焦三仙和豆粕混匀灭菌得到第一混合物；枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉加水混匀灭菌得到第二混合物；将第一混合物和第二混合物混合，室温下加入驯化菌液，密闭，28～37℃培养，阴干，加入百里香油混匀，得到油菌复合物。

[0018] 进一步的，当上一代枯草芽孢杆菌液为枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第I代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：0.5；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为99:1:2:30:0.2；

[0019] 当上一代枯草芽孢杆菌液为第I代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第II代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：0.4；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为98:2:4:30:0.4；

[0020] 当上一代枯草芽孢杆菌液为第II代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第III代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：0.6；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为97:3:6:30:0.6；

[0021] 当上一代枯草芽孢杆菌液为第III代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第IV代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：0.5；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为96:4:8:30:0.8；

[0022] 当上一代枯草芽孢杆菌液为第IV代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第V代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：0.8；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为95:5:10:30:1.0；

[0023] 当上一代枯草芽孢杆菌液为第V代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第VI代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：0.7；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为94:6:12:30:1.2；

[0024] 当上一代枯草芽孢杆菌液为第VI代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第VII代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：1；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为93:7:14:30:1.4；

[0025] 当上一代枯草芽孢杆菌液为第VII代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第VIII代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：0.9；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为92:8:16:30:1.6；

[0026] 当上一代枯草芽孢杆菌液为第VIII代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第IX代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：1.2；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为91:9:18:30:1.8；

[0027] 当上一代枯草芽孢杆菌液为第IX代枯草芽孢杆菌液时，下一代枯草芽孢杆菌液为第X代枯草芽孢杆菌液，所述驯化步骤的枯草芽孢杆菌培养基与精油包合粉的重量比为60.5：1.1；所述发酵步骤中焦三仙、豆粕、百里香油、枯草芽孢杆菌培养基和精油包合粉的重量比为90:10:20:30:2.0。

[0028] 活菌制剂在制备饲料添加剂中的用途。

[0029] 本发明的有益效果为：本发明通过将微量百里香油加入枯草芽孢杆菌培养基，对枯草芽孢杆菌进行传代驯化，用驯化后的枯草芽孢杆菌发酵焦麦芽、焦神曲、焦山楂(此三物合称“焦三仙”)与豆粕混合物，再将经发酵后焦三仙与豆粕混合物与适量百里香油混合而成。这种组合物不仅没有表现出相互不利影响使双方功能降低，反而表现出高度功能协同性；同时使枯草芽孢杆菌的保存期大大延长。用于促进动物生长和生产，其性能远远高于单独使用百里香油或枯草芽孢杆菌；采用本发明的活菌制剂制成的饲料添加剂能够显著的提高家禽畜的免疫水平，尤其是对于猪而言，无论是对仔猪血液中嗜中性白粒细胞百分数的影响，还是对仔猪猪瘟抗体水平、仔猪淋巴细胞转化率的影响，以及促进仔猪的生长，均优于黄芪多糖。由此可知，本发明制得的油菌复合物不仅能够充分发挥其保健防疫功能，同时油菌复合物尤其适用于家禽(例如鸡、鸭、鹅) 和家畜(例如猪、牛、羊、马、兔)的饲养。

具体实施方式

[0030] 下面结合具体实施例对本发明做进一步阐释。

[0031] 本发明中的下一代和上一代用于表示相邻的两代驯化枯草芽孢杆菌液；如第III代驯化枯草芽孢杆菌液的上一代为第II代驯化枯草芽孢杆菌液，以此类推。

[0032] 实施例1

[0033] 材料：β-环糊精(山东滨州智源生物科技有限公司)；百里香油(江西鑫森天然植物油有限公司)；柠檬酸钠(市售)。

[0034] 取β-环糊精(1～30份)，加水(100份)并加热使溶解，加柠檬酸钠调节 pH至(8～11)，保温(40℃～100℃)，边搅拌(60～600转/min)边缓慢加(0.5～30份/min)百里香油至液面出现油滴为止，加盐酸调节pH至(4～7)，凉至室温，过滤，40～60℃干燥，得百里香油β-环糊精包合粉(简称精油包合粉)，百里香油含量为55％。

[0035] 实施例2

[0036] 材料：枯草芽孢杆菌标准菌株(中国普通微生物菌种保藏管理中心)；精油包合粉(实施例1制备)，焦三仙(焦麦芽、焦神曲、焦山楂各等份混合，焦麦芽、焦神曲、焦山楂均四川科伦中药饮片有限公司产品)，其他均为市售产品。

[0037] 枯草芽孢杆菌培养基：由葡萄糖20份+蛋白胨15份+氯化钠5份+牛肉膏 0.5份+琼脂20份组成。

[0038] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5， 121℃灭菌15min，凉至室温，加枯草芽孢杆菌冻存菌种一支，60～100r/min振摇，28～37℃培养24～
48h，既得活化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0039] 取焦三仙94份、豆粕4份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉0.2份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加活化菌液20份，密闭，28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加精油包合粉10份，混匀，得油菌复合对照物。

[0040] 实施例3

[0041] 材料：与实施例2相同。

[0042] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉0.5份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加枯草芽孢杆菌冻存菌种一支， 60～100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅰ代驯化菌液。取出于4～ 6℃保存备用。

[0043] 取焦三仙99份、豆粕1份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉0.2份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅰ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加百里香油2份，混匀，得油菌复合物Ⅰ。

[0044] 实施例4

[0045] 材料：第Ⅰ代驯化菌液(实施例3制备)；其他与实施例2相同。

[0046] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉0.4份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加第Ⅰ代驯化菌液10份，60～ 100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅱ代驯化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0047] 取焦三仙98份、豆粕2份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉0.4份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅱ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加百里香油4份，混匀，得油菌复合物Ⅱ。

[0048] 实施例5

[0049] 材料：第Ⅱ代驯化菌液(实施例4制备)；其他与实施例2相同。

[0050] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉0.6份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加第Ⅱ代驯化菌液10份，60～ 100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅲ代驯化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0051] 取焦三仙97份、豆粕3份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉0.6份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅲ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加百里香油6份，混匀，得油菌复合物Ⅲ。

[0052] 实施例6

[0053] 材料：第Ⅲ代驯化菌液(实施例5制备)；其他与实施例2相同。

[0054] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉0.5份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加第Ⅲ代驯化菌液10份，60～ 100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅳ代驯化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0055] 取焦三仙96份、豆粕4份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉0.8份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅳ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加百里香油8份，混匀，得油菌复合物Ⅳ。

[0056] 实施例7

[0057] 材料：第Ⅳ代驯化菌液(实施例6制备)；其他与实施例2相同。

[0058] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉0.8份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加第Ⅳ代驯化菌液10份，60～ 100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅴ代驯化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0059] 取焦三仙95份、豆粕5份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉1.0份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅴ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加百里香油10份，混匀，得油菌复合物Ⅴ。

[0060] 实施例8

[0061] 材料：第Ⅴ代驯化菌液(实施例7制备)；其他与实施例2相同。

[0062] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉0.7份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加第Ⅴ代驯化菌液10份，60～ 100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅵ代驯化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0063] 取焦三仙94份、豆粕6份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉1.2份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅵ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加精油包合粉12份，混匀，得油菌复合物Ⅵ。

[0064] 实施例9

[0065] 材料：第Ⅵ代驯化菌液(实施例8制备)；其他与实施例2相同。

[0066] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉1份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加第Ⅵ代驯化菌液10份，60～ 100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅶ代驯化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0067] 取焦三仙93份、豆粕7份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉1.4份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅶ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加精油包合粉14份，混匀，得油菌复合物Ⅶ。

[0068] 实施例10

[0069] 材料：第Ⅶ代驯化菌液(实施例9制备)；其他与实施例2相同。

[0070] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉0.9份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加第Ⅶ代驯化菌液10份，60～ 100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅷ代驯化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0071] 取焦三仙92份、豆粕8份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉1.6份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅷ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加精油包合粉16份，混匀，得油菌复合物Ⅷ。

[0072] 实施例11

[0073] 材料：第Ⅷ代驯化菌液(实施例10制备)；其他与实施例2相同。

[0074] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉1.2份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加第Ⅷ代驯化菌液10份，60～ 100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅸ代驯化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0075] 取焦三仙91份、豆粕9份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉1.8份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅸ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加精油包合粉18份，混匀，得油菌复合物Ⅸ。

[0076] 实施例12

[0077] 材料：第Ⅸ代驯化菌液(实施例11制备)；其他与实施例2相同。

[0078] 取枯草芽孢杆菌培养基60.5份，加精油包合粉1.1份，加水1000份使溶解，调节pH值为6.5，121℃灭菌15min，凉至室温，加第Ⅸ代驯化菌液10份，60～ 100r/min振摇，28～37℃培养24～48h，既得第Ⅹ代驯化菌液。取出于4～6℃保存备用。

[0079] 取焦三仙90份、豆粕10份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份、精油包合粉2.0份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅹ代驯化菌液20份，密闭， 28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加精油包合粉20份，混匀，得油菌复合物Ⅹ。

[0080] 表1实施例1～12中所用主要物料及其量的变化

[0081]

[0082]

[0083] 实施例13

[0084] 材料：试验大鼠130只(四川省医学科学院)，雌雄各半；环磷酰胺(市售)；油菌复合对照物(实施例1制备)；油菌复合物Ⅰ～Ⅹ号(实施例13中序号5 至序号9的油菌复合物)。

[0085] 将大鼠随机分为13组(每组10只，雌雄各半)，依次为空白组、阴性对照组、阳性对照组、试验Ⅰ～Ⅹ组。其中，空白组常规饲养；阴性对照组添加了环磷酰胺；阳性对照组加油菌复合对照物，试验Ⅰ～Ⅹ组依次添加油菌复合物Ⅰ～Ⅹ号。

[0086] 除空白组外，其它组在试验期间每天向各组大鼠腹腔注射环磷酰胺0.1ml/d；三天后，除空白组与阴性对照组外，每天在各组大鼠饮水中依次加1％的对应实验品。7天后分别测定各组大鼠脾脏指数、胸腺指数和免疫细胞CD4+/CD8+，结果见表2。

[0087] 表2不同实验组大鼠脾、胸腺重量及其指数比较

[0088] 组别 CD4+/CD8+ 脾脏指数胸腺指数空白组 2.57 0.0027 0.0016
阴性对照组 1.57 0.0024 0.0011
阳性对照组 2.24 0.0025 0.0019
试验Ⅰ组 2.24 0.0030 0.0020
试验Ⅱ组 2.26 0.0029 0.0020
试验Ⅲ组 2.40 0.0029 0.0023
试验Ⅳ组 2.58 0.0030 0.0021
试验Ⅴ组 2.38 0.0027 0.0019
试验Ⅵ组 2.48 0.0027 0.0019
试验Ⅶ组 2.58 0.0030 0.0021
试验Ⅷ组 2.34 0.0028 0.0021
试验Ⅸ组 2.20 0.0025 0.0018
试验Ⅹ组 2.23 0.0026 0.0016

[0089] 从表2中结果来看，试验Ⅲ～Ⅷ组的数据中，无论是脾脏指数、胸腺指数，还是免疫调节作用，都明显优于阳性对照组与阴性对照组。

[0090] 实施例14

[0091] 材料：试验小鼠130只(四川省医学科学院)，雌雄各半；油菌复合对照物 (实施例1制备)；油菌复合物Ⅰ～Ⅹ号(实施例13中序号5至序号9的油菌复合物)。

[0092] 将大鼠随机分为13组(每组10只，雌雄各半)，依次为空白组、阴性对照组、阳性对照组、试验Ⅰ～Ⅹ组。其中，空白组常规饲养；阴性对照组添加了环磷酰胺；阳性对照组加油菌复合对照物，试验Ⅰ～Ⅹ组依次添加油菌复合物Ⅰ～Ⅹ号。

[0093] 第一天测定所有组中小鼠的空腹体重。第二天起，除空白组外，每天向各组小鼠饮水中依次加1％的对应实验品，连续7天。并于第8天早上测定实验组小鼠空腹体重，并计算其平均日增重，单位为克，结果见表3。

[0094] 表3小鼠平均日增长对照表

[0095]组别平均初重平均终重平均日增重平均日采食料重比
空白组 20.58 23.75 0.45 5.98 13.21
对照组 20.2 23.41 0.46 5.91 12.89
试验Ⅰ组 20.23 23.84 0.52 6.57 12.74
试验Ⅱ组 20.19 23.98 0.54 6.43 11.88
试验Ⅲ组 19.8 24.06 0.61 5.66 9.30
试验Ⅳ组 20.42 24.61 0.60 5.72 9.56
试验Ⅴ组 20.07 24.52 0.64 6.05 9.52
试验Ⅵ组 20.29 24.7 0.63 6.16 9.78
试验Ⅶ组 20.68 24.75 0.58 5.4 9.29
试验Ⅷ组 20.02 24.04 0.57 5.38 9.37
试验Ⅸ组 20.45 24.12 0.52 6.24 11.90
试验Ⅹ组 20.45 24.02 0.51 5.96 11.69

[0096] 从表3中结果来看，试验Ⅴ组的平均日增重最高，试验Ⅶ组的料重比最低，综合两方面结果来，实验Ⅲ～Ⅷ组都明显优于空白组和对照组。

[0097] 实施例15

[0098] 材料：试验大鼠130只(四川省医学科学院)，雌雄各半；环磷酰胺(市售)；油菌复合对照物(实施例1制备；密闭，室温下在干燥通风处储存6个月)；油菌复合物Ⅰ～Ⅹ号(实施例13中序号5至序号9的油菌复合物；密闭，室温下在干燥通风处储存6个月)。

[0099] 将大鼠随机分为13组(每组10只，雌雄各半)，依次为空白组、阴性对照组、阳性对照组、试验Ⅰ～Ⅹ组。其中，空白组常规饲养；阴性对照组添加了环磷酰胺；阳性对照组加油菌复合对照物，试验Ⅰ～Ⅹ组依次添加油菌复合物Ⅰ～Ⅹ号。

[0100] 除空白组外，其它组在试验期间每天向各组大鼠腹腔注射环磷酰胺0.1ml/d；三天后，除空白组与阴性对照组外，每天在各组大鼠饮水中依次加1％的对应实验品。7天后分别测定各组大鼠脾脏指数、胸腺指数和免疫细胞CD4+/CD8+，结果见表4。

[0101] 表4不同实验组大鼠脾、胸腺重量及其指数比较

[0102]组别 CD4+/CD8+ 脾脏指数胸腺指数
空白组 2.33 0.0027 0.0021
阴性对照组 1.28 0.0022 0.0015
阳性对照组 2.16 0.002 0.0018
试验Ⅰ组 2.08 0.0024 0.0019
试验Ⅱ组 1.99 0.0023 0.0016
试验Ⅲ组 2.13 0.0029 0.0023
试验Ⅳ组 2.46 0.0028 0.0025
试验Ⅴ组 2.4 0.003 0.0022
试验Ⅵ组 2.19 0.0028 0.0021
试验Ⅶ组 2.22 0.0027 0.0023
试验Ⅷ组 2.37 0.0026 0.0022
试验Ⅸ组 2.12 0.0022 0.002
试验Ⅹ组 2.12 0.002 0.0017

[0103] 从表4中结果来看，经过3个月的常温储藏之后，试验Ⅲ～Ⅷ组的数据中，无论是脾脏指数、胸腺指数，还是免疫调节作用，都明显优于阳性对照组与阴性对照组；而试验Ⅰ～Ⅱ组和试验Ⅸ～Ⅹ的数据与阴性对照组相似。由此可知，经过驯化，试验Ⅲ～Ⅷ组所得的发明物稳定性更高，有利于发明产品的长期保存。

[0104] 实施例16

[0105] 材料：试验小鼠130只(四川省医学科学院)，雌雄各半；油菌复合对照物(实施例1制备；密闭，室温下在干燥通风处储存6个月)；油菌复合物Ⅰ～Ⅹ号(实施例13中序号5至序号9的油菌复合物；密闭，室温下在干燥通风处储存6个月)。

[0106] 将大鼠随机分为13组(每组10只，雌雄各半)，依次为空白组、阴性对照组、阳性对照组、试验Ⅰ～Ⅹ组。其中，空白组常规饲养；阴性对照组添加了环磷酰胺；阳性对照组加油菌复合对照物，试验Ⅰ～Ⅹ组依次添加油菌复合物Ⅰ～Ⅹ号。

[0107] 第一天测定所有组中小鼠的空腹体重。第二天起，除空白组外，每天向各组小鼠饮水中依次加1％的对应实验品，连续7天。并于第8天早上测定实验组小鼠空腹体重，并计算其平均日增重，单位为克，结果见表5。

[0108] 表5小鼠平均日增长对照表

[0109]组别平均初重平均终重平均日增重平均日采食料重比
空白组 20.4 23.71 0.47 5.88 12.44
对照组 21.74 25.17 0.49 5.88 12.00
试验Ⅰ组 20.27 23.85 0.51 6.27 12.26
试验Ⅱ组 20.24 24 0.54 6.43 11.97
试验Ⅲ组 19.83 24.11 0.61 5.76 9.42
试验Ⅳ组 20.44 24.64 0.60 5.81 9.68
试验Ⅴ组 20.08 24.56 0.64 6.15 9.61
试验Ⅵ组 20.33 24.71 0.63 6.21 9.92
试验Ⅶ组 20.73 24.77 0.58 5.45 9.44
试验Ⅷ组 20.05 24.09 0.58 5.38 9.32
试验Ⅸ组 20.47 24.15 0.53 6.24 11.87
试验Ⅹ组 20.46 24.07 0.52 5.96 11.56

[0110] 从表3中结果来看，经过3个月的常温储藏之后，试验Ⅲ～Ⅷ组的数据中，平均日增重与料重比都明显优于阳性对照组与阴性对照组；而试验Ⅰ～Ⅱ组和试验Ⅸ～Ⅹ的数据与阴性对照组相似。由此可知，经过驯化，试验Ⅲ～Ⅷ组所得的发明物稳定性更高，有利于发明产品的长期保存。

[0111] 实施例17

[0112] 材料：第Ⅷ代驯化菌液(实施例10制备)；其他与实施例2相同。

[0113] 取焦三仙92份、豆粕8份，粉碎为10目粉，混匀，通蒸汽灭菌30分钟；与此同时，取枯草芽孢杆菌培养基30份份、精油包合粉0.2份，加水50份，煮沸30分钟；趁热，将两者混合，凉至室温，加第Ⅷ代驯化菌液20份，密闭，28～37℃培养24～48h，40～55℃晾干，粉碎(温度不超过55℃)为40～60目粉，经测定，枯草芽孢杆菌≥200亿/克，加精油包合粉8份，混匀，得油菌复合物实验品。

[0114] 实验例一油菌复合物对仔猪免疫功能与日增重的影响

[0115] 材料：20日龄体重相近的三元仔猪3窝(每窝10头，成都某猪场)；黄芪多糖(市售)；油菌复合物(实施例5制备)；猪瘟疫苗(辽宁益康生物股份有限公司)；猪瘟抗体检测试剂盒(中国农业科学院兰州兽医研究所)。

[0116] 方法：3窝20日龄三元仔猪，注射猪瘟疫苗4份，随机分为对照组、黄芪多糖组、油菌复合物组，每组10头，28日龄断奶；25日龄开始，黄芪多糖组投喂黄芪多糖(添加量为200mg/kg)，油菌复合物组投喂油菌复合物(添加量为 200mg/kg)，对照组不投药；于25、40和50日龄时进行采血，并进行免疫指标检测；分别于28日龄和38日龄早上测定仔猪空腹体重，结果如表6所示。

[0117] 表6不同添加物对仔猪血液中嗜中性白粒细胞百分数的影响％

[0118]日龄对照组黄芪多糖组油菌复合物组
25 9.878 9.604 8.136
40 6.411 15.874 18.517
50 5.746 7.642 9.434

[0119] 从表6可见，25日龄时，黄芪多糖组和油菌复合物组间仔猪嗜中性白粒细胞百分数差异不显著；40日龄时，黄芪多糖组和油菌复合物组的外周血嗜中性白粒细胞百分数均显著高于对照组。油菌复合物组高于黄芪多糖组，差异不明显。在50日龄时，黄芪多糖高于对照组，油菌复合物组显著高于黄芪多糖组。

[0120] 表7不同添加物对仔猪猪瘟抗体水平的影响

[0121] 日龄对照组黄芪多糖组油菌复合物组25 7.87 7.7 8.05
40 6.79 8.93 9.22
50 7.94 9.01 10.16

[0122] 从表7可见，40和50日龄时，黄芪多糖组和油菌复合物组猪瘟抗体水平均显著高于对照组。在40日龄时，黄芪多糖组和油菌复合物组没有显著差异。 50日龄时，油菌复合物组显著高于黄芪多糖组。结果表明，在25日龄时黄芪多糖组和油菌复合物组仔猪猪瘟抗体水平差异不显著，但随着饲养日龄的增加，在40和50日龄时，油菌复合物组猪瘟抗体水平不仅显著高于对照组，也显著高于黄芪多糖组。由此可见，黄芪多糖、油菌复合物对仔猪的免疫功能均具有一定的促进作用，但仍以油菌复合物应用后具有更好的免疫增强作用。

[0123] 表8不同添加物对仔猪淋巴细胞转化率的影响

[0124]日龄对照组黄芪多糖组油菌复合物组
25 33.863 33.55 33.018
40 38.137 41.689 42.867
50 42.86 46.239 48.373

[0125] 从表8可以看出，仔猪外周淋巴细胞转化率在25日龄时，黄芪多糖组和油菌复合物组与对照组间均差异不显著；40日龄和50日龄时，油菌复合物组极显著高于对照组，其余各组间差异不显著。结果表明，黄芪多糖和油菌复合物能够提高仔猪淋巴细胞的转化率，从而提高仔猪的免疫功能，并以油菌复合物组转化率最高。

[0126] 表9不同添加物对仔猪平均日增重的影响

[0127]

[0128] 从表9可以看出，添加黄芪多糖组的仔猪平均日增重相对对照组而言，并未发生明显变化；添加油菌复合物组的仔猪平均日增重相对另外两组都有明显的提高。

[0129] 综上所述，无论是对仔猪血液中嗜中性白粒细胞百分数的影响，还是对仔猪猪瘟抗体水平、仔猪淋巴细胞转化率的影响，以及促进仔猪的生长，油菌复合物均优于黄芪多糖。由此可知，本发明提供工艺制得的油菌复合物，不仅能够充分发挥其保健防疫功能，同时还能使油菌复合物作为饲料原料使用时的经济性能，尤其适用于家禽(例如鸡、鸭、鹅)和家畜(例如猪、牛、羊、马、兔)的饲养。

[0130] 本发明不局限于上述可选的实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品。上述具体实施方式不应理解成对本发明的保护范围的限制，本发明的保护范围应当以权利要求书中界定的为准，并且说明书可以用于解释权利要求书。

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