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一种制备尿激酶粗品的方法
申请号	CN201310643507.4	申请日	2013-11-30	公开(公告)号	CN103740687A	公开(公告)日	2014-04-23
申请人	青岛康原药业有限公司;			发明人	刘乃山; 张晓涵; 安迪; 张元泽;
摘要	本发明公开了一种制备尿激酶粗品的方法。本发明的技术方案是利用吸附工序、脱附工序、盐析工序从合格尿液中制备尿激酶粗品的方法。本发明操作简单且有较高的收率。
权利要求	1.一种制备尿激酶粗品的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： (1)吸附工序：取合格尿液用二层纱布过滤，滤入搅拌罐中；不断搅拌的同时，缓慢加入离子交换树脂，调节pH，搅拌吸附，洗涤树脂至澄清； (2)脱附工序：搅拌洗脱，抽滤，收集洗脱液，再次洗脱，收集洗脱液，合并两次洗脱液； (3)盐析工序：加入固体硫酸铵，搅拌溶解，调节pH值，加丙酮，搅拌，放置沉淀，离心，得尿激酶盐析品，即尿激酶粗品。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，调节尿液的pH值到4.5～ 6.5；搅拌吸附的时间为：1～2小时；洗涤树脂时先用水洗涤去残尿及杂质，然后用磷酸缓冲液洗至澄清。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所用的洗脱液为含氯化钠的氨水；第一次搅拌洗脱时间为0.5～1.5小时；第二次搅拌洗脱时间为20～50分钟。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，按照洗脱液的体积加入固体硫酸铵，搅拌溶解，使溶液达到50％～70％的饱和度；在-4～0℃用醋酸调节溶液上清液pH值至4.5～6.5；用丙酮沉淀，沉淀时间为12～16小时；每1000ml溶液中加入固体硫酸铵的重量为300～450g。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所得的尿激酶粗品应在阴凉处保存。
说明书全文	一种制备尿激酶粗品的方法技术领域 [0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及从合格的尿液中制备尿激酶粗品的方法。背景技术 [0002] 尿激酶是一种碱性蛋白酶，由肾脏产生，主要存在于人体及哺乳动物的尿液中，血液凝固时人体的正常机能，但是在某些病理状态下，由血管内形成血栓堵塞血液流通时，就会造成严重后果。尿激酶是溶血栓药物，但它本身并不直接用于血块本身，而是首先激活体内的纤溶酶原，成为有活性的纤溶酶，纤溶酶作用于纤维蛋白酶凝块，使其分解成可溶性多碳。 [0003] 尿激酶有多种分子量形式，高分子量的尿激酶溶解血栓临床效果要比低分子量的约高一倍，因此，国际上把尿激酶的分子量作为质量标准的检查项目之一，为减少低分子量的产生，生产过程中pH值不宜过低。 [0004] 由于尿激酶有着重要的医药价值，所以相继有很多专刊报道了尿激酶粗品的提取方法，因人体尿液中尿激酶含量很低，取尿激酶的关键就是如何从大量的尿液中富集尿激酶，从目前发表的专刊来看，主要有三类方法：(1)、发泡法：即以高速搅拌使酶液发泡，然后使泡沫液化，加入硫酸铵使尿激酶沉淀。(2)、沉淀剂法：在尿液中加入沉淀剂，使尿激酶沉淀，尿激酶则保留在沉淀中。(3)、吸附剂法：此法应用最多，选择适当的吸附剂，有选择的吸附尿激酶。 [0005] 本工艺就是采用离子交换树脂作为吸附剂，生产尿激酶粗品。发明内容 [0006] 本发明的目的是从合格的尿液中提取尿激酶粗品。。 [0007] 本发明的技术方案是：利用吸附工序、脱附工序、盐析工序从合格尿液中制备尿激酶粗品的方法。本发明操作简单且有较高的收率。包括如下步骤： [0008] (1)吸附工序：取合格尿液用二层纱布过滤，滤入搅拌罐中；在不断搅拌的同时，以缓慢的速度加入D-160A离子交换树脂，并用精密仪器测定，调节尿液pH到4.5～6.5之间；搅拌吸附1～2小时，弃去尿液，用水洗涤树脂去残尿及杂质，再用磷酸缓冲液洗至澄清为止； [0009] (2)脱附工序：用含氯化钠的氨水搅拌洗脱0.5～1.5小时，抽滤，收集洗脱液，树脂再用同样溶液洗脱20～50分钟，收集洗脱液，合并二次洗脱液； [0010] (3)盐析工序：按洗脱液的体积计算加入固体硫酸铵，搅拌溶解，达到50％～70％饱和度，于-4～0℃上清液用醋酸调pH到4.5～6.5，加1～3倍量丙酮，稍搅拌后，放置沉淀12～16小时，离心，收集沉淀的尿激酶盐析品； [0011] (4)将尿激酶盐析品放置阴凉处保存；

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