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一种含苯醚甲环唑和生物抗菌物质HSAF的杀菌组合物及其应用

阅读：821发布：2020-05-12

专利汇可以提供一种含苯醚甲环唑和生物抗菌物质HSAF的杀菌组合物及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种含苯醚甲环唑和生物抗菌物质HSAF的杀菌组合物及其应用。该杀菌组合物以苯醚甲环唑和HSAF为主要有效成分，其中苯醚甲环唑与HSAF的质量比为1:25～25:1。该杀菌组合物在上述配比范围内表现协同增效作用，克服和延缓了病菌的抗药性，杀菌速度快，防治效果好、持效期长、应用成本低。该杀菌组合物可以用于防控多种作物真菌、卵菌病害，尤其是果树、蔬菜的黑斑病、腐烂病、黑星病、炭疽病、锈病等真菌病害，明显优于单剂的防控效果。，下面是一种含苯醚甲环唑和生物抗菌物质HSAF的杀菌组合物及其应用专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，其特征在于，该杀菌组合物含有有效成分苯醚甲环唑和HSAF，其中苯醚甲环唑与HSAF的质量比为1:15～2:1或5:1～25:1。
2.根据权利要求1所述的含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，其特征在于，苯醚甲环唑与HSAF的质量比为1:15～1:3或2:1。
3.根据权利要求2所述的含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，其特征在于，苯醚甲环唑与HSAF的质量比为1:10～1:3或2:1。
4.根据权利要求3所述的含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，其特征在于，苯醚甲环唑与HSAF的质量比为1:3～1:5或1:10。
5.根据权利要求1所述的含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，其特征在于，该杀菌组合物中苯醚甲环唑与HSAF的质量含量为1％～90％。
6.根据权利要求5所述的含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，其特征在于，该杀菌组合物中苯醚甲环唑与HSAF的质量含量为5％～70％。
7.根据权利要求6所述的含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，其特征在于，该杀菌组合物中苯醚甲环唑与HSAF的质量含量为5％～30％。
8.根据权利要求7所述的含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，其特征在于，该杀菌组合物中苯醚甲环唑与HSAF的质量含量为10％～25％。
9.一种复配杀菌剂制剂，其特征在于，含有权利要求1所述的杀菌组合物和农药制剂领域可接受的辅料配制成农药上可接受的任意一种剂型。
10.根据权利要求9所述的复配杀菌剂制剂，其特征在于，所述剂型为水分散粒剂、可湿性粉剂、水乳剂、微乳剂或悬浮剂。
11.根据权利要求9所述的复配杀菌剂制剂，其特征在于，所述辅料为润湿剂、分散剂、展着剂、稳定剂、渗透剂、增稠剂、防冻剂、消泡剂、填料或溶剂。
12.权利要求1～8任一项所述的杀菌组合物或权利要求9～11任一项所述的复配杀菌剂制剂在防治作物真菌病害中的应用。
13.权利要求1～8任一项所述的杀菌组合物或权利要求9～11任一项所述的复配杀菌剂制剂在防治果树或蔬菜作物真菌病害中的应用。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述真菌病害为黑斑病、黑星病、炭疽病、锈病、腐烂病或轮纹病。

说明书全文

一种含苯醚甲环唑和生物抗菌物质HSAF的杀菌组合物及其

应用

技术领域

[0001] 本发明属于农药技术领域，具体涉及一种以苯醚甲环唑和生物抗菌物质HSAF为主要活性成分的杀菌组合物及其应用。

背景技术

[0002] 近年来，随着人们生活水平的提高，种植业结构和模式发生改变，绿色、高效的果树、蔬菜等园艺作物种植面积逐步扩大，品种日益丰富，经济产值迅速增加。在园艺作物品种的选育和推广过程中，果蔬的品质(包括营养价值、口感和外观形态特征等)被放在首位，其次才考虑品种的抗病性特征。另外，果树为多年生作物，蔬菜重茬栽培，都造成田间存在丰富的病原菌。因此，园艺作物病害，特别是真菌、卵菌病害的发生危害日益严重，大幅降低了园艺农产品的商品率，造成了巨大的经济损失。为了有效控制作物病害的危害，提高果蔬外观，化学杀菌剂被盲目超量使用，病原菌抗药性发展迅速，农药残留问题严重，一些优良化学杀菌剂的市场寿命也大大缩短。

[0003] 开发新型、安全、高效杀菌剂的周期长，人力和资金的投入巨大，风险高。基于现有作用机制不同杀菌剂，筛选安全、高效的复配杀菌剂组合物，研发周期短，投入少，风险低。相对于单一杀菌剂，复配杀菌剂能够显著提高病害防控效果，减缓病原菌的抗药性发展，扩大杀菌谱，减少化学农药的使用剂量，降低果蔬产品中的农药残留，提高果蔬经济效益。

[0004] 苯醚甲环唑，英文名称：Difenoconazole；分子式：C19H17Cl2N3O3；化学名称：顺,反-3-氯-4-[4-甲基-2-1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-1,3-二哑戊烷-2-基)苯基4-氯苯基醚；属三唑类杀菌剂。其杀菌谱广，安全性比较高，对子囊亚门，担子菌亚门和包括链格孢属、壳二抱属、尾孢霉属、刺盘抱属、球座菌属、茎点霉属、柱隔孢属、壳针孢属、黑星菌属在内的半知菌，白粉菌科，锈菌目和某些种传病原菌有持久的保护和治疗作用。经田间试验表明，能够有效防治园艺、蔬菜和粮食作物上的黑星病、黑斑病、斑点病、炭疽病、白粉病、早疫病、锈病、黑豆病等。

[0005] HSAF，英文全称：Heat Stable Antifungal Factor；分子式：C29H40O6N2；是一种由产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)OH11菌株生物合成的大环内酰胺类化合物；该物质结构和作用方式新颖，对热极其稳定，对包括梨黑斑病菌、黑星病菌、腐烂病菌在内的10多种病原真菌、卵菌均具有较强的拮抗活性(见授权专利ZL 201410823196.4)。田间试验结果表明，其对梨树黑斑病、黑星病、腐烂病、炭疽病、轮纹病等表现较好的防治效果。

[0006] 至今尚未见利用苯醚甲环唑和生物抗菌物质HSAF为主要活性成分研制复配杀菌剂防治果树黑斑病、黑星病、炭疽病等植物病害的报道。

发明内容

[0007] 针对上述存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种新型、安全、高效、成本低、应用范围广的含苯醚甲环唑和生物抗菌物质HSAF的杀菌组合物。该杀菌组合物能够有效防控作物真菌病害，尤其是对梨和苹果的黑斑病、腐烂病、黑星病、炭疽病、锈病等真菌病害防治效果好、持效期长、成本低。

[0008] 本发明的目的是通过下列技术措施来实现：

[0009] 一种含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，该杀菌组合物含有有效成分苯醚甲环唑和HSAF，其中苯醚甲环唑与HSAF的质量比为1:25～25:1。

[0010] 本发明所述的杀菌组合物，其苯醚甲环唑与HSAF的质量比优选为1:15～2:1或5:1～25:1，发明人发现，在此范围内，该杀菌剂组合物不但具有更好的协同增效作用，且使用剂量更低，持效期更长；进一步优选为1:15～1:3或2:1；更进一步优选为1:10～1:3或2:1；最优选为1:3～1:5或1:10。

[0011] 本发明杀菌组合物中的苯醚甲环唑和HSAF的配比可根据具体施用情况在合理范围内进行调整，例如苯醚甲环唑和HSAF二者的重量比为1:15、1:14、1:13、1:12、1:11、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、
13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、21:1、22:1、23:1、24:1、25:1等。

[0012] 本发明所述的杀菌组合物中苯醚甲环唑与HSAF的质量含量优选为1％～90％。更优选为5％～70％，更进一步优选为5％～30％，最优选为10％～25％。

[0013] 本发明还提供了一种复配杀菌剂制剂。

[0014] 本发明所提供的复配杀菌剂制剂，由含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物与农药制剂领域可接受的辅料配制成农药上可接受的任意一种剂型。

[0015] 所述复配杀菌剂的剂型可为下述剂型中的一种或几种剂型：水分散粒剂(WG)、可湿性粉剂(WP)、水乳剂(AE)、微乳剂(ME)、油悬浮剂(OF)、悬浮剂(SC)等。

[0016] 在本发明所述复配杀菌剂中，苯醚甲环唑和HSAF二者占组合物的质量百分含量为1％～90％。优选为5％～70％，更进一步优选为5％～30％，最优选为10％～25％。

[0017] 所述辅料包括但不限于润湿剂、分散剂、展着剂、稳定剂、渗透剂、增稠剂、防冻剂、消泡剂、填料、溶剂；其中，所述润湿剂可以为十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸盐、烷基酚甲醛树脂聚氧乙烯醚、脂肪醇硫酸盐、苯乙基酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚之中的一种或几种；所述分散剂可以为木质素磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、烷基乙基磺酸盐、烷基萘磺酸盐甲醛缩合物和聚羧酸盐类的一种或几种；所述稳定剂可以为环氧化植物油如环氧化大豆油、环氧化亚麻油中的一种或几种；所述展着剂可以为聚乙烯醇、烷基二苯醚二磺酸钠、聚三硅氧烷、油酸三乙醇胺中的一种或几种；所述渗透剂可以为氮酮、聚乙二醇酸烃基醚、农用有机硅中的一种或几种；所述增稠剂可以为黄原胶、瓜尔胶、迪特胶、羧甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、羧乙烯聚合物、丙烯酸系聚合物、淀粉衍生物、多糖类等；所述防冻剂可以为乙二醇、二乙二醇、丙二醇、丙三醇等多元醇类；所述消泡剂可以为聚二甲氧基烷、DF-830/831/832、道康宁3150、矿物油类中的一种或几种；所述溶剂可以为大豆油、油酸甲酯、白油、松节油、甲基萘高级脂肪烃油中的一种或几种；所述填料可以为白炭黑、玉米淀粉、高岭土、硅藻土、硫酸钠、硫酸铵中的一种或几种。

[0018] 本发明还提供所述的杀菌组合物在防治作物真菌病害上的应用，尤其是在防治果树、蔬菜作物病害方面的应用。所述的植物真菌病害可以为黑斑病、黑星病、炭疽病、锈病、腐烂病、轮纹病等。

[0019] 本发明还提供所述的含苯醚甲环唑和HSAF的复配杀菌剂在防治作物真菌病害上的应用，尤其是在防治果树、蔬菜作物病害方面的应用。所述的植物真菌病害可以为黑斑病、黑星病、炭疽病、锈病、腐烂病、轮纹病等。

[0020] 本发明所述含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物的各种应用剂型的生产工艺均属现有已知技术。

[0021] 本发明提供的含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物及其复配杀菌剂，通常采用喷雾的方法使用，也可以根据需要采用农业上应用的其他使用技术。

[0022] 本发明的有益效果：

[0023] 1、本发明所用的苯醚甲环唑和HSAF作用机理不同，相互混配不会产生拮抗作用，在一定的配比范围内表现出较高的协同增效作用，降低了杀菌剂的使用量，减少了用药次数，节省了用药成本，减轻了农药对农田生态环境的污染，提高了农产品品质。

[0024] 2、本发明的杀菌组合物适用于防治果树、蔬菜等的真菌、卵菌病害，特别是对黑斑病、黑星病、炭疽病、锈病、腐烂病、轮纹病等具有较好的防治效果。相对于单剂，该组合物具有明显协同增效作用，克服或延缓了病原菌的抗药性，延长了药剂的市场寿命，对抗药性菌株表现较高的抑菌活性，扩大了防病谱，显著提高了防治效果。

[0025] 3、本发明的含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物，药效发挥迅速，持效期长，安全性高，防病谱广，成本低，使用方便，其推广应用具有巨大的经济和社会效益。附图说明

[0026] 图1为苯醚甲环唑与HSAF最佳配比抑制梨黑斑病菌生长的室内生测实验结果。

具体实施方式

[0027] 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。

[0028] 本发明中所提及的生物抗菌活性物质HSAF为专利ZL 201410823196.4中所公开的抗菌活性物质。若无特殊说明，下述实施例中所用技术方法均为常规方法；若无特殊说明，下述实施例中所用试验材料，均为常规试剂材料；若无特殊说明，以下实施例中，所有百分比均为质量百分比。

[0029] 以下所述实施例仅为本发明部分较好的实施例，仅仅用于描述本发明，不能理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

[0030] 实施例1：10％苯醚甲环唑·HSAF油悬浮剂(1:3)

[0031] 含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物的各组分为：苯醚甲环唑2.5％，HSAF7.5％，苯乙基苯酚聚氧乙烯醚5％，木质素磺酸钠8％，环氧大豆油5％，有机膨润土5％，聚乙二醇酸烃基醚0.1％，加油酸甲酯至100％。

[0032] 将HSAF与油酸甲酯充分混合后，再将其他上述物料(有机膨润土除外)一起加入到反应釜混合机中，搅拌均匀，将物料注入多级砂磨机中研磨，研磨后的物料细度98％通过1-5μm后出料，物料再与事先溶解好的有机膨润土一起放入高剪切乳化釜中，乳化后即可制成
10％苯醚甲环唑·HSAF油悬浮剂。

[0033] 实施例2：11％苯醚甲环唑·HSAF水分散粒剂(1:10)

[0034] 含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物的各组分为：苯醚甲环唑1％，HSAF 10％，萘磺酸盐Morwet EFW 3％，聚羧酸盐类Agrilan 700 10％，硫酸铵5％，聚乙烯醇5％，硼砂2％，加高岭土至100％。

[0035] 将HSAF与填料吸附混合后，与上述其它物料一起加入锥形混合机中混合均匀，后经气流粉碎机粉碎，粉碎后的物料再经锥形混合机混合，混合后的物料细度98％通过325目标准筛，加入捏合机中捏合成可塑性物料，最后将此物料放入挤压造粒机中挤压造粒，造粒后经干燥、筛分制得11％苯醚甲环唑·HSAF水分散粒剂。

[0036] 实施例3：21％苯醚甲环唑·HSAF水分散粒剂(2:1)

[0037] 含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物的各组分为：苯醚甲环唑14％，HSAF 7％，木质磺酸钠8％，十二烷基硫酸钠2％，硫酸铵5％，聚乙烯醇5％，硼砂2％，道康宁3150 0.2％，加硅藻土至100％。

[0038] 将苯醚甲环唑与填料吸附混合后，与上述其它物料一起加入锥形混合机中混合均匀，后经气流粉碎机粉碎，粉碎后的物料再经锥形混合机混合，混合后的物料细度98％通过325目标准筛，加入捏合机中捏合成可塑性物料，最后将此物料放入挤压造粒机中挤压造粒，造粒后经干燥、筛分制得21％苯醚甲环唑·HSAF水分散粒剂。

[0039] 实施例4：20％苯醚甲环唑·HSAF可湿性粉剂(1:3)

[0040] 含苯醚甲环唑和HSAF杀菌组合物的各组分为：苯醚甲环唑5％，HSAF 15％，丁基萘磺酸钠3％，木质素磺酸钙5％，白炭黑5％，加高岭土至100％。

[0041] 将苯醚甲环唑与填料吸附混合后，与上述其它物料一起加入锥形混合机中混合均匀，后经气流粉碎机粉碎，粉碎后的物料再经锥形混合机混合，混合后的物料细度98％通过325目标准筛即制得20％苯醚甲环唑·HSAF可湿性粉剂。

[0042] 实施例5：12％苯醚甲环唑·HSAF悬浮剂(1:5)

[0043] 含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物的各组分为：苯醚甲环唑2％，HSAF 10％，苯乙基苯酚聚氧乙烯醚5％，木质素磺酸钠8％，乙二醇5％，硅酸镁铝2％，消泡剂0.5％，防腐剂0.1％，黄原胶0.1％，加水至100％。

[0044] 将HSAF与填料吸附混合后，再将其他上述物料(黄原胶除外)一起加入到反应釜混合机中，搅拌均匀，将物料注入多级砂磨机中研磨，研磨后的物料细度98％通过1-5μm后出料，物料再与事先溶解好的黄原胶一起放入高剪切乳化釜中，乳化后即可制成12％苯醚甲环唑·HSAF悬浮剂。

[0045] 实施例6：18％苯醚甲环唑·HSAF水分散粒剂(1:5)

[0046] 含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物的各组分为：苯醚甲环唑3％，HSAF 15％，十二烷基硫酸钠4％，羧酸盐类5％，尿素10％，加高岭土至100％。

[0047] 将HSAF与填料吸附混合后，与上述其它物料一起加入锥形混合机中混合均匀，后经气流粉碎机粉碎，粉碎后的物料再经锥形混合机混合，混合后的物料细度98％通过325目标准筛，加入捏合机中捏合成可塑性物料，最后将此物料放入挤压造粒机中挤压造粒，造粒后经干燥、筛分即制得18％苯醚甲环唑·HSAF水分散粒剂。

[0048] 实施例7：11％苯醚甲环唑·HSAF微乳剂(1:10)

[0049] 含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物的各组分为：苯醚甲环唑1％，HSAF 10％，十二烷基苯磺酸钙6％，苯乙基酚聚氧乙烯醚磷酸酯3％，农乳33#2％，烷基酚聚氧乙烯醚1％，异丙醇10％，聚二甲氧基烷0.5％，加水至100％。将以上原料按常规配制微乳剂的方法投入混合釜中混合，制成11％苯醚甲环唑·HSAF微乳剂。

[0050] 实施例8：21％苯醚甲环唑·HSAF油悬浮剂(2:1)

[0051] 含苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物的各组分为：苯醚甲环唑14％，HSAF7％，苯乙基苯酚聚氧乙烯醚5％，木质素磺酸钠8％，环氧大豆油5％，有机膨润土5％，加油酸甲酯至100％。

[0052] 将苯醚甲环唑与油酸甲酯充分混合后，再将其他上述物料(有机膨润土除外)一起加入到反应釜混合机中，搅拌均匀，将物料注入多级砂磨机中研磨，研磨后的物料细度98％通过1-5μm后出料，物料再与事先溶解好的有机膨润土一起放入高剪切乳化釜中，乳化后即可制成21％苯醚甲环唑·HSAF油悬浮剂。

[0053] 实施例9：两种杀菌活性物质不同配比组合对梨黑斑病菌的室内生测实验

[0054] 在室内采用菌丝生长速率法，测定不同药剂抑制梨黑斑病菌菌丝生长的EC50值，采用共毒系数计算方法，计算出混剂的共毒系数(CTC)，确定混剂的增效性，具体计算方法如下：

[0055] 以混剂中某一单剂为标准药剂(通常选择EC50较低者)，其它单剂为供试药剂，进行计算：

[0056] 单剂毒力指数＝标准药剂EC50/供试药剂EC50×100

[0057] 理论毒力指数(TTI)＝A单剂的毒力指数×A单剂在混剂中所占比例+B单剂的毒力指数×B单剂在混剂中所占比例

[0058] 实测毒力指数(ATI)＝标准单剂的EC50值/混剂的EC50值×100

[0059] 共毒系数(CTC)＝实测毒力指数/理论毒力指数×100

[0060] 共毒系数分级：CTC大于120时混剂具有协同增效性，CTC小于80时为拮抗，CTC在80-120之间为相加作用。

[0061] 按照有效成分苯醚甲环唑(A):HSAF(B)质量配比为：1:25、1:15、1:10、1:7、1:5、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、5:1、7:1、10:1、15:1、25:1进行试验，测定其对梨黑斑病菌的共毒系数。

[0062] 表1苯醚甲环唑+HSAF不同配比对梨黑斑病菌抑制作用的室内生测结果

[0063]

[0064] 上述室内生测结果表明，苯醚甲环唑与HSAF复配对梨黑斑病菌菌丝生长的抑制作用存在协同增效作用，其中苯醚甲环唑与HSAF按照1:3复配时，共毒系数(CTC)高达340.46，对梨黑斑病菌菌丝生长抑制作用的EC50仅为0.2416mg/L，显著低于苯醚甲环唑(0.5247mg/L)和HSAF(1.0145mg/L)(图1)。

[0065] 实施例10：用以上实施例制得的杀菌组合物制剂防治梨黑斑病田间试验

[0066] 供试药剂：选择实施例1～5中制备的复配杀菌剂，本试验药剂用量根据各个组分的不同分别设两个处理浓度。

[0067] 对照药剂：10％苯醚甲环唑可湿性粉剂(市购)

[0068] 5％HSAF可湿性粉剂(试验室制备)

[0069] 空白清水对照。

[0070] 试验方法：每个处理设置3个重复小区，每个小区5株树。采用喷雾法，每亩梨园用药液200kg。间隔12天-15天，连续用药3次。初次施药前调查病情基数，最后一次施药后第10天和15天调查病害防治效果，病情基数及病害防治效果调查方法为：在每个小区内随机选择3株树，每株树随机调查200张叶片，调查叶片病情级数。叶片病情分级方法如下：

[0071] 0级，叶片无病斑；

[0072] 1级，病斑面积占整片叶面积的10％以下；

[0073] 3级，病斑面积占整片叶面积的11％～25％；

[0074] 5级，病斑面积占整片叶面积的26％-40％；

[0075] 7级，病斑面积占整片叶面积的41％～65％；

[0076] 9级，病斑面积占整片叶面积的65％以上。

[0077] 病情指数按照公式1计算，防治效果按照公式2计算，具体如下：

[0078] 公式1：病情指数＝∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查总叶数×9)×100

[0079] 公式2：防治效果(％)＝[1-(对照区药前病情指数×处理区药后病情指数)/(对照区药后病情指数×处理区药前病情指数)]×100

[0080] 试验数据用邓肯氏新复极差(DMRT)法进行统计分析，具体试验结果见表2：

[0081] 表2不同配比杀菌组合物制剂防治梨黑斑病田间试验结果

[0082]

[0083]

[0084] 注：A，苯醚甲环唑；B，HSAF，abcd表示差异显著性。

[0085] 上述田间药效结果表明，苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物具有明显的协同增效作用，组合物对梨黑斑病防治效果优良，使用剂量低，防治效果均好于单剂品种，且防效期长，在农药具有应用价值。

[0086] 实施例11：用以上实施例制得的杀菌组合物制剂防治梨黑星病田间试验

[0087] 供试药剂：选择实施例4～8中制备的复配杀菌剂，本试验药剂用量根据各个组分的不同分别设两个处理浓度。

[0088] 对照药剂：10％苯醚甲环唑可湿性粉剂(市购)

[0089] 5％HSAF可湿性粉剂(试验室制备)

[0090] 空白清水对照。

[0091] 试验方法：每个处理设置3个重复小区，每个小区5株树。采用喷雾法，每亩梨园用药液200kg。间隔10天-15天，连续用药3次。初次施药前调查病情基数，最后一次施药后第10天和15天调查病害防治效果，病情基数及病害防治效果调查方法为：在每个小区内随机选择3株树，每株树随机调查200张叶片，按照实施例10中的描述调查病叶数，并进行统计分析，具体试验结果见表3：

[0092] 表3不同配比杀菌组合物制剂防治梨黑星病田间试验结果

[0093]

[0094]

[0095] 注：A，苯醚甲环唑；B，HSAF，abcd表示差异显著性。

[0096] 上述田间药效结果表明，苯醚甲环唑和HSAF的杀菌组合物具有明显的协同增效作用，组合物对梨黑星病防治效果优良，使用剂量低，防治效果均好于单剂品种，且防效期长，在农药具有应用价值。

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