芳香族酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 |
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| 申请号 | CN201610181525.9 | 申请日 | 2016-03-24 | 公开(公告)号 | CN107226805A | 公开(公告)日 | 2017-10-03 |
| 申请人 | 北京天诚医药科技有限公司; | 发明人 | 陈向阳; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及芳香族酰胺类衍 生物 、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示的新的衍生物及其可药用的盐或含有其的药物组合物、及其制备方法。本发明还涉及所述衍生物及其可药用的盐或含有其的药物组合物在制备 治疗 剂，特别是Bruton酪 氨 酸激酶 抑制剂 ，和在制备治疗和/或 预防 肿瘤 与免疫相关等 疾病 的药物中的用途。其中通式(I)的各取代基同 说明书 中的定义相同。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐： |
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| 说明书全文 | 芳香族酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用技术领域[0001] 本发明涉及一种新的芳香族酰胺类衍生物及其可药用的盐或含有其的药物组合物、及其制备方法。本发明还涉及所述类衍生物及其可药用的盐或含有其的药物组合物在制备治疗剂，Bruton酪氨酸激酶抑制剂，和在制备治疗和/或预防肿瘤与炎症等疾病的药物中的用途。 背景技术[0002] Bruton酪氨酸激酶(BTK)是一种重要的介导细胞信号转导的酶，存在于浆细胞，包括B细胞中。B细胞是通过B细胞受体(BCR)被活化的，而BTK在BCR介导的信号通路中起了决定性的作用。B细胞上的BCR被活化后，引起BTK的激活，导致下游的磷脂酶C(PLC)浓度增加，并激活IP3和DAG信号通路。这一信号通路可以促进细胞的增殖、粘附和存活，在B细胞淋巴瘤的发展过程中起重要的作用。 [0003] BTK突变体在人群中的存在证明了BTK可以成为药物靶点。性联无丙种球蛋白血症(XLA)是一种罕见的遗传疾病，存在于1/250,000的男性中。在这种疾病中，BTK的功能被抑制，从而导致了B细胞的产生或成熟受阻。患有XLA疾病的男性，体内基本没有B细胞，循环抗体也很少，容易出现严重甚至致命的感染。由此可见，BTK在B细胞的生长和分化中起着极其重要的作用。 [0004] BTK抑制剂通过抑制BTK的活性，可以抑制B淋巴瘤细胞的增殖，破坏瘤细胞的粘附，促进瘤细胞的凋亡，使Btk在B细胞有关的癌症中成为令人注目的药物靶点，尤其对B细胞淋巴瘤和白血病，比如非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma，NHL)、慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)、和抗复发性或难治性套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma，MCL)等。目前市场上唯一的具有BTK特异性抑制的药物是Pharmacyclics/JNJ的Ibrutinib。Ibrutinib是一种非可逆的小分子BTK抑制剂，对治疗MCL、CLL、WM有非常明显的疗效，而且安全。其它进入临床针对细胞淋巴瘤的BTK抑制剂还有Celgene公司的CC-292、Acerta公司的ACP-196、ONO公司的ONO-4059、Beigene公司的BGB-3111等等。 [0005] BTK抑制剂除了可以抗B细胞淋巴瘤和白血病，还可以抑制B细胞自身抗体和细胞因子的产生。在自身免疫性疾病中，B细胞呈递自身抗原，促进T细胞活化分泌致炎症因子造成组织损伤，同时又激活B细胞产生大量抗体，触发自身免疫反应。T和B细胞相互作用形成正反馈调节链，导致自身免疫反应失控，加重组织病理损伤。研究显示，体内存在着调节性B细胞，可通过分泌白细胞介素10(IL-10)或转化生长因子β1(TGF-β1)及其他机制，负向调控免疫应答，抑制免疫介导的炎症反应。所以，B细胞可以作为自身免疫性疾病，比如类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)、过敏性疾病(例如食道炎、eosoniphilic esophagitis)等的药物靶点。当前市场上还没有用于免疫性疾病的BTK特异抑制剂，但有几个正处于临床阶段，比如Celgene公司的CC-292、Acerta公司的ACP-196、Hanmi的HM-71224、Principia的PRN-1008、Merck Serono的M- 2951和Pharmacyclics的一个化合物。 [0006] 全球非霍奇金淋巴瘤的市场将从2007年的33亿美元增长到2017年的47亿美元(年均增长3.7％)。作为基于B细胞抗体的生物制剂， 在NHL治疗领域的销售额将从2007年的28亿美元增长到2017年的32亿美元。但是作为一种生物制剂， 和 Lymphostat B，在大范围B细胞清除方面都有不足，也没有合适的口服用量。针对自身免疫性疾病，如抗类风湿类口服药物的潜在市场更大。现在基于抗肿瘤坏死因子(TNF)的药物，市场是50亿美元，不过目前基于抗TNF的药物，例如 和 是特异性针对T细胞 的，都采用皮下注射的方式。针对类风湿性关节炎治疗的市场，从2009年到2017年将增长约两倍，达到134亿美元。用于其他疾病治疗，如红斑狼疮等的潜在市场也非常大。因此BTK抑制剂具有十分广阔的前景。 [0007] 由于BTK在多个信号通路中所起的重要作用，BTK抑制剂的开发吸引了众多生物制药公司的关注，目前已公开了一系列的BTK抑制剂的专利申请，其中包括WO2007087068、WO2010126960、WO2011019780、WO2011090760、WO2012135801、WO2012158764、WO2013060098、WO2013081016、WO2013010869、WO2013113097、CN103113375、WO2014068527、WO2014125410、WO2014173289、WO2013118986、WO2015017502和WO2015048689等，但仍需要开发新的具有更好药效的化合物。经过不断努力，本发明设计具有通式(I)所示的结构的化合物，并发现具有此类结构的化合物表现出优异的效果和作用。 发明内容[0008] 本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐： [0009] [0010] 其中： [0011] 环A和B1各自独立地选自芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选被一个或多个G1所取代； [0012] B2独立地选自H、C3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个G2所取代； [0013] L1独立地选自-C0-2烷基-、-CR2R3-、-C1-2烷基(R1)(OH)-、-C(O)-、-CR1R2O-、-OCR1R2-、-SCR1R2-、-CR1R2S-、-NR1-、-NR1C(O)-、-C(O)NR1-、-NR1CONR2-、-CF2-、-O-、-S-、-S(O)m-、-NR1S(O)m-或-S(O)mNR1-； [0014] L2独立地选自-C0-4烷基-、-C(O)-、-O-、-NR3-、-NR3C(O)-或-NR3S(O)m-； [0015] X独立地选自C0-4烷基、C3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环3 基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个G所取代； [0016] Y独立地选自-C(O)-、-NR4C(O)-、-S(O)m-或-NR4S(O)m-； [0017] R独立地选自H、D、烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个G4所取代； [0018] R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、D、C1-8烷基、C3-8环基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个G5所取代； [0019] G1、G2、G3、G4和G5各自独立地选自H、D、卤素、氰基、烷基、烯基、炔基、环基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-OC(O)NR5R6、-C(O)OR5、-C(O)NR5R6、-C(O)R5、-NR5R6、-NR5C(O)R6、-NR5C(O)NR6R7、-S(O)mR5或-NR5S(O)mR6，其中所述烷基、烯基、炔基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自D、卤素、氰基、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、-OR7、-OC(O)NR7R8、-C(O)OR7、-C(O)NR7R8、-C(O)R7、-NR7R8、-NR7C(O)R8、-NR7C(O)NR8R9、-S(O)mR7、-NR7S8 (O)mR的取代基所取代； [0020] R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C3-8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基或单环芳基；且 [0021] m为1或2。 [0022] 在本发明的一个实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，其为通式(II)所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐： [0023] [0024] 其中： [0025] 环B为 [0026] Z1和Z2各自独立地选自CH或N； [0027] Z3为O或S； [0029] 在本发明的另一个实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，其为通式(III)所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐： [0030] [0031] 其中： [0032] B1和B2为苯环或六元杂芳环； [0033] 环B、L2、X、Y、R、G1和G2的定义如权利要求1-2中所述。 [0034] 在本发明的另一个实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，其为通式(IV)所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐： [0035] [0036] 其中： [0037] P1和P2各自独立地选自C(Ra)或N； [0038] Ra为H或烷基； [0039] n和o各自独立地选自0、1或2； [0040] 环B、B1、B2、L2、Y和R的定义如权利要求1-3中所述。 [0041] 在本发明的另一个实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，其中其中R独立地选自H、D、烷基或杂烷基。 [0042] 本发明的典型化合物包括，但并不限于： [0043] [0044] [0045] 或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐。 [0046] 本发明进一步涉及一种药物组合物，其含有治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐及药学上可接受的载体，稀释剂和赋形剂。 [0047] 本发明的另一方面涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备Bruton酪氨酸激酶抑制剂中的用途。 [0048] 本发明的另一方面涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备治疗和/或预防肿瘤与炎症等疾病的药物中的用途。 [0049] 本发明还涉及一种治疗和/或预防肿瘤与炎症等疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，或包含其的药物组合物。 [0050] 本发明的另一方面涉及作为治疗和/或预防肿瘤与炎症等疾病的药物的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐。 具体实施方式[0052] 在本文中使用的表示方式“Cx-y”表示碳原子数的范围，其中x和y均为整数，例如C3-8环基表示具有3-8个碳原子的环基，-C0-2烷基表示具有0-2个碳原子的烷基，其中-C0烷基是指化学单键。 [0053] “烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团，例如可以是1至18个碳原子、1至12个碳原子、1至8个碳原子、1至6个碳原子或1至4个碳原子的直链和支链基团。在本文中“烷基”可以是一价的、二价的或三价基团。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、及其各种支链异构体等。非限制性实施例还包括亚甲基、次甲基、亚乙基、次乙基、亚丙基、次丙基、亚丁基、次丁基及其各种支链异构体。烷基可以是任选取代的或未取代的。 [0054] “环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至12个环原子，例如可以是3至12个、3至10个或3至6个环原子，或者可以是3、4、5、6元环。单环环基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。环基可以是任选取代的或未取代的。 [0055] “杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至20个环原子，例如可以是3至16个、3至12个、3至10个、3至6个或5至6个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包括3至12个环原子，其中1～4个是杂原子，更优选杂环烷基环包含3至10个环原子，最优选5元环或6元环，其中1～4个是杂原子，更优选1～3个是杂原子，最优选1～2个是杂原子。单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基和氮杂环丁烷基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。 [0056] “螺杂环基”指5至20元，单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共扼的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实施例包含 [0057] [0058] “稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共扼的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实施例包含 [0059] [0060] [0061] 所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，非限制性实施例包含： [0062] 等。 [0063] 杂环基可以是任选取代的或未取代的。 [0064] “芳基”指6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共扼的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基，最优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含： [0065] [0066] 芳基可以是取代的或未取代的。 [0067] “杂芳基”指包含1至4个杂原子，5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子包括氧、硫和氮。优选为5至10元。更优选杂芳基是5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基等，所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含： [0068] [0069] 杂芳基可以是任选取代的或未取代的。 [0070] “卤素”指氟、氯、溴或碘。 [0071] “氰基”指-CN。 [0072] “任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。 [0073] “取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。 [0074] “药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。 [0075] 实施例 [0076] 本发明通式(I)所述的化合物或其可药用的盐的制备，可通过以下实施例中所述的示例性方法以及本领域技术人员所用的相关公开文献操作完成，但这些实施例并非限制着本发明的范围。 [0077] 化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或质谱(MS)来确定的。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400或Varian Oxford-300核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以10-6(ppm)作为单位给出。 [0078] MS的测定用Agilent SQD(ESI)质谱仪(生产商：Agilent，型号：6110)或Shimadzu SQD(ESI)质谱仪(生产商：Shimadzu，型号：2020)。 [0079] HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfirc C18，150×4.6mm，5μm，色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm，5μm色谱柱)。 [0080] 薄层层析硅胶板使用青岛海洋GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm硅胶板。 [0081] 柱层析一般使用青岛海洋200～300目硅胶为载体。 [0082] 本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(Accela ChemBio Inc)、北京耦合化学品等公司。 [0083] 实施例中如无特殊说明，反应均在氩气氛或氮气氛下进行。 [0084] 氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。 [0085] 氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。 [0086] 加压氢化反应使用北京佳维科创科技有限公司GCD-500G高纯氢气发生器和BLT-2000中压氢化仪。 [0087] 氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。 [0088] 微波反应使用CEM Discover-SP型微波反应器。 [0089] 实施例中如无特殊说明，反应的温度为室温，温度范围是20℃-30℃。 [0091] 纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂的体系包括A：二氯甲烷和甲醇体系；B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和酸性或碱性试剂等进行调节。 [0092] 合成方法： [0093] 化合物可根据下面经典的酰胺耦合反应得到，胺前体可根据专利WO2015048662的合成方法得到。 [0094] [0095] 实施例1 [0096] 6-(1-(丁-2-炔酰)哌啶-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺 [0097] [0098] 第一步 [0099] 2，6-二氯尼克酰胺 [0100] 将化合物2，6-二氯尼古丁腈1a(1.73g，10mmol)、浓硫酸(10mL)和水(2mL)混合，加热到90℃，搅拌1小时。冷却至室温，将反应混合物倾倒至冰水浴中，用氨水调节pH值至8。过滤，滤饼用水洗涤，干燥后得到目标产物2，6-二氯尼克酰胺1b(1.4g，固体)，产率：73％。 [0101] MS m/z(ESI)：191[M+1] [0102] 第二步 [0103] 6-氯-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺 [0104] 将化合物2，6-二氯尼克酰胺1b(0.678g，3.5mmol)、(4-苯氧基苯基)硼酸(0.835g，3.9mmol)、碳酸铯(0.977g，7.1mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0.324g，0.35mmol)、水(4mL)和1，4-二氧六环(15mL)混合，除氧，氩气保护下加热回流16小时。冷却至室温，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到目标产物6-氯-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺1c(0.611g，固体)，产率：53％。 [0105] MS m/z(ESI)：325[M+1] [0106] 第三步 [0107] 5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)-5′，6′-二氢-[2，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸叔丁酯 [0108] 将化合物6-氯-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺1c(0.162g，0.50mmol)、(1-(叔丁氧基羰基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)硼酸(0.232g，0.75mmol)、四(三苯基膦)钯(0.115g，0.1mmol)、碳酸钾(0.207g，1.5mmol)、乙二醇二甲醚(10mL)和水(2mL)混合后，加热到90℃，搅拌5小时。冷却至室温，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝700/1)，得到目标产物5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)-5′，6′-二氢-[2，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸叔丁酯1d(0.21g，固体)，产率：89％。 [0109] MS m/z(ESI)：472[M+1] [0110] 第四步 [0111] 4-(5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0112] 将化合物5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)-5′，6′-二氢-[2，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸叔丁酯1d(0.21g，0.45mmol)、钯炭(10mg)和乙酸乙酯(10mL)混合，除氧，氢气气氛下室温搅拌16小时。减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝70/1)，得到目标产物4-(5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯1e(0.20g，固体)，产率：94％。 [0113] MS m/z(ESI)：474[M+1] [0114] 第五步 [0115] 2-(4-苯氧基苯基)-6-(哌啶-4-基)尼克酰胺 [0116] 将化合物4-(5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯1e(0.215g，0.45mmol)、三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(5mL)混合，室温下搅拌1小、时。减压脱溶，残余物溶解于二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝70/1到5/1)，得到目标产物2-(4-苯氧基苯基)-6-(哌啶-4-基)尼克酰胺1f(0.12g，固体)，产率：71％。 [0117] MS m/z(ESI)：374[M+1] [0118] 第六步 [0119] 6-(1-(丁-2-炔酰)哌啶-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺 [0120] 将化合物2-(4-苯氧基苯基)-6-(哌啶-4-基)尼克酰胺1f(100mg，0.27mmol)、丁-2-炔酸(34mg，0.405mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(114mg，0.3mmol)、三乙胺(55mg，0.54mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(10mL)混合，在常温下搅拌3小时。减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝50/1)，得到目标产物6-(1-(丁-2-炔酰)哌啶-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺1(54mg，固体)，产率：46％。 [0121] MS m/z(ESI)：440[M+1] [0122] 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.87(d，J＝7.9Hz，1H)，7.79-7.67(m，2H)，7.45-7.29(m，3H)，7.17(t，J＝7.4Hz，1H)，7.12-7.00(m，4H)，4.59(dd，J＝18.1，15.6Hz，2H)，3.38(d，J＝ 2.8Hz，1H)，3.13(tt，J＝11.8，3.6Hz，1H)，2.91(td，J＝12.9，3.0Hz，1H)，2.14-1.97(m， 5H)，1.82(m，2H)。 [0123] 实施例2 [0124] 2-(4-苯氧基苯基)-6-(1-丙炔酰哌啶-4-基)尼克酰胺 [0125] [0126] 参照实施例1的操作步骤合成实施例2，但在第六步中用丙炔酸取代丁-2-炔酸。 [0127] MS m/z(ESI)：426[M+1] [0128] 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(d，J＝7.9Hz，1H)，7.70(d，J＝8.6Hz，2H)，7.40(t，J＝7.9Hz，2H)，7.28-7.16(m，2H)，7.10(d，J＝8.3Hz，4H)，5.54(d，J＝61.1Hz，2H)，4.73(d，J＝13.3Hz，1H)，4.56(d，J＝13.7Hz，1H)，3.31(t，J＝11.7Hz，1H)，3.18(d，J＝19.3Hz，2H)，2.86(td，J＝13.0，2.7Hz，1H)，2.11(dd，J＝23.9，13.5Hz，2H)，2.00-1.74(m，2H)。 [0129] 实施例3 [0130] 6-(1-(丁-2-炔酰)吡咯烷-3-基)-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺 [0131] [0132] 参照实施例1的操作步骤合成实施例3，但在第三步中用叔-丁基3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼戊环-2-基)-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸酯取代(1-(叔丁氧基羰基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)硼酸。 [0133] MS m/z(ESI)：426[M+1] [0134] 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(t，J＝7.9Hz，1H)，7.71(dd，J＝8.5，5.6Hz，2H)，7.44-7.34(m，2H)，7.27-7.15(m，2H)，7.13-6.99(m，5H)，5.77-5.43(m，2H)，4.16(dd，J＝ 10.8，7.5Hz，0.5H)，4.03-3.92(m，2H)，3.76(ddd，J＝26.2，15.4，7.6Hz，3H)，3.56(dt，J＝ 12.4，8.0Hz，0.5H)，2.46-2.29(m，2H)，2.01(d，J＝13.1Hz，3H)，1.49(dd，J＝16.2，9.7Hz， 1H)。 [0135] 实施例4 [0136] 6-(4-(丁-2-炔酰)哌嗪-1-基)-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺 [0137] [0138] 第一步 [0139] 4-(6-氯-5-氰基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 [0140] 将化合物2，6-二氯尼古丁腈1a(0.519g，3.0mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.558g，3.0mmol)、碳酸钾(0.636g，6.0mmol)和乙醇(30mL)混合，加热至80℃，回流搅拌3小时。冷却至室温，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1到1/1)得到目标产物4-(6-氯-5-氰基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯4a(0.59g，固体)，产率：60％。 [0141] MS m/z(ESI)：323[M+1] [0142] 第二步 [0143] 2-氯-6-(哌嗪-1-基)尼克酰胺 [0144] 利用4-(6-氯-5-氰基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯4a(0.60g，1.86mmol)为原料，参照实施例1中1b的合成方法合成，得到标题产物2-氯-6-(哌嗪-1-基)尼克酰胺4b(0.42g，固体)，产率：94％。 [0145] MS m/z(ESI)：241[M+1] [0146] 第三步 [0147] 2-(4-苯氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)尼克酰胺 [0148] 利用2-氯-6-(哌嗪-1-基)尼克酰胺4b(0.29g，1.2mmol)为原料，参照实施例1中1c的合成方法合成，得到标题产物2-(4-苯氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)尼克酰胺4c(0.26g，固体)，产率：58％。 [0149] MS m/z(ESI)：375[M+1] [0150] 第四步 [0151] 6-(4-(丁-2-炔酰)哌嗪-1-基)-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺 [0152] 利用2-(4-苯氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)尼克酰胺4c(80mg，0.21mmol)为原料，参照实施例1中1的合成方法合成，得到标题产物6-(4-(丁-2-炔酰)哌嗪-1-基)-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺4(28mg，固体)，产率：30％。 [0153] MS m/z(ESI)：441[M+1] [0154] 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.78(d，J＝8.7Hz，1H)，7.73-7.61(m，2H)，7.46-7.33(m，2H)，7.16(t，J＝7.4Hz，1H)，7.13-6.97(m，4H)，6.83(d，J＝8.7Hz，1H)，3.92(dd，J＝6.4， 3.9Hz，2H)，3.79(dd，J＝6.3，4.0Hz，2H)，3.73(s，1H)，2.08(s，3H)。 [0155] 实施例5 [0156] 6-(1-(丁-2-炔酰)吡咯烷-3-基)-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺 [0157] [0158] 参照实施例4的操作步骤合成实施例5，但在第一步中用叔-丁基吡咯烷-3-基氨基甲酸酯取代哌嗪-1-羧酸叔丁酯。 [0159] MS m/z(ESI)：441[M+1] [0160] 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.70(ddd，J＝11.7，9.5，5.7Hz，3H)，7.45-7.30(m，2H)，7.15(t，J＝7.4Hz，1H)，7.03(ddd，J＝9.5，6.7，1.9Hz，4H)，6.47(d，J＝8.7Hz，1H)，4.57- 4.44(m，1H)，3.82(dd，J＝11.1，6.3Hz，1H)，3.65(ddd，J＝20.2，12.1，4.4Hz，2H)，3.48(dd，J＝11.1，4.4Hz，1H)，2.31(dd，J＝13.4，6.2Hz，1H)，2.13-2.01(m，1H)，1.97(s，3H)。 [0161] 实施例6 [0162] 6-((1-(丁-2-炔酰)吡咯烷-3-基)氨基)-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺 [0163] [0164] 参照实施例4的操作步骤合成实施例6，但在第一步中用叔-丁基3-氨基吡咯烷-1-羧酸酯取代哌嗪-1-羧酸叔丁酯。 [0165] MS m/z(ESI)：441[M+1] [0166] 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.71-7.58(m，3H)，7.39(t，J＝7.7Hz，2H)，7.16(dd，J＝7.4，6.5Hz，1H)，7.10-6.96(m，4H)，6.52(dd，J＝8.6，5.3Hz，1H)，4.61(dd，J＝6.8，3.3Hz， 1H)，4.07(dd，J＝11.3，5.9Hz，1H)，3.93-3.72(m，2H)，3.70-3.37(m，2H)，2.39-2.24(m， 1H)，2.11-1.94(m，4H)。 [0167] 实施例7 [0168] 1-(1-(丁-2-炔酰)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酰胺 [0169] [0170] 第一步 [0171] 叔-丁基3-((甲磺酰)氧代)吡咯烷-1-羧酸酯 [0172] 将化合物叔-丁基3-羟基吡咯烷-1-羧酸酯7a(561mg，3.0mmol)、甲基磺酰氯(410mg，3.6mmol)、三乙胺(606mg，6.0mmol)和二氯甲烷(50mL)混合，室温下搅拌4小时。此混合物用50mL二氯甲烷稀释后，依次用饱和氯化铵溶液(20mL)和饱和食盐水(20mL×2)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶得到目标产物叔-丁基3-((甲磺酰)氧代)吡咯烷-1-羧酸酯7b(790mg)，产率：99％。产物不经纯化直接用于下一步反应。 [0173] MS m/z(ESI)：266[M+1] [0174] 第二步 [0175] 3-羰基-3-(4-苯氧基苯基)丙酸乙酯 [0176] 将混合物碳酸二乙酯(8.8g，75mmol)、氢化钠(60％，3.0g，75mmol)和甲苯(50mL)加热到90℃，然后加入化合物1-(4-苯氧基苯基)乙酮7c(6.36g，30mmol)的甲苯(50mL)溶液，将上述反应混合物回流搅拌50分钟。冷却至室温，加入50mL水，减压除去甲苯，残余物用100mL水稀释，用二氯甲烷萃取(100mL×3)。将有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝50/1)，得到目标产物3-羰基-3-(4-苯氧基苯基)丙酸乙酯7d(5.54g)，产率：65％。 [0177] MS m/z(ESI)：285[M+1] [0178] 第三步 [0179] 3-乙氧基-2-(4-苯氧基苯甲酰)丙烯酸乙酯 [0180] 将化合物3-羰基-3-(4-苯氧基苯基)丙酸乙酯7d(5.54g，19.5mmol)、原甲酸三乙酯(11mL，66mmol)和醋酸酐(28mL)混合后，加热到120℃，搅拌4小时。减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝50/1)，得到目标产物3-乙氧基-2-(4-苯氧基苯甲酰)丙烯酸乙酯7e(2.6g)，产率：25％。 [0181] MS m/z(ESI)：341[M+1] [0182] 第四步 [0183] 3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯 [0184] 将化合物3-乙氧基-2-(4-苯氧基苯甲酰)丙烯酸乙酯7e(2.6g，7.6mmol)、水合肼(0.39g，7.6mmol)和乙醇(50mL)混合后，加热到85℃，搅拌21小时。冷却至室温，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到目标产物3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯7f(2.0g)，产率：85％。 [0185] MS m/z(ESI)：309[M+1] [0186] 第五步 [0187] 乙基1-(1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸酯 [0188] 将化合物3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯7f(308mg，1.0mmol)、3-((甲磺酰)氧代)叔-丁基3-((甲磺酰)氧代)吡咯烷-1-羧酸酯7b(477mg，1.8mmol)、碳酸铯(650mg，2.0mmol)和无水N，N-二甲基甲酰胺(20mL)混合，加热到100℃，搅拌16小时。冷却至室温，减压脱溶，残余物加饱和碳酸氢钠(30mL)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝ 10/1)，得到目标产物乙基1-(1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸酯7g(334mg)，产率：70％。 [0189] MS m/z(ESI)：478[M+1] [0190] 第六步 [0191] 1-(1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸[0192] 将混合物乙基1-(1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸酯7g(334mg，0.7mmol)、氢氧化锂水溶液(1N，7mL，7.0mmol)和乙醇(20mL)加热到75℃，搅拌1小时。冷却至室温，减压脱溶，残余物用5mL水稀释，用2N盐酸酸化至pH为6。过滤，得到的固体用15mL水洗涤，真空下干燥得到目标产物1-(1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸7h(230mg，固体)，产率：73％。 [0193] MS m/z(ESI)：450[M+1] [0194] 第七步 [0195] 叔-丁基3-(4-氨基甲酰-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-羧酸酯[0196] 用氨气向化合物1-(1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸7h(230mg，0.51mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(232mg，0.61mmol)和无水N，N-二甲基甲酰胺(10mL)的混合物中鼓泡30分钟，得到的反应混合物在室温下继续搅拌30分钟。用30mL乙酸乙酯稀释，依次用水(20mL×2)和饱和食盐水(20mL×2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝50/1)，得到目标产物叔-丁基3-(4-氨基甲酰-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-羧酸酯7i(190mg，油状物)，产率：83％。 [0197] MS m/z(ESI)：449[M+1] [0198] 第八步 [0199] 3-(4-苯氧基苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺 [0200] 将化合物叔-丁基3-(4-氨基甲酰-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-羧酸酯7i(190mg，0.42mmol)、盐酸的乙醇溶液(4N，1mL，4.0mmol)和二氯甲烷(2mL)混合后，室温下搅拌16小时。减压脱溶，得到目标产物3-(4-苯氧基苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺7j(120mg，油状物)。 [0201] MS m/z(ESI)：349[M+1] [0202] 第九步 [0203] 1-(1-(丁-2-炔酰)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酰胺 [0204] 利用3-(4-苯氧基苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺7j(120mg，0.34mmol)为原料，参照实施例1中1的合成方法合成，得到标题产物1-(1-(丁-2-炔酰)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酰胺7(30mg，固体)，产率：21％。 [0205] MS m/z(ESI)：415[M+1] [0206] 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.18(d，J＝7.0Hz，1H)，7.71(dd，J＝8.7，1.9Hz，2H)，7.39(t，J＝7.9Hz，2H)，7.15(t，J＝7.4Hz，1H)，7.04(dd，J＝13.9，8.3Hz，4H)，5.10(d，J＝2.9Hz，1H)，4.22-4.12(m，1H)，4.06-3.86(m，2H)，3.83-3.62(m，1H)，2.60-2.44(m，2H)， 2.05(d，J＝12.0Hz，3H)。 [0207] 实施例8 [0208] 1-((1-(丁-2-炔酰)哌啶-4-基)甲基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酰胺[0209] [0210] 参照实施例7的操作步骤合成实施例8，但在第一步中用叔-丁基4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸酯取代叔-丁基3-羟基吡咯烷-1-羧酸酯。 [0211] MS m/z(ESI)：443[M+1] [0212] 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.10(s，1H)，7.72-7.64(m，2H)，7.45-7.34(m，2H)，7.16(t，J＝7.4Hz，1H)，7.10-6.98(m，4H)，4.46(dd，J＝12.7，8.8Hz，2H)，4.12(d，J＝7.2Hz，2H)，3.17(d，J＝2.5Hz，1H)，2.74(d，J＝2.9Hz，1H)，2.35-2.19(m，1H)，2.04(s，3H)，1.71(d，J＝15.5Hz，2H)，1.31(s，2H)。 [0213] 实施例9 [0214] 1-(1-(丁-2-炔酰)吖丁啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酰胺 [0215] [0216] 参照实施例7的操作步骤合成实施例9，但在第一步中用叔-丁基3-羟基吖丁啶-1-羧酸酯取代叔-丁基3-羟基吡咯烷-1-羧酸酯。 [0217] MS m/z(ESI)：401[M+1] [0218] 1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.21(s，1H)，7.75(d，J＝8.7Hz，2H)，7.44-7.33(m，2H)，7.16(t，J＝7.4Hz，1H)，7.11-6.93(m，4H)，5.33(s，1H)，4.69(dd，J＝20.5，6.8Hz，2H)，4.47(dd，J＝27.8，6.7Hz，2H)，2.05(s，3H)。 [0219] BTK的活性抑制测试 [0220] 使用体外激酶检测实验评估本发明的化合物对Bruton酪氨酸激酶(BTK)活性的影响 [0221] 实验方法概述如下： [0222] 使用Promega公司的ADP-GloTM激酶检测试剂盒，通过检测激酶反应中所产生的ADP水平来测定BTK的体外活性。在激酶检测实验中，激酶消耗ATP将底物磷酸化，同时产成ADP。ADP-Glo试剂将终止激酶反应并且将剩余的ATP完全消耗，最后加入激酶检测试剂，将ADP转化为新的ATP。检测试剂中的萤光素酶在ATP和O2参与下能够催化荧光素，产生氧化型的荧光素、AMP并且产生光量子，从而将化学信号转为光信号(Luminecence)。光信号的强度与激酶反应中ADP产生量呈正相关，从而能够定量检测激酶BTK的活性。 [0223] 所有检测实验均在23℃恒温进行，使用Corning 3674白色384孔检测板，激酶BTK(全长His-Tag)由公司内部表达纯化，激酶底物为多肽(4∶1Glu，Tyr)(购自SignalChem)和ATP(Sigma)，使用酶标仪EnVision(Perkin Elmer)读取光信号。检测缓冲液包括40mM Tris-HC(pH 7.5)、10mM MgCl2(Sigma)、2mM MnCl2(Sigma)、0.05mM DTT(Sigma)和0.01％BSA(Sigma)；将激酶BTK使用检测缓冲液配制为1.6ng/uL浓度的激酶反应溶液；底物反应溶液包括0.2mg/mL多肽底物和50μmATP。 [0224] 化合物IC50由10个浓度点通过以下公式计算。先将化合物在100％DMSO中溶解稀释至1mM，然后用DMSO进行3倍的系列稀释至最低浓度为0.05μm，每个浓度点再使用检测缓冲液稀释40倍。向384孔检测板中先添加1uL系列浓度的化合物溶液和2uL激酶反应溶液，混合均匀后室温避光孵育30分钟；随后加入2uL底物反应溶液，反应总体积为5uL，将反应混合物TM在室温避光反应60分钟；随后加入与反应等体积的5uLADP-Glo 试剂终止反应，混合均匀后室温放置40分钟；最后加入10uL激酶检测试剂，室温避光放置30分钟，然后在Envision上读取数值。 [0225] 抑制百分率基于以下公式计算： [0226] 抑制％＝[1-(RLU化合物-RLUmin)/(RLUmax-RLUmin)]X100 [0227] 其中RLU化合物为给定化合物浓度下的冷光读数，RLUmin为不加入激酶的情况下的冷光读数，RLUmax为不加入化合物的情况下的冷光读数。通过使用Excel中XLfit程序来计算化合物的IC50。 [0228]化合物编号 IC50(nM) 化合物编号 IC50(nM) 1. A 2. A 3. C 4. A 5. A 6. A 7. A 8. C 9. A [0229] A＜100nM；B＝100至500nM；C＞500nM [0230] 结论：本发明的化合物对Bruton酪氨酸激酶(BTK)的活性具有明显的抑制效应。 |
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