调节性多核苷酸
阅读：2发布：2020-06-16
专利汇可以提供调节性多核苷酸专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及调节性多核苷酸的组合物和制备、生产和 治疗 用途 的方法。，下面是调节性多核苷酸专利的具体信息内容。
1.调节性多核苷酸，包含：
(a)茎和环以形成茎-环结构，所述茎-环结构的序列从5’到3’包含：
(i)包含过客链的5’茎臂；
(ii)环区域，其中该环区域包含选自由SEQ ID NO：16、10、11、12、13、14、15、17、18和19组成的组的序列：；
(iii)包含引导链的3’茎臂，其中在该引导链的5’端存在尿苷；
(b)位于所述茎-环结构的5’的第一侧翼区，其中该第一侧翼区包含选自由SEQ ID NO：
5、1、2、3、4、6、7、8和9组成的组的序列；和
(c)位于所述茎-环结构的3’的第二侧翼区，其中所述第二侧翼区包含选自SEQ ID NO：
21、20、22、23、24、25、26和27组成的组的序列。
2.调节性多核苷酸，包含：
(a)茎和环以形成茎-环结构，所述茎-环结构的序列从5’到3’包含：
(i)包含引导链的5’茎臂，其中在该引导链的5’端存在尿苷；
(ii)环区域，其中该环区域包含选自SEQ ID NO：16、10、11、12、13、14、15、17、18和19组成的组的序列；
(iii)包含过客链的3’茎臂；
(b)位于所述茎-环结构的5’的第一侧翼区，其中该第一侧翼区包含选自SEQ ID NO：5、
1、2、3、4、6、7、8和9组成的组的序列；和
(c)位于所述茎-环结构的3’的第二侧翼区，其中所述第二侧翼区包含选自SEQ ID NO：
21、20、22、23、24、25、26和27组成的组的序列。
3.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中所述茎-环结构的环区域来源于规范microRNA。
4.根据权利要求3所述的调节性多核苷酸，其中所述规范microRNA是miR-22。
5.根据权利要求4所述的调节性多核苷酸，其中所述第一侧翼区或第二侧翼区中的至少一个来源于let-7b。
6.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中所述环区域包含SEQ ID NO：16。
7.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中第一侧翼区包含SEQ ID NO：5。
8.根据1或2所述的调节性多核苷酸，其中第二侧翼区包含SEQ ID NO：21。
9.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中所述茎-环结构包含在茎-环结构的
5’茎的碱基处或附近的UG基序。
10.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中环区域在所述环区域的5’端包含UGUG基序。
11.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中第二区包含CNNC基序。
12.根据权利要求9所述的调节性多核苷酸，其中5’茎臂包含位于UG基序和过客链或引导链之间的5’间隔区。
13.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中3’茎臂包含3’间隔区，并且其中3’间隔区具有足以形成一个螺旋转角的长度。
14.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中引导链包含在2位和9位之间的microRNA种子序列。
15.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中引导链包含在2位和8位之间的microRNA种子序列。
16.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中引导链包含在2位和7位之间的microRNA种子序列。
17.根据权利要求1或2所述的调节性多核苷酸，其中引导链的长度在15-30个核苷酸之间。
18.根据权利要求17所述的调节性多核苷酸，其中引导链的长度在21-25个核苷酸之间。
19.根据权利要求18所述的调节性多核苷酸，其中引导链的长度为22个核苷酸。
20.根据权利要求18所述的调节性多核苷酸，其中引导链的长度为21个核苷酸。
21.根据权利要求17所述的调节性多核苷酸，其中过客链至少70％互补于引导链。
22.根据权利要求17所述的调节性多核苷酸，其中引导链至少60％互补于靶RNA，所述靶RNA选自由以下组成的组：哺乳动物编码mRNA和哺乳动物非编码RNA。
23.根据权利要求22所述的调节性多核苷酸，其中靶RNA为哺乳动物编码mRNA。
24.根据权利要求23所述的调节性多核苷酸，其中编码mRNA在神经细胞、组织或器官中表达。
25.编码权利要求1-24中任一项所述的调节性多核苷酸的质粒或载体。
26.根据权利要求25所述的载体，其包含重组腺相关病毒(AAV)构建体。
27.重组AAV病毒，其包含权利要求26所述的AAV构建体。
28.权利要求27所述的重组AAV病毒，其包含选自由以下组成的组的衣壳血清型：AAV1、AAV2、AAV2G9、AAV3、AAV3a、AAV3b、AAV3-3、AAV4、AAV4-4、AAV5、AAV6、AAV6.1、AAV6.2、AAV6.1.2、AAV7、AAV7.2、AAV8、AAV9、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84、AAV9.9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV16.3、AAV24.1、AAV27.3、AAV42.12、AAV42-1b、AAV42-2、AAV42-3a、AAV42-3b、AAV42-4、AAV42-5a、AAV42-
5b、AAV42-6b、AAV42-8、AAV42-10、AAV42-11、AAV42-12、AAV42-13、AAV42-15、AAV42-aa、AAV43-1、AAV43-12、AAV43-20、AAV43-21、AAV43-23、AAV43-25、AAV43-5、AAV44.1、AAV44.2、AAV44.5、AAV223.1、AAV223.2、AAV223.4、AAV223.5、AAV223.6、AAV223.7、AAV1-7/rh.48、AAV1-8/rh.49、AAV2-15/rh.62、AAV2-3/rh.61、AAV2-4/rh.50、AAV2-5/rh.51、AAV3.1/hu.6、AAV3.1/hu.9、AAV3-9/rh.52、AAV3-11/rh.53、AAV4-8/r11.64、AAV4-9/rh.54、AAV4-
19/rh.55、AAV5-3/rh.57、AAV5-22/rh.58、AAV7.3/hu.7、AAV16.8/hu.10、AAV16.12/hu.11、AAV29.3/bb.1、AAV29.5/bb.2、AAV106.1/hu.37、AAV114.3/hu.40、AAV127.2/hu.41、AAV127.5/hu.42、AAV128.3/hu.44、AAV130.4/hu.48、AAV145.1/hu.53、AAV145.5/hu.54、AAV145.6/hu.55、AAV161.10/hu.60、AAV161.6/hu.61、AAV33.12/hu.17、AAV33.4/hu.15、AAV33.8/hu.16、AAV52/hu.19、AAV52.1/hu.20、AAV58.2/hu.25、AAVA3.3、AAVA3.4、AAVA3.5、AAVA3.7、AAVC1、AAVC2、AAVC5、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAVF3、AAVF5、AAVH2、AAVrh.72、AAVhu.8、AAVrh.68、AAVrh.70、AAVpi.1、AAVpi.3、AAVpi.2、AAVrh.60、AAVrh.44、AAVrh.65、AAVrh.55、AAVrh.47、AAVrh.69、AAVrh.45、AAVrh.59、AAVhu.12、AAVH6、AAVLK03、AAVH-1/hu.1、AAVH-5/hu.3、AAVLG-10/rh.40、AAVLG-4/rh.38、AAVLG-9/hu.39、AAVN721-8/rh.43、AAVCh.5、AAVCh.5R1、AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、AAVcy.5、AAVCV.5R1、AAVCy.5R2、AAVCy.5R3、AAVCy.5R4、AAVcy.6、AAVhu.1、AAVhu.2、AAVhu.3、AAVhu.4、AAVhu.5、AAVhu.6、AAVhu.7、AAVhu.9、AAVhu.10、AAVhu.11、AAVhu.13、AAVhu.15、AAVhu.16、AAVhu.17、AAVhu.18、AAVhu.20、AAVhu.21、AAVhu.22、AAVhu.23.2、AAVhu.24、AAVhu.25、AAVhu.27、AAVhu.28、AAVhu.29、AAVhu.29R、AAVhu.31、AAVhu.32、AAVhu.34、AAVhu.35、AAVhu.37、AAVhu.39、AAVhu.40、AAVhu.41、AAVhu.42、AAVhu.43、AAVhu.44、AAVhu.44R1、AAVhu.44R2、AAVhu.44R3、AAVhu.45、AAVhu.46、AAVhu.47、AAVhu.48、AAVhu.48R1、AAVhu.48R2、AAVhu.48R3、AAVhu.49、AAVhu.51、AAVhu.52、AAVhu.54、AAVhu.55、AAVhu.56、AAVhu.57、AAVhu.58、AAVhu.60、AAVhu.61、AAVhu.63、AAVhu.64、AAVhu.66、AAVhu.67、AAVhu.14/9、AAVhu.t 19、AAVrh.2、AAVrh.2R、AAVrh.8、AAVrh.8R、AAVrh.10、AAVrh.12、AAVrh.13、AAVrh.13R、AAVrh.14、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.20、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh.37R2、AAVrh.38、AAVrh.39、AAVrh.40、AAVrh.46、AAVrh.48、AAVrh.48.1、AAVrh.48.1.2、AAVrh.48.2、AAVrh.49、AAVrh.51、AAVrh.52、AAVrh.53、AAVrh.54、AAVrh.56、AAVrh.57、AAVrh.58、AAVrh.61、AAVrh.64、AAVrh.64R1、AAVrh.64R2、AAVrh.67、AAVrh.73、AAVrh.74、AAVrh8R、AAVrh8R A586R突变体、AAVrh8R R533A突变体、AAAV、BAAV、山羊AAV、牛AAV、AAVhE1.1、AAVhEr1.5、AAVhER1.14、AAVhEr1.8、AAVhEr1.16、AAVhEr1.18、AAVhEr1.35、AAVhEr1.7、AAVhEr1.36、AAVhEr2.29、AAVhEr2.4、AAVhEr2.16、AAVhEr2.30、AAVhEr2.31、AAVhEr2.36、AAVhER1.23、AAVhEr3.1、AAV2.5T、AAV-PAEC、AAV-LK01、AAV-LK02、AAV-LK03、AAV-LK04、AAV-LK05、AAV-LK06、AAV-LK07、AAV-LK08、AAV-LK09、AAV-LK10、AAV-LK11、AAV-LK12、AAV-LK13、AAV-LK14、AAV-LK15、AAV-LK16、AAV-LK17、AAV-LK18、AAV-LK19、AAV-PAEC2、AAV-PAEC4、AAV-PAEC6、AAV-PAEC7、AAV-PAEC8、AAV-PAEC11、AAV-PAEC12、AAV-2-pre-miRNA-101、AAV-8h、AAV-8b、AAV-h、AAV-b、AAV SM 10-2、AAV Shuffle 100-1、AAV Shuffle 100-3、AAV Shuffle 100-7、AAV Shuffle 10-2、AAV Shuffle 10-6、AAV Shuffle 10-8、AAV Shuffle 100-2、AAV SM 10-1、AAV SM 10-8、AAV SM 100-3、AAV SM 100-10、BNP61 AAV、BNP62 AAV、BNP63 AAV、AAVrh.50、AAVrh.43、AAVrh.62、AAVrh.48、AAVhu.19、AAVhu.11、AAVhu.53、AAV4-8/rh.64、AAVLG-9/hu.39、AAV54.5/hu.23、AAV54.2/hu.22、AAV54.7/hu.24、AAV54.1/hu.21、AAV54.4R/hu.27、AAV46.2/hu.28、AAV46.6/hu.29、AAV128.1/hu.43、真型AAV(ttAAV)、UPENN AAV 10、日本AAV 10、AAV CBr-7.1、AAV CBr-7.10、AAV CBr-7.2、AAV CBr-7.3、AAV CBr-7.4、AAV CBr-
7.5、AAV CBr-7.7、AAV CBr-7.8、AAV CBr-B7.3、AAV CBr-B7.4、AAV CBr-E1、AAV CBr-E2、AAV CBr-E3、AAV CBr-E4、AAV CBr-E5、AAV CBr-e5、AAV CBr-E6、AAV CBr-E7、AAV CBr-E8、AAV CHt-1、AAV CHt-2、AAV CHt-3、AAV CHt-6.1、AAV CHt-6.10、AAV CHt-6.5、AAV CHt-
6.6、AAV CHt-6.7、AAV CHt-6.8、AAV CHt-P1、AAV CHt-P2、AAV CHt-P5、AAV CHt-P6、AAV CHt-P8、AAV CHt-P9、AAV CKd-1、AAV CKd-10、AAV CKd-2、AAV CKd-3、AAV CKd-4、AAV CKd-
6、AAV CKd-7、AAV CKd-8、AAV CKd-B1、AAV CKd-B2、AAV CKd-B3、AAV CKd-B4、AAV CKd-B5、AAV CKd-B6、AAV CKd-B7、AAV CKd-B8、AAV CKd-H1、AAV CKd-H2、AAV CKd-H3、AAV CKd-H4、AAV CKd-H5、AAV CKd-H6、AAV CKd-N3、AAV CKd-N4、AAV CKd-N9、AAV CLg-F1、AAV CLg-F2、AAV CLg-F3、AAV CLg-F4、AAV CLg-F5、AAV CLg-F6、AAV CLg-F7、AAV CLg-F8、AAV CLv-1、AAV CLv1-1、AAV Clv1-10、AAV CLv1-2、AAV CLv-12、AAV CLv1-3、AAV CLv-13、AAV CLv1-
4、AAV Clv1-7、AAV Clv1-8、AAV Clv1-9、AAV CLv-2、AAV CLv-3、AAV CLv-4、AAV CLv-6、AAV CLv-8、AAV CLv-D1、AAV CLv-D2、AAV CLv-D3、AAV CLv-D4、AAV CLv-D5、AAV CLv-D6、AAV CLv-D7、AAV CLv-D8、AAV CLv-E1、AAV CLv-K1、AAV CLv-K3、AAV CLv-K6、AAV CLv-L4、AAV CLv-L5、AAV CLv-L6、AAV CLv-M1、AAV CLv-M11、AAV CLv-M2、AAV CLv-M5、AAV CLv-M6、AAV CLv-M7、AAV CLv-M8、AAV CLv-M9、AAV CLv-R1、AAV CLv-R2、AAV CLv-R3、AAV CLv-R4、AAV CLv-R5、AAV CLv-R6、AAV CLv-R7、AAV CLv-R8、AAV CLv-R9、AAV CSp-1、AAV CSp-
10、AAV CSp-11、AAV CSp-2、AAV CSp-3、AAV CSp-4、AAV CSp-6、AAV CSp-7、AAV CSp-8、AAV CSp-8.10、AAV CSp-8.2、AAV CSp-8.4、AAV CSp-8.5、AAV CSp-8.6、AAV CSp-8.7、AAV CSp-
8.8、AAV CSp-8.9、AAV CSp-9、AAV.hu.48R3、AAV.VR-355、AAV3B、AAV4、AAV5、AAVF1/HSC1、AAVF11/HSC11、AAVF12/HSC12、AAVF13/HSC13、AAVF14/HSC14、AAVF15/HSC15、AAVF16/HSC16、AAVF17/HSC17、AAVF2/HSC2、AAVF3/HSC3、AAVF4/HSC4、AAVF5/HSC5、AAVF6/HSC6、AAVF7/HSC7、AAVF8/HSC8、AAVF9/HSC9、AAVDJ、AAVDJ-8PHP.B、PHP.A、G2B-26、G2B-13、TH1.1-32和/或TH1.1-35。
调节性多核苷酸
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2016年5月18日提交的标题为Modulatory Polynucleotides的美国临时专利申请号62/338,137和2017年4月13日提交的标题为Modulatory Polynucleotides的
美国临时专利申请号62/485,050的优先权，其每一篇的内容通过引用的方式以其整体并入
本文。
美国临时专利申请号62/485,050的优先权，其每一篇的内容通过引用的方式以其整体并入
本文。
[0004] 本申请与电子格式的序列表一起提交。该序列表以2017年5月18日创建的名称为20571039PCT.txt的文件提供，其大小为4,301,289字节。序列表的电子格式的信息通过引
用的方式以其整体并入本文。
发明领域
用的方式以其整体并入本文。
发明领域
[0005] 本发明涉及用于设计、制备、生产和/或配制调节性多核苷酸的组合物、方法、工艺、试剂盒和装置。在一些实施方案中，此类调节性多核苷酸可以由重组腺相关病毒(AAV)
编码或在其内编码，并且可以包含人工microRNA、人工pre-microRNA和/或人工pri-
microRNA。
编码或在其内编码，并且可以包含人工microRNA、人工pre-microRNA和/或人工pri-
microRNA。
[0006] 发明背景
[0007] microRNA(或miRNA或miR)是小的非编码单链核糖核酸分子(RNA)，其长度通常为19-25个核苷酸。已经在哺乳动物基因组中鉴定了超过一千种microRNA。成熟的microRNA通
过与靶mRNA的互补序列部分或完全配对而主要结合靶信使RNA(mRNA)的3’非翻译区(3’-
UTR)，促进靶mRNA以转录后水平降解，并且在某些情况下，抑制翻译的起始。microRNA在许
多关键的生物过程中起至关重要的作用，如细胞周期和生长、细胞凋亡、细胞增殖和组织发
育的调节。
过与靶mRNA的互补序列部分或完全配对而主要结合靶信使RNA(mRNA)的3’非翻译区(3’-
UTR)，促进靶mRNA以转录后水平降解，并且在某些情况下，抑制翻译的起始。microRNA在许
多关键的生物过程中起至关重要的作用，如细胞周期和生长、细胞凋亡、细胞增殖和组织发
育的调节。
[0008] miRNA基因通常被转录为miRNA的长初级转录物(即pri-miRNA)。将pri-miRNA切割成miRNA的前体(即pre-miRNA)，其被进一步加工以产生成熟的功能性miRNA。
[0009] 虽然许多靶标表达策略采用基于核酸的形式，但仍需要具有更高的特异性和更少的脱靶效应的改进的核酸形式。
[0010] 本发明以人工pri-、pre-和成熟microRNA构建体的形式提供了这种改进的形式及其设计方法。这些新构建体可以是合成的独立分子，或者可以在用于递送至细胞的质粒或
表达载体中编码。此类载体包括但不限于腺相关病毒载体，如任何AAV血清型的载体基因组
或其他病毒递送载体，如慢病毒等。
表达载体中编码。此类载体包括但不限于腺相关病毒载体，如任何AAV血清型的载体基因组
或其他病毒递送载体，如慢病毒等。
发明内容
[0011] 本文描述了用于设计、制备、生产和/或配制调节性多核苷酸的组合物、方法、工艺、试剂盒和装置。
[0012] 在一些实施方案中，此种调节性多核苷酸可以由质粒或载体或重组腺相关病毒(AAV)编码或包含在其中，并且可以包含人工microRNA、人工pre-microRNA和/或人工pri-
microRNA。
microRNA。
[0014] 附图简要说明
[0015] 如附图中所示的，根据以下的本发明特定实施例的描述，前述和其他目的、特征和优点将是显而易见的，在所述附图中，相同的附图标记在全篇的不同视图中指代相同的部
件。附图不一定按比例绘制，而是将重点放在说明本发明的各种实施方案的原理上。
件。附图不一定按比例绘制，而是将重点放在说明本发明的各种实施方案的原理上。
[0017] 图2是显示调节性多核苷酸(MP)相对于ITR、内含子(I)和polyA(P)的位置的图。
[0018] 发明详述
[0019] I.本发明的组合物
[0020] 调节性多核苷酸
[0021] 根据本发明，提供了作为人工microRNA起作用的调节性多核苷酸。如本文所用，“调节性多核苷酸”是功能为调节(增加或减少)靶基因的水平或量的任何核酸聚合物。调节
性多核苷酸包括在调节之前在细胞内部加工的前体分子。调节性多核苷酸或其加工形式可
以在质粒、载体、基因组或其他核酸表达载体中编码以递送至细胞。
性多核苷酸包括在调节之前在细胞内部加工的前体分子。调节性多核苷酸或其加工形式可
以在质粒、载体、基因组或其他核酸表达载体中编码以递送至细胞。
[0022] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸可以包含编码至少一个siRNA分子的至少一个核酸序列。如果存在多于一个核酸，则核酸可以独立地编码1、2、3、4、5、6、7、8、9或多于9
个siRNA分子。
个siRNA分子。
[0023] 在一些实施方案中，调节性多核苷酸被设计为初级microRNA(pri-miR)或前体microRNA(pre-miR)，其在细胞内被加工以产生高度特异性的人工microRNA。
[0024] 调节性多核苷酸，尤其是本发明的人工microRNA，可以基于规范的或已知的microRNA、pri-microRNA或pre-microRNA的序列或结构支架设计。此种序列可以对应于任
何已知的microRNA或其前体，如美国公开US2005/0261218和美国公开US2005/0059005中教
导的那些，其内容通过引用的方式以其整体并入本文。
何已知的microRNA或其前体，如美国公开US2005/0261218和美国公开US2005/0059005中教
导的那些，其内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0025] microRNA(或miRNA或miR)是19-25个核苷酸长的非编码RNA，其与核酸分子的3′UTR结合并通过降低核酸分子稳定性或通过抑制翻译来下调基因表达。本发明的调节性多
核苷酸可以包含一个或多个microRNA序列、microRNA种子或人工microRNA，例如，作为
microRNA起作用的序列。
核苷酸可以包含一个或多个microRNA序列、microRNA种子或人工microRNA，例如，作为
microRNA起作用的序列。
[0026] microRNA序列包含“种子”区域，即成熟microRNA的2-9位区域中的序列，该序列与miRNA靶序列具有完美的Watson-Crick互补性。microRNA种子可以包含成熟microRNA的2-8
位或2-7位或2-9位。在一些实施方案中，microRNA种子可以包含7个核苷酸(例如，成熟
microRNA的核苷酸2-8)，其中相应的miRNA靶中的种子互补位点的侧翼为与microRNA的1位
相对的腺嘌呤(A)。在一些实施方案中，microRNA种子可以包含6个核苷酸(例如，成熟
microRNA的核苷酸2-7)，其中相应的miRNA靶中的种子互补位点的侧翼为与microRNA的1位
相对的腺嘌呤(A)。参见例如Grimson A，Farh KK，Johnston WK，Garrett-Engele P，Lim
LP，Bartel DP；Mol Cell.2007 Jul 6；27(1)：91-105，其每一篇通过引用的方式以其整体
并入本文。在天然存在的microRNA中，microRNA种子的碱基与靶序列具有完全互补性。
位或2-7位或2-9位。在一些实施方案中，microRNA种子可以包含7个核苷酸(例如，成熟
microRNA的核苷酸2-8)，其中相应的miRNA靶中的种子互补位点的侧翼为与microRNA的1位
相对的腺嘌呤(A)。在一些实施方案中，microRNA种子可以包含6个核苷酸(例如，成熟
microRNA的核苷酸2-7)，其中相应的miRNA靶中的种子互补位点的侧翼为与microRNA的1位
相对的腺嘌呤(A)。参见例如Grimson A，Farh KK，Johnston WK，Garrett-Engele P，Lim
LP，Bartel DP；Mol Cell.2007 Jul 6；27(1)：91-105，其每一篇通过引用的方式以其整体
并入本文。在天然存在的microRNA中，microRNA种子的碱基与靶序列具有完全互补性。
[0027] 如本文所教导的，设计参数或规则已被确定并应用于设计具有优异的靶基因调节性质以及有限的脱靶效应的调节性多核苷酸(例如人工microRNA)。
[0028] 在一个实施方案中，可以设计和优化本文所述的调节性多核苷酸的分子支架，以创建具有所需靶基因调节性质的调节性多核苷酸。作为一个非限制性实例，调节性多核苷
酸可具有优异的靶基因调节性质以及有限的脱靶效应。
酸可具有优异的靶基因调节性质以及有限的脱靶效应。
[0029] 在一个实施方案中，本发明的调节性多核苷酸(如人工miR)包含根据产生高度特异性的靶识别和低的引导链/过客链之比的一组规则来组装的模块元件或序列基序。这样
的模块或序列基序包括但不限于双链区、侧翼区、环、优化的环、UGUG环、GU结构域、间隔物
(以控制近端和远端基序或模块间距或引入结构元件，如转角(turn)、环或凸起)、CNNC基序
和热力学不对称区域，其可以包括环、凸起、错配、摆动(wobble)和/或其组合。在构建人工
miR时可以单独或组合应用的规则的非限制性实例包括以下文献中教导的那些：Seitz et
al.Silence 2011，2：4；Gu，et al.，Cell 151，900-911，November 9，2012；Schwartz，et
al.，Cell，Vol.115，199-208，October 17，2003；Park，et al.，Nature，Vol.475，101，14
July 2011；Ketley et al.，2013，PLoS ONE 8(6)；Liu，et al.，Nucleic Acids Research，
2008，Vol.36，No.9 2811-2824；Dow，et al.，2013，Nat Protoc.；7(2)：374-393.doi：
10.1038/nprot.2011.446；Auyeung，et al.，Cell 152，844-858，February 14，2013；Gu et
al.，Cell 2012 Nov 9，151(4)：900-11；Fellmann et al.Molecular Cell 41，733-746，
2011；Han et al.Cell 125，887-907，2006；Betancur et al.Frontiers in Genetics，
Vol.3，Art.127，1-6 July 2012；Schwarz et al.Cell Vol 115，199-208，2003；其每一篇
的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
的模块或序列基序包括但不限于双链区、侧翼区、环、优化的环、UGUG环、GU结构域、间隔物
(以控制近端和远端基序或模块间距或引入结构元件，如转角(turn)、环或凸起)、CNNC基序
和热力学不对称区域，其可以包括环、凸起、错配、摆动(wobble)和/或其组合。在构建人工
miR时可以单独或组合应用的规则的非限制性实例包括以下文献中教导的那些：Seitz et
al.Silence 2011，2：4；Gu，et al.，Cell 151，900-911，November 9，2012；Schwartz，et
al.，Cell，Vol.115，199-208，October 17，2003；Park，et al.，Nature，Vol.475，101，14
July 2011；Ketley et al.，2013，PLoS ONE 8(6)；Liu，et al.，Nucleic Acids Research，
2008，Vol.36，No.9 2811-2824；Dow，et al.，2013，Nat Protoc.；7(2)：374-393.doi：
10.1038/nprot.2011.446；Auyeung，et al.，Cell 152，844-858，February 14，2013；Gu et
al.，Cell 2012 Nov 9，151(4)：900-11；Fellmann et al.Molecular Cell 41，733-746，
2011；Han et al.Cell 125，887-907，2006；Betancur et al.Frontiers in Genetics，
Vol.3，Art.127，1-6 July 2012；Schwarz et al.Cell Vol 115，199-208，2003；其每一篇
的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0030] 在一个实施方案中，任何已知的RNAi构建体或RNAi剂可以作为用于设计本发明的调节性多核苷酸或人工microRNA的过客和/或引导链的起始构建体。这些包括规范
(canonical)的siRNA，小干扰RNA(siRNA)，双链RNA(dsRNA)，反向重复序列，短发夹RNA
(shRNA)，小时序调节RNA(stRNA)，聚类抑制性RNA(cRNA)包括径向聚类抑制性RNA，不对称
聚类抑制性RNA，线性聚类抑制性RNA，络合物或化合物聚类抑制性RNA，dicer底物，DNA指导
的RNAi(ddRNAi)，单链RNAi(ssRNAi)，microRNA(miRNA)拮抗剂，microRNA模拟物，microRNA
激动剂，blockmirs(又名Xmirs)，microRNA类似物，microRNA添加物(microRNA addback)，
supermiR，PCT公开WO/2005/013901中公开的寡聚构建体(其内容以其整体并入本文)、三生
(tripartite)RNAi构建体，如美国公开20090131360中公开的那些，其内容以其整体并入本
文，PCT公开WO/2010/011346中公开的solo-rxRNA构建体，其内容通过引用的方式以其整体
并入本文，PCT公开WO/2010/033247中公开的sd-rxRNA构建体，其内容通过引用的方式以其
整体并入本文，双作用RNAi构建体，其降低RNA水平并且还调节免疫应答，如PCT公开WO/
2010/002851和WO/2009/141146PCT中公开的，其内容通过引用的方式以其整体并入本文，
以及抗基因RNA(agRNA)或小活化RNA(saRNA)，其增加其设计靶标的表达，PCT公开WO/2006/
130201、WO/2007/086990、WO/2009/046397、WO/2009/149182、WO/2009/086428中有公开，其
内容通过引用的方式以其整体并入本文。
(canonical)的siRNA，小干扰RNA(siRNA)，双链RNA(dsRNA)，反向重复序列，短发夹RNA
(shRNA)，小时序调节RNA(stRNA)，聚类抑制性RNA(cRNA)包括径向聚类抑制性RNA，不对称
聚类抑制性RNA，线性聚类抑制性RNA，络合物或化合物聚类抑制性RNA，dicer底物，DNA指导
的RNAi(ddRNAi)，单链RNAi(ssRNAi)，microRNA(miRNA)拮抗剂，microRNA模拟物，microRNA
激动剂，blockmirs(又名Xmirs)，microRNA类似物，microRNA添加物(microRNA addback)，
supermiR，PCT公开WO/2005/013901中公开的寡聚构建体(其内容以其整体并入本文)、三生
(tripartite)RNAi构建体，如美国公开20090131360中公开的那些，其内容以其整体并入本
文，PCT公开WO/2010/011346中公开的solo-rxRNA构建体，其内容通过引用的方式以其整体
并入本文，PCT公开WO/2010/033247中公开的sd-rxRNA构建体，其内容通过引用的方式以其
整体并入本文，双作用RNAi构建体，其降低RNA水平并且还调节免疫应答，如PCT公开WO/
2010/002851和WO/2009/141146PCT中公开的，其内容通过引用的方式以其整体并入本文，
以及抗基因RNA(agRNA)或小活化RNA(saRNA)，其增加其设计靶标的表达，PCT公开WO/2006/
130201、WO/2007/086990、WO/2009/046397、WO/2009/149182、WO/2009/086428中有公开，其
内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0031] 同样地，上面列出的microRNA的任何pri-或pre-microRNA前体也可以用作本发明的调节性多核苷酸的分子支架。
[0032] 在一个实施方案中，起始构建体可以来源于任何相关物种，如但不限于小鼠、大鼠、狗、猴或人。
[0033] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子的下游，所述启动子如但不限于CMV、U6、H1、CBA或CBA启动子，具有SV40或人β珠蛋白内含子。此外，调节性
多核苷酸也可以位于表达载体中多腺苷酸化序列的上游。作为一个非限制性实例，调节性
多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或
多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-
15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸内。作为一个
非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上
游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷
酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多
腺苷酸化序列上游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-
25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％核苷酸的位置。
多核苷酸也可以位于表达载体中多腺苷酸化序列的上游。作为一个非限制性实例，调节性
多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或
多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-
15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸内。作为一个
非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上
游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷
酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多
腺苷酸化序列上游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-
25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％核苷酸的位置。
[0034] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中多腺苷酸化序列的上游。此外，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子的下游，所述启动子如但不限于CMV、
U6、H1、CBA或CBA启动子，具有SV40或人β珠蛋白内含子。作为一个非限制性实例，调节性多
核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、
10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多
腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-
15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸内。作为一个
非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上
游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷
酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多
腺苷酸化序列上游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-
25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
U6、H1、CBA或CBA启动子，具有SV40或人β珠蛋白内含子。作为一个非限制性实例，调节性多
核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、
10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多
腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-
15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸内。作为一个
非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上
游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷
酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中启动子下游和/或多
腺苷酸化序列上游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-
25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
[0035] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸可以位于scAAV中。
[0036] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸可以位于ssAAV中。
[0037] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中flip ITR的5’端附近。在另一个实施方案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中flip ITR的3’端附近。在又一
个实施方案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中flop ITR的5’端附近。在又一个实施
方案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中flop ITR的3’端附近。在一个实施方案中，调
节性多核苷酸可以位于表达载体中flip ITR的5’端和flop ITR的3’端之间。在一个实施方
案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中flip ITR的3’端和flip ITR的5’端之间(例如，
flip ITR的5’端和flop ITR的3’端或flop ITR的3’端和flip ITR的5’端之间的半路上)。
作为一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)
的5’或3’端下游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、
24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为一个非限制性实例，调节性多核苷酸可
以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop
ITR)的5’或3’端下游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-
15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸内。作为另一
个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或
3’端上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-15、10-20、
10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30内。作为一个非限制性实例，调节
性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上游的前1％、
2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷酸内。作为
另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的
5’或3’端下游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-
25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
个实施方案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中flop ITR的5’端附近。在又一个实施
方案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中flop ITR的3’端附近。在一个实施方案中，调
节性多核苷酸可以位于表达载体中flip ITR的5’端和flop ITR的3’端之间。在一个实施方
案中，调节性多核苷酸可以位于表达载体中flip ITR的3’端和flip ITR的5’端之间(例如，
flip ITR的5’端和flop ITR的3’端或flop ITR的3’端和flip ITR的5’端之间的半路上)。
作为一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)
的5’或3’端下游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、
24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为一个非限制性实例，调节性多核苷酸可
以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop
ITR)的5’或3’端下游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-
15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸内。作为另一
个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或
3’端上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-15、10-20、
10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30内。作为一个非限制性实例，调节
性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上游的前1％、
2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷酸内。作为
另一个非限制性实例，调节性多核苷酸可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的
5’或3’端下游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-
25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
[0038] 除模块(module)或序列基序外，调节性多核苷酸还包含过客链和引导链中的至少一种或两者。过客链和引导链可以位于调节性多核苷酸的茎环结构的5’臂或3’臂上。
[0039] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸的3’茎臂可以在引导链的3’端下游具有11个核苷酸，其与5’茎臂中过客链的5’端上游的13个核苷酸中的11个具有互补性。
[0040] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸可以具有半胱氨酸，其是在调节性多核苷酸的3’茎臂的3’端下游的6个核苷酸。
[0041] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸包含引导链的miRNA种子匹配。在另一个实施方案中，调节性多核苷酸包含过客链的miRNA种子匹配。在又一个实施方案中，调节性多核
苷酸不包含引导链或过客链的种子匹配。
苷酸不包含引导链或过客链的种子匹配。
[0042] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸可以几乎没有针对引导链的显著的全长脱靶。在另一个实施方案中，调节性多核苷酸针对过客链可以几乎没有显著的全长脱靶。在又
一个实施方案中，调节性多核苷酸针对引导链或过客链可以几乎没有显著的全长脱靶。
一个实施方案中，调节性多核苷酸针对引导链或过客链可以几乎没有显著的全长脱靶。
[0043] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸可以具有体外高活性。在另一个实施方案中，调节性多核苷酸可以具有体外低活性。在又一个实施方案中，调节性多核苷酸可以具有体
外高引导链活性和低过客链活性。
外高引导链活性和低过客链活性。
[0044] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸具有体外高引导链活性和低过客链活性。引导链的靶敲低(KD)可以为至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、99.5％
或100％。引导链的靶敲低可以是60-65％、60-70％、60-75％、60-80％、60-85％、60-90％、
60-95％、60-99％、60-99.5％、60-100％、65-70％、65-75％、65-80％、65-85％、65-90％、
65-95％、65-99％、65-99.5％、65-100％、70-75％、70-80％、70-85％、70-90％、70-95％、
70-99％、70-99.5％、70-100％、75-80％、75-85％、75-90％、75-95％、75-99％、75-99.5％、
75-100％、80-85％、80-90％、80-95％、80-99％、80-99.5％、80-100％、85-90％、85-95％、
85-99％、85-99.5％、85-100％、90-95％、90-99％、90-99.5％、90-100％、95-99％、95-
99.5％、95-100％、99-99.5％、99-100％或99.5-100％。作为一个非限制性实例，引导链的
靶敲低(KD)为大于70％。
或100％。引导链的靶敲低可以是60-65％、60-70％、60-75％、60-80％、60-85％、60-90％、
60-95％、60-99％、60-99.5％、60-100％、65-70％、65-75％、65-80％、65-85％、65-90％、
65-95％、65-99％、65-99.5％、65-100％、70-75％、70-80％、70-85％、70-90％、70-95％、
70-99％、70-99.5％、70-100％、75-80％、75-85％、75-90％、75-95％、75-99％、75-99.5％、
75-100％、80-85％、80-90％、80-95％、80-99％、80-99.5％、80-100％、85-90％、85-95％、
85-99％、85-99.5％、85-100％、90-95％、90-99％、90-99.5％、90-100％、95-99％、95-
99.5％、95-100％、99-99.5％、99-100％或99.5-100％。作为一个非限制性实例，引导链的
靶敲低(KD)为大于70％。
[0045] 在一个实施方案中，过客链对于最近的脱靶(off target)的IC50大于引导链对靶的IC50乘以100。作为一个非限制性实例，如果过客链对于最近的脱靶的IC50大于引导链对
靶的IC50乘以100，则调节性多核苷酸被称为具有体外高导向链活性和低过客链活性。
靶的IC50乘以100，则调节性多核苷酸被称为具有体外高导向链活性和低过客链活性。
[0046] 在一个实施方案中，引导链的5’加工在体外或体内至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％的时间在5’端具有正确的起点(n)。作为一个非限制性实例，引导链的5’
加工是精确的并且在体外至少99％的时间在5’端具有正确的起始(n)。作为一个非限制性
实例，引导链的5’加工是精确的并且在体内至少99％的时间在5’端具有正确的起点(n)。
加工是精确的并且在体外至少99％的时间在5’端具有正确的起始(n)。作为一个非限制性
实例，引导链的5’加工是精确的并且在体内至少99％的时间在5’端具有正确的起点(n)。
[0047] 在一个实施方案中，在体外或体内，引导链与过客链(G∶P)之比为1∶10、1∶9、1∶8、1∶7、1∶6、1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1；1、2∶10、2∶9、2∶8、2∶7、2∶6、2∶5、2∶4、2∶3、2∶2、2∶1、3∶10、3∶9、
3∶8、3∶7、3∶6、3∶5、3∶4、3∶3、3∶2、3∶1、4∶10、4∶9、4∶8、4∶7、4∶6、4∶5、4∶4、4∶3、4∶2、4∶1、5∶
10、5∶9、5∶8、5∶7、5∶6、5∶5、5∶4、5∶3、5∶2、5∶1、6∶10、6∶9、6∶8、6∶7、6∶6、6∶5、6∶4、6∶3、6∶2、6∶1、7∶10、7∶9、7∶8、7∶7、7∶6、7∶5、7∶4、7∶3、7∶2、7∶1、8∶10、8∶9、8∶8、8∶7、8∶6、8∶5、8∶4、8∶3、
8∶2、8∶1、9∶10、9∶9、9∶8、9∶7、9∶6、9∶5、9∶4、9∶3、9∶2、9∶1、10∶10、10∶9、10∶8、10∶7、10∶6、10∶5、10∶4、10∶3、10∶2、10∶1、1∶99、5∶95、10∶90、15∶85、20∶80、25∶75、30∶70、35∶65、40∶60、45∶55、50∶50、55∶45、60∶40、65∶35、70∶30、75∶25、80∶20、85∶15、90∶10、95∶5或99∶1。
3∶8、3∶7、3∶6、3∶5、3∶4、3∶3、3∶2、3∶1、4∶10、4∶9、4∶8、4∶7、4∶6、4∶5、4∶4、4∶3、4∶2、4∶1、5∶
10、5∶9、5∶8、5∶7、5∶6、5∶5、5∶4、5∶3、5∶2、5∶1、6∶10、6∶9、6∶8、6∶7、6∶6、6∶5、6∶4、6∶3、6∶2、6∶1、7∶10、7∶9、7∶8、7∶7、7∶6、7∶5、7∶4、7∶3、7∶2、7∶1、8∶10、8∶9、8∶8、8∶7、8∶6、8∶5、8∶4、8∶3、
8∶2、8∶1、9∶10、9∶9、9∶8、9∶7、9∶6、9∶5、9∶4、9∶3、9∶2、9∶1、10∶10、10∶9、10∶8、10∶7、10∶6、10∶5、10∶4、10∶3、10∶2、10∶1、1∶99、5∶95、10∶90、15∶85、20∶80、25∶75、30∶70、35∶65、40∶60、45∶55、50∶50、55∶45、60∶40、65∶35、70∶30、75∶25、80∶20、85∶15、90∶10、95∶5或99∶1。
[0048] 引导链与过客链之比是指在剪切引导链之后引导链与过客链的比率。例如，80∶20的引导链与过客链之比是指相对于从前体剪下的每2条过客链具有8条引导链。作为一个非
限制性实例，在体外引导链与过客链之比为8∶2。作为一个非限制性实例，在体内引导链与
过客链之比为8∶2。作为一个非限制性实例，在体外引导链与过客链之比为9∶1。作为一个非
限制性实例，在体内引导链与过客链之比为9∶1。
限制性实例，在体外引导链与过客链之比为8∶2。作为一个非限制性实例，在体内引导链与
过客链之比为8∶2。作为一个非限制性实例，在体外引导链与过客链之比为9∶1。作为一个非
限制性实例，在体内引导链与过客链之比为9∶1。
[0049] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为大于1。
[0050] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为大于2。
[0051] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为大于5。
[0052] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为大于10。
[0053] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为大于20。
[0054] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为大于50。
[0055] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为至少3∶1。
[0056] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为至少5∶1。
[0057] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为至少10∶1。
[0058] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为至少20∶1。
[0059] 在一个实施方案中，表达的引导链与过客链(G∶P)(也称为反义链与有义链)之比为至少50∶1。
[0060] 在一个实施方案中，在体外或在体内表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为1∶10、1∶9、1∶8、1∶7、1∶6、1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1；1、2∶10、2∶9、2∶8、2∶7、2∶6、
2∶5、2∶4、2∶3、2∶2、2∶1、3∶10、3∶9、3∶8、3∶7、3∶6、3∶5、3∶4、3∶3、3∶2、3∶1、4∶10、4∶9、4∶8、4∶
7、4∶6、4∶5、4∶4、4∶3、4∶2、4∶1、5∶10、5∶9、5∶8、5∶7、5∶6、5∶5、5∶4、5∶3、5∶2、5∶1、6∶10、6∶9、6∶8、6∶7、6∶6、6∶5、6∶4、6∶3、6∶2、6∶1、7∶10、7∶9、7∶8、7∶7、7∶6、7∶5、7∶4、7∶3、7∶2、7∶1、8∶10、
8∶9、8∶8、8∶7、8∶6、8∶5、8∶4、8∶3、8∶2、8∶1、9∶10、9∶9、9∶8、9∶7、9∶6、9∶5、9∶4、9∶3、9∶2、9∶1、
10∶10、10∶9、10∶8、10∶7、10∶6、10∶5、10∶4、10∶3、10∶2、10∶1、1∶99、5∶95、10∶90、15∶85、20∶
80、25∶75、30∶70、35∶65、40∶60、45∶55、50∶50、55∶45、60∶40、65∶35、70∶30、75∶25、80∶20、85∶15、90∶10、95∶5或99∶1。过客链与引导链之比是指在剪切引导链之后过客链与引导链的比
率。例如，80∶20的过客链与引导链之比将相对于每2条从前体中剪下的引导链有8条过客
链。作为一个非限制性实例，在体外过客链与引导链之比为80∶20。作为一个非限制性实例，
在体内过客链与引导链之比为80∶20。作为一个非限制性实例，在体外过客链与引导链之比
为8∶2。作为一个非限制性实例，在体内过客链与引导链之比为8∶2。作为一个非限制性实
例，在体外过客链与引导链之比为9∶1。作为一个非限制性实例，在体内过客链与引导链之
比为9∶1。
2∶5、2∶4、2∶3、2∶2、2∶1、3∶10、3∶9、3∶8、3∶7、3∶6、3∶5、3∶4、3∶3、3∶2、3∶1、4∶10、4∶9、4∶8、4∶
7、4∶6、4∶5、4∶4、4∶3、4∶2、4∶1、5∶10、5∶9、5∶8、5∶7、5∶6、5∶5、5∶4、5∶3、5∶2、5∶1、6∶10、6∶9、6∶8、6∶7、6∶6、6∶5、6∶4、6∶3、6∶2、6∶1、7∶10、7∶9、7∶8、7∶7、7∶6、7∶5、7∶4、7∶3、7∶2、7∶1、8∶10、
8∶9、8∶8、8∶7、8∶6、8∶5、8∶4、8∶3、8∶2、8∶1、9∶10、9∶9、9∶8、9∶7、9∶6、9∶5、9∶4、9∶3、9∶2、9∶1、
10∶10、10∶9、10∶8、10∶7、10∶6、10∶5、10∶4、10∶3、10∶2、10∶1、1∶99、5∶95、10∶90、15∶85、20∶
80、25∶75、30∶70、35∶65、40∶60、45∶55、50∶50、55∶45、60∶40、65∶35、70∶30、75∶25、80∶20、85∶15、90∶10、95∶5或99∶1。过客链与引导链之比是指在剪切引导链之后过客链与引导链的比
率。例如，80∶20的过客链与引导链之比将相对于每2条从前体中剪下的引导链有8条过客
链。作为一个非限制性实例，在体外过客链与引导链之比为80∶20。作为一个非限制性实例，
在体内过客链与引导链之比为80∶20。作为一个非限制性实例，在体外过客链与引导链之比
为8∶2。作为一个非限制性实例，在体内过客链与引导链之比为8∶2。作为一个非限制性实
例，在体外过客链与引导链之比为9∶1。作为一个非限制性实例，在体内过客链与引导链之
比为9∶1。
[0061] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为大于1。
[0062] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为大于2。
[0063] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为大于5。
[0064] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为大于10。
[0065] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为大于20。
[0066] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为大于50。
[0067] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为至少3∶1。
[0068] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为至少5∶1。
[0069] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为至少10∶1。
[0070] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为至少20∶1。
[0071] 在一个实施方案中，表达的过客链与引导链(P∶G)(也称为有义链与反义链)之比为至少50∶1。
[0072] 在一个实施方案中，在测量加工时，当pri-或pre-microRNA表现出(利用本领域中已知的和本文中描述的方法)大于2倍的引导链与过客链之比时，过客链-引导链双链体被
认为是有效的。作为一个非限制性实例，在测量加工时，pri-或pre-microRNA表现出大于2
倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、或2至5倍、2至10
倍、2至15倍、3至5倍、3至10倍、3至15倍、4至5倍、4至10倍、4至15倍、5至10倍、5至15倍、6至
10倍、6至15倍、7至10倍、7至15倍、8至10倍、8至15倍、9至10倍、9至15倍、10至15倍、11至15
倍、12至15倍、13至15倍或14至15倍的引导链与过客链之比。
认为是有效的。作为一个非限制性实例，在测量加工时，pri-或pre-microRNA表现出大于2
倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、或2至5倍、2至10
倍、2至15倍、3至5倍、3至10倍、3至15倍、4至5倍、4至10倍、4至15倍、5至10倍、5至15倍、6至
10倍、6至15倍、7至10倍、7至15倍、8至10倍、8至15倍、9至10倍、9至15倍、10至15倍、11至15
倍、12至15倍、13至15倍或14至15倍的引导链与过客链之比。
[0073] 在一个实施方案中，载体基因组的完整性为构建体全长的至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或多于99％。
[0074] 靶核酸
[0075] 本发明的调节性多核苷酸可以靶向至任何基因或核酸构建体，包括编码和非编码基因。可以靶向编码人或灵长类动物蛋白质的基因(DNA或mRNA)。此外，还可以靶向非编码
基因，例如，长链非编码RNA(lncRNA)。
基因，例如，长链非编码RNA(lncRNA)。
[0076] 这样的lncRNA分子和设计用于靶向这样的lncRNA的RNAi构建体的实例分别在国际公开WO2012/018881 A2中教导，其中任何一个可以被调节性多核苷酸靶向或者在调节性
多核苷酸中编码，所述文献的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
多核苷酸中编码，所述文献的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0077] 在一个实施方案中，本发明的调节性多核苷酸可以靶向本领域已知的任何基因。作为一个非限制性实例，基因可以是SOD1。
[0078] 在一个实施方案中，本发明的调节性多核苷酸可以靶向本领域已知的任何基因。作为一个非限制性实例，基因可以是Htt。
[0079] 在一个实施方案中，可以将调节性多核苷酸设计成靶向人基因组中的任何基因或mRNA，例如与CNS病症(如但不限于亨廷顿氏病、ALS等)相关的基因。
[0080] 分子支架
[0081] 在一些实施方案中，调节性多核苷酸的起始分子支架是已知的或野生型的pri-或pre-microRNA。在其他实施方案中，调节性多核苷酸的分子支架从头开始(ab initio)设
计。(参见Cullen，Gene Therapy(2006)13，503-508，用miR30工作；Chung，et al.，Nucleic
Acids Research，2006，Vol.34，No.7，用miR-155工作；其内容通过引用的方式以其整体并
入本文)。
计。(参见Cullen，Gene Therapy(2006)13，503-508，用miR30工作；Chung，et al.，Nucleic
Acids Research，2006，Vol.34，No.7，用miR-155工作；其内容通过引用的方式以其整体并
入本文)。
[0083] 本发明的调节性多核苷酸可以设计为pri-miR，如图1所示。在该图中，显示了pri-miR分子支架。包含有效负载(例如，本文所述的siRNA、miRNA或其他RNAi剂)的调节性多核
苷酸包含前导5’侧翼序列，其可以是任何长度，并且可以全部或部分地衍生自野生型
microRNA序列或者是完全人工的。
苷酸包含前导5’侧翼序列，其可以是任何长度，并且可以全部或部分地衍生自野生型
microRNA序列或者是完全人工的。
[0084] 在一个实施方案中，分子支架包含至少一个5’侧翼区。作为一个非限制性实例，5’侧翼区可以包含5’侧翼序列，其可以是任何长度，并且可以全部或部分地衍生自野生型
microRNA序列或者是完全人工序列。
microRNA序列或者是完全人工序列。
[0085] 在一个实施方案中，分子支架包含至少一个3’侧翼区。作为一个非限制性实例，3’侧翼区可以包含3’侧翼序列，其可以是任何长度，并且可以全部或部分地衍生自野生型
microRNA序列或者是完全人工序列。
microRNA序列或者是完全人工序列。
[0086] 在一个实施方案中，分子支架包含至少一个环基序区。作为一个非限制性实例，环基序区可以包含可以为任何长度的序列。
[0087] 在一个实施方案中，分子支架包含5’侧翼区、环基序区和/或3’侧翼区。
[0088] 在一个实施方案中，至少一种有效负载(payload)(例如，本文所述的siRNA、miRNA或其他RNAi剂)可以由调节性多核苷酸编码，所述调节性多核苷酸还可以包含至少一种分
子支架。分子支架可以包含5’侧翼序列和/或3’侧翼序列，其可以是任何长度，并且可以全
部或部分地衍生自野生型microRNA序列或者是完全人工的。3’侧翼序列可以反映5’侧翼序
列的大小和来源。任何一个侧翼序列都可以不存在。3’侧翼序列可以任选地含有一个或多
个CNNC基序，其中“N”代表任何核苷酸。
子支架。分子支架可以包含5’侧翼序列和/或3’侧翼序列，其可以是任何长度，并且可以全
部或部分地衍生自野生型microRNA序列或者是完全人工的。3’侧翼序列可以反映5’侧翼序
列的大小和来源。任何一个侧翼序列都可以不存在。3’侧翼序列可以任选地含有一个或多
个CNNC基序，其中“N”代表任何核苷酸。
[0089] 形成所示的茎环结构的茎是编码至少一个有效负载序列的调节性多核苷酸的最小量。在一些实施方案中，有效负载序列包含至少一种核酸序列，其部分地与靶序列互补或
者将与靶序列杂交。在一些实施方案中，有效负载是野生型microRNA。在一些实施方案中，
有效负载是siRNA分子或siRNA分子的片段。在一些实施方案中，有效负载是基本上双链的
构建体，其可以包含一个或多个microRNA、人工microRNA或siRNA。
者将与靶序列杂交。在一些实施方案中，有效负载是野生型microRNA。在一些实施方案中，
有效负载是siRNA分子或siRNA分子的片段。在一些实施方案中，有效负载是基本上双链的
构建体，其可以包含一个或多个microRNA、人工microRNA或siRNA。
[0090] 在一些实施方案中，调节性多核苷酸的茎环的5’臂包含编码过客链的核酸序列。该链也称为有义链，因为它反映了与靶标的同一性。过客链的长度可以在15-30个核苷酸之
间。它的长度可以是15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。
间。它的长度可以是15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。
[0091] 在一些实施方案中，调节性多核苷酸的茎环的3’臂包含编码引导链的核酸序列。该链也称为反义链，因为它反映了与靶标的同源性。引导链的长度可以为15-30个核苷酸、
21-25个核苷酸或22个核苷酸。它的长度可以是15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、
27、28、29或30个核苷酸。在一些情况下，引导链在5’最末端包含“G”核苷酸。
21-25个核苷酸或22个核苷酸。它的长度可以是15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、
27、28、29或30个核苷酸。在一些情况下，引导链在5’最末端包含“G”核苷酸。
[0092] 在一些实施方案中，当引导链包含microRNA或人工microRNA时，引导链可以包含一个或多个microRNA种子序列。种子序列可以相对于引导链的第一个5’核苷酸或相对于切
丁酶(dicer)切割位点位于引导链的2-7、2-8或2-9位。
丁酶(dicer)切割位点位于引导链的2-7、2-8或2-9位。
[0093] 在其他实施方案中，过客链可以位于调节性多核苷酸的茎环结构的茎的3’臂上，而引导链位于5’臂上。
[0094] 过客链和引导链可以在其大部分长度上完全互补。在其他实施方案中，过客链和引导链可以独立地在所述链的至少50、60、70、80、85、90、95或99％的长度上为至少70、80、
90、95或99％互补。
90、95或99％互补。
[0095] 过客链的同一性和引导链的同源性都不需要与靶序列100％互补。
[0096] 在一个实施方案中，分离调节性多核苷酸的茎环结构的过客和引导链的是环序列(也称为环基序、接头或接头基序)。环序列可以是任何长度，在4-30个核苷酸之间、在4-20
个核苷酸之间、在4-15个核苷酸之间、在5-15个核苷酸之间、在6-12个核苷酸之间、6个核苷
酸、7个核苷酸、8个核苷酸、9个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、
14个核苷酸和/或15个核苷酸。
个核苷酸之间、在4-15个核苷酸之间、在5-15个核苷酸之间、在6-12个核苷酸之间、6个核苷
酸、7个核苷酸、8个核苷酸、9个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、
14个核苷酸和/或15个核苷酸。
[0097] 在一些实施方案中，环序列包含编码至少一个UGUG基序的核酸序列。在一些实施方案中，编码UGUG基序的核酸序列位于环序列的5’末端。
[0098] 在一个实施方案中，在调节性多核苷酸中可以存在间隔区以将一个或多个模块(例如，5’侧翼区、环基序区、3’侧翼区、有义序列、反义序列)彼此分离开。可以存在一个或
多个这样的间隔区。
多个这样的间隔区。
[0099] 在一个实施方案中，在过客链和侧翼区序列之间可以存在8-20个(即8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)核苷酸的间隔区。
[0100] 在一个实施方案中，间隔区的长度为13个核苷酸，并位于过客链的5’末端和侧翼序列的3’末端之间。在一个实施方案中，间隔物具有足以形成大约一个螺旋转角的长度的
序列。
序列。
[0101] 在一个实施方案中，在引导链和侧翼序列之间可以存在8-20个(即8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)核苷酸的间隔区。
[0102] 在一个实施方案中，间隔物序列在10-13个(即10、11、12或13个)核苷酸之间，并且位于引导链的3’末端和侧翼序列的5’末端之间。在一个实施方案中，间隔物具有足够的长
度以形成序列的大约一个螺旋转角。
度以形成序列的大约一个螺旋转角。
[0103] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸在茎的基部包含至少一个UG基序，由此G核苷酸是配对的且U核苷酸是未配对的。在一些实施方案中，未配对的U核苷酸位于侧翼序列中。
[0104] 在一个实施方案中，调节性多核苷酸以5’至3’方向包含5’侧翼序列、5’臂、环基序、3’臂和3’侧翼序列。作为一个非限制性实例，5’臂可以包含过客链，而3’臂包含引导链。
在另一个非限制性实例中，5’臂包含引导链，而3’臂包含过客链。
在另一个非限制性实例中，5’臂包含引导链，而3’臂包含过客链。
[0105] 在一个实施方案中，可以改变5’臂、有效负载(例如，过客链和/或引导链)、环基序和/或3’臂序列(例如，取代1个或多个核苷酸、添加核苷酸和/或删除核苷酸)。改变可以引
起构建体功能的有益变化(例如，增加靶序列的敲低、减少构建体的降解、减少脱靶效应、提
高有效负载的效率以及减少有效负载的降解)。
起构建体功能的有益变化(例如，增加靶序列的敲低、减少构建体的降解、减少脱靶效应、提
高有效负载的效率以及减少有效负载的降解)。
[0106] 在一个实施方案中，可以改变过客链序列(例如，取代1个或多个核苷酸、添加核苷酸和/或删除核苷酸)。作为一个非限制性实例，过客链序列可以在序列的最后4个核苷酸内
包含1或2个取代(例如，C取代G)。作为另一个非限制性实例，过客链序列可以在序列的5’端
的7-15个核苷酸内包含1或2个取代(例如，U取代A或C取代G)。
包含1或2个取代(例如，C取代G)。作为另一个非限制性实例，过客链序列可以在序列的5’端
的7-15个核苷酸内包含1或2个取代(例如，U取代A或C取代G)。
[0107] 在一个实施方案中，可以改变3’臂链序列(例如，取代1个或多个核苷酸、添加核苷酸和/或删除核苷酸)。作为一个非限制性实例，3’臂的序列可以在序列的前4个核苷酸内包
含1或2个取代(例如，A取代U)。
含1或2个取代(例如，A取代U)。
[0108] 在一个实施方案中，有效负载构建体的分子支架可以包含5’侧翼区、环基序和3’侧翼区。在5’侧翼区和环基序之间可以是第一有效负载区，并且在环基序和3’侧翼区之间
可以是第二有效负载区。第一和第二有效负载区可以包含本文所述的siRNA、miRNA或其他
RNAi剂、片段或变体。第一和第二有效负载区还可以包含彼此相同、不同或互补的序列。作
为一个非限制性实例，第一有效负载区序列可以是siRNA构建体的过客链，第二有效负载区
序列可以是siRNA构建体的引导链。过客和引导序列可以彼此基本上互补。作为另一个非限
制性实例，第一有效负载区序列可以是siRNA构建体的引导链，第二有效负载区序列可以是
siRNA构建体的过客链。过客和引导序列可以彼此基本上互补。
可以是第二有效负载区。第一和第二有效负载区可以包含本文所述的siRNA、miRNA或其他
RNAi剂、片段或变体。第一和第二有效负载区还可以包含彼此相同、不同或互补的序列。作
为一个非限制性实例，第一有效负载区序列可以是siRNA构建体的过客链，第二有效负载区
序列可以是siRNA构建体的引导链。过客和引导序列可以彼此基本上互补。作为另一个非限
制性实例，第一有效负载区序列可以是siRNA构建体的引导链，第二有效负载区序列可以是
siRNA构建体的过客链。过客和引导序列可以彼此基本上互补。
[0109] 在一个实施方案中，本文所述的调节性多核苷酸的分子支架可以包含5’侧翼区、环基序区和3’侧翼区。可以由本文所述的调节性多核苷酸编码的5’侧翼区、环基序区和3’
侧翼区的序列的非限制性实例在表1-3中示出。
侧翼区的序列的非限制性实例在表1-3中示出。
[0110] 表1.分子支架的5’侧翼区
[0111]
[0112]
[0113] 表2.分子支架的环基序区
[0114]
[0115] 表3.分子支架的3’侧翼区
[0116]
[0117]
[0118] 表1-3中描述的其中U是T的任何区域可以用作本文所述的分子支架中的模块(modules)。
[0119] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码表1中列出的至少一个5’侧翼区的至少一个核酸序列。作为一个非限制性实例，5’侧翼区可以是5F1、5F2、5F3、5F4、5F5、5F6、
5F7、5F8或5F9。
5F7、5F8或5F9。
[0120] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列。
[0121] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列。
[0122] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列。
[0123] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列。
[0124] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列。
[0125] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列。
[0126] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列。
[0127] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列。
[0128] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列。
[0129] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码表2中列出的至少一个环基序区的至少一个核酸序列。作为一个非限制性示例，环基序区可以是L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9
或L10。
或L10。
[0130] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0131] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0132] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0133] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0134] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0135] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0136] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0137] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0138] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0139] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0140] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码表3中列出的至少一个3’侧翼区的至少一个核酸序列。作为一个非限制性实例，分子支架可以包含3’侧翼区3F1、3F2、3F3、3F4、
3F5、3F6、3F7或3F8。
3F5、3F6、3F7或3F8。
[0141] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个3F1侧翼区的至少一个核酸序列。
[0142] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个3F2侧翼区的至少一个核酸序列。
[0143] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个3F3侧翼区的至少一个核酸序列。
[0144] 在一个实施方案中，分子支架可以包含至少一个编码至少一个3F4侧翼区的核酸序列。
[0145] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个3F5侧翼区的至少一个核酸序列。
[0146] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个3F6侧翼区的至少一个核酸序列。
[0147] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个3F7侧翼区的至少一个核酸序列。
[0148] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个3F8侧翼区的至少一个核酸序列。
[0149] 在一个实施方案中，分子支架可以包含至少一个编码如表1和表2中所述的至少一个5’侧翼区和至少一个环基序区的核酸序列。作为一个非限制性实例，5’侧翼区和环基序
区可以是5F1和L1、5F1和L2、5F1和L3、5F1和L4、5F1和L5、5F1和L6、5F1和L7、5F1和L8、5F1和
L9、5F1和L10、5F1和L11、5F2和L1、5F2和L2、5F2和L3、5F2和L4、5F2和L5、5F2和L6、5F2和L7、
5F2和L8、5F2和L9、5F2和L10、5F2和L11、5F3和L1、5F3和L2、5F3和L3、5F3和L4、5F3和L5、5F3
和L6、5F3和L7、5F3和L8、5F3和L9、5F3和L10、5F3和L11、5F4和L1、5F4和L2、5F4和L3、5F4和
L4、5F4和L5、5F4和L6、5F4和L7、5F4和L8、5F4和L9、5F4和L10、5F4和L11、5F5和L1、5F5和L2、
5F5和L3、5F5和L4、5F5和L5、5F5和L6、5F5和L7、5F5和L8、5F5和L9、5F5和L10、5F5和L11、5F6
和L1、5F6和L2、5F6和L3、5F6和L4、5F6和L5、5F6和L6、5F6和L7、5F6和L8、5F6和L9、5F6和
L10、5F6和L11、5F7和L1、5F7和L2、5F7和L3、5F7和L4、5F7和L5、5F7和L6、5F7和L7、5F7和L8、
5F7和L9、5F7和L10、5F7和L11、5F8和L1、5F8和L2、5F8和L3、5F8和L4、5F8和L5、5F8和L6、5F8
和L7、5F8和L8、5F8和L9、5F8和L10、5F8和L11、5F9和L1、5F9和L2、5F9和L3、5F9和L4、5F9和
L5、5F9和L6、5F9和L7、5F9和L8、5F9和L9、5F9和L10或5F9和L11。
区可以是5F1和L1、5F1和L2、5F1和L3、5F1和L4、5F1和L5、5F1和L6、5F1和L7、5F1和L8、5F1和
L9、5F1和L10、5F1和L11、5F2和L1、5F2和L2、5F2和L3、5F2和L4、5F2和L5、5F2和L6、5F2和L7、
5F2和L8、5F2和L9、5F2和L10、5F2和L11、5F3和L1、5F3和L2、5F3和L3、5F3和L4、5F3和L5、5F3
和L6、5F3和L7、5F3和L8、5F3和L9、5F3和L10、5F3和L11、5F4和L1、5F4和L2、5F4和L3、5F4和
L4、5F4和L5、5F4和L6、5F4和L7、5F4和L8、5F4和L9、5F4和L10、5F4和L11、5F5和L1、5F5和L2、
5F5和L3、5F5和L4、5F5和L5、5F5和L6、5F5和L7、5F5和L8、5F5和L9、5F5和L10、5F5和L11、5F6
和L1、5F6和L2、5F6和L3、5F6和L4、5F6和L5、5F6和L6、5F6和L7、5F6和L8、5F6和L9、5F6和
L10、5F6和L11、5F7和L1、5F7和L2、5F7和L3、5F7和L4、5F7和L5、5F7和L6、5F7和L7、5F7和L8、
5F7和L9、5F7和L10、5F7和L11、5F8和L1、5F8和L2、5F8和L3、5F8和L4、5F8和L5、5F8和L6、5F8
和L7、5F8和L8、5F8和L9、5F8和L10、5F8和L11、5F9和L1、5F9和L2、5F9和L3、5F9和L4、5F9和
L5、5F9和L6、5F9和L7、5F9和L8、5F9和L9、5F9和L10或5F9和L11。
[0150] 在一个实施方案中，分子支架可以包含如表2和表3中所述的至少一个3’侧翼区和至少一个环基序区。作为一个非限制性实例，分子支架可以包含3F1和L1、3F1和L2、3F1和
L3、3F1和L4、3F1和L5、3F1和L6、3F1和L7、3F1和L8、3F1和L9、3F1和L10、3F1和L11、3F2和L1、
3F2和L2、3F2和L3、3F2和L4、3F2和L5、3F2和L6、3F2和L7、3F2和L8、3F2和L9、3F2和L10、3F2
和L11、3F3和L1、3F3和L2、3F3和L3、3F3和L4、3F3和L5、3F3和L6、3F3和L7、3F3和L8、3F3和
L9、3F3和L10、3F3和L11、3F4和L1、3F4和L2、3F4和L3、3F4和L4、3F4和L5、3F4和L6、3F4和L7、
3F4和L8、3F4和L9、3F4和L10、3F4和L11、3F5和L1、3F5和L2、3F5和L3、3F5和L4、3F5和L5、3F5
和L6、3F5和L7、3F5和L8、3F5和L9、3F5和L10、3F5和L11、3F6和L1、3F6和L2、3F6和L3、3F6和
L4、3F6和L5、3F6和L6、3F6和L7、3F6和L8、3F6和L9、3F6和L10、3F6和L11、3F7和L1、3F7和L2、
3F7和L3、3F7和L4、3F7和L5、3F7和L6、3F7和L7、3F7和L8、3F7和L9、3F7和L10、3F7和L11、3F8
和L1、3F8和L2、3F8和L3、3F8和L4、3F8和L5、3F8和L6、3F8和L7、3F8和L8、3F8和L9、3F8和L10
或3F8和L11。
L3、3F1和L4、3F1和L5、3F1和L6、3F1和L7、3F1和L8、3F1和L9、3F1和L10、3F1和L11、3F2和L1、
3F2和L2、3F2和L3、3F2和L4、3F2和L5、3F2和L6、3F2和L7、3F2和L8、3F2和L9、3F2和L10、3F2
和L11、3F3和L1、3F3和L2、3F3和L3、3F3和L4、3F3和L5、3F3和L6、3F3和L7、3F3和L8、3F3和
L9、3F3和L10、3F3和L11、3F4和L1、3F4和L2、3F4和L3、3F4和L4、3F4和L5、3F4和L6、3F4和L7、
3F4和L8、3F4和L9、3F4和L10、3F4和L11、3F5和L1、3F5和L2、3F5和L3、3F5和L4、3F5和L5、3F5
和L6、3F5和L7、3F5和L8、3F5和L9、3F5和L10、3F5和L11、3F6和L1、3F6和L2、3F6和L3、3F6和
L4、3F6和L5、3F6和L6、3F6和L7、3F6和L8、3F6和L9、3F6和L10、3F6和L11、3F7和L1、3F7和L2、
3F7和L3、3F7和L4、3F7和L5、3F7和L6、3F7和L7、3F7和L8、3F7和L9、3F7和L10、3F7和L11、3F8
和L1、3F8和L2、3F8和L3、3F8和L4、3F8和L5、3F8和L6、3F8和L7、3F8和L8、3F8和L9、3F8和L10
或3F8和L11。
[0151] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0152] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0153] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0154] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0155] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0156] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0157] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0158] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0159] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0160] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0161] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L11环基序区的至少一个核酸序列。
[0162] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0163] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0164] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0165] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0166] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0167] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0168] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0169] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0170] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0171] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0172] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L11环基序区的至少一个核酸序列。
[0173] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0174] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0175] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0176] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0177] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0178] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0179] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0180] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0181] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0182] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0183] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L11环基序区的至少一个核酸序列。
[0184] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0185] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0186] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0187] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0188] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0189] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0190] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0191] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0192] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0193] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0194] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L11环基序区的至少一个核酸序列。
[0195] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0196] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0197] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0198] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0199] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0200] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0201] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0202] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0203] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0204] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0205] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L11环基序区的至少一个核酸序列。
[0206] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0207] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0208] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0209] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0210] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0211] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0212] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0213] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0214] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0215] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0216] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L11环基序区的至少一个核酸序列。
[0217] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0218] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0219] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0220] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0221] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0222] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0223] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0224] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0225] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0226] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0227] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L11环基序区的至少一个核酸序列。
[0228] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0229] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0230] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0231] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0232] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0233] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0234] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0235] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0236] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0237] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0238] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L11环基序区的至少一个核酸序列。
[0239] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列。
[0240] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列。
[0241] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列。
[0242] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列。
[0243] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列。
[0244] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L6环基序区的至少一个核酸序列。
[0245] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L7环基序区的至少一个核酸序列。
[0246] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L8环基序区的至少一个核酸序列。
[0247] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L9环基序区的至少一个核酸序列。
[0248] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L10环基序区的至少一个核酸序列。
[0249] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个L11环基序区的至少一个核酸序列。
[0250] 在一个实施方案中，如表1和表3所述，分子支架可以包含编码至少一个5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少3’侧翼区的至少一个核酸序列。作为一个非限制性实例，
分子支架可以包含5F1和3F1、5F1和3F2、5F1和3F3、5F1和3F4、5F1和3F5、5F1和3F6、5F1和
3F7、5F1和3F8、5F2和3F1、5F2和3F2、5F2和3F3、5F2和3F4、5F2和3F5、5F2和3F6、5F2和3F7、
5F2和3F8、5F3和3F1、5F3和3F2、5F3和3F3、5F3和3F4、5F3和3F5、5F3和3F6、5F3和3F7、5F3和
3F8、5F4和3F1、5F4和3F2、5F4和3F3、5F4和3F4、5F4和3F5、5F4和3F6、5F4和3F7、5F4和3F8、
5F5和3F1、5F5和3F2、5F5和3F3、5F5和3F4、5F5和3F5、5F5和3F6、5F5和3F7、5F5和3F8、5F6和
3F1、5F6和3F2、5F6和3F3、5F6和3F4、5F6和3F5、5F6和3F6、5F6和3F7、5F6和3F8、5F7和3F1、
5F7和3F2、5F7和3F3、5F7和3F4、5F7和3F5、5F7和3F6、5F7和3F7、5F7和3F8、5F8和3F1、5F8和
3F2、5F8和3F3、5F8和3F4、5F8和3F5、5F8和3F6、5F8和3F7、5F8和3F8、5F9和3F1、5F9和3F2、
5F9和3F3、5F9和3F4、5F9和3F5、5F9和3F6、5F9和3F7或5F9和3F8。
分子支架可以包含5F1和3F1、5F1和3F2、5F1和3F3、5F1和3F4、5F1和3F5、5F1和3F6、5F1和
3F7、5F1和3F8、5F2和3F1、5F2和3F2、5F2和3F3、5F2和3F4、5F2和3F5、5F2和3F6、5F2和3F7、
5F2和3F8、5F3和3F1、5F3和3F2、5F3和3F3、5F3和3F4、5F3和3F5、5F3和3F6、5F3和3F7、5F3和
3F8、5F4和3F1、5F4和3F2、5F4和3F3、5F4和3F4、5F4和3F5、5F4和3F6、5F4和3F7、5F4和3F8、
5F5和3F1、5F5和3F2、5F5和3F3、5F5和3F4、5F5和3F5、5F5和3F6、5F5和3F7、5F5和3F8、5F6和
3F1、5F6和3F2、5F6和3F3、5F6和3F4、5F6和3F5、5F6和3F6、5F6和3F7、5F6和3F8、5F7和3F1、
5F7和3F2、5F7和3F3、5F7和3F4、5F7和3F5、5F7和3F6、5F7和3F7、5F7和3F8、5F8和3F1、5F8和
3F2、5F8和3F3、5F8和3F4、5F8和3F5、5F8和3F6、5F8和3F7、5F8和3F8、5F9和3F1、5F9和3F2、
5F9和3F3、5F9和3F4、5F9和3F5、5F9和3F6、5F9和3F7或5F9和3F8。
[0251] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0252] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0253] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0254] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0255] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0256] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0257] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0258] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0259] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0260] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0261] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0262] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0263] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0264] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0265] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0266] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0267] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0268] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0269] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0270] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0271] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0272] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0273] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0274] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0275] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0276] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0277] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0278] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0279] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0280] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0281] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0282] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0283] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0284] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0285] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0286] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0287] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0288] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0289] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0290] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0291] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0292] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0293] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0294] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0295] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0296] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0297] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0298] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0299] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0300] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0301] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0302] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0303] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0304] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0305] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0306] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0307] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0308] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0309] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0310] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0311] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0312] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0313] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0314] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0315] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0316] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0317] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0318] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0319] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0320] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0321] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0322] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至少一个核酸序列。
[0323] 在一个实施方案中，分子支架可以包含至少一个5’侧翼区、至少一个环基序区和至少一个3’侧翼区。作为一个非限制性实例，分子支架可以包含5F1、L1和3F1；5F1、L1和
3F2；5F1、L1和3F3；5F1、L1和3F4；5F 1、L1和3F5；5F1、L1和3F6；5F1、L1和3F7；5F1、L1和3F8；
5F2、L1和3F1；5F2、L1和3F2；5F2、L1和3F3；5F2、L1和3F4；5F2、L1和3F5；5F2、L1和3F6；5F2、
L1和3F7；5F2、L1和3F8；5F3、L1和3F1；5F3、L1和3F2；5F3、L1和3F3；5F3、L1和3F4；5F3、L1和
3F5；5F3、L1和3F6；5F3、L1和3F7；5F3、L1和3F8；5F4、L1和3F1；5F4、L1和3F2；5F4、L1和3F3；
5F4、L1和3F4；5F4、L1和3F5；5F4、L1和3F6；5F4、L1和3F7；5F4、L1和3F8；5F5、L1和3F1；5F5、
L1和3F2；5F5、L1和3F3；5F5、L1和3F4；5F5、L1和3F5；5F5、L1和3F6；5F5、L1和3F7；5F5、L1和
3F8；5F6、L1和3F1；5F6、L1和3F2；5F6、L1和3F3；5F6、L1和3F4；5F6、L1和3F5；5F6、L1和3F6；
5F6、L1和3F7；5F6、L1和3F8；5F7、L1和3F1；5F7、L1和3F2；5F7、L1和3F3；5F7、L1和3F4；5F7、
L1和3F5；5F7、L1和3F6；5F7、L1和3F7；5F7、L1和3F8；5F8、L1和3F1；5F8、L1和3F2；5F8、L1和
3F3；5F8、L1和3F4；5F8、L1和3F5；5F8、L1和3F6；5F8、L1和3F7；5F8、L1和3F8；5F9、L1和3F1；
5F9、L1和3F2；5F9、L1和3F3；5F9、L1和3F4；5F9、L1和3F5；5F9、L1和3F6；5F9、L1和3F7；5F9、
L1和3F8；5F1、L2和3F1；5F1、L2和3F2；5F1、L2和3F3；5F1、L2和3F4；5F1、L2和3F5；5F1、L2和
3F6；5F1、L2和3F7；5F1、L2和3F8；5F2、L2和3F1；5F2、L2和3F2；5F2、L2和3F3；5F2、L2和3F4；
5F2、L2和3F5；5F2、L2和3F6；5F2、L2和3F7；5F2、L2和3F8；5F3、L2和3F1；5F3、L2和3F2；5F3、
L2和3F3；5F3、L2和3F4；5F3、L2和3F5；5F3、L2和3F6；5F3、L2和3F7；5F3、L2和3F8；5F4、L2和
3F1；5F4、L2和3F2；5F4、L2和3F3；5F4、L2和3F4；5F4、L2和3F5；5F4、L2和3F6；5F4、L2和3F7；
5F4、L2和3F8；5F5、L2和3F1；5F5、L2和3F2；5F5、L2和3F3；5F5、L2和3F4；5F5、L2和3F5；5F5、
L2和3F6；5F5、L2和3F7；5F5、L2和3F8；5F6、L2和3F1；5F6、L2和3F2；5F6、L2和3F3；5F6、L2和
3F4；5F6、L2和3F5；5F6、L2和3F6；5F6、L2和3F7；5F6、L2和3F8；5F7、L2和3F1；5F7、L2和3F2；
5F7、L2和3F3；5F7、L2和3F4；5F7、L2和3F5；5F7、L2和3F6；5F7、L2和3F7；5F7、L2和3F8；5F8、
L2和3F1；5F8、L2和3F2；5F8、L2和3F3；5F8、L2和3F4；5F8、L2和3F5；5F8、L2和3F6；5F8、L2和
3F7；5F8、L2和3F8；5F9、L2和3F1；5F9、L2和3F2；5F9、L2和3F3；5F9、L2和3F4；5F9、L2和3F5；
5F9、L2和3F6；5F9、L2和3F7；5F9、L2和3F8；5F1、L3和3F1；5F1、L3和3F2；5F1、L3和3F3；5F1、
L3和3F4；5F1、L3和3F5；5F1、L3和3F6；5F1、L3和3F7；5F1、L3和3F8；5F2、L3和3F1；5F2、L3和
3F2；5F2、L3和3F3；5F2、L3和3F4；5F2、L3和3F5；5F2、L3和3F6；5F2、L3和3F7；5F2、L3和3F8；
5F3、L3和3F1；5F3、L3和3F2；5F3、L3和3F3；5F3、L3和3F4；5F3、L3和3F5；5F3、L3和3F6；5F3、
L3和3F7；5F3、L3和3F8；5F4、L3和3F1；5F4、L3和3F2；5F4、L3和3F3；5F4、L3和3F4；5F4、L3和
3F5；5F4、L3和3F6；5F4、L3和3F7；5F4、L3和3F8；5F5、L3和3F1；5F5、L3和3F2；5F5、L3和3F3；
5F5、L3和3F4；5F5、L3和3F5；5F5、L3和3F6；5F5、L3和3F7；5F5、L3和3F8；5F6、L3和3F1；5F6、
L3和3F2；5F6、L3和3F3；5F6、L3和3F4；5F6、L3和3F5；5F6、L3和3F6；5F6、L3和3F7；5F6、L3和
3F8；5F7、L3和3F1；5F7、L3和3F2；5F7、L3和3F3；5F7、L3和3F4；5F7、L3和3F5；5F7、L3和3F6；
5F7、L3和3F7；5F7、L3和3F8；5F8、L3和3F1；5F8、L3和3F2；5F8、L3和3F3；5F8、L3和3F4；5F8、
L3和3F5；5F8、L3和3F6；5F8、L3和3F7；5F8、L3和3F8；5F9、L3和3F1；5F9、L3和3F2；5F9、L3和
3F3；5F9、L3和3F4；5F9、L3和3F5；5F9、L3和3F6；5F9、L3和3F7；5F9、L3和3F8；5F1、L4和3F1；
5F1、L4和3F2；5F1、L4和3F3；5F1、L4和3F4；5F1、L4和3F5；5F1、L4和3F6；5F1、L4和3F7；5F1、
L4和3F8；5F2、L4和3F1；5F2、L4和3F2；5F2、L4和3F3；5F2、L4和3F4；5F2、L4和3F5；5F2、L4和
3F6；5F2、L4和3F7；5F2、L4和3F8；5F3、L4和3F1；5F3、L4和3F2；5F3、L4和3F3；5F3、L4和3F4；
5F3、L4和3F5；5F3、L4和3F6；5F3、L4和3F7；5F3、L4和3F8；5F4、L4和3F1；5F4、L4和3F2；5F4、
L4和3F3；5F4、L4和3F4；5F4、L4和3F5；5F4、L4和3F6；5F4、L4和3F7；5F4、L4和3F8；5F5、L4和
3F1；5F5、L4和3F2；5F5、L4和3F3；5F5、L4和3F4；5F5、L4和3F5；5F5、L4和3F6；5F5、L4和3F7；
5F5、L4和3F8；5F6、L4和3F1；5F6、L4和3F2；5F6、L4和3F3；5F6、L4和3F4；5F6、L4和3F5；5F6、
L4和3F6；5F6、L4和3F7；5F6、L4和3F8；5F7、L4和3F1；5F7、L4和3F2；5F7、L4和3F3；5F7、L4和
3F4；5F7、L4和3F5；5F7、L4和3F6；5F7、L4和3F7；5F7、L4和3F8；5F8、L4和3F1；5F8、L4和3F2；
5F8、L4和3F3；5F8、L4和3F4；5F8、L4和3F5；5F8、L4和3F6；5F8、L4和3F7；5F8、L4和3F8；5F9、
L4和3F1；5F9、L4和3F2；5F9、L4和3F3；5F9、L4和3F4；5F9、L4和3F5；5F9、L4和3F6；5F9、L4和
3F7；5F9、L4和3F8；5F1、L5和3F1；5F1、L5和3F2；5F1、L5和3F3；5F1、L5和3F4；5F1、L5和3F5；
5F1、L5和3F6；5F1、L5和3F7；5F1、L5和3F8；5F2、L5和3F1；5F2、L5和3F2；5F2、L5和3F3；5F2、
L5和3F4；5F2、L5和3F5；5F2、L5和3F6；5F2、L5和3F7；5F2、L5和3F8；5F3、L5和3F1；5F3、L5和
3F2；5F3、L5和3F3；5F3、L5和3F4；5F3、L5和3F5；5F3、L5和3F6；5F3、L5和3F7；5F3、L5和3F8；
5F4、L5和3F1；5F4、L5和3F2；5F4、L5和3F3；5F4、L5和3F4；5F4、L5和3F5；5F4、L5和3F6；5F4、
L5和3F7；5F4、L5和3F8；5F5、L5和3F1；5F5、L5和3F2；5F5、L5和3F3；5F5、L5和3F4；5F5、L5和
3F5；5F5、L5和3F6；5F5、L5和3F7；5F5、L5和3F8；5F6、L5和3F1；5F6、L5和3F2；5F6、L5和3F3；
5F6、L5和3F4；5F6、L5和3F5；5F6、L5和3F6；5F6、L5和3F7；5F6、L5和3F8；5F7、L5和3F1；5F7、
L5和3F2；5F7、L5和3F3；5F7、L5和3F4；5F7、L5和3F5；5F7、L5和3F6；5F7、L5和3F7；5F7、L5和
3F8；5F8、L5和3F1；5F8、L5和3F2；5F8、L5和3F3；5F8、L5和3F4；5F8、L5和3F5；5F8、L5和3F6；
5F8、L5和3F7；5F8、L5和3F8；5F9、L5和3F1；5F9、L5和3F2；5F9、L5和3F3；5F9、L5和3F4；5F9、
L5和3F5；5F9、L5和3F6；5F9、L5和3F7；或5F9、L5和3F8。
3F2；5F1、L1和3F3；5F1、L1和3F4；5F 1、L1和3F5；5F1、L1和3F6；5F1、L1和3F7；5F1、L1和3F8；
5F2、L1和3F1；5F2、L1和3F2；5F2、L1和3F3；5F2、L1和3F4；5F2、L1和3F5；5F2、L1和3F6；5F2、
L1和3F7；5F2、L1和3F8；5F3、L1和3F1；5F3、L1和3F2；5F3、L1和3F3；5F3、L1和3F4；5F3、L1和
3F5；5F3、L1和3F6；5F3、L1和3F7；5F3、L1和3F8；5F4、L1和3F1；5F4、L1和3F2；5F4、L1和3F3；
5F4、L1和3F4；5F4、L1和3F5；5F4、L1和3F6；5F4、L1和3F7；5F4、L1和3F8；5F5、L1和3F1；5F5、
L1和3F2；5F5、L1和3F3；5F5、L1和3F4；5F5、L1和3F5；5F5、L1和3F6；5F5、L1和3F7；5F5、L1和
3F8；5F6、L1和3F1；5F6、L1和3F2；5F6、L1和3F3；5F6、L1和3F4；5F6、L1和3F5；5F6、L1和3F6；
5F6、L1和3F7；5F6、L1和3F8；5F7、L1和3F1；5F7、L1和3F2；5F7、L1和3F3；5F7、L1和3F4；5F7、
L1和3F5；5F7、L1和3F6；5F7、L1和3F7；5F7、L1和3F8；5F8、L1和3F1；5F8、L1和3F2；5F8、L1和
3F3；5F8、L1和3F4；5F8、L1和3F5；5F8、L1和3F6；5F8、L1和3F7；5F8、L1和3F8；5F9、L1和3F1；
5F9、L1和3F2；5F9、L1和3F3；5F9、L1和3F4；5F9、L1和3F5；5F9、L1和3F6；5F9、L1和3F7；5F9、
L1和3F8；5F1、L2和3F1；5F1、L2和3F2；5F1、L2和3F3；5F1、L2和3F4；5F1、L2和3F5；5F1、L2和
3F6；5F1、L2和3F7；5F1、L2和3F8；5F2、L2和3F1；5F2、L2和3F2；5F2、L2和3F3；5F2、L2和3F4；
5F2、L2和3F5；5F2、L2和3F6；5F2、L2和3F7；5F2、L2和3F8；5F3、L2和3F1；5F3、L2和3F2；5F3、
L2和3F3；5F3、L2和3F4；5F3、L2和3F5；5F3、L2和3F6；5F3、L2和3F7；5F3、L2和3F8；5F4、L2和
3F1；5F4、L2和3F2；5F4、L2和3F3；5F4、L2和3F4；5F4、L2和3F5；5F4、L2和3F6；5F4、L2和3F7；
5F4、L2和3F8；5F5、L2和3F1；5F5、L2和3F2；5F5、L2和3F3；5F5、L2和3F4；5F5、L2和3F5；5F5、
L2和3F6；5F5、L2和3F7；5F5、L2和3F8；5F6、L2和3F1；5F6、L2和3F2；5F6、L2和3F3；5F6、L2和
3F4；5F6、L2和3F5；5F6、L2和3F6；5F6、L2和3F7；5F6、L2和3F8；5F7、L2和3F1；5F7、L2和3F2；
5F7、L2和3F3；5F7、L2和3F4；5F7、L2和3F5；5F7、L2和3F6；5F7、L2和3F7；5F7、L2和3F8；5F8、
L2和3F1；5F8、L2和3F2；5F8、L2和3F3；5F8、L2和3F4；5F8、L2和3F5；5F8、L2和3F6；5F8、L2和
3F7；5F8、L2和3F8；5F9、L2和3F1；5F9、L2和3F2；5F9、L2和3F3；5F9、L2和3F4；5F9、L2和3F5；
5F9、L2和3F6；5F9、L2和3F7；5F9、L2和3F8；5F1、L3和3F1；5F1、L3和3F2；5F1、L3和3F3；5F1、
L3和3F4；5F1、L3和3F5；5F1、L3和3F6；5F1、L3和3F7；5F1、L3和3F8；5F2、L3和3F1；5F2、L3和
3F2；5F2、L3和3F3；5F2、L3和3F4；5F2、L3和3F5；5F2、L3和3F6；5F2、L3和3F7；5F2、L3和3F8；
5F3、L3和3F1；5F3、L3和3F2；5F3、L3和3F3；5F3、L3和3F4；5F3、L3和3F5；5F3、L3和3F6；5F3、
L3和3F7；5F3、L3和3F8；5F4、L3和3F1；5F4、L3和3F2；5F4、L3和3F3；5F4、L3和3F4；5F4、L3和
3F5；5F4、L3和3F6；5F4、L3和3F7；5F4、L3和3F8；5F5、L3和3F1；5F5、L3和3F2；5F5、L3和3F3；
5F5、L3和3F4；5F5、L3和3F5；5F5、L3和3F6；5F5、L3和3F7；5F5、L3和3F8；5F6、L3和3F1；5F6、
L3和3F2；5F6、L3和3F3；5F6、L3和3F4；5F6、L3和3F5；5F6、L3和3F6；5F6、L3和3F7；5F6、L3和
3F8；5F7、L3和3F1；5F7、L3和3F2；5F7、L3和3F3；5F7、L3和3F4；5F7、L3和3F5；5F7、L3和3F6；
5F7、L3和3F7；5F7、L3和3F8；5F8、L3和3F1；5F8、L3和3F2；5F8、L3和3F3；5F8、L3和3F4；5F8、
L3和3F5；5F8、L3和3F6；5F8、L3和3F7；5F8、L3和3F8；5F9、L3和3F1；5F9、L3和3F2；5F9、L3和
3F3；5F9、L3和3F4；5F9、L3和3F5；5F9、L3和3F6；5F9、L3和3F7；5F9、L3和3F8；5F1、L4和3F1；
5F1、L4和3F2；5F1、L4和3F3；5F1、L4和3F4；5F1、L4和3F5；5F1、L4和3F6；5F1、L4和3F7；5F1、
L4和3F8；5F2、L4和3F1；5F2、L4和3F2；5F2、L4和3F3；5F2、L4和3F4；5F2、L4和3F5；5F2、L4和
3F6；5F2、L4和3F7；5F2、L4和3F8；5F3、L4和3F1；5F3、L4和3F2；5F3、L4和3F3；5F3、L4和3F4；
5F3、L4和3F5；5F3、L4和3F6；5F3、L4和3F7；5F3、L4和3F8；5F4、L4和3F1；5F4、L4和3F2；5F4、
L4和3F3；5F4、L4和3F4；5F4、L4和3F5；5F4、L4和3F6；5F4、L4和3F7；5F4、L4和3F8；5F5、L4和
3F1；5F5、L4和3F2；5F5、L4和3F3；5F5、L4和3F4；5F5、L4和3F5；5F5、L4和3F6；5F5、L4和3F7；
5F5、L4和3F8；5F6、L4和3F1；5F6、L4和3F2；5F6、L4和3F3；5F6、L4和3F4；5F6、L4和3F5；5F6、
L4和3F6；5F6、L4和3F7；5F6、L4和3F8；5F7、L4和3F1；5F7、L4和3F2；5F7、L4和3F3；5F7、L4和
3F4；5F7、L4和3F5；5F7、L4和3F6；5F7、L4和3F7；5F7、L4和3F8；5F8、L4和3F1；5F8、L4和3F2；
5F8、L4和3F3；5F8、L4和3F4；5F8、L4和3F5；5F8、L4和3F6；5F8、L4和3F7；5F8、L4和3F8；5F9、
L4和3F1；5F9、L4和3F2；5F9、L4和3F3；5F9、L4和3F4；5F9、L4和3F5；5F9、L4和3F6；5F9、L4和
3F7；5F9、L4和3F8；5F1、L5和3F1；5F1、L5和3F2；5F1、L5和3F3；5F1、L5和3F4；5F1、L5和3F5；
5F1、L5和3F6；5F1、L5和3F7；5F1、L5和3F8；5F2、L5和3F1；5F2、L5和3F2；5F2、L5和3F3；5F2、
L5和3F4；5F2、L5和3F5；5F2、L5和3F6；5F2、L5和3F7；5F2、L5和3F8；5F3、L5和3F1；5F3、L5和
3F2；5F3、L5和3F3；5F3、L5和3F4；5F3、L5和3F5；5F3、L5和3F6；5F3、L5和3F7；5F3、L5和3F8；
5F4、L5和3F1；5F4、L5和3F2；5F4、L5和3F3；5F4、L5和3F4；5F4、L5和3F5；5F4、L5和3F6；5F4、
L5和3F7；5F4、L5和3F8；5F5、L5和3F1；5F5、L5和3F2；5F5、L5和3F3；5F5、L5和3F4；5F5、L5和
3F5；5F5、L5和3F6；5F5、L5和3F7；5F5、L5和3F8；5F6、L5和3F1；5F6、L5和3F2；5F6、L5和3F3；
5F6、L5和3F4；5F6、L5和3F5；5F6、L5和3F6；5F6、L5和3F7；5F6、L5和3F8；5F7、L5和3F1；5F7、
L5和3F2；5F7、L5和3F3；5F7、L5和3F4；5F7、L5和3F5；5F7、L5和3F6；5F7、L5和3F7；5F7、L5和
3F8；5F8、L5和3F1；5F8、L5和3F2；5F8、L5和3F3；5F8、L5和3F4；5F8、L5和3F5；5F8、L5和3F6；
5F8、L5和3F7；5F8、L5和3F8；5F9、L5和3F1；5F9、L5和3F2；5F9、L5和3F3；5F9、L5和3F4；5F9、
L5和3F5；5F9、L5和3F6；5F9、L5和3F7；或5F9、L5和3F8。
[0324] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0325] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0326] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0327] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0328] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0329] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0330] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0331] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0332] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0333] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0334] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0335] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0336] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0337] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0338] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0339] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0340] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0341] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0342] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0343] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0344] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0345] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0346] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0347] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0348] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0349] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0350] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0351] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0352] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0353] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0354] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0355] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0356] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0357] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0358] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0359] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0360] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0361] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0362] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0363] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0364] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0365] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0366] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个环基序区的至少一个L1核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0367] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0368] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0369] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0370] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0371] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0372] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0373] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0374] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0375] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0376] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0377] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0378] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0379] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0380] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0381] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0382] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0383] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0384] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0385] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0386] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0387] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0388] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0389] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0390] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0391] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0392] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0393] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0394] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0395] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L1环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0396] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0397] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0398] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0399] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0400] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0401] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0402] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0403] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0404] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0405] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0406] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0407] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0408] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0409] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0410] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0411] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0412] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0413] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0414] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0415] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0416] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0417] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0418] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0419] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0420] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0421] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0422] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0423] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0424] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0425] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0426] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0427] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0428] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0429] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0430] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0431] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0432] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0433] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0434] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0435] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0436] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0437] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0438] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0439] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0440] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0441] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0442] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0443] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0444] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0445] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0446] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0447] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0448] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0449] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0450] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0451] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0452] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0453] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0454] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0455] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0456] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0457] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0458] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0459] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0460] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0461] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0462] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0463] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0464] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0465] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0466] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0467] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L2环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0468] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0469] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0470] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0471] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0472] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0473] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0474] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0475] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0476] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0477] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0478] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0479] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0480] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0481] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0482] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0483] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0484] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0485] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0486] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0487] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0488] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0489] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0490] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0491] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0492] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0493] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0494] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0495] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0496] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0497] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0498] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0499] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0500] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0501] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0502] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0503] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0504] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0505] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0506] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0507] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0508] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0509] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0510] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0511] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0512] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0513] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0514] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0515] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0516] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0517] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0518] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0519] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0520] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0521] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0522] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0523] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0524] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0525] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0526] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0527] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0528] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0529] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0530] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0531] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0532] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0533] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0534] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0535] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0536] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0537] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0538] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0539] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L3环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0540] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0541] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0542] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0543] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0544] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0545] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0546] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0547] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0548] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0549] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0550] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0551] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0552] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0553] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0554] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0555] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0556] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0557] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0558] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0559] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0560] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0561] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0562] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0563] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0564] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0565] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0566] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0567] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0568] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0569] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0570] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0571] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0572] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0573] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0574] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0575] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0576] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0577] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0578] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0579] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0580] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0581] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0582] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0583] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0584] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0585] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0586] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0587] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0588] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0589] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0590] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0591] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0592] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0593] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0594] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0595] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0596] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0597] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0598] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0599] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0600] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0601] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0602] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0603] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0604] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0605] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0606] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0607] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0608] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0609] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0610] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0611] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L4环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0612] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0613] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0614] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0615] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0616] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0617] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0618] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0619] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F1 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0620] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0621] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0622] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0623] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0624] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0625] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0626] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0627] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F2 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0628] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0629] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0630] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0631] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0632] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0633] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0634] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0635] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F3 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0636] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0637] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0638] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0639] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0640] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0641] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0642] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0643] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F4 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0644] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0645] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0646] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0647] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0648] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0649] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0650] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0651] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F5 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0652] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0653] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0654] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0655] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0656] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0657] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0658] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0659] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F6 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0660] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0661] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0662] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0663] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0664] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0665] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0666] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0667] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F7 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0668] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0669] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0670] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0671] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0672] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0673] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0674] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0675] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F8 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0676] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F1 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0677] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F2 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0678] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F3 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0679] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F4 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0680] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F5 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0681] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F6 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0682] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F7 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0683] 在一个实施方案中，分子支架可以包含编码至少一个5F9 5’侧翼区的至少一个核酸序列、编码至少一个L5环基序区的至少一个核酸序列和编码至少一个3F8 3’侧翼区的至
少一个核酸序列。
少一个核酸序列。
[0684] 在一个实施方案中，分子支架可以包含本领域已知的一个或多个接头。接头可以将各区域分开或者将一个分子支架与另一个分开。作为一个非限制性实例，分子支架可以
是多顺反子的。
是多顺反子的。
[0685] 在一个实施方案中，使用以下性质中的至少一种设计调节性多核苷酸：环变体、种子错配/凸起/摆动变体、茎错配、环变体和附属茎(vassal stem)错配变体、种子错配和基
部茎错配变体、茎错配和基部茎错配变体、种子摆动和基部茎摆动变体或茎序列变体。
部茎错配变体、茎错配和基部茎错配变体、种子摆动和基部茎摆动变体或茎序列变体。
[0686] 在一个实施方案中，分子支架可以位于表达载体的两个ITR之间。作为一个非限制性实例，分子支架可以在如图2所示的六个不同位置中的至少一处插入到表达载体中。在图
2中，“ITR”是反向末端重复，“I”代表内含子，“P”是polyA，并且“MP”是调节性多核苷酸。
2中，“ITR”是反向末端重复，“I”代表内含子，“P”是polyA，并且“MP”是调节性多核苷酸。
[0687] 在一个实施方案中，分子支架可以位于启动子的下游，所述启动子例如但不限CMV、U6、H1、CBA或具有SV40或人β珠蛋白内含子的CBA启动子。此外，分子支架也可以位于多
腺苷酸化序列的上游。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷
酸化序列上游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、
25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于启
动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、
5-25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷
酸内。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的
前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷酸
内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的
前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-
20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％。
腺苷酸化序列的上游。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷
酸化序列上游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、
25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于启
动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、
5-25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷
酸内。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的
前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷酸
内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的
前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-
20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％。
[0688] 在一个实施方案中，分子支架可以位于多腺苷酸化序列的上游。此外，分子支架可以位于启动子的下游，所述启动子例如但不限于CMV、U6、H1、CBA或具有SV40或人β珠蛋白内
含子的CBA启动子。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸
化序列上游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、
25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于启
动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、
5-25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷
酸内。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的
前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷酸
内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的
前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-
20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
含子的CBA启动子。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸
化序列上游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、
25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于启
动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、
5-25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷
酸内。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的
前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷酸
内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的
前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-
20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
[0689] 在一个实施方案中，分子支架可以位于scAAV中。
[0690] 在一个实施方案中，分子支架可以位于ssAAV中。
[0691] 在一个实施方案中，分子支架可以位于flip ITR的5’端附近。在另一个实施方案中，分子支架可以位于flip ITR的3’端附近。在又一个实施方案中，分子支架可以位于flop
ITR的5’端附近。在又一个实施方案中，分子支架可以位于flop ITR的3’端附近。在一个实
施方案中，分子支架可以位于flip ITR的5’端和flop ITR的3’端之间。在一个实施方案中，
分子支架可以位于flip ITR的3’端和flip ITR的5’端之间(例如，flip ITR的5’端和flop
ITR的3’端或flop ITR的3’端和flip ITR的5’端之间的半路上)。作为一个非限制性实例，
分子支架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上
游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、
28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于ITR(例如，
Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-
25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸
内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端
上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-15、10-20、10-
25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个内。作为一个非限制性实例，分子支
架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、
7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷酸内。作为另一个非限制性实例，分
子支架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的前1-5％、1-10％、1-15％、
1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-
25％或20-25％的位置。
ITR的5’端附近。在又一个实施方案中，分子支架可以位于flop ITR的3’端附近。在一个实
施方案中，分子支架可以位于flip ITR的5’端和flop ITR的3’端之间。在一个实施方案中，
分子支架可以位于flip ITR的3’端和flip ITR的5’端之间(例如，flip ITR的5’端和flop
ITR的3’端或flop ITR的3’端和flip ITR的5’端之间的半路上)。作为一个非限制性实例，
分子支架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为一个非限制性实例，分子支架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上
游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、
28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于ITR(例如，
Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-
25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸
内。作为另一个非限制性实例，分子支架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端
上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、10-15、10-20、10-
25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个内。作为一个非限制性实例，分子支
架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、
7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％的核苷酸内。作为另一个非限制性实例，分
子支架可以位于ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的前1-5％、1-10％、1-15％、
1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-
25％或20-25％的位置。
[0692] 载体
[0693] 在一些实施方案中，本文所述的siRNA分子可以由载体如质粒或病毒载体编码。在一个实施方案中，siRNA分子由病毒载体编码。病毒载体可以是但不限于疱疹病毒(HSV)载
体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、慢病毒载体等。在一些具体实施方案
中，病毒载体是AAV载体。
体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、慢病毒载体等。在一些具体实施方案
中，病毒载体是AAV载体。
[0694] 逆转录病毒载体
[0695] 在一些实施方案中，靶向SOD1或HTT的siRNA双链体可以由逆转录病毒载体编码(参见，例如，美国专利号5,399,346；5,124,263；4,650,764和4,980,289；其每一篇的内容
通过引用的方式以其整体并入本文)。
通过引用的方式以其整体并入本文)。
[0696] 腺病毒载体
[0697] 腺病毒是真核生物DNA病毒，其可被修饰以在体内有效地将核酸递送至多种细胞类型，并且已广泛用于基因治疗方案，包括用于将基因靶向至神经细胞。已经描述了用于核
酸治疗的各种复制缺陷型腺病毒和最小腺病毒载体(参见，例如，PCT专利公开号
WO199426914、WO 199502697、WO199428152、WO199412649、WO199502697和WO199622378；其
每一篇的内容通过引用的方式以其整体并入本文)。这样的腺病毒载体也可以用于将本发
明的siRNA分子递送至细胞。
酸治疗的各种复制缺陷型腺病毒和最小腺病毒载体(参见，例如，PCT专利公开号
WO199426914、WO 199502697、WO199428152、WO199412649、WO199502697和WO199622378；其
每一篇的内容通过引用的方式以其整体并入本文)。这样的腺病毒载体也可以用于将本发
明的siRNA分子递送至细胞。
[0698] 腺相关病毒(AAV)载体
[0699] 腺相关病毒(AAV)是一种依赖性细小病毒(与其他细小病毒一样)，它是一种单链无包膜DNA病毒，其基因组长度为约5000个核苷酸，并且其含有两个开放阅读框，编码负责
复制的蛋白质(Rep)和衣壳的结构蛋白(Cap)。开放阅读框的两侧是两个反向末端重复
(ITR)序列，其作为病毒基因组的复制起点。此外，AAV基因组含有包装序列，允许将病毒基
因组包装到AAV衣壳中。AAV载体需要辅助者(co-helper)(例如腺病毒)在感染细胞中进行
生产性感染。在没有这种辅助功能的情况下，AAV病毒颗粒基本上进入宿主细胞但不整合到
细胞的基因组中。
复制的蛋白质(Rep)和衣壳的结构蛋白(Cap)。开放阅读框的两侧是两个反向末端重复
(ITR)序列，其作为病毒基因组的复制起点。此外，AAV基因组含有包装序列，允许将病毒基
因组包装到AAV衣壳中。AAV载体需要辅助者(co-helper)(例如腺病毒)在感染细胞中进行
生产性感染。在没有这种辅助功能的情况下，AAV病毒颗粒基本上进入宿主细胞但不整合到
细胞的基因组中。
[0700] 由于几种独特的特征，已经研究了AAV载体的siRNA递送。特征的非限制性实例包括(i)感染分裂和不分裂两种细胞的能力；(ii)感染性的广泛宿主范围，包括人类细胞；
(iii)野生型AAV尚未与任何疾病相关，并且未显示在感染细胞中复制；(iv)缺乏针对该载
体的细胞介导的免疫应答和(v)宿主染色体中的非整合性质，从而降低了长期遗传改变的
可能性。而且，AAV载体感染对改变细胞基因表达的模式具有极小的影响(Stilwell和
Samulski et al.，Biotechniques，2003，34，148)。
(iii)野生型AAV尚未与任何疾病相关，并且未显示在感染细胞中复制；(iv)缺乏针对该载
体的细胞介导的免疫应答和(v)宿主染色体中的非整合性质，从而降低了长期遗传改变的
可能性。而且，AAV载体感染对改变细胞基因表达的模式具有极小的影响(Stilwell和
Samulski et al.，Biotechniques，2003，34，148)。
[0701] 通常，用于siRNA递送的AAV载体可以是重组病毒载体，其为复制缺陷型的，因为它们缺少编码病毒基因组内的功能性Rep和Cap蛋白的序列。在一些情况下，缺陷型AAV载体可
能缺乏大多数或全部的编码序列，并且基本上仅含有一个或两个AAV ITR序列和包装序列。
能缺乏大多数或全部的编码序列，并且基本上仅含有一个或两个AAV ITR序列和包装序列。
[0702] 在一个实施方案中，可以将包含编码本发明siRNA分子的核酸序列的AAV载体引入到哺乳动物细胞中。
[0704] 在一些实施方案中，包含编码本发明siRNA分子的核酸序列的AAV载体可以是人血清型AAV载体。这种人AAV载体可以来源于任何已知的血清型，例如来源于血清型AAV1-
AAV11中的任何一种。作为一个非限制性实例，AAV载体可以是在AAV1源性衣壳中包含AAV1
源性基因组的载体；在AAV2源性衣壳中包含AAV2源性基因组的载体；在AAV4源性衣壳中包
含AAV4源性基因组的载体；在AAV6源性衣壳中包含AAV6源性基因组的载体；或在AAV9源性
衣壳中包含AAV9源性基因组的载体。
AAV11中的任何一种。作为一个非限制性实例，AAV载体可以是在AAV1源性衣壳中包含AAV1
源性基因组的载体；在AAV2源性衣壳中包含AAV2源性基因组的载体；在AAV4源性衣壳中包
含AAV4源性基因组的载体；在AAV6源性衣壳中包含AAV6源性基因组的载体；或在AAV9源性
衣壳中包含AAV9源性基因组的载体。
[0705] 在其他实施方案中，包含用于编码本发明siRNA分子的核酸序列的AAV载体可以是假型杂交或嵌合AAV载体，其含有源自至少两种不同AAV血清型的序列和/或组分。假型AAV
载体可以是包含来源于一种AAV血清型的AAV基因组和至少部分来源于不同的AAV血清型的
衣壳蛋白的载体。作为非限制性实例，这种假型AAV载体可以是在AAV1源性衣壳中包含AAV2
源性基因组的载体；或在AAV6源性衣壳中包含AAV2源性基因组的载体；或在AAV4源性衣壳
中包含AAV2源性基因组的载体；或在AAV9源性衣壳中包含AAV2源性基因组的载体。以类似
的方式，本发明预期涵盖任何杂合或嵌合AAV载体。
载体可以是包含来源于一种AAV血清型的AAV基因组和至少部分来源于不同的AAV血清型的
衣壳蛋白的载体。作为非限制性实例，这种假型AAV载体可以是在AAV1源性衣壳中包含AAV2
源性基因组的载体；或在AAV6源性衣壳中包含AAV2源性基因组的载体；或在AAV4源性衣壳
中包含AAV2源性基因组的载体；或在AAV9源性衣壳中包含AAV2源性基因组的载体。以类似
的方式，本发明预期涵盖任何杂合或嵌合AAV载体。
[0706] 在其他实施方案中，包含编码本发明siRNA分子的核酸序列的AAV载体可以用于将siRNA分子递送至中枢神经系统(例如，美国专利号6,180,613；其内容通过引用的方式以其
整体并入本文)。
整体并入本文)。
[0707] 在一些方面，包含编码本发明的siRNA分子的核酸序列的AAV载体可以进一步包含修饰的衣壳，包括来自非病毒来源的肽。在其他方面，AAV载体可以含有CNS特异性嵌合衣
壳，以促进将编码的siRNA双链体递送至脑和脊髓。例如，可以构建来自表现出CNS向性的
AAV变体的cap核苷酸序列的比对以鉴定可变区(VR)序列和结构。
壳，以促进将编码的siRNA双链体递送至脑和脊髓。例如，可以构建来自表现出CNS向性的
AAV变体的cap核苷酸序列的比对以鉴定可变区(VR)序列和结构。
[0708] 在一个实施方案中，包含编码本发明siRNA分子的核酸序列的AAV载体可以编码作为多顺反子分子的siRNA分子。siRNA分子可以另外地在siRNA分子的区域之间包含一个或
多个接头。
多个接头。
[0709] 自身互补型和单链载体
[0710] 在一个实施方案中，本发明中使用的AAV载体是单链载体(ssAAV)。
[0712] 在一个实施方案中，本发明中使用的AAV载体是scAAV。
[0713] 本领域公开了用于产生和/或修饰AAV载体的方法，如假型AAV载体(国际专利公开号WO200028004；WO200123001；WO2004112727；WO 2005005610和WO 2005072364，其每一篇
的内容均通过引用的方式以其整体并入本文)。
的内容均通过引用的方式以其整体并入本文)。
[0714] AAV血清型
[0715] 本发明的AAV颗粒可以包含或来源于任何天然或重组AAV血清型。根据本发明，AAV颗粒可以利用或基于选自以下任何一种的血清型：AAV1、AAV2、AAV2G9、AAV3、AAV3a、AAV3b、
AAV3-3、AAV4、AAV4-4、AAV5、AAV6、AAV6.1、AAV6.2、AAV6.1.2、AAV7、AAV7.2、AAV8、AAV9、
AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84、
AAV9.9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV16.3、AAV24.1、AAV27.3、AAV42.12、AAV42-1b、AAV42-2、
AAV42-3a、AAV42-3b、AAV42-4、AAV42-5a、AAV42-5b、AAV42-6b、AAV42-8、AAV42-10、AAV42-
11、AAV42-12、AAV42-13、AAV42-15、AAV42-aa、AAV43-1、AAV43-12、AAV43-20、AAV43-21、
AAV43-23、AAV43-25、AAV43-5、AAV44.1、AAV44.2、AAV44.5、AAV223.1、AAV223.2、AAV223.4、
AAV223.5、AAV223.6、AAV223.7、AAV1-7/rh.48、AAV1-8/rh.49、AAV2-15/rh.62、AAV2-3/
rh.61、AAV2-4/rh.50、AAV2-5/rh.51、AAV3.1/hu.6、AAV3.1/hu.9、AAV3-9/rh.52、AAV3-11/
rh.53、AAV4-8/r11.64、AAV4-9/rh.54、AAV4-19/rh.55、AAV5-3/rh.57、AAV5-22/rh.58、
AAV7.3/hu.7、AAV16.8/hu.10、AAV16.12/hu.11、AAV29.3/bb.1、AAV29.5/bb.2、AAV106.1/
hu.37、AAV114.3/hu.40、AAV127.2/hu.41、AAV127.5/hu.42、AAV128.3/hu.44、AAV130.4/
hu.48、AAV145.1/hu.53、AAV145.5/hu.54、AAV145.6/hu.55、AAV161.10/hu.60、AAV161.6/
hu.61、AAV33.12/hu.17、AAV33.4/hu.15、AAV33.8/hu.16、AAV52/hu.19、AAV52.1/hu.20、
AAV58.2/hu.25、AAVA3.3、AAVA3.4、AAVA3.5、AAVA3.7、AAVC1、AAVC2、AAVC5、AAV-DJ、AAV-
DJ8、AAVF3、AAVF5、AAVH2、AAVrh.72、AAVhu.8、AAVrh.68、AAVrh.70、AAVpi.1、AAVpi.3、
AAVpi.2、AAVrh.60、AAVrh.44、AAVrh.65、AAVrh.55、AAVrh.47、AAVrh.69、AAVrh.45、
AAVrh.59、AAVhu.12、AAVH6、AAVLK03、AAVH-1/hu.1、AAVH-5/hu.3、AAVLG-10/rh.40、AAVLG-
4/rh.38、AAVLG-9/hu.39、AAVN721-8/rh.43、AAVCh.5、AAVCh.5R1、AAVcy.2、AAVcy.3、
AAVcy.4、AAVcy.5、AAVCy.5R1、AAVCy.5R2、AAVCy.5R3、AAVCy.5R4、AAVcy.6、AAVhu.1、
AAVhu.2、AAVhu.3、AAVhu.4、AAVhu.5、AAVhu.6、AAVhu.7、AAVhu.9、AAVhu.10、AAVhu.11、
AAVhu.13、AAVhu.15、AAVhu.16、AAVhu.17、AAVhu.18、AAVhu.20、AAVhu.21、AAVhu.22、
AAVhu.23.2、AAVhu.24、AAVhu.25、AAVhu.27、AAVhu.28、AAVhu.29、AAVhu.29R、AAVhu.31、
AAVhu.32、AAVhu.34、AAVhu.35、AAVhu.37、AAVhu.39、AAVhu.40、AAVhu.41、AAVhu.42、
AAVhu.43、AAVhu.44、AAVhu.44R1、AAVhu.44R2、AAVhu.44R3、AAVhu.45、AAVhu.46、
AAVhu.47、AAVhu.48、AAVhu.48R1、AAVhu.48R2、AAVhu.48R3、AAVhu.49、AAVhu.51、
AAVhu.52、AAVhu.54、AAVhu.55、AAVhu.56、AAVhu.57、AAVhu.58、AAVhu.60、AAVhu.61、
AAVhu.63、AAVhu.64、AAVhu.66、AAVhu.67、AAVhu.14/9、AAVhu.t 19、AAVrh.2、AAVrh.2R、
AAVrh.8、AAVrh.8R、AAVrh.10、AAVrh.12、AAVrh.13、AAVrh.13R、AAVrh.14、AAVrh.17、
AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.20、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、
AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh.37R2、
AAVrh.38、AAVrh.39、AAVrh.40、AAVrh.46、AAVrh.48、AAVrh.48.1、AAVrh.48.1.2、
AAVrh.48.2、AAVrh.49、AAVrh.51、AAVrh.52、AAVrh.53、AAVrh.54、AAVrh.56、AAVrh.57、
AAVrh.58、AAVrh.61、AAVrh.64、AAVrh.64R1、AAVrh.64R2、AAVrh.67、AAVrh.73、AAVrh.74、
AAVrh8R、AAVrh8R A586R突变体、AAVrh8R R533A突变体、AAAV、BAAV、山羊AAV、牛AAV、
AAVhE1.1、AAVhEr1.5、AAVhER1.14、AAVhEr1.8、AAVhEr1.16、AAVhEr1.18、AAVhEr1.35、
AAVhEr1.7、AAVhEr1.36、AAVhEr2.29、AAVhEr2.4、AAVhEr2.16、AAVhEr2.30、AAVhEr2.31、
AAVhEr2.36、AAVhER1.23、AAVhEr3.1、AAV2.5T、AAV-PAEC、AAV-LK01、AAV-LK02、AAV-LK03、
AAV-LK04、AAV-LK05、AAV-LK06、AAV-LK07、AAV-LK08、AAV-LK09、AAV-LK10、AAV-LK11、AAV-
LK12、AAV-LK13、AAV-LK14、AAV-LK15、AAV-LK16、AAV-LK17、AAV-LK18、AAV-LK19、AAV-
PAEC2、AAV-PAEC4、AAV-PAEC6、AAV-PAEC7、AAV-PAEC8、AAV-PAEC11、AAV-PAEC12、AAV-2-
pre-miRNA-101、AAV-8h、AAV-8b、AAV-h、AAV-b、AAVSM 10-2、AAV Shuffle 100-1、AAV
Shuffle 100-3、AAV Shuffle 100-7、AAV Shuffle 10-2、AAV Shuffle 10-6、AAV Shuffle
10-8、AAV Shuffle 100-2、AAV SM 10-1、AAV SM 10-8、AAV SM 100-3、AAV SM 100-10、
BNP61 AAV、BNP62 AAV、BNP63 AAV、AAVrh.50、AAVrh.43、AAVrh.62、AAVrh.48、AAVhu.19、
AAVhu.11、AAVhu.53、AAV4-8/rh.64、AAVLG-9/hu.39、AAV54.5/hu.23、AAV54.2/hu.22、
AAV54.7/hu.24、AAV54.1/hu.21、AAV54.4R/hu.27、AAV46.2/hu.28、AAV46.6/hu.29、
AAV128.1/hu.43、真型AAV(ttAAV)、UPENN AAV 10、日本AAV 10血清型、AAV CBr-7.1、AAV
CBr-7.10、AAV CBr-7.2、AAV CBr-7.3、AAV CBr-7.4、AAV CBr-7.5、AAV CBr-7.7、AAV CBr-
7.8、AAV CBr-B7.3、AAV CBr-B7.4、AAV CBr-E1、AAV CBr-E2、AAV CBr-E3、AAV CBr-E4、AAV
CBr-E5、AAV CBr-e5、AAV CBr-E6、AAV CBr-E7、AAV CBr-E8、AAV CHt-1、AAV CHt-2、AAV
CHt-3、AAV CHt-6.1、AAV CHt-6.10、AAV CHt-6.5、AAV CHt-6.6、AAV CHt-6.7、AAV CHt-
6.8、AAV CHt-P1、AAV CHt-P2、AAV CHt-P5、AAV CHt-P6、AAV CHt-P8、AAV CHt-P9、AAV
CKd-1、AAV CKd-10、AAV CKd-2、AAV CKd-3、AAV CKd-4、AAV CKd-6、AAV CKd-7、AAV CKd-8、
AAV CKd-B1、AAV CKd-B2、AAV CKd-B3、AAV CKd-B4、AAV CKd-B5、AAV CKd-B6、AAV CKd-B7、
AAV CKd-B8、AAV CKd-H1、AAV CKd-H2、AAV CKd-H3、AAV CKd-H4、AAV CKd-H5、AAV CKd-H6、
AAV CKd-N3、AAV CKd-N4、AAV CKd-N9、AAV CLg-F1、AAV CLg-F2、AAV CLg-F3、AAV CLg-F4、
AAV CLg-F5、AAV CLg-F6、AAV CLg-F7、AAV CLg-F8、AAV CLv-1、AAV CLv1-1、AAV Clv1-10、
AAV CLv1-2、AAV CLv-12、AAV CLv1-3、AAV CLv-13、AAV CLv1-4、AAV Clv1-7、AAV Clv1-8、
AAV Clv1-9、AAV CLv-2、AAV CLv-3、AAV CLv-4、AAV CLv-6、AAV CLv-8、AAV CLv-D1、AAV
CLv-D2、AAV CLv-D3、AAV CLv-D4、AAV CLv-D5、AAV CLv-D6、AAV CLv-D7、AAV CLv-D8、AAV
CLv-E1、AAV CLv-K1、AAV CLv-K3、AAV CLv-K6、AAV CLv-L4、AAV CLv-L5、AAV CLv-L6、AAV
CLv-M1、AAV CLv-M11、AAV CLv-M2、AAV CLv-M5、AAV CLv-M6、AAV CLv-M7、AAV CLv-M8、AAV
CLv-M9、AAV CLv-R1、AAV CLv-R2、AAV CLv-R3、AAV CLv-R4、AAV CLv-R5、AAV CLv-R6、AAV
CLv-R7、AAV CLv-R8、AAV CLv-R9、AAV CSp-1、AAV CSp-10、AAV CSp-11、AAV CSp-2、AAV
CSp-3、AAV CSp-4、AAV CSp-6、AAV CSp-7、AAV CSp-8、AAV CSp-8.10、AAV CSp-8.2、AAV
CSp-8.4、AAV CSp-8.5、AAV CSp-8.6、AAV CSp-8.7、AAV CSp-8.8、AAV CSp-8.9、AAV CSp-
9、AAV.hu.48R3、AAV.VR-355、AAV3B、AAV4、AAV5、AAVF1/HSC1、AAVF11/HSC11、AAVF12/
HSC12、AAVF13/HSC13、AAVF14/HSC14、AAVF15/HSC15、AAVF16/HSC16、AAVF17/HSC17、AAVF2/
HSC2、AAVF3/HSC3、AAVF4/HSC4、AAVF5/HSC5、AAVF6/HSC6、AAVF7/HSC7、AAVF8/HSC8、AAVF9/
HSC9、AAV-PHP.B(PHP.B)、AAV-PHP.A(PHP.A)、G2B-26、G2B-13、TH1.1-32和/或TH1.1-35，及
其变体。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV2。作为一个非限制性实例，重组
AAV病毒的衣壳是AAVrh10。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV9(hu14)。作
为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV-DJ。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒
的衣壳是AAV9.47。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV-DJ8。作为一个非限
制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV-PHP.B。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳
是AAV-PHP.A。
AAV3-3、AAV4、AAV4-4、AAV5、AAV6、AAV6.1、AAV6.2、AAV6.1.2、AAV7、AAV7.2、AAV8、AAV9、
AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84、
AAV9.9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV16.3、AAV24.1、AAV27.3、AAV42.12、AAV42-1b、AAV42-2、
AAV42-3a、AAV42-3b、AAV42-4、AAV42-5a、AAV42-5b、AAV42-6b、AAV42-8、AAV42-10、AAV42-
11、AAV42-12、AAV42-13、AAV42-15、AAV42-aa、AAV43-1、AAV43-12、AAV43-20、AAV43-21、
AAV43-23、AAV43-25、AAV43-5、AAV44.1、AAV44.2、AAV44.5、AAV223.1、AAV223.2、AAV223.4、
AAV223.5、AAV223.6、AAV223.7、AAV1-7/rh.48、AAV1-8/rh.49、AAV2-15/rh.62、AAV2-3/
rh.61、AAV2-4/rh.50、AAV2-5/rh.51、AAV3.1/hu.6、AAV3.1/hu.9、AAV3-9/rh.52、AAV3-11/
rh.53、AAV4-8/r11.64、AAV4-9/rh.54、AAV4-19/rh.55、AAV5-3/rh.57、AAV5-22/rh.58、
AAV7.3/hu.7、AAV16.8/hu.10、AAV16.12/hu.11、AAV29.3/bb.1、AAV29.5/bb.2、AAV106.1/
hu.37、AAV114.3/hu.40、AAV127.2/hu.41、AAV127.5/hu.42、AAV128.3/hu.44、AAV130.4/
hu.48、AAV145.1/hu.53、AAV145.5/hu.54、AAV145.6/hu.55、AAV161.10/hu.60、AAV161.6/
hu.61、AAV33.12/hu.17、AAV33.4/hu.15、AAV33.8/hu.16、AAV52/hu.19、AAV52.1/hu.20、
AAV58.2/hu.25、AAVA3.3、AAVA3.4、AAVA3.5、AAVA3.7、AAVC1、AAVC2、AAVC5、AAV-DJ、AAV-
DJ8、AAVF3、AAVF5、AAVH2、AAVrh.72、AAVhu.8、AAVrh.68、AAVrh.70、AAVpi.1、AAVpi.3、
AAVpi.2、AAVrh.60、AAVrh.44、AAVrh.65、AAVrh.55、AAVrh.47、AAVrh.69、AAVrh.45、
AAVrh.59、AAVhu.12、AAVH6、AAVLK03、AAVH-1/hu.1、AAVH-5/hu.3、AAVLG-10/rh.40、AAVLG-
4/rh.38、AAVLG-9/hu.39、AAVN721-8/rh.43、AAVCh.5、AAVCh.5R1、AAVcy.2、AAVcy.3、
AAVcy.4、AAVcy.5、AAVCy.5R1、AAVCy.5R2、AAVCy.5R3、AAVCy.5R4、AAVcy.6、AAVhu.1、
AAVhu.2、AAVhu.3、AAVhu.4、AAVhu.5、AAVhu.6、AAVhu.7、AAVhu.9、AAVhu.10、AAVhu.11、
AAVhu.13、AAVhu.15、AAVhu.16、AAVhu.17、AAVhu.18、AAVhu.20、AAVhu.21、AAVhu.22、
AAVhu.23.2、AAVhu.24、AAVhu.25、AAVhu.27、AAVhu.28、AAVhu.29、AAVhu.29R、AAVhu.31、
AAVhu.32、AAVhu.34、AAVhu.35、AAVhu.37、AAVhu.39、AAVhu.40、AAVhu.41、AAVhu.42、
AAVhu.43、AAVhu.44、AAVhu.44R1、AAVhu.44R2、AAVhu.44R3、AAVhu.45、AAVhu.46、
AAVhu.47、AAVhu.48、AAVhu.48R1、AAVhu.48R2、AAVhu.48R3、AAVhu.49、AAVhu.51、
AAVhu.52、AAVhu.54、AAVhu.55、AAVhu.56、AAVhu.57、AAVhu.58、AAVhu.60、AAVhu.61、
AAVhu.63、AAVhu.64、AAVhu.66、AAVhu.67、AAVhu.14/9、AAVhu.t 19、AAVrh.2、AAVrh.2R、
AAVrh.8、AAVrh.8R、AAVrh.10、AAVrh.12、AAVrh.13、AAVrh.13R、AAVrh.14、AAVrh.17、
AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.20、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、
AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh.37R2、
AAVrh.38、AAVrh.39、AAVrh.40、AAVrh.46、AAVrh.48、AAVrh.48.1、AAVrh.48.1.2、
AAVrh.48.2、AAVrh.49、AAVrh.51、AAVrh.52、AAVrh.53、AAVrh.54、AAVrh.56、AAVrh.57、
AAVrh.58、AAVrh.61、AAVrh.64、AAVrh.64R1、AAVrh.64R2、AAVrh.67、AAVrh.73、AAVrh.74、
AAVrh8R、AAVrh8R A586R突变体、AAVrh8R R533A突变体、AAAV、BAAV、山羊AAV、牛AAV、
AAVhE1.1、AAVhEr1.5、AAVhER1.14、AAVhEr1.8、AAVhEr1.16、AAVhEr1.18、AAVhEr1.35、
AAVhEr1.7、AAVhEr1.36、AAVhEr2.29、AAVhEr2.4、AAVhEr2.16、AAVhEr2.30、AAVhEr2.31、
AAVhEr2.36、AAVhER1.23、AAVhEr3.1、AAV2.5T、AAV-PAEC、AAV-LK01、AAV-LK02、AAV-LK03、
AAV-LK04、AAV-LK05、AAV-LK06、AAV-LK07、AAV-LK08、AAV-LK09、AAV-LK10、AAV-LK11、AAV-
LK12、AAV-LK13、AAV-LK14、AAV-LK15、AAV-LK16、AAV-LK17、AAV-LK18、AAV-LK19、AAV-
PAEC2、AAV-PAEC4、AAV-PAEC6、AAV-PAEC7、AAV-PAEC8、AAV-PAEC11、AAV-PAEC12、AAV-2-
pre-miRNA-101、AAV-8h、AAV-8b、AAV-h、AAV-b、AAVSM 10-2、AAV Shuffle 100-1、AAV
Shuffle 100-3、AAV Shuffle 100-7、AAV Shuffle 10-2、AAV Shuffle 10-6、AAV Shuffle
10-8、AAV Shuffle 100-2、AAV SM 10-1、AAV SM 10-8、AAV SM 100-3、AAV SM 100-10、
BNP61 AAV、BNP62 AAV、BNP63 AAV、AAVrh.50、AAVrh.43、AAVrh.62、AAVrh.48、AAVhu.19、
AAVhu.11、AAVhu.53、AAV4-8/rh.64、AAVLG-9/hu.39、AAV54.5/hu.23、AAV54.2/hu.22、
AAV54.7/hu.24、AAV54.1/hu.21、AAV54.4R/hu.27、AAV46.2/hu.28、AAV46.6/hu.29、
AAV128.1/hu.43、真型AAV(ttAAV)、UPENN AAV 10、日本AAV 10血清型、AAV CBr-7.1、AAV
CBr-7.10、AAV CBr-7.2、AAV CBr-7.3、AAV CBr-7.4、AAV CBr-7.5、AAV CBr-7.7、AAV CBr-
7.8、AAV CBr-B7.3、AAV CBr-B7.4、AAV CBr-E1、AAV CBr-E2、AAV CBr-E3、AAV CBr-E4、AAV
CBr-E5、AAV CBr-e5、AAV CBr-E6、AAV CBr-E7、AAV CBr-E8、AAV CHt-1、AAV CHt-2、AAV
CHt-3、AAV CHt-6.1、AAV CHt-6.10、AAV CHt-6.5、AAV CHt-6.6、AAV CHt-6.7、AAV CHt-
6.8、AAV CHt-P1、AAV CHt-P2、AAV CHt-P5、AAV CHt-P6、AAV CHt-P8、AAV CHt-P9、AAV
CKd-1、AAV CKd-10、AAV CKd-2、AAV CKd-3、AAV CKd-4、AAV CKd-6、AAV CKd-7、AAV CKd-8、
AAV CKd-B1、AAV CKd-B2、AAV CKd-B3、AAV CKd-B4、AAV CKd-B5、AAV CKd-B6、AAV CKd-B7、
AAV CKd-B8、AAV CKd-H1、AAV CKd-H2、AAV CKd-H3、AAV CKd-H4、AAV CKd-H5、AAV CKd-H6、
AAV CKd-N3、AAV CKd-N4、AAV CKd-N9、AAV CLg-F1、AAV CLg-F2、AAV CLg-F3、AAV CLg-F4、
AAV CLg-F5、AAV CLg-F6、AAV CLg-F7、AAV CLg-F8、AAV CLv-1、AAV CLv1-1、AAV Clv1-10、
AAV CLv1-2、AAV CLv-12、AAV CLv1-3、AAV CLv-13、AAV CLv1-4、AAV Clv1-7、AAV Clv1-8、
AAV Clv1-9、AAV CLv-2、AAV CLv-3、AAV CLv-4、AAV CLv-6、AAV CLv-8、AAV CLv-D1、AAV
CLv-D2、AAV CLv-D3、AAV CLv-D4、AAV CLv-D5、AAV CLv-D6、AAV CLv-D7、AAV CLv-D8、AAV
CLv-E1、AAV CLv-K1、AAV CLv-K3、AAV CLv-K6、AAV CLv-L4、AAV CLv-L5、AAV CLv-L6、AAV
CLv-M1、AAV CLv-M11、AAV CLv-M2、AAV CLv-M5、AAV CLv-M6、AAV CLv-M7、AAV CLv-M8、AAV
CLv-M9、AAV CLv-R1、AAV CLv-R2、AAV CLv-R3、AAV CLv-R4、AAV CLv-R5、AAV CLv-R6、AAV
CLv-R7、AAV CLv-R8、AAV CLv-R9、AAV CSp-1、AAV CSp-10、AAV CSp-11、AAV CSp-2、AAV
CSp-3、AAV CSp-4、AAV CSp-6、AAV CSp-7、AAV CSp-8、AAV CSp-8.10、AAV CSp-8.2、AAV
CSp-8.4、AAV CSp-8.5、AAV CSp-8.6、AAV CSp-8.7、AAV CSp-8.8、AAV CSp-8.9、AAV CSp-
9、AAV.hu.48R3、AAV.VR-355、AAV3B、AAV4、AAV5、AAVF1/HSC1、AAVF11/HSC11、AAVF12/
HSC12、AAVF13/HSC13、AAVF14/HSC14、AAVF15/HSC15、AAVF16/HSC16、AAVF17/HSC17、AAVF2/
HSC2、AAVF3/HSC3、AAVF4/HSC4、AAVF5/HSC5、AAVF6/HSC6、AAVF7/HSC7、AAVF8/HSC8、AAVF9/
HSC9、AAV-PHP.B(PHP.B)、AAV-PHP.A(PHP.A)、G2B-26、G2B-13、TH1.1-32和/或TH1.1-35，及
其变体。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV2。作为一个非限制性实例，重组
AAV病毒的衣壳是AAVrh10。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV9(hu14)。作
为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV-DJ。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒
的衣壳是AAV9.47。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV-DJ8。作为一个非限
制性实例，重组AAV病毒的衣壳是AAV-PHP.B。作为一个非限制性实例，重组AAV病毒的衣壳
是AAV-PHP.A。
[0716] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国公开号US20030138772(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV1(US20030138772的
SEQ ID NO：6和64)、AAV2(US20030138772的SEQ ID NO：7和70)、AAV3(US20030138772的SEQ
ID NO：8和71)、AAV4(US20030138772的SEQ ID NO：63)、AAV5(US20030138772的SEQ ID NO：
114)、AAV6(US20030138772的SEQ ID NO：65)、AAV7(US20030138772的SEQ ID NO：1-3)、
AAV8(US20030138772的SEQ ID NO：4和95)、AAV9(US20030138772的SEQ ID NO：5和100)、
AAV10(US20030138772的SEQ ID NO：117)、AAV11(US20030138772的SEQ ID NO：118)、AAV12
(US20030138772的SEQ ID NO：119)、AAVrh10(US20030138772的SEQ ID NO：81的氨基酸1至
738)、AAV16.3(US20030138772SEQ ID NO：10)、AAV29.3/bb.1(US20030138772 SEQ ID NO：
11)、AAV29.4(US20030138772 SEQ ID NO：12)、AAV29.5/bb.2(US20030138772 SEQ ID NO：
13)、AAV1.3(US20030138772 SEQ ID NO：14)、AAV13.3(US20030138772 SEQ ID NO：15)、
AAV24.1(US20030138772 SEQ ID NO：16)、AAV27.3(US20030138772 SEQ ID NO：17)、
AAV7.2(US20030138772 SEQ ID NO：18)、AAVC1(US20030138772 SEQ ID NO：19)、AAVC3
(US20030138772 SEQ ID NO：20)、AAVC5(US20030138772 SEQ ID NO：21)、AAVF1
(US20030138772 SEQ ID NO：22)、AAVF3(US20030138772 SEQ ID NO：23)、AAVF5
(US20030138772 SEQ ID NO：24)、AAVH6(US20030138772 SEQ ID NO：25)、AAVH2
(US20030138772 SEQ ID NO：26)、AAV42-8(US20030138772 SEQ ID NO：27)、AAV42-15
(US20030138772 SEQ ID NO：28)、AAV42-5b(US20030138772 SEQ ID NO：29)、AAV42-1b
(US20030138772 SEQ ID NO：30)、AAV42-13(US20030138772 SEQ ID NO：31)、AAV42-3a
(US20030138772 SEQ ID NO：32)、AAV42-4(US20030138772 SEQ ID NO：33)、AAV42-5a
(US20030138772 SEQ ID NO：34)、AAV42-10(US20030138772 SEQ ID NO：35)、AAV42-3b
(US20030138772 SEQ ID NO：36)、AAV42-11(US20030138772 SEQ ID NO：37)、AAV42-6b
(US20030138772 SEQ ID NO：38)、AAV43-1(US20030138772 SEQ ID NO：39)、AAV43-5
(US20030138772 SEQ ID NO：40)、AAV43-12(US20030138772 SEQ ID NO：41)、AAV43-20
(US20030138772 SEQ ID NO：42)、AAV43-21(US20030138772 SEQ ID NO：43)、AAV43-23
(US20030138772 SEQ ID NO：44)、AAV43-25(US20030138772 SEQ ID NO：45)、AAV44.1
(US20030138772 SEQ ID NO：46)、AAV44.5(US20030138772 SEQ ID NO：47)、AAV223.1
(US20030138772 SEQ ID NO：48)、AAV223.2(US20030138772 SEQ ID NO：49)、AAV223.4
(US20030138772 SEQ ID NO：50)、AAV223.5(US20030138772 SEQ ID NO：51)、AAV223.6
(US20030138772 SEQ ID NO：52)、AAV223.7(US20030138772 SEQ ID NO：53)、AAVA3.4
(US20030138772 SEQ ID NO：54)、AAVA3.5(US20030138772 SEQ ID NO：55)、AAVA3.7
(US20030138772 SEQ ID NO：56)、AAVA3.3(US20030138772 SEQ ID NO：57)、AAV42.12
(US20030138772 SEQ ID NO：58)、AAV44.2(US20030138772 SEQ ID NO：59)、AAV42-2
(US20030138772 SEQ ID NO：9)，或其变体。
SEQ ID NO：6和64)、AAV2(US20030138772的SEQ ID NO：7和70)、AAV3(US20030138772的SEQ
ID NO：8和71)、AAV4(US20030138772的SEQ ID NO：63)、AAV5(US20030138772的SEQ ID NO：
114)、AAV6(US20030138772的SEQ ID NO：65)、AAV7(US20030138772的SEQ ID NO：1-3)、
AAV8(US20030138772的SEQ ID NO：4和95)、AAV9(US20030138772的SEQ ID NO：5和100)、
AAV10(US20030138772的SEQ ID NO：117)、AAV11(US20030138772的SEQ ID NO：118)、AAV12
(US20030138772的SEQ ID NO：119)、AAVrh10(US20030138772的SEQ ID NO：81的氨基酸1至
738)、AAV16.3(US20030138772SEQ ID NO：10)、AAV29.3/bb.1(US20030138772 SEQ ID NO：
11)、AAV29.4(US20030138772 SEQ ID NO：12)、AAV29.5/bb.2(US20030138772 SEQ ID NO：
13)、AAV1.3(US20030138772 SEQ ID NO：14)、AAV13.3(US20030138772 SEQ ID NO：15)、
AAV24.1(US20030138772 SEQ ID NO：16)、AAV27.3(US20030138772 SEQ ID NO：17)、
AAV7.2(US20030138772 SEQ ID NO：18)、AAVC1(US20030138772 SEQ ID NO：19)、AAVC3
(US20030138772 SEQ ID NO：20)、AAVC5(US20030138772 SEQ ID NO：21)、AAVF1
(US20030138772 SEQ ID NO：22)、AAVF3(US20030138772 SEQ ID NO：23)、AAVF5
(US20030138772 SEQ ID NO：24)、AAVH6(US20030138772 SEQ ID NO：25)、AAVH2
(US20030138772 SEQ ID NO：26)、AAV42-8(US20030138772 SEQ ID NO：27)、AAV42-15
(US20030138772 SEQ ID NO：28)、AAV42-5b(US20030138772 SEQ ID NO：29)、AAV42-1b
(US20030138772 SEQ ID NO：30)、AAV42-13(US20030138772 SEQ ID NO：31)、AAV42-3a
(US20030138772 SEQ ID NO：32)、AAV42-4(US20030138772 SEQ ID NO：33)、AAV42-5a
(US20030138772 SEQ ID NO：34)、AAV42-10(US20030138772 SEQ ID NO：35)、AAV42-3b
(US20030138772 SEQ ID NO：36)、AAV42-11(US20030138772 SEQ ID NO：37)、AAV42-6b
(US20030138772 SEQ ID NO：38)、AAV43-1(US20030138772 SEQ ID NO：39)、AAV43-5
(US20030138772 SEQ ID NO：40)、AAV43-12(US20030138772 SEQ ID NO：41)、AAV43-20
(US20030138772 SEQ ID NO：42)、AAV43-21(US20030138772 SEQ ID NO：43)、AAV43-23
(US20030138772 SEQ ID NO：44)、AAV43-25(US20030138772 SEQ ID NO：45)、AAV44.1
(US20030138772 SEQ ID NO：46)、AAV44.5(US20030138772 SEQ ID NO：47)、AAV223.1
(US20030138772 SEQ ID NO：48)、AAV223.2(US20030138772 SEQ ID NO：49)、AAV223.4
(US20030138772 SEQ ID NO：50)、AAV223.5(US20030138772 SEQ ID NO：51)、AAV223.6
(US20030138772 SEQ ID NO：52)、AAV223.7(US20030138772 SEQ ID NO：53)、AAVA3.4
(US20030138772 SEQ ID NO：54)、AAVA3.5(US20030138772 SEQ ID NO：55)、AAVA3.7
(US20030138772 SEQ ID NO：56)、AAVA3.3(US20030138772 SEQ ID NO：57)、AAV42.12
(US20030138772 SEQ ID NO：58)、AAV44.2(US20030138772 SEQ ID NO：59)、AAV42-2
(US20030138772 SEQ ID NO：9)，或其变体。
[0717] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国公开号US20150159173(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV2(US20150159173的
SEQ ID NO：7和23)、rh20(US20150159173的SEQ ID NO：1)、rh32/33(US20150159173的SEQ
ID NO：2)、rh39(US20150159173的SEQ ID NO：3、20和36)、rh46(US20150159173的SEQ ID
NO：4和22)、rh73(US20150159173的SEQ ID NO：5)、rh74(US20150159173的SEQ ID NO：6)、
AAV6.1(US20150159173的SEQ ID NO：29)、rh.8(US20150159173的SEQ ID NO：41)、rh.48.1
(US20150159173的SEQ ID NO：44)、hu.44(US20150159173的SEQ ID NO：45)、hu.29
(US20150159173的SEQ ID NO：42)、hu.48(US20150159173的SEQ ID NO：38)、rh54
(US20150159173的SEQ ID NO：49)、AAV2(US20150159173的SEQ ID NO：7)、cy.5
(US20150159173的SEQ ID NO：8和24)、rh.10(US20150159173的SEQ ID NO：9和25)、rh.13
(US20150159173的SEQ ID NO：10和26)、AAV1(US20150159173的SEQ ID NO：11和27)、AAV3
(US20150159173的SEQ ID NO：12和28)、AAV6(US20150159173的SEQ ID NO：13和29)、AAV7
(US20150159173的SEQ ID NO：14和30)、AAV8(US20150159173的SEQ ID NO：15和31)、hu.13
(US20150159173的SEQ ID NO：16和32)、hu.26(US20150159173的SEQ ID NO：17和33)、
hu.37(US20150159173的SEQ ID NO：18和34)、hu.53(US20150159173的SEQ ID NO：19和
35)、rh.43(US20150159173的SEQ ID NO：21和37)、rh2(US20150159173的SEQ ID NO：39)、
rh.37(US20150159173的SEQ ID NO：40)、rh.64(US20150159173的SEQ ID NO：43)、rh.48
(US20150159173的SEQ ID NO：44)、ch.5(US20150159173的SEQ ID NO 46)、rh.67
(US20150159173的SEQ ID NO：47)、rh.58(US20150159173的SEQ ID NO：48)，或其变体，包
括但不限于Cy5R1、Cy5R2、Cy5R3、Cy5R4、rh.13R、rh.37R2、rh.2R、rh.8R、rh.48.1、rh.48.2、
rh.48.1.2、hu.44R1、hu.44R2、hu.44R3、hu.29R、ch.5R1、rh64R1、rh64R2、AAV6.2、AAV6.1、
AAV6.12、hu.48R1、hu.48R2和hu.48R3。
SEQ ID NO：7和23)、rh20(US20150159173的SEQ ID NO：1)、rh32/33(US20150159173的SEQ
ID NO：2)、rh39(US20150159173的SEQ ID NO：3、20和36)、rh46(US20150159173的SEQ ID
NO：4和22)、rh73(US20150159173的SEQ ID NO：5)、rh74(US20150159173的SEQ ID NO：6)、
AAV6.1(US20150159173的SEQ ID NO：29)、rh.8(US20150159173的SEQ ID NO：41)、rh.48.1
(US20150159173的SEQ ID NO：44)、hu.44(US20150159173的SEQ ID NO：45)、hu.29
(US20150159173的SEQ ID NO：42)、hu.48(US20150159173的SEQ ID NO：38)、rh54
(US20150159173的SEQ ID NO：49)、AAV2(US20150159173的SEQ ID NO：7)、cy.5
(US20150159173的SEQ ID NO：8和24)、rh.10(US20150159173的SEQ ID NO：9和25)、rh.13
(US20150159173的SEQ ID NO：10和26)、AAV1(US20150159173的SEQ ID NO：11和27)、AAV3
(US20150159173的SEQ ID NO：12和28)、AAV6(US20150159173的SEQ ID NO：13和29)、AAV7
(US20150159173的SEQ ID NO：14和30)、AAV8(US20150159173的SEQ ID NO：15和31)、hu.13
(US20150159173的SEQ ID NO：16和32)、hu.26(US20150159173的SEQ ID NO：17和33)、
hu.37(US20150159173的SEQ ID NO：18和34)、hu.53(US20150159173的SEQ ID NO：19和
35)、rh.43(US20150159173的SEQ ID NO：21和37)、rh2(US20150159173的SEQ ID NO：39)、
rh.37(US20150159173的SEQ ID NO：40)、rh.64(US20150159173的SEQ ID NO：43)、rh.48
(US20150159173的SEQ ID NO：44)、ch.5(US20150159173的SEQ ID NO 46)、rh.67
(US20150159173的SEQ ID NO：47)、rh.58(US20150159173的SEQ ID NO：48)，或其变体，包
括但不限于Cy5R1、Cy5R2、Cy5R3、Cy5R4、rh.13R、rh.37R2、rh.2R、rh.8R、rh.48.1、rh.48.2、
rh.48.1.2、hu.44R1、hu.44R2、hu.44R3、hu.29R、ch.5R1、rh64R1、rh64R2、AAV6.2、AAV6.1、
AAV6.12、hu.48R1、hu.48R2和hu.48R3。
[0718] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国专利号US 7198951(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV9(US 7198951的SEQ ID
NO：1-3)、AAV2(US 7198951的SEQ ID NO：4)、AAV1(US 7198951的SEQ ID NO：5)、AAV3(US
7198951的SEQ ID NO：6)和AAV8(US7198951的SEQ ID NO：7)。
NO：1-3)、AAV2(US 7198951的SEQ ID NO：4)、AAV1(US 7198951的SEQ ID NO：5)、AAV3(US
7198951的SEQ ID NO：6)和AAV8(US7198951的SEQ ID NO：7)。
[0719] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如N Pulicherla等人(Molecular Therapy 19(6)：1070-1078(2011)，通过引用的方式以其整体并入本文)所述的AAV9序列中
的突变，如但不限于AAV9.9、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、
AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84。
的突变，如但不限于AAV9.9、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、
AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84。
[0720] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国专利号US 6156303(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV3B(US 6156303的SEQ ID
NO：1和10)、AAV6(US 6156303的SEQ ID NO：2、7和11)、AAV2(US 6156303的SEQ ID NO：3和
8)、AAV3A(US 6156303的SEQ ID NO：4和9)，或其衍生物。
NO：1和10)、AAV6(US 6156303的SEQ ID NO：2、7和11)、AAV2(US 6156303的SEQ ID NO：3和
8)、AAV3A(US 6156303的SEQ ID NO：4和9)，或其衍生物。
[0721] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国公开号US20140359799(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV8(US20140359799的
SEQ ID NO：1)、AAVDJ(US20140359799的SEQ ID NO：2和3)，或其变体。
SEQ ID NO：1)、AAVDJ(US20140359799的SEQ ID NO：2和3)，或其变体。
[0722] 在一些实施方案中，血清型可以是AAVDJ或其变体，如AAVDJ8(或AAV-DJ8)，如Grimm等人(Journal of Virology 82(12)：5887-5911(2008)，通过引用的方式以其整体并
入本文)所述。AAVDJ8的氨基酸序列可以包含两个或更多个突变以除去肝素结合结构域
(HBD)。作为一个非限制性实例，如在美国专利号7,588,772(其内容通过引用的方式以其整
体并入本文)中的SEQ ID NO：1所描述的AAV-DJ序列，可以包含两个突变：(1)R587Q，其中在
氨基酸587处的精氨酸(R；Arg)变为谷氨酰胺(Q；Gln)和(2)R590T，其中氨基酸590处的精氨
酸(R；Arg)变为苏氨酸(T；Thr)。作为另一个非限制性实例，可以包含三个突变：(1)K406R，
其中氨基酸406处的赖氨酸(K；Lys)变为精氨酸(R；Arg)，(2)R587Q，其中氨基酸587处的精
氨酸(R；Arg)变为谷氨酰胺(Q；Gln)和(3)R590T，其中氨基酸590处的精氨酸(R；Arg)变为苏
氨酸(T；Thr)。
入本文)所述。AAVDJ8的氨基酸序列可以包含两个或更多个突变以除去肝素结合结构域
(HBD)。作为一个非限制性实例，如在美国专利号7,588,772(其内容通过引用的方式以其整
体并入本文)中的SEQ ID NO：1所描述的AAV-DJ序列，可以包含两个突变：(1)R587Q，其中在
氨基酸587处的精氨酸(R；Arg)变为谷氨酰胺(Q；Gln)和(2)R590T，其中氨基酸590处的精氨
酸(R；Arg)变为苏氨酸(T；Thr)。作为另一个非限制性实例，可以包含三个突变：(1)K406R，
其中氨基酸406处的赖氨酸(K；Lys)变为精氨酸(R；Arg)，(2)R587Q，其中氨基酸587处的精
氨酸(R；Arg)变为谷氨酰胺(Q；Gln)和(3)R590T，其中氨基酸590处的精氨酸(R；Arg)变为苏
氨酸(T；Thr)。
[0723] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如国际公开号WO1998011244(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的AAV4序列，如但不限于AAV4(WO1998011244的
SEQ ID NO：1-20)。
SEQ ID NO：1-20)。
[0724] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如国际公开号WO2014144229所述的并通过引用的方式并入本文中的AAV2序列中的突变以生成AAV2G9。
[0725] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如国际公开号WO2005033321(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV3-3(WO2005033321的
SEQ ID NO：217)、AAV1(WO2005033321的SEQ ID NO：219和202)、AAV106.1/hu.37
(WO2005033321的SEQ ID No：10)、AAV114.3/hu.40(WO2005033321的SEQ ID No：11)、
AAV127.2/hu.41(WO2005033321的SEQ ID NO：6和8)、AAV128.3/hu.44(WO2005033321的SEQ
ID No：81)、AAV130.4/hu.48(WO2005033321的SEQ ID NO：78)、AAV145.1/hu.53
(WO2005033321的SEQ ID No：176和177)、AAV145.6/hu.56(WO2005033321的SEQ ID NO：168
和192)、AAV16.12/hu.11(WO2005033321的SEQ ID NO：153和57)、AAV16.8/hu.10
(WO2005033321的SEQ ID NO：156和56)、AAV161.10/hu.60(WO2005033321的SEQ ID No：
170)、AAV161.6/hu.61(WO2005033321的SEQ ID No：174)、AAV1-7/rh.48(WO2005033321的
SEQ ID NO：32)、AAV1-8/rh.49(WO2005033321的SEQ ID NO：103和25)、AAV2(WO2005033321
的SEQ ID NO：211和221)、AAV2-15/rh.62(WO2005033321的SEQ ID No：33和114)、AAV2-3/
rh.61(WO2005033321的SEQ ID NO：21)、AAV2-4/rh.50(WO2005033321的SEQ ID No：23和
108)、AAV2-5/rh.51(WO2005033321的SEQ ID NO：104和22)、AAV3.1/hu.6(WO2005033321的
SEQ ID NO：5和84)、AAV3.1/hu.9(WO2005033321的SEQ ID NO：155和58)、AAV3-11/rh.53
(WO2005033321的SEQ ID NO：186和176)、AAV3-3(WO2005033321的SEQ ID NO：200)、
AAV33.12/hu.17(WO2005033321的SEQ ID NO：4)、AAV33.4/hu.15(WO2005033321的SEQ ID
No：50)、AAV33.8/hu.16(WO2005033321的SEQ ID No：51)、AAV3-9/rh.52(WO2005033321的
SEQ ID NO：96和18)、AAV4-19/rh.55(WO2005033321的SEQ ID NO：117)、AAV4-4
(WO2005033321的SEQ ID NO：201和218)、AAV4-9/rh.54(WO2005033321的SEQ ID NO：116)、
AAV5(WO2005033321的SEQ ID NO：199和216)、AAV52.1/hu.20(WO2005033321的SEQ ID NO：
63)、AAV52/hu.19(WO2005033321的SEQ ID NO：133)、AAV5-22/rh.58(WO2005033321的SEQ
ID No：27)、AAV5-3/rh.57(WO2005033321的SEQ ID NO：105)、AAV5-3/rh.57(WO2005033321
的SEQ ID No：26)、AAV58.2/hu.25(WO2005033321的SEQ ID No：49)、AAV6(WO20050333210
的SEQ ID NO：203和22)、AAV7(WO2005033321的SEQ ID NO：222和213)、AAV7.3/hu.7
(WO2005033321的SEQ ID No：55)、AAV8(WO2005033321的SEQ ID NO：223和214)、AAVH-1/
hu.1(WO2005033321的SEQ ID No：46)、AAVH-5/hu.3(WO2005033321的SEQ ID No：44)、
AAVhu.1(WO2005033321的SEQ ID NO：144)、AAVhu.10(WO2005033321的SEQ ID NO：156)、
AAVhu.11(WO2005033321的SEQ ID NO：153)、AAVhu.12(WO2005033321 SEQ ID NO：59)、
AAVhu.13(SEQ ID NO：129的WO2005033321)、AAVhu.14/AAV9(WO2005033321的SEQ ID NO：
123和3)、AAVhu.15(WO2005033321的SEQ ID NO：147)、AAVhu.16(WO2005033321的SEQ ID
NO：148)、AAVhu.17(WO2005033321的SEQ ID NO：83)、AAVhu.18(WO2005033321的SEQ ID
NO：149)、AAVhu.19(WO2005033321的SEQ ID NO：133)、AAVhu.2(WO2005033321的SEQ ID
NO：143)、AAVhu.20(WO2005033321的SEQ ID NO：134)、AAVhu.21(WO2005033321的SEQ ID
NO：135)、AAVhu.22(WO2005033321的SEQ ID NO：138)、AAVhu.23.2(WO2005033321的SEQ ID
NO：137)、AAVhu.24(WO2005033321的SEQ ID NO：136)、AAVhu.25(WO2005033321的SEQ ID
NO：146)、AAVhu.27(WO2005033321的SEQ ID NO：140)、AAVhu.29(WO2005033321的SEQ ID
NO：132)、AAVhu.3(WO2005033321的SEQ ID NO：145)、AAVhu.31(WO2005033321的SEQ ID
NO：121)、AAVhu.32(WO2005033321的SEQ ID NO：122)、AAVhu.34(WO2005033321的SEQ ID
NO：125)、AAVhu.35(WO2005033321的SEQ ID NO：164)、AAVhu.37(WO2005033321的SEQ ID
NO：88)、AAVhu.39(WO2005033321的SEQ ID NO：102)、AAVhu.4(WO2005033321的SEQ ID NO：
141)、AAVhu.40(WO2005033321的SEQ ID NO：87)、AAVhu.41(WO2005033321的SEQ ID NO：
91)、AAVhu.42(WO2005033321的SEQ ID NO：85)、AAVhu.43(WO2005033321的SEQ ID NO：
160)、AAVhu.44(WO2005033321的SEQ ID NO：144)、AAVhu.45(WO2005033321的SEQ ID NO：
127)、AAVhu.46(WO2005033321的SEQ ID NO：159)、AAVhu.47(WO2005033321的SEQ ID NO：
128)、AAVhu.48(WO2005033321的SEQ ID NO：157)、AAVhu.49(WO2005033321的SEQ ID NO：
189)、AAVhu.51(WO2005033321的SEQ ID NO：190)、AAVhu.52(WO2005033321的SEQ ID NO：
191)、AAVhu.53(WO2005033321的SEQ ID NO：186)、AAVhu.54(WO2005033321的SEQ ID NO：
188)、AAVhu.55(WO2005033321的SEQ ID NO：187)、AAVhu.56(WO2005033321的SEQ ID NO：
192)、AAVhu.57(WO2005033321的SEQ ID NO：193)、AAVhu.58(WO2005033321的SEQ ID NO：
194)、AAVhu.6(WO2005033321的SEQ ID NO：84)、AAVhu.60(WO2005033321的SEQ ID NO：
184)、AAVhu.61(WO2005033321的SEQ ID NO：185)、AAVhu.63(WO2005033321的SEQ ID NO：
195)、AAVhu.64(WO2005033321的SEQ ID NO：196)、AAVhu.66(WO2005033321的SEQ ID NO：
197)、AAVhu.67(WO2005033321的SEQ ID NO：198)、AAVhu.7(WO2005033321的SEQ ID NO：
150)、AAVhu.8(WO2005033321SEQ ID NO：12)、AAVhu.9(WO2005033321的SEQ ID NO：155)、
AAVLG-10/rh.40(WO2005033321的SEQ ID No：14)、AAVLG-4/rh.38(WO2005033321的SEQ ID
NO：86)、AAVLG-4/rh.38(WO2005033321的SEQ ID No：7)、AAVN721-8/rh.43(WO2005033321
的SEQ ID NO：163)、AAVN721-8/rh.43(WO2005033321的SEQ ID No：43)、AAVpi.1
(WO2005033321SEQ ID NO：28)、AAVpi.2(WO2005033321 SEQ ID NO：30)、AAVpi.3
(WO2005033321 SEQ ID NO：29)、AAVrh.38(WO2005033321的SEQ ID NO：86)、AAVrh.40
(WO2005033321的SEQ ID NO：92)、AAVrh.43(WO2005033321的SEQ ID NO：163)、AAVrh.44
(WO2005033321 SEQ ID NO：34)、AAVrh.45(WO2005033321 SEQ ID NO：41)、AAVrh.47
(WO2005033321 SEQ ID NO：38)、AAVrh.48(WO2005033321的SEQ ID NO：115)、AAVrh.49
(WO2005033321的SEQ ID NO：103)、AAVrh.50(WO2005033321的SEQ ID NO：108)、AAVrh.51
(WO2005033321的SEQ ID NO：104)、AAVrh.52(WO2005033321的SEQ ID NO：96)、AAVrh.53
(WO2005033321的SEQ ID NO：97)、AAVrh.55(WO2005033321 SEQ ID NO：37)、AAVrh.56
(WO2005033321的SEQ ID NO：152)、AAVrh.57(WO2005033321的SEQ ID NO：105)、AAVrh.58
(WO2005033321的SEQ ID NO：106)、AAVrh.59(WO2005033321 SEQ ID NO：42)、AAVrh.60
(WO2005033321 SEQ ID NO：31)、AAVrh.61(WO2005033321的SEQ ID NO：107)、AAVrh.62
(WO2005033321的SEQ ID NO：114)、AAVrh.64(WO2005033321的SEQ ID NO：99)、AAVrh.65
(WO2005033321 SEQ ID NO：35)、AAVrh.68(WO2005033321 SEQ ID NO：16)、AAVrh.69
(WO2005033321 SEQ ID NO：39)、AAVrh.70(WO2005033321 SEQ ID NO：20)、AAVrh.72
(WO2005033321 SEQ ID NO：9)，或其变体，包括但不限于AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、
AAVcy.5、AAVcy.6、AAVrh.12、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.21、AAVrh.22、
AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.25/42 15、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、
AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh14。变体的非限制性实例包括
WO2005033321的SEQ ID NO：13、15、17、19、24、36、40、45、47、48、51-54、60-62、64-77、79、
80、82、89、90、93-95、98、100、101、109-113、118-120、124、126、131、139、142、151，154、158、
161、162、165-183、202、204-212、215、219、224-236，其内容通过引用的方式以其整体并入
本文。
SEQ ID NO：217)、AAV1(WO2005033321的SEQ ID NO：219和202)、AAV106.1/hu.37
(WO2005033321的SEQ ID No：10)、AAV114.3/hu.40(WO2005033321的SEQ ID No：11)、
AAV127.2/hu.41(WO2005033321的SEQ ID NO：6和8)、AAV128.3/hu.44(WO2005033321的SEQ
ID No：81)、AAV130.4/hu.48(WO2005033321的SEQ ID NO：78)、AAV145.1/hu.53
(WO2005033321的SEQ ID No：176和177)、AAV145.6/hu.56(WO2005033321的SEQ ID NO：168
和192)、AAV16.12/hu.11(WO2005033321的SEQ ID NO：153和57)、AAV16.8/hu.10
(WO2005033321的SEQ ID NO：156和56)、AAV161.10/hu.60(WO2005033321的SEQ ID No：
170)、AAV161.6/hu.61(WO2005033321的SEQ ID No：174)、AAV1-7/rh.48(WO2005033321的
SEQ ID NO：32)、AAV1-8/rh.49(WO2005033321的SEQ ID NO：103和25)、AAV2(WO2005033321
的SEQ ID NO：211和221)、AAV2-15/rh.62(WO2005033321的SEQ ID No：33和114)、AAV2-3/
rh.61(WO2005033321的SEQ ID NO：21)、AAV2-4/rh.50(WO2005033321的SEQ ID No：23和
108)、AAV2-5/rh.51(WO2005033321的SEQ ID NO：104和22)、AAV3.1/hu.6(WO2005033321的
SEQ ID NO：5和84)、AAV3.1/hu.9(WO2005033321的SEQ ID NO：155和58)、AAV3-11/rh.53
(WO2005033321的SEQ ID NO：186和176)、AAV3-3(WO2005033321的SEQ ID NO：200)、
AAV33.12/hu.17(WO2005033321的SEQ ID NO：4)、AAV33.4/hu.15(WO2005033321的SEQ ID
No：50)、AAV33.8/hu.16(WO2005033321的SEQ ID No：51)、AAV3-9/rh.52(WO2005033321的
SEQ ID NO：96和18)、AAV4-19/rh.55(WO2005033321的SEQ ID NO：117)、AAV4-4
(WO2005033321的SEQ ID NO：201和218)、AAV4-9/rh.54(WO2005033321的SEQ ID NO：116)、
AAV5(WO2005033321的SEQ ID NO：199和216)、AAV52.1/hu.20(WO2005033321的SEQ ID NO：
63)、AAV52/hu.19(WO2005033321的SEQ ID NO：133)、AAV5-22/rh.58(WO2005033321的SEQ
ID No：27)、AAV5-3/rh.57(WO2005033321的SEQ ID NO：105)、AAV5-3/rh.57(WO2005033321
的SEQ ID No：26)、AAV58.2/hu.25(WO2005033321的SEQ ID No：49)、AAV6(WO20050333210
的SEQ ID NO：203和22)、AAV7(WO2005033321的SEQ ID NO：222和213)、AAV7.3/hu.7
(WO2005033321的SEQ ID No：55)、AAV8(WO2005033321的SEQ ID NO：223和214)、AAVH-1/
hu.1(WO2005033321的SEQ ID No：46)、AAVH-5/hu.3(WO2005033321的SEQ ID No：44)、
AAVhu.1(WO2005033321的SEQ ID NO：144)、AAVhu.10(WO2005033321的SEQ ID NO：156)、
AAVhu.11(WO2005033321的SEQ ID NO：153)、AAVhu.12(WO2005033321 SEQ ID NO：59)、
AAVhu.13(SEQ ID NO：129的WO2005033321)、AAVhu.14/AAV9(WO2005033321的SEQ ID NO：
123和3)、AAVhu.15(WO2005033321的SEQ ID NO：147)、AAVhu.16(WO2005033321的SEQ ID
NO：148)、AAVhu.17(WO2005033321的SEQ ID NO：83)、AAVhu.18(WO2005033321的SEQ ID
NO：149)、AAVhu.19(WO2005033321的SEQ ID NO：133)、AAVhu.2(WO2005033321的SEQ ID
NO：143)、AAVhu.20(WO2005033321的SEQ ID NO：134)、AAVhu.21(WO2005033321的SEQ ID
NO：135)、AAVhu.22(WO2005033321的SEQ ID NO：138)、AAVhu.23.2(WO2005033321的SEQ ID
NO：137)、AAVhu.24(WO2005033321的SEQ ID NO：136)、AAVhu.25(WO2005033321的SEQ ID
NO：146)、AAVhu.27(WO2005033321的SEQ ID NO：140)、AAVhu.29(WO2005033321的SEQ ID
NO：132)、AAVhu.3(WO2005033321的SEQ ID NO：145)、AAVhu.31(WO2005033321的SEQ ID
NO：121)、AAVhu.32(WO2005033321的SEQ ID NO：122)、AAVhu.34(WO2005033321的SEQ ID
NO：125)、AAVhu.35(WO2005033321的SEQ ID NO：164)、AAVhu.37(WO2005033321的SEQ ID
NO：88)、AAVhu.39(WO2005033321的SEQ ID NO：102)、AAVhu.4(WO2005033321的SEQ ID NO：
141)、AAVhu.40(WO2005033321的SEQ ID NO：87)、AAVhu.41(WO2005033321的SEQ ID NO：
91)、AAVhu.42(WO2005033321的SEQ ID NO：85)、AAVhu.43(WO2005033321的SEQ ID NO：
160)、AAVhu.44(WO2005033321的SEQ ID NO：144)、AAVhu.45(WO2005033321的SEQ ID NO：
127)、AAVhu.46(WO2005033321的SEQ ID NO：159)、AAVhu.47(WO2005033321的SEQ ID NO：
128)、AAVhu.48(WO2005033321的SEQ ID NO：157)、AAVhu.49(WO2005033321的SEQ ID NO：
189)、AAVhu.51(WO2005033321的SEQ ID NO：190)、AAVhu.52(WO2005033321的SEQ ID NO：
191)、AAVhu.53(WO2005033321的SEQ ID NO：186)、AAVhu.54(WO2005033321的SEQ ID NO：
188)、AAVhu.55(WO2005033321的SEQ ID NO：187)、AAVhu.56(WO2005033321的SEQ ID NO：
192)、AAVhu.57(WO2005033321的SEQ ID NO：193)、AAVhu.58(WO2005033321的SEQ ID NO：
194)、AAVhu.6(WO2005033321的SEQ ID NO：84)、AAVhu.60(WO2005033321的SEQ ID NO：
184)、AAVhu.61(WO2005033321的SEQ ID NO：185)、AAVhu.63(WO2005033321的SEQ ID NO：
195)、AAVhu.64(WO2005033321的SEQ ID NO：196)、AAVhu.66(WO2005033321的SEQ ID NO：
197)、AAVhu.67(WO2005033321的SEQ ID NO：198)、AAVhu.7(WO2005033321的SEQ ID NO：
150)、AAVhu.8(WO2005033321SEQ ID NO：12)、AAVhu.9(WO2005033321的SEQ ID NO：155)、
AAVLG-10/rh.40(WO2005033321的SEQ ID No：14)、AAVLG-4/rh.38(WO2005033321的SEQ ID
NO：86)、AAVLG-4/rh.38(WO2005033321的SEQ ID No：7)、AAVN721-8/rh.43(WO2005033321
的SEQ ID NO：163)、AAVN721-8/rh.43(WO2005033321的SEQ ID No：43)、AAVpi.1
(WO2005033321SEQ ID NO：28)、AAVpi.2(WO2005033321 SEQ ID NO：30)、AAVpi.3
(WO2005033321 SEQ ID NO：29)、AAVrh.38(WO2005033321的SEQ ID NO：86)、AAVrh.40
(WO2005033321的SEQ ID NO：92)、AAVrh.43(WO2005033321的SEQ ID NO：163)、AAVrh.44
(WO2005033321 SEQ ID NO：34)、AAVrh.45(WO2005033321 SEQ ID NO：41)、AAVrh.47
(WO2005033321 SEQ ID NO：38)、AAVrh.48(WO2005033321的SEQ ID NO：115)、AAVrh.49
(WO2005033321的SEQ ID NO：103)、AAVrh.50(WO2005033321的SEQ ID NO：108)、AAVrh.51
(WO2005033321的SEQ ID NO：104)、AAVrh.52(WO2005033321的SEQ ID NO：96)、AAVrh.53
(WO2005033321的SEQ ID NO：97)、AAVrh.55(WO2005033321 SEQ ID NO：37)、AAVrh.56
(WO2005033321的SEQ ID NO：152)、AAVrh.57(WO2005033321的SEQ ID NO：105)、AAVrh.58
(WO2005033321的SEQ ID NO：106)、AAVrh.59(WO2005033321 SEQ ID NO：42)、AAVrh.60
(WO2005033321 SEQ ID NO：31)、AAVrh.61(WO2005033321的SEQ ID NO：107)、AAVrh.62
(WO2005033321的SEQ ID NO：114)、AAVrh.64(WO2005033321的SEQ ID NO：99)、AAVrh.65
(WO2005033321 SEQ ID NO：35)、AAVrh.68(WO2005033321 SEQ ID NO：16)、AAVrh.69
(WO2005033321 SEQ ID NO：39)、AAVrh.70(WO2005033321 SEQ ID NO：20)、AAVrh.72
(WO2005033321 SEQ ID NO：9)，或其变体，包括但不限于AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、
AAVcy.5、AAVcy.6、AAVrh.12、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.21、AAVrh.22、
AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.25/42 15、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、
AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh14。变体的非限制性实例包括
WO2005033321的SEQ ID NO：13、15、17、19、24、36、40、45、47、48、51-54、60-62、64-77、79、
80、82、89、90、93-95、98、100、101、109-113、118-120、124、126、131、139、142、151，154、158、
161、162、165-183、202、204-212、215、219、224-236，其内容通过引用的方式以其整体并入
本文。
[0726] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如国际公开号WO2015168666(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAVrh8R(WO2015168666的
SEQ ID NO：9)、AAVrh8R A586R突变体(WO2015168666的SEQ ID NO：10)、AAVrh8R R533A突
变体(WO2015168666的SEQ ID NO：11)，或其变体。
SEQ ID NO：9)、AAVrh8R A586R突变体(WO2015168666的SEQ ID NO：10)、AAVrh8R R533A突
变体(WO2015168666的SEQ ID NO：11)，或其变体。
[0727] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国专利号US9233131(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAVhE1.1(US9233131的SEQ
ID NO：44)、AAVhEr1.5(US9233131的SEQ ID NO：45)、AAVhER1.14(US9233131的SEQ ID NO：
46)、AAVhEr1.8(US9233131的SEQ ID NO：47)、AAVhEr1.16(US9233131的SEQ ID NO：48)、
AAVhEr1.18(US9233131的SEQ ID NO：49)、AAVhEr1.35(US9233131的SEQ ID NO：50)、
AAVhEr1.7(US9233131的SEQ ID NO：51)、AAVhEr1.36(US9233131的SEQ ID NO：52)、
AAVhEr2.29(US9233131的SEQ ID NO：53)、AAVhEr2.4(US9233131的SEQ ID NO：54)、
AAVhEr2.16(US9233131的SEQ ID NO：55)、AAVhEr2.30(US9233131的SEQ ID NO：56)、
AAVhEr2.31(US9233131的SEQ ID NO：58)、AAVhEr2.36(US9233131的SEQ ID NO：57)、
AAVhER1.23(US9233131的SEQ ID NO：53)、AAVhEr3.1(US9233131的SEQ ID NO：59)、
AAV2.5T(US9233131的SEQ ID NO：42)，或其变体。
ID NO：44)、AAVhEr1.5(US9233131的SEQ ID NO：45)、AAVhER1.14(US9233131的SEQ ID NO：
46)、AAVhEr1.8(US9233131的SEQ ID NO：47)、AAVhEr1.16(US9233131的SEQ ID NO：48)、
AAVhEr1.18(US9233131的SEQ ID NO：49)、AAVhEr1.35(US9233131的SEQ ID NO：50)、
AAVhEr1.7(US9233131的SEQ ID NO：51)、AAVhEr1.36(US9233131的SEQ ID NO：52)、
AAVhEr2.29(US9233131的SEQ ID NO：53)、AAVhEr2.4(US9233131的SEQ ID NO：54)、
AAVhEr2.16(US9233131的SEQ ID NO：55)、AAVhEr2.30(US9233131的SEQ ID NO：56)、
AAVhEr2.31(US9233131的SEQ ID NO：58)、AAVhEr2.36(US9233131的SEQ ID NO：57)、
AAVhER1.23(US9233131的SEQ ID NO：53)、AAVhEr3.1(US9233131的SEQ ID NO：59)、
AAV2.5T(US9233131的SEQ ID NO：42)，或其变体。
[0728] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国专利公开号US20150376607(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV-PAEC
(US20150376607的SEQ ID NO：1)、AAV-LK01(US20150376607的SEQ ID NO：2)、AAV-LK02
(US20150376607的SEQ ID NO：3)、AAV-LK03(US20150376607的SEQ ID NO：4)、AAV-LK04
(US20150376607的SEQ ID NO：5)、AAV-LK05(US20150376607的SEQ ID NO：6)、AAV-LK06
(US20150376607的SEQ ID NO：7)、AAV-LK07(US20150376607的SEQ ID NO：8)、AAV-LK08
(US20150376607的SEQ ID NO：9)、AAV-LK09(US20150376607的SEQ ID NO：10)、AAV-LK10
(US20150376607的SEQ ID NO：11)、AAV-LK11(US20150376607的SEQ ID NO：12)、AAV-LK12
(US20150376607的SEQ ID NO：13)、AAV-LK13(US20150376607的SEQ ID NO：14)、AAV-LK14
(US20150376607的SEQ ID NO：15)、AAV-LK15(US20150376607的SEQ ID NO：16)、AAV-LK16
(US20150376607的SEQ ID NO：17)、AAV-LK17(US20150376607的SEQ ID NO：18)、AAV-LK18
(US20150376607的SEQ ID NO：19)、AAV-LK19(US20150376607的SEQ ID NO：20)、AAV-PAEC2
(US20150376607的SEQ ID NO：21)、AAV-PAEC4(US20150376607的SEQ ID NO：22)、AAV-
PAEC6(US20150376607的SEQ ID NO：23)、AAV-PAEC7(US20150376607的SEQ ID NO：24)、
AAV-PAEC8(US20150376607的SEQ ID NO：25)、AAV-PAEC11(US20150376607的SEQ ID NO：
26)、AAV-PAEC12(US20150376607的SEQ ID NO：27)，或其变体。
(US20150376607的SEQ ID NO：1)、AAV-LK01(US20150376607的SEQ ID NO：2)、AAV-LK02
(US20150376607的SEQ ID NO：3)、AAV-LK03(US20150376607的SEQ ID NO：4)、AAV-LK04
(US20150376607的SEQ ID NO：5)、AAV-LK05(US20150376607的SEQ ID NO：6)、AAV-LK06
(US20150376607的SEQ ID NO：7)、AAV-LK07(US20150376607的SEQ ID NO：8)、AAV-LK08
(US20150376607的SEQ ID NO：9)、AAV-LK09(US20150376607的SEQ ID NO：10)、AAV-LK10
(US20150376607的SEQ ID NO：11)、AAV-LK11(US20150376607的SEQ ID NO：12)、AAV-LK12
(US20150376607的SEQ ID NO：13)、AAV-LK13(US20150376607的SEQ ID NO：14)、AAV-LK14
(US20150376607的SEQ ID NO：15)、AAV-LK15(US20150376607的SEQ ID NO：16)、AAV-LK16
(US20150376607的SEQ ID NO：17)、AAV-LK17(US20150376607的SEQ ID NO：18)、AAV-LK18
(US20150376607的SEQ ID NO：19)、AAV-LK19(US20150376607的SEQ ID NO：20)、AAV-PAEC2
(US20150376607的SEQ ID NO：21)、AAV-PAEC4(US20150376607的SEQ ID NO：22)、AAV-
PAEC6(US20150376607的SEQ ID NO：23)、AAV-PAEC7(US20150376607的SEQ ID NO：24)、
AAV-PAEC8(US20150376607的SEQ ID NO：25)、AAV-PAEC11(US20150376607的SEQ ID NO：
26)、AAV-PAEC12(US20150376607的SEQ ID NO：27)，或其变体。
[0729] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国专利号US9163261(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV-2-pre-miRNA-101(SEQ
ID NO：1 US9163261)，或其变体。
ID NO：1 US9163261)，或其变体。
[0730] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国专利公开号US20150376240(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV-8h
(US20150376240的SEQ ID NO：6)、AAV-8b(US20150376240的SEQ ID NO：5)、AAV-h
(US20150376240的SEQ ID NO：2)、AAV-b(US20150376240的SEQ ID NO：1)，或其变体。
(US20150376240的SEQ ID NO：6)、AAV-8b(US20150376240的SEQ ID NO：5)、AAV-h
(US20150376240的SEQ ID NO：2)、AAV-b(US20150376240的SEQ ID NO：1)，或其变体。
[0731] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国专利公开号US20160017295(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV SM 10-2
(US20160017295的SEQ ID NO：22)、AAV Shuffle 100-1(US20160017295的SEQ ID NO：23)、
AAV Shuffle 100-3(US20160017295的SEQ ID NO：24)、AAV Shuffle 100-7
(US20160017295的SEQ ID NO：25)、AAV Shuffle 10-2(US20160017295的SEQ ID NO：34)、
AAV Shuffle 10-6(US20160017295的SEQ ID NO：35)、AAV Shuffle 10-8(US20160017295
的SEQ ID NO：36)、AAV Shuffle 100-2(US20160017295的SEQ ID NO：37)、AAV SM 10-1
(US20160017295的SEQ ID NO：38)、AAV SM 10-8(US20160017295的SEQ ID NO：39)、AAV SM
100-3(US20160017295的SEQ ID NO：40)、AAV SM 100-10(US20160017295的SEQ ID NO：
41)，或其变体。
(US20160017295的SEQ ID NO：22)、AAV Shuffle 100-1(US20160017295的SEQ ID NO：23)、
AAV Shuffle 100-3(US20160017295的SEQ ID NO：24)、AAV Shuffle 100-7
(US20160017295的SEQ ID NO：25)、AAV Shuffle 10-2(US20160017295的SEQ ID NO：34)、
AAV Shuffle 10-6(US20160017295的SEQ ID NO：35)、AAV Shuffle 10-8(US20160017295
的SEQ ID NO：36)、AAV Shuffle 100-2(US20160017295的SEQ ID NO：37)、AAV SM 10-1
(US20160017295的SEQ ID NO：38)、AAV SM 10-8(US20160017295的SEQ ID NO：39)、AAV SM
100-3(US20160017295的SEQ ID NO：40)、AAV SM 100-10(US20160017295的SEQ ID NO：
41)，或其变体。
[0732] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国专利公开号US20150238550(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于BNP61 AAV
(US20150238550的SEQ ID NO：1)、BNP62 AAV(US20150238550的SEQ ID NO：3)、BNP63 AAV
(US20150238550的SEQ ID NO：4)，或其变体。
(US20150238550的SEQ ID NO：1)、BNP62 AAV(US20150238550的SEQ ID NO：3)、BNP63 AAV
(US20150238550的SEQ ID NO：4)，或其变体。
[0733] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或可以具有如美国专利公开号US20150315612(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于
AAVrh.50(US20150315612的SEQ ID NO：108)、AAVrh.43(US20150315612的SEQ ID NO：
163)、AAVrh.62(US20150315612的SEQ ID NO：114)、AAVrh.48(US20150315612的SEQ ID
NO：115)、AAVhu.19(US20150315612的SEQ ID NO：133)、AAVhu.11(US20150315612的SEQ ID
NO：153)、AAVhu.53(US20150315612的SEQ ID NO：186)、AAV4-8/rh.64(US20150315612的
SEQ ID No：15)、AAVLG-9/hu.39(US20150315612的SEQ ID No：24)、AAV54.5/hu.23
(US20150315612的SEQ ID No：60)、AAV54.2/hu.22(US20150315612的SEQ ID No：67)、
AAV54.7/hu.24(US20150315612的SEQ ID No：66)、AAV54.1/hu.21(US20150315612的SEQ
ID No：65)、AAV54.4R/hu.27(US20150315612的SEQ ID No：64)、AAV46.2/hu.28
(US20150315612的SEQ ID No：68)、AAV46.6/hu.29(US20150315612的SEQ ID No：69)、
AAV128.1/hu.43(US20150315612的SEQ ID No：80)，或其变体。
AAVrh.50(US20150315612的SEQ ID NO：108)、AAVrh.43(US20150315612的SEQ ID NO：
163)、AAVrh.62(US20150315612的SEQ ID NO：114)、AAVrh.48(US20150315612的SEQ ID
NO：115)、AAVhu.19(US20150315612的SEQ ID NO：133)、AAVhu.11(US20150315612的SEQ ID
NO：153)、AAVhu.53(US20150315612的SEQ ID NO：186)、AAV4-8/rh.64(US20150315612的
SEQ ID No：15)、AAVLG-9/hu.39(US20150315612的SEQ ID No：24)、AAV54.5/hu.23
(US20150315612的SEQ ID No：60)、AAV54.2/hu.22(US20150315612的SEQ ID No：67)、
AAV54.7/hu.24(US20150315612的SEQ ID No：66)、AAV54.1/hu.21(US20150315612的SEQ
ID No：65)、AAV54.4R/hu.27(US20150315612的SEQ ID No：64)、AAV46.2/hu.28
(US20150315612的SEQ ID No：68)、AAV46.6/hu.29(US20150315612的SEQ ID No：69)、
AAV128.1/hu.43(US20150315612的SEQ ID No：80)，或其变体。
[0734] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如国际公开号WO2015121501(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于真型AAV(ttAAV)
(WO2015121501的SEQ ID NO：2)、“UPenn AAV10”(WO2015121501的SEQ ID NO：8)、“日本
AAV10”(WO2015121501的SEQ ID NO：9)，或其变体。
(WO2015121501的SEQ ID NO：2)、“UPenn AAV10”(WO2015121501的SEQ ID NO：8)、“日本
AAV10”(WO2015121501的SEQ ID NO：9)，或其变体。
[0735] 根据本发明，可以从多种物种进行AAV衣壳血清型的选择或使用。在一个实施方案中，AAV可以是禽AAV(AAAV)。AAAV血清型可以是或具有如美国专利号US 9238800(其内容通
过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAAV(US 9,238,800的SEQ ID
NO：1、2、4、6、8、10、12和14)，或其变体。
过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAAV(US 9,238,800的SEQ ID
NO：1、2、4、6、8、10、12和14)，或其变体。
[0736] 在一个实施方案中，AAV可以是牛AAV(BAAV)。BAAV血清型可以是或具有如美国专利号US 9,193,769(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于
BAAV(US 9193769的SEQ ID NO：1和6)，或其变体。BAAV血清型可以是或具有如美国专利号
US7427396(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于BAAV
(US7427396的SEQ ID NO：5和6)，或其变体。
BAAV(US 9193769的SEQ ID NO：1和6)，或其变体。BAAV血清型可以是或具有如美国专利号
US7427396(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于BAAV
(US7427396的SEQ ID NO：5和6)，或其变体。
[0737] 在一个实施方案中，AAV可以是山羊AAV。山羊AAV血清型可以是或具有如美国专利号US7427396(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于山羊
AAV(US7427396的SEQ ID NO：3)，或其变体。
AAV(US7427396的SEQ ID NO：3)，或其变体。
[0738] 在其他实施方案中，可以将AAV工程化为来自两种或更多种亲本血清型的杂合AAV。在一个实施方案中，AAV可以是AAV2G9，其包含来自AAV2和AAV9的序列。AAV2G9 AAV血
清型可以是或具有如美国专利公开号US20160017005中所述的序列，其内容通过引用的方
式以其整体并入本文。
清型可以是或具有如美国专利公开号US20160017005中所述的序列，其内容通过引用的方
式以其整体并入本文。
[0739] 在一个实施方案中，AAV可以是如Pulicherla等(Molecular Therapy 19(6)：1070-1078(2011)所述的具有氨基酸390-627(VP1编号)中的突变的AAV9衣壳文库产生的血
清型，该文献的内容通过引用的方式以其整体并入本文。血清型和相应的核苷酸和氨基酸
取代可以是但不限于AAV9.1(G1594C；D532H)、AAV6.2(T1418A和T1436X；V473D和I479K)、
AAV9.3(T1238A；F413Y)、AAV9.4(T1250C和A1617T；F417S)、AAV9.5(A1235G、A1314T、
A1642G、C1760T；Q412R、T548A、A587V)、AAV9.6(T1231A；F411I)、AAV9.9(G1203A、G1785T；
W595C)、AAV9.10(A1500G、T1676C；M559T)、AAV9.11(A1425T、A1702C、A1769T；T568P、
Q590L)、AAV9.13(A1369C、A1720T；N457H、T574S)、AAV9.14(T1340A、T1362C、T1560C、
G1713A；L447H)、AAV9.16(A1775T；Q592L)、AAV9.24(T1507C、T1521G；W503R)、AAV9.26
(A1337G、A1769C；Y446C、Q590P)、AAV9.33(A1667C；D556A)、AAV9.34(A1534G、C1794T；
N512D)、AAV9.35(A1289T、T1450A、C1494T、A1515T、C1794A、G1816A；Q430L、Y484N、N98K、
V606I)、AAV9.40(A1694T、E565V)、AAV9.41(A1348T、T1362C；T450S)、AAV9.44(A1684C、
A1701T、A1737G；N562H、K567N)、AAV9.45(A1492T、C1804T；N498Y、L602F)、AAV9.46(G1441C、
T1525C、T1549G；G481R、W509R、L517V)、9.47(G1241A、G1358A、A1669G、C1745T；S414N、
G453D、K557E、T582I)、AAV9.48(C1445T、A1736T；P482L、Q579L)、AAV9.50(A1638T、C1683T、
T1805A；Q546H、L602H)、AAV9.53(G1301A、A1405C、C1664T、G1811T；R134Q、S469R、A555V、
G604V)、AAV9.54(C1531A、T1609A；L511I、L537M)、AAV9.55(T1605A；F535L)、AAV9.58
(C1475T、C1579A；T492I、H527N)、AAV.59(T1336C；Y446H)、AAV9.61(A1493T；N498I)、
AAV9.64(C1531A、A1617T；L511I)、AAV9.65(C1335T、T1530C、C1568A；A523D)、AAV9.68
(C1510A；P504T)、AAV9.80(G1441A，；G481R)、AAV9.83(C1402A、A1500T；P468T、E500D)、
AAV9.87(T1464C、T1468C；S490P)、AAV9.90(A1196T；Y399F)、AAV9.91(T1316G、A1583T、
C1782G、T1806C；L439R、K528I)、AAV9.93(A1273G、A1421G、A1638C、C1712T、G1732A、A1744T、
A1832T；S425G、Q474R、Q546H、P571L、G578R、T582S、D611V)、AAV9.94(A1675T；M559L)和
AAV9.95(T1605A；F535L)。
清型，该文献的内容通过引用的方式以其整体并入本文。血清型和相应的核苷酸和氨基酸
取代可以是但不限于AAV9.1(G1594C；D532H)、AAV6.2(T1418A和T1436X；V473D和I479K)、
AAV9.3(T1238A；F413Y)、AAV9.4(T1250C和A1617T；F417S)、AAV9.5(A1235G、A1314T、
A1642G、C1760T；Q412R、T548A、A587V)、AAV9.6(T1231A；F411I)、AAV9.9(G1203A、G1785T；
W595C)、AAV9.10(A1500G、T1676C；M559T)、AAV9.11(A1425T、A1702C、A1769T；T568P、
Q590L)、AAV9.13(A1369C、A1720T；N457H、T574S)、AAV9.14(T1340A、T1362C、T1560C、
G1713A；L447H)、AAV9.16(A1775T；Q592L)、AAV9.24(T1507C、T1521G；W503R)、AAV9.26
(A1337G、A1769C；Y446C、Q590P)、AAV9.33(A1667C；D556A)、AAV9.34(A1534G、C1794T；
N512D)、AAV9.35(A1289T、T1450A、C1494T、A1515T、C1794A、G1816A；Q430L、Y484N、N98K、
V606I)、AAV9.40(A1694T、E565V)、AAV9.41(A1348T、T1362C；T450S)、AAV9.44(A1684C、
A1701T、A1737G；N562H、K567N)、AAV9.45(A1492T、C1804T；N498Y、L602F)、AAV9.46(G1441C、
T1525C、T1549G；G481R、W509R、L517V)、9.47(G1241A、G1358A、A1669G、C1745T；S414N、
G453D、K557E、T582I)、AAV9.48(C1445T、A1736T；P482L、Q579L)、AAV9.50(A1638T、C1683T、
T1805A；Q546H、L602H)、AAV9.53(G1301A、A1405C、C1664T、G1811T；R134Q、S469R、A555V、
G604V)、AAV9.54(C1531A、T1609A；L511I、L537M)、AAV9.55(T1605A；F535L)、AAV9.58
(C1475T、C1579A；T492I、H527N)、AAV.59(T1336C；Y446H)、AAV9.61(A1493T；N498I)、
AAV9.64(C1531A、A1617T；L511I)、AAV9.65(C1335T、T1530C、C1568A；A523D)、AAV9.68
(C1510A；P504T)、AAV9.80(G1441A，；G481R)、AAV9.83(C1402A、A1500T；P468T、E500D)、
AAV9.87(T1464C、T1468C；S490P)、AAV9.90(A1196T；Y399F)、AAV9.91(T1316G、A1583T、
C1782G、T1806C；L439R、K528I)、AAV9.93(A1273G、A1421G、A1638C、C1712T、G1732A、A1744T、
A1832T；S425G、Q474R、Q546H、P571L、G578R、T582S、D611V)、AAV9.94(A1675T；M559L)和
AAV9.95(T1605A；F535L)。
[0740] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如国际公开号WO2016049230(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAVF1/HSC1(WO2016049230
的SEQ ID NO：2和20)、AAVF2/HSC2(WO2016049230的SEQ ID NO：3和21)、AAVF3/HSC3
(WO2016049230的SEQ ID NO：5和22)、AAVF4/HSC4(WO2016049230的SEQ ID NO：6和23)、
AAVF5/HSC5(WO2016049230的SEQ ID NO：11和25)、AAVF6/HSC6(WO2016049230的SEQ ID
NO：7和24)、AAVF7/HSC7(WO2016049230的SEQ ID NO：8和27)、AAVF8/HSC8(WO2016049230的
SEQ ID NO：9和28)、AAVF9/HSC9(WO2016049230的SEQ ID NO：10和29)、AAVF11/HSC11
(WO2016049230的SEQ ID NO：4和26)、AAVF12/HSC12(WO2016049230的SEQ ID NO：12和30)、
AAVF13/HSC13(WO2016049230的SEQ ID NO：14和31)、AAVF14/HSC14(WO2016049230的SEQ
ID NO：15和32)、AAVF15/HSC15(WO2016049230的SEQ ID NO：16和33)、AAVF16/HSC16
(WO2016049230的SEQ ID NO：17和34)、AAVF17/HSC17(WO2016049230的SEQ ID NO：13和
35)，或其变体或衍生物。
的SEQ ID NO：2和20)、AAVF2/HSC2(WO2016049230的SEQ ID NO：3和21)、AAVF3/HSC3
(WO2016049230的SEQ ID NO：5和22)、AAVF4/HSC4(WO2016049230的SEQ ID NO：6和23)、
AAVF5/HSC5(WO2016049230的SEQ ID NO：11和25)、AAVF6/HSC6(WO2016049230的SEQ ID
NO：7和24)、AAVF7/HSC7(WO2016049230的SEQ ID NO：8和27)、AAVF8/HSC8(WO2016049230的
SEQ ID NO：9和28)、AAVF9/HSC9(WO2016049230的SEQ ID NO：10和29)、AAVF11/HSC11
(WO2016049230的SEQ ID NO：4和26)、AAVF12/HSC12(WO2016049230的SEQ ID NO：12和30)、
AAVF13/HSC13(WO2016049230的SEQ ID NO：14和31)、AAVF14/HSC14(WO2016049230的SEQ
ID NO：15和32)、AAVF15/HSC15(WO2016049230的SEQ ID NO：16和33)、AAVF16/HSC16
(WO2016049230的SEQ ID NO：17和34)、AAVF17/HSC17(WO2016049230的SEQ ID NO：13和
35)，或其变体或衍生物。
[0741] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如美国专利号US 8734809(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV CBr-E1(US8734809的SEQ
ID NO：13和87)、AAV CBr-E2(US8734809的SEQ ID NO：14和88)、AAV CBr-E3(US8734809的
SEQ ID NO：15和89)、AAV CBr-E4(US8734809的SEQ ID NO：16和90)、AAV CBr-E5
(US8734809的SEQ ID NO：17和91)、AAV CBr-e5(US8734809的SEQ ID NO：18和92)、AAV
CBr-E6(US8734809的SEQ ID NO：19和93)、AAV CBr-E7(US8734809的SEQ ID NO：20和94)、
AAV CBr-E8(US8734809的SEQ ID NO：21和95)、AAV CLv-D1(US8734809的SEQ ID NO：22和
96)、AAV CLv-D2(US8734809的SEQ ID NO：23和97)、AAV CLv-D3(US8734809的SEQ ID NO：
24和98)、AAV CLv-D4(US8734809的SEQ ID NO：25和99)、AAV CLv-D5(US8734809的SEQ ID
NO：26和100)、AAV CLv-D6(US8734809的SEQ ID NO：27和101)、AAV CLv-D7(US8734809的
SEQ ID NO：28和102)、AAV CLv-D8(US8734809的SEQ ID NO：29和103)、AAV CLV-E1
(US8734809的SEQ ID NO：13和87)、AAV CLV-R1(US8734809的SEQ ID NO：30和104)、AAV
CLv-R2(US8734809的SEQ ID NO：31和105)、AAV CLv-R3(US8734809的SEQ ID NO：32和
106)、AAV CLv-R4(US8734809的SEQ ID NO：33和107)、AAV CLv-R5(US8734809的SEQ ID
NO：34和108)、AAV CLv-R6(US8734809的SEQ ID NO：35和109)、AAV CLV-R7(US8734809的
SEQ ID NO：36和110)、AAV CLV-R8(US8734809的SEQ ID NO：37和111)、AAV CLv-R9
(US8734809的SEQ ID NO：38和112)、AAV CLg-F1(US8734809的SEQ ID NO：39和113)、AAV
CLg-F2(US8734809的SEQ ID NO：40和114)、AAV CLg-F3(US8734809的SEQ ID NO：41和
115)、AAV CLg-F4(US8734809的SEQ ID NO：42和116)、AAV CLg-F5(US8734809的SEQ ID
NO：43和117)、AAV CLg-F6(US8734809的SEQ ID NO：43和117)、AAV CLg-F7(US8734809的
SEQ ID NO：44和118)、AAV CLg-F8(US8734809的SEQ ID NO：43和117)、AAV CSp-1
(US8734809的SEQ ID NO：45和119)、AAV CSp-10(US8734809的SEQ ID NO：46和120)、AAV
CSp-11(US8734809的SEQ ID NO：47和121)、AAV CSp-2(US8734809的SEQ ID NO：48和122)、
AAV CSp-3(US8734809的SEQ ID NO：49和123)、AAV CSp-4(US8734809的SEQ ID NO：50和
124)、AAV CSp-6(US8734809的SEQ ID NO：51和125)、AAV CSp-7(US8734809的SEQ ID NO：
52和126)、AAV CSp-8(US8734809的SEQ ID NO：53和127)、AAV CSp-9(US8734809的SEQ ID
NO：54和128)、AAV CHt-2(US8734809的SEQ ID NO：55和129)、AAV CHt-3(US8734809的SEQ
ID NO：56和130)、AAV CKd-1(US8734809的SEQ ID NO：57和131)、AAV CKd-10(US8734809的
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124)、AAV CSp-6(US8734809的SEQ ID NO：51和125)、AAV CSp-7(US8734809的SEQ ID NO：
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CKd-6(US8734809的SEQ ID NO：62和136)、AAV CKd-7(US8734809的SEQ ID NO：63和137)、
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139)、AAV CLv-12(US8734809的SEQ ID NO：66和140)、AAV CLv-13(US8734809的SEQ ID
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150)、AAV CKd-B5(US8734809的SEQ ID NO：77和151)、AAV CKd-B6(US8734809的SEQ ID
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159)、AAV CKd-H6(US8734809的SEQ ID NO：77和151)、AAV CHt-1(US8734809的SEQ ID NO：
86和160)、AAV CLv1-1(US8734809的SEQ ID NO：171)、AAV CLV1-2(US8734809的SEQ ID
NO：172)、AAV CLv1-3(US8734809的SEQ ID NO：173)、AAV CLv1-4(US8734809的SEQ ID NO：
174)、AAV Clv1-7(US8734809的SEQ ID NO：175)、AAV Clv1-8(US8734809的SEQ ID NO：
176)、AAV Clv1-9(US8734809的SEQ ID NO：177)、AAV Clv1-10(US8734809的SEQ ID NO：
178)、AAV.VR-355(US8734809的SEQ ID NO：181)、AAV.hu.48R3(US8734809的SEQ ID NO：
183)，或其变体或衍生物。
[0742] 在一些实施方案中，AAV血清型可以是或具有如国际公开号WO2016065001(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV CHt-P2(WO2016065001
的SEQ ID NO：1和51)、AAV CHt-P5(WO2016065001的SEQ ID NO：2和52)、AAV CHt-P9
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61)、AAV CKd-N3(WO2016065001的SEQ ID NO：12和62)、AAV CKd-N4(WO2016065001的SEQ
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(WO2016065001的SEQ ID NO：29和79)、AAV CHt-P6(WO2016065001的SEQ ID NO：30和80)、
AAV CHt-P8(WO2016065001的SEQ ID NO：31和81)、AAV CHt-6.1(WO2016065001的SEQ ID
NO：32和82)、AAV CHt-6.10(WO2016065001的SEQ ID NO：33和83)、AAV CHt-6.5
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NO：37和87)、AAV CSp-8.10(WO2016065001的SEQ ID NO：38和88)、AAV CSp-8.2
(WO2016065001的SEQ ID NO：39和89)、AAV CSp-8.4(WO2016065001的SEQ ID NO：40和90)、
AAV CSp-8.5(WO2016065001的SEQ ID NO：41和91)、AAV CSp-8.6(WO2016065001的SEQ ID
NO：42和92)、AAV CSp-8.7(WO2016065001的SEQ ID NO：43和93)、AAV CSp-8.8
(WO2016065001的SEQ ID NO：44和94)、AAV CSp-8.9(WO2016065001的SEQ ID NO：45和95)、
AAV CBr-B7.3(WO2016065001的SEQ ID NO：46和96)、AAV CBr-B7.4(WO2016065001的SEQ
ID NO：47和97)、AAV3B(WO2016065001的SEQ ID NO：48和98)、AAV4(WO2016065001的SEQ ID
NO：49和99)、AAV5(WO2016065001的SEQ ID NO：50和100)，或其变体或衍生物。
的SEQ ID NO：1和51)、AAV CHt-P5(WO2016065001的SEQ ID NO：2和52)、AAV CHt-P9
(WO2016065001的SEQ ID NO：3和53)、AAV CBr-7.1(WO2016065001的SEQ ID NO：4和54)、
AAV CBr-7.2(WO2016065001的SEQ ID NO：5和55)、AAV CBr-7.3(WO2016065001的SEQ ID
NO：6和56)、AAV CBr-7.4(WO2016065001的SEQ ID NO：7和57)、AAV CBr-7.5(WO2016065001
的SEQ ID NO：8和58)、AAV CBr-7.7(WO2016065001的SEQ ID NO：9和59)、AAV CBr-7.8
(WO2016065001的SEQ ID NO：10和60)、AAV CBr-7.10(WO2016065001的SEQ ID NO：11和
61)、AAV CKd-N3(WO2016065001的SEQ ID NO：12和62)、AAV CKd-N4(WO2016065001的SEQ
ID NO：13和63)、AAV CKd-N9(WO2016065001的SEQ ID NO：14和64)、AAV CLv-L4
(WO2016065001的SEQ ID NO：15和65)、AAV CLv-L5(WO2016065001的SEQ ID NO：16和66)、
AAV CLv-L6(WO2016065001的SEQ ID NO：17和67)、AAV CLv-K1(WO2016065001的SEQ ID
NO：18和68)、AAV CLv-K3(WO2016065001的SEQ ID NO：19和69)、AAV CLv-K6(WO2016065001
的SEQ ID NO：20和70)、AAV CLv-M1(WO2016065001的SEQ ID NO：21和71)、AAV CLv-M11
(WO2016065001的SEQ ID NO：22和72)、AAV CLv-M2(WO2016065001的SEQ ID NO：23和73)、
AAV CLv-M5(WO2016065001的SEQ ID NO：24和74)、AAV CLv-M6(WO2016065001的SEQ ID
NO：25和75)、AAV CLv-M7(WO2016065001的SEQ ID NO：26和76)、AAV CLv-M8(WO2016065001
的SEQ ID NO：27和77)、AAV CLv-M9(WO2016065001的SEQ ID NO：28和78)、AAV CHt-P1
(WO2016065001的SEQ ID NO：29和79)、AAV CHt-P6(WO2016065001的SEQ ID NO：30和80)、
AAV CHt-P8(WO2016065001的SEQ ID NO：31和81)、AAV CHt-6.1(WO2016065001的SEQ ID
NO：32和82)、AAV CHt-6.10(WO2016065001的SEQ ID NO：33和83)、AAV CHt-6.5
(WO2016065001的SEQ ID NO：34和84)、AAV CHt-6.6(WO2016065001的SEQ ID NO：35和85)、
AAV CHt-6.7(WO2016065001的SEQ ID NO：36和86)、AAV CHt-6.8(WO2016065001的SEQ ID
NO：37和87)、AAV CSp-8.10(WO2016065001的SEQ ID NO：38和88)、AAV CSp-8.2
(WO2016065001的SEQ ID NO：39和89)、AAV CSp-8.4(WO2016065001的SEQ ID NO：40和90)、
AAV CSp-8.5(WO2016065001的SEQ ID NO：41和91)、AAV CSp-8.6(WO2016065001的SEQ ID
NO：42和92)、AAV CSp-8.7(WO2016065001的SEQ ID NO：43和93)、AAV CSp-8.8
(WO2016065001的SEQ ID NO：44和94)、AAV CSp-8.9(WO2016065001的SEQ ID NO：45和95)、
AAV CBr-B7.3(WO2016065001的SEQ ID NO：46和96)、AAV CBr-B7.4(WO2016065001的SEQ
ID NO：47和97)、AAV3B(WO2016065001的SEQ ID NO：48和98)、AAV4(WO2016065001的SEQ ID
NO：49和99)、AAV5(WO2016065001的SEQ ID NO：50和100)，或其变体或衍生物。
[0743] 在一个实施方案中，AAV可以是包含至少一个AAV衣壳CD8+ T细胞表位的血清型。作为一个非限制性实例，血清型可以是AAV1、AAV2或AAV8。
[0744] 在一个实施方案中，AAV可以是选自表4中的任何一种的血清型。
[0745] 在一个实施方案中，AAV可以包含表4中的序列的序列、片段或其变体。
[0746] 在一个实施方案中，AAV可以由如表4中所述的序列、片段或变体编码。
[0747] 表4.AAV血清型
[0748]
[0749]
[0750]
[0751]
[0752]
[0753]
[0754]
[0755]
[0756]
[0757]
[0758]
[0759]
[0760]
[0761]
[0762]
[0763]
[0764]
[0765]
[0766]
[0767]
[0768]
[0769]
[0770]
[0771]
[0772]
[0773]
[0774]
[0775]
[0776]
[0777]
[0778]
[0779]
[0780]
[0781]
[0782]
[0783] 表4中列出的每个专利、申请和/或出版物均通过引用的方式以其整体并入本文。
[0784] 在一个实施方案中，AAV血清型可以是或可以具有如国际专利公开WO2015038958(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中所述的序列，如但不限于AAV9
(WO2015038958的SEQ ID NO：2和11，或本文中分别为SEQ ID NO：153和154)、PHP.B
(WO2015038958的SEQ ID NO：8和9，本文中的SEQ ID NO：895和896)、G2B-13(WO2015038958
的SEQ ID NO：12，本文中的SEQ ID NO：897)、G2B-26(WO2015038958的SEQ ID NO：13，本文
中的SEQ ID NO：895和896)、TH1.1-32(WO2015038958的SEQ ID NO：14，本文中的SEQ ID
NO：898)、TH1.1-35(WO2015038958的SEQ ID NO：15，本文中的SEQ ID NO：899)，或其变体。
此外，WO2015038958中所述的任何靶向肽或氨基酸插入物可以插入到任何亲本AAV血清型，
如但不限于AAV9(对于DNA序列为SEQ ID NO：153，并且对于氨基酸序列为SEQ ID NO：154)。
在一个实施方案中，将氨基酸插入物插入亲本AAV(例如AAV9)的氨基酸586-592之间。在另
一个实施方案中，将氨基酸插入物插入亲本AAV序列的氨基酸588-589之间。氨基酸插入物
可以是但不限于，以下任何氨基酸序列：TLAVPFK(WO2015038958的SEQ ID NO：1；本文中的
SEQ ID NO：900)、KFPVALT(WO2015038958的SEQ ID NO：3；本文中的SEQ ID NO：901)、
LAVPFK(WO2015038958的SEQ ID NO：31；本文中的SEQ ID NO：902)、AVPFK(WO2015038958的
SEQ ID NO：32；本文中的SEQ ID NO：903)、VPFK(WO2015038958的SEQ ID NO：33；本文中的
SEQ ID NO：904)、TLAVPF(WO2015038958的SEQ ID NO：34；本文中的SEQ ID NO：905)、TLAVP
(WO2015038958的SEQ ID NO：35；本文中的SEQ ID NO：906)、TLAV(WO2015038958的SEQ ID
NO：36；本文中的SEQ ID NO：907)、SVSKPFL(WO2015038958的SEQ ID NO：28；本文中的SEQ
ID NO：908)、FTLTTPK(WO2015038958的SEQ ID NO：29；本文中的SEQ ID NO：909)、MNATKNV
(WO2015038958的SEQ ID NO：30；本文中的SEQ ID NO：910)、QSSQTPR(WO2015038958的SEQ
ID NO：54；本文中的SEQ ID NO：911)、ILGTGTS(WO2015038958的SEQ ID NO：55；本文中的
SEQ ID NO：912)、TRTNPEA(WO2015038958的SEQ ID NO：56；本文中的SEQ ID NO：913)、
NGGTSSS(WO2015038958的SEQ ID NO：58；本文中的SEQ ID NO：914)或YTLSQGW
(WO2015038958的SEQ ID NO：60；本文中的SEQ ID NO：915)。可以编码氨基酸插入物的核苷
酸序列的非限制性实例包括以下：AAGTTTCCTGTGGCGTTGACT(WO2015038958的SEQ ID NO：3；
本文中的SEQ ID NO：916)、ACTTTGGCGGTGCCTTTTAAG(WO2015038958的SEQ ID NO：24和49；
本文中的SEQ ID NO：917)、AGTGTGAGTAAGCCTTTTTTG(WO2015038958的SEQ ID NO：25；本文
中的SEQ ID NO：918)、TTTACGTTGACGACGCCTAAG(WO2015038958的SEQ ID NO：26；本文中的
SEQ ID NO：919)、ATGAATGCTACGAAGAATGTG(WO2015038958的SEQ ID NO：27；本文中的SEQ
ID NO：920)、CAGTCGTCGCAGACGCCTAGG(WO2015038958的SEQ ID NO：48；本文中的SEQ ID
NO：921)、ATTCTGGGGACTGGTACTTCG(WO2015038958的SEQ ID NO：50和52；本文中的SEQ ID
NO：922)、ACGCGGACTAATCCTGAGGCT(WO2015038958的SEQ ID NO：51；本文中的SEQ ID NO：
923)、AATGGGGGGACTAGTAGTTCT(WO2015038958的SEQ ID NO：53；本文中的SEQ ID NO：924)、
或TATACTTTGTCGCAGGGTTGG(WO2015038958的SEQ ID NO：59；本文中的SEQ ID NO：925)。
(WO2015038958的SEQ ID NO：2和11，或本文中分别为SEQ ID NO：153和154)、PHP.B
(WO2015038958的SEQ ID NO：8和9，本文中的SEQ ID NO：895和896)、G2B-13(WO2015038958
的SEQ ID NO：12，本文中的SEQ ID NO：897)、G2B-26(WO2015038958的SEQ ID NO：13，本文
中的SEQ ID NO：895和896)、TH1.1-32(WO2015038958的SEQ ID NO：14，本文中的SEQ ID
NO：898)、TH1.1-35(WO2015038958的SEQ ID NO：15，本文中的SEQ ID NO：899)，或其变体。
此外，WO2015038958中所述的任何靶向肽或氨基酸插入物可以插入到任何亲本AAV血清型，
如但不限于AAV9(对于DNA序列为SEQ ID NO：153，并且对于氨基酸序列为SEQ ID NO：154)。
在一个实施方案中，将氨基酸插入物插入亲本AAV(例如AAV9)的氨基酸586-592之间。在另
一个实施方案中，将氨基酸插入物插入亲本AAV序列的氨基酸588-589之间。氨基酸插入物
可以是但不限于，以下任何氨基酸序列：TLAVPFK(WO2015038958的SEQ ID NO：1；本文中的
SEQ ID NO：900)、KFPVALT(WO2015038958的SEQ ID NO：3；本文中的SEQ ID NO：901)、
LAVPFK(WO2015038958的SEQ ID NO：31；本文中的SEQ ID NO：902)、AVPFK(WO2015038958的
SEQ ID NO：32；本文中的SEQ ID NO：903)、VPFK(WO2015038958的SEQ ID NO：33；本文中的
SEQ ID NO：904)、TLAVPF(WO2015038958的SEQ ID NO：34；本文中的SEQ ID NO：905)、TLAVP
(WO2015038958的SEQ ID NO：35；本文中的SEQ ID NO：906)、TLAV(WO2015038958的SEQ ID
NO：36；本文中的SEQ ID NO：907)、SVSKPFL(WO2015038958的SEQ ID NO：28；本文中的SEQ
ID NO：908)、FTLTTPK(WO2015038958的SEQ ID NO：29；本文中的SEQ ID NO：909)、MNATKNV
(WO2015038958的SEQ ID NO：30；本文中的SEQ ID NO：910)、QSSQTPR(WO2015038958的SEQ
ID NO：54；本文中的SEQ ID NO：911)、ILGTGTS(WO2015038958的SEQ ID NO：55；本文中的
SEQ ID NO：912)、TRTNPEA(WO2015038958的SEQ ID NO：56；本文中的SEQ ID NO：913)、
NGGTSSS(WO2015038958的SEQ ID NO：58；本文中的SEQ ID NO：914)或YTLSQGW
(WO2015038958的SEQ ID NO：60；本文中的SEQ ID NO：915)。可以编码氨基酸插入物的核苷
酸序列的非限制性实例包括以下：AAGTTTCCTGTGGCGTTGACT(WO2015038958的SEQ ID NO：3；
本文中的SEQ ID NO：916)、ACTTTGGCGGTGCCTTTTAAG(WO2015038958的SEQ ID NO：24和49；
本文中的SEQ ID NO：917)、AGTGTGAGTAAGCCTTTTTTG(WO2015038958的SEQ ID NO：25；本文
中的SEQ ID NO：918)、TTTACGTTGACGACGCCTAAG(WO2015038958的SEQ ID NO：26；本文中的
SEQ ID NO：919)、ATGAATGCTACGAAGAATGTG(WO2015038958的SEQ ID NO：27；本文中的SEQ
ID NO：920)、CAGTCGTCGCAGACGCCTAGG(WO2015038958的SEQ ID NO：48；本文中的SEQ ID
NO：921)、ATTCTGGGGACTGGTACTTCG(WO2015038958的SEQ ID NO：50和52；本文中的SEQ ID
NO：922)、ACGCGGACTAATCCTGAGGCT(WO2015038958的SEQ ID NO：51；本文中的SEQ ID NO：
923)、AATGGGGGGACTAGTAGTTCT(WO2015038958的SEQ ID NO：53；本文中的SEQ ID NO：924)、
或TATACTTTGTCGCAGGGTTGG(WO2015038958的SEQ ID NO：59；本文中的SEQ ID NO：925)。
[0785] 在一个实施方案中，可以将AAV血清型工程化为包含至少一个AAV衣壳CD8+ T细胞表位。Hui等(Molecular Therapy-Methods&Clinical Development(2015)2，15029 doi：
10.1038/mtm.2015.29；其内容通过引用的方式以其整体并入本文)鉴定出了AAV1和AAV2的
AAV衣壳特异性CD8+ T细胞表位(参见例如该出版物中的表2)。作为一个非限制性实例，衣
壳特异性CD8+ T细胞表位可以是用于AAV2血清型。作为一个非限制性实例，衣壳特异性CD8
+ T细胞表位可以是用于AAV1血清型。
10.1038/mtm.2015.29；其内容通过引用的方式以其整体并入本文)鉴定出了AAV1和AAV2的
AAV衣壳特异性CD8+ T细胞表位(参见例如该出版物中的表2)。作为一个非限制性实例，衣
壳特异性CD8+ T细胞表位可以是用于AAV2血清型。作为一个非限制性实例，衣壳特异性CD8
+ T细胞表位可以是用于AAV1血清型。
[0786] 在一个实施方案中，可以将AAV血清型工程化为包含用于AAV2的至少一个AAV衣壳CD8+ T细胞表位，如但不限于SADNNNSEY(SEQ ID NO：926)、LIDQYLYYL(SEQ ID NO：927)、
VPQYGYLTL(SEQ ID NO：928)、TTSTRTWAL(SEQ ID NO：929)、YHLNGRDSL(SEQ ID NO：930)、
SQAVGRSSF(SEQ ID NO：931)、VPANPSTTF(SEQ ID NO：932)、FPQSGVLIF(SEQ ID NO：933)、
YFDFNRFHCHFSPRD(SEQ ID NO：934)、VGNSSGNWHCDSTWM(SEQ ID NO：935)、QFSQAGASDIRDQSR
(SEQ ID NO：936)、GASDIRQSRNWLP(SEQ ID NO：937)和GNRQAATADVNTQGV(SEQ ID NO：938)。
VPQYGYLTL(SEQ ID NO：928)、TTSTRTWAL(SEQ ID NO：929)、YHLNGRDSL(SEQ ID NO：930)、
SQAVGRSSF(SEQ ID NO：931)、VPANPSTTF(SEQ ID NO：932)、FPQSGVLIF(SEQ ID NO：933)、
YFDFNRFHCHFSPRD(SEQ ID NO：934)、VGNSSGNWHCDSTWM(SEQ ID NO：935)、QFSQAGASDIRDQSR
(SEQ ID NO：936)、GASDIRQSRNWLP(SEQ ID NO：937)和GNRQAATADVNTQGV(SEQ ID NO：938)。
[0787] 在一个实施方案中，可以将AAV血清型工程化以包含用于AAV1的至少一个AAV衣壳CD8+ T细胞表位，如但不限于LDRLMNPLI(SEQ ID NO：939)、TTSTRTWAL(SEQ ID NO：929)和
QPAKKRLNF(SEQ ID NO：940))。
QPAKKRLNF(SEQ ID NO：940))。
[0788] 在一个实施方案中，可以使用Hui等(Molecular Therapy-Methods&Clinical Development(2015)2，15029 doi：10.1038/mtm.2015.29；其内容通过引用的方式以其整体
并入本文)描述的方法鉴定包含在AAV血清型中的肽。作为一个非限制性实例，该方法包括
分离人脾细胞，使用跨越AAV衣壳蛋白的氨基酸序列的个体肽体外再刺激脾细胞，采用用于
体外再刺激的个体肽进行IFN-γELISpot，生物信息学分析以确定由IFN-γELISpot鉴定的
15聚体的HLA限制性，鉴定给定HLA等位基因的候选反应性9聚体表位，合成候选物9聚体，对
来自携带预测与鉴定的AAV表位结合的HLA等位基因的受试者的脾细胞进行第二次IFN-γ
ELISpot筛选，确定AAV衣壳反应性CD8+ T细胞表位，并确定受试者对给定AAV表位反应的频
率。
并入本文)描述的方法鉴定包含在AAV血清型中的肽。作为一个非限制性实例，该方法包括
分离人脾细胞，使用跨越AAV衣壳蛋白的氨基酸序列的个体肽体外再刺激脾细胞，采用用于
体外再刺激的个体肽进行IFN-γELISpot，生物信息学分析以确定由IFN-γELISpot鉴定的
15聚体的HLA限制性，鉴定给定HLA等位基因的候选反应性9聚体表位，合成候选物9聚体，对
来自携带预测与鉴定的AAV表位结合的HLA等位基因的受试者的脾细胞进行第二次IFN-γ
ELISpot筛选，确定AAV衣壳反应性CD8+ T细胞表位，并确定受试者对给定AAV表位反应的频
率。
[0789] 在一个实施方案中，AAV可以是由如Deverman等(Nature Biotechnology 34(2)：204-209(2016))描述的基于Cre重组的AAV靶向进化(CREATE)产生的血清型，该文献的内容
通过引用的方式以其整体并入本文。在一个实施方案中，与其他AAV血清型相比，以这种方
式产生的AAV血清型具有改善的CNS转导和/或神经元和星形胶质细胞向性。作为非限制性
实例，AAV血清型可以是PHP.B、PHP.B2、PHP.B3、PHP.A、G2A12、G2A15。在一个实施方案中，这
些AAV血清型可以是AAV9(SEQ ID NO：153和154)衍生物，其在氨基酸588-589之间具有7氨
基酸插入物。这些7氨基酸插入物的非限制性实例包括TLAVPFK(SEQ ID NO：900)、SVSKPFL
(SEQ ID NO：908)、FTLTTPK(SEQ ID NO：909)、YTLSQGW(SEQ ID NO：915)、QAVRTSL(SEQ ID
NO：941)和/或LAKERLS(SEQ ID NO：942)。
通过引用的方式以其整体并入本文。在一个实施方案中，与其他AAV血清型相比，以这种方
式产生的AAV血清型具有改善的CNS转导和/或神经元和星形胶质细胞向性。作为非限制性
实例，AAV血清型可以是PHP.B、PHP.B2、PHP.B3、PHP.A、G2A12、G2A15。在一个实施方案中，这
些AAV血清型可以是AAV9(SEQ ID NO：153和154)衍生物，其在氨基酸588-589之间具有7氨
基酸插入物。这些7氨基酸插入物的非限制性实例包括TLAVPFK(SEQ ID NO：900)、SVSKPFL
(SEQ ID NO：908)、FTLTTPK(SEQ ID NO：909)、YTLSQGW(SEQ ID NO：915)、QAVRTSL(SEQ ID
NO：941)和/或LAKERLS(SEQ ID NO：942)。
[0790] 在一个实施方案中，AAV血清型可以是如Jackson等(Frontiers in Molecular Neuroscience 9：154(2016))中所述，其内容通过引用的方式以其整体并入本文。在一些实
施方案中，AAV血清型是PHP.B或AAV9。在一些实施方案中，与使用更普遍存在的启动子(即
CBA或CMV)时相比，AAV血清型与突触蛋白启动子配对以增强神经元转导。
施方案中，AAV血清型是PHP.B或AAV9。在一些实施方案中，与使用更普遍存在的启动子(即
CBA或CMV)时相比，AAV血清型与突触蛋白启动子配对以增强神经元转导。
[0791] 在一个实施方案中，包含在AAV血清型中的肽可以通过以下步骤来鉴定：分离人脾细胞，使用跨越AAV衣壳蛋白的氨基酸序列的个体肽体外再刺激脾细胞，采用用于体外再刺
激的个体肽进行IFN-γELISpot，生物信息学分析以确定由IFN-γELISpot鉴定的15聚体的
给定等位基因的限制，鉴定给定等位基因的候选反应性9聚体表位，合成候选物9聚体，对来
自携带预测与鉴定的AAV表位结合的特定等位基因的受试者的脾细胞进行第二次IFN-γ
ELISpot筛选，确定AAV衣壳反应性CD8+ T细胞表位，并确定受试者对给定AAV表位反应的频
率。
激的个体肽进行IFN-γELISpot，生物信息学分析以确定由IFN-γELISpot鉴定的15聚体的
给定等位基因的限制，鉴定给定等位基因的候选反应性9聚体表位，合成候选物9聚体，对来
自携带预测与鉴定的AAV表位结合的特定等位基因的受试者的脾细胞进行第二次IFN-γ
ELISpot筛选，确定AAV衣壳反应性CD8+ T细胞表位，并确定受试者对给定AAV表位反应的频
率。
[0792] 包含siRNA分子的核酸序列的AAV载体可以由AAV的各种血清型制备或衍生，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV9.47、AAV9(hu14)、
AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAV-DJ8、AAV-DJ、AAV-PHP.A和/或AAV-PHP.B。在一
些情况下，不同血清型的AAV可以混合在一起或者与其他类型的病毒混合以产生嵌合AAV载
体。作为一个非限制性实例，AAV载体衍生自AAV9血清型。
AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAV-DJ8、AAV-DJ、AAV-PHP.A和/或AAV-PHP.B。在一
些情况下，不同血清型的AAV可以混合在一起或者与其他类型的病毒混合以产生嵌合AAV载
体。作为一个非限制性实例，AAV载体衍生自AAV9血清型。
[0793] 病毒基因组组分：反向末端重复(ITR)
[0794] 本发明的AAV颗粒包含具有至少一个ITR区和有效负载区的病毒基因组。在一个实施方案中，病毒基因组具有两个ITR。这两个ITR在5’和3’端侧接有效负载区。ITR用作包含
复制的识别位点的复制起点。ITR包含可以互补和对称排列的序列区。掺入本发明的病毒基
因组中的ITR可以包含天然存在的多核苷酸序列或重组衍生的多核苷酸序列。
复制的识别位点的复制起点。ITR包含可以互补和对称排列的序列区。掺入本发明的病毒基
因组中的ITR可以包含天然存在的多核苷酸序列或重组衍生的多核苷酸序列。
[0795] ITR可以衍生自与衣壳相同的血清型，选自表6中列出的任何血清型或其衍生物。ITR可以是与衣壳不同的血清型。在一个实施方案中，AAV颗粒具有多于一个ITR。在一个非
限制性实例中，AAV颗粒具有包含两个ITR的病毒基因组。在一个实施方案中，ITR具有彼此
相同的血清型。在另一个实施方案中，ITR具有不同的血清型。非限制性实例包括具有与衣
壳相同血清型的0个、1个或2个ITR。在一个实施方案中，AAV颗粒的病毒基因组的两个ITR都
是AAV2 ITR。
限制性实例中，AAV颗粒具有包含两个ITR的病毒基因组。在一个实施方案中，ITR具有彼此
相同的血清型。在另一个实施方案中，ITR具有不同的血清型。非限制性实例包括具有与衣
壳相同血清型的0个、1个或2个ITR。在一个实施方案中，AAV颗粒的病毒基因组的两个ITR都
是AAV2 ITR。
[0796] 独立地，每个ITR的长度可以为约100至约150个核苷酸。ITR的长度可以为约100-105个核苷酸、106-110个核苷酸、111-115个核苷酸、116-120个核苷酸、121-125个核苷酸、
126-130个核苷酸、131-135核苷酸、136-140个核苷酸、141-145个核苷酸或146-150个核苷
酸。在一个实施方案中，ITR的长度为140-142个核苷酸。ITR长度的非限制性实例是长度为
102、140、141、142、145个核苷酸，以及与其具有至少95％同一性的那些。
126-130个核苷酸、131-135核苷酸、136-140个核苷酸、141-145个核苷酸或146-150个核苷
酸。在一个实施方案中，ITR的长度为140-142个核苷酸。ITR长度的非限制性实例是长度为
102、140、141、142、145个核苷酸，以及与其具有至少95％同一性的那些。
[0797] 在一个实施方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中flip ITR的5’端附近。在另一个实施方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中flip ITR的3’端附近。在又一
个实施方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中flop ITR的5’端附近。在又一个实施
方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中flop ITR的3’端附近。在一个实施方案中，
编码的siRNA分子可以位于表达载体中flip ITR的5’端和flop ITR的3’端之间。在一个实
施方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中flip ITR的3’端和flip ITR的5’端之间
(例如，flip ITR的5’端和flop ITR的3’端或flop ITR的3’端和flip ITR的5’端之间的半
路上)。作为一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或
Flop ITR)的5’或3’端下游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、
21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为一个非限制性实例，编码的
siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上游的1、2、3、4、5、
6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于
30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例
如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-
20、5-25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核
苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，Flip
或Flop ITR)的5’或3’端上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、
5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30内。作为一个
非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或
3’端上游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％
的核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，
Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-
15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
个实施方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中flop ITR的5’端附近。在又一个实施
方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中flop ITR的3’端附近。在一个实施方案中，
编码的siRNA分子可以位于表达载体中flip ITR的5’端和flop ITR的3’端之间。在一个实
施方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中flip ITR的3’端和flip ITR的5’端之间
(例如，flip ITR的5’端和flop ITR的3’端或flop ITR的3’端和flip ITR的5’端之间的半
路上)。作为一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或
Flop ITR)的5’或3’端下游的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、
21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为一个非限制性实例，编码的
siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端上游的1、2、3、4、5、
6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于
30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例
如，Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-
20、5-25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核
苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，Flip
或Flop ITR)的5’或3’端上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、
5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30内。作为一个
非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，Flip或Flop ITR)的5’或
3’端上游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％
的核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中ITR(例如，
Flip或Flop ITR)的5’或3’端下游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-
15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
[0798] 病毒基因组组分：启动子
[0799] 本领域技术人员可以认识到靶细胞可能需要特定的启动子，包括但不限于物种特异性、诱导型、组织特异性或细胞周期特异性的启动子(Parr et al.，Nat.Med.3：1145-9
(1997)；其内容通过引用的方式以其整体并入本文中)。
(1997)；其内容通过引用的方式以其整体并入本文中)。
[0800] 在一个实施方案中，启动子是被认为有效驱动调节性多核苷酸表达的启动子。
[0801] 在一个实施方案中，启动子是对被靶向的细胞具有向性的启动子。
[0802] 在一个实施方案中，启动子是弱启动子，其在靶向的组织(如但不限于神经系统组织)中提供有效负载(例如，调节性多核苷酸，例如，siRNA或dsRNA)的表达持续一段时间。表
达可以持续以下时间段：1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10
小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21
小时、22小时、23小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2周、15天、16天、17天、18天、19天、20天、3周、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、
30天、31天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个
月、1年、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、
23个月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年或多于10年。表达可以持续1-5小时、1-
12小时、1-2天、1-5天、1-2周、1-3周、1-4周、1-2个月、1-4个月、1-6个月、2-6个月、3-6个月、
3-9个月、4-8个月、6-12个月、1-2年、1-5年、2-5年、3-6年、3-8年、4-8年或5-10年。作为一个
非限制性实例，启动子是用于在神经组织中持续表达有效负载的弱启动子。
达可以持续以下时间段：1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10
小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21
小时、22小时、23小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2周、15天、16天、17天、18天、19天、20天、3周、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、
30天、31天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个
月、1年、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、
23个月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年或多于10年。表达可以持续1-5小时、1-
12小时、1-2天、1-5天、1-2周、1-3周、1-4周、1-2个月、1-4个月、1-6个月、2-6个月、3-6个月、
3-9个月、4-8个月、6-12个月、1-2年、1-5年、2-5年、3-6年、3-8年、4-8年或5-10年。作为一个
非限制性实例，启动子是用于在神经组织中持续表达有效负载的弱启动子。
[0803] 在一个实施方案中，启动子可以是小于1kb的启动子。启动子的长度可以为200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、
400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、
590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、
780、790、800或多于800。启动子的长度可以在200-300、200-400、200-500、200-600、200-
700、200-800、300-400、300-500、300-600、300-700、300-800、400-500、400-600、400-700、
400-800、500-600、500-700、500-800、600-700、600-800或700-800之间。
400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、
590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、
780、790、800或多于800。启动子的长度可以在200-300、200-400、200-500、200-600、200-
700、200-800、300-400、300-500、300-600、300-700、300-800、400-500、400-600、400-700、
400-800、500-600、500-700、500-800、600-700、600-800或700-800之间。
[0804] 在一个实施方案中，启动子可以是两种或更多种组分的组合，如但不限于CMV和CBA。每种组分的长度可以为200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、
330、340、350、360、370、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、400、410、420、
430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、
620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800或多于800。每种组分的长度可以在200-300、200-400、200-500、200-600、200-700、200-800、
300-400、300-500、300-600、300-700、300-800、400-500、400-600、400-700、400-800、500-
600、500-700、500-800、600-700、600-800或700-800之间。作为一个非限制性实例，启动子
是382个核苷酸的CMV-增强子序列和260个核苷酸的CBA-启动子序列的组合。
330、340、350、360、370、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、400、410、420、
430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、
620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800或多于800。每种组分的长度可以在200-300、200-400、200-500、200-600、200-700、200-800、
300-400、300-500、300-600、300-700、300-800、400-500、400-600、400-700、400-800、500-
600、500-700、500-800、600-700、600-800或700-800之间。作为一个非限制性实例，启动子
是382个核苷酸的CMV-增强子序列和260个核苷酸的CBA-启动子序列的组合。
[0805] 在一个实施方案中，载体基因组包含至少一种增强靶特异性和表达的元件(参见例如，Powell et al.Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene
Target Specificity and Expression in Gene Therapy，2015；其内容通过引用的方式以
其整体并入本文)。增强转基因靶特异性和表达的元件的非限制性实例包括启动子、内源
miRNA、转录后调节元件(PRE)、多腺苷酸化(PolyA)信号序列和上游增强子(USE)、CMV增强
子和内含子。
Target Specificity and Expression in Gene Therapy，2015；其内容通过引用的方式以
其整体并入本文)。增强转基因靶特异性和表达的元件的非限制性实例包括启动子、内源
miRNA、转录后调节元件(PRE)、多腺苷酸化(PolyA)信号序列和上游增强子(USE)、CMV增强
子和内含子。
[0806] 在一个实施方案中，载体基因组包含至少一种增强靶特异性和表达的元件(参见例如，Powell et al.Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene
Target Specificity and Expression in Gene Therapy，2015；其内容通过引用的方式以
其整体并入本文)，如启动子。
Target Specificity and Expression in Gene Therapy，2015；其内容通过引用的方式以
其整体并入本文)，如启动子。
[0807] 在大多数组织中促进表达的启动子包括但不限于人延伸因子1α亚基(EF1α)、即刻早期巨细胞病毒(immediate-early cytomegalovirus，CMV)、鸡β-肌动蛋白(CBA)及其衍生
物CAG、β葡糖醛酸酶(GUSB)或泛素C(UBC)。组织特异性表达元件可用于限制表达至某些细
胞类型，如但不限于神经系统启动子，其可用于限制表达至神经元、星形胶质细胞或少突胶
质细胞。神经元的组织特异性表达元件的非限制性实例包括神经元特异性烯醇化酶(NSE)、
血小板衍生生长因子(PDGF)、血小板衍生生长因子B链(PDGF-β)、突触蛋白(Syn)、甲基-CpG
结合蛋白2(MeCP2)、CaMKII、mGluR2、NFL、NFH、nβ2、PPE、Enk和EAAT2启动子。星形胶质细胞
的组织特异性表达元件的非限制性实例包括胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和EAAT2启动子。少
突胶质细胞的组织特异性表达元件的非限制性实例包括髓鞘碱性蛋白(MBP)启动子。
物CAG、β葡糖醛酸酶(GUSB)或泛素C(UBC)。组织特异性表达元件可用于限制表达至某些细
胞类型，如但不限于神经系统启动子，其可用于限制表达至神经元、星形胶质细胞或少突胶
质细胞。神经元的组织特异性表达元件的非限制性实例包括神经元特异性烯醇化酶(NSE)、
血小板衍生生长因子(PDGF)、血小板衍生生长因子B链(PDGF-β)、突触蛋白(Syn)、甲基-CpG
结合蛋白2(MeCP2)、CaMKII、mGluR2、NFL、NFH、nβ2、PPE、Enk和EAAT2启动子。星形胶质细胞
的组织特异性表达元件的非限制性实例包括胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和EAAT2启动子。少
突胶质细胞的组织特异性表达元件的非限制性实例包括髓鞘碱性蛋白(MBP)启动子。
[0808] 在一个实施方案中，载体基因组包含普遍存在的启动子。普遍存在的启动子的非限制性实例包括H1、U6、CMV、CBA(包括衍生物CAG、CBh等)、EF-1α、PGK、UBC、GUSB(hGBp)和
UCOE(HNRPA2B1-CBX3的启动子)。Yu等(Molecular Pain 2011，7：63；其内容通过引用的方
式以其整体并入本文)使用慢病毒载体评价在大鼠DRG细胞和原代DRG细胞中在CAG、EFIα、
PGK和UBC启动子下eGFP的表达，并发现UBC显示出比其他3种启动子更弱的表达，并且对于
所有启动子仅见到10-12％的胶质细胞表达。Soderblom等(E.Neuro 2015；其内容通过引用
的方式以其整体并入本文)在运动皮质中注射后，在具有CMV和UBC启动子的AAV8和具有CMV
启动子的AAV2中eGFP的表达。鼻内施用含有UBC或EFIα启动子的质粒显示的持续的气道表
达大于采用CMV启动子的表达(参见例如，Gill et al.，Gene Therapy 2001，Vol.8，1539-
1546；其内容为通过引用的方式以其整体并入本文)。Husain等(Gene Therapy 2009；其内
容通过引用的方式以其整体并入本文)评价了具有hGUSB启动子、HSV-1LAT启动子和NSE启
动子的HβH构建体，并且发现HβH构建体在小鼠脑中显示出比NSE更弱的表达。Passini和
Wolfe(J.Virol.2001，12382-12392，其内容通过引用的方式以其整体并入本文)评价了在
新生小鼠中心室内注射后HβH载体的长期作用，并发现存在至少1年的持续表达。Xu等(Gene
Therapy 2001，8，1323-1332；其内容通过引用的方式以其整体并入本文)发现与CMV-lacZ、
CMV-luc、EF、GFAP、hENK、nAChR、PPE、PPE+wpre、NSE(0.3kb)、NSE(1.8kb)和NSE(1.8kb+
wpre)相比，使用NF-L和NF-H启动子时在所有脑区域中的低表达。Xu等发现启动子活性按降
序排列为NSE(1.8kb)、EF、NSE(0.3kb)、GFAP、CMV、hENK、PPE、NFL和NFH。NFL是650个核苷酸
的启动子，NFH是920个核苷酸的启动子，它们都不存在于肝脏中，但NFH在感觉本体感受神
经元、脑和脊髓中是丰富的，并且NFH存在于心脏中。Scn8a是470个核苷酸的启动子，其在整
个DRG、脊髓和脑中表达，在海马神经元和小脑浦肯野细胞、皮质、丘脑和下丘脑中具有特别
高的表达(参见例如，Drews et al.2007和Raymond et al.2004；其各自的内容通过引用的
方式以其整体并入本文中)。
UCOE(HNRPA2B1-CBX3的启动子)。Yu等(Molecular Pain 2011，7：63；其内容通过引用的方
式以其整体并入本文)使用慢病毒载体评价在大鼠DRG细胞和原代DRG细胞中在CAG、EFIα、
PGK和UBC启动子下eGFP的表达，并发现UBC显示出比其他3种启动子更弱的表达，并且对于
所有启动子仅见到10-12％的胶质细胞表达。Soderblom等(E.Neuro 2015；其内容通过引用
的方式以其整体并入本文)在运动皮质中注射后，在具有CMV和UBC启动子的AAV8和具有CMV
启动子的AAV2中eGFP的表达。鼻内施用含有UBC或EFIα启动子的质粒显示的持续的气道表
达大于采用CMV启动子的表达(参见例如，Gill et al.，Gene Therapy 2001，Vol.8，1539-
1546；其内容为通过引用的方式以其整体并入本文)。Husain等(Gene Therapy 2009；其内
容通过引用的方式以其整体并入本文)评价了具有hGUSB启动子、HSV-1LAT启动子和NSE启
动子的HβH构建体，并且发现HβH构建体在小鼠脑中显示出比NSE更弱的表达。Passini和
Wolfe(J.Virol.2001，12382-12392，其内容通过引用的方式以其整体并入本文)评价了在
新生小鼠中心室内注射后HβH载体的长期作用，并发现存在至少1年的持续表达。Xu等(Gene
Therapy 2001，8，1323-1332；其内容通过引用的方式以其整体并入本文)发现与CMV-lacZ、
CMV-luc、EF、GFAP、hENK、nAChR、PPE、PPE+wpre、NSE(0.3kb)、NSE(1.8kb)和NSE(1.8kb+
wpre)相比，使用NF-L和NF-H启动子时在所有脑区域中的低表达。Xu等发现启动子活性按降
序排列为NSE(1.8kb)、EF、NSE(0.3kb)、GFAP、CMV、hENK、PPE、NFL和NFH。NFL是650个核苷酸
的启动子，NFH是920个核苷酸的启动子，它们都不存在于肝脏中，但NFH在感觉本体感受神
经元、脑和脊髓中是丰富的，并且NFH存在于心脏中。Scn8a是470个核苷酸的启动子，其在整
个DRG、脊髓和脑中表达，在海马神经元和小脑浦肯野细胞、皮质、丘脑和下丘脑中具有特别
高的表达(参见例如，Drews et al.2007和Raymond et al.2004；其各自的内容通过引用的
方式以其整体并入本文中)。
[0809] 在一个实施方案中，载体基因组包含UBC启动子。UBC启动子的大小可以为300-350个核苷酸。作为一个非限制性实例，UBC启动子是332个核苷酸。
[0810] 在一个实施方案中，载体基因组包含GUSB启动子。GUSB启动子的大小可以为350-400个核苷酸。作为一个非限制性实例，GUSB启动子是378个核苷酸。作为一个非限制性实
例，构建体可以是AAV-启动子-CMV/珠蛋白内含子-调节性多核苷酸-RBG，其中AAV可以是自
身互补的，并且AAV可以是DJ血清型。
例，构建体可以是AAV-启动子-CMV/珠蛋白内含子-调节性多核苷酸-RBG，其中AAV可以是自
身互补的，并且AAV可以是DJ血清型。
[0811] 在一个实施方案中，载体基因组包含NFL启动子。NFL启动子的大小可以为600-700个核苷酸。作为一个非限制性实例，NFL启动子是650个核苷酸。作为一个非限制性实例，构
建体可以是AAV-启动子-CMV/珠蛋白内含子-调节性多核苷酸-RBG，其中AAV可以是自身互
补的，并且AAV可以是DJ血清型。
建体可以是AAV-启动子-CMV/珠蛋白内含子-调节性多核苷酸-RBG，其中AAV可以是自身互
补的，并且AAV可以是DJ血清型。
[0812] 在一个实施方案中，载体基因组包含NFH启动子。NFH启动子的大小可以为900-950个核苷酸。作为一个非限制性实例，NFH启动子是920个核苷酸。作为一个非限制性实例，构
建体可以是AAV-启动子-CMV/珠蛋白内含子-调节性多核苷酸-RBG，其中AAV可以是自身互
补的，并且AAV可以是DJ血清型。
建体可以是AAV-启动子-CMV/珠蛋白内含子-调节性多核苷酸-RBG，其中AAV可以是自身互
补的，并且AAV可以是DJ血清型。
[0813] 在一个实施方案中，载体基因组包含scn8a启动子。scn8a启动子的大小可以为450-500个核苷酸。作为一个非限制性实例，scn8a启动子是470个核苷酸。作为一个非限制
性实例，构建体可以是AAV-启动子-CMV/珠蛋白内含子-调节性多核苷酸-RBG，其中AAV可以
是自身互补的，并且AAV可以是DJ血清型。
性实例，构建体可以是AAV-启动子-CMV/珠蛋白内含子-调节性多核苷酸-RBG，其中AAV可以
是自身互补的，并且AAV可以是DJ血清型。
[0814] 在一个实施方案中，载体基因组包含FXN启动子。
[0815] 在一个实施方案中，载体基因组包含PGK启动子。
[0816] 在一个实施方案中，载体基因组包含CBA启动子。
[0817] 在一个实施方案中，载体基因组包含CMV启动子。
[0818] 在一个实施方案中，载体基因组包含H1启动子。
[0819] 在一个实施方案中，载体基因组包含U6启动子。
[0820] 在一个实施方案中，载体基因组包含肝或骨骼肌启动子。肝启动子的非限制性实例包括hAAT和TBG。骨骼肌启动子的非限制性实例包括结蛋白(Desmin)、MCK和C5-12。
[0821] 在一个实施方案中，AAV载体包含增强子元件、启动子和/或5’UTR内含子。增强子可以是但不限于CMV增强子，启动子可以是但不限于CMV、CBA、UBC、GUSB、NSE、突触蛋白、
MeCP2和GFAP启动子，并且5’UTR/内含子可以是但不限于SV40和CBA-MVM。作为一个非限制
性实例，组合使用的增强剂、促进剂和/或内含子可以是：(1)CMV增强子、CMV启动子、SV405’
UTR内含子；(2)CMV增强子、CBA启动子、SV 405’UTR内含子；(3)CMV增强子、CBA启动子、CBA-
MVM 5’UTR内含子；(4)UBC启动子；(5)GUSB启动子；(6)NSE启动子；(7)突触蛋白启动子；(8)
MeCP2启动子；(9)GFAP启动子、(10)H1启动子；和(11)U6启动子。
MeCP2和GFAP启动子，并且5’UTR/内含子可以是但不限于SV40和CBA-MVM。作为一个非限制
性实例，组合使用的增强剂、促进剂和/或内含子可以是：(1)CMV增强子、CMV启动子、SV405’
UTR内含子；(2)CMV增强子、CBA启动子、SV 405’UTR内含子；(3)CMV增强子、CBA启动子、CBA-
MVM 5’UTR内含子；(4)UBC启动子；(5)GUSB启动子；(6)NSE启动子；(7)突触蛋白启动子；(8)
MeCP2启动子；(9)GFAP启动子、(10)H1启动子；和(11)U6启动子。
[0822] 在一个实施方案中，AAV载体具有工程化启动子。
[0823] 病毒基因组组分：内含子
[0824] 在一个实施方案中，载体基因组包含至少一个增强转基因靶特异性和表达的元件(参见例如，Powell et al.Viral Expression Cassette Elements to Enhance
Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy，2015；其内容通过引
用的方式以其整体并入本文)，如内含子。内含子的非限制性实例包括MVM(67-97bps)、F.IX
截短的内含子1(300bps)、β-珠蛋白SD/免疫球蛋白重链剪接受体(250bps)、腺病毒剪接供
体/免疫球蛋白剪接受体(500bps)、SV40晚期剪接供体/剪接受体(19S/16S)(180bps)和杂
合腺病毒剪接供体/IgG剪接受体(230bps)。
Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy，2015；其内容通过引
用的方式以其整体并入本文)，如内含子。内含子的非限制性实例包括MVM(67-97bps)、F.IX
截短的内含子1(300bps)、β-珠蛋白SD/免疫球蛋白重链剪接受体(250bps)、腺病毒剪接供
体/免疫球蛋白剪接受体(500bps)、SV40晚期剪接供体/剪接受体(19S/16S)(180bps)和杂
合腺病毒剪接供体/IgG剪接受体(230bps)。
[0825] 在一个实施方案中，内含子的长度可以是100-500个核苷酸。内含子的长度可以为80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、
180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、
370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或500个。启动子的长度可以在
80-100、80-120、80-140、80-160、80-180、80-200、80-250、80-300、80-350、80-400、80-450、
80-500、200-300、200-400、200-500、300-400、300-500或400-500个之间。
180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、
370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或500个。启动子的长度可以在
80-100、80-120、80-140、80-160、80-180、80-200、80-250、80-300、80-350、80-400、80-450、
80-500、200-300、200-400、200-500、300-400、300-500或400-500个之间。
[0826] 在一个实施方案中，AAV载体可以包含SV40内含子或其片段或变体。作为一个非限制性实例，启动子可以是CMV。作为另一个非限制性实例，启动子可以是CBA。作为又一个非
限制性实例，启动子可以是H1。
限制性实例，启动子可以是H1。
[0827] 在一个实施方案中，AAV载体可以包含β-珠蛋白内含子或其片段或变体。作为一个非限制性实例，启动子可以是CMV。作为另一个非限制性实例，启动子可以是CBA。作为又一
个非限制性实例，启动子可以是H1。
个非限制性实例，启动子可以是H1。
[0828] 在一个实施方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中内含子的下游，所述内含子例如但不限于SV40内含子或β珠蛋白内含子或本领域已知的其他内含子。此外，编码的
siRNA分子也可以位于表达载体中多腺苷酸化序列的上游。作为一个非限制性实例，编码的
siRNA分子可以位于表达载体中具有内含子的启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1、
2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、
30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中
内含子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-
20、5-25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核
苷酸内。作为一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中内含子下游和/或
多腺苷酸化序列上游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％
或多于25％的核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中
内含子下游和/或多腺苷酸化序列的上游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-
10％、5-15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的
位置。
siRNA分子也可以位于表达载体中多腺苷酸化序列的上游。作为一个非限制性实例，编码的
siRNA分子可以位于表达载体中具有内含子的启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1、
2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、
30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中
内含子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-
20、5-25、5-30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核
苷酸内。作为一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中内含子下游和/或
多腺苷酸化序列上游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％
或多于25％的核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中
内含子下游和/或多腺苷酸化序列的上游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-
10％、5-15％、5-20％、5-25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的
位置。
[0829] 病毒基因组组分：多腺苷酸化序列
[0830] 在一个实施方案中，本发明的AAV颗粒的病毒基因组包含至少一个多腺苷酸化序列。AAV颗粒的病毒基因组可以包含有效负载编码序列的3’端和3’ITR的5’端之间的多腺苷
酸化序列。
酸化序列。
[0831] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列或“polyA序列”的长度范围可以从不存在至约500个核苷酸。多腺苷酸化序列的长度可以是但不限于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、
38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、
63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、
88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、
110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、
129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、
148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、
167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、
186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、
205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、
224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、
243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、
262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、
281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、
300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、
319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、
338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、
357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、
376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、
395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、
414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、
433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、
452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、
471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、
490、491、492、493、494、495、496、497、498、499和500个核苷酸。
13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、
38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、
63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、
88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、
110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、
129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、
148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、
167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、
186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、
205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、
224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、
243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、
262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、
281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、
300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、
319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、
338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、
357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、
376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、
395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、
414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、
433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、
452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、
471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、
490、491、492、493、494、495、496、497、498、499和500个核苷酸。
[0832] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为50-100个核苷酸。
[0833] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为50-150个核苷酸。
[0834] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为50-160个核苷酸。
[0835] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为50-200个核苷酸。
[0836] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为60-100个核苷酸。
[0837] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为60-150个核苷酸。
[0838] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为60-160个核苷酸。
[0839] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为60-200个核苷酸。
[0840] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为70-100个核苷酸。
[0841] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为70-150个核苷酸。
[0842] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为70-160个核苷酸。
[0843] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为70-200个核苷酸。
[0844] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为80-100个核苷酸。
[0845] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为80-150个核苷酸。
[0846] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为80-160个核苷酸。
[0847] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为80-200个核苷酸。
[0848] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为90-100个核苷酸。
[0849] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为90-150个核苷酸。
[0850] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为90-160个核苷酸。
[0851] 在一个实施方案中，多腺苷酸化序列的长度为90-200个核苷酸。
[0852] 在一个实施方案中，编码的siRNA分子可以位于表达载体中多腺苷酸化序列的上游。此外，编码的siRNA分子可以位于表达载体中启动子的下游，所述启动子例如但不限于
CMV、U6、H1、CBA或具有SV40或人β珠蛋白内含子的CBA启动子。作为一个非限制性实例，编码
的siRNA分子可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1、2、3、4、5、6、
7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中启动子下游
和/或多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-
30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸内。作
为一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化
序列上游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％
的核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中启动子下游
和/或多腺苷酸化序列上游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-
20％、5-25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
CMV、U6、H1、CBA或具有SV40或人β珠蛋白内含子的CBA启动子。作为一个非限制性实例，编码
的siRNA分子可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化序列上游的1、2、3、4、5、6、
7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多于30个核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中启动子下游
和/或多腺苷酸化序列上游的1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、5-10、5-15、5-20、5-25、5-
30、10-15、10-20、10-25、10-30、15-20、15-25、15-30、20-25、20-30或25-30个核苷酸内。作
为一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中启动子下游和/或多腺苷酸化
序列上游的前1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％或多于25％
的核苷酸内。作为另一个非限制性实例，编码的siRNA分子可以位于表达载体中启动子下游
和/或多腺苷酸化序列上游的前1-5％、1-10％、1-15％、1-20％、1-25％、5-10％、5-15％、5-
20％、5-25％、10-15％、10-20％、10-25％、15-20％、15-25％或20-25％的位置。
[0853] 表达载体
[0854] 在一个实施方案中，表达载体(例如，AAV载体)可以包含编码至少一个本文所述的siRNA序列或双链体的调节性多核苷酸中的至少一个。
[0855] 在一个实施方案中，表达载体可以包含从ITR到ITR，按5’到3’的顺序：ITR、启动子、内含子、调节多核苷酸、polyA序列和ITR。
[0856] 基因组大小
[0857] 在一个实施方案中，包含编码本文所述的调节性多核苷酸的核酸序列的载体基因组可以是单链或双链载体基因组。载体基因组的大小可以是小、中等、大或最大尺寸。另外，
该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
[0858] 在一个实施方案中，包含编码本文所述的调节性多核苷酸的核酸序列的载体基因组可以是小的单链载体基因组。小的单链载体基因组的大小可以是2.7至3.5kb，如大小为
约2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4和3.5kb。作为一个非限制性实例，小的单链载体基
因组的大小可以是3.2kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
约2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4和3.5kb。作为一个非限制性实例，小的单链载体基
因组的大小可以是3.2kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
[0859] 在一个实施方案中，包含编码本文所述的调节性多核苷酸的核酸序列的载体基因组可以是小的双链载体基因组。小的双链载体基因组的大小可以是1.3至1.7kb，如大小为
约1.3、1.4、1.5、1.6和1.7kb。作为一个非限制性实例，小的双链载体基因组的大小可以是
1.6kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
约1.3、1.4、1.5、1.6和1.7kb。作为一个非限制性实例，小的双链载体基因组的大小可以是
1.6kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
[0860] 在一个实施方案中，包含编码本文所述的调节性多核苷酸(例如，siRNA或dsRNA)的核酸序列的载体基因组可以是中等的单链载体基因组。中等的单链载体基因组的大小可
以是3.6至4.3kb，如大小为约3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2和4.3kb。作为一个非限制性
实例，中等的单链载体基因组的大小可以是4.0kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和
polyA尾。
以是3.6至4.3kb，如大小为约3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2和4.3kb。作为一个非限制性
实例，中等的单链载体基因组的大小可以是4.0kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和
polyA尾。
[0861] 在一个实施方案中，包含编码本文所述的调节性多核苷酸的核酸序列的载体基因组可以是中等的双链载体基因组。中等的双链载体基因组的大小可以是1.8至2.1kb，如大
小为约1.8、1.9、2.0和2.1kb。作为一个非限制性实例，中等的双链载体基因组的大小可以
是2.0kb。另外，该载体基因组可包含启动子和polyA尾。
小为约1.8、1.9、2.0和2.1kb。作为一个非限制性实例，中等的双链载体基因组的大小可以
是2.0kb。另外，该载体基因组可包含启动子和polyA尾。
[0862] 在一个实施方案中，包含编码本文所述的调节性多核苷酸的核酸序列的载体基因组可以是大的单链载体基因组。大的单链载体基因组的大小可以是4.4至6.0kb，如大小为
约4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9和6.0kb。作为一个非限制性实例，大的单链载体基因组的大小可以是4.7kb。作为另一个非限制性实例，
大的单链载体基因组的大小可以是4.8kb。作为又一个非限制性实例，大的单链载体基因组
的大小可以是6.0kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
约4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9和6.0kb。作为一个非限制性实例，大的单链载体基因组的大小可以是4.7kb。作为另一个非限制性实例，
大的单链载体基因组的大小可以是4.8kb。作为又一个非限制性实例，大的单链载体基因组
的大小可以是6.0kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
[0863] 在一个实施方案中，包含编码本文所述的调节性多核苷酸的核酸序列的载体基因组可以是大的双链载体基因组。大的双链载体基因组的大小可以是2.2至3.0kb，如大小为
约2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9和3.0kb。作为一个非限制性实例，大的双链载体基
因组的大小可以是2.4kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
约2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9和3.0kb。作为一个非限制性实例，大的双链载体基
因组的大小可以是2.4kb。另外，该载体基因组可以包含启动子和polyA尾。
[0864] 病毒生产
[0865] 本发明提供了一种在病毒复制细胞中通过病毒基因组复制产生细小病毒颗粒(例如，AAV颗粒)的方法，包括使病毒复制细胞与AAV多核苷酸或AAV基因组接触。
[0866] 本发明提供了一种用于生产具有增强的(增加的、改善的)转导效率的AAV颗粒的方法，包括以下步骤：1)用杆粒载体和病毒构建体载体和/或AAV有效负载构建体载体共转
染感受态细菌细胞，2)分离得到的病毒构建体表达载体和AAV有效负载构建体表达载体并
分别转染病毒复制细胞，3)分离和纯化得到的包含病毒构建体表达载体或AAV有效负载构
建体表达载体的有效负载和病毒构建体颗粒，4)用包含病毒构建体表达载体或AAV有效负
载构建体表达载体的AAV有效负载和病毒构建体颗粒共感染病毒复制细胞，5)收获和纯化
包含细小病毒基因组的病毒颗粒。
染感受态细菌细胞，2)分离得到的病毒构建体表达载体和AAV有效负载构建体表达载体并
分别转染病毒复制细胞，3)分离和纯化得到的包含病毒构建体表达载体或AAV有效负载构
建体表达载体的有效负载和病毒构建体颗粒，4)用包含病毒构建体表达载体或AAV有效负
载构建体表达载体的AAV有效负载和病毒构建体颗粒共感染病毒复制细胞，5)收获和纯化
包含细小病毒基因组的病毒颗粒。
[0867] 在一个实施方案中，本发明提供了一种生产AAV颗粒的方法，包括以下步骤：1)用有效负载区、表达rep和cap基因的构建体和辅助构建体同时共转染哺乳动物细胞，例如但
不限于HEK293细胞，2)收获和纯化包含病毒基因组的AAV颗粒。
不限于HEK293细胞，2)收获和纯化包含病毒基因组的AAV颗粒。
[0868] 细胞
[0869] 本发明提供了一种包含AAV多核苷酸和/或AAV基因组的细胞。
[0870] 本文公开的病毒生产描述了用于生产AAV颗粒的过程和方法，所述AAV颗粒接触靶细胞以递送有效负载构建体，例如重组病毒构建体，其包含编码有效负载分子的核苷酸。
[0871] 在一个实施方案中，AAV颗粒可以在包含昆虫细胞的病毒复制细胞中生产。
[0872] 培养物中的昆虫细胞的生长条件和培养物中的昆虫细胞中异源产物的产生在本领域中是熟知的，参见美国专利号6,204,059，其内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0873] 根据本发明，可以使用允许细小病毒复制并且可以保持在培养物中的任何昆虫细胞。可以使用来自草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)的细胞系，包括但不限于Sf9或Sf21
细胞系，果蝇(Drosophila)细胞系或蚊子细胞系，如白纹伊蚊(Aedes albopictus)衍生的
细胞系。昆虫细胞用于表达异源蛋白质的用途已被文献充分记载，将核酸(如载体，例如昆
虫-细胞相容性载体)引入到这些细胞的方法以及在培养物中维持这些细胞的方法也是如
此。参见，例如，Methods in Molecular Biology，ed.Richard，Humana Press，NJ(1995)；O′
Reilly et al.，Baculovirus Expression Vectors，A Laboratory Manual，Oxford
Univ.Press(1994)；Samulski et al.，J.Vir.63：3822-8(1989)；Kajigaya et al.，
Proc.Nat′l.Acad.Sci.USA 88：4646-50(1991)；Ruffing et al.，J.Vir.66：6922-30
(1992)；Kimbauer et al.，Vir.219：37-44(1996)；Zhao et al.，Vir.272：382-93(2000)；
和Samulski et al.，U.S.Pat.No.6,204,059，其每一篇的内容通过引用的方式以其整体并
入本文。
细胞系，果蝇(Drosophila)细胞系或蚊子细胞系，如白纹伊蚊(Aedes albopictus)衍生的
细胞系。昆虫细胞用于表达异源蛋白质的用途已被文献充分记载，将核酸(如载体，例如昆
虫-细胞相容性载体)引入到这些细胞的方法以及在培养物中维持这些细胞的方法也是如
此。参见，例如，Methods in Molecular Biology，ed.Richard，Humana Press，NJ(1995)；O′
Reilly et al.，Baculovirus Expression Vectors，A Laboratory Manual，Oxford
Univ.Press(1994)；Samulski et al.，J.Vir.63：3822-8(1989)；Kajigaya et al.，
Proc.Nat′l.Acad.Sci.USA 88：4646-50(1991)；Ruffing et al.，J.Vir.66：6922-30
(1992)；Kimbauer et al.，Vir.219：37-44(1996)；Zhao et al.，Vir.272：382-93(2000)；
和Samulski et al.，U.S.Pat.No.6,204,059，其每一篇的内容通过引用的方式以其整体并
入本文。
[0874] 病毒复制细胞可以选自任何生物有机体，包括原核(例如细菌)细胞和真核细胞，包括昆虫细胞、酵母细胞和哺乳动物细胞。病毒复制细胞可以包含哺乳动物细胞，如A549，
WEH1，3T3，10T1/2，BHK，MDCK，COS 1，COS 7，BSC 1，BSC 40，BMT 10，VERO.W138，HeLa，
HEK293，Saos，C2C12，L细胞，HT1080，HepG2和来源于哺乳动物的原代成纤维细胞、肝细胞和
成肌细胞。病毒复制细胞包含来源于哺乳动物物种(包括但不限于人、猴、小鼠、大鼠、兔和
仓鼠)的细胞或细胞类型，包括但不限于成纤维细胞、肝细胞、肿瘤细胞、细胞系转化细胞
等。
WEH1，3T3，10T1/2，BHK，MDCK，COS 1，COS 7，BSC 1，BSC 40，BMT 10，VERO.W138，HeLa，
HEK293，Saos，C2C12，L细胞，HT1080，HepG2和来源于哺乳动物的原代成纤维细胞、肝细胞和
成肌细胞。病毒复制细胞包含来源于哺乳动物物种(包括但不限于人、猴、小鼠、大鼠、兔和
仓鼠)的细胞或细胞类型，包括但不限于成纤维细胞、肝细胞、肿瘤细胞、细胞系转化细胞
等。
[0875] 小规模生产AAV颗粒
[0876] 本文公开的病毒生产描述了用于生产AAV颗粒的过程和方法，所述AAV颗粒接触靶细胞以递送有效负载，例如重组病毒构建体，其包含编码有效负载的核苷酸。
[0877] 在一个实施方案中，可以在包含哺乳动物细胞的病毒复制细胞中生产AAV颗粒。
[0878] 通常用于生产重组AAV颗粒的病毒复制细胞包括但不限于如以下文献中所述的293细胞、COS细胞、HeLa细胞、KB细胞和其他哺乳动物细胞系：美国专利号6,156,303、5,
387,484、5,741,683、5,691,176和5,688,676；美国专利申请2002/0081721和国际专利申请
WO 00/47757、WO 00/24916和WO 96/17947，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并
入本文。
387,484、5,741,683、5,691,176和5,688,676；美国专利申请2002/0081721和国际专利申请
WO 00/47757、WO 00/24916和WO 96/17947，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并
入本文。
[0879] 在一个实施方案中，在哺乳动物细胞中生产AAV颗粒，其中所有三种VP蛋白以接近1∶1∶10(VP1∶VP2∶VP3)的化学计量表达。允许这种受控的表达水平的调节机制包括生产两
种mRNA：一种用于VP1，另一种用于VP2和VP3，通过差异剪接生产。
种mRNA：一种用于VP1，另一种用于VP2和VP3，通过差异剪接生产。
[0880] 在另一个实施方案中，使用三重转染方法在哺乳动物细胞中生产AAV颗粒，其中有效负载构建体、细小病毒Rep和细小病毒Cap以及辅助构建体包含在三种不同的构建体内。
可以使用AAV颗粒生产的三种组分的三重转染方法来生产小批量病毒用于测定，包括转导
效率、靶组织(向性)评价和稳定性。
可以使用AAV颗粒生产的三种组分的三重转染方法来生产小批量病毒用于测定，包括转导
效率、靶组织(向性)评价和稳定性。
[0881] 杆状病毒
[0882] 本文公开的颗粒生产描述了用于生产AAV颗粒的过程和方法，所述AAV颗粒接触靶细胞以递送包含编码有效负载的核苷酸的有效负载构建体。
[0883] 简而言之，病毒构建体载体和AAV有效负载构建体载体各自通过转座子供体/受体系统通过本领域技术人员已知和进行的标准分子生物学技术掺入到杆粒(也称为杆状病毒
质粒)中。单独的病毒复制细胞群的转染产生两种杆状病毒，一种包含病毒构建体表达载
体，另一种包含AAV有效负载构建体表达载体。这两种杆状病毒可以用于感染单个病毒复制
细胞群以生产AAV颗粒。
质粒)中。单独的病毒复制细胞群的转染产生两种杆状病毒，一种包含病毒构建体表达载
体，另一种包含AAV有效负载构建体表达载体。这两种杆状病毒可以用于感染单个病毒复制
细胞群以生产AAV颗粒。
[0884] 用于在昆虫细胞中生产病毒颗粒的杆状病毒表达载体，包括但不限于草地夜蛾(Sf9)细胞，提供高滴度的病毒颗粒产物。编码病毒构建体表达载体和AAV有效负载构建体
表达载体的重组杆状病毒引发病毒复制细胞的生产性感染。从原发感染中释放的感染性杆
状病毒颗粒继发感染培养物中的其他细胞，在许多感染周期中指数感染整个细胞培养群，
这是初始感染复数的函数，参见Urabe，M.et al.，J Virol.2006 Feb；80(4)：1874-85，其内
容通过引用的方式以其整体并入本文。
表达载体的重组杆状病毒引发病毒复制细胞的生产性感染。从原发感染中释放的感染性杆
状病毒颗粒继发感染培养物中的其他细胞，在许多感染周期中指数感染整个细胞培养群，
这是初始感染复数的函数，参见Urabe，M.et al.，J Virol.2006 Feb；80(4)：1874-85，其内
容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0885] 在昆虫细胞系统中用杆状病毒生产AAV颗粒可以解决已知的杆状病毒遗传和物理不稳定性。在一个实施方案中，生产系统通过利用无滴度的(titerless)感染细胞保存和放
大系统历经多次传代解决了杆状病毒不稳定性。用编码病毒颗粒的结构、非结构组分的病
毒表达构建体转染病毒生产细胞的小规模种子培养物。将杆状病毒感染的病毒生产细胞收
获成等分试样，其可以在液氮中冷冻保存；等分试样保留感染大规模病毒生产细胞培养物
的活力和感染性Wasilko DJ et al.，Protein Expr Purif.2009 Jun；65(2)：122-32，其内
容通过引用的方式以其整体并入本文。
大系统历经多次传代解决了杆状病毒不稳定性。用编码病毒颗粒的结构、非结构组分的病
毒表达构建体转染病毒生产细胞的小规模种子培养物。将杆状病毒感染的病毒生产细胞收
获成等分试样，其可以在液氮中冷冻保存；等分试样保留感染大规模病毒生产细胞培养物
的活力和感染性Wasilko DJ et al.，Protein Expr Purif.2009 Jun；65(2)：122-32，其内
容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0886] 可以使用遗传稳定的杆状病毒来生产用于在无脊椎动物细胞中生产AAV颗粒的一种或多种组分的来源。在一个实施方案中，缺陷型杆状病毒表达载体可以在昆虫细胞中以
游离基因方式保持。在这样的实施方案中，用复制控制元件工程化杆粒载体，所述复制控制
元件包括但不限于启动子、增强子和/或细胞周期调节的复制元件。
游离基因方式保持。在这样的实施方案中，用复制控制元件工程化杆粒载体，所述复制控制
元件包括但不限于启动子、增强子和/或细胞周期调节的复制元件。
[0887] 在一个实施方案中，杆状病毒可以用(非)可选择标记工程化，用于重组到几丁质酶/组织蛋白酶基因座中。chia/v-cath基因座对于在组织培养物中繁殖杆状病毒不是必需
的，并且V-cath(EC 3.4.22.50)是对含有Arg-Arg二肽的底物最具活性的半胱氨酸内切蛋
白酶。Arg-Arg二肽存在于浓核病毒和细小病毒衣壳结构蛋白中，但很少发生在依赖病毒
VP1中。
的，并且V-cath(EC 3.4.22.50)是对含有Arg-Arg二肽的底物最具活性的半胱氨酸内切蛋
白酶。Arg-Arg二肽存在于浓核病毒和细小病毒衣壳结构蛋白中，但很少发生在依赖病毒
VP1中。
[0888] 在一个实施方案中，允许杆状病毒感染的稳定病毒复制细胞用AAV复制和病毒颗粒生产所必需的元件中的任何一个的至少一个稳定整合拷贝进行工程化，所述元件包括但
不限于整个AAV基因组、Rep和Cap基因、Rep基因、Cap基因、作为单独的转录盒的每个Rep蛋
白、作为单独的转录盒的每个VP蛋白、AAP(装配激活蛋白)或至少一个具有天然或非天然启
动子的杆状病毒辅助基因。
不限于整个AAV基因组、Rep和Cap基因、Rep基因、Cap基因、作为单独的转录盒的每个Rep蛋
白、作为单独的转录盒的每个VP蛋白、AAP(装配激活蛋白)或至少一个具有天然或非天然启
动子的杆状病毒辅助基因。
[0889] 大规模生产
[0890] 在一些实施方案中，可以修改AAV颗粒生产以增加生产规模。根据本发明的大规模病毒生产方法可以包括美国专利号5,756,283、6,258,595、6,261,551、6,270,996、6,281,
010、6,365,394、6,475,769、6,482,634、6,485,966、6,943,019、6,953,690、7,022,519、7,
238,526、7,291,498和7,491,508或国际公开号WO1996039530、WO1998010088、
WO1999014354、WO1999015685、WO1999047691、WO2000055342、WO2000075353和
WO2001023597中教导的那些方法中的任何一种，所述文献中的每一篇的内容均通过引用的
方式以其整体并入。增加病毒颗粒生产规模的方法通常包括增加病毒复制细胞的数量。在
一些实施方案中，病毒复制细胞包含贴壁细胞。为了增加贴壁病毒复制细胞生产病毒颗粒
的规模，需要更大的细胞培养表面。在一些情况下，大规模生产方法包括使用滚瓶来增加细
胞培养表面。具有增加的表面积的其他细胞培养底物是本领域已知的。具有增加的表面积
的另外的贴壁细胞培养产品的实例包括但不限于 (Corning
Corp.，Corning，NY)和NuncTM Cell FactoryTM(Thermo Scientific，Waltham，MA.)。在一
些情况下，大规模贴壁细胞表面可以包含约1,000cm2至约100,000cm2。在一些情况下，大规
模贴壁细胞培养物可以包含约107至约109个细胞、约108至约1010个细胞、约109至约1012
个细胞或至少1012个细胞。在一些情况下，大规模贴壁培养物可以生产约109至约1012、约
1010至约1013、约1011至约1014、约1012至约1015或至少1015个病毒颗粒。
010、6,365,394、6,475,769、6,482,634、6,485,966、6,943,019、6,953,690、7,022,519、7,
238,526、7,291,498和7,491,508或国际公开号WO1996039530、WO1998010088、
WO1999014354、WO1999015685、WO1999047691、WO2000055342、WO2000075353和
WO2001023597中教导的那些方法中的任何一种，所述文献中的每一篇的内容均通过引用的
方式以其整体并入。增加病毒颗粒生产规模的方法通常包括增加病毒复制细胞的数量。在
一些实施方案中，病毒复制细胞包含贴壁细胞。为了增加贴壁病毒复制细胞生产病毒颗粒
的规模，需要更大的细胞培养表面。在一些情况下，大规模生产方法包括使用滚瓶来增加细
胞培养表面。具有增加的表面积的其他细胞培养底物是本领域已知的。具有增加的表面积
的另外的贴壁细胞培养产品的实例包括但不限于 (Corning
Corp.，Corning，NY)和NuncTM Cell FactoryTM(Thermo Scientific，Waltham，MA.)。在一
些情况下，大规模贴壁细胞表面可以包含约1,000cm2至约100,000cm2。在一些情况下，大规
模贴壁细胞培养物可以包含约107至约109个细胞、约108至约1010个细胞、约109至约1012
个细胞或至少1012个细胞。在一些情况下，大规模贴壁培养物可以生产约109至约1012、约
1010至约1013、约1011至约1014、约1012至约1015或至少1015个病毒颗粒。
[0891] 在一些实施方案中，本发明的大规模病毒生产方法可以包括使用悬浮细胞培养物。悬浮细胞培养允许显著增加的细胞数量。通常，可以在约10-50cm2表面积上生长的贴壁
细胞的数量可以在悬浮液中在约1cm3的体积中生长。
细胞的数量可以在悬浮液中在约1cm3的体积中生长。
[0892] 可以根据本领域已知的任何方法进行大规模培养模式的复制细胞的转染。对于大规模贴壁细胞培养物，转染方法可以包括但不限于使用无机化合物(例如磷酸钙)、有机化
合物[例如，聚乙烯亚胺(PEI)]或使用非化学方法(例如电穿孔)。对于在悬浮液中生长的细
胞，转染方法可以包括但不限于使用磷酸钙和使用PEI。在一些情况下，可以根据Feng，L.et
al.，2008.Biotechnol Appl.Biochem.50：121-32中描述的标题为“转染程序
(Transfection Procedure)”的部分进行大规模悬浮培养物的转染，该文献的内容通过引
用的方式以其整体并入本文。根据这些实施方案，可以形成PEI-DNA复合物用于引入待转染
的质粒。在一些情况下，用PEI-DNA复合物转染的细胞可以在转染前“休克(shocked)”。这包
括将细胞培养温度降低至4℃持续约1小时的时间段。在一些情况下，细胞培养物可以休克
约10分钟至约5小时的时间段。在一些情况下，细胞培养物可在约0℃至约20℃的温度下休
克。
合物[例如，聚乙烯亚胺(PEI)]或使用非化学方法(例如电穿孔)。对于在悬浮液中生长的细
胞，转染方法可以包括但不限于使用磷酸钙和使用PEI。在一些情况下，可以根据Feng，L.et
al.，2008.Biotechnol Appl.Biochem.50：121-32中描述的标题为“转染程序
(Transfection Procedure)”的部分进行大规模悬浮培养物的转染，该文献的内容通过引
用的方式以其整体并入本文。根据这些实施方案，可以形成PEI-DNA复合物用于引入待转染
的质粒。在一些情况下，用PEI-DNA复合物转染的细胞可以在转染前“休克(shocked)”。这包
括将细胞培养温度降低至4℃持续约1小时的时间段。在一些情况下，细胞培养物可以休克
约10分钟至约5小时的时间段。在一些情况下，细胞培养物可在约0℃至约20℃的温度下休
克。
[0893] 在一些情况下，转染可以包括一种或多种用于表达RNA效应分子的载体以减少来自一种或多种AAV有效负载构建体的核酸的表达。这些方法可以通过减少在表达有效负载
构建体上浪费的细胞资源来增强病毒颗粒的生产。在一些情况下，这些方法可以根据美国
公开号US2014/0099666中教导的那些方法进行，其内容通过引用的方式以其整体并入本
文。
构建体上浪费的细胞资源来增强病毒颗粒的生产。在一些情况下，这些方法可以根据美国
公开号US2014/0099666中教导的那些方法进行，其内容通过引用的方式以其整体并入本
文。
[0894] 生物反应器
[0895] 在一些实施方案中，细胞培养生物反应器可以用于大规模病毒生产。在一些情况下，生物反应器包括搅拌釜反应器。这种反应器通常包括容器，形状通常为圆柱形，具有搅
拌器(例如叶轮)。在一些实施方案中，这种生物反应器容器可以放置在水套内以控制容器
温度和/或使环境温度变化的影响最小化。生物反应器容器的容积大小可以在以下范围内：
约500ml至约2L、约1L至约5L、约2.5L至约20L、约10L至约50L、约25L至约100L、约75L至约
500L、约250L至约2,000L、约1,000L至约10,000L、约5,000L至约50,000L或至少50,000L。容
器底部可以是圆形或扁平的。在一些情况下，动物细胞培养物可以保持在具有圆形容器底
部的生物反应器中。
拌器(例如叶轮)。在一些实施方案中，这种生物反应器容器可以放置在水套内以控制容器
温度和/或使环境温度变化的影响最小化。生物反应器容器的容积大小可以在以下范围内：
约500ml至约2L、约1L至约5L、约2.5L至约20L、约10L至约50L、约25L至约100L、约75L至约
500L、约250L至约2,000L、约1,000L至约10,000L、约5,000L至约50,000L或至少50,000L。容
器底部可以是圆形或扁平的。在一些情况下，动物细胞培养物可以保持在具有圆形容器底
部的生物反应器中。
[0896] 在某些情况下，生物反应器容器可以通过使用热循环装置来加温。热循环装置在水套周围泵入加热的水。在一些情况下，可以将加热的水通过存在于生物反应器容器内的
管道(例如盘管)泵入。在一些情况下，暖空气可以在生物反应器周围循环，包括但不限于直
接位于培养基上方的空气空间。另外地，可以维持pH和CO2水平以优化细胞活力。
管道(例如盘管)泵入。在一些情况下，暖空气可以在生物反应器周围循环，包括但不限于直
接位于培养基上方的空气空间。另外地，可以维持pH和CO2水平以优化细胞活力。
[0897] 在一些情况下，生物反应器可以包括中空纤维反应器。中空纤维生物反应器可以支持锚定依赖性和锚定非依赖性细胞的培养。其他生物反应器可以包括但不限于填充床或
固定床生物反应器。这种生物反应器可以包括具有玻璃珠的容器，用于贴壁细胞附着。其他
填充床反应器可以包括陶瓷珠。
固定床生物反应器。这种生物反应器可以包括具有玻璃珠的容器，用于贴壁细胞附着。其他
填充床反应器可以包括陶瓷珠。
[0898] 在一些情况下，通过使用一次性生物反应器生产病毒颗粒。在一些实施方案中，此类生物反应器可以包括WaveTM一次性生物反应器。
[0899] 在一些实施方案中，动物细胞生物反应器培养物中的AAV颗粒生产可以根据美国专利号5,064764、6,194,191、6,566,118、8,137,948或美国专利申请号US2011/0229971中
所教导的方法进行，所述文献中的每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。
所教导的方法进行，所述文献中的每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。
[0900] 细胞裂解
[0901] 可以根据本领域已知的任何方法对本发明的细胞(包括但不限于病毒生产细胞)进行细胞裂解。可以进行细胞裂解以获得存在于本发明的任何细胞内的一种或多种物质
(例如病毒颗粒)。在一些实施方案中，细胞裂解可以根据以下文献中列出的任何方法进行：
美国专利号7,326,555、7,579,181、7,048,920、6,410,300、6,436,394、7,732,129、7,510,
875、7,445,930、6,726,907、6,194,191、7,125,706、6,995,006、6,676,935、7,968,333、5,
756,283、6,258,595、6,261,551、6,270,996、6,281,010、6,365,394、6,475,769、6,482,
634、6,485,966、6,943,019、6,953,690、7,022,519、7,238,526、7,291,498和7,491,508或
国际公开号WO1996039530、WO1998010088、WO1999014354、WO1999015685、WO1999047691、
WO2000055342、WO2000075353和WO2001023597，所述文献中的每一篇的内容均通过引用的
方式以其整体并入本文。细胞裂解方法可以是化学方法或机械方法。化学细胞裂解通常包
括使一种或多种细胞与一种或多种裂解剂接触。机械裂解通常包括使一种或多种细胞经受
一种或多种裂解条件和/或一种或多种裂解力。
(例如病毒颗粒)。在一些实施方案中，细胞裂解可以根据以下文献中列出的任何方法进行：
美国专利号7,326,555、7,579,181、7,048,920、6,410,300、6,436,394、7,732,129、7,510,
875、7,445,930、6,726,907、6,194,191、7,125,706、6,995,006、6,676,935、7,968,333、5,
756,283、6,258,595、6,261,551、6,270,996、6,281,010、6,365,394、6,475,769、6,482,
634、6,485,966、6,943,019、6,953,690、7,022,519、7,238,526、7,291,498和7,491,508或
国际公开号WO1996039530、WO1998010088、WO1999014354、WO1999015685、WO1999047691、
WO2000055342、WO2000075353和WO2001023597，所述文献中的每一篇的内容均通过引用的
方式以其整体并入本文。细胞裂解方法可以是化学方法或机械方法。化学细胞裂解通常包
括使一种或多种细胞与一种或多种裂解剂接触。机械裂解通常包括使一种或多种细胞经受
一种或多种裂解条件和/或一种或多种裂解力。
[0902] 在一些实施方案中，化学裂解可以用于裂解细胞。如本文所用，术语“裂解剂”是指可以帮助破坏细胞的任何物质。在一些情况下，将裂解剂引入到溶液中，称为裂解溶液或裂
解缓冲液。如本文所用，术语“裂解溶液”是指包含一种或多种裂解剂的溶液(通常为水溶
液)。除裂解剂外，裂解溶液可以包括一种或多种缓冲剂、增溶剂、表面活性剂、防腐剂、冷冻
保护剂、酶、酶抑制剂和/或螯合剂。裂解缓冲液是包含一种或多种缓冲剂的裂解溶液。裂解
溶液的其他组分可以包括一种或多种增溶剂。如本文所用，术语“增溶剂”是指增强溶液的
一种或多种组分的溶解度和/或应用溶液的一种或多种实体的溶解度的化合物。在一些情
况下，增溶剂增强蛋白质的溶解度。在一些情况下，基于它们增强蛋白质溶解度同时保持蛋
白质构象和/或活性的能力来选择增溶剂。
解缓冲液。如本文所用，术语“裂解溶液”是指包含一种或多种裂解剂的溶液(通常为水溶
液)。除裂解剂外，裂解溶液可以包括一种或多种缓冲剂、增溶剂、表面活性剂、防腐剂、冷冻
保护剂、酶、酶抑制剂和/或螯合剂。裂解缓冲液是包含一种或多种缓冲剂的裂解溶液。裂解
溶液的其他组分可以包括一种或多种增溶剂。如本文所用，术语“增溶剂”是指增强溶液的
一种或多种组分的溶解度和/或应用溶液的一种或多种实体的溶解度的化合物。在一些情
况下，增溶剂增强蛋白质的溶解度。在一些情况下，基于它们增强蛋白质溶解度同时保持蛋
白质构象和/或活性的能力来选择增溶剂。
[0903] 示例性裂解剂可以包括美国专利号8,685,734、7,901,921、7,732,129、7,223,585、7,125,706、8,236,495、8,110,351、7,419,956、7,300,797、6,699,706和6,143,567中
描述的那些中的任何一种，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。在一些
情况下，裂解剂可以选自裂解盐、两性剂、阳离子剂、离子型洗涤剂和非离子型洗涤剂。裂解
盐可以包括但不限于氯化钠(NaCl)和氯化钾(KCl)。进一步的裂解盐可以包括美国专利号
8,614,101、7,326,555、7,579,181、7,048,920、6,410,300、6,436,394、7,732,129、7,510,
875、7,445,930、6,726,907、6,194,191、7,125,706、6,995,006、6,676,935和7,968,333中
描述的那些中的任何一种，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。可以增
加或降低盐的浓度以获得细胞膜破裂的有效浓度。如本文所提及的两性剂是能够作为酸或
碱反应的化合物。两性剂可以包括但不限于溶血磷脂酰胆碱、3-((3-胆酰胺基丙基)二甲基
铵)-1-丙磺酸盐(CHAPS)、 等。阳离子剂可以包括但不限于十六烷基三甲基
溴化铵(C(16)TAB)和苯扎氯铵。包含洗涤剂的裂解剂可以包括离子洗涤剂或非离子洗涤
剂。洗涤剂可以起到分解或溶解细胞结构的作用，所述细胞结构包括但不限于细胞膜、细胞
壁、脂质、碳水化合物、脂蛋白和糖蛋白。示例性的离子型洗涤剂包括美国专利号7,625,570
和6,593,123或美国公开号US2014/0087361中教导的那些中的任何一种，所述文献中的每
一篇的内容通过引用的方式以其整体并入本文。一些离子型洗涤剂可以包括但不限于十二
烷基硫酸钠(SDS)、胆酸盐和脱氧胆酸盐。在一些情况下，离子型洗涤剂可以作为增溶剂包
括在裂解溶液中。非离子型洗涤剂可以包括但不限于辛基葡糖苷、洋地黄皂苷、芦布若尔
(lubrol)、C12E8、 Triton X-100和Noniodet P-40。非离子
型洗涤剂通常是较弱的裂解剂，但可以作为增溶剂包括在内以溶解细胞和/或病毒蛋白质。
其他裂解剂可以包括酶和尿素。在一些情况下，可以将一种或多种裂解剂在裂解溶液中组
合以增强细胞裂解和蛋白质溶解度中的一种或多种。在一些情况下，在裂解溶液中可以包
括酶抑制剂以防止可能由细胞膜破坏引发的蛋白水解。
描述的那些中的任何一种，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。在一些
情况下，裂解剂可以选自裂解盐、两性剂、阳离子剂、离子型洗涤剂和非离子型洗涤剂。裂解
盐可以包括但不限于氯化钠(NaCl)和氯化钾(KCl)。进一步的裂解盐可以包括美国专利号
8,614,101、7,326,555、7,579,181、7,048,920、6,410,300、6,436,394、7,732,129、7,510,
875、7,445,930、6,726,907、6,194,191、7,125,706、6,995,006、6,676,935和7,968,333中
描述的那些中的任何一种，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。可以增
加或降低盐的浓度以获得细胞膜破裂的有效浓度。如本文所提及的两性剂是能够作为酸或
碱反应的化合物。两性剂可以包括但不限于溶血磷脂酰胆碱、3-((3-胆酰胺基丙基)二甲基
铵)-1-丙磺酸盐(CHAPS)、 等。阳离子剂可以包括但不限于十六烷基三甲基
溴化铵(C(16)TAB)和苯扎氯铵。包含洗涤剂的裂解剂可以包括离子洗涤剂或非离子洗涤
剂。洗涤剂可以起到分解或溶解细胞结构的作用，所述细胞结构包括但不限于细胞膜、细胞
壁、脂质、碳水化合物、脂蛋白和糖蛋白。示例性的离子型洗涤剂包括美国专利号7,625,570
和6,593,123或美国公开号US2014/0087361中教导的那些中的任何一种，所述文献中的每
一篇的内容通过引用的方式以其整体并入本文。一些离子型洗涤剂可以包括但不限于十二
烷基硫酸钠(SDS)、胆酸盐和脱氧胆酸盐。在一些情况下，离子型洗涤剂可以作为增溶剂包
括在裂解溶液中。非离子型洗涤剂可以包括但不限于辛基葡糖苷、洋地黄皂苷、芦布若尔
(lubrol)、C12E8、 Triton X-100和Noniodet P-40。非离子
型洗涤剂通常是较弱的裂解剂，但可以作为增溶剂包括在内以溶解细胞和/或病毒蛋白质。
其他裂解剂可以包括酶和尿素。在一些情况下，可以将一种或多种裂解剂在裂解溶液中组
合以增强细胞裂解和蛋白质溶解度中的一种或多种。在一些情况下，在裂解溶液中可以包
括酶抑制剂以防止可能由细胞膜破坏引发的蛋白水解。
[0904] 在一些实施方案中，进行机械细胞裂解。机械细胞裂解方法可以包括使用一种或多种裂解条件和/或一种或多种裂解力。如本文所用，术语“裂解条件”是指促进细胞破坏的
状态或环境。裂解条件可以包括某些温度、压力、渗透纯度、盐度等。在一些情况下，裂解条
件包括增加或降低的温度。根据一些实施方案，裂解条件包括温度变化以促进细胞破坏。根
据这些实施方案进行的细胞裂解可以包括冻融裂解。如本文所用，术语“冻融裂解”是指细
胞裂解，其中使细胞溶液经受一个或多个冻融循环。根据冻融裂解方法，将溶液中的细胞冷
冻以诱导由冰晶的形成和膨胀引起的细胞膜的机械破坏。根据冻融裂解方法使用的细胞溶
液可以进一步包含一种或多种裂解剂、增溶剂、缓冲剂、冷冻保护剂、表面活性剂、防腐剂、
酶、酶抑制剂和/或螯合剂。一旦经受冷冻的细胞溶液解冻，这些组分可以增强所需细胞产
物的回收。在一些情况下，在经受冻融裂解的细胞溶液中包括一种或多种细胞保护剂。如本
文所用，术语“冷冻保护剂”是指用于保护一种或多种物质免于因冷冻而损坏的物质。冷冻
保护剂可以包括美国公开号US2013/0323302或美国专利号6,503,888、6,180,613、7,888,
096、7,091,030中教导的那些中的任何一种，所述文献中的每一篇通过引用的方式以其整
体并入本文。在一些情况下，冷冻保护剂可以包括但不限于二甲基亚砜、1，2-丙二醇、2，3-
丁二醇、甲酰胺、甘油、乙二醇、1，3-丙二醇和n-二甲基甲酰胺、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀
粉、琼脂糖、葡聚糖、肌醇、葡萄糖、羟乙基淀粉、乳糖、山梨糖醇、甲基葡萄糖、蔗糖和尿素。
在一些实施方案中，可以根据美国专利号7,704,721中描述的任何方法进行冻融裂解，其内
容通过引用的方式以其整体并入本文。
状态或环境。裂解条件可以包括某些温度、压力、渗透纯度、盐度等。在一些情况下，裂解条
件包括增加或降低的温度。根据一些实施方案，裂解条件包括温度变化以促进细胞破坏。根
据这些实施方案进行的细胞裂解可以包括冻融裂解。如本文所用，术语“冻融裂解”是指细
胞裂解，其中使细胞溶液经受一个或多个冻融循环。根据冻融裂解方法，将溶液中的细胞冷
冻以诱导由冰晶的形成和膨胀引起的细胞膜的机械破坏。根据冻融裂解方法使用的细胞溶
液可以进一步包含一种或多种裂解剂、增溶剂、缓冲剂、冷冻保护剂、表面活性剂、防腐剂、
酶、酶抑制剂和/或螯合剂。一旦经受冷冻的细胞溶液解冻，这些组分可以增强所需细胞产
物的回收。在一些情况下，在经受冻融裂解的细胞溶液中包括一种或多种细胞保护剂。如本
文所用，术语“冷冻保护剂”是指用于保护一种或多种物质免于因冷冻而损坏的物质。冷冻
保护剂可以包括美国公开号US2013/0323302或美国专利号6,503,888、6,180,613、7,888,
096、7,091,030中教导的那些中的任何一种，所述文献中的每一篇通过引用的方式以其整
体并入本文。在一些情况下，冷冻保护剂可以包括但不限于二甲基亚砜、1，2-丙二醇、2，3-
丁二醇、甲酰胺、甘油、乙二醇、1，3-丙二醇和n-二甲基甲酰胺、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀
粉、琼脂糖、葡聚糖、肌醇、葡萄糖、羟乙基淀粉、乳糖、山梨糖醇、甲基葡萄糖、蔗糖和尿素。
在一些实施方案中，可以根据美国专利号7,704,721中描述的任何方法进行冻融裂解，其内
容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0905] 如本文所用，术语“裂解力”是指用于破坏细胞的物理活动。裂解力可以包括但不限于机械力、声力、重力、光力、电力等。通过机械力进行的细胞裂解在本文中称为“机械裂
解”。可以根据机械裂解使用的机械力可以包括高剪切流体力。根据这种机械裂解方法，可
以使用微流化器。微流化器通常包括可以施加细胞溶液的入口贮存器。然后可以通过泵(例
如高压泵)以高速和/或高压将细胞溶液泵送到相互作用室中以产生剪切流体力。然后可以
将得到的裂解物收集在一个或多个输出贮存器中。可以调节泵的速度和/或压力以调节细
胞裂解并增强产物(例如病毒颗粒)的回收。其他机械裂解方法可以包括通过刮擦对细胞的
物理破坏。
解”。可以根据机械裂解使用的机械力可以包括高剪切流体力。根据这种机械裂解方法，可
以使用微流化器。微流化器通常包括可以施加细胞溶液的入口贮存器。然后可以通过泵(例
如高压泵)以高速和/或高压将细胞溶液泵送到相互作用室中以产生剪切流体力。然后可以
将得到的裂解物收集在一个或多个输出贮存器中。可以调节泵的速度和/或压力以调节细
胞裂解并增强产物(例如病毒颗粒)的回收。其他机械裂解方法可以包括通过刮擦对细胞的
物理破坏。
[0906] 可以基于待裂解细胞的细胞培养模式选择细胞裂解方法。例如，对于贴壁细胞培养物，可以使用一些化学和机械裂解方法。这样的机械裂解方法可以包括冻融裂解或刮擦。
在另一个实例中，贴壁细胞培养物的化学裂解可以通过用包含表面活性剂(如Triton-X-
100)的裂解溶液孵育来进行。在一些情况下，可以用另外一种核酸酶来处理从贴壁细胞培
养物产生的细胞裂解物，以降低由释放的DNA引起的裂解物的粘度。
在另一个实例中，贴壁细胞培养物的化学裂解可以通过用包含表面活性剂(如Triton-X-
100)的裂解溶液孵育来进行。在一些情况下，可以用另外一种核酸酶来处理从贴壁细胞培
养物产生的细胞裂解物，以降低由释放的DNA引起的裂解物的粘度。
[0907] 在一个实施方案中，用于在无裂解的情况下收获AAV颗粒的方法可以用于有效且可扩大的AAV颗粒生产。在一个非限制性实例中，如美国专利申请20090275107中所述，可以
通过以下步骤来生产AAV颗粒：在细胞培养物中培养缺乏肝素结合位点的AAV颗粒，从而使
AAV颗粒进入到上清液，从培养物中收集上清液；以及从上清液中分离AAV颗粒，所述文献的
内容通过引用的方式以其整体并入本文。
通过以下步骤来生产AAV颗粒：在细胞培养物中培养缺乏肝素结合位点的AAV颗粒，从而使
AAV颗粒进入到上清液，从培养物中收集上清液；以及从上清液中分离AAV颗粒，所述文献的
内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0908] 澄清
[0909] 可以对包含病毒颗粒的细胞裂解物进行澄清。澄清是指从细胞裂解物中纯化病毒颗粒所采取的初始步骤。澄清通过去除较大的不溶性碎片来制备用于进一步纯化的裂解
物。澄清步骤可以包括但不限于离心和过滤。在澄清期间，可以低速进行离心以仅去除较大
的碎片。类似地，可以使用具有较大孔径的过滤器进行过滤，从而仅去除较大的碎屑。在某
些情况下，在澄清过程中可以使用切向流过滤。病毒澄清的目标包括细胞裂解物的高通量
处理和优化最终病毒回收。包括澄清步骤的优点包括用于处理较大体积的裂解物的可扩展
性。在一些实施方案中，澄清可以根据以下文献中显示的任何方法进行：美国专利号8,524,
446、5,756,283、6,258,595、6,261,551、6,270,996、6,281,010、6,365,394、6,475,769、6,
482,634、6,485,966、6,943,019、6,953,690、7,022,519、7,238,526、7,291,498、7,491,
508；US公开号US2013/0045186、US2011/0263027、US2011/0151434、US2003/0138772；和国
际公开号WO2002012455、WO1996039530、WO1998010088、WO1999014354、WO1999015685、
WO1999047691、WO2000055342、WO2000075353和WO2001023597，其每一篇的内容均通过引用
的方式以其整体并入本文。
物。澄清步骤可以包括但不限于离心和过滤。在澄清期间，可以低速进行离心以仅去除较大
的碎片。类似地，可以使用具有较大孔径的过滤器进行过滤，从而仅去除较大的碎屑。在某
些情况下，在澄清过程中可以使用切向流过滤。病毒澄清的目标包括细胞裂解物的高通量
处理和优化最终病毒回收。包括澄清步骤的优点包括用于处理较大体积的裂解物的可扩展
性。在一些实施方案中，澄清可以根据以下文献中显示的任何方法进行：美国专利号8,524,
446、5,756,283、6,258,595、6,261,551、6,270,996、6,281,010、6,365,394、6,475,769、6,
482,634、6,485,966、6,943,019、6,953,690、7,022,519、7,238,526、7,291,498、7,491,
508；US公开号US2013/0045186、US2011/0263027、US2011/0151434、US2003/0138772；和国
际公开号WO2002012455、WO1996039530、WO1998010088、WO1999014354、WO1999015685、
WO1999047691、WO2000055342、WO2000075353和WO2001023597，其每一篇的内容均通过引用
的方式以其整体并入本文。
[0910] 通过过滤澄清细胞裂解物的方法在本领域中是充分理解的，并且可以根据多种可用方法进行，包括但不限于被动过滤和流动过滤。使用的过滤器可以包括各种材料和孔径。
例如，细胞裂解物过滤器可以包含约1μM至约5μM、约0.5μM至约2μM、约0.1μM至约1μM、约
0.05μM至约0.05μM和约0.001μM至约0.1μM的孔尺寸。细胞裂解物过滤器的示例性孔尺寸可
以包括但不限于2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、
0.4、0.3、0.2、0.1、0.95、0.9、0.85、0.8、0.75、0.7、0.65、0.6、0.55、0.5、0.45、0.4、0.35、
0.3、0.25、0.2、0.15、0.1、0.05、0.22、0.21、0.20、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、
0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01、0.02、0.019、0.018、
0.017、0.016、0.015、0.014、0.013、0.012、0.011、0.01、0.009、0.008、0.007、0.006、0.005、
0.004、0.003、0.002、0.001和0.001μM。在一个实施方案中，澄清可以包括通过具有2.0μM孔
尺寸的过滤器过滤以除去大的碎片，然后通过具有0.45μM孔尺寸的过滤器以除去完整的细
胞。
例如，细胞裂解物过滤器可以包含约1μM至约5μM、约0.5μM至约2μM、约0.1μM至约1μM、约
0.05μM至约0.05μM和约0.001μM至约0.1μM的孔尺寸。细胞裂解物过滤器的示例性孔尺寸可
以包括但不限于2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、
0.4、0.3、0.2、0.1、0.95、0.9、0.85、0.8、0.75、0.7、0.65、0.6、0.55、0.5、0.45、0.4、0.35、
0.3、0.25、0.2、0.15、0.1、0.05、0.22、0.21、0.20、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、
0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01、0.02、0.019、0.018、
0.017、0.016、0.015、0.014、0.013、0.012、0.011、0.01、0.009、0.008、0.007、0.006、0.005、
0.004、0.003、0.002、0.001和0.001μM。在一个实施方案中，澄清可以包括通过具有2.0μM孔
尺寸的过滤器过滤以除去大的碎片，然后通过具有0.45μM孔尺寸的过滤器以除去完整的细
胞。
[0911] 过滤器材料可以由多种材料组成。这些材料可以包括但不限于聚合物材料和金属材料(例如烧结金属和有孔铝)。示例性材料可以包括但不限于尼龙、纤维素材料(例如乙酸
纤维素)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚醚砜、聚酰胺、聚砜、聚丙烯和聚对苯二甲酸乙二醇酯。在
一些情况下，可用于澄清细胞裂解物的过滤器可以包括但不限于ULTIPLEAT PROFILETM过滤
器(Pall Corporation，Port Washington，NY)、SUPORTM膜过滤器(Pall Corporation，Port
Washington，NY)。
纤维素)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚醚砜、聚酰胺、聚砜、聚丙烯和聚对苯二甲酸乙二醇酯。在
一些情况下，可用于澄清细胞裂解物的过滤器可以包括但不限于ULTIPLEAT PROFILETM过滤
器(Pall Corporation，Port Washington，NY)、SUPORTM膜过滤器(Pall Corporation，Port
Washington，NY)。
[0912] 在一些情况下，可以进行流动过滤以增加过滤速度和/或有效性。在一些情况下，流动过滤可以包括真空过滤。根据这些方法，在过滤器的与待过滤的细胞裂解物相反的一
侧形成真空。在一些情况下，细胞裂解物可以通过离心力通过过滤器。在一些情况下，使用
泵来迫使细胞裂解物通过澄清过滤器。可以通过调节通道尺寸和/或流体压力中的一个来
调节通过一个或多个过滤器的细胞裂解物的流速。
侧形成真空。在一些情况下，细胞裂解物可以通过离心力通过过滤器。在一些情况下，使用
泵来迫使细胞裂解物通过澄清过滤器。可以通过调节通道尺寸和/或流体压力中的一个来
调节通过一个或多个过滤器的细胞裂解物的流速。
[0913] 根据一些实施方案，细胞裂解物可以通过离心澄清。离心可以用于沉淀裂解物中的不溶性颗粒。在澄清期间，离心强度[以重力单位(g)表示，其表示标准重力的倍数]可以
低于随后的纯化步骤。在一些情况下，可以以约200g至约800g、约500g至约1500g、约1000g
至约5000g、约1200g至约10000g或约8000g至约15000g对细胞裂解物进行离心。在一些实施
方案中，细胞裂解物离心以8000g进行15分钟。在一些情况下，可以进行密度梯度离心以通
过沉降速率分配细胞裂解物中的微粒。根据本发明的方法使用的梯度可以包括但不限于氯
化铯梯度和碘克沙醇步骤梯度。
低于随后的纯化步骤。在一些情况下，可以以约200g至约800g、约500g至约1500g、约1000g
至约5000g、约1200g至约10000g或约8000g至约15000g对细胞裂解物进行离心。在一些实施
方案中，细胞裂解物离心以8000g进行15分钟。在一些情况下，可以进行密度梯度离心以通
过沉降速率分配细胞裂解物中的微粒。根据本发明的方法使用的梯度可以包括但不限于氯
化铯梯度和碘克沙醇步骤梯度。
[0914] 纯化：色谱法
[0915] 在一些情况下，可以通过一种或多种色谱方法从澄清的细胞裂解物中纯化AAV颗粒。色谱法是指本领域已知的用于从混合物中分离出一种或多种元素的任何数量的方法。
这样的方法可以包括但不限于离子交换色谱法(例如阳离子交换色谱法和阴离子交换色谱
法)、免疫亲和色谱法和尺寸排阻色谱法。在一些实施方案中，病毒色谱法的方法可以包括
以下文献中教导的那些中的任何一种：美国专利号5,756,283、6,258,595、6,261,551、6,
270,996、6,281,010、6,365,394、6,475,769、6,482,634、6,485,966、6,943,019、6,953,
690、7,022,519、7,238,526、7,291,498和7,491,508或国际公开号WO1996039530、
WO1998010088、WO1999014354、WO1999015685、WO1999047691、WO2000055342、WO2000075353
和WO2001023597，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。
这样的方法可以包括但不限于离子交换色谱法(例如阳离子交换色谱法和阴离子交换色谱
法)、免疫亲和色谱法和尺寸排阻色谱法。在一些实施方案中，病毒色谱法的方法可以包括
以下文献中教导的那些中的任何一种：美国专利号5,756,283、6,258,595、6,261,551、6,
270,996、6,281,010、6,365,394、6,475,769、6,482,634、6,485,966、6,943,019、6,953,
690、7,022,519、7,238,526、7,291,498和7,491,508或国际公开号WO1996039530、
WO1998010088、WO1999014354、WO1999015685、WO1999047691、WO2000055342、WO2000075353
和WO2001023597，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。
[0916] 在一些实施方案中，离子交换色谱法可以用于分离病毒颗粒。离子交换色谱法基于衣壳蛋白和存在于固定相上的带电荷位点之间的电荷-电荷相互作用用于结合病毒颗
粒，所述固定相通常是病毒制剂(例如澄清的裂解物)通过的柱。在施加病毒制备物后，然后
可以通过施加洗脱溶液来洗脱结合的病毒颗粒以破坏电荷-电荷相互作用。可以通过调节
盐浓度和/或pH来优化洗脱溶液以增强结合的病毒颗粒的回收。根据被分离的病毒衣壳的
电荷，可以选择阳离子或阴离子交换色谱法。离子交换色谱法的方法可以包括但不限于美
国专利号7,419,817、6,143,548、7,094,604、6,593,123、7,015,026和8,137,948中所教导
的那些中的任何一种，所述专利中的每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。
粒，所述固定相通常是病毒制剂(例如澄清的裂解物)通过的柱。在施加病毒制备物后，然后
可以通过施加洗脱溶液来洗脱结合的病毒颗粒以破坏电荷-电荷相互作用。可以通过调节
盐浓度和/或pH来优化洗脱溶液以增强结合的病毒颗粒的回收。根据被分离的病毒衣壳的
电荷，可以选择阳离子或阴离子交换色谱法。离子交换色谱法的方法可以包括但不限于美
国专利号7,419,817、6,143,548、7,094,604、6,593,123、7,015,026和8,137,948中所教导
的那些中的任何一种，所述专利中的每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。
[0917] 在一些实施方案中，可以使用免疫亲和色谱法。免疫亲和色谱法是利用一种或多种免疫化合物(例如抗体或抗体相关结构)来保留病毒颗粒的色谱法形式。免疫化合物可以
特异性结合病毒颗粒表面上的一种或多种结构，包括但不限于一种或多种病毒外壳蛋白。
在一些情况下，免疫化合物可能对特定病毒变体具有特异性。在一些情况下，免疫化合物可
以与多种病毒变体结合。在一些实施方案中，免疫化合物可以包括重组单链抗体。这样的重
组单链抗体可以包括以下文献中描述的那些：Smith，R.H.et al.，2009.Mol.Ther.17(11)：
1888-96，其内容通过引用的方式以其整体并入本文。这样的免疫化合物能够结合几种AAV
衣壳变体，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV6和AAV8。
特异性结合病毒颗粒表面上的一种或多种结构，包括但不限于一种或多种病毒外壳蛋白。
在一些情况下，免疫化合物可能对特定病毒变体具有特异性。在一些情况下，免疫化合物可
以与多种病毒变体结合。在一些实施方案中，免疫化合物可以包括重组单链抗体。这样的重
组单链抗体可以包括以下文献中描述的那些：Smith，R.H.et al.，2009.Mol.Ther.17(11)：
1888-96，其内容通过引用的方式以其整体并入本文。这样的免疫化合物能够结合几种AAV
衣壳变体，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV6和AAV8。
[0918] 在一些实施方案中，可以使用尺寸排阻色谱法(SEC)。SEC可以包括使用凝胶根据尺寸分离颗粒。在病毒颗粒纯化中，SEC过滤有时被称为“抛光(polishing)”。在一些情况
下，可以进行SEC以产生接近同质的最终产物。在一些情况下，这些最终产物可以用于临床
前研究和/或临床研究(Kotin，R.M.2011.Human Molecular Genetics.20(1)：R2-R6，其内
容通过引用的方式以其整体并入本文)。在一些情况下，SEC可以根据美国专利号6,143,
548，7,015,026，8,476,418，6,410,300，8,476,418，7,419,817，7,094,604，6,593,123和8,
137,948中教导的任何方法进行，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。
下，可以进行SEC以产生接近同质的最终产物。在一些情况下，这些最终产物可以用于临床
前研究和/或临床研究(Kotin，R.M.2011.Human Molecular Genetics.20(1)：R2-R6，其内
容通过引用的方式以其整体并入本文)。在一些情况下，SEC可以根据美国专利号6,143,
548，7,015,026，8,476,418，6,410,300，8,476,418，7,419,817，7,094,604，6,593,123和8,
137,948中教导的任何方法进行，其每一篇的内容均通过引用的方式以其整体并入本文。
[0919] 在一个实施方案中，可以使用美国专利号US 6146874中描述的方法分离或纯化包含至少一种AAV颗粒的组合物，该专利的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0920] 在一个实施方案中，可以使用美国专利号US 6660514中描述的方法分离或纯化包含至少一种AAV颗粒的组合物，该专利的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0921] 在一个实施方案中，可以使用美国专利号US 8283151中描述的方法分离或纯化包含至少一种AAV颗粒的组合物，该专利的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0922] 在一个实施方案中，可以使用美国专利号US 8524446中描述的方法分离或纯化包含至少一种AAV颗粒的组合物，该专利的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0923] II.制剂和递送
[0924] 药物组合物和制剂
[0925] 尽管本文提供的药物组合物(例如，包含待递送的有效负载的那些调节性多核苷酸(包括编码质粒或表达载体，如病毒，例如AAV))的描述主要涉及适合施用于人的药物组
合物，本领域技术人员将理解这样的组合物通常适合施用于任何其他动物，例如，施用于非
人类动物，例如，非人类哺乳动物。对适合施用于人的药物组合物进行修改以使组合物适合
施用于各种动物是很好理解的，并且普通技术的兽医药理学家可以仅仅通过平常的(如果
有的话)实验即可设计和/或进行这样的修改。预期的药物组合物所施用的受试者包括但不
限于人和/或其他灵长类动物；哺乳动物，包括商业上相关的哺乳动物，如牛、猪、马、羊、猫、
狗、小鼠和/或大鼠；和/或鸟类，包括商业上相关的鸟类，如家禽、鸡、鸭、鹅和/或火鸡。
合物，本领域技术人员将理解这样的组合物通常适合施用于任何其他动物，例如，施用于非
人类动物，例如，非人类哺乳动物。对适合施用于人的药物组合物进行修改以使组合物适合
施用于各种动物是很好理解的，并且普通技术的兽医药理学家可以仅仅通过平常的(如果
有的话)实验即可设计和/或进行这样的修改。预期的药物组合物所施用的受试者包括但不
限于人和/或其他灵长类动物；哺乳动物，包括商业上相关的哺乳动物，如牛、猪、马、羊、猫、
狗、小鼠和/或大鼠；和/或鸟类，包括商业上相关的鸟类，如家禽、鸡、鸭、鹅和/或火鸡。
[0926] 在一些实施方案中，将组合物施用于人、人类患者或受试者。出于本发明的目的，短语“活性成分”通常是指携带有效负载的病毒载体或是指如本文所述的由病毒载体递送
的调节性多核苷酸有效负载分子。
的调节性多核苷酸有效负载分子。
[0927] 本文所述的药物组合物的制剂可以通过药理学领域已知或今后开发的任何方法制备。通常，这样的制备方法包括将活性成分与赋形剂和/或一种或多种其他辅助成分联合
的步骤，然后，如果必要和/或期望时，将产品分成、成形和/或包装成期望的单剂量或多剂
量单位。
的步骤，然后，如果必要和/或期望时，将产品分成、成形和/或包装成期望的单剂量或多剂
量单位。
[0928] 根据本发明的药物组合物中的活性成分、药学上可接受的赋形剂和/或任何其他成分的相对量将根据所治疗的受试者的身份、大小和/或状况以及进一步地根据组合物的
施用途径而变化。
施用途径而变化。
[0929] 可以使用一种或多种赋形剂来配制调节性多核苷酸或编码它们的病毒载体以：(1)增加稳定性；(2)增加细胞转染或转导；(3)允许持续或延迟释放；或(4)改变生物分布
(例如，将病毒载体靶向至特定组织或细胞类型)。
(例如，将病毒载体靶向至特定组织或细胞类型)。
[0930] 本发明的制剂可以包括但不限于盐水、类脂质、脂质体、脂质纳米颗粒、聚合物、脂质体复合物(lipoplexes)、核壳纳米颗粒、肽、蛋白质、用病毒载体转染的细胞(例如，用于
移植入受试者)、纳米颗粒模拟物，及其组合。此外，可以使用自组装核酸纳米颗粒来配制本
发明的病毒载体。
移植入受试者)、纳米颗粒模拟物，及其组合。此外，可以使用自组装核酸纳米颗粒来配制本
发明的病毒载体。
[0931] 本文所述的药物组合物的制剂可以通过药理学领域已知的或今后开发的任何方法制备。通常，这样的制备方法包括将活性成分与赋形剂和/或一种或多种其他辅助成分联
合的步骤。
合的步骤。
[0932] 根据本发明的药物组合物可以作为单单位剂量(single unit dose)和/或作为多个单次单位剂量成批(in bulk)地制备、包装和/或销售。如本文所用，“单位剂量”是指包含
预定量活性成分的药物组合物的离散量。活性成分的量通常等于要施用于受试者的活性成
分的剂量和/或这种剂量的方便分数，举例来说，如这种剂量的一半或三分之一。
预定量活性成分的药物组合物的离散量。活性成分的量通常等于要施用于受试者的活性成
分的剂量和/或这种剂量的方便分数，举例来说，如这种剂量的一半或三分之一。
[0933] 根据本发明的药物组合物中的活性成分、药学上可接受的赋形剂和/或任何其他成分的相对量可以根据所治疗的受试者的身份、尺寸和/或状况以及进一步地根据组合物
的施用途径而变化。例如，组合物可以包含0.1％至99％(w/w)之间的活性成分。举例来说，
组合物可以包含0.1％至100％之间，例如，.5至50％之间、1-30％之间、5-80％之间、至少
80％(w/w)的活性成分。
的施用途径而变化。例如，组合物可以包含0.1％至99％(w/w)之间的活性成分。举例来说，
组合物可以包含0.1％至100％之间，例如，.5至50％之间、1-30％之间、5-80％之间、至少
80％(w/w)的活性成分。
[0934] 在一些实施方案中，本文描述的制剂可以含有至少一种有效负载分子。作为一个非限制性实例，制剂可以含有1、2、3、4或5种调节性多核苷酸有效负载分子。在一个实施方
案中，制剂可以含有靶向蛋白质的调节性多核苷酸有效负载构建体，所述蛋白质选自以下
类别，例如但不限于人蛋白质、兽蛋白质、细菌蛋白质、生物蛋白质、抗体、免疫原性蛋白质、
治疗性肽和蛋白质、分泌蛋白质、质膜蛋白质、细胞质和细胞骨架蛋白质、细胞内膜结合蛋
白质、核蛋白质、与人类疾病相关的蛋白质和/或与非人类疾病相关的蛋白质。在一个实施
方案中，制剂含有至少三种靶向蛋白质的有效负载(payload)构建体。
案中，制剂可以含有靶向蛋白质的调节性多核苷酸有效负载构建体，所述蛋白质选自以下
类别，例如但不限于人蛋白质、兽蛋白质、细菌蛋白质、生物蛋白质、抗体、免疫原性蛋白质、
治疗性肽和蛋白质、分泌蛋白质、质膜蛋白质、细胞质和细胞骨架蛋白质、细胞内膜结合蛋
白质、核蛋白质、与人类疾病相关的蛋白质和/或与非人类疾病相关的蛋白质。在一个实施
方案中，制剂含有至少三种靶向蛋白质的有效负载(payload)构建体。
[0935] 在一些实施方案中，药学上可接受的赋形剂可以是至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％纯。在一些实施方案中，赋形剂被批准用于人类和用于兽
用。在一些实施方案中，赋形剂可以由美国食品和药品管理局批准。在一些实施方案中，赋
形剂可以是药用级的。在一些实施方案中，赋形剂可以满足美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、
英国药典和/或国际药典的标准。
用。在一些实施方案中，赋形剂可以由美国食品和药品管理局批准。在一些实施方案中，赋
形剂可以是药用级的。在一些实施方案中，赋形剂可以满足美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、
英国药典和/或国际药典的标准。
[0936] 如本文所用，赋形剂包括但不限于任何和所有溶剂、分散介质、稀释剂或其他液体载体、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂等以适合于所需的特
定剂型。用于配制药物组合物的各种赋形剂和制备该组合物的技术是本领域已知的(参见
Remington：The Science and Practice of Pharmacy，21st Edition，A.R.Gennaro，
Lippincott，Williams&Wilkins，Baltimore，MD，2006；通过引用的方式以其整体并入本
文)。可以预期常规赋形剂介质的使用涵盖在本发明的范围内，除非任何常规赋形剂介质可
能与物质或其衍生物不相容，例如产生任何不期望的生物效应或者其他以有害的方式与药
物组合物的任何其他(一种或多种)组分相互作用。
定剂型。用于配制药物组合物的各种赋形剂和制备该组合物的技术是本领域已知的(参见
Remington：The Science and Practice of Pharmacy，21st Edition，A.R.Gennaro，
Lippincott，Williams&Wilkins，Baltimore，MD，2006；通过引用的方式以其整体并入本
文)。可以预期常规赋形剂介质的使用涵盖在本发明的范围内，除非任何常规赋形剂介质可
能与物质或其衍生物不相容，例如产生任何不期望的生物效应或者其他以有害的方式与药
物组合物的任何其他(一种或多种)组分相互作用。
[0937] 示例性稀释剂包括但不限于碳酸钙、碳酸钠、磷酸钙、磷酸二钙、硫酸钙、磷酸氢钙、磷酸钠乳糖、蔗糖、纤维素、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、氯化钠、干淀
粉、玉米淀粉、糖粉等，和/或它们的组合。
粉、玉米淀粉、糖粉等，和/或它们的组合。
[0938] 非活性成分
[0939] 在一些实施方案中，调节性多核苷酸制剂可以包含至少一种赋形剂，其是非活性成分。如本文所用，术语“非活性成分”是指包括在制剂中的一种或多种非活性剂。在一些实
施方案中，可以在本发明的制剂中使用的非活性成分中的全部、无一或一些可以由美国食
品和药品管理局(FDA)批准。
施方案中，可以在本发明的制剂中使用的非活性成分中的全部、无一或一些可以由美国食
品和药品管理局(FDA)批准。
[0940] 携带本文公开的调节性多核苷酸的病毒载体的制剂可以包括阳离子或阴离子。在一个实施方案中，制剂包括金属阳离子，例如但不限于Zn2+、Ca2+、Cu2+、Mg+及其组合。作为
一个非限制性实例，制剂可以包括与金属阳离子络合的聚合物和调节性多核苷酸(参见例
如美国专利号6,265,389和6,555,525，其每一篇通过引用的方式以其整体并入本文)。
一个非限制性实例，制剂可以包括与金属阳离子络合的聚合物和调节性多核苷酸(参见例
如美国专利号6,265,389和6,555,525，其每一篇通过引用的方式以其整体并入本文)。
[0941] 递送
[0942] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用欧洲专利申请号EP1857552中描述的AAV病毒粒子的递送方法施用或递送，该申请的内容通过引用的方式以
其整体并入本文。
其整体并入本文。
[0943] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用欧洲专利申请号EP2678433中描述的使用AAV载体递送蛋白质的方法施用或递送，该申请的内容通过引用的
方式以其整体并入本文。
方式以其整体并入本文。
[0944] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用美国专利号US 5858351中描述的使用AAV载体递送DNA分子的方法施用或递送，该专利的内容通过引用的
方式以其整体并入本文。
方式以其整体并入本文。
[0945] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用美国专利号US 6211163中描述的将DNA递送至血流的方法施用或递送，该专利的内容通过引用的方式以其
整体并入本文。
整体并入本文。
[0946] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用美国专利号US 6325998中描述的递送AAV病毒粒子的方法施用或递送，该专利的内容通过引用的方式以其
整体并入本文。
整体并入本文。
[0947] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用美国专利号US 6335011中描述的将DNA递送至肌肉细胞的方法施用或递送，该专利的内容通过引用的方式
以其整体并入本文。
以其整体并入本文。
[0948] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用美国专利号US 6610290中描述的将DNA递送至肌肉细胞和组织的方法施用或递送，该专利的内容通过引用
的方式以其整体并入本文。
的方式以其整体并入本文。
[0949] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用美国专利号US 7704492中描述的将DNA递送至肌肉细胞的方法施用或递送，该专利的内容通过引用的方式
以其整体并入本文。
以其整体并入本文。
[0950] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用美国专利号US 7112321中描述的将有效负载递送至骨骼肌的方法施用或递送，该专利的内容通过引用的
方式以其整体并入本文。
方式以其整体并入本文。
[0951] 在一个实施方案中，病毒载体可以使用美国专利号US 7588757中描述的将有效负载递送至中枢神经系统的方法施用或递送，该专利的内容通过引用的方式以其整体并入本
文。
文。
[0952] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用美国专利号US 8283151中描述的递送有效负载的方法施用或递送，该专利的内容通过引用的方式以其整
体并入本文。
体并入本文。
[0953] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用美国专利号US 8318687中描述的递送用于治疗阿尔茨海默病的有效负载的方法施用或递送，该专利的内
容通过引用的方式以其整体并入本文。
容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0954] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用国际专利公开号WO2012144446中描述的递送负载的方法施用或递送，该文献的内容通过引用的方式以其整
体并入本文。
体并入本文。
[0955] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用国际专利公开号WO2001089583中描述的使用谷氨酸脱羧酶(GAD)递送载体递送有效负载的方法施用或递
送，该文献的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
送，该文献的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0956] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用国际专利公开号WO2001096587中描述的递送有效负载的方法施用或递送，该文献的内容通过引用的方式以
其整体并入本文。
其整体并入本文。
[0957] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用国际专利公开号WO2002014487中描述的将有效负载递送至肌肉组织的方法施用或递送，该文献的内容通过
引用的方式以其整体并入本文。
引用的方式以其整体并入本文。
[0958] 在一个实施方案中，包含调节性多核苷酸的病毒载体可以使用国际专利公开号WO2012057363中描述的将有效负载递送至神经细胞的方法施用或递送，该文献的内容通过
引用的方式以其整体并入本文。
引用的方式以其整体并入本文。
[0959] 本文所述的病毒载体的药物组合物可以通过生物利用度、治疗窗和/或分布容积中的一种或多种来表征。
[0960] 在一个实施方案中，可以配制包含调节性多核苷酸的病毒载体。作为一个非限制性实例，可以优化制剂的比重(baricity)和/或克分子渗透压浓度以确保在中枢神经系统
或中枢神经系统的区域或组件中的最佳药物分布。
或中枢神经系统的区域或组件中的最佳药物分布。
[0961] 在一个实施方案中，可以通过单途径施用将包含调节性多核苷酸的病毒载体递送至受试者。
[0962] 在一个实施方案中，可以经由多位点施用途径将包含调节性多核苷酸的病毒载体递送至受试者。可以在2、3、4、5或多于5个位点向受试者施用包含调节性多核苷酸的病毒载
体。
体。
[0963] 在一个实施方案中，可以使用推注向受试者施用本文所述的包含调节性多核苷酸的病毒载体。
[0964] 在一个实施方案中，可以在数分钟、数小时或数天的时间内使用持续递送向受试者施用本文所述的包含调节性多核苷酸的病毒载体。输注速率可以根据受试者、分布、制剂
或另一递送参数而改变。
或另一递送参数而改变。
[0965] 在一个实施方案中，导管可以位于脊柱中多于一个位点处用于多位点递送。包含调节性多核苷酸的病毒载体可以以连续输注和/或推注方式递送。每个递送位点可以是不
同的给药方案，或者可以对每个递送位点使用相同的给药方案。作为一个非限制性实例，递
送部位可以在子宫颈和腰部区域中。作为另一个非限制性实例，递送位点可以在子宫颈区
域中。作为另一个非限制性实例，递送位点可以在腰部区域中。
同的给药方案，或者可以对每个递送位点使用相同的给药方案。作为一个非限制性实例，递
送部位可以在子宫颈和腰部区域中。作为另一个非限制性实例，递送位点可以在子宫颈区
域中。作为另一个非限制性实例，递送位点可以在腰部区域中。
[0966] 在一个实施方案中，可以在递送本文所述的包含调节性多核苷酸的病毒载体之前对受试者进行脊柱解剖学和病理学分析。作为一个非限制性实例，与没有脊柱侧凸的受试
者相比，患有脊柱侧凸的受试者可以具有不同的给药方案和/或导管位置。
者相比，患有脊柱侧凸的受试者可以具有不同的给药方案和/或导管位置。
[0967] 在一个实施方案中，在递送包含调节性多核苷酸的病毒载体期间受试者脊柱的取向可以垂直于地面。
[0968] 在另一个实施方案中，在递送包含调节性多核苷酸的病毒载体期间受试者脊柱的取向可以与地面水平。
[0969] 在一个实施方案中，在递送包含调节性多核苷酸的病毒载体期间，受试者的脊柱与地面相比可以成一角度。受试者的脊柱与地面相比的角度可以是至少10度、20度、30度、
40度、50度、60度、70度、80度、90度、100度、110度、120度、130度、140度、150度或180度。
40度、50度、60度、70度、80度、90度、100度、110度、120度、130度、140度、150度或180度。
[0970] 在一个实施方案中，选择递送方法和持续时间以在脊髓中提供广泛的转导。作为一个非限制性实例，鞘内递送用于沿着脊髓的喙-尾长度提供广泛的转导。作为另一个非限
制性实例，多部位输注沿着脊髓的喙-尾长度提供更均匀的转导。作为又一个非限制性实
例，延长的输注沿着脊髓的喙-尾长度提供更均匀的转导。
制性实例，多部位输注沿着脊髓的喙-尾长度提供更均匀的转导。作为又一个非限制性实
例，延长的输注沿着脊髓的喙-尾长度提供更均匀的转导。
[0971] 引入到细胞中
[0972] 可以使用多种方法中的任何一种将本发明的调节性多核苷酸引入到宿主细胞中。可以产生包含调节性多核苷酸的病毒载体的感染。合适的病毒载体的实例包括复制缺陷型
逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关载体和慢病毒载体。
逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关载体和慢病毒载体。
[0973] 根据本发明，用于治疗和/或诊断的病毒载体包含已被蒸馏或减少至转导感兴趣的核酸有效负载或载质(cargo)所必需的最小组分的病毒。
[0974] 以这种方式，病毒载体被工程化为用于特异性递送同时缺乏野生型病毒中发现的有害复制和/或整合特征的载体。
[0975] 如本文所用，“载体”是转运、转导或以其他方式充当异源分子(如本发明的调节性多核苷酸)的载体的任何分子或部分。“病毒载体”是包含编码或包含感兴趣的有效负载分
子的一个或多个多核苷酸区域的载体，例如转基因、编码多肽或多个多肽的多核苷酸或调
节性核酸。本发明的病毒载体可以重组生产，并且可以是基于腺相关病毒(AAV)亲本或参考
序列。可以用于本发明的血清型包括由AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、
AAV9、AAV9.47、AAV9(hu14)、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAV-
PHP.A和/或AAV-PHP.B产生的那些中的任何血清型。
子的一个或多个多核苷酸区域的载体，例如转基因、编码多肽或多个多肽的多核苷酸或调
节性核酸。本发明的病毒载体可以重组生产，并且可以是基于腺相关病毒(AAV)亲本或参考
序列。可以用于本发明的血清型包括由AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、
AAV9、AAV9.47、AAV9(hu14)、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAV-
PHP.A和/或AAV-PHP.B产生的那些中的任何血清型。
[0976] 在一个实施方案中，可以用于本发明的血清型可以是AAV-DJ8。AAV-DJ8的氨基酸序列可以包含两个或更多个突变以除去肝素结合结构域(HBD)。作为一个非限制性实例，在
美国专利号7,588,772(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中描述为SEQ ID NO：1
的AAV-DJ序列，可以包含两个突变：(1)R587Q，其中氨基酸587处的精氨酸(R；Arg)改变为谷
氨酰胺(Q；Gln)和(2)R590T，其中氨基酸590处的精氨酸(R；Arg)改变为苏氨酸(T；Thr)。作
为另一个非限制性实例，可以包含三个突变：(1)K406R，其中氨基酸406处的赖氨酸(K；Lys)
改变为精氨酸(R；Arg)，(2)R587Q，其中氨基酸587处的精氨酸(R；Arg)改变为谷氨酰胺(Q；
Gln)和(3)R590T，其中氨基酸590处的精氨酸(R；Arg)改变为苏氨酸(T；Thr)。
美国专利号7,588,772(其内容通过引用的方式以其整体并入本文)中描述为SEQ ID NO：1
的AAV-DJ序列，可以包含两个突变：(1)R587Q，其中氨基酸587处的精氨酸(R；Arg)改变为谷
氨酰胺(Q；Gln)和(2)R590T，其中氨基酸590处的精氨酸(R；Arg)改变为苏氨酸(T；Thr)。作
为另一个非限制性实例，可以包含三个突变：(1)K406R，其中氨基酸406处的赖氨酸(K；Lys)
改变为精氨酸(R；Arg)，(2)R587Q，其中氨基酸587处的精氨酸(R；Arg)改变为谷氨酰胺(Q；
Gln)和(3)R590T，其中氨基酸590处的精氨酸(R；Arg)改变为苏氨酸(T；Thr)。
[0977] AAV载体还可以包含自身互补的AAV载体(scAAV)。scAAV载体含有两条DNA链，它们一起退火形成双链DNA。通过跳过第二链合成，scAAV允许在细胞中快速表达。
[0978] 在一个实施方案中，本发明中使用的AAV载体是scAAV。
[0979] 在一个实施方案中，可以将调节性多核苷酸引入来自任何相关物种的细胞中，所述物种例如但不限于人、狗、小鼠、大鼠或猴。
[0980] 在一个实施方案中，可以将调节性多核苷酸引入与待治疗的疾病相关的细胞中。作为一个非限制性实例，疾病是ALS，并且靶细胞是运动神经元和星形胶质细胞。
[0981] 在一个实施方案中，可以将调节性多核苷酸引入到具有高水平的靶序列内源表达的细胞中。
[0982] 在另一个实施方案中，可以将调节性多核苷酸引入到具有低水平的靶序列内源表达的细胞中。
[0983] 在一个实施方案中，细胞可以是具有高效率的AAV转导的细胞。
[0984] 在一个实施方案中，可以用于体外分析调节性多核苷酸的细胞包括但不限于HEK293、HeLa、人原代星形胶质细胞、人星形胶质细胞系(U251MG)、SH-SY5Y-神经元和人
iPSC-来源的运动神经元祖细胞。
iPSC-来源的运动神经元祖细胞。
[0985] III.施用和给药
[0986] 施用
[0987] 本发明的包含调节性多核苷酸的病毒载体可以通过任何导致治疗有效结果的途径施用。这些包括但不限于肠内(进入到肠中)、胃肠道、硬膜外(进入硬脑膜)、经口(经由口
腔)、透皮、硬膜外、大脑内(进入到大脑中)、脑室内(进入到脑室中)、表皮(应用于皮肤上)、
皮内(进入到皮肤本身中)、皮下(皮肤下面)、经鼻施用(通过鼻子)、静脉内(进入到静脉
中)、静脉推注、静脉滴注、动脉内(进入到动脉中)、肌内(进入到肌肉中)、心内(进入到心脏
中)、骨内输注(进入到骨髓中)、鞘内(进入到椎管中)、软膜下(在软膜(pia)和下层组织之
间)、腹膜内、(输注或注射到腹膜中)、膀胱内输注、玻璃体内、(通过眼睛)、海绵体内注射
(进入病理腔)、腔内(进入阴茎根部)、阴道内施用、子宫内、羊膜外施用、透皮(通过完整皮
肤扩散来全身分布)、透粘膜(通过粘膜扩散)、经阴道、吹气(鼻吸)、舌下、唇下、灌肠、滴眼
液(滴到结膜上)、滴耳剂、经耳(在耳朵中或通过耳朵)、经颊(指向脸颊)、结膜、皮肤、牙齿
(到一颗或多颗牙齿)、电渗透、子宫颈内膜、窦内、气管内、体外、血液透析、浸润、间质、腹
内、羊膜内、关节内、胆内、支气管内、囊内、软骨内(软骨内部)、尾部内(马尾内)、脑池内(小
脑延髓池内(cerebellomedularis))、角膜内(角膜内)、牙内(dental intracornal)、冠状
动脉内(冠状动脉内部)、阴茎海绵体内(阴茎的阴茎海绵体的可膨胀空间内)、椎间盘内(椎
间盘内部)、管内(腺体管内)、十二指肠内(十二指肠内部)、硬脑膜内(硬脑膜内或下方)、表
皮内(至表皮)、食管内(至食道)、胃内(在胃内)、龈内(在牙龈内)、回肠内(在小肠的远端部
分内)、病灶内(在局部病变内或直接引入到局部病变)、管腔(管的内腔内)、淋巴管内(淋巴
内)、髓内(在骨骼的骨髓腔内)、脑膜内(脑膜内部)、眼内(眼睛内)、卵巢内(卵巢内部)、心
包内(心包膜内)、胸膜内(胸膜内部)、前列腺内(前列腺内)、肺内(肺或其支气管内)、窦内
(鼻窦或眶周窦内)、椎管内(脊柱内)、滑膜内(关节的滑膜腔内)、腱内(肌腱内)、睾丸内(睾
丸内)、鞘内(脑脊髓轴任何水平的脑脊液内)、胸腔内(胸腔内)、小管内(在器官的小管内)、
瘤内(在肿瘤内)、鼓室内(在aurus介质内)、血管内(在一个或多个血管内)、心室内(在心室
内)、离子电渗疗法(通过电流，其中可溶性盐的离子迁移到身体组织内)、冲洗(水洗或冲洗
开放的伤口或体腔)、喉部(直接到喉部上)、鼻胃管(通过鼻子进入到胃中)、封闭敷裹技术
(局部途径施用，然后用遮盖该区域的敷料覆盖)、眼科(到外眼)、口咽(直接到口腔和咽
部)、肠胃外、经皮、关节周围、硬膜外、神经周、牙周、直肠、呼吸道(通过经口或经鼻吸入在
呼吸道内起局部或全身作用)、眼球后(在脑桥后面或眼球后面)、软组织、蛛网膜下、结膜
下、粘膜下、局部、经胎盘(通过胎盘或穿过胎盘)、经气管(通过气管壁)、经鼓室(穿过或通
过鼓室)、输尿管(到输尿管)、尿道(到尿道)、阴道、骶管阻滞、诊断、神经阻滞、胆道灌注、心
脏灌注、光分离置换法或脊椎。在具体实施方案中，组合物可以以允许它们穿过血脑屏障、
血管屏障或其他上皮屏障的方式施用。在一个实施方案中，用于施用途径的制剂可以包括
至少一种非活性成分。
腔)、透皮、硬膜外、大脑内(进入到大脑中)、脑室内(进入到脑室中)、表皮(应用于皮肤上)、
皮内(进入到皮肤本身中)、皮下(皮肤下面)、经鼻施用(通过鼻子)、静脉内(进入到静脉
中)、静脉推注、静脉滴注、动脉内(进入到动脉中)、肌内(进入到肌肉中)、心内(进入到心脏
中)、骨内输注(进入到骨髓中)、鞘内(进入到椎管中)、软膜下(在软膜(pia)和下层组织之
间)、腹膜内、(输注或注射到腹膜中)、膀胱内输注、玻璃体内、(通过眼睛)、海绵体内注射
(进入病理腔)、腔内(进入阴茎根部)、阴道内施用、子宫内、羊膜外施用、透皮(通过完整皮
肤扩散来全身分布)、透粘膜(通过粘膜扩散)、经阴道、吹气(鼻吸)、舌下、唇下、灌肠、滴眼
液(滴到结膜上)、滴耳剂、经耳(在耳朵中或通过耳朵)、经颊(指向脸颊)、结膜、皮肤、牙齿
(到一颗或多颗牙齿)、电渗透、子宫颈内膜、窦内、气管内、体外、血液透析、浸润、间质、腹
内、羊膜内、关节内、胆内、支气管内、囊内、软骨内(软骨内部)、尾部内(马尾内)、脑池内(小
脑延髓池内(cerebellomedularis))、角膜内(角膜内)、牙内(dental intracornal)、冠状
动脉内(冠状动脉内部)、阴茎海绵体内(阴茎的阴茎海绵体的可膨胀空间内)、椎间盘内(椎
间盘内部)、管内(腺体管内)、十二指肠内(十二指肠内部)、硬脑膜内(硬脑膜内或下方)、表
皮内(至表皮)、食管内(至食道)、胃内(在胃内)、龈内(在牙龈内)、回肠内(在小肠的远端部
分内)、病灶内(在局部病变内或直接引入到局部病变)、管腔(管的内腔内)、淋巴管内(淋巴
内)、髓内(在骨骼的骨髓腔内)、脑膜内(脑膜内部)、眼内(眼睛内)、卵巢内(卵巢内部)、心
包内(心包膜内)、胸膜内(胸膜内部)、前列腺内(前列腺内)、肺内(肺或其支气管内)、窦内
(鼻窦或眶周窦内)、椎管内(脊柱内)、滑膜内(关节的滑膜腔内)、腱内(肌腱内)、睾丸内(睾
丸内)、鞘内(脑脊髓轴任何水平的脑脊液内)、胸腔内(胸腔内)、小管内(在器官的小管内)、
瘤内(在肿瘤内)、鼓室内(在aurus介质内)、血管内(在一个或多个血管内)、心室内(在心室
内)、离子电渗疗法(通过电流，其中可溶性盐的离子迁移到身体组织内)、冲洗(水洗或冲洗
开放的伤口或体腔)、喉部(直接到喉部上)、鼻胃管(通过鼻子进入到胃中)、封闭敷裹技术
(局部途径施用，然后用遮盖该区域的敷料覆盖)、眼科(到外眼)、口咽(直接到口腔和咽
部)、肠胃外、经皮、关节周围、硬膜外、神经周、牙周、直肠、呼吸道(通过经口或经鼻吸入在
呼吸道内起局部或全身作用)、眼球后(在脑桥后面或眼球后面)、软组织、蛛网膜下、结膜
下、粘膜下、局部、经胎盘(通过胎盘或穿过胎盘)、经气管(通过气管壁)、经鼓室(穿过或通
过鼓室)、输尿管(到输尿管)、尿道(到尿道)、阴道、骶管阻滞、诊断、神经阻滞、胆道灌注、心
脏灌注、光分离置换法或脊椎。在具体实施方案中，组合物可以以允许它们穿过血脑屏障、
血管屏障或其他上皮屏障的方式施用。在一个实施方案中，用于施用途径的制剂可以包括
至少一种非活性成分。
[0988] 给药
[0989] 本发明提供了包括将根据本发明的病毒载体和它们的调节性多核苷酸有效负载或复合物施用于有需要的受试者的方法。可以使用有效预防、治疗、诊断或成像疾病、病症
和/或病况(例如，与工作记忆缺陷有关的疾病、障碍和/或病症)的任何量和任何施用途径
将病毒载体药物、成像、诊断或预防性组合物施用于受试者。所需的确切量将因受试者而
异，取决于受试者的物种、年龄和一般状况、疾病的严重程度、特定组合物、其施用方式，其
作用模式等。根据本发明的组合物通常配制成单位剂型，以便于施用和剂量均匀。然而，应
当理解，本发明组合物的每日总用量可以由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任何
特定患者的特定治疗有效剂量水平、预防有效剂量水平或适当的成像剂量水平将取决于多
种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所用具体化合物的活性；所用的具体组合
物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间、施用途径和所用的具体调节
性多核苷酸有效负荷的排泄速率；治疗的持续时间；与所用的具体化合物组合或配合使用
的药物；以及医学领域众所周知的相似因素。
和/或病况(例如，与工作记忆缺陷有关的疾病、障碍和/或病症)的任何量和任何施用途径
将病毒载体药物、成像、诊断或预防性组合物施用于受试者。所需的确切量将因受试者而
异，取决于受试者的物种、年龄和一般状况、疾病的严重程度、特定组合物、其施用方式，其
作用模式等。根据本发明的组合物通常配制成单位剂型，以便于施用和剂量均匀。然而，应
当理解，本发明组合物的每日总用量可以由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任何
特定患者的特定治疗有效剂量水平、预防有效剂量水平或适当的成像剂量水平将取决于多
种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所用具体化合物的活性；所用的具体组合
物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间、施用途径和所用的具体调节
性多核苷酸有效负荷的排泄速率；治疗的持续时间；与所用的具体化合物组合或配合使用
的药物；以及医学领域众所周知的相似因素。
[0990] 在某些实施方案中，根据本发明的病毒载体药物组合物可以以足以每天递送约0.0001mg/kg至约100mg/kg、约0.001mg/kg至约0.05mg/kg、约0.005mg/kg至约0.05mg/kg、
约0.001mg/kg至约0.005mg/kg、约0.05mg/kg至约0.5mg/kg、约0.01mg/kg至约50mg/kg、约
0.1mg/kg至约40mg/kg、约0.5mg/kg至约30mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至
约10mg/kg或约1mg/kg至约25mg/kg受试者体重的调节性多核苷酸剂量水平每天一次或多
次施用，以获得所需的治疗、诊断、预防或成像效果(参见例如，国际公开号WO2013078199中
描述的单位剂量范围，其全部内容通过引用的方式以其并入本文)。所需的调节性多核苷酸
剂量可以多于一次递送(例如，一天内多于一次施用)。在某些实施方案中，可以使用多次施
用(例如，两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十
四次或更多次施用)递送所需的调节性多核苷酸剂量。当采用多次施用时，可以使用分给药
方案，如本文所述的那些。如本文所用，“分剂量”是将单单位剂量或总日剂量分成两个或更
多个剂量，例如单次单位剂量的两次或更多次施用。如本文所用，“单单位剂量”是以一次给
药(one dose)/一个时间/单一途径/单一接触点(即单给药事件)施用的任何调节性多核苷
酸治疗剂的剂量。如本文所用，“总日剂量”是在24小时内给出或开具的量。它可以作为单单
位剂量施用。在一个实施方案中，将本发明的包含调节性多核苷酸的病毒载体以分剂量施
用于受试者。它们可以仅配制在缓冲液中或配制成本文所述的制剂。
约0.001mg/kg至约0.005mg/kg、约0.05mg/kg至约0.5mg/kg、约0.01mg/kg至约50mg/kg、约
0.1mg/kg至约40mg/kg、约0.5mg/kg至约30mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至
约10mg/kg或约1mg/kg至约25mg/kg受试者体重的调节性多核苷酸剂量水平每天一次或多
次施用，以获得所需的治疗、诊断、预防或成像效果(参见例如，国际公开号WO2013078199中
描述的单位剂量范围，其全部内容通过引用的方式以其并入本文)。所需的调节性多核苷酸
剂量可以多于一次递送(例如，一天内多于一次施用)。在某些实施方案中，可以使用多次施
用(例如，两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十
四次或更多次施用)递送所需的调节性多核苷酸剂量。当采用多次施用时，可以使用分给药
方案，如本文所述的那些。如本文所用，“分剂量”是将单单位剂量或总日剂量分成两个或更
多个剂量，例如单次单位剂量的两次或更多次施用。如本文所用，“单单位剂量”是以一次给
药(one dose)/一个时间/单一途径/单一接触点(即单给药事件)施用的任何调节性多核苷
酸治疗剂的剂量。如本文所用，“总日剂量”是在24小时内给出或开具的量。它可以作为单单
位剂量施用。在一个实施方案中，将本发明的包含调节性多核苷酸的病毒载体以分剂量施
用于受试者。它们可以仅配制在缓冲液中或配制成本文所述的制剂。
[0991] 在一个实施方案中，将根据本发明的组合物递送至细胞包括由[VG/小时＝mL/小时*VG/mL]定义的递送速率，其中VG是病毒基因组，VG/mL是组合物浓度，mL/小时是延长递
送的速率。
送的速率。
[0992] 在一个实施方案中，将根据本发明的组合物递送至细胞可以包含每个受试者的总浓度为约1x106VG至约1x1016VG。在一些实施方案中，递送可以包括以下组合物浓度：约
1x106、2x106、3x106、4x106、5x106、6x106、7x106、8x106、9x106、1x107、2x107、3x107、4x107、
5x107、6x107、7x107、8x107、9x107、1x108、2x108、3x108、4x108、5x108、6x108、7x108、8x108、
8 9 9 9 9 9 9 9 9 9 10 10 10
9x10 、1x10、2x10、3x10、4x10 、5x10 、6x10、7x10、8x10、9x10 、1x10 、2x10 、3x10 、
4x1010、5x1010、6x1010、7x1010、8x1010、9x1010、1x1011、1.1x1011、1.2x1011、1.3x1011、
1.4x1011、1.5x1011、1.6x1011、1.7x1011、1.8x1011、1.9x1011、2x1011、2.1x1011、2.2x1011、
2.3x1011、2.4x1011、2.5x1011、2.6x1011、2.7x1011、2.8x1011、2.9x1011、3x1011、4x1011、5x1011、
11 11 11 11 11 11 11 11 11
6x10 、7x10 、7.1x10 、7.2x10 、7.3x10 、7.4x10 、7.5x10 、7.6x10 、7.7x10 、
7.8x1011、7.9x1011、8x1011、9x1011、1x1012、1.1x1012、1.2x1012、1.3x1012、1.4x1012、1.5x1012、
1.6x1012、1.7x1012、1.8x1012、1.9x1012、2x1012、2.1x1012、2.2x1012、2.3x1012、2.4x1012、
2.5x1012、2.6x1012、2.7x1012、2.8x1012、2.9x1012、3x1012、3.1x1012、3.2x1012、3.3x1012、
3.4x1012、3.5x1012、3.6x1012、3.7x1012、3.8x1012、3.9x1012、4x1012、4.1x1012、4.2x1012、
4.3x1012、4.4x1012、4.5x1012，4.6x1012、4.7x1012、4.8x1012、4.9x1012、5x1012、6x1012、
6.1x1012、6.2x1012、6.3x1012、6.4x1012、6.5x1012、6.6x1012、6.7x1012、6.8x1012、6.9x1012、
7x1012、8x1012、8.1x1012、8.2x1012、8.3x1012、8.4x1012、8.5x1012、8.6x1012、8.7x1012、
8.8x1012、8.9x1012、9x1012、1x1013、1.1x1013、1.2x1013、1.3x1013、1.4x1013、1.5x1013、
1.6x1013、1.7x1013、1.8x1013、1.9x1013、2x1013、3x1013、4x1013、5x1013、6x1013、6.7x1013、
13 13 13 14 14 14 14 14 14 14 14 14
7x10 、8x10 、9x10 、1x10 、2x10 、3x10 、4x10 、5x10 、6x10 、7x10 、8x10 、9x10 、
1x1015、2x1015、3x1015、4x1015、5x1015、6x1015、7x1015、8x1015、9x1015或1x1016VG/受试者。
1x106、2x106、3x106、4x106、5x106、6x106、7x106、8x106、9x106、1x107、2x107、3x107、4x107、
5x107、6x107、7x107、8x107、9x107、1x108、2x108、3x108、4x108、5x108、6x108、7x108、8x108、
8 9 9 9 9 9 9 9 9 9 10 10 10
9x10 、1x10、2x10、3x10、4x10 、5x10 、6x10、7x10、8x10、9x10 、1x10 、2x10 、3x10 、
4x1010、5x1010、6x1010、7x1010、8x1010、9x1010、1x1011、1.1x1011、1.2x1011、1.3x1011、
1.4x1011、1.5x1011、1.6x1011、1.7x1011、1.8x1011、1.9x1011、2x1011、2.1x1011、2.2x1011、
2.3x1011、2.4x1011、2.5x1011、2.6x1011、2.7x1011、2.8x1011、2.9x1011、3x1011、4x1011、5x1011、
11 11 11 11 11 11 11 11 11
6x10 、7x10 、7.1x10 、7.2x10 、7.3x10 、7.4x10 、7.5x10 、7.6x10 、7.7x10 、
7.8x1011、7.9x1011、8x1011、9x1011、1x1012、1.1x1012、1.2x1012、1.3x1012、1.4x1012、1.5x1012、
1.6x1012、1.7x1012、1.8x1012、1.9x1012、2x1012、2.1x1012、2.2x1012、2.3x1012、2.4x1012、
2.5x1012、2.6x1012、2.7x1012、2.8x1012、2.9x1012、3x1012、3.1x1012、3.2x1012、3.3x1012、
3.4x1012、3.5x1012、3.6x1012、3.7x1012、3.8x1012、3.9x1012、4x1012、4.1x1012、4.2x1012、
4.3x1012、4.4x1012、4.5x1012，4.6x1012、4.7x1012、4.8x1012、4.9x1012、5x1012、6x1012、
6.1x1012、6.2x1012、6.3x1012、6.4x1012、6.5x1012、6.6x1012、6.7x1012、6.8x1012、6.9x1012、
7x1012、8x1012、8.1x1012、8.2x1012、8.3x1012、8.4x1012、8.5x1012、8.6x1012、8.7x1012、
8.8x1012、8.9x1012、9x1012、1x1013、1.1x1013、1.2x1013、1.3x1013、1.4x1013、1.5x1013、
1.6x1013、1.7x1013、1.8x1013、1.9x1013、2x1013、3x1013、4x1013、5x1013、6x1013、6.7x1013、
13 13 13 14 14 14 14 14 14 14 14 14
7x10 、8x10 、9x10 、1x10 、2x10 、3x10 、4x10 、5x10 、6x10 、7x10 、8x10 、9x10 、
1x1015、2x1015、3x1015、4x1015、5x1015、6x1015、7x1015、8x1015、9x1015或1x1016VG/受试者。
[0993] 在一个实施方案中，将根据本发明的组合物递送至细胞可以包含每个受试者的总浓度为约1x106VG/kg至约1x1016VG/kg。在一些实施方案中，递送可以包括以下组合物浓度：
6 6 6 6 6 6 6 6 6 7 7 7 7
约1x10 、2x10 、3x10、4x10、5x10、6x10 、7x10 、8x10 、9x10、1x10、2x10、3x10 、4x10 、
5x107、6x107、7x107、8x107、9x107、1x108、2x108、3x108、4x108、5x108、6x108、7x108、8x108、
9x108、1x109、2x109、3x109、4x109、5x109、6x109、7x109、8x109、9x109、1x1010、2x1010、3x1010、
4x1010、5x1010、6x1010、7x1010、8x1010、9x1010、1x1011、1.1x1011、1.2x1011、1.3x1011、
11 11 11 11 11 11 11 11 11
1.4x10 、1.5x10 、1.6x10 、1.7x10 、1.8x10 、1.9x10 、2x10 、2.1x10 、2.2x10 、
2.3x1011、2.4x1011、2.5x1011、2.6x1011、2.7x1011、2.8x1011、2.9x1011、3x1011、4x1011、5x1011、
6x1011、7x1011、7.1x1011、7.2x1011、7.3x1011、7.4x1011、7.5x1011、7.6x1011、7.7x1011、
7.8x1011、7.9x1011、8x1011、9x1011、1x1012、1.1x1012、1.2x1012、1.3x1012、1.4x1012、1.5x1012、
1.6x1012、1.7x1012、1.8x1012、1.9x1012、2x1012、2.1x1012、2.2x1012、2.3x1012、2.4x1012、
2.5x1012、2.6x1012、2.7x1012、2.8x1012、2.9x1012、3x1012、3.1x1012、3.2x1012、3.3x1012、
3.4x1012、3.5x1012、3.6x1012、3.7x1012、3.8x1012、3.9x1012、4x1012、4.1x1012、4.2x1012、
4.3x1012、4.4x1012、4.5x1012，4.6x1012、4.7x1012、4.8x1012、4.9x1012、5x1012、6x1012、
6.1x1012、6.2x1012、6.3x1012、6.4x1012、6.5x1012、6.6x1012、6.7x1012、6.8x1012、6.9x1012、
7x1012、8x1012、8.1x1012、8.2x1012、8.3x1012、8.4x1012、8.5x1012、8.6x1012、8.7x1012、
8.8x1012、8.9x1012、9x1012、1x1013、1.1x1013、1.2x1013、1.3x1013、1.4x1013、1.5x1013、
1.6x1013、1.7x1013、1.8x1013、1.9x1013、2x1013、3x1013、4x1013、5x1013、6x1013、6.7x1013、
7x1013、8x1013、9x1013、1x1014、2x1014、3x1014、4x1014、5x1014、6x1014、7x1014、8x1014、9x1014、
1x1015、2x1015、3x1015、4x1015、5x1015、6x1015、7x1015、8x1015、9x1015或1x1016VG/kg。
6 6 6 6 6 6 6 6 6 7 7 7 7
约1x10 、2x10 、3x10、4x10、5x10、6x10 、7x10 、8x10 、9x10、1x10、2x10、3x10 、4x10 、
5x107、6x107、7x107、8x107、9x107、1x108、2x108、3x108、4x108、5x108、6x108、7x108、8x108、
9x108、1x109、2x109、3x109、4x109、5x109、6x109、7x109、8x109、9x109、1x1010、2x1010、3x1010、
4x1010、5x1010、6x1010、7x1010、8x1010、9x1010、1x1011、1.1x1011、1.2x1011、1.3x1011、
11 11 11 11 11 11 11 11 11
1.4x10 、1.5x10 、1.6x10 、1.7x10 、1.8x10 、1.9x10 、2x10 、2.1x10 、2.2x10 、
2.3x1011、2.4x1011、2.5x1011、2.6x1011、2.7x1011、2.8x1011、2.9x1011、3x1011、4x1011、5x1011、
6x1011、7x1011、7.1x1011、7.2x1011、7.3x1011、7.4x1011、7.5x1011、7.6x1011、7.7x1011、
7.8x1011、7.9x1011、8x1011、9x1011、1x1012、1.1x1012、1.2x1012、1.3x1012、1.4x1012、1.5x1012、
1.6x1012、1.7x1012、1.8x1012、1.9x1012、2x1012、2.1x1012、2.2x1012、2.3x1012、2.4x1012、
2.5x1012、2.6x1012、2.7x1012、2.8x1012、2.9x1012、3x1012、3.1x1012、3.2x1012、3.3x1012、
3.4x1012、3.5x1012、3.6x1012、3.7x1012、3.8x1012、3.9x1012、4x1012、4.1x1012、4.2x1012、
4.3x1012、4.4x1012、4.5x1012，4.6x1012、4.7x1012、4.8x1012、4.9x1012、5x1012、6x1012、
6.1x1012、6.2x1012、6.3x1012、6.4x1012、6.5x1012、6.6x1012、6.7x1012、6.8x1012、6.9x1012、
7x1012、8x1012、8.1x1012、8.2x1012、8.3x1012、8.4x1012、8.5x1012、8.6x1012、8.7x1012、
8.8x1012、8.9x1012、9x1012、1x1013、1.1x1013、1.2x1013、1.3x1013、1.4x1013、1.5x1013、
1.6x1013、1.7x1013、1.8x1013、1.9x1013、2x1013、3x1013、4x1013、5x1013、6x1013、6.7x1013、
7x1013、8x1013、9x1013、1x1014、2x1014、3x1014、4x1014、5x1014、6x1014、7x1014、8x1014、9x1014、
1x1015、2x1015、3x1015、4x1015、5x1015、6x1015、7x1015、8x1015、9x1015或1x1016VG/kg。
[0994] 在一个实施方案中，每剂量可以施用约105至106个病毒基因组(单位)。
[0995] 在一个实施方案中，将根据本发明的组合物递送至细胞可以包含约1x106VG/mL至约1x1016VG/mL的总浓度。在一些实施方案中，递送可以包含以下组合物浓度：约1x106、
6 6 6 6 6 6 6 6 7 7 7 7 7
2x10、3x10 、4x10 、5x10 、6x10 、7x10、8x10 、9x10 、1x10 、2x10、3x10 、4x10 、5x10 、
6x107、7x107、8x107、9x107、1x108、2x108、3x108、4x108、5x108、6x108、7x108、8x108、9x108、
1x109、2x109、3x109、4x109、5x109、6x109、7x109、8x109、9x109、1x1010、2x1010、3x1010、4x1010、
5x1010、6x1010、7x1010、8x1010、9x1010、1x1011、1.1x1011、1.2x1011、1.3x1011、1.4x1011、
11 11 11 11 11 11 11 11 11 11
1.5x10 、1.6x10 、1.7x10 、1.8x10 、1.9x10 、2x10 、3x10 、4x10 、5x10 、6x10 、
7x1011、8x1011、9x1011、1x1012、1.1x1012、1.2x1012、1.3x1012、1.4x1012、1.5x1012、1.6x1012、
1.7x1012、1.8x1012、1.9x1012、2x1012、2.1x1012、2.2x1012、2.3x1012、2.4x1012、2.5x1012、
2.6x1012、2.7x1012、2.8x1012、2.9x1012、3x1012、3.1x1012、3.2x1012、3.3x1012、3.4x1012、
3.5x1012、3.6x1012、3.7x1012、3.8x1012、3.9x1012、4x1012、4.1x1012、4.2x1012、4.3x1012、
4.4x1012、4.5x1012、4.6x1012、4.7x1012、4.8x1012、4.9x1012、5x1012、6x1012、6.1x1012、
6.2x1012、6.3x1012、6.4x1012、6.5x1012、6.6x1012、6.7x1012、6.8x1012、6.9x1012、7x1012、
8x1012、9x1012、1x1013、1.1x1013、1.2x1013、1.3x1013、1.4x1013、1.5x1013、1.6x1013、1.7x1013、
1.8x1013、1.9x1013、2x1013、3x1013、4x1013、5x1013、6x1013、6.7x1013、7x1013、8x1013、9x1013、
1x1014、2x1014、3x1014、4x1014、5x1014、6x1014、7x1014、8x1014、9x1014、1x1015、2x1015、3x1015、
15 15 15 15 15 15 16
4x10 、5x10 、6x10 、7x10 、8x10 、9x10 或1x10 VG/mL。
6 6 6 6 6 6 6 6 7 7 7 7 7
2x10、3x10 、4x10 、5x10 、6x10 、7x10、8x10 、9x10 、1x10 、2x10、3x10 、4x10 、5x10 、
6x107、7x107、8x107、9x107、1x108、2x108、3x108、4x108、5x108、6x108、7x108、8x108、9x108、
1x109、2x109、3x109、4x109、5x109、6x109、7x109、8x109、9x109、1x1010、2x1010、3x1010、4x1010、
5x1010、6x1010、7x1010、8x1010、9x1010、1x1011、1.1x1011、1.2x1011、1.3x1011、1.4x1011、
11 11 11 11 11 11 11 11 11 11
1.5x10 、1.6x10 、1.7x10 、1.8x10 、1.9x10 、2x10 、3x10 、4x10 、5x10 、6x10 、
7x1011、8x1011、9x1011、1x1012、1.1x1012、1.2x1012、1.3x1012、1.4x1012、1.5x1012、1.6x1012、
1.7x1012、1.8x1012、1.9x1012、2x1012、2.1x1012、2.2x1012、2.3x1012、2.4x1012、2.5x1012、
2.6x1012、2.7x1012、2.8x1012、2.9x1012、3x1012、3.1x1012、3.2x1012、3.3x1012、3.4x1012、
3.5x1012、3.6x1012、3.7x1012、3.8x1012、3.9x1012、4x1012、4.1x1012、4.2x1012、4.3x1012、
4.4x1012、4.5x1012、4.6x1012、4.7x1012、4.8x1012、4.9x1012、5x1012、6x1012、6.1x1012、
6.2x1012、6.3x1012、6.4x1012、6.5x1012、6.6x1012、6.7x1012、6.8x1012、6.9x1012、7x1012、
8x1012、9x1012、1x1013、1.1x1013、1.2x1013、1.3x1013、1.4x1013、1.5x1013、1.6x1013、1.7x1013、
1.8x1013、1.9x1013、2x1013、3x1013、4x1013、5x1013、6x1013、6.7x1013、7x1013、8x1013、9x1013、
1x1014、2x1014、3x1014、4x1014、5x1014、6x1014、7x1014、8x1014、9x1014、1x1015、2x1015、3x1015、
15 15 15 15 15 15 16
4x10 、5x10 、6x10 、7x10 、8x10 、9x10 或1x10 VG/mL。
[0996] 生物利用度
[0997] 本发明的包含调节性多核苷酸的病毒载体在与本文所述的递送/配制剂或载体(vehicle)配制成组合物时，与缺少如本文所述的递送剂的组合物相比可以显示出增加的
生物利用度。如本文所用，术语“生物利用度”是指施用于受试者的给定量的特定药剂的全
身利用度。可以通过测量化合物在施用于哺乳动物后未改变形式的化合物的曲线下面积
(AUC)或最大血清或血浆浓度(Cmax)来评估生物利用度。AUC是沿纵坐标(Y轴)的化合物的血
清或血浆浓度相对于横坐标(X轴)的时间绘制的曲线下面积的测定。通常，特定化合物的
AUC可以使用本领域普通技术人员已知的方法并如以下文献中所述的方法计算：
G.S.Banker，Modern Pharmaceutics，Drugs and the Pharmaceutical Sciences，v.72，
Marcel Dekker，New York，Inc.，1996，其内容通过引用的方式以其整体并入本文。
生物利用度。如本文所用，术语“生物利用度”是指施用于受试者的给定量的特定药剂的全
身利用度。可以通过测量化合物在施用于哺乳动物后未改变形式的化合物的曲线下面积
(AUC)或最大血清或血浆浓度(Cmax)来评估生物利用度。AUC是沿纵坐标(Y轴)的化合物的血
清或血浆浓度相对于横坐标(X轴)的时间绘制的曲线下面积的测定。通常，特定化合物的
AUC可以使用本领域普通技术人员已知的方法并如以下文献中所述的方法计算：
G.S.Banker，Modern Pharmaceutics，Drugs and the Pharmaceutical Sciences，v.72，
Marcel Dekker，New York，Inc.，1996，其内容通过引用的方式以其整体并入本文。
[0998] Cmax值是在向受试者施用化合物后在受试者的血清或血浆中达到的化合物的最大浓度。可以使用本领域普通技术人员已知的方法测量特定化合物的Cmax值。如本文所用，短
语“增加生物利用度”或“改善药代动力学”是指可以增加受试者中本发明的病毒载体的全
身利用度(如通过AUC、Cmax或Cmin测量的)。在一些实施方案中，此类作用可以包括与如本文
所述的一种或多种递送剂共同施用。在一些实施方案中，病毒载体的生物利用度可以增加
至少约2％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至
少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至
少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。
语“增加生物利用度”或“改善药代动力学”是指可以增加受试者中本发明的病毒载体的全
身利用度(如通过AUC、Cmax或Cmin测量的)。在一些实施方案中，此类作用可以包括与如本文
所述的一种或多种递送剂共同施用。在一些实施方案中，病毒载体的生物利用度可以增加
至少约2％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至
少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至
少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。
[0999] 治疗窗口
[1000] 本发明的包含调节性多核苷酸的病毒载体在与如本文所述的一种或多种递送剂一起配制时，与在不含如本文所述的一种或多种病毒载体的情况下施用的病毒载体的治疗
窗口相比，可以显示出化合物和/或组合物施用的治疗窗口的增加。如本文所用，术语“治疗
窗口”是指血浆浓度的范围，或在作用位点处治疗活性物质的水平范围，具有引发治疗效果
的高概率。在一些实施方案中，当以制剂施用时，病毒载体的治疗窗口可以增加至少约2％、
至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、
至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、
至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。
窗口相比，可以显示出化合物和/或组合物施用的治疗窗口的增加。如本文所用，术语“治疗
窗口”是指血浆浓度的范围，或在作用位点处治疗活性物质的水平范围，具有引发治疗效果
的高概率。在一些实施方案中，当以制剂施用时，病毒载体的治疗窗口可以增加至少约2％、
至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、
至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、
至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。
[1001] 分布体积(volume of distribution)
[1002] 本发明的包含调节性多核苷酸的病毒载体在与如本文所述的一种或多种递送剂一起配制时，相对于缺少如本文所述的一种或多种递送剂的制剂，可以显示出改善的分布
体积(Vdist)，例如降低的或靶向的。Vdist将药剂在体内的量与相同药剂在血液或血浆中的浓
度相关联。如本文所用，术语“分布体积”是指以与血液或血浆中相同的浓度在体内含有相
同量的药剂所需的流体体积：Vdist等于体内药剂的量/血液或血浆中药剂的浓度。例如，对
于10mg剂量的给定药剂和10mg/L的血浆浓度，分步体积为1升。分布体积反映了药剂在血管
外组织中的存在程度。大的分布体积反映了与血浆蛋白质相比，药剂与组织组分结合的倾
向性。在临床环境中，Vdist可以用于确定达到稳态浓度的加载剂量。在一些实施方案中，当
与如本文所述的一种或多种递送剂共同施用时，本发明的病毒载体组合物的分布体积可以
降低至少约2％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约
30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约
65％、至少约70％。
体积(Vdist)，例如降低的或靶向的。Vdist将药剂在体内的量与相同药剂在血液或血浆中的浓
度相关联。如本文所用，术语“分布体积”是指以与血液或血浆中相同的浓度在体内含有相
同量的药剂所需的流体体积：Vdist等于体内药剂的量/血液或血浆中药剂的浓度。例如，对
于10mg剂量的给定药剂和10mg/L的血浆浓度，分步体积为1升。分布体积反映了药剂在血管
外组织中的存在程度。大的分布体积反映了与血浆蛋白质相比，药剂与组织组分结合的倾
向性。在临床环境中，Vdist可以用于确定达到稳态浓度的加载剂量。在一些实施方案中，当
与如本文所述的一种或多种递送剂共同施用时，本发明的病毒载体组合物的分布体积可以
降低至少约2％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约
30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约
65％、至少约70％。
[1003] 组合
[1004] 包含调节性多核苷酸的病毒载体可以与一种或多种其他治疗剂、预防剂、诊断剂或成像剂组合使用。“与......组合”并不意味着药剂必须同时施用和/或配制以一起递送，
尽管这些递送方法也在本发明的范围内。组合物可以与一种或多种其他所需的治疗剂或医
疗程序同时、在其之前或之后施用。通常，每种药剂将以针对该药剂确定的剂量和/或时间
表施用。在一些实施方案中，本发明包括药学、预防、诊断或成像的组合物与可以改善其生
物利用度、减少和/或改变它们的代谢、抑制它们的排泄和/或改变它们在体内的分布的药
剂的组合的递送。
尽管这些递送方法也在本发明的范围内。组合物可以与一种或多种其他所需的治疗剂或医
疗程序同时、在其之前或之后施用。通常，每种药剂将以针对该药剂确定的剂量和/或时间
表施用。在一些实施方案中，本发明包括药学、预防、诊断或成像的组合物与可以改善其生
物利用度、减少和/或改变它们的代谢、抑制它们的排泄和/或改变它们在体内的分布的药
剂的组合的递送。
[1005] IV.使用方法
[1006] 减少靶基因的表达
[1007] 在一些实施方案中，本发明提供了抑制/沉默细胞中基因表达的方法。因此，编码siRNA双链体或编码的dsRNA的调节性多核苷酸可用于基本上抑制细胞中、特别是神经元中
的基因表达。在一些方面，基因表达的抑制是指抑制了至少约15％，如抑制了至少约16％、
17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、
32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、
47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、
62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、
77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-
50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、
20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-
95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-
70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-
100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-
100％或95-100％。因此，靶基因的蛋白质产物可以被抑制了至少约15％，优选至少约16％、
17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、
32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、
47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、
62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、
77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-
50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、
20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-
95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、60-70％、60-
80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-
95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。
的基因表达。在一些方面，基因表达的抑制是指抑制了至少约15％，如抑制了至少约16％、
17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、
32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、
47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、
62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、
77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-
50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、
20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-
95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-
70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-
100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-
100％或95-100％。因此，靶基因的蛋白质产物可以被抑制了至少约15％，优选至少约16％、
17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、
32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、
47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、
62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、
77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-
50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、
20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-
95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、60-70％、60-
80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-
95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。
[1008] 在一些实施方案中，本发明提供了抑制/沉默细胞中、特别是中型多棘神经元中基因表达的方法。在一些方面，基因表达的抑制是指抑制了至少约15％，如至少约16％、17％、
18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、
33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、
48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、
63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、
78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、
15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-
70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-
95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-
70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-
100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-
100％或95-100％。因此，靶向的基因的蛋白质产物可以被抑制至少约15％，优选至少约
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、
61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、
76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、
15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-
60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-
70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-
90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-
60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-90％、60-
95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-100％、90-
95％、90-100％或95-100％。
18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、
33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、
48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、
63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、
78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、
15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-
70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-
95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-
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100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-
100％或95-100％。因此，靶向的基因的蛋白质产物可以被抑制至少约15％，优选至少约
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、
61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、
76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、
15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-
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70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-
90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-
60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-90％、60-
95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-100％、90-
95％、90-100％或95-100％。
[1009] 在一些实施方案中，本发明提供了抑制/沉默细胞中、特别是运动神经元中基因表达的方法。在一些方面，基因表达的抑制是指抑制了至少约15％，如至少约16％、17％、
18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、
33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、
48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、
63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、
78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、
15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-
70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-
95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-
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100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-
100％或95-100％。因此，靶向的基因的蛋白质产物可以被抑制至少约15％，优选至少约
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、
61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、
76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、
15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-
60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-
70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-
90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-
60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-90％、60-
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95％、90-100％或95-100％。
18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、
33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、
48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、
63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、
78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、
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100％或95-100％。因此，靶向的基因的蛋白质产物可以被抑制至少约15％，优选至少约
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、
61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、
76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、
15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-
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95％、90-100％或95-100％。
[1010] 在一些实施方案中，本发明提供了抑制/沉默细胞中、特别是星形胶质细胞中基因表达的方法。在一些方面，基因表达的抑制是指抑制了至少约15％，如至少约16％、17％、
18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、
33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、
48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、
63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、
78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、
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70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
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100％或95-100％。因此，靶向的基因的蛋白质产物可以被抑制至少约15％，优选至少约
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
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76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、
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60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-
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18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、
33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、
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78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、
15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-
70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
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70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-
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100％或95-100％。因此，靶向的基因的蛋白质产物可以被抑制至少约15％，优选至少约
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、
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95％、90-100％或95-100％。
[1011] 在一个实施方案中，siRNA双链体或编码的dsRNA可以用于使蛋白质的表达减少了至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、
29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、
44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、
59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、
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100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-
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100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，蛋白质表达的表达可以减
少50-90％。作为一个非限制性实例，蛋白质表达的表达可以减少30-70％。作为一个非限制
性实例，蛋白质表达的表达可以减少20-70％。作为一个非限制性实例，蛋白质表达的表达
可以减少15-30％。
29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、
44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、
59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、
74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-
30％、15-40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、
20-50％、20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-
60％、30-70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-
80％、40-90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-
100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-
90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-
100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，蛋白质表达的表达可以减
少50-90％。作为一个非限制性实例，蛋白质表达的表达可以减少30-70％。作为一个非限制
性实例，蛋白质表达的表达可以减少20-70％。作为一个非限制性实例，蛋白质表达的表达
可以减少15-30％。
[1012] 在一个实施方案中，编码siRNA双链体或编码的dsRNA的调节性多核苷酸可以用于将mRNA的表达减少至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、
26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、
41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、
56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、
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30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-
40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-
60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-
90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-
70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，mRNA表
达的表达可以减少50-90％。作为一个非限制性实例，mRNA表达的表达可以减少30-70％。作
为一个非限制性实例，mRNA表达的表达可以减少20-70％。作为一个非限制性实例，mRNA表
达的表达可以减少15-30％。
26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、
41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、
56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、
71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至
少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-
30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-
40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-
60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-
90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-
70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，mRNA表
达的表达可以减少50-90％。作为一个非限制性实例，mRNA表达的表达可以减少30-70％。作
为一个非限制性实例，mRNA表达的表达可以减少20-70％。作为一个非限制性实例，mRNA表
达的表达可以减少15-30％。
[1013] 在一个实施方案中，siRNA双链体或编码的dsRNA可以用于减少CNS的至少一个区域(如但不限于中脑)中蛋白质和/或mRNA的表达。在CNS的至少一个区域中蛋白质和/或
mRNA的表达减少了至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、
26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、
41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、
56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、
71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至
少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-
30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-
40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-
60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-
90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-
70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，纹状体
和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-90％。作为一个非限制性实例，纹状体中蛋白
质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，纹状体中蛋白质和mRNA的表达减
少了20-50％。作为一个非限制性实例，纹状体中蛋白质和mRNA的表达减少了15-50％。作为
一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了30-70％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了20-70％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-
70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了20-70％。作
为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了20-70％。作为一个
非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-70％。作为一个非限制
性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，
纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，纹状体
和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮
质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋
白质和mRNA的表达减少了50％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了51％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了52％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作
为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了54％。作为一个非限
制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了55％。作为一个非限制性实例，
纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性实例，纹状体和/
或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋
白质和mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了59％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了60％。
mRNA的表达减少了至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、
26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、
41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、
56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、
71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至
少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-
30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-
40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-
60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-
90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-
70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，纹状体
和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-90％。作为一个非限制性实例，纹状体中蛋白
质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，纹状体中蛋白质和mRNA的表达减
少了20-50％。作为一个非限制性实例，纹状体中蛋白质和mRNA的表达减少了15-50％。作为
一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了30-70％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了20-70％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-
70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了20-70％。作
为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了20-70％。作为一个
非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-70％。作为一个非限制
性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，
纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，纹状体
和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮
质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋
白质和mRNA的表达减少了50％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了51％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了52％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作
为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了54％。作为一个非限
制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了55％。作为一个非限制性实例，
纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性实例，纹状体和/
或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋
白质和mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了59％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了60％。
[1014] 在一个实施方案中，编码siRNA双链体或编码的dsRNA的调节性多核苷酸可以用于减少CNS的至少一个区域(如但不限于前脑)中蛋白质和/或mRNA的表达。在CNS的至少一个
区域中蛋白质和/或mRNA的表达减少了至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、
22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、
37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、
52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、
67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、
90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-
80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、
20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-
100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-
70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-
95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-
95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非
限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了50-90％。作为一个非限制性实例，纹状体
中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表
达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了30-70％。作
为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了20-70％。作为一个非限制性实
例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了20-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了15-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了50-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-
60％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50％。作为
一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限制
性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了52％。作为一个非限制性实例，纹
状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了54％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了55％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了56％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
57％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了58％。作为
一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了59％。作为一个非限制
性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为一个非限制性实例，纹
状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了63％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了64％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
65％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作为
一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限制
性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了68％。作为一个非限制性实例，纹
状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了70％。
区域中蛋白质和/或mRNA的表达减少了至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、
22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、
37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、
52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、
67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、
90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-
80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、
20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-
100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-
70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-
95％、55-100％、60-70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-
95％、70-100％、80-90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非
限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了50-90％。作为一个非限制性实例，纹状体
中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表
达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了30-70％。作
为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了20-70％。作为一个非限制性实
例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了20-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了15-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了50-70％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-
60％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50％。作为
一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限制
性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了52％。作为一个非限制性实例，纹
状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了54％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了55％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了56％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
57％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了58％。作为
一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了59％。作为一个非限制
性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为一个非限制性实例，纹
状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了63％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了64％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
65％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作为
一个非限制性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限制
性实例，纹状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了68％。作为一个非限制性实例，纹
状体和/或皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作为一个非限制性实例，纹状体和/或
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了70％。
[1015] 在一个实施方案中，编码siRNA双链体或编码的dsRNA的调节性多核苷酸可以用于减少壳核中蛋白质和/或mRNA的表达。在CNS的至少一个区域中蛋白质和/或mRNA的表达减
少了至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、
28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、
43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、
58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、
73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、
15-30％、15-40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-
40％、20-50％、20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-
50％、30-60％、30-70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-
70％、40-80％、40-90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-
95％、50-100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-
80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-
95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和
mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了
40-50％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非
限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，壳核中
蛋白质和mRNA的表达减少了50％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减
少了51％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了52％。作为一个非限
制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质
和mRNA的表达减少了54％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了
55％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性
实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和
mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了59％。
作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为一个非限制性实例，
壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的
表达减少了62％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了63％。作为一
个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了64％。作为一个非限制性实例，壳核中
蛋白质和mRNA的表达减少了65％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减
少了66％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限
制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了68％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质
和mRNA的表达减少了69％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了
70％。
少了至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、
28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、
43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、
58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、
73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、
15-30％、15-40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-
40％、20-50％、20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-
50％、30-60％、30-70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-
70％、40-80％、40-90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-
95％、50-100％、55-60％、55-70％、55-80％、55-90％、55-95％、55-100％、60-70％、60-
80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-
95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和
mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了
40-50％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非
限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，壳核中
蛋白质和mRNA的表达减少了50％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减
少了51％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了52％。作为一个非限
制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质
和mRNA的表达减少了54％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了
55％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性
实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和
mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了59％。
作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为一个非限制性实例，
壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的
表达减少了62％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了63％。作为一
个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了64％。作为一个非限制性实例，壳核中
蛋白质和mRNA的表达减少了65％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减
少了66％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限
制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了68％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质
和mRNA的表达减少了69％。作为一个非限制性实例，壳核中蛋白质和mRNA的表达减少了
70％。
[1016] 在一个实施方案中，编码siRNA双链体或编码的dsRNA的调节性多核苷酸可以用于减少皮质中蛋白质和/或mRNA的表达。蛋白质和/或mRNA的表达减少了至少约15％、16％、
17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、
32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、
47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、
62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、
77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-
50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、
20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-
95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、60-70％、60-
80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-
95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
30-70％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了至少30％。作为一个
非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表
达减少了50-70％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-60％。作
为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50％。作为一个非限制性实例，皮
质中蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表
达减少了52％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个
非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了54％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋
白质和mRNA的表达减少了55％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了56％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制
性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了59％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。
作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了63％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了64％。作为一
个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了65％。作为一个非限制性实例，皮质中
蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了67％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了68％。作为一个非限
制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质
和mRNA的表达减少了70％。
17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、
32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、
47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、
62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、
77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、15-
50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-60％、
20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-70％、30-
80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-90％、40-
95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、60-70％、60-
80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-90％、80-
95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
30-70％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了至少30％。作为一个
非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表
达减少了50-70％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-60％。作
为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50％。作为一个非限制性实例，皮
质中蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表
达减少了52％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个
非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了54％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋
白质和mRNA的表达减少了55％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了56％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制
性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了59％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。
作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了63％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了64％。作为一
个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了65％。作为一个非限制性实例，皮质中
蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了67％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了68％。作为一个非限
制性实例，皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作为一个非限制性实例，皮质中蛋白质
和mRNA的表达减少了70％。
[1017] 在一个实施方案中，编码siRNA双链体或编码的dsRNA的调节性多核苷酸可以用于减少运动皮质中蛋白质和/或mRNA的表达。蛋白质和/或mRNA的表达减少了至少约15％、
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、
61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、
76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、
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60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-
70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-
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70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，运动皮
质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了30-70％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了20-70％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-70％。作为
一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了至少30％。作为一个非限制性
实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，运动皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
50％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限
制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了52％。作为一个非限制性实例，运动皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了54％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了55％。作
为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性实
例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了59％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为一个
非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，运动
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了63％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
64％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了65％。作为一个非限
制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作为一个非限制性实例，运动皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了68％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作
为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了70％。
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、
61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、
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15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-
60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-
70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-
90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、60-
70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，运动皮
质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了30-70％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了20-70％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-70％。作为
一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了至少30％。作为一个非限制性
实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，运动皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
50％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限
制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了52％。作为一个非限制性实例，运动皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了54％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了55％。作
为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性实
例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了59％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为一个
非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，运动
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了63％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
64％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了65％。作为一个非限
制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作为一个非限制性实例，运动皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了68％。作为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作
为一个非限制性实例，运动皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了70％。
[1018] 在一个实施方案中，编码siRNA双链体或编码的dsRNA的调节性多核苷酸可以用于减少躯体感觉皮质中蛋白质和/或mRNA的表达。蛋白质和/或mRNA的表达减少了至少约
15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、
30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、
45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、
60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、
75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-
40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、
20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-
70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-
90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、60-
70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，躯体感
觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋
白质和mRNA的表达减少了30-70％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了20-70％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了15-70％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了至少
30％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为
一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非限制
性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，躯
体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中
蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了52％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
53％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了54％。作为一个
非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了55％。作为一个非限制性实例，
躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了59％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为
一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性
实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，躯体感觉
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了63％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质
和mRNA的表达减少了64％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达
减少了65％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作
为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限制
性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了68％。作为一个非限制性实例，躯体感
觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了70％。
15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、
30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、
45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、
60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、
75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-
40％、15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、
20-60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-
70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-
90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、60-
70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，躯体感
觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋
白质和mRNA的表达减少了30-70％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了20-70％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了15-70％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了至少
30％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为
一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非限制
性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，躯
体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了50％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中
蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了52％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
53％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了54％。作为一个
非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了55％。作为一个非限制性实例，
躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了59％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为
一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性
实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，躯体感觉
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了63％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质
和mRNA的表达减少了64％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达
减少了65％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作
为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限制
性实例，躯体感觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了68％。作为一个非限制性实例，躯体感
觉皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作为一个非限制性实例，躯体感觉皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了70％。
[1019] 在一个实施方案中，编码siRNA双链体或编码的dsRNA的调节性多核苷酸可以用于减少颞叶皮质中蛋白质和/或mRNA的表达。蛋白质和/或mRNA的表达减少了至少约15％、
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、
61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、
76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、
15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-
60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-
70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-
90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、60-
70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，颞叶皮
质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了30-70％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了20-70％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-70％。作为
一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了至少30％。作为一个非限制性
实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
50％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限
制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了52％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了54％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了55％。作
为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性实
例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了59％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为一个
非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，颞叶
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了63％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
64％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了65％。作为一个非限
制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了68％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作
为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了70％。
16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、
31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、
46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、
61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、
76％、77％、78％、79％、80％、85％、90％、95％和100％，或至少15-20％、15-30％、15-40％、
15-50％、15-60％、15-70％、15-80％、15-90％、15-95％、20-30％、20-40％、20-50％、20-
60％、20-70％、20-80％、20-90％、20-95％、20-100％、30-40％、30-50％、30-60％、30-
70％、30-80％、30-90％、30-95％、30-100％、40-50％、40-60％、40-70％、40-80％、40-
90％、40-95％、40-100％、50-60％、50-70％、50-80％、50-90％、50-95％、50-100％、60-
70％、60-80％、60-90％、60-95％、60-100％、70-80％、70-90％、70-95％、70-100％、80-
90％、80-95％、80-100％、90-95％、90-100％或95-100％。作为一个非限制性实例，颞叶皮
质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-50％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了30-70％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少
了20-70％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了15-70％。作为
一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了至少30％。作为一个非限制性
实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了40-70％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了50-70％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA
的表达减少了50-60％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
50％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了51％。作为一个非限
制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了52％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了53％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了54％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了55％。作
为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了56％。作为一个非限制性实
例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了57％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白
质和mRNA的表达减少了58％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减
少了59％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了60％。作为一个
非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了61％。作为一个非限制性实例，颞叶
皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了62％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和
mRNA的表达减少了63％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了
64％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了65％。作为一个非限
制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了66％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质
中蛋白质和mRNA的表达减少了67％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的
表达减少了68％。作为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了69％。作
为一个非限制性实例，颞叶皮质中蛋白质和mRNA的表达减少了70％。
[1020] 在一些实施方案中，本发明提供了通过抑制需要治疗的受试者的基因和/或蛋白质的表达来治疗或改善中枢神经系统的疾病和/或病症的方法，该方法包括向受试者施用
药学有效量的编码siRNA双链体的至少一种调节性多核苷酸或编码靶向该基因的siRNA双
链体的核酸，将编码siRNA双链体(或编码的双链体)的调节性多核苷酸递送到靶向的细胞
中，抑制基因表达和蛋白质产生，以及改善受试者的中枢神经系统疾病和/或病症的症状。
药学有效量的编码siRNA双链体的至少一种调节性多核苷酸或编码靶向该基因的siRNA双
链体的核酸，将编码siRNA双链体(或编码的双链体)的调节性多核苷酸递送到靶向的细胞
中，抑制基因表达和蛋白质产生，以及改善受试者的中枢神经系统疾病和/或病症的症状。
[1021] V.试剂盒和装置
[1022] 试剂盒
[1023] 本发明提供了多种用于方便地和/或有效地实施本发明方法的试剂盒。通常，试剂盒将包含足够量和/或数目的组分以允许使用者对受试者进行多次治疗和/或进行多次实
验。
验。
[1024] 本发明的任何载体、构建体、调节性多核苷酸、多核苷酸或多肽可以包含在试剂盒中。在一些实施方案中，试剂盒可以进一步包括用于产生和/或合成本发明的化合物和/或
组合物的试剂和/或说明书。在一些实施方案中，试剂盒还可以包括一种或多种缓冲剂。在
一些实施方案中，本发明的试剂盒可以包括用于制作蛋白质或核酸阵列或文库的组分，因
此可以包括例如固体支持物。
组合物的试剂和/或说明书。在一些实施方案中，试剂盒还可以包括一种或多种缓冲剂。在
一些实施方案中，本发明的试剂盒可以包括用于制作蛋白质或核酸阵列或文库的组分，因
此可以包括例如固体支持物。
[1025] 在一些实施方案中，试剂盒组分可以包装在水性介质中或以冻干形式包装。试剂盒的容器形式通常包括至少一个小瓶、试管、烧瓶、瓶子、注射器或其他容器形式，其中可以
放置组分，并且优选是适当等分的。当存在多于一种试剂盒组分(标记试剂和标签可以包装
在一起)时，试剂盒通常还可以含有第二、第三或其他另外的容器，其中可以单独放置另外
的组分。在一些实施方案中，试剂盒还可以包含第二容器装置，用于容纳无菌的药学上可接
受的缓冲剂和/或其他稀释剂。在一些实施方案中，组分的各种组合可以包含在一个或多个
小瓶中。本发明的试剂盒通常还可以包括用于容纳本发明的化合物和/或组合物的装置，例
如严格限制用于商业销售的蛋白质、核酸和任何其他试剂容器。这种容器可以包括注射或
吹塑成型的塑料容器，其中保留所需的小瓶。
放置组分，并且优选是适当等分的。当存在多于一种试剂盒组分(标记试剂和标签可以包装
在一起)时，试剂盒通常还可以含有第二、第三或其他另外的容器，其中可以单独放置另外
的组分。在一些实施方案中，试剂盒还可以包含第二容器装置，用于容纳无菌的药学上可接
受的缓冲剂和/或其他稀释剂。在一些实施方案中，组分的各种组合可以包含在一个或多个
小瓶中。本发明的试剂盒通常还可以包括用于容纳本发明的化合物和/或组合物的装置，例
如严格限制用于商业销售的蛋白质、核酸和任何其他试剂容器。这种容器可以包括注射或
吹塑成型的塑料容器，其中保留所需的小瓶。
[1026] 在一些实施方案中，试剂盒组分以一种和/或多种液体溶液提供。在一些实施方案中，液体溶液是水性溶液，特别优选无菌水性溶液。在一些实施方案中，试剂盒组分可以作
为干粉提供。当试剂和/或组分以干粉形式提供时，这些粉末可以通过添加合适体积的溶剂
来重构。在一些实施方案中，溶剂也可以提供在另一种容器形式中。在一些在实施方案中，
标记染料以干粉形式提供。在一些实施方案中，本发明的试剂盒中提供10、20、30、40、50、
60、70、80、90、100、120、120、130、140、150、160、170、180、190、200、300、400、500、600、700、
800、900、1000微克或者至少或至多那些量的干燥染料。在这样的实施方案中，然后可以将
染料重悬浮在任何合适的溶剂如DMSO中。
为干粉提供。当试剂和/或组分以干粉形式提供时，这些粉末可以通过添加合适体积的溶剂
来重构。在一些实施方案中，溶剂也可以提供在另一种容器形式中。在一些在实施方案中，
标记染料以干粉形式提供。在一些实施方案中，本发明的试剂盒中提供10、20、30、40、50、
60、70、80、90、100、120、120、130、140、150、160、170、180、190、200、300、400、500、600、700、
800、900、1000微克或者至少或至多那些量的干燥染料。在这样的实施方案中，然后可以将
染料重悬浮在任何合适的溶剂如DMSO中。
[1027] 在一些实施方案中，试剂盒可以包括使用试剂盒组分的说明书以及使用试剂盒中未包括的任何其他试剂的说明。说明可以包括可以实施的变体。
[1028] 装置
[1030] 本发明提供了可以掺入编码一种或多种调节性多核苷酸有效负载分子的病毒载体的装置。这些装置含有在稳定的制剂中的病毒载体，其可以立即递送到有此需要的受试
者，如人类患者。
者，如人类患者。
[1031] 可以使用用于施用的装置根据本文教导的单次、多次或分次给药方案递送本发明的包含调节性多核苷酸的病毒载体。
[1032] 本领域已知的用于多次施用于细胞、器官和组织的方法和装置预期与本文公开的方法和组合物一起使用，作为本发明的实施方案。这些包括，例如，具有多个针的那些方法
和装置、应用例如管腔或导管的混合装置以及利用热、电流或辐射驱动机制的装置。
和装置、应用例如管腔或导管的混合装置以及利用热、电流或辐射驱动机制的装置。
[1033] 本发明的调节性多核苷酸可以用于治疗、预防或改善以异常或不希望的靶表达为特征的任何疾病或病症。
[1034] VI.定义
[1035] 在本说明书中的各个地方，本发明化合物的取代以组或范围公开。具体地，预期本发明包括这些组和范围中的成员的每个个体子组合。
[1036] 约：如本文所用，术语“约”是指所述值的+/-10％。
[1037] 组合施用：如本文所用，术语“组合施用”或“组合的施用”是指两种或更多种药剂同时或以间隔施用于受试者，使得每种药剂对患者的作用可能存在重叠。在一些实施方案
中，它们在彼此约60、30、15、10、5或1分钟内施用。在一些实施方案中，药剂施用的间隔足够
紧密，使得实现组合(例如协同)效应。
中，它们在彼此约60、30、15、10、5或1分钟内施用。在一些实施方案中，药剂施用的间隔足够
紧密，使得实现组合(例如协同)效应。
[1038] 动物：如本文所用，术语“动物”是指动物界的任何成员。在一些实施方案中，“动物”是指处于任何发育阶段的人。在一些实施方案中，“动物”是指处于任何发育阶段的非人
动物。在某些实施方案中，非人动物是哺乳动物(例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、
羊、牛、灵长类动物或猪)。在一些实施方案中，动物包括但不限于哺乳动物、鸟类、爬行动
物、两栖动物、鱼类和蠕虫。在一些实施方案中，动物是转基因动物、基因工程动物或克隆。
动物。在某些实施方案中，非人动物是哺乳动物(例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、
羊、牛、灵长类动物或猪)。在一些实施方案中，动物包括但不限于哺乳动物、鸟类、爬行动
物、两栖动物、鱼类和蠕虫。在一些实施方案中，动物是转基因动物、基因工程动物或克隆。
[1039] 大约：如本文所用，术语“大约”或“约”在应用于感兴趣的一个或多个值时，是指与所述参考值相似的值。在某些实施方案中，术语“大约”或“约”是指在任一方向(大于或小
于)上落在所述参考值的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、
10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小范围内的值的范围，除非另有说明或
以其他方式根据上下文是显而易见的(除非此类数字超过可能值的100％)。
于)上落在所述参考值的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、
10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小范围内的值的范围，除非另有说明或
以其他方式根据上下文是显而易见的(除非此类数字超过可能值的100％)。
[1040] 与……缔合：如本文所用，当针对两个或更多个部分使用时，术语“与……缔合”、“缀合”、“联接”、“附着”和“系连”是指所述部分彼此直接或经由作为联接剂的一个或多个
另外的部分物理缔合或连接，以形成足够稳定的结构使得所述部分在使用该结构的条件
(例如，生理条件)下保持物理结合。“缔合”不需要严格通过直接共价化学键合。它还可以是
离子或氢键键合或基于杂交的连接，所述连接是足够稳定的，使得“缔合的”实体保持物理
缔合。
另外的部分物理缔合或连接，以形成足够稳定的结构使得所述部分在使用该结构的条件
(例如，生理条件)下保持物理结合。“缔合”不需要严格通过直接共价化学键合。它还可以是
离子或氢键键合或基于杂交的连接，所述连接是足够稳定的，使得“缔合的”实体保持物理
缔合。
[1041] 双功能的：如本文所用，术语“双功能的”表示能够执行或维持至少两种功能的任何物质、分子或部分。所述功能可以影响相同的结果或不同的结果。产生功能的结构可以是
相同或不同的。
相同或不同的。
[1044] 生物活性的：如本文所用，短语“生物活性的”表示在生物系统和/或生物体中具有活性的任何物质的特征。例如，当被施用于生物体时，对该生物体具有生物学作用的物质被
认为是具有生物活性。在特定实施方案中，如果甚至多核苷酸的一部分具有生物活性或模
仿被认为生物学上相关的活性，则本发明的调节性多核苷酸可以被认为具有生物活性。
认为是具有生物活性。在特定实施方案中，如果甚至多核苷酸的一部分具有生物活性或模
仿被认为生物学上相关的活性，则本发明的调节性多核苷酸可以被认为具有生物活性。
[1045] 诱导的多能干细胞：如本文所用，“诱导的多能干细胞”是可以被诱导以形成几种不同细胞类型中的任何一种的细胞。
[1046] 化合物：如本文所用，术语“化合物”意在包括所述结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。
[1047] 本文描述的化合物可以是不对称的(例如，具有一个或多个立构中心)。包括所有的立体异构体，如对映异构体和非对映异构体，除非另外指出。可以以光学活性形式或外消
旋形式分离含有不对称取代的碳原子的本发明化合物。如何由光学活性的起始原料制备光
学活性形式的方法是本领域已知的，如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。烯
烃、C＝N双键等的许多几何异构体也可以存在于本文描述的化合物中，并且在本发明中包
括所有这样的稳定异构体。描述了本发明化合物的顺式和反式几何异构体，并且它们可以
作为异构体的混合物或作为分开的异构形式分离。
旋形式分离含有不对称取代的碳原子的本发明化合物。如何由光学活性的起始原料制备光
学活性形式的方法是本领域已知的，如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。烯
烃、C＝N双键等的许多几何异构体也可以存在于本文描述的化合物中，并且在本发明中包
括所有这样的稳定异构体。描述了本发明化合物的顺式和反式几何异构体，并且它们可以
作为异构体的混合物或作为分开的异构形式分离。
[1048] 本发明的化合物还包括互变异构形式。互变异构形式源自单键与邻近双键的交换和伴随的质子迁移。互变异构形式包括质子转移互变异构体，所述质子转移互变异构体是
具有相同经验式和总电荷的异构质子化状态。
具有相同经验式和总电荷的异构质子化状态。
[1049] 本发明的化合物还包括在中间体化合物或最终化合物中出现的原子的全部同位素。“同位素”是指这样的原子：其具有相同的原子数，但是因由原子核中中子数不同而具有
不同的质量数。例如，氢的同位素包括氚和氘。
不同的质量数。例如，氢的同位素包括氚和氘。
[1050] 本发明的化合物和盐可通过常规方法与溶剂或水分子组合制备以形成溶剂合物和水合物。
[1051] 保守的：如本文所用，术语“保守的”是指多核苷酸序列或多肽序列各自的核苷酸或氨基酸残基，所述残基是在对比的两个或更多个序列的相同位置中未发生改变的那些。
相对保守的核苷酸或氨基酸是在比序列中其他地方出现的核苷酸或氨基酸更相关的序列
中保守的那些。
相对保守的核苷酸或氨基酸是在比序列中其他地方出现的核苷酸或氨基酸更相关的序列
中保守的那些。
[1052] 在一些实施方案中，如果两个或更多个序列是100％彼此相同的，则称它们是“完全保守的”。在一些实施方案中，如果两个或更多个序列彼此至少70％相同、至少80％相同、
至少90％相同或至少95％相同，则称它们是“高度保守的”。在一些实施方案中，如果两个或
更多个序列彼此约70％相同、约80％相同、约90％相同、约95％、约98％、或约99％相同，则
称它们是“高度保守的”。在一些实施方案中，如果两个或更多个序列彼此至少30％相同、至
少40％相同、至少50％相同、至少60％相同、至少70％相同、至少80％相同、至少90％相同或
至少95％相同，则称它们是“保守的”。在一些实施方案中，如果两个或更多个序列彼此约
30％相同、约40％相同、约50％相同、约60％相同、约70％相同、约80％相同、约90％相同、约
95％相同、约98％相同或约99％相同，则称它们是“保守的”。序列的保守可以适用于多核苷
酸或多肽的整个长度，或可以适用于其部分、区域或特征。
至少90％相同或至少95％相同，则称它们是“高度保守的”。在一些实施方案中，如果两个或
更多个序列彼此约70％相同、约80％相同、约90％相同、约95％、约98％、或约99％相同，则
称它们是“高度保守的”。在一些实施方案中，如果两个或更多个序列彼此至少30％相同、至
少40％相同、至少50％相同、至少60％相同、至少70％相同、至少80％相同、至少90％相同或
至少95％相同，则称它们是“保守的”。在一些实施方案中，如果两个或更多个序列彼此约
30％相同、约40％相同、约50％相同、约60％相同、约70％相同、约80％相同、约90％相同、约
95％相同、约98％相同或约99％相同，则称它们是“保守的”。序列的保守可以适用于多核苷
酸或多肽的整个长度，或可以适用于其部分、区域或特征。
[1053] 控释：如本文所用，术语“控释”是指符合特定释放模式以实现治疗结果的药物组合物或化合物释放特性。
[1054] 环状或环化的：如本文所用，术语“环状”是指存在连续的环。环状分子不需要是圆形的，仅仅连接以形成无断裂的亚基链。
[1056] 细胞毒性的：如本文所用，“细胞毒性的”是指杀死细胞(例如，哺乳动物细胞(例如，人细胞))、细菌、病毒、真菌、原生动物、寄生虫、朊病毒或它们的组合或对其造成有害、
有毒或致死的作用。
有毒或致死的作用。
[1057] 递送：如本文所用，“递送”是指递送化合物、物质、实体、部分、载质或有效负载的动作或方式。
[1058] 递送剂：如本文所用，“递送剂”是指至少部分地促进调节性多核苷酸体内递送至靶向的细胞的任何物质。
[1059] 失稳的：如本文所用，术语“可失稳的”、“失稳”或“失稳区域”是指与相同区域或分子的起始、野生型或天然形式相比更不稳定的区域或分子。
[1060] 可检测标记物：如本文所用，“可检测标记物”是指与另一个实体连接、掺入或缔合的一个或多个标志物、信号或部分，所述另一个实体通过本领域已知的方法容易检测到，所
述方法包括放射摄影术、荧光、化学发光、酶活性、吸光度等。可检测标记物包括放射性同位
素、荧光团、生色团、酶、染料、金属离子、诸如生物素、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白和
半抗原的配体、量子点等。可检测标记物可以位于本文中公开的肽或蛋白质中的任何位置
处。它们可以是在氨基酸、肽或蛋白质内，或位于N-末端或C-末端处。
述方法包括放射摄影术、荧光、化学发光、酶活性、吸光度等。可检测标记物包括放射性同位
素、荧光团、生色团、酶、染料、金属离子、诸如生物素、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白和
半抗原的配体、量子点等。可检测标记物可以位于本文中公开的肽或蛋白质中的任何位置
处。它们可以是在氨基酸、肽或蛋白质内，或位于N-末端或C-末端处。
[1061] 非对映异构体：如本文所用，“非对映异构体”是指彼此不为镜像且彼此不可重叠的立体异构体。
[1062] 消化：如本文所用，术语“消化”是指分解成较小的碎片或组分。当提及多肽或蛋白质时，消化导致肽的产生。
[1063] 远端的：如本文所用，术语“远端的”是指位于远离中心或远离感兴趣的点或区域的地方。
[1064] 给药方案：如本文所用，“给药方案”是施用计划表或医师确定的治疗、预防或姑息疗法的方案。
[1065] 对映异构体：如本文所用，术语“对映异构体”是指本发明化合物的每种个体光学活性形式，其具有至少80％(即，至少90％的一种对映异构体和至多10％的另一种对映异构
体)、优选至少90％、更优选至少98％的光学纯度或对映体过量(如通过本领域的标准方法
确定的)。
体)、优选至少90％、更优选至少98％的光学纯度或对映体过量(如通过本领域的标准方法
确定的)。
[1066] 包封：如本文所用，术语“包封”是指围绕、包围或包裹。
[1067] 工程化的：如本文所用，当本发明的实施方案被设计成具有与起始点、野生型或天然分子不同的结构性或化学性特征或性质时，所述实施方案是“工程化的”。
[1068] 有效量：如本文所用，术语药剂的“有效量”是足以实现有益的或期望的结果(例如，临床结果)的量，并且因此，“有效量”取决于它所应用的上下文。例如，在施用治疗癌症
的药剂的上下文中，药剂的有效量是例如与在不施用所述药剂的情况下得到的应答相比足
以实现癌症的如本文中所定义的治疗的量。
的药剂的上下文中，药剂的有效量是例如与在不施用所述药剂的情况下得到的应答相比足
以实现癌症的如本文中所定义的治疗的量。
[1069] 外来体：如本文所用，“外来体”是由哺乳动物细胞分泌的囊泡或参与RNA降解的复合物。
[1070] 表达：如本文所用，核酸序列的“表达”是指以下事件中的一个或多个：(1)从DNA序列产生RNA模板(例如，通过转录)；(2)加工RNA转录物(例如，通过剪接、编辑、5’帽形成和/
或3’端加工)；(3)RNA翻译成多肽或蛋白质；和(4)多肽或蛋白质的翻译后修饰。
或3’端加工)；(3)RNA翻译成多肽或蛋白质；和(4)多肽或蛋白质的翻译后修饰。
[1071] 特征：如本文所用，“特征”是指特性、性质或独特的元素。
[1072] 制剂：如本文所用，“制剂”包括至少一种调节性多核苷酸和递送剂。
[1073] 片段：如本文所用，“片段”是指一部分。例如，蛋白质的片段可以包含通过消化从培养的细胞分离的全长蛋白质而得到的多肽。
[1074] 功能性的：如本文所用，“功能性的”生物分子是处于特定形式的生物分子，在所述特定形式中，所述生物分子表现出用于表征它的性质和/或活性。
[1075] 同源性：如本文所用，术语“同源性”是指聚合物分子之间例如核酸分子(例如DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间的总体相关性。在一些实施方案中，如果聚合
物分子的序列是至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、
80％、85％、90％、95％或99％相同或相似的，则认为它们是彼此“同源的”。术语“同源的”必
然是指至少两个序列(多核苷酸或多肽序列)之间的比较。根据本发明，如果两个多核苷酸
序列编码的多肽就至少一个至少约20个氨基酸的片段而言至少约50％、60％、70％、80％、
90％、95％或甚至99％相同，则认为所述两个多核苷酸序列是同源的。在一些实施方案中，
通过编码至少4-5个独特地指定的氨基酸的片段的能力来表征同源多核苷酸序列。对于长
度小于60个核苷酸的多核苷酸序列，通过编码至少4-5个独特地指定的氨基酸的片段的能
力来确定同源性。根据本发明，如果两种蛋白质就至少一个至少约20个氨基酸的片段而言
至少约50％、60％、70％、80％或90％相同，则认为这两个蛋白质序列是同源的。
物分子的序列是至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、
80％、85％、90％、95％或99％相同或相似的，则认为它们是彼此“同源的”。术语“同源的”必
然是指至少两个序列(多核苷酸或多肽序列)之间的比较。根据本发明，如果两个多核苷酸
序列编码的多肽就至少一个至少约20个氨基酸的片段而言至少约50％、60％、70％、80％、
90％、95％或甚至99％相同，则认为所述两个多核苷酸序列是同源的。在一些实施方案中，
通过编码至少4-5个独特地指定的氨基酸的片段的能力来表征同源多核苷酸序列。对于长
度小于60个核苷酸的多核苷酸序列，通过编码至少4-5个独特地指定的氨基酸的片段的能
力来确定同源性。根据本发明，如果两种蛋白质就至少一个至少约20个氨基酸的片段而言
至少约50％、60％、70％、80％或90％相同，则认为这两个蛋白质序列是同源的。
[1076] 同一性：如本文所用，术语“同一性”是指聚合物分子之间例如多核苷酸分子(例如DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间的总体相关性。例如，可以通过为最佳比较
目的比对两个序列，进行两个多核苷酸序列的同一性百分比的计算(例如，可以在第一和第
二核酸序列中的一个或二个中引入缺口以进行最佳比对，并且可以出于比较目的而忽略不
相同的序列)。在某些实施方案中，为比较目的所比对的序列的长度是参照序列长度的至少
30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或100％。然
后比较在相应核苷酸位置处的核苷酸。当第一序列中的位置被第二序列中对应位置处的相
同核苷酸占据时，则所述分子在该位置处是相同的。考虑到为进行两个序列的最佳比对需
要引入的缺口的数目和每个缺口的长度，两个序列之间的同一性百分比是所述序列共有的
相同位置的数目的函数。可以使用数学算法实现两个序列之间的序列比较和同一性百分比
测定。例如，两个核苷酸序列之间的同一性百分比可以使用诸如在以下文献中描述的那些
的方法来确定：Computational Molecular Biology，Lesk，A.M.，ed.，Oxford University
Press，New York，1988；Biocomputing：Informatics and Genome Projects，Smith，D.W.，
ed.，Academic Press，New York，1993；Sequence Analysis in Molecular Biology，von
Heinje，G.，Academic Press，1987；Computer Analysis of Sequence Data，Part I，
Griffin，A.M.，和Griffin，H.G.，eds.，Humana Press，New Jersey，1994；和Sequence
Analysis Primer，Gribskov，M.and Devereux，J.，eds.，M Stockton Press，New York，
1991；其每一篇通过引用的方式并入本文。例如，使用已经并入ALIGN程序(2.0版)中的
Meyers和Miller(CABIOS，1989，4：11-17)的算法，使用PAM120加权残基表、缺口长度罚分为
12和缺口罚分为4，可以确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。可选地，使用GCG软件包
中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵，可以确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。通
常用来确定序列之间的同一性百分比的方法包括但不限于在Carillo，H.，和Lipman，D.，
SIAM J Applied Math.，48：1073(1988)中公开的那些；该文献通过引用的方式并入本文。
用于确定同一性的技术被编纂在公众可得到的计算机程序中。用于确定两个序列之间的同
源性的示例性计算机软件包括但不限于GCG程序包(Devereux，J.，et al.，Nucleic Acids
Research，12(1)，387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA Altschul(S.F.et al.，
J.Molec.Biol.，215，403(1990))。
目的比对两个序列，进行两个多核苷酸序列的同一性百分比的计算(例如，可以在第一和第
二核酸序列中的一个或二个中引入缺口以进行最佳比对，并且可以出于比较目的而忽略不
相同的序列)。在某些实施方案中，为比较目的所比对的序列的长度是参照序列长度的至少
30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或100％。然
后比较在相应核苷酸位置处的核苷酸。当第一序列中的位置被第二序列中对应位置处的相
同核苷酸占据时，则所述分子在该位置处是相同的。考虑到为进行两个序列的最佳比对需
要引入的缺口的数目和每个缺口的长度，两个序列之间的同一性百分比是所述序列共有的
相同位置的数目的函数。可以使用数学算法实现两个序列之间的序列比较和同一性百分比
测定。例如，两个核苷酸序列之间的同一性百分比可以使用诸如在以下文献中描述的那些
的方法来确定：Computational Molecular Biology，Lesk，A.M.，ed.，Oxford University
Press，New York，1988；Biocomputing：Informatics and Genome Projects，Smith，D.W.，
ed.，Academic Press，New York，1993；Sequence Analysis in Molecular Biology，von
Heinje，G.，Academic Press，1987；Computer Analysis of Sequence Data，Part I，
Griffin，A.M.，和Griffin，H.G.，eds.，Humana Press，New Jersey，1994；和Sequence
Analysis Primer，Gribskov，M.and Devereux，J.，eds.，M Stockton Press，New York，
1991；其每一篇通过引用的方式并入本文。例如，使用已经并入ALIGN程序(2.0版)中的
Meyers和Miller(CABIOS，1989，4：11-17)的算法，使用PAM120加权残基表、缺口长度罚分为
12和缺口罚分为4，可以确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。可选地，使用GCG软件包
中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵，可以确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。通
常用来确定序列之间的同一性百分比的方法包括但不限于在Carillo，H.，和Lipman，D.，
SIAM J Applied Math.，48：1073(1988)中公开的那些；该文献通过引用的方式并入本文。
用于确定同一性的技术被编纂在公众可得到的计算机程序中。用于确定两个序列之间的同
源性的示例性计算机软件包括但不限于GCG程序包(Devereux，J.，et al.，Nucleic Acids
Research，12(1)，387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA Altschul(S.F.et al.，
J.Molec.Biol.，215，403(1990))。
[1077] 抑制基因的表达：如本文所用，短语“抑制基因的表达”意指造成基因的表达产物的量的减少。所述表达产物可以是从基因转录的RNA(例如mRNA)或从基因转录的RNA所翻译
成的多肽。通常，mRNA水平的降低会导致从其翻译的多肽的水平的降低。可以使用用于测量
mRNA或蛋白质的标准技术确定表达水平。
成的多肽。通常，mRNA水平的降低会导致从其翻译的多肽的水平的降低。可以使用用于测量
mRNA或蛋白质的标准技术确定表达水平。
[1078] 异构体：如本文所用，术语“异构体”意指本发明的任何化合物的任何互变异构体、立体异构体、对映异构体或非对映异构体。应当认识到，本发明的化合物可以具有一个或多
个手性中心和/或双键，且因此，作为立体异构体存在，诸如双键异构体(即，几何E/Z异构
体)或非对映异构体(例如，对映异构体(即(+)或(-))或顺/反异构体)。根据本发明，本文中
描述的化学结构，以及因此本发明的化合物，包括所有相应的立体异构体，也就是说，立体
异构纯形式(例如，几何纯的、对映异构纯的或非对映异构纯的)和对映异构的和立体异构
的混合物，例如，外消旋体。通常可以通过众所周知的方法，诸如手性相气相色谱法、手性相
高效液相色谱法、使化合物结晶为手性盐复合物或使化合物在手性溶剂中结晶，将本发明
的化合物的对映异构的和立体异构的混合物拆分成它们的组分对映异构体或立体异构体。
也可以通过众所周知的不对称合成方法，从立体异构纯或对映异构纯的中间体、试剂和催
化剂得到对映异构体和立体异构体。
个手性中心和/或双键，且因此，作为立体异构体存在，诸如双键异构体(即，几何E/Z异构
体)或非对映异构体(例如，对映异构体(即(+)或(-))或顺/反异构体)。根据本发明，本文中
描述的化学结构，以及因此本发明的化合物，包括所有相应的立体异构体，也就是说，立体
异构纯形式(例如，几何纯的、对映异构纯的或非对映异构纯的)和对映异构的和立体异构
的混合物，例如，外消旋体。通常可以通过众所周知的方法，诸如手性相气相色谱法、手性相
高效液相色谱法、使化合物结晶为手性盐复合物或使化合物在手性溶剂中结晶，将本发明
的化合物的对映异构的和立体异构的混合物拆分成它们的组分对映异构体或立体异构体。
也可以通过众所周知的不对称合成方法，从立体异构纯或对映异构纯的中间体、试剂和催
化剂得到对映异构体和立体异构体。
[1080] 体内：如本文所用，术语“体内”是指在生物体(例如，动物、植物或微生物或其细胞或组织)内发生的事件。
[1081] 分离的：如本文所用，术语“分离的”是指已经与至少一些与其缔合的组分(无论在自然界中还是在实验环境中)分离的物质或实体。在提及已经与它们缔合的分离的物质时，
分离的物质可以具有不同的纯度水平。分离的物质和/或实体可以与至少约10％、约20％、
约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或更多的最初与它们缔合的其他
组分分离。在某些实施方案中，分离的药剂具有超过约80％、约85％、约90％、约91％、约
92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或超过约99％的纯度。如本
文所用，如果一物质基本上不含有其他组分，则该物质是“纯的”。
分离的物质可以具有不同的纯度水平。分离的物质和/或实体可以与至少约10％、约20％、
约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或更多的最初与它们缔合的其他
组分分离。在某些实施方案中，分离的药剂具有超过约80％、约85％、约90％、约91％、约
92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或超过约99％的纯度。如本
文所用，如果一物质基本上不含有其他组分，则该物质是“纯的”。
[1082] 基本上分离的：“基本上分离的”意指，所述化合物与在其中形成或检测到它的环境基本上分离。部分分离可以包括例如富含本发明化合物的组合物。基本上分离可包括含
有以重量计至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、
至少约97％或至少约99％的本发明化合物或其盐的组合物。用于分离化合物及其盐的方法
是本领域中常规的。
有以重量计至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、
至少约97％或至少约99％的本发明化合物或其盐的组合物。用于分离化合物及其盐的方法
是本领域中常规的。
[1083] 接头：如本文所用，接头是指一组原子，例如，10-1,000个原子，且可以包含原子或基团，例如但不限于，碳、氨基、烷基氨基、氧、硫、亚砜、磺酰基、羰基和亚胺。接头可以在第
一末端连接至核苷碱基或糖部分上的经修饰的核苷或核苷酸，和在第二末端连接至有效负
载，例如，可检测剂或治疗剂。接头可以具有足够的长度从而不会干扰向核酸序列中的掺
入。接头可以用于任何可用的目的，诸如如本文中所述的形成调节性多核苷酸多聚体(例
如，通过连接两个或更多个调节性多核苷酸分子)或调节性多核苷酸缀合物，以及施用有效
负载。可以掺入到接头中的化学基团的实例包括但不限于烷基、烯基、炔基、酰氨基
(amido)、氨基、醚、硫醚、酯、亚烷基、杂亚烷基、芳基或杂环基，它们中的每一个都可以是任
选取代的，如本文中所述。接头的实例包括但不限于不饱和的烷烃、聚乙二醇(例如，乙二醇
或丙二醇单体单元，例如，二乙二醇、二丙二醇、三乙二醇、三丙二醇、四乙二醇或四乙二醇)
和葡聚糖聚合物及其衍生物。其他实例包括但不限于接头内的可切割的部分，例如，二硫键
(-S-S-)或偶氮键(-N＝N-)，对其可以使用还原剂或光解进行切割。选择性可切割的键的非
限制性实例包括：可以例如通过使用三(2-羧基乙基)膦(TCEP)或其他还原剂和/或光解切
割的酰氨基键，以及可以例如通过酸性或碱性水解切割的酯键。
一末端连接至核苷碱基或糖部分上的经修饰的核苷或核苷酸，和在第二末端连接至有效负
载，例如，可检测剂或治疗剂。接头可以具有足够的长度从而不会干扰向核酸序列中的掺
入。接头可以用于任何可用的目的，诸如如本文中所述的形成调节性多核苷酸多聚体(例
如，通过连接两个或更多个调节性多核苷酸分子)或调节性多核苷酸缀合物，以及施用有效
负载。可以掺入到接头中的化学基团的实例包括但不限于烷基、烯基、炔基、酰氨基
(amido)、氨基、醚、硫醚、酯、亚烷基、杂亚烷基、芳基或杂环基，它们中的每一个都可以是任
选取代的，如本文中所述。接头的实例包括但不限于不饱和的烷烃、聚乙二醇(例如，乙二醇
或丙二醇单体单元，例如，二乙二醇、二丙二醇、三乙二醇、三丙二醇、四乙二醇或四乙二醇)
和葡聚糖聚合物及其衍生物。其他实例包括但不限于接头内的可切割的部分，例如，二硫键
(-S-S-)或偶氮键(-N＝N-)，对其可以使用还原剂或光解进行切割。选择性可切割的键的非
限制性实例包括：可以例如通过使用三(2-羧基乙基)膦(TCEP)或其他还原剂和/或光解切
割的酰氨基键，以及可以例如通过酸性或碱性水解切割的酯键。
[1084] microRNA(miRNA)结合位点：如本文所用，microRNA(miRNA)结合位点代表至少miRNA的“种子”区域与其结合的核酸转录物的核苷酸位置或区域。
[1085] 修饰的：如本文所用，“修饰的”是指本发明的分子的状态或结构发生改变。可以以许多方式修饰分子，所述方式包括在化学上、在结构上和在功能上。
[1086] 天然存在的：如本文所用，“天然存在的”意指在没有人工辅助的情况下在自然界中存在。
[1087] 中和抗体：如本文所用，“中和抗体”是指与其抗原结合并通过中和或消除其所具有的任何生物活性来防御细胞免于抗原或感染剂影响的抗体。
[1088] 非人脊椎动物：如本文所用，“非人脊椎动物”包括除智人(Homo sapiens)之外的所有脊椎动物，包括野生的和驯化的物种。非人脊椎动物的实例包括但不限于哺乳动物，如
羊驼、白臀野牛、野牛、骆驼、猫、牛、鹿、狗、驴、大额牛、山羊、豚鼠、马、大羊驼、骡、猪、兔、驯鹿、绵羊、水牛和牦牛。
羊驼、白臀野牛、野牛、骆驼、猫、牛、鹿、狗、驴、大额牛、山羊、豚鼠、马、大羊驼、骡、猪、兔、驯鹿、绵羊、水牛和牦牛。
[1089] 脱靶：如本文所用，“脱靶”是指对任何一种或多种靶标、基因或细胞转录物的任何非预期作用。
[1090] 开放读码框：如本文所用，“开放读码框”或“ORF”是指在给定的读码框中不含有终止密码子的序列。
[1091] 可操作地连接的：如本文所用，短语“可操作地连接的”是指两个或更多个分子、构建体、转录物、实体、部分等之间的功能性连接。
[1092] 任选取代的：在本文中“任选取代的X”(例如，任选取代的烷基)形式的短语等同于“X，其中X是任选取代的”(例如，“烷基，其中所述烷基是任选取代的”)。它并不是表示特征
“X”(例如烷基)本身是任选的。
“X”(例如烷基)本身是任选的。
[1093] 肽：如本文所用，“肽”具有小于或等于50个氨基酸的长度，例如，约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个氨基酸长度。
[1094] 患者：如本文所用，“患者”是指可能寻求或需要治疗、要求治疗、正在接受治疗、将会接受治疗的受试者，或因为特定疾病或病况而在经过训练的专业人员照料下的受试者。
[1095] 药学上可接受的：短语“药学上可接受的”在本文中用于是指这样的化合物、物质、组合物和/或剂型：在合理的医学判断范围内，其适合用于接触人类和动物的组织，而没有
过度的毒性、刺激、过敏性应答或其他问题或并发症，与合理的收益/风险比相称。
过度的毒性、刺激、过敏性应答或其他问题或并发症，与合理的收益/风险比相称。
[1096] 药学上可接受的赋形剂：如本文所用，短语“药学上可接受的赋形剂”是指除了本文所述化合物以外的任何成分(例如，能够悬浮或溶解活性化合物的载体)，且其具有在患
者中基本上无毒的和非炎症性的性质。赋形剂可以包括，例如：抗粘剂、抗氧化剂、粘合剂、
包衣剂、压缩助剂、崩解剂、染料(色料)、软化剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣
剂、矫味剂、香料、助流剂(流动增进剂)、润滑剂、防腐剂、印刷用油墨、吸附剂、助悬剂或分
散剂、甜味剂和水合水。示例性的赋形剂包括但不限于丁羟甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸钙(二
碱式)、硬脂酸钙、交联羧甲纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交聚维酮、半胱氨酸、乙
基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露醇、甲
硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚维酮、
预胶化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸
钠、羟乙酸淀粉钠、山梨醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维生素A、维生素E、
维生素C和木糖醇。
者中基本上无毒的和非炎症性的性质。赋形剂可以包括，例如：抗粘剂、抗氧化剂、粘合剂、
包衣剂、压缩助剂、崩解剂、染料(色料)、软化剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣
剂、矫味剂、香料、助流剂(流动增进剂)、润滑剂、防腐剂、印刷用油墨、吸附剂、助悬剂或分
散剂、甜味剂和水合水。示例性的赋形剂包括但不限于丁羟甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸钙(二
碱式)、硬脂酸钙、交联羧甲纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交聚维酮、半胱氨酸、乙
基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露醇、甲
硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚维酮、
预胶化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸
钠、羟乙酸淀粉钠、山梨醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维生素A、维生素E、
维生素C和木糖醇。
[1097] 药学上可接受的盐：本发明还包括本文所述化合物的药学上可接受的盐。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指公开的化合物的衍生物，其中通过将现有的酸或碱部分转
化成其盐形式(例如，通过使游离碱基团与合适的有机酸反应)来修饰母体化合物。药学上
可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基如羧酸的
碱盐或有机盐；等。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、乙酸、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、
天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯磺酸、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸
盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖
酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚糖酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺
酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸
盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、
3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸
盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、
锂、钾、钙、镁等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲
胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。本发明的药学上可接受的盐包括例如从无毒的无机酸
或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学
方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，这样的盐可以通过使这些化合物的
游离酸或碱形式与化学计量量的适当的碱或酸在水或有机溶剂或这两者的混合物中反应
来制备；通常，非水性介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐的列表
可在以下文献中找到：Remington’s Pharmaceutical Sciences，17th ed.，Mack
Publishing Company，Easton，Pa.，1985，p.1418，Pharmaceutical Salts：Properties，
Selection，and Use，P.H.Stahl and C.G.Wermuth(eds.)，Wiley-VCH，2008；和Berge et
al.，Journal of Pharmaceutical Science，66，1-19(1977)，其每一篇通过引用的方式以
其整体并入本文。
化成其盐形式(例如，通过使游离碱基团与合适的有机酸反应)来修饰母体化合物。药学上
可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基如羧酸的
碱盐或有机盐；等。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、乙酸、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、
天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯磺酸、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸
盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖
酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚糖酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺
酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸
盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、
3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸
盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、
锂、钾、钙、镁等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲
胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。本发明的药学上可接受的盐包括例如从无毒的无机酸
或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学
方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，这样的盐可以通过使这些化合物的
游离酸或碱形式与化学计量量的适当的碱或酸在水或有机溶剂或这两者的混合物中反应
来制备；通常，非水性介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐的列表
可在以下文献中找到：Remington’s Pharmaceutical Sciences，17th ed.，Mack
Publishing Company，Easton，Pa.，1985，p.1418，Pharmaceutical Salts：Properties，
Selection，and Use，P.H.Stahl and C.G.Wermuth(eds.)，Wiley-VCH，2008；和Berge et
al.，Journal of Pharmaceutical Science，66，1-19(1977)，其每一篇通过引用的方式以
其整体并入本文。
[1098] 药学上可接受的溶剂化物：如本文所用，术语“药学上可接受的溶剂化物”意指其中合适的溶剂的分子掺入晶格中的本发明化合物。合适的溶剂在施用的剂量下是生理学上
可耐受的。例如，溶剂化物可以通过从包括有机溶剂、水或其混合物的溶液结晶、重结晶或
沉淀来制备。合适的溶剂的实例是乙醇、水(例如，一水合物、二水合物和三水合物)、N-甲基
吡咯烷酮(NMP)、二甲亚砜(DMSO)、N，N’-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N’-二甲基乙酰胺(DMAC)、
1，3-二甲基-2-咪唑啉酮(DMEU)、1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2-(1H)-嘧啶酮(DMPU)、乙腈
(ACN)、丙二醇、乙酸乙酯、苯甲醇、2-吡咯烷酮、苯甲酸苄酯等。当水是溶剂时，溶剂化物被
称作“水合物”。
可耐受的。例如，溶剂化物可以通过从包括有机溶剂、水或其混合物的溶液结晶、重结晶或
沉淀来制备。合适的溶剂的实例是乙醇、水(例如，一水合物、二水合物和三水合物)、N-甲基
吡咯烷酮(NMP)、二甲亚砜(DMSO)、N，N’-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N’-二甲基乙酰胺(DMAC)、
1，3-二甲基-2-咪唑啉酮(DMEU)、1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2-(1H)-嘧啶酮(DMPU)、乙腈
(ACN)、丙二醇、乙酸乙酯、苯甲醇、2-吡咯烷酮、苯甲酸苄酯等。当水是溶剂时，溶剂化物被
称作“水合物”。
[1099] 药代动力学：如本文所用，“药代动力学”是指分子或化合物在其涉及测定施用于活生物体的物质的结局时的任何一种或多种性质。药代动力学被分成几个领域，包括吸收
的程度和速率、分布、代谢和排泄。这通常被称作ADME，其中：(A)吸收是物质进入血液循环
的过程；(D)分布是物质遍及身体的流体和组织的分散或散布；(M)代谢(或生物转化)是母
体化合物不可逆地转化成子代谢物；和(E)排泄(或消除)是指物质从身体消除。在罕见的情
况下，一些药物不可逆地积累在身体组织中。
的程度和速率、分布、代谢和排泄。这通常被称作ADME，其中：(A)吸收是物质进入血液循环
的过程；(D)分布是物质遍及身体的流体和组织的分散或散布；(M)代谢(或生物转化)是母
体化合物不可逆地转化成子代谢物；和(E)排泄(或消除)是指物质从身体消除。在罕见的情
况下，一些药物不可逆地积累在身体组织中。
[1100] 物理化学的：如本文所用，“物理化学的”意指或涉及物理性质和/或化学性质。
[1101] 预防：如本文所用，术语“预防”是指部分地或完全地延迟感染、疾病、病症和/或病况的发作；部分地或完全地延迟特定感染、疾病、病症和/或病况的一种或多种症状、特征或
临床表现的发作；部分地或完全地延迟特定感染、疾病、病症和/或病况的一种或多种症状、
特征或表现的发作；部分地或完全地延迟自感染、特定疾病、病症和/或病况的进展；和/或
降低发生与感染、疾病、病症和/或病况相关的病理的风险。
临床表现的发作；部分地或完全地延迟特定感染、疾病、病症和/或病况的一种或多种症状、
特征或表现的发作；部分地或完全地延迟自感染、特定疾病、病症和/或病况的进展；和/或
降低发生与感染、疾病、病症和/或病况相关的病理的风险。
[1102] 前药：本发明还包括本文所述化合物的前药。如本文所用，“前药”是指处于一定形式的任何物质、分子或实体，所述形式据预期该物质、分子或实体在化学或物理改变后作为
治疗剂起作用。前药可以以某种方式共价地结合或掩蔽，并且其在施用于哺乳动物受试者
之前、之时或之后释放或转化成活性药物部分。前药可以通过以特定方式修饰存在于化合
物中的官能团来制备，所述方式使得所述修饰在常规操作中或在体内被切割成母体化合
物。前药包括这样的化合物：其中羟基、氨基、巯基或羧基键合至任何基团，该基团在施用于
哺乳动物受试者时裂解以分别形成游离的羟基、氨基、巯基或羧基。前药的制备和用途在以
下文献中讨论：，T.Higuchi和V.Stella，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems，”
A.C.S.Symposium Series的第14卷以及Bioreversible Carriers in Drug Design，
Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987，
这两篇文献均特此通过引用的方式以其整体并入。在一些实施方案中，本发明的pri-miR可
以是pre-miR的前药。同样，pri-或pre-miR可以是从其加工的人工miR的前药。
治疗剂起作用。前药可以以某种方式共价地结合或掩蔽，并且其在施用于哺乳动物受试者
之前、之时或之后释放或转化成活性药物部分。前药可以通过以特定方式修饰存在于化合
物中的官能团来制备，所述方式使得所述修饰在常规操作中或在体内被切割成母体化合
物。前药包括这样的化合物：其中羟基、氨基、巯基或羧基键合至任何基团，该基团在施用于
哺乳动物受试者时裂解以分别形成游离的羟基、氨基、巯基或羧基。前药的制备和用途在以
下文献中讨论：，T.Higuchi和V.Stella，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems，”
A.C.S.Symposium Series的第14卷以及Bioreversible Carriers in Drug Design，
Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987，
这两篇文献均特此通过引用的方式以其整体并入。在一些实施方案中，本发明的pri-miR可
以是pre-miR的前药。同样，pri-或pre-miR可以是从其加工的人工miR的前药。
[1103] 增殖：如本文所用，术语“增殖”是指生长、扩充或增加或引起快速地生长、扩充或增加。“增殖性的”是指具有增殖的能力。“抗增殖性的”是指具有抵抗或抵消增殖性质的性
质。
质。
[1104] 预防性的：如本文所用，“预防性的”是指用于阻止疾病传播的治疗或作用过程。
[1105] 预防：如本文所用，“预防”是指为维持健康和阻止疾病传播而采取的措施。
[1106] 蛋白质切割位点：如本文所用，“蛋白质切割位点”是指这样的位点：在该位点处可以通过化学方式、酶方式或光化学方式完成氨基酸链的受控切割。
[1107] 蛋白质切割信号：如本文所用，“蛋白质切割信号”是指标记或标志要切割的多肽的至少一个氨基酸。
[1108] 感兴趣的蛋白质：如本文所用，术语“感兴趣的蛋白质”或“期望的蛋白质”包括本文中提供的那些及其片段、突变体、变体和改变。
[1109] 近端的：如本文所用，术语“近端的”意指位于离中心较近的位置或与感兴趣的点或区域较近的位置。
[1110] 纯化：如本文所用，“纯化”、“纯化的”意指使得基本上纯的或清除不想要的组分、污染物质、混合物或缺陷。
[1111] 样品：如本文所用，术语“样品”或“生物样品”是指它的组织、细胞或组成部分(例如体液，包括但不限于血液、粘液、淋巴液、滑液、脑脊液、唾液、羊水、羊膜脐带血、尿、阴道
液和精液)的子集。样品还可以包括从完整生物体或它的组织、细胞或组成部分的子集制备
的匀浆物、裂解物或提取物，或其级分或部分，包括但不限于，例如，血浆、血清、脊髓液、淋
巴液，皮肤、呼吸道、肠道和泌尿生殖道的外表部分、泪液、唾液、乳汁、血细胞、肿瘤、器官。
样品进一步是指培养基，如营养物液体培养基或凝胶，其可以含有细胞组分，如蛋白质或核
酸分子。
液和精液)的子集。样品还可以包括从完整生物体或它的组织、细胞或组成部分的子集制备
的匀浆物、裂解物或提取物，或其级分或部分，包括但不限于，例如，血浆、血清、脊髓液、淋
巴液，皮肤、呼吸道、肠道和泌尿生殖道的外表部分、泪液、唾液、乳汁、血细胞、肿瘤、器官。
样品进一步是指培养基，如营养物液体培养基或凝胶，其可以含有细胞组分，如蛋白质或核
酸分子。
[1112] 信号序列：如本文所用，短语“信号序列”是指可以指引蛋白质的运输或定位的序列。
[1113] 单个单位剂量：如本文所用，“单个单位剂量”是在一次给药/一个时间/单个途径/单个接触点(即，单个施用事件)所施用的任何治疗剂的剂量。
[1114] 相似性：如本文所用，术语“相似性”是指聚合物分子之间例如多核苷酸分子(例如DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间的总体相关性。以与计算同一性百分比相
同的方式，可以计算聚合物分子彼此之间的相似性百分比，除了如本领域中所理解的，相似
性百分比的计算考虑保守取代。
同的方式，可以计算聚合物分子彼此之间的相似性百分比，除了如本领域中所理解的，相似
性百分比的计算考虑保守取代。
[1115] 分次剂量：如本文所用，“分次剂量”是将单个单位剂量或日总剂量分成两个或更多个剂量。
[1116] 稳定的：如本文所用，“稳定的”是指足够稳健以在从反应混合物分离至可用纯度下仍存在并且优选地能够配制成有效治疗剂的化合物。
[1117] 稳定化的：如本文所用，术语“稳定化”、“稳定化的”、“稳定化的区域”意指使得或变得稳定。
[1118] 立体异构体：如本文所用，术语“立体异构体”是指化合物(例如，本文描述的任何式的化合物)可能具有的所有可能的不同的异构形式以及构象形式，尤其是基础分子结构
的所有可能的立体化学上和构象上的异构形式、所有非对映异构体、对映异构体和/或构象
异构体。本发明的一些化合物可以以不同的互变异构形式存在，所述互变异构形式都被包
括在本发明范围内。
的所有可能的立体化学上和构象上的异构形式、所有非对映异构体、对映异构体和/或构象
异构体。本发明的一些化合物可以以不同的互变异构形式存在，所述互变异构形式都被包
括在本发明范围内。
[1119] 受试者：如本文所用，术语“受试者”或“患者”是指例如为了实验、诊断、预防和/或治疗目的可以向其施用本发明的组合物的任何生物体。典型的受试者包括动物(例如哺乳
动物，如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物和人类)和/或植物。
动物，如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物和人类)和/或植物。
[1120] 基本上：如本文所用，术语“基本上”是指表现出感兴趣的特征或性质的全部或接近全部的程度或度的定性条件。生物领域的普通技术人员会理解，生物学现象和化学现象
很少(如果有的话)达到完全和/或进行到完整或者获得或避免绝对结果。术语“基本上”因
此在本文中用于涵盖在许多生物学现象和化学现象中固有的潜在缺乏的完全性。
很少(如果有的话)达到完全和/或进行到完整或者获得或避免绝对结果。术语“基本上”因
此在本文中用于涵盖在许多生物学现象和化学现象中固有的潜在缺乏的完全性。
[1121] 基本上等于：如本文所用，当涉及剂量之间的时间差异时，该术语是指加/减2％。
[1122] 基本上同时地：如本文所用，并且在涉及多个剂量时，该术语是指在2秒内。
[1123] 遭受：正在“遭受”疾病、病症和/或病况的个体已经被诊断出或表现出疾病、病症和/或病况的一种或多种症状。
[1124] 易患：“易患”疾病、病症和/或病况的个体尚未诊断出和/或可能没有表现出所述疾病、病症和/或病况的症状，但是具有发生疾病或其症状的倾向。在一些实施方案中，易患
疾病、病症和/或病况(例如，癌症)的个体可以由以下一项或多项来表征：(1)与所述疾病、
病症和/或病况的发展相关的基因突变；(2)与所述疾病、病症和/或病况的发展相关的遗传
多态性；(3)与所述疾病、病症和/或病况相关的蛋白质和/或核酸的增加的和/或减少的表
达和/或活性；(4)与所述疾病、病症和/或病况的发展相关的习惯和/或生活方式；(5)所述
疾病、病症和/或病况的家族史；和(6)暴露于与所述疾病、病症和/或病况的发展相关的微
生物和/或被其感染。在一些实施方案中，易患疾病、病症和/或病况的个体将发生所述疾
病、病症和/或病况。在一些实施方案中，易患疾病、病症和/或病况的个体将不发生所述疾
病、病症和/或病况。
疾病、病症和/或病况(例如，癌症)的个体可以由以下一项或多项来表征：(1)与所述疾病、
病症和/或病况的发展相关的基因突变；(2)与所述疾病、病症和/或病况的发展相关的遗传
多态性；(3)与所述疾病、病症和/或病况相关的蛋白质和/或核酸的增加的和/或减少的表
达和/或活性；(4)与所述疾病、病症和/或病况的发展相关的习惯和/或生活方式；(5)所述
疾病、病症和/或病况的家族史；和(6)暴露于与所述疾病、病症和/或病况的发展相关的微
生物和/或被其感染。在一些实施方案中，易患疾病、病症和/或病况的个体将发生所述疾
病、病症和/或病况。在一些实施方案中，易患疾病、病症和/或病况的个体将不发生所述疾
病、病症和/或病况。
[1125] 持续释放：如本文所用，术语“持续释放”是指在特定时间段内符合释放速率的药物组合物或化合物的释放特性。
[1126] 合成的：术语“合成的”意指通过人生产、制备和/或制造的。本发明的多核苷酸或多肽或其他分子的合成可以是化学或酶促的。
[1127] 靶向的细胞：如本文所用，“靶向的细胞”是指感兴趣的任何一种或多种细胞。所述细胞可以在体外、在体内、在原位或在生物体的组织或器官中存在。所述生物体可以是动
物，优选地是哺乳动物，更优选地是人，并且最优选地是患者。
物，优选地是哺乳动物，更优选地是人，并且最优选地是患者。
[1128] 治疗剂：术语“治疗剂”是指当施用给受试者时具有治疗、诊断和/或预防效果和/或引起期望的生物学和/或药理学作用的任何药剂。
[1129] 治疗有效量：如本文所用，术语“治疗有效量”意指要递送的药剂(例如，核酸、药物、治疗剂、诊断剂、预防剂等)在施用于遭受或易患感染、疾病、病症和/或病况的受试者时
足以治疗所述感染、疾病、病症和/或病况；改善其症状；诊断、预防所述感染、疾病、病症和/
或病况；和/或延迟其发作的量。
足以治疗所述感染、疾病、病症和/或病况；改善其症状；诊断、预防所述感染、疾病、病症和/
或病况；和/或延迟其发作的量。
[1130] 治疗上有效的结果：如本文所用，术语“治疗上有效的结果”是指这样的结果：其在遭受或易患感染、疾病、病症和/或病况的受试者中足以治疗所述感染、疾病、病症和/或病
况；改善其症状；诊断、预防所述感染、疾病、病症和/或病况，和/或延迟其发作。
况；改善其症状；诊断、预防所述感染、疾病、病症和/或病况，和/或延迟其发作。
[1131] 总日剂量：如本文所用，“总日剂量”是在24小时内给出或开具的量。它可以作为单次单位剂量施用。
[1132] 转染：如本文所用，术语“转染”是指将外源核酸引入细胞中的方法。转染的方法包括但不限于化学方法、物理处理和阳离子脂质或混合物。
[1133] 治疗：如本文所用，术语“治疗”是指部分地或完全地缓解、改善、改进、减轻特定感染、疾病、病症和/或病况的一种或多种症状或特征，延迟所述症状或特征的发作，抑制所述
症状或特征的进展，降低所述症状或特征的严重程度，和/或减少所述症状或特征的发生
率。例如，“治疗”癌症可以是指抑制肿瘤的存活、生长和/或传播。出于降低发生与疾病、病
症和/或病况相关的病理的风险的目的，治疗可以施用于没有表现出所述疾病、病症和/或
病况的体征的受试者，和/或施用于仅表现出疾病、病症和/或病况的早期体征的受试者。
症状或特征的进展，降低所述症状或特征的严重程度，和/或减少所述症状或特征的发生
率。例如，“治疗”癌症可以是指抑制肿瘤的存活、生长和/或传播。出于降低发生与疾病、病
症和/或病况相关的病理的风险的目的，治疗可以施用于没有表现出所述疾病、病症和/或
病况的体征的受试者，和/或施用于仅表现出疾病、病症和/或病况的早期体征的受试者。
[1134] 未修饰的：如本文所用，“未修饰的”是指在以任何方式改变之前的任何物质、化合物或分子。未修饰的可以是指但不总是指生物分子的野生型或天然形式。分子可以经历一
系列修饰，因而每种经修饰的分子可以充当“未修饰的”起始分子进行后续修饰。
系列修饰，因而每种经修饰的分子可以充当“未修饰的”起始分子进行后续修饰。
[1135] VII.等同方案和范围
[1137] 在权利要求中，诸如“a”、“an”和“the”的冠词可以是指一个/种或超过一个/种，除非指示相反情形或以其它方式从上下文显而易见。如果群体成员中的一个、超过一个或所
有成员存在于指定的产品或过程中、在指定的产品或过程中使用、或以其他方式与指定的
产品或过程相关，则认为满足在一组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或描述，
除非指示相反情形或以其它方式从上下文显而易见。本发明包括这样的实施方案，其中所
述组的刚好一个成员存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方式与
给定产品或方法相关。本发明包括这样的实施方案，其中所述组成员中的超过一个或全部
都存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方式与给定产品或方法相
关。
有成员存在于指定的产品或过程中、在指定的产品或过程中使用、或以其他方式与指定的
产品或过程相关，则认为满足在一组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或描述，
除非指示相反情形或以其它方式从上下文显而易见。本发明包括这样的实施方案，其中所
述组的刚好一个成员存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方式与
给定产品或方法相关。本发明包括这样的实施方案，其中所述组成员中的超过一个或全部
都存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方式与给定产品或方法相
关。
[1138] 还应当指出，术语“包含”旨在是开放式的，并且允许但不要求包括额外的要素或步骤。当在本文中使用术语“包含”时，因此还包括和公开了术语“由......组成”。
[1139] 除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员所通常理解的相同含义。本文描述了用于本发明中的方法和材料；还可以使用本
领域已知的其他合适的方法和材料。
领域已知的其他合适的方法和材料。
[1140] 在给出范围的情况下，包括端点。此外，应当理解，除非另外指示或以其他方式从上下文和本领域普通技术人员的理解显而易见，以范围表述的数值在本发明的不同实施方
案中可包括处于所述范围内的任何具体数值或子范围，其精确至该范围的下限单位的十分
之一，除非上下文另外清楚地指明。
案中可包括处于所述范围内的任何具体数值或子范围，其精确至该范围的下限单位的十分
之一，除非上下文另外清楚地指明。
[1141] 另外，应当理解，可以从任意一项或多项权利要求中明确地排除落在现有技术内的本发明的任何特定实施方案。因为这样的实施方案被视为本领域普通技术人员已知的，
所以可以排除它们，即使所述排除并未在本文中明确地阐明。可以因为任何原因从任意一
项或多项权利要求排除本发明的组合物的任何特定实施方案(例如，任何核酸或由其编码
的蛋白质；任何生产方法；任何使用方法等)，无论是否与现有技术的存在相关。
所以可以排除它们，即使所述排除并未在本文中明确地阐明。可以因为任何原因从任意一
项或多项权利要求排除本发明的组合物的任何特定实施方案(例如，任何核酸或由其编码
的蛋白质；任何生产方法；任何使用方法等)，无论是否与现有技术的存在相关。
[1142] 所有引用的来源，例如，在本文中引用的参考文献、出版物、数据库、数据库条目和论文，均通过引用的方式并入本申请中，即便没有在引文中明确地说明。在引用的来源的描
述与本申请发生冲突的情况下，本申请中的描述应当占主导地位。
述与本申请发生冲突的情况下，本申请中的描述应当占主导地位。
[1143] 章节和表格的标题不旨在为限制性的。
[1144] VIII.实施例
[1145] 实施例1.调节性多核苷酸(人工pri-或pre-microRNA)的设计
[1146] 将人工pri-或pre-microRNA设计为含有编码人工miR(或人工siRNA或成熟miRNA)的shRNA或茎环结构，所述人工miR(或人工siRNA或成熟miRNA)具有至少一条可以与靶核酸
(例如，RNA或DNA)至少部分杂交的链以及以下特征中的一种或多种：(a)在基础茎的基部处
的UG基序，(b)在miRNA环的5’端处的UGUG基序，(c)在引导链的5’端处的尿苷，(d)从诸如
miR-22的规范microRNA衍生出的环结构，(e)在3’侧翼序列处的CNNC，(f)来自诸如let-7b
的规范microRNA的侧翼区域，和/或(g)在过客链和引导链之后在茎中的一个或多个摆动碱
基对、凸起和错配，和/或(h)在过客链和引导链之间的一个或多个摆动碱基对、凸起和错
配。
(例如，RNA或DNA)至少部分杂交的链以及以下特征中的一种或多种：(a)在基础茎的基部处
的UG基序，(b)在miRNA环的5’端处的UGUG基序，(c)在引导链的5’端处的尿苷，(d)从诸如
miR-22的规范microRNA衍生出的环结构，(e)在3’侧翼序列处的CNNC，(f)来自诸如let-7b
的规范microRNA的侧翼区域，和/或(g)在过客链和引导链之后在茎中的一个或多个摆动碱
基对、凸起和错配，和/或(h)在过客链和引导链之间的一个或多个摆动碱基对、凸起和错
配。
[1147] 设计后，将所述序列工程化或合成或插入质粒或载体中并施用于细胞或生物体。合适的质粒或载体是转染或转导靶细胞的任何一种。
[1148] 可以使用腺相关病毒载体(AAV)、病毒颗粒或整个病毒。
[1149] 施用导致调节性多核苷酸加工以产生改变靶核酸的表达水平的人工microRNA。
[1150] 通过本领域的方法可以确定靶标的有效敲低，并将表现出小的(如果有的话)脱靶效应。
[1151] 当测量加工时，调节性多核苷酸(例如，pri-或pre-microRNA)的有效过客-引导链双链体表现出大于8-10倍的引导链与过客链之比。
[1152] 实施例2.过客-引导链优化
[1153] 为了实现靶表达的特异性且有效的靶敲低或调节，可以分别优化将形成本发明的pri-或pre-microRNA的茎-环结构的双链体茎的过客链和引导链，例如作为siRNA(小干扰
RNA)。
RNA)。
[1154] 针对选择的靶核酸将siRNA设计为规范siRNA，其具有19碱基对中央双链体以及在双链体的链的3’端上的二核苷酸突出端，并且其中反义链(引导链)在19核苷酸区域上具有
与靶核酸的完美互补性。
与靶核酸的完美互补性。
[1155] 可选地，将siRNA设计成其中有义链(过客链)包含与靶核酸的小于19个核苷酸的同一性(identity)。
[1156] 对有义-反义(过客-引导)链双链体碱基配对进行修饰以引入摆动、凸起或错配。可以在有义链的5’或3’末端处掺入插入或删除或错配，并且这些插入或删除可以反映或可
以不反映在反义链(引导链)上。
以不反映在反义链(引导链)上。
[1157] 通过本领域用于靶敲低和其他有关的生理学和药代动力学性质以及用于脱靶效应的程度的已知的标准方法，测试得到的siRNA。
[1158] 然后在有或没有进一步修饰的情况下将表现出足够的靶敲低和少脱靶效应的siRNA工程化为本发明的pri-或pre-microRNA的过客链和引导链。
[1159] 实施例3.靶向HTT的Pri和pre-microRNA
[1160] 将发现是有效的过客-引导链双链体工程化至表达载体中并转染进中枢神经系统或神经元细胞系或其他来源的永生花细胞系的细胞中。尽管在siRNA敲低研究中使用的突
出端是用于siRNA的规范dTdT，但是在合成的pri-或pre-miR中的突出端可以包含任何二核
苷酸突出端。
出端是用于siRNA的规范dTdT，但是在合成的pri-或pre-miR中的突出端可以包含任何二核
苷酸突出端。
[1161] 使用的细胞可以是原代细胞或来源于诱导的多能干细胞(iPS细胞)。
[1162] 然后测量靶标的敲低，并进行深度测序以确定从在表达载体中施用的每个pri-或pre-microRNA加工的确切过客链和引导链。
[1163] 计算引导链与过客链之比以确定装配的效率，例如，装配成RNA诱导的沉默复合物(RISC)的效率。
[1164] 对引导链和过客链的5’端测序以确定切割位点并确定5’端加工精确度。预期加工精确度将高于85％。
[1165] 在一个平行研究中共转染HeLa细胞以分析靶标的体外敲低。平行地，建立使用基于细胞的萤光素酶报告基因测定；使用含有引导链靶位点的荧光素酶构建体来评估中靶效
应以及使用具有过客链靶位点的构建体来确定脱靶(过客链)效应。
应以及使用具有过客链靶位点的构建体来确定脱靶(过客链)效应。
[1166] 再次进行深度测序。
[1167] 实施例4.在AAV-miRNA载体中的Pri-miRNA构建体
[1168] 将设计的siRNA的过客-引导链双链体工程化为AAV-miRNA表达载体。构建体(从ITR到ITR，按5’到3’的顺序)包含突变体或野生型ITR、启动子(CMV、H1、U6或CBA启动子(其
包括CMVie增强子、CB启动子和SV40或人β珠蛋白内含子)、靶标的pri-miRNA构建体、兔珠蛋
白或人生长激素polyA和野生型ITR。进行体外和体内研究以测试AAV-miRNA表达载体的功
效。
包括CMVie增强子、CB启动子和SV40或人β珠蛋白内含子)、靶标的pri-miRNA构建体、兔珠蛋
白或人生长激素polyA和野生型ITR。进行体外和体内研究以测试AAV-miRNA表达载体的功
效。
[1169] 尽管已经就几个描述的实施方案相当详尽地且相当具体地描述了本发明，但是并不旨在将本发明限于任何这样的细节或实施方案或任何具体实施方案，而是应当参考随附
权利要求来解释本发明，从而在考虑现有技术的情况下对这些权利要求提供最广泛的可能
解释，并因此有效地包括本发明的预期范围。
权利要求来解释本发明，从而在考虑现有技术的情况下对这些权利要求提供最广泛的可能
解释，并因此有效地包括本发明的预期范围。
[1170] 在本文中提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用的方式以其整体并入。如果出现矛盾，以本说明书包括定义为准。另外，章节标题、材料、方法和实施
例仅为示例性的，而不旨在为限制性的。
例仅为示例性的，而不旨在为限制性的。
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