技术领域
[0001] 本
发明涉及
生物医药技术领域,具体是一种水性复合佐剂、其应用及猫用疫苗。
背景技术
[0002] 猫作为宠物深受人们的喜爱。但是其传染病猫瘟、猫传染性鼻气管炎、猫杯状病毒严重威胁猫的健康。对于这些病毒性
疾病,目前没有特效的药物进行
治疗,主要是用疫苗
预防为主。
[0003] 然而,现有的猫用疫苗佐剂大多采用
白油等油类佐剂,这类油性佐剂对
注射部位刺激性较大,易发生过敏等不安全反应。
发明内容
[0004] 本发明
实施例的目的在于提供一种水性复合佐剂,以解决上述背景技术中提出的问题。
[0005] 为实现上述目的,本发明实施例提供如下技术方案:
[0006] 一种水性复合佐剂,每毫升所述的水性复合佐剂包括以下组分:注射用母
牛分支杆菌肽0.5~3mg、黄芪多糖1~5mg、白介素-710~100μg、氢
氧化
铝胶0.1~0.2mL、稳定剂100~300mg。
[0007] 作为本发明实施例的一个优选方案,每毫升所述的水性复合佐剂包括以下组分:注射用母牛分支杆菌肽1~2mg、黄芪多糖2~4mg、白介素-740~60μg、氢氧化铝胶0.14~
0.17mL、稳定剂150~250mg。
[0008] 作为本发明实施例的另一个优选方案,所述的氢氧化铝胶中铝的
质量含量以三氧化二铝计为1.8%~2.2%。
[0009] 作为本发明实施例的另一个优选方案,所述的稳定剂为
磷酸盐缓冲液。
[0010] 作为本发明实施例的另一个优选方案,所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2~7.8。
[0011] 本发明实施例的另一目的在于提供一种上述水性复合佐剂在制备猫用疫苗中的应用。
[0012] 作为本发明实施例的另一个优选方案,所述猫用疫苗包括猫瘟灭活疫苗、猫传染性鼻气管炎灭活疫苗和猫杯状病毒灭活疫苗。
[0013] 本发明实施例的另一目的在于提供一种猫用疫苗,其包括
抗原以及上述水性复合佐剂。
[0014] 作为本发明实施例的另一个优选方案,所述水性复合佐剂与所述抗原的质量比为1:(4~9)。
[0015] 作为本发明实施例的另一个优选方案,所述抗原为猫瘟病毒灭活抗原、猫传染性鼻气管炎病毒灭活抗原和猫杯状病毒灭活抗原中的一种。
[0016] 与
现有技术相比,本发明实施例的有益效果是:
[0017] 本发明实施例提供的一种水性复合佐剂,以水作为
溶剂,其对注射部位刺激性较小、不易发生过敏,其制成的疫苗安全且高效。其中,本发明实施例提供的水性复合佐剂所采用的各组分的作用如下:
[0018] 注射用母牛分支杆菌肽,具有明显的双向免疫调节功能。可促进外周血T淋巴
细胞增殖反应,使CD3和CD4值明显升高,CD8值明显降低,改善细胞免疫功能,并使结核菌素试验(Purified Protein Derivative,PPD)反应强者减弱。同时,其可增强巨噬细胞功能,可提高巨噬细胞产生H2O2和NO水平,提高细胞免疫。
[0019] 黄芪多糖具有免疫调节、抗
肿瘤、抗肝硬化、抗动脉粥样硬化、降血糖、抗病毒、治疗代谢性紊乱、抗衰老等作用。黄芪多糖在体内和体外均具有调节免疫的作用。在体外,
发酵黄芪多糖可促进树突状细胞表面分子的表达、细胞因子的分泌、T细胞活化和增殖、激活TLR
信号通路。黄芪多糖可明显提高小鼠骨髓源DC表面MHC-II、CD80、CD86及CD83的表达,同时可明显提高DCIL-2、IL-6、IFN和TNF、IL-1等细胞因子的分泌,并且通过TLR2或者TLR4促进树突状细胞的成熟。体内实验表明,发酵黄芪可提高免疫器官指数、免疫细胞数量及功能,促进细胞因子分泌。黄芪对小鼠免疫器官重量及指数无明显影响,但是能够提高小鼠吞噬细胞的吞噬功能及淋巴细胞酸性非特异性酯酶活性。黄芪液可明显提高小鼠脾脏指数,但是对小鼠胸腺指数无明显影响,可明显促进小鼠T淋巴细胞的增殖与转化、
腹腔巨噬细胞的吞噬功能与IL-1和IL-2的分泌。黄芪多糖的浓度对免疫器官指数和细胞因子的分泌具有重要影响,有研究表明低浓度黄芪发酵液可增加免疫器官指数,高浓度的黄芪发酵液则对免疫器官无明显影响;发酵黄芪液可显著提高IgG和sI gA的分泌,且呈剂量依赖性。
[0020] 白介素-7是适应性免疫系统中的关键细胞因子,其对T淋巴细胞和B淋巴细胞的发育和存活过程具有举足轻重的作用。白介素-7可能通过影响胸腺细胞的生成和发育从而调节T细胞的的发展过程。白介素-7的信号可通过促进CD4+T和CD8+T细胞的生存,阻止激活的T细胞凋亡来扩增抗原特异性的T细胞群。白介素-7同样能够刺激T细胞受体的信号并使其敏感化,并促使其所增加的CD4+的效应T细胞进一步发展为其他发挥重要免疫作用的T细胞。白介素-7可刺激祖B细胞扩增,并作用于整个B细胞成熟分化过程。最近有一项研究表明,鼠Fc融合的白介素-7和疫苗共同免疫后可通过促进GCB细胞的形成,有效抵抗致死性流感病毒的攻击。
[0021] 氢氧化铝胶有“储存库效应”和“免疫刺激效应”两种主要机制。铝佐剂
吸附抗原后,增加抗原的表面积,并且改变活性基因的构型,从而增强抗原的免疫原性。对小分子量可溶性抗原或半抗原,经胶体颗粒吸附后,可提高
抗体产量。此时在接种区域形成了一个抗原贮存库,一方面该处强烈吸引巨噬细胞、树突状细胞、郎罕氏细胞等抗原提呈细胞的识别与内吞,促进T细胞免疫
力,并加强T细胞与B细胞的协同作用;另一方面,佐剂可引起注射局部肉芽肿,使抗原在局部组织内的贮存,缓慢释放抗原,延长了抗原递呈细胞A PC与T淋巴细胞相互作用的时间,从而提高抗体应答,增强体液免疫。此外,氢氧化铝可活化补体,补体C3b成分不能被EDTA抑制,提示补体活化并不发生在经典或选择性旁路。活化依赖于血
纤维与解酶原。
[0022] 稳定剂是用于保持各组分的
稳定性,为了保持各组分的微环境稳定。
具体实施方式
[0023] 下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
[0024] 实施例1
[0025] 该实施例提供了一种水性复合佐剂以及猫瘟灭活疫苗,其中,该水性复合佐剂的制备方法如下:先称取注射用母牛分支杆菌肽0.5mg、黄芪多糖5mg、白介素-7 10μg、氢氧化铝胶0.1mL、稳定剂100mg,备用;接着,在常温条件下,将上述称取的注射用母牛分支杆菌肽、黄芪多糖、白介素-7、氢氧化铝胶、稳定剂与无菌去离子水进行混合,配制得到1mL的水性复合佐剂。其中,注射用母牛分支杆菌肽为通用生物系统(安徽)有限公司的市售产品;黄芪多糖为西安万方生物科技有限公司的市售产品,其为90%纯度的
水溶性粉;白介素-7为上海
生物工程股份有限公司表达的猫类白介素-7;氢氧化铝胶中铝的质量含量以三氧化二铝计为1.8%;稳定剂可采用pH值为7.2的磷酸盐缓冲液。
[0026] 另外,将该水性复合佐剂与猫瘟病毒灭活抗原按照1:4的质量比进行混合,即可得到猫瘟灭活疫苗。
[0027] 实施例2
[0028] 该实施例提供了一种水性复合佐剂以及猫传染性鼻气管炎灭活疫苗,其中,该水性复合佐剂的制备方法如下:先称取注射用母牛分支杆菌肽3mg、黄芪多糖1mg、白介素-7100μg、氢氧化铝胶0.2mL、稳定剂300mg,备用;接着,在常温条件下,将上述称取的注射用母牛分支杆菌肽、黄芪多糖、白介素-7、氢氧化铝胶、稳定剂与无菌去离子水进行混合,配制得到1mL的水性复合佐剂。其中,注射用母牛分支杆菌肽为通用生物系统(安徽)有限公司的市售产品;黄芪多糖为西安万方生物科技有限公司的市售产品,其为90%纯度的水溶性粉;
白介素-7为上海生物工程股份有限公司表达的猫类白介素-7;氢氧化铝胶中铝的质量含量以三氧化二铝计为2.2%;稳定剂可采用pH值为7.8的磷酸盐缓冲液。
[0029] 另外,将该水性复合佐剂与猫传染性鼻气管炎病毒灭活抗原按照1:9的质量比进行混合,即可得到猫传染性鼻气管炎病毒灭活抗原。
[0030] 实施例3
[0031] 该实施例提供了一种水性复合佐剂以及猫杯状病毒灭活疫苗,其中,该水性复合佐剂的制备方法如下:先称取注射用母牛分支杆菌肽2mg、黄芪多糖3mg、白介素-7 50μg、氢氧化铝胶0.15mL、稳定剂300mg,备用;接着,在常温条件下,将上述称取的注射用母牛分支杆菌肽、黄芪多糖、白介素-7、氢氧化铝胶、稳定剂与无菌去离子水进行混合,配制得到1mL的水性复合佐剂。其中,注射用母牛分支杆菌肽为通用生物系统(安徽)有限公司的市售产品;黄芪多糖为西安万方生物科技有限公司的市售产品,其为90%纯度的水溶性粉;白介素-7为上海生物工程股份有限公司表达的猫类白介素-7;氢氧化铝胶中铝的质量含量以三氧化二铝计为2%;稳定剂可采用pH值为7.5的磷酸盐缓冲液。
[0032] 另外,将该水性复合佐剂与猫杯状病毒灭活抗原按照1:5的质量比进行混合,即可得到猫杯状病毒灭活抗原。
[0033] 实施例4
[0034] 该实施例提供了一种水性复合佐剂,其中,该水性复合佐剂的制备方法如下:先称取注射用母牛分支杆菌肽1mg、黄芪多糖2mg、白介素-7 40μg、氢氧化铝胶0.14mL、稳定剂250mg,备用;接着,在常温条件下,将上述称取的注射用母牛分支杆菌肽、黄芪多糖、白介素-7、氢氧化铝胶、稳定剂与无菌去离子水进行混合,配制得到1mL的水性复合佐剂。其中,注射用母牛分支杆菌肽为通用生物系统(安徽)有限公司的市售产品;黄芪多糖为西安万方生物科技有限公司的市售产品,其为90%纯度的水溶性粉;白介素-7为上海生物工程股份有限公司表达的猫类白介素-7;氢氧化铝胶中铝的质量含量以三氧化二铝计为2%;稳定剂可采用pH值为7.5的磷酸盐缓冲液。
[0035] 实施例5
[0036] 该实施例提供了一种水性复合佐剂,其中,该水性复合佐剂的制备方法如下:先称取注射用母牛分支杆菌肽2mg、黄芪多糖4mg、白介素-7 60μg、氢氧化铝胶0.17mL、稳定剂150mg,备用;接着,在常温条件下,将上述称取的注射用母牛分支杆菌肽、黄芪多糖、白介素-7、氢氧化铝胶、稳定剂与无菌去离子水进行混合,配制得到1mL的水性复合佐剂。其中,注射用母牛分支杆菌肽为通用生物系统(安徽)有限公司的市售产品;黄芪多糖为西安万方生物科技有限公司的市售产品,其为90%纯度的水溶性粉;白介素-7为上海生物工程股份有限公司表达的猫类白介素-7;氢氧化铝胶中铝的质量含量以三氧化二铝计为2%;稳定剂可采用pH值为7.5的磷酸盐缓冲液。
[0037] 对比例1
[0038] 该对比例提供了一种市售的猫三联灭活疫苗。
[0039] 对比例2
[0040] 该对比例提供了一种猫瘟灭活疫苗,其除了不含有注射用母牛分支杆菌肽组分,其余组分和用量均与实施例1相同。
[0041] 对比例3
[0042] 该对比例提供了一种猫瘟灭活疫苗,其除了不含有注黄芪多糖组分,其余组分和用量均与实施例1相同。
[0043] 对比例4
[0044] 该对比例提供了一种猫瘟灭活疫苗,其除了不含有白介素-7组分,其余组分和用量均与实施例1相同。
[0045] 对比例5
[0046] 该对比例提供了一种猫瘟灭活疫苗,其除了不含有氢氧化铝胶组分,其余组分和用量均与实施例1相同。
[0047] 将上述实施例1、对比例1~5提供的猫瘟灭活疫苗分别对5只2月龄猫进行免疫,每只用量1mL,另设5只不免疫作为空白对照组。免疫后观察猫的反应、临床症状,其结果见表1;另外,分别对这些猫在免疫后的7日、14日、28日
采血检测HI抗体,其检测结果见表2。
[0048] 表1
[0049]
[0050]
[0051] 其中,“-”表示无任何眼观反应。
[0052] 表2
[0053]
[0054]
[0055] 另外,将上述实施例2提供的猫传染性鼻气管炎灭活疫苗分别对10只2月龄猫进行免疫,每只用量1mL。免疫后观察猫的反应、临床症状,结果无任何眼观反应,见表3;另外,分别对这10只猫在免疫后的7日、14日、28日采血检测HI抗体,其检测结果见表4。
[0056] 表3
[0057] 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10症状 - - - - - - - - - -
[0058] 其中,“-”表示无任何眼观反应。
[0059] 表4
[0060] 编号 免疫后7日 免疫后14日 免疫后28日1 8 28 32
2 8 32 56
3 16 32 56
4 8 28 32
5 16 32 56
6 16 32 64
7 8 28 56
8 16 32 56
9 16 32 64
10 8 28 56
[0061] 另外,将上述实施例3提供的猫杯状病毒灭活疫苗分别对10只2月龄猫进行免疫,每只用量1mL。免疫后观察猫的反应、临床症状,结果无任何眼观反应,见表5;另外,分别对这10只猫在免疫后的7日、14日、28日采血检测HI抗体,其检测结果见表6。
[0062] 表5
[0063]编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
症状 - - - - - - - - - -
[0064] 其中,“-”表示无任何眼观反应。
[0065] 表6
[0066]
[0067]
[0068] 从上表1~6可以看到,使用本发明实施例提供的水性复合佐剂制成的疫苗既安全又高效。
[0069] 以上述依据本发明的理想实施例为启示,通过上述的说明内容,相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内,进行多样的变更以及
修改。本项发明的技术性范围并不局限于
说明书上的内容,必须要根据
权利要求范围来确定其技术性范围。