一种延缓衰老的中药组合物及其制备方法
阅读：1043发布：2020-06-24
专利汇可以提供一种延缓衰老的中药组合物及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种延缓衰老的中药组合物及其制备方法。本发明所提供的中药组合物由下述 质量 份的原料制成：淫羊藿12-30份、女贞子8-24份；优选的淫羊藿和女贞子的质量比为(1-1.5)：1。制备方法如下：1)按质量份数称取淫羊藿、女贞子，加 水 浸泡后，煎煮提取，收集煎液并浓缩成相对 密度 为1.15-1.20(22℃测定)的浸膏；2)向浸膏中加入 乙醇 使其含醇量以体积含量计达到40％-80％，静置，取上清液回收乙醇，即得。本发明的中药提取物组合物针对衰老发病机制之“肾精不足，阴阳失衡”的特点，选择平补肾中阴阳之药对淫羊藿、女贞子为研究对象，为开发平补阴阳药对淫羊藿、女贞子有效成分延缓衰老的新药提供 基础 。，下面是一种延缓衰老的中药组合物及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种延缓衰老的中药组合物，由下述质量份的原料制成：淫羊藿12-30份、女贞子8-
24份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：所述淫羊藿和女贞子的质量比为(0.5-2)：1。
3.权利要求1或2所述的中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
1)按所述质量份数称取淫羊藿、女贞子，加水浸泡后，煎煮提取，收集煎液并浓缩成相对密度为1.15-1.20的浸膏；
2)向所述浸膏中加入乙醇或乙醇水溶液使其含醇量以体积含量计达到40％-80％，静置，取上清液回收乙醇，即得所述中药组合物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，加入的水量为所述淫羊藿和女贞子总质量的5—10倍；所述浸泡的时间为20min-1h。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述煎煮提取进行
1—3次，每次煎煮提取的时间为1—2小时。
6.根据权利要求3-5中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为85—95％；所述静置的时间为4—12小时。
7.根据权利要求3-6中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述方法还包括下述步骤：将所述中药组合物浓缩至相对密度为1-2.5的浸膏，干燥，粉碎成细粉，得到中药组合物粉末。
8.权利要求1或2所述的中药组合物在制备延缓衰老药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述延缓衰老具体体现在下述1)-8)中的至少一种：
1)降低哺乳动物血清中超氧化物歧化酶、丙二醛、还原型谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶及总抗氧化能力水平；
2)降低哺乳动物血清中天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、甘油三酯的含量；
3)提高哺乳动物血清中雌二醇、睾酮、促黄体生成素、促卵泡生成素、促性腺激素释放激素的含量；
4)改善哺乳动物下丘脑-垂体-性腺轴的功能；
5)降低哺乳动物支气管管壁厚度以及肌壁厚度；
6)降低哺乳动物心肌纤维间隙，升高哺乳动物心肌细胞面积百分比；
7)降低哺乳动物肝细胞脂肪变性百分比，提高哺乳动物肝细胞面积百分比；
8)增加哺乳动物脾小体的直径。
10.一种延缓衰老的药物，其活性成分为权利要求1或2所述的中药组合物。
一种延缓衰老的中药组合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种延缓衰老的中药组合物及其制备方法。
背景技术
[0002] 随着社会发展，人口老龄化成为突出问题。据WHO报道，全球老年人口约有6亿人，中国老年人口占全国人口总数的10％以上，并以年均3.2％的速度增长；至2050年全球老年人口将增至20亿，占总人口的比例将达到35％。面对社会的老龄化及老龄人口迅速的发展趋势，如何延缓衰老已成为医学界崭新的具有积极作用和重大价值的研究课题。
[0003] 衰老分生理性衰老与病理性衰老两类。生理性衰老通常指生物体发育成熟后，在正常情况下随着年龄的增加机能减退，内环境稳定性下降，全身复杂的形态结构与生理功能发生不可逆的退行性变化，直至趋向死亡的过程。而疾病或异常因素可引起病理性的衰老，使衰老现象提早出现。抗衰老研究一直是医学领域的热门课题，对衰老机制的认识从分子、生理、生化及形成等不同层面、不同角度产生了很多学说，如神经-内分泌-免疫衰老学说、代谢废物累积学说、炎症衰老学说、程序性衰老学说、复制性衰老学说、自由基学说等等。虽然关于衰老的机制研究很多，但各种学说仅能从某一角度进行阐述，无法全面解释衰老的整个进程。
[0004] 在中医学对于衰老的认识的诸多学说中，肾虚衰老学说一直占主导地位，认为肾为先天之本，主藏精；肾精通过肾阳蒸化肾阴产生肾气，而肾气则直接关系到人体的生长、发育、生殖和衰老。一般人随着年龄增加，肾虚呈递增趋势。有调查报道，肾虚的发生在30岁已有一定百分率，40岁以上可达70％，70岁以上达95％，90岁以上达100％。现代观察亦表明，中老年脏腑辨证属肾虚者可高达80.4％。调查自然人群虚证中发现，其肾虚排在首位，可见肾虚与衰老密切相关。肾中精气不足，肾中阴阳渐亏是衰老的核心及根本原因，且始终贯穿于整个衰老过程。
[0005] 基于上述肾虚与衰老的联系，中医药抗衰老的治疗历来强调补肾方药的应用。通过对文献的回顾，发现在中医药抗衰老的实验研究中，补肾法为抗衰老研究中的一支生力军，其中尤以六味地黄丸、金匮肾气丸、左归丸、右归丸等系列组方为研究重点，大量学者从药理药效方面开展了原方或拆方的研究，并深入到分子和基因水平进行了探讨。初步证明了补肾法是有效的抗衰老途径之一，但相关研究也存在着一定的不足。①多基于某一种现代衰老机制学说来说明药物作用，多采用单点取样的静态观察模式，缺乏对衰老的系统生物学进程的影响的解释。②多采用病理性衰老模型，未能联系中医证型本质：多采用单方应用的观察模式，即不同的学者在同样的衰老模型上分别证实滋阴方或益阳方的作用，很少同时进行滋阴、益阳方药作用的对比研究或配伍功用研究，忽视了方药对于肾虚证(包括肾精不足、肾阴虚、肾阳虚、肾气虚等具体证型)的选择作用，无法说明中医药“辨证论治”的精髓。
[0006] 北京市级及国家级名老中医李世增教授临床善用淫羊藿女贞子配伍治疗衰老相关疾病，以淫羊藿女贞子配伍“平补阴阳、补肾益精”为基础，随证加减组方，取得较好的疗效。李老认为衰老辨证以肾阴虚、肾阳虚、肾精不足(阴阳两虚)三证为主，崇尚张景岳“善补阳者，必于阴中求阳，则阳得阴助而生化无穷；善补阴者，必于阳中求阴，则阴得阳升而泉源不竭”的配伍指导，无论临床哪一见证，必以淫羊藿、女贞子二药合用。补肾阳中药淫羊藿、补益肝肾之阴中药女贞子均具有药用植物分布广，低毒副作用、价格合理、标本兼治、资源丰富、可长期服用等优点；且组方药味少，有效成分明确，故有着良好的开发和应用前景。
发明内容
[0007] 本发明的目的是提供一种延缓衰老的中药组合物。
[0008] 本发明所提供的延缓衰老的中药组合物由下述质量份的原料制成：淫羊藿12-30份、女贞子8-24份。
[0009] 所述淫羊藿的质量份具体可为12-15份、15-30份；所述女贞子的质量份具体可为8-15份、15-24份。
[0010] 优选的，所述淫羊藿和女贞子的质量比为(0.5-2)：1，进一步可为(1-1.5)：1。
[0011] 更进一步的，所述中药组合物药物组合物由如下原料制成：淫羊藿15份、女贞子15份；或所述中药组合物药物组合物由如下原料制成：淫羊藿12份、女贞子8份；所述中药组合物药物组合物由如下原料制成：淫羊藿30份、女贞子20份。
[0012] 制成本发明药物组合物的各原料药是按照质量份作为配比，在生产时可按照相应的比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或减小，但各组成之间的原料药质量配比比例不变。
[0013] 本发明的另一个目的是提供上述延缓衰老的中药组合物的制备方法。
[0014] 本发明的所提供的延缓衰老的中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
[0015] 1)按所述质量份数称取淫羊藿、女贞子，加水浸泡后，煎煮提取，收集煎液并浓缩成相对密度为1.15-1.20(22℃测定)的浸膏；
[0016] 2)向所述浸膏中加入乙醇或乙醇水溶液使其含醇量(以体积含量计)达到40-80％(具体可为60％)，静置，取上清液回收乙醇，即得所述中药组合物。
[0017] 该药物组合物的药液可以直接或适量浓缩后制成口服液。
[0018] 其中，步骤1)中加入的水量为所述淫羊藿和女贞子总质量的5—10倍(具体可为8倍)；所述浸泡的时间可为20min至1h(具体可为30分钟)。
[0019] 所述煎煮提取可进行1—3次(优选为2次)，每次煎煮提取的时间可为1—2小时。
[0020] 步骤2)中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量具体可为85—95％；所述静置的时间可为4—12小时。
[0021] 为了进一步得到固态的药物，所述方法还包括：将所述中药组合物浓缩至相对密度为1.0-2.5(具体可为1.3)(22℃测定)的浸膏，干燥，粉碎成细粉，得到中药组合物粉末的步骤；或进一步将所述中药组合物粉末加辅料制成颗粒剂或胶囊剂。
[0022] 上述方法制备的中药组合物可根据需要进一步制备成药学上可接受的剂型。
[0023] 本发明的再一个目的是提供所述中药组合物的应用。
[0024] 本发明所提供的中药组合物的应用是其在制备延缓衰老药物中的应用。
[0025] 所述延缓衰老具体体现在下述1)-7)中的至少一种：
[0027] 2)降低哺乳动物血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)以及甘油三酯(TG)的含量；
[0029] 4)降低哺乳动物支气管管壁厚度以及肌壁厚度；
[0031] 6)降低哺乳动物肝细胞脂肪变性百分比，提高肝细胞面积百分比；
[0032] 7)增加哺乳动物脾小体的直径。
[0033] 所述哺乳动物包括人类。
[0034] 以上述中药组合物为活性成分制成的药物也属于本发明的保护范围。通过将上述药物组合物，直接制备或者加入药学上可接受的辅料后制备，可制成任何药学上可接受的剂型。以口服制剂为例包括：胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、滴丸剂、缓控释制剂、口服液、合剂和糖浆剂；以外用制剂为例包括：软膏剂、栓剂、贴剂、酒剂、酊剂、凝胶剂、搽剂、气雾剂、喷雾剂和涂膜剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
[0035] 与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0036] (1)本发明的中药提取物组合物针对衰老发病机制之“肾精不足，阴阳失衡”的特点，选择平补肾中阴阳之药对淫羊藿、女贞子为研究对象，为开发平补阴阳药对淫羊藿、女贞子有效成分延缓衰老的新药提供基础。
[0037] (2)本发明的中药组合物制剂的原料药资源分布广，毒副作用低，可长期服用。
[0038] (3)本发明的中药组合物制剂组方精简，有效成分明确，疗效确切，质量可控，且无须传统中药的煎煮过程，服用方便。
具体实施方式
[0040] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0041] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0042] 下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0043] 下述实施例中除特殊说明外，％均表示g/100mL。
[0044] SPF级3月龄(8只)、6月龄组(8只)、8月龄(32只)健康雄性SD大鼠，由北京维通利华实验动物技术股份有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2016-0006。
[0045] 下述实施例中所用的淫羊藿、女贞子均符合中国药典(2015年版)一部正文各药材项下的有关规定。投料前，通过鉴定，各味药材实物与名称相符，质量符合标准。
[0046] 下述实施例中所使用的淫羊藿提取物的制备方法如下：
[0047] 将淫羊藿15kg，加120kg水浸泡30min，煎煮2次，每次1hr。合并2次煎液并浓缩至相对密度1.2(22℃)的浸膏。加入95％乙醇使其含醇量达60％。静置过夜，取上清液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.3的浸膏，减压干燥，粉碎成细粉。应用时以蒸馏水稀释。
[0048] 下述实施例中所使用的女贞子提取物的制备方法如下：
[0049] 将女贞子15kg，加120kg水浸泡30min，煎煮2次，每次1hr。合并2次煎液并浓缩至相对密度1.2(22℃)的浸膏。加入95％乙醇使其含醇量达60％。静置过夜，取上清液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.3的浸膏，减压干燥，粉碎成细粉。应用时以蒸馏水稀释。
[0050] 实施例1、淫羊藿和女贞子提取物的制备以及中药组合物制剂的制备
[0051] 一、中药组合物颗粒剂：
[0052] 将淫羊藿15kg，女贞子15kg混合，加240kg水浸泡30min，煎煮2次，每次1hr。合并2次煎液并浓缩至相对密度1.15-1.20(22℃)的浸膏。加入95％乙醇使其含醇量达60％。静置过夜，取上清液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.3的浸膏，减压干燥，粉碎成细粉。将浸膏粉2.4kg与糊精2.4kg按照1∶1比例混合，制成软材，过筛制颗粒，70℃常压干燥4h，按每包0.5g。
[0053] 二、中药组合物胶囊的制备：
[0054] 将淫羊藿12kg，女贞子8kg混合，加160kg水浸泡30min，煎煮2次，每次1hr。合并2次煎液并浓缩至相对密度1.15-1.20的浸膏。加入95％乙醇使其含醇量达60％。静置过夜，取上清液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.3的浸膏，减压干燥，粉碎成细粉。将浸膏粉1.5kg与糊精1.5kg按照1∶1比例混合，制成软材，过筛制颗粒，70℃常压干燥4h，整粒，装胶囊，每粒装0.5g。
[0055] 三、中药组合物口服液的制备：
[0056] 将淫羊藿30kg，女贞子20kg混合，加400kg水浸泡30min，煎煮2次，每次1hr。合并2次煎液并浓缩至相对密度1.15-1.20的清膏。加入95％乙醇100kg使其含醇量达60％。静置过夜，取上清液减压回收乙醇，并浓缩至50000ml，滤过，灌装，每支10ml，灭菌，即得口服液。
[0057] 实施例2、淫羊藿女贞子提取物对自然衰老大鼠的影响
[0058] 一、取SPF级3月龄(8只)、6月龄组(8只)、8月龄(32只)健康雄性SD大鼠。8月龄大鼠随机分为4组，包括17月龄组，淫羊藿女贞子组(配伍组)、淫羊藿组、女贞子组，每组8只。3、6月龄组大鼠购买后适应环境1周后处死。17月龄组与用药各组以8月龄大鼠正常饲养至15月龄后开始灌胃给药，每日1次，连续给药2月。17月龄组、淫羊藿组、女贞子组、配伍组分别给予等体积的生理盐水、淫羊藿提取物2g/kg、女贞子提取物1.5g/kg、淫羊藿女贞子提取物3.5g/kg体重灌胃给药。
[0059] 二、大鼠饲养至相应月龄后处死。各组大鼠末次灌胃后禁食16h，称重，腹腔麻醉，腹主动脉取血；取左肾、肝脏、心脏、脾脏、肺脏，置于10％甲醛中固定，HE染色，进行脏腑组织病理计量统计。自动生化仪检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase，AST)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase，ALT)、总胆固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglyceride，TG)、尿素氮(Blood urea nitrogen，BUN)、肌酐(Creatinine，Cr)的含量；采用比色法检测大鼠血清总一氧化氮合成酶(Total nitric oxide synthase，TNOS)、诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase，iNOS)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathion peroxidase，GSH-PX)、总抗氧化能力(Total antioxidant capacity，T-AOC)；微板法检测还原型谷胱甘肽(Glutathione，GSH)、一氧化氮(Nitric oxide，NO)；WST-1法检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活性；TBA法检测丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量。酶免法检测血清中雌二醇(estradio，E2)、睾酮(testosterone，T)、促黄体生成素(luteinizing hormone，LH)、促卵泡生成素(follic stimulating hormone，FSH)、促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone，GnRH)。实验数据采用均数±标准差 表示，组间比较采用方差齐性检验及单因素方差分析。结果如下：
[0060] (一)、各组大鼠肝功能及血脂水平的比较
[0061] 表1各组大鼠血清AST、ALTT、TC和TG含量的比较( n＝8)
[0062]
[0063] 注：与3月龄组比较，*P<0.05，**P<0.01；与6月龄组比较，△P<0.05；与17月龄组比较，#P<0.05。
[0064] 表1结果显示：与3、6月龄青年大鼠比较，17月龄组老年大鼠血清肝功能指标AST、ALT和血脂TC、TG含量均显著升高(均P<0.05或0.01)。与17月龄组比较，配伍组能显著降低AST、ALT、TC、TG的含量(P<0.05)，女贞子组仅能降低AST含量(P<0.05)，淫羊藿组能降低TC、TG含量(均P<0.05)。
[0065] (二)、各组大鼠肾功能水平的比较
[0066] 表2各组大鼠血清BUN、Cr含量的比较( n＝8)
[0067]
[0068] 注：与3月龄组比较，**P<0.01；与6月龄组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与17月龄组比较，#P<0.05，##P<0.01。
[0069] 表2结果显示：与3月龄、6月龄比较，17月龄组BUN含量显著降低(P<0.01)。与17月龄组比较，配伍组Cr和BUN含量显著降低(P<0.05或P<0.01)；淫羊藿组BUN含量降(P<0.05)；女贞子组Cr含量降低(P<0.01)。
[0070] (三)、各组大鼠血清抗氧化作用的比较
[0071] 表3各组大鼠血清SOD、MDA、GSH-PX、GSH及T-AOC的比较( n＝8)
[0072]
[0073]
[0074] 注：与3月龄组比较，**P<0.01；与6月龄组比较，△△P<0.01,△P<0.05；与17月龄组比## ■ ■■较，P<0.01；与配伍组比较，P<0.05， P<0.01。
[0075] 表3结果显示：分别与3月龄、6月龄组大鼠比较，17月龄组大鼠血清中SOD、GSH、GSH-PX、T-AOC水平显著降低(P<0.01)，MDA水平显著升高(P<0.01)，提示老龄大鼠血清中抗氧化水平逐渐降低，氧化水平升高。与17月龄组比较，淫羊藿组大鼠血清中SOD、MSA、GSH及GSH-PX水平有统计学差异(均P<0.01)，女贞子组大鼠血清中SOD、MDA、GSH及T-AOC水平有统计学差异(均P<0.01)，配伍组大鼠血清中SOD、MDA、GSH、GSH-PX及T-AOC水平均有统计学差异(均P<0.01)。此外，配伍组对MDA、GSH-PX、T-ACO的影响作用均较淫羊藿、女贞子单用疗效更加显著(P<0.05或0.01)；配伍组对SOD的升高作用较淫羊藿单用组有显著差异(P<0.01)。
[0076] (四)、各组大鼠血清NO和NOS水平的比较
[0077] 表4各组大鼠血清NO和NOS含量的比较( n＝8)
[0078]
[0079] 注：与3月龄组比较，**P<0.01；与6月龄组比较，△△P<0.01；与17月龄组比较，##P<0.01；与配伍组比较，■P<0.05，■■P<0.01。
[0080] 表4结果显示：分别与3月龄、6月龄组大鼠比较，17月龄组大鼠血清中NO、TNOS、iNOS水平显著升高(P<0.01)。与17月龄组比较，淫羊藿组、女贞子组及配伍组大鼠血清中NO、TNOS、iNOS均显著减少(P<0.01或P<0.05)。此外，配伍组大鼠血清中TNOS分别较淫羊藿、女贞子单用组有显著性差异(P<0.01)；配伍组降低血清NO水平较女贞子单用组有显著差异(P<0.05)。
[0081] (五)、各组大鼠血清E2、T、LH、FSH和GnRH水平的比较
[0082] 表5各组大鼠血清E2、T、LH、FSH和GnRH含量的比较( n＝8)
[0083]
[0084] 注：与3月龄组比较，*P<0.05，**P<0.01；与6月龄组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与17月龄组比较，#P<0.05，##P<0.01；与配伍组比较，■P<0.05，■■P<0.01。
[0085] 表5结果显示：分别与3月龄、6月龄组大鼠比较，17月龄组大鼠血清中E2、T、GnRH水平显著降低(P<0.01)；与6月龄大鼠比较，17月龄大鼠LH和FSH水平显著降低(P<0.01或P<0.05)。与17月龄组比较，配伍组大鼠血清中E2、T、GnRH、LH、FSH均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)，但淫羊藿、女贞子单用组均无差异。此外，配伍组大鼠血清中E2和T与淫羊藿、女贞子单用组有显著差异(P<0.01或P<0.05)，提示淫羊藿女贞子配伍具有改善下丘脑-垂体-性腺轴的功能。
[0086] (六)、各组大鼠肺组织病理计量参数的比较
[0087] 表6各组大鼠肺组织病理计数( n＝6)
[0088]
[0089] 注：与3月龄组比较，**P<0.01；与6月龄组比较，△△P<0.01；与17月龄组比较，##P<■0.01；与配伍组比较，P<0.05。
[0090] 表6结果显示：分别与3月、6月组比较，17月组的支气管管壁厚度以及肌壁厚度均显著增加(均P<0.01)。与17月组相比，淫羊藿组和配伍组的管壁厚度以及平滑肌厚度均显著降低(均P<0.01)；与女贞子单用比较，配伍组能显著降低管壁厚度以及平滑肌厚度(均P<0.05)。
[0091] (七)、各组大鼠心脏病理计量参数的比较
[0092] 表7各组大鼠心脏组织病理参数的比较( n＝6)
[0093]
[0094] 注：与3月龄组比较，**P<0.01；与6月龄组比较，△△P<0.01；与17月龄组比较，##P<■0.01；与配伍组比较，P<0.05。
[0095] 表8结果显示：与3月组比较，17月组大鼠心脏心肌纤维间隙明显增加(P<0.01)，心肌细胞面积百分比明显降低(均P<0.01)；与6月组比较，17月组大鼠心脏心肌纤维间隙明显增加(P<0.01)。与17月组相比，淫羊藿、女贞子和配伍组均显著降低心肌纤维间隙(均P<0.01)，仅配伍组能显著升高心肌细胞面积百分比(P<0.01)。此外，配伍组对心肌病理参数的影响作用显著优于淫羊藿单用(P<0.05或P<0.01)。
[0096] (八)、各组大鼠肝脏病理计量参数的比较
[0097] 表8各组大鼠肝脏组织病理参数的比较( n＝6)
[0098]
[0099] 注：与3月龄组比较，**P<0.01；与6月龄组比较，△△P<0.01；与17月龄组比较，##P<0.01；与配伍组比较，■P<0.05。
[0100] 表8结果显示：分别与3月、6月组比较，17月组大鼠脂肪变性、肝细胞面积百分比均有统计学意义(P<0.01)，提示衰老会出现肝细胞脂肪变性的病理改变。与17月组相比，配伍组显著降低肝细胞脂肪变性百分比(均P<0.01)；淫羊藿、女贞子及配伍组能显著提高肝细胞面积百分比(P<0.05或0.01)。此外，配伍组降低脂肪变性百分比的作用优于女贞子单用组(P<0.05)。
[0101] (九)、各组大鼠脾脏病理计量参数的比较
[0102] 表9各组大鼠脾脏组织病理参数的比较( n＝6)
[0103]
[0104] 注：与3月龄组比较，**P<0.01；与6月龄组比较，△△P<0.01；与17月龄组比较，##P<0.01。
[0105] 表9结果显示：分别与3月、6月组比较，17月组大鼠脾小体直径显著减少(P<0.01)。与17月组相比，淫羊藿、女贞子单用及配伍组均能显著增加脾小体的直径(均P<0.01)，提示药物对脾脏衰老具有改善作用(P<0.05或0.01)。
[0106] 实施例3、淫羊藿女贞子提取物清除自由基的联合作用研究
[0107] (一)对脂质过氧化自由基的清除能力的影响
[0108] 将5ml乙醇、5ml 0.1mol/L磷酸缓冲液(pH 8.0)、0.1mL亚油酸分别与250mg/mL、500mg/mL、750mg/mL、1000mg/mL、1500mg/mL的淫羊藿提取物、女贞子提取物、淫羊藿女贞子
4:3提取物、淫羊藿女贞子1:1提取物、淫羊藿女贞子2:1提取物、淫羊藿女贞子1:2提取物(体积均为1mL)混合，用50W紫外灯照射45min，然后加入4mL三氯乙酸(20％，W/W)，1mL 3％硫代巴比妥酸，95℃反应90min(冰浴)，离心后取上清，用分光光度计在532nm处比色，测其吸光度OD值，以蒸馏水为空白组。计算自由基清除率：P＝(OD0-OD样品)/OD0，OD0为空白组的吸光度值。
4:3提取物、淫羊藿女贞子1:1提取物、淫羊藿女贞子2:1提取物、淫羊藿女贞子1:2提取物(体积均为1mL)混合，用50W紫外灯照射45min，然后加入4mL三氯乙酸(20％，W/W)，1mL 3％硫代巴比妥酸，95℃反应90min(冰浴)，离心后取上清，用分光光度计在532nm处比色，测其吸光度OD值，以蒸馏水为空白组。计算自由基清除率：P＝(OD0-OD样品)/OD0，OD0为空白组的吸光度值。
[0109] 表10脂质过氧化自由基的清除率
[0110]
[0111] 计算分析得出上述样品的IC50值见表11：
[0112] 表11各样品清除脂质过氧化自由基的IC50值
[0113]
[0114] 参照Berenbaum于1985年提出的计算方法： 其中Xi：第i个药物在联合用药的药物个数。当Berenbaum指数小于1时，药物联合为协同作用，而当Berenbaum指数大于1时，则提示拮抗作用。本例计算得出：淫羊藿女贞子4:3提取物的Berenbaum指数＝0.7567；淫羊藿女贞子1:1提取物的Berenbaum指数＝0.7973；淫羊藿女贞子2:1提取物的Berenbaum指数＝0.6688；淫羊藿女贞子1:2提取物的Berenbaum指数＝
0.8687。提示配方中的各组分之间具有协同抗脂质过氧化作用。
0.8687。提示配方中的各组分之间具有协同抗脂质过氧化作用。
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