PI3K相关疾病或病症的组合疗法 |
|||||||
| 申请号 | CN201980051319.8 | 申请日 | 2019-05-31 | 公开(公告)号 | CN113194752A | 公开(公告)日 | 2021-07-30 |
| 申请人 | 康奈尔大学; 纽约哥伦比亚大学理事会; | 发明人 | L·C·坎特利; B·霍普金斯; S·慕克吉; M·冈萨维斯; | ||||
| 摘要 | 本文描述了用于 治疗 与PI3K 信号 传导相关的 疾病 或病症的组合物和方法。例如，这类组合物可以包括使用 葡萄糖 代谢调节剂、使用胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中的至少一种激酶和/或使用影响受试者代谢状态的饮食。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种抑制细胞增殖的方法，其包括使细胞与有效量的葡萄糖代谢调节剂接触；以及使所述细胞与有效量的胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的至少一种抑制剂接触，从而抑制细胞增殖。 |
||||||
| 说明书全文 | PI3K相关疾病或病症的组合疗法[0001] 本申请要求2018年6月1日提交的美国临时申请序列号62/679,329的申请日的优先权，所述临时申请的内容通过引用具体地全部并入本文。 技术领域[0002] 本公开大体上涉及治疗与胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径信号传导相关的疾病或病症的方法，所述疾病或病症包括血液恶性肿瘤和实体肿瘤。特别地，本公开涉及通过药物或饮食调节葡萄糖代谢来增加胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径抑制剂的疗效。 背景技术[0003] 一些疾病和病症与胰岛素受体磷脂酰肌醇激酶(磷酸肌醇3‑激酶(PI3K))、蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶标(mammalian target of rapamycin，mTOR)信号传导途径(称为胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径)之间存在关联。在癌症中，观察到PIK3CA的突变与KRAS的突变频率相似(Kandoth,C.等人.12种主要癌症类型的突变态势和重要性(Mutational landscape and significance across 12major cancer types)《. 自然》(Nature)502,333‑339,doi:10.1038/nature12634(2013)；Millis,S.Z.,Ikeda,S.,Reddy,S.,Gatalica,Z.和Kurzrock,R.19784种多样的实体肿瘤的磷脂酰肌醇‑3‑激酶途径的变化态势(Landscape of Phosphatidylinositol‑3‑Kinase Pathway Alterations Across 19784Diverse Solid Tumors)《. 美国医学会杂志‑肿瘤学卷》(JAMA Oncol)2,1565‑1573,doi:10.1001/jamaoncol.2016.0891(2016)。) [0004] 即使需要靶向胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的疗法，但医学界仍在努力确定靶向PI3K以及胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR信号传导的上游和下游调节因子的有效组合物和方法。因此，对于治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的组合物和方法存在长期感受到的且未被满足的需求。本公开提供了这样的组合物和方法等等。 发明内容 [0005] 本公开大体上涉及用于治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的组合物和方法，所述组合物和方法可以包括在存在或不存在影响受试者代谢状态的饮食下施用葡萄糖代谢调节剂。在某些情况下，所述方法可以包括施用胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的抑制剂和施用葡萄糖代谢调节剂。在某些情况下，所述方法包括向在治疗期间食用生酮饮食的受试者施用途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂。本公开还涉及药物组合物，其可以包括途径抑制剂、葡萄糖代谢调节剂或其组合。 [0006] 本公开提供了一种治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的葡萄糖代谢调节剂；以及向所述受试者施用有效量的胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂。 [0007] 本公开还提供了一种治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括施用有效量的途径抑制剂，其中任选地，所述途径抑制剂能够抑制胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中的至少一种激酶。 [0008] 受试者可以在任何这些治疗期间食用或被施用生酮饮食。 [0009] 本公开还提供了一种药物组合物，其包括葡萄糖代谢调节剂和途径抑制剂，其中任选地，所述途径抑制剂能够抑制胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中的至少一种激酶。 [0010] 本公开还提供了一种抑制细胞增殖或细胞增殖疾病的方法，其包括向受试者施用有效量的葡萄糖摄取抑制剂；以及向所述受试者施用有效量的PI3K抑制剂。 [0011] 受试者可以是需要治疗的或者可以进行治疗以抑制疾病或病况的发作。 [0012] 本公开还提供了一种抑制细胞增殖或细胞增殖疾病的方法，其涉及向受试者施用有效量的PI3K抑制剂，其中所述受试者在治疗期间食用生酮饮食。 [0013] 在一些实施例中，葡萄糖代谢调节剂是葡萄糖摄取抑制剂。例如，这样的葡萄糖摄取抑制剂可以是钠‑葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)抑制剂、钠‑葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂、SGLT1/SGLT2双重抑制剂或其组合。 [0014] 在一些实施例中，葡萄糖摄取抑制剂选自达格列净(dapagliflozin)、恩格列净(empagliflozin)、卡格列净(canagliflozin)、伊格列净(ipragliflozin)、托格列净 (tofogliflozin)、依碳酸舍格列净(sergliflozin etabonate)、依碳酸瑞格列净 (remogliflozin etabonate)、埃格列净(ertugliflozin)、索格列净(sotagliflozin)、卡纳格列净(conagliflozin)或其组合。 [0015] 在一些实施例中，葡萄糖代谢调节剂是二甲双胍。 [0016] 在一些实施例中，葡萄糖代谢调节剂是胰岛素受体/胰岛素样生长因子1(IGF1)受体抑制剂，其中任选地，胰岛素受体/IGF1受体抑制剂是林斯替尼(linsitinib)(OSI‑906)。 [0017] 在一些实施例中，途径抑制剂选自艾德昔布(idelalisib)、考帕昔布(copanlisib)、布帕昔布(buparlisib)(BKM120)、阿普昔布(alpelisib)(BYL719)、塔瑟昔布(taselisib)(GDC‑0032)、匹克昔布(pictilisib)(GDC‑0941)、阿哌昔布(apitolisib)(GDC‑0980)、塞来昔布(serabelisib)(TAK‑117)、达妥昔布(dactolisib)、艾坡昔布 (apelisib)、MK2206、林斯替尼(OSI‑906)或其组合。 [0018] 在一些实施例中，PI3K抑制剂选自由艾德昔布、考帕昔布、布帕昔布(BKM120)、阿普昔布(BYL719)、塔瑟昔布(GDC‑0032)、匹克昔布(GDC‑0941)、阿哌昔布(GDC‑0980)、塞来昔布(TAK‑117)、达妥昔布和艾坡昔布组成的组。 [0019] 在一些实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症是癌症或细胞增殖病症、代谢病症、神经退行性疾病、炎性疾病或其组合。 [0020] 在一些实施例中，与单独使用途径抑制剂相比，破坏全身性葡萄糖稳态提高途径抑制剂治疗的疗效。 [0022] 图1A‑1D表明，用PI3K抑制剂处理引起全身反馈，导致血糖和胰岛素增加。图1A以图形方式示出了用指示的PI3K抑制剂化合物处理的小鼠随时间推移测量的血糖水平(N＝5/臂，通过双向方差分析，处理群组中所有小鼠的血糖曲线与媒剂相比，p值<0.0001)。为了模拟临床治疗，这些小鼠没有挨饿进行此测定。图1B以图形方式示出了用指示的PI3K抑制剂化合物处理的小鼠随时间推移测量的胰岛素水平(N＝5/臂，通过双向方差分析，处理群组中所有小鼠的血糖曲线与媒剂相比，p值<0.0001)。为了模拟临床治疗，这些小鼠没有挨饿进行此测定。图1C以图形方式示出了在时程(240分钟)结束时，从图1A‑1B所用的相同动物的血清样品中获取的c‑肽水平，作为胰岛素释放曲线下面积的代表。通过t检验比较媒剂处理与布帕昔布(BKM120)、阿普昔布(BYL719)和塔瑟昔布(GDC‑0032)的p值分别为0.017、< 0.0001和0.007。图1D‑1以图形方式示出了在用布帕昔布(BKM120)单次处理后90分钟成像的原位植入的Kras‑Tp53‑Pdx‑Cre(KPC)肿瘤通过氟脱氧葡萄糖‑正电子发射断层扫描(FDG‑PET)检测到的氟脱氧葡萄糖示踪剂的数量(如图1D‑2所示)(N＝4/臂)。这些结果表明，PI3K抑制剂诱导的胰岛素峰值在单剂量BKM120后，在急性状态下引起这些动物的肿瘤中葡萄糖摄取的增加(通过t检验，p值＝0.0002)。 [0023] 图2A‑2C展示了胰岛素的反馈水平对细胞增殖、信号传导和存活的影响。图2A显示了用或不用PI3K抑制剂BKM120(1μM)和/或胰岛素(10ng/ml)处理的原位Kras‑Tp53‑Pdx‑Cre(KPC)细胞系K8484和K8082的蛋白质的蛋白质印迹，进一步说明了如图1A‑1D中观察到的对胰岛素的生理反应。图2B以图形方式示出了在存在或不存在胰岛素(10ng/ml)和BKM120(1μM)的情况下生长的KPC细胞系K8484的增殖测定结果。显示了通过比较条件+/‑胰岛素的方差分析确定的p值。图2C以图形方式示出了在存在或不存在胰岛素(10ng/ml)和 BKM120(1μM)的情况下生长的KPC细胞系K8082的增殖测定结果。显示了通过比较条件+/‑胰岛素的方差分析确定的p值。 [0024] 图3A‑3G证明了靶向PI3K抑制剂在体内诱导葡萄糖/胰岛素反馈。图3A以图形方式示出了携带同基因K8484 KPC同种异体移植肿瘤的野生型c57/bl6小鼠在用单剂量BKM120与二甲双胍预处理、SGLT2抑制剂(SGLT2i)预处理或生酮饮食处理后随时间推移的血糖水平(N＝4/臂)。通过二甲双胍、SGLT2i和生酮饮食的双向重复测量方差分析计算的p值分别为0.2136(不显著)、<0.0001和0.007。图3B以图形方式示出了与图3A相同的小鼠在用 BKM120处理后180分钟所采集的血液中c‑肽的水平。通过非配对t检验计算出的二甲双胍、SGLT2i和生酮饮食的p值分别为0.7566(不显著)、0.0386和0.0117。图3C显示了免疫组织化学图像，其示出了pS6(ser‑235)的表达，以观察这些肿瘤中活跃的PI3K信号传导水平。图3D以图形方式示出了图3C中观察到的染色定量，其显示为每个高倍视野的阳性细胞(20个视野/臂取为4只小鼠中每只小鼠的5张高倍视野图像的平均值)。与BKM120和二甲双胍、 SGLT2i或生酮饮食组合处理的肿瘤相比，BKM120单独处理的肿瘤中的pS6阳性细胞的p值分别为0.6186、<0.0001和<0.0001。图3E‑1至图3E‑4显示了在单独或与其它药剂组合使用PI3Kα特异性抑制剂BYL‑719处理12天后，KPC K8484肿瘤小鼠的荧光素酶报告分子发光的IVIS图像。图3E‑1显示了单独使用PI3Kα特异性抑制剂BYL‑719处理12天后，KPC K8484肿瘤小鼠的荧光素酶报告分子发光的IVIS图像。图3E‑2显示了用PI3Kα特异性抑制剂BYL‑719处理12天后，KPC K8484肿瘤小鼠的荧光素酶报告分子发光的IVIS图像(N＝10个肿瘤/臂)，所述BYL‑719处理前使用二甲双胍10天。图3E‑3显示了用PI3Kα特异性抑制剂BYL‑719处理12天后，KPC K8484肿瘤小鼠的荧光素酶报告分子发光的IVIS图像(N＝10个肿瘤/臂)，所述BYL‑719处理前使用生酮饮食10天。图3E‑4显示了用PI3Kα特异性抑制剂BYL‑719处理12天后，KPC K8484肿瘤小鼠的荧光素酶报告分子发光的IVIS图像(N＝10个肿瘤/臂)，所述BYL‑ 719处理前使用卡格列净(SGLT2i)10天。本研究中饮食干预在肿瘤植入时开始，BYL‑719处理在植入后九天开始。图3F以图形方式示出了从这些肿瘤的图像中量化发光。图3G以图形方式示出了这些动物的存活率，显示出通过对数秩(Mantel‑Cox)检验所确定，在用BYL‑719处理的情况下添加SGLT2抑制剂或施用生酮饮食增加了这些动物的总体存活率，p值分别为 0.0019和<0.0001。 [0025] 图4A‑4E展示了规避PI3K抑制剂的上靶葡萄糖/胰岛素反馈对肿瘤生长的影响。图4A以图形方式示出了用多西环素(doxycycline)和PI3K抑制剂BYL‑719和/或生酮饮食处理的小鼠的K8484 KPC肿瘤体积(其中肿瘤细胞表达多西环素诱导发夹靶向的Renilla 3 (ShRenilla)或胰岛素受体(ShIR))。在此实验中，允许肿瘤生长十四天，达到大于1cm的平均大小，此时开始饮食、多西环素诱导发夹表达和PI3K抑制剂处理(如图所示，N>5个肿瘤/臂)。图4B以图形方式示出了用所指示的BYL‑719和/或胰岛素与生酮(keto)一起处理的 ES272 Pik3ca突变型乳腺癌同种异体移植肿瘤的体积。本实验中的肿瘤在植入小鼠后允许生长10天，随后开始饮食和指示的处理。图4C以图形方式示出了用BKM120和/或同时具有生酮饮食处理的受试者来源的子宫内膜异种移植物(PDX)的肿瘤体积(N＝5/臂)。单独使用 BKM120和BKM120加生酮饮食处理的小鼠之间的方差分析比较表明，在该模型中，加入生酮饮食显著提高处理效果(p值＝0.0028)。图4D示出了最后一次用媒剂、生酮饮食、BKM120或生酮饮食与BKM120的组合(BKM120/生酮)处理后4小时所取的肿瘤的磷酸‑胰岛素受体 (pINSR)、磷酸‑AKT(pAKT)、磷酸‑S6(pS6)、裂解的胱天蛋白酶3(Cl.Casp 3)和Ki67的组织学。图4E以图形方式示出了图4D中所示的肿瘤的磷酸‑胰岛素受体(pINSR)、磷酸‑AKT (pAKT)、磷酸‑S6(pS6)、裂解的胱天蛋白酶3(Cl.Casp 3)和ki67的定量，所述肿瘤是最后一次用媒剂、生酮饮食、BKM120或生酮饮食与BKM120的组合(BKM120/生酮)处理后4小时取得。 定量描绘为每个高倍视野的分数，为五只小鼠中的每只小鼠拍摄了四张图像。对于pINSR、pAKT、pS6和Cl.Casp 3，比较BKM120处理的肿瘤与用BKM120与生酮饮食处理的肿瘤的盲法评分的t检验的p值分别为0.005、0.005、0.017和0.028。 [0026] 图5A‑5D示出了用靶向PI3K途径的药剂处理后的血糖和C‑肽水平。图5A以图形方式示出了随时间推移的血糖水平，其中时间0是用指示的抑制剂处理的时间。图5B以图形方式示出了随时间推移的血糖水平，其中时间0是用所指示的额外抑制剂处理的时间。图5C以图形方式示出了图5A中小鼠在用抑制剂处理后240和180分钟所取的c‑肽水平，作为这些动物总胰岛素释放的替代物，显示PI3K抑制剂和IGFR/INSR抑制剂显著增加了这些动物的胰岛素释放。在所有情况下，引起血糖水平急性增加的化合物也增加了血清胰岛素水平。图5D以图形方式示出了图5B中所述的小鼠在用抑制剂处理后240和180分钟所取的c‑肽水平，作为这些动物总胰岛素释放的替代物，显示PI3K抑制剂和IGFR/INSR抑制剂显著增加了这些动物的胰岛素释放。在所有情况下，引起血糖水平急性增加的化合物也增加了血清胰岛素水平。 [0027] 图6A‑6G展示了图1A‑D中观察到的胰岛素反馈水平对BKM120体外疗效的影响。图6A‑1以图形方式示出了MDA‑MB‑468乳腺癌细胞在最小生长培养基中的细胞增殖，所述细胞的生长通过添加在小鼠中观察到的由BKM120诱导的胰岛素反馈水平(10ng/ml)而被部分挽救。图6A‑2以图形方式示出了BT‑549乳腺癌细胞在最小生长培养基中的增殖，所述细胞的生长通过添加在小鼠中观察到的由BKM120诱导的胰岛素反馈水平(10ng/ml)而被部分挽 救。图6A‑3以图形方式示出了PC‑3前列腺腺癌细胞在最小生长培养基中的增殖，所述细胞的生长通过添加在小鼠中观察到的由BKM120诱导的胰岛素反馈水平(10ng/ml)而被部分挽救。图6B以图形方式示出了细胞活力测定，展示了这些反馈水平的胰岛素对2个受试者(Pt)来源的类器官培养物(Pt A和Pt B)的影响，所述来器官培养物同时被BKM120以剂量反应形式处理，如在96小时通过细胞滴度‑glo所测量。图6C以图形方式示出了在最小生长培养基中的增殖(汇合百分比)，所述增殖通过添加在图1A‑D中观察到的在小鼠中由BKM120诱导的胰岛素的反馈水平来部分挽救。图6D显示了用和不用生理观察到的胰岛素水平(10ng/ml)处理和用临床相关的PI3K抑制剂GDC‑0032和BYL‑719处理的HCT116‑neo细胞的增殖(汇合百分比)。图6E以图形方式示出了用和不用生理观察到的胰岛素水平(10ng/ml)处理和用临床相关的PI3K抑制剂GDC‑0032和BYL‑719处理的HCT116 PTEN基因敲除(KO)细胞的增殖(汇合百分比)。图6F显示了在指示的处理条件下DLD1‑Neo的增殖(汇合百分比)，这些条件与图 6G中相同。图6G以图形方式示出了在与图6F相同的处理条件下，DLD‑1PTEN基因敲除细胞的增殖(汇合百分比)。值得注意的是，在PI3K抑制的环境下，结肠癌系的等基因(isogenic)组中PTEN的丧失并不统一地改变对胰岛素的反应。在PTEN丧失的情况下，尽管存在PI3K抑制剂，生理水平的胰岛素可以恢复HCT116的正常增殖。 [0028] 图7A‑7F示出了在有或没有靶向全身胰岛素反馈的补充方法的情况下，用PI3K抑制剂处理的KPC K8484同种异体移植物的血糖、肿瘤体积、酮浓度和甘油三酯水平。图7A以图形方式示出了图3E‑3G的用对照饮食、生酮饮食、二甲双胍(250mg/kg)或卡格列净(SGLT2i)(6mg/kg)处理的小鼠在第一剂量的BYL‑719(45mg/kg)后的血糖曲线。图7B以图形方式示出了在没有PI3K抑制剂的情况下，用如图3A‑3G所示的代谢调节剂处理的小鼠的肿瘤体积。图7C以图形方式示出了每个所示处理群组的平均肿瘤体积(线)与散度(点)。图7D以图形方式示出了在有或没有6mg/kg的卡格列净的情况下，每天用BKM120处理的小鼠的独立实验的肿瘤体积，卡格列净在PI3K处理前60分钟施用，以便SGLT2抑制峰值与PI3K抑制剂处理后的血糖峰值水平一致。图7E以图形方式示出了在用或不用所指示的二甲双胍、卡格列净或生酮饮食进行预处理的情况下，图3A‑D中所示的小鼠在用BKM120单次处理后的血酮。图7F以图形方式示出了在用或不用所指示的二甲双胍、卡格列净或生酮饮食进行预处理的情况下，图3A‑D中所示的小鼠在用BKM120单次处理后通过量热测定法所测定的甘油三酯水平。 [0029] 图8A‑8H示出了抑制胰岛素受体在观察到的肿瘤反应变化中的作用。图8A显示了如所指示在用多西环素处理以诱导sh‑Renilla和sh‑INSR发夹后，用于生成图4A中异种移植物的K8484细胞的细胞裂解物的蛋白质印迹。图8B以图形方式示出了随时间推移用卡尺测量的KPC‑K8484肿瘤同种异体移植的个体小鼠的肿瘤体积。图8C以图形方式示出了图8A中小鼠的存活曲线。图8D以图形方式示出了在指示的处理后240分钟小鼠的血糖水平。OSI‑906和BKM120中的两个葡萄糖测量值超出了检测器的范围(例如>600)。图8E以图形方式示出了在指示的处理后240分钟小鼠的c‑肽水平。图8F以图形方式示出了小鼠在指示的处理过程中的质量。正如先前已经公布的那样，小鼠在开始生酮饮食后会失去10‑20％的质量。 图8G以图形方式示出了在存在或不存在生酮饮食的情况下，用OSI‑906(INSR/IGFR抑制剂)或GDC‑0032处理的图8A中的肿瘤的肿瘤体积。当结合生酮饮食时，在野生型c57/bl6中生长的PIK3CA+MYC突变型小鼠乳腺肿瘤同种异体移植物ES‑278中，处理效果显著提高。图8H以图形方式示出了随时间推移用卡尺测量的携带KPC同种异体移植肿瘤的野生型c57/bl6小 鼠的肿瘤体积。如图4B所示，用BYL‑719、生酮饮食或胰岛素的组合处理小鼠。生酮‑BYL719‑胰岛素群组中的小鼠在1周的处理中失去了>20％的身体质量，所以实验在第7天终止。 [0030] 图9A‑9E示出了PI3K抑制剂处理对受试者来源的膀胱癌异种移植模型和PIK3CA突变型乳腺癌的同基因同种异体移植模型的影响。图9A以图形方式示出了来源于膀胱癌受试者(受试者C)并单独或在生酮饮食存在下用泛PI3K抑制剂GDC‑0941或PI3K‑β节制性化合物GDC‑0032处理的受试者来源的子宫内膜异种移植物(PDX)随时间推移的肿瘤体积。线表示每个处理组的平均肿瘤体积，点表示随时间推移的单个肿瘤体积。在开始处理之前，允许肿瘤生长直到其直径大于0.6cm。图9B以图形方式示出了在第12天收获时取得的肿瘤(来自图9A)的质量。图9C以图形方式示出了具有PIK3CA(H1047R)突变型小鼠乳腺癌的原位同种异体移植物ES272并按指示用BKM120单独或与生酮饮食组合处理的小鼠随时间推移的肿瘤生长。图9D以图形方式示出了具有PIK3CA(H1047R)突变型小鼠乳腺癌的原位同种异体移植物ES272且按指示用BKM120单独或与生酮饮食组合处理的小鼠在收获时的肿瘤质量。图9E以图形方式示出了图9C‑9D中所述的小鼠随时间推移的质量。 [0031] 图10A‑10E说明了在存在或不存在生酮饮食的情况下考帕昔布对生长在野生型c57/bl6小鼠胁腹的原位Kras‑Tp53‑Pdx‑Cre(KPC)K8082肿瘤模型的生长的影响。图10A以图形方式示出了具有生长在胁腹的KPC K8082同种异体移植物并按指示单独使用BAY80‑ 6946和与生酮饮食预处理组合处理的小鼠的存活率(通过Mantel‑Cox对数秩检验，本研究中比较BAY 80‑6946和BAY 80‑6946与生酮饮食组合的p值为0.0019)。图10B以图形方式示出了该群组中每个肿瘤的体积，以单独的线绘制。图10C以图形方式示出了在处理后240分钟时从图10B和10C中的动物获取的样品的单次血糖测量值。图10D以图形方式示出了在处理后240分钟时从图10B和10C中的动物获取的样品的c‑肽测量值。图10E以图形方式示出了图10A‑10D中所述动物随处理时间推移的质量。在开始处理之前，允许肿瘤生长直到其直径>0.6cm。 [0032] 图11A‑11E展示了BKM120/生酮组合对AML同基因模型的影响。图11A显示了小鼠的AML负担随着指示处理时间推移的IVIS图像(如mCherry所报告)。图11B以图形方式示出了单独用BKM120或与生酮饮食组合处理的具有AML同基因模型的小鼠的存活率。显示了在开始BKM120处理之前(之前)或在开始BKM120处理的同时(同时)开始生酮饮食的各个线，都表明添加生酮饮食显著增强BKM120的疗效(之前和同时分别为p＝0.0316和0.349)。星号(*)表示由于AML浸润CNS导致瘫痪而处死的小鼠，而不是通常在这些小鼠中看到的由于肿瘤负担而死亡。值得注意的是，BKM+生酮饮食组的小鼠经常由于瘫痪而处死，这不常是其它处理组的死亡原因。图11C以图形方式示出了图4A‑4E所示的AML模型的疾病负担，以骨髓中AML细胞的百分比来测量。图11D以图形方式示出了各处理组的脾脏重量。图11E以图形方式示出了用BKM120和/或生酮饮食预处理的小鼠的AML负担，以证明在AML研究中观察到的效果不是与预处理有关的植入问题所导致。图11F显示了如所示用BKM120或生酮饮食处理的小鼠的图像，其中所述饮食和BKM120疗法在同一天开始(共处理)。 [0033] 图12A‑12C示出了同时靶向葡萄糖/胰岛素反馈的多种方法在体内的影响。图12A以图形方式示出了在单独的二甲双胍预处理、SGLT2抑制剂(SGLT2i)预处理、生酮饮食或其组合后，用单剂量BKM120处理后，携带同基因K8484 KPC同种异体移植肿瘤的野生型c57/bl6小鼠的血糖水平(N＝4/臂)。图12B以图形方式示出了在用单剂量BKM120与单独的二甲双胍预处理、SGLT2抑制剂(SGLT2i)预处理、生酮饮食或其组合处理后，携带同基因K8484 KPC同种异体移植肿瘤的野生型c57/bl6小鼠的酮水平(N＝4/臂)。图12C以图形方式示出了在用单剂量BKM120与单独的二甲双胍预处理、SGLT2抑制剂(SGLT2i)预处理、生酮饮食或其组合处理后，携带同基因K8484 KPC同种异体移植肿瘤的野生型c57/bl6小鼠的c‑肽水平(N＝4/臂)。 具体实施方式[0034] 本公开大体上涉及用于治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的组合物和方法。所述方法可以包括施用葡萄糖代谢调节剂、使用影响受试者代谢状态的饮食或其组合。在某些情况下，所述方法包括共同施用途径抑制剂(如胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的抑制剂)和施用葡萄糖代谢调节剂。在某些情况下，治疗方法包括向在治疗期间食用生酮饮食的受试者施用途径抑制剂。本公开还涉及包含途径抑制剂和葡萄糖代谢调节剂的药物组合物。 [0035] 一些研究表明，单独施用各种葡萄糖代谢调节剂或施用胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的各种抑制剂可能与不利的安全概况和次优的抗癌活性有关。然而，本文所述的组合疗法的类型可以减少或消除这类副作用。例如，当与其它治疗剂和/或生酮饮食组合时，抑制剂可以较低的剂量或较短的持续时间施用。这样的组合疗法可以提供降低的毒性，并避免仅药物疗法的单一疗法的一些副作用。 [0036] 鉴于胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径在细胞信号传导中的核心作用，所述途径如本领域技术人员所希望的那样作为可成药的靶标尚未得到证实。已有二十多种PI3K抑制剂进入临床试验，但仅两种(艾德昔布和考帕昔布)被批准用于癌症疗法。这些药剂主要靶向PIK3CD编码的酶p110Δ，而不是更广泛突变的PIK3CA编码的酶p110α，从而有效治疗淋巴瘤。几种靶向p110α的药物已经进入批准试验，然而毒性概况一直难以控制，并且反应并没有像预期的那样与PIK3CA突变相关。(Massacesi,C.等人,PI3K抑制剂作为新的癌症治疗剂：对临床试验设计的影响(PI3K inhibitors as new cancer therapeutics: implications for clinical trial design.)《肿瘤靶标和治疗》(Onco Targets Ther)9, 203‑210(2016)；Mayer,I.A.等人,PI3Kα特异性抑制剂阿普昔布(BYL719)与来曲唑一起用于ER+/HER2‑转移性乳腺癌的Ib期研究(A Phase Ib Study of Alpelisib(BYL719),a PI3Kalpha‑Specific Inhibitor,with Letrozole in ER+/HER2‑Metastatic Breast Cancer.)《临床癌症研究》(Clin Cancer Res)23,26‑34(2017))。 [0037] 如本文所公开的，药物阻断PI3K会升高血清葡萄糖并提高血清胰岛素。这种高胰岛素血症可在给药后一小时或两小时内重新激活肿瘤中的PI3K和mTOR信号传导途径，从而损害PI3K阻断的有效性。本公开提供了降低血清胰岛素的各种干预措施。例如，本文所述的+方法可以包括施用二甲双胍、Na /葡萄糖共转运蛋白抑制剂、使用生酮饮食或其组合。如本文所示，当受试者采用生酮饮食时，人类肿瘤类器官和在体内以肿瘤形式生长的细胞系以及基因工程肿瘤等不同组别都表现出对PI3K抑制剂的增强反应。在具有或没有PIK3CA突变的肿瘤中都发现了增强的反应。这些结果表明，用葡萄糖代谢调节剂治疗受试者和/或维持受试者的生酮饮食增强受试者在多种癌症中对PI3K抑制剂的反应。 [0038] 葡萄糖代谢调节剂和生酮饮食改善途径抑制剂的药物疗效，所述途径抑制剂除了BKM120和BYL719外还包括一系列靶向PI3K途径的药剂，包括泛PI3K抑制剂GDC‑0941、PI3K‑β节制性(sparing)化合物GDC‑0032、mTOR/PI3K双重抑制剂GDC‑0980、I类PI3Kα同工型的口服生物利用型抑制剂塞来昔布(TAK‑117)以及最近批准的PI3K‑α/δ抑制剂考帕昔布。 [0039] 例如，在PTEN/PIK3CA突变型子宫内膜PDX肿瘤中，与单独使用BKM120治疗的肿瘤相比，向BKM120添加生酮饮食降低胰岛素信号传导的免疫组织化学标志物。在这些肿瘤中，生酮饮食增强了BKM120降低磷酸化胰岛素受体、磷酸化AKT和磷酸化S6水平的能力。这种信号传导的减少与Ki67染色显示的细胞增殖水平下降和裂解的胱天蛋白酶3染色显示的细胞凋亡水平增加有关。 [0040] 在一个实施例中，本公开包括一种抑制细胞增殖的方法，其包括使细胞与有效量的葡萄糖代谢调节剂接触；以及使细胞与有效量的胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的至少一种抑制剂接触，从而抑制细胞增殖。在某些实施例中，至少一种抑制剂抑制胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中的至少一种激酶，从而抑制细胞增殖。在特定的实施例中，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径是哺乳动物，例如人的胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径。在各种实施例中，所述方法可以在体内、离体或体外实施。 [0041] 在另一个实施例中，本公开包括一种治疗细胞增殖疾病的方法，其包括：向有需要的受试者施用有效量的胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的至少一种抑制剂；以及向所述受试者施用生酮饮食和/或至少一种葡萄糖代谢调节剂，从而抑制所述受试者的细胞增殖。在某些实施例中，向受试者施用生酮饮食。在某些实施例中，向受试者施用葡萄糖代谢调节剂。在某些实施例中，向受试者施用生酮饮食和葡萄糖代谢调节剂。在某些实施例中，至少一种抑制剂抑制胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中的至少一种激酶，从而抑制细胞增殖。在特定的实施例中，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径是哺乳动物，例如人的胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径。 [0042] 在本文所公开的任何方法的特定实施例中，“施用”包括向受试者提供途径抑制剂、葡萄糖代谢调节剂和/或生酮饮食，例如在稍后时间摄入或施用，或向受试者提供途径抑制剂、葡萄糖代谢调节剂和/或生酮饮食的处方。在某些实施例中，生酮饮食的“施用”包含指导受试者遵循生酮饮食。 [0043] 本文所公开的方法和组合物可用于增加用途径抑制剂(例如，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR信号传导途径的抑制剂)治疗的有效性。因此，本公开提供了一种用于增加用途径抑制剂(例如，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR信号传导途径的抑制剂)治疗的有效性或疗效的方法。这样的方法可以包括用有效量的途径抑制剂和任选地有效量的葡萄糖代谢调节剂治疗受试者。本公开还提供了一种用于增加用途径抑制剂(例如，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR信号传导途径的抑制剂)治疗的有效性或疗效的方法。这样的方法可以包括用有效量的途径抑制剂治疗受试者，其中所述受试者在治疗期间食用生酮饮食。受试者可以是需要这种治疗的。或者，治疗可以用于减少受试者的疾病发生或发作。 [0044] 本文公开的方法和组合物可允许使用较低剂量的途径抑制剂。因此，本公开提供了一种用于治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的途径抑制剂(例如，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR信号传导途径的抑制剂)和有效量的葡萄糖代谢调节剂，其中所述途径抑制剂的有效量是比没有用葡萄糖代谢调节剂治疗时的有效的量低的量。 [0045] 本公开还提供了一种用于治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的途径抑制剂(例如，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR信号传导途径的抑制剂)，其中所述受试者在治疗期间食用生酮饮食，其中所述途径抑制剂的有效量是比所述受试者在治疗期间不食用生酮饮食时的有效的量低的量。在某些实施例中，当与葡萄糖代谢调节剂和/或生酮饮食组合使用时，途径抑制剂的有效量比单独使用时途径抑制剂的量少90％、少80％、少70％、少60％、少50％、少40％或少30％。 [0046] 本文公开的方法和组合物可允许较不频繁地施用途径抑制剂。因此，本公开提供了一种用于治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的途径抑制剂(例如，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR信号传导途径的抑制剂)和有效量的葡萄糖代谢调节剂，其中所述途径抑制剂的施用频率低于不使用葡萄糖代谢调节剂治疗时的有效的频率。本公开还提供了一种用于治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的途径抑制剂(例如，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR信号传导途径的抑制剂)，其中所述受试者在治疗期间食用生酮饮食，其中所述途径抑制剂的施用频率低于所述受试者在治疗期间不食用生酮饮食时的有效的频率。例如，与单独施用途径抑制剂或葡萄糖代谢调节剂时相比，在治疗期间可少施用至少一个、或至少两个、或至少三个、或至少四个、或至少五个、或至少六个、或至少七个、或至少八个、或至少十个、或至少十三个、或至少十五个剂量的途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂。 [0047] 与PI3K信号传导相关的疾病或病症 [0048] 术语“与PI3K信号传导相关的疾病或病症”意在宽泛地解释为指由胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的一个或多个成员的功能获得(gain of function)或功能丧失(loss of function)引起的疾病或病症。“与PI3K信号传导相关的疾病或病症”是哺乳动物如人类、家养动物、动物园动物或实验动物的疾病或病症。 [0049] 术语“与PI3K信号传导相关的疾病或病症”并不限于特定形式的PI3K。存在多种PI3K基因，所述短语涵盖与其中任何一种相关的疾病和或病症。人类PI3K基因至少包括表1中所列的基因。 [0050] 表1：PI3K基因 [0051] [0052] 术语“与PI3K信号传导相关的疾病或病症”不限于由PI3K的功能获得或功能丧失直接引起的疾病或病症，而是涵盖由胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的其它基因的功能获得或功能丧失引起的疾病和病症。PI3K信号传导的上游和下游调节因子包括许多可成药的靶标，如信号传导受体、蛋白激酶B(称为AKT)、雷帕霉素的机制靶标(mTOR)等。 [0053] 术语“与PI3K信号传导相关的疾病或病症”不限于特定的疾病病理学。病理上不同的疾病和病症往往有共同的机制基础。因此，基于机制的治疗传统上是以靶标机制而不是以疾病或病症的组织来源或病理特征来定义的。 [0054] 因此，与PI3K信号传导相关的疾病和病症包括各种类型的疾病或病症。在一个实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症是细胞增殖疾病。在一个实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症是神经退行性疾病。在一个实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症是炎性疾病或病况。在一个实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症是代谢疾病。 [0055] 在一些实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症是细胞增殖疾病，包括但不限于一种或多种白血病(例如，急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓细胞性白血病、急性髓母细胞性白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性骨髓单核细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、急性红细胞白血病、慢性白血病、慢性骨髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏病)、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、重链疾病以及实体肿瘤，如肉瘤和癌瘤(例如，纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏肿瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、威尔姆氏瘤(Wilms tumor)、子宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤)或其组合。 [0056] 在一些实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症是神经退行性疾病，包括但不限于脑创伤、脊髓创伤、外周神经系统创伤、阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)、皮克氏病(Pick's disease)、弥漫性路易体病、进行性核上麻痹(斯蒂尔‑理查德森综合征(Steel‑Richardson syndrome))、多系统变性(夏伊‑德尔格综合征(Shy‑Drager syndrome))；运动神经元疾病，包括肌肉萎缩性侧索硬化、退行性共济失调、皮质基底变性、关岛型ALS‑帕金森氏‑痴呆复合征(ALS‑Parkinson's‑Dementia complex of Guam)、亚急性硬化性全脑炎、亨廷顿氏病(Huntington's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、突触核蛋白病、原发性进行性失语症、纹状体黑质变性、马查多‑约瑟夫病 (Machado‑Joseph disease)/脊髓小脑性共济失调3型和橄榄体脑桥小脑变性、妥瑞氏病(Gilles De La Tourette's disease)、延髓和假性延髓麻痹、脊髓和脊髓延髓肌肉萎缩(肯尼迪病(Kennedy's disease))、原发性侧索硬化症、家族性痉挛性截瘫、沃尼‑霍夫曼病(Werdnig‑Hoffman disease)、库‑韦二氏病(Kugelberg‑Welander disease)、台‑萨氏病(Tay‑Sach's disease)、桑德霍夫病(Sandhoff disease)、家族性痉挛病、沃‑库‑韦三氏病(Wohlfart‑Kugelberg‑Welander disease)、痉挛性截瘫、进行性多病灶脑白质病和朊病毒病(包括克雅二氏(Creutzfeldt‑Jakob)、格施谢三氏病(Gerstmann‑Straussler‑ Scheinker disease)、库鲁病(Kuru)和致命性家族性失眠症)、年龄相关性痴呆、血管性痴呆、弥漫性白质病(宾斯旺格病(Binswanger's disease))、内分泌或代谢源性痴呆、头部创伤和弥漫性脑损伤的痴呆、拳击员痴呆或额颞叶痴呆、由大脑局部缺血或梗塞包括栓塞性闭塞和血栓性闭塞以及任何类型的颅内出血导致的神经退行性病症、颅内和椎管内病变、遗传性脑血管病、遗传性淀粉样蛋白、唐氏综合征(Down's syndrome)、巨球蛋白血症、继发性家族性地中海热、穆‑韦二氏综合征(Muckle‑Wells syndrome)、多发性骨髓瘤、胰腺相关淀粉样变性、心脏相关淀粉样变性、慢性血液透析性关节病、芬兰淀粉样变性、爱荷华淀粉样变性或其组合。 [0057] 在一些实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症是炎性病症，包括但不限于II型糖尿病、胰岛素抗性心血管疾病、心律不齐、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、高甘油三酯血症、血脂异常、视网膜病变、肾病变、神经病变、肥胖症和黄斑水肿、回肠炎、溃疡性结肠炎、巴雷特氏综合征(Barrett's syndrome)、克罗恩氏病(Crohn's disease)或其组合。 [0058] 在一些实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症是代谢疾病，包括但不限于II型糖尿病、胰岛素抗性心血管疾病、心律不齐、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、高甘油三酯血症、血脂异常、视网膜病变、肾病变、神经病变、肥胖症、黄斑水肿或其组合。 [0059] 在本公开的方法的一些实施例中，受试者未接受过治疗。在一些实施例中，受试者对高血糖症具有抗性。在一些实施例中，受试者不是高血糖症。在一些实施例中，受试者在治疗前不是高血糖。在一些实施例中，受试者是低血糖。在一些实施例中，受试者表现出血糖控制。在一些实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症与葡萄糖稳态受损相关。在一些实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症与葡萄糖稳态受损相关。在一些实施例中，与PI3K信号传导相关的疾病或病症与正常的葡萄糖稳态相关。在一些情况下，受试者需要治疗。然而，在一些情况下，对受试者进行治疗以减少疾病或病症的发生或发作。 [0060] 葡萄糖代谢调节剂 [0061] 在一些实施例中，本公开的组合物和方法可以包括葡萄糖代谢调节剂。可以使用各种葡萄糖代谢调节剂，并且包括但不限于脂质、氨基酸、小分子药物、抗体、蛋白质、核酸和基因编辑系统。在一些实施例中，葡萄糖代谢调节剂抑制葡萄糖代谢。例如，葡萄糖代谢调节剂可以是葡萄糖摄取抑制剂。在一些实施例中，葡萄糖摄取抑制剂可以是钠‑葡萄糖转运蛋白的抑制剂。在一些实施例中，葡萄糖代谢调节剂可以是葡萄糖转运蛋白的抑制剂。在一些实施例中，葡萄糖摄取抑制剂可以选自由钠‑葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)抑制剂、钠‑葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂或SGLT1/SGLT2双重抑制剂组成的组。 [0062] 在一些情况下，葡萄糖代谢调节剂可以在受试者正在食用生酮饮食或正在向受试者施用生酮饮食时施用。 [0063] 葡萄糖对于活体内的能量产生至关重要，而葡萄糖转运蛋白在各个器官中起着至关重要的作用。葡萄糖转运蛋白分为两个家族。协助性葡萄糖转运蛋白(GLUT)通过协助性扩散来转运葡萄糖。钠‑葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)使用电化学梯度跨膜共同转运钠离子和葡萄糖(或其它底物)。(Harada等人,钠‑葡萄糖转运蛋白在肠道和肾脏的葡萄糖摄取中的作用(Role of sodium‑glucose transporters in glucose uptake of the intestine and kidney)《. 糖尿病研究杂志》(J Diabetes Investig.)2012年8月20日；3(4):352‑353.；Gallo等人,探究SGLT2作为糖尿病的治疗靶标：基本生理学和结果(Probing SGLT2 as a therapeutic target for diabetes:Basic physiology and consequences)《. 糖尿病与血管疾病研究》(Diab Vasc Dis Res.)2015年3月；12(2):78‑89；Wright等人,人类钠葡萄糖转运蛋白生物学(Biology of Human Sodium Glucose Transporters)《. 生理学评论》(Physiological Reviews.)91(2):733‑794(2011)。)六个SGLT蛋白和基因家族显示在表2中。在某些实施例中，葡萄糖代谢调节剂抑制一种或多种SGLT蛋白。 [0064] 表2：钠依赖性葡萄糖转运蛋白和组织分布 [0065] [0066] 在一些实施例中，葡萄糖摄取抑制剂可以是达格列净、恩格列净、卡格列净、伊格列净、托格列净、依碳酸舍格列净、依碳酸瑞格列净、埃格列净、索格列净、卡纳格列净或其组合。在一些实施例中，葡萄糖代谢调节剂可以是二甲双胍。在一些实施例中，葡萄糖代谢调节剂可以是胰岛素受体/IGF1受体抑制剂。在一些实施例中，葡萄糖代谢调节剂可以是林斯替尼(OSI‑906)。 [0067] 达格列净(在美国商品名为FarxigaTM，在EU和俄罗斯商品名为ForxigaTM)是一种列净(gliflozin)类药物，用于治疗2型糖尿病。它由百时美施贵宝公司(Bristol‑Myers Squibb)与阿斯利康公司(AstraZeneca)合作开发。达格列净具有以下化学结构： [0068] [0069] 恩格列净(商品名JardianceTM)是一种列净类药物，于2014年获批用于治疗成人2型糖尿病。它由勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim)和礼来公司(Eli Lilly and Company)开发。恩格列净是SGLT2的抑制剂，可使血液中的糖分由肾脏排泄并随尿液排出。 恩格列净具有以下化学结构： [0070] [0071] 卡格列净(商品名InvokanaTM或SulisentTM)是一种用于治疗2型糖尿病的药物。它属于列净类或SGLT2抑制剂类。卡格列净具有以下化学结构： [0072] [0073] 伊格列净(商品名SuglatTM和JardianceTM)是一种用于治疗2型糖尿病的药物。伊格列净由安斯泰来制药(Astellas Pharma)和寿制药(Kotobuki Pharmaceutical)联合开发，被批准作为饮食和运动的辅助药物，用于改善2型糖尿病成人的血糖控制。伊格列净具有以下化学结构： [0074] [0075] 托格列净(代号CSG452)是一种用于治疗糖尿病的实验性药物，由中外制药(Chugai Pharma)与科瓦(Kowa)和赛诺菲(Sanofi)合作开发。它是一种SGLT2抑制剂。托格列净已在日本获得了该适应症的全球首个批准，可作为单药治疗或与其它抗高血糖药剂组合使用。托格列净具有以下化学结构： [0076] [0077] 依碳酸舍格列净(代号GW869682X)是葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline)正在开发的一种研究性抗糖尿病药物。它是一种SGLT2抑制剂。依碳酸舍格列净具有以下化学结构： [0078] [0079] 依碳酸瑞格列净是一种拟用于治疗非酒精性脂肪性肝炎(“NASH”)和2型糖尿病的列净类药物。瑞格列净由Avolynt公司开发。依碳酸瑞格列净具有以下化学结构： [0080] [0081] 埃格列净(商品名SteglatroTM)是一种用于治疗2型糖尿病的药物。在美国，它被食品和药物管理局批准作为单药治疗，以及与西格列汀(sitagliptin)或与二甲双胍以固定剂量组合使用。埃格列净具有以下化学结构： [0082] [0083] 索格列净或LX4211是一种口服递送的小分子化合物，目前由莱斯康制药(Lexicon Pharmaceuticals)开发，用于治疗1型和2型糖尿病。索格列净抑制SGLT1和SGLT2。索格列净具有以下化学结构： [0084] [0085] 卡格列净(商品名Invokana或Sulisent)是一种用于治疗2型糖尿病的药物。它属于列净类或SGLT2抑制剂类。卡格列净具有以下化学结构： [0086] [0087] 二甲双胍是用于治疗2型糖尿病(尤其是超重人群)的一线药物。二甲双胍具有以下化学结构： [0088] [0089] 林斯替尼(代号OSI‑906)是一种用于治疗各种类型癌症的实验性候选药物。在一些情况下，它可以充当葡萄糖代谢调节剂、途径抑制剂或两者兼而有之。它是胰岛素受体和胰岛素样生长因子1受体(IGF‑1R)的抑制剂。(Fassnacht等人,林斯替尼(OSI‑906)与安慰剂用于患有局部晚期或转移性肾上腺皮质癌的受试者：一项双盲、随机、3期研究(Linsitinib(OSI‑906)versus placebo for subjects with locally advanced or metastatic adrenocortical carcinoma:a double‑blind,randomized,phase 3study).《柳叶刀肿瘤学》(Lancet Oncology).16(4):426‑435(2015)。)林斯替尼具有以下化学结构： [0090] [0091] 在一些情况下，葡萄糖代谢调节剂可以与胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂抑制剂同时施用。在一些情况下，葡萄糖代谢调节剂可以在胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂之前施用。在一些情况下，葡萄糖代谢调节剂可以在施用胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂之后施用。生酮饮食可以在施用葡萄糖代谢调节剂之前、期间或之后食用或施用。 [0092] 途径抑制剂 [0093] 在一些实施例中，本公开提供了一种治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括向受试者施用有效量的途径抑制剂。在一些实施例中，本公开提供了一种治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括向受试者施用有效量的途径抑制剂，其中所述受试者在治疗期间处于生酮饮食状态。受试者可以是需要这种治疗的，或受试者可以经过治疗以减少疾病或病症的发生或发作。在一些实施例中，途径抑制剂能够抑制胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中的至少一种激酶。在一些实施例中，途径抑制剂能够抑制一个或多个靶标，如INSR/IGFR、PI3K、AKT、mTOR中的任一个或其组合。在一些实施例中，途径抑制剂能够抑制PI3K。在一些实施例中，途径抑制剂能够抑制p110‑α、p110‑β、p110‑γ、p110‑δ、p85‑α、p85‑β、p55‑γ、p150、p101、p87、PI3K‑C2α、PI3K‑C2β、PI3K‑C2γ和Vps34中的一个或多个。 [0094] 在一些实施例中，途径抑制剂可以是艾德昔布、考帕昔布、布帕昔布(BKM120)、阿普昔布(BYL719)、塔瑟昔布(GDC‑0032)、匹克昔布(GDC‑0941)、阿哌昔布(GDC‑0980)、塞来昔布(TAK‑117)、达妥昔布、艾坡昔布、MK2206、林斯替尼(OSI‑906)或其组合。 [0095] 艾德昔布(商品名ZydeligTM，代号GS‑1101或CAL‑101)是一种用于治疗某些血液恶性肿瘤的药物。所述物质充当磷酸肌醇3‑激酶抑制剂。更具体地，它阻断了酶磷酸肌醇3‑激酶(PI3K)的δ同工型p110‑δ。它由吉利德科学公司(Gilead Sciences)开发。艾德昔布具有以下化学结构： [0096] [0097] 考帕昔布(商品名AliqopaTM，代号BAY 80‑6946)是拜耳医疗保健制药公司(Bayer HealthCare Pharmaceuticals Inc.)开发的一种激酶抑制剂，被批准用于治疗患有复发性滤泡性淋巴瘤的成年受试者，这些受试者先前已接受了至少两次全身疗法。考帕昔布具有以下化学结构： [0098] [0099] 布帕昔布(代号BKM120)是一种具有潜在抗肿瘤活性的脂质激酶的泛I类磷脂酰肌醇3‑激酶(PI3K)家族的口服生物利用型特异性口服抑制剂。布帕昔布以ATP竞争方式特异性抑制I类PIK3，从而抑制第二信使磷脂酰肌醇‑3,4,5‑三磷酸的产生和PI3K信号传导途径的激活。布帕昔布具有以下化学结构： [0100] [0101] 一些研究表明，在晚期或复发性子宫内膜癌期间，单独施用BKM120可能与不利的安全概况和最小的抗肿瘤活性相关。然而，本文所述的组合疗法的类型可以减少或消除这类副作用。例如，当与其它治疗剂和/或生酮饮食组合时，BKM120可以较低的剂量施用。这类组合疗法可以提供降低的毒性并避免副作用。 [0102] 阿普昔布(代号BYL719)是一种具有潜在抗肿瘤活性的口服生物利用型磷脂酰肌醇3‑激酶(PI3K)抑制剂。阿普昔布特异性抑制PIK3，从而抑制PI3K信号传导途径的激活。阿普昔布具有以下化学结构： [0103] [0104] 塔瑟昔布(代号GDC‑0032)由罗氏公司(Roche)开发，是一种I类磷脂酰肌醇3‑激酶(PI3K)α同工型(PIK3CA)的口服生物利用型抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。塔瑟昔布选择性抑制PIK3CA及其突变形式，从而可能导致表达PIK3CA的肿瘤细胞的肿瘤细胞凋亡和生长抑制。塔瑟昔布具有以下化学结构： [0105] [0106] 匹克昔布(代号GDC‑0941)由罗氏公司(Roche)开发，是PI3Kα/δ的强效抑制剂，在无细胞测定中IC50为3nM，对p110β(11倍)和p110γ(25倍)具有适度的选择性。匹克昔布具有以下化学结构： [0107] [0108] 阿哌昔布(代号GDC‑0980、RG7422)是一种强效的I类PI3K抑制剂，对于PI3Kα/β/δ/γ，在无细胞测定中IC50分别为5nM/27nM/7nM/14nM。阿哌昔布也是一种mTOR抑制剂，在无细胞测定中Ki为17nM。阿哌昔布具有以下化学结构： [0109] [0110] 塞来昔布(也称为MLN1117、INK1117和TAK‑117)是一种I类磷酸肌醇3‑激酶(PI3K)α同工型的口服生物利用型抑制剂。塞来昔布选择性抑制PI3K/Akt/mTOR途径中的PI3Kα激酶，其包括PIK3CA的突变。塞来昔布具有以下结构： [0111] [0112] 达妥昔布(代号NVP‑BEZ235和BEZ‑235)是一种充当PI3K抑制剂的咪唑并喹啉衍生物。达妥昔布也抑制mTOR。达妥昔布具有以下化学结构： [0113] [0114] MK2206是一种具有潜在抗肿瘤活性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt(蛋白激酶B)的口服生物利用型变构抑制剂。MK2206以非ATP竞争方式与Akt结合并抑制其活性。MK2206具有以下化学结构： [0115] [0116] 林斯替尼(代号OSI‑906)是一种用于治疗各种类型癌症的实验性候选药物。在一些情况下，它可以充当葡萄糖代谢调节剂、途径抑制剂或两者兼而有之。它是胰岛素受体和胰岛素样生长因子1受体(IGF‑1R)的抑制剂。(Fassnacht等人,林斯替尼(OSI‑906)与安慰剂用于患有局部晚期或转移性肾上腺皮质癌的受试者：一项双盲、随机、3期研究《. 柳叶刀肿瘤学》.16(4):426‑435(2015)。)林斯替尼具有以下化学结构： [0117] [0118] 在一些情况下，可以使用或向受试者施用胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的抑制剂的组合。例如，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的抑制剂可以是布帕昔布(BKM120)、塔瑟昔布(GDC‑0032)、匹克昔布(GDC‑0941)或林斯替尼(OSI‑906)中的两种或更多种的组合。 [0119] 在包括使用途径抑制剂和葡萄糖代谢调节剂两者的方法以及包含途径抑制剂和葡萄糖代谢调节剂两者的组合物的特定实施例中，可以使用包含表6中任一行所示的任何药剂组合的组合。 [0120] 表6.葡萄糖代谢调节剂和途径抑制剂的组合 [0121] [0122] [0123] [0124] [0125] 在一些情况下，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂可以与葡萄糖代谢调节剂同时施用。在一些情况下，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂可以在葡萄糖代谢调节剂之前施用。在一些情况下，胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂可以在葡萄糖代谢调节剂之后施用。生酮饮食可以在胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂施用之前、期间或之后食用或施用。 [0126] 生酮饮食 [0127] 在一些实施例中，本公开提供了一种治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其中受试者在治疗期间食用生酮饮食。在一些实施例中，所述方法包括向受试者施用生酮饮食。 [0128] 在一些情况下，可以在食用或施用生酮饮食的同时向受试者施用胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂。在一些实施例中，所述方法可以包括在施用生酮饮食和/或施用胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂的同时向受试者施用有效量的葡萄糖代谢调节剂。 [0129] 在一些实施例中，受试者在施用途径抑制剂之前食用生酮饮食。在一些实施例中，受试者在施用途径抑制剂之后食用生酮饮食。在一些实施例中，受试者在施用途径抑制剂的同时食用生酮饮食。 [0130] 自20世纪70年代以来，生酮饮食已被用于癫痫受试者，与正常的西方饮食相比，生酮饮食已被证明可以降低血糖水平和增加胰岛素敏感性。(Hopkins,B.D.,Goncalves,M.D.和Cantley,L.C.肥胖和癌症机制：癌症代谢(Obesity and Cancer Mechanisms:Cancer Metabolism).《临床肿瘤学杂志》(J Clin Oncol)34,4277‑4283,doi:10.1200/ JCO.2016.67.9712(2016)；Sampaio,L.P.用于癫痫治疗的生酮饮食(Ketogenic diet for epilepsy treatment.)《神经精神档案》(Arq Neuropsiquiatr)74,842‑848,doi:10.1590/ 0004‑282X20160116(2016)。)在一些实施例中，生酮饮食包括高脂肪、低碳水化合物饮食。 在一些实施例中，生酮饮食比改良的阿特金斯饮食(Atkins diet)更严格。在一些实施例中，生酮饮食包括食用规定量的热量、液体和蛋白质。生酮饮食在大多数主要医院都可获得。 [0131] 经典的生酮饮食是由脂肪克数与碳水化合物加蛋白质克数的设定比例来定义的。脂肪克数与碳水化合物加蛋白质克数的最常见比例是3:1或4:1。在这种经典的生酮饮食 中，大约90％的能量来自脂肪，10％来自碳水化合物和蛋白质的组合。热量通常被限制在年龄的每日建议量的80‑90％。在一些情况下，对食用所述饮食的受试者施加液体限制。 [0132] 在一个实例中，用于实验目的的生酮饮食是可购自 的AIN‑76A纯化的大鼠和小鼠饮食或其等效物。 [0133] 在一些实施例中，生酮饮食包括至多5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％的蛋白质，饮食的其余部分由脂肪、纤维、灰分和碳水化合物组成。在一些实施例中，生酮饮食包括至多2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％的碳水化合物，饮食的其余部分由脂肪、纤维、灰分和蛋白质组成。在一些实施例中，生酮饮食包括以克为单位测量的脂肪和以克为单位共同测量的碳水化合物和蛋白质，脂肪与碳水化合物/蛋白质的比例为2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、 4.3、4.4或4.5比一(1)。生酮饮食与正常饮食的比较如下表3所示。尽管表3中所示的生酮饮食用于实验目的，但受试者根据本文所述的一种或多种方法施用或食用的生酮饮食可以具有表3中列出的类似的脂肪、蛋白质、碳水化合物、灰分和其它成分的百分比。 [0134] 在一些情况下，这样的生酮饮食可以涉及摄入生酮与抗生酮大分子的比例为3:1，结果是大约85％的脂肪、12％的蛋白质和3％的碳水化合物。脂肪的混合物可以是多样化的。例如，脂肪可以包括来自植物、坚果和动物产品的脂肪。饮食可以由营养师积极管理，营养师以特定的时间表与饮食中的患者进行互动，例如，每周一次或每月一次。这样的饮食可以获得高达80％的依从性，高达90％的依从性，高达95％的依从性，高达96％的依从性，高达98％的依从性，高达99％的依从性，甚至高达100％的依从性。例如，在一项正在进行的子宫内膜癌妇女试点研究中，4周内实现了100％的依从性。 [0135] 施用途径、制剂和剂量 [0136] 所公开的治疗方法可以通过治疗剂的任何施用模式来完成。这些模式包括全身或局部施用，如口服、经鼻、肠胃外、经皮、皮下、阴道、颊、直肠或局部施用模式。 [0137] 根据预期的施用模式，所公开的组合物可以是固体、半固体或液体剂型，例如，注射剂、片剂、栓剂、丸剂、缓释胶囊、酏剂、酊剂、乳剂、糖浆、粉剂、液体、悬浮剂等，有时呈单位剂量并与常规制药实践一致。同样，组合物也可以静脉内(包括团注和输注)、腹膜内、皮下或肌肉内形式施用，并且都使用制药技术领域的技术人员熟知的形式。 [0138] 示例性的药物组合物是片剂和明胶胶囊，其包含途径抑制剂(和/或葡萄糖代谢调节剂)和药学上可接受的载体，如a)稀释剂，例如纯化水、甘油三酯油如氢化或部分氢化的植物油或其混合物、玉米油、橄榄油、葵花籽油、红花油、鱼油如EPA或DHA、或其酯或甘油三酯或其混合物、ω‑3脂肪酸或其衍生物、乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素、钠、糖精、葡萄糖和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如硅石、滑石粉、硬脂酸、其镁或钙盐、油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠和/或聚乙二醇；对于片剂还有；c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、碳酸镁、天然糖类如葡萄糖或β‑乳糖、玉米甜味剂、天然和合成胶类如阿拉伯胶、黄芪胶或海藻酸钠、蜡和/或聚乙烯吡咯烷酮(如果需要)；d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、甲基纤维素、膨润土、黄原胶、海藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂；f)乳化剂或分散剂，如Tween 80、Labrasol、HPMC、DOSS、caproyl 909、labrafac、labrafil、peceol、transcutol、capmul MCM、capmul PG‑12、captex 355、gelucire、维生素E TGPS或其它可接受的乳化剂；和/或g)增强化合物吸收的试剂，如环糊精、羟丙基‑环糊精、PEG400、PEG200。 [0139] 液体，特别是可注射的组合物，可以例如通过溶解、分散等来制备。例如，将途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂溶解在药学上可接受的溶剂(例如，水、生理盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等)中或与之混合，，从而形成可注射的等渗溶液或悬浮液。蛋白质如白蛋白、乳糜微粒或血清蛋白可用于使所公开的化合物增溶。 [0140] 所公开的药物组合物也可以配制成栓剂，所述栓剂可以由脂肪乳剂或悬浮剂制备；使用聚烷二醇如丙二醇作为载体。 [0141] 所公开的药物组合物也可以脂质体递送系统的形式施用，例如小的单层囊泡、大的单层囊泡和多层囊泡。脂质体可以由各种磷脂形成，含有胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。在一些实施例中，将脂质组分的膜与药物水溶液水合，以形成封装途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂的脂质层，如美国专利第5,262,564号中所述，其以全文引用的方式并入本文中。 [0142] 所公开的药物组合物也可以通过使用单克隆抗体作为单独的载体来递送，将途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂与之偶联。途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂也可以与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这样的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚(羟丙基)甲基丙烯酰胺‑苯酚、聚(羟乙基)‑天冬酰胺苯酚或用棕榈酰残基取代的聚(环氧乙烷)‑聚赖氨酸。此外，途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂可以与一类可用于实现药物控制释放的生物可降解聚合物偶联，例如聚乳酸、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。在一个实施例中，途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂不与聚合物，例如聚羧酸聚合物或聚丙烯酸酯共价结合。 [0143] 肠胃外注射施用一般用于皮下、肌肉内或静脉内注射和输注。注射剂可以常规形式制备，既可以是液体溶液或悬浮液，也可以是适合在注射前溶解于液体的固体形式。 [0144] 药物组合物可以分别按照常规的混合、造粒或包衣方法制备，按重量或体积计，本药物组合物可以含有约0.1％至约99％、约5％至约90％或约1％至约20％的葡萄糖代谢调节剂和/或激酶抑制剂。 [0145] 剂量方案是根据各种因素选择的，包括受试者的类型、物种、年龄、体重、性别和医疗状况；待治疗的病况的严重程度；施用途径；受试者的肾脏或肝脏功能；以及采用的特定化合物。本领域普通技术的医生或兽医可以容易地确定和处方预防、对抗或阻止疾病或病症的进展所需的药物有效量。 [0146] 在一些情况下，当用于指示效果时，途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂的有效剂量范围为约0.5mg至约5000mg的途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂，根据治疗疾病或病症的需要。用于体内或体外使用的组合物可以含有约0.5、5、20、50、75、100、150、250、500、750、1000、1250、2500、3500或5000mg的途径抑制剂和/或葡萄糖代谢调节剂，或者，在剂量清单中的一个量到另一个量的范围内。在一个实施例中，组合物呈可刻痕的片剂形式。 [0147] 在一些实施例中，本公开提供了一种药物组合物，其包括葡萄糖代谢调节剂和胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的抑制剂。 [0148] 在一些实施例中，本公开提供了一种药物组合物，其包括葡萄糖摄取抑制剂和胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的抑制剂。 [0149] 在一些实施例中，本公开提供了一种试剂盒，其含有包含葡萄糖摄取抑制剂的药物组合物和包含胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的抑制剂的药物组合物。 [0150] 试剂盒 [0151] 本文还描述了一种试剂盒，其包括用于控制、预防或治疗细胞增殖疾病的包装药物组合物。本发明的试剂盒可以被设计用于控制、预防或治疗细胞增殖或细胞增殖疾病。 [0152] 在一个实施例中，试剂盒或容器容纳胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的至少一种抑制剂。试剂盒还可以包括葡萄糖代谢调节剂。每个抑制剂或调节剂可以单独包装。或者，一种或多种抑制剂或调节剂可以包装或配制在一起。 [0153] 因此，试剂盒或容器可以容纳胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的至少一种抑制剂、至少一种葡萄糖代谢调节剂或其组合。 [0155] 在另一个实施例中，试剂盒容纳生酮饮食的一种或多种组分。生酮饮食的每个组分可以单独包装。或者，生酮饮食的一种或多种组分可以包装在一起。 [0156] 在另一个实施例中，试剂盒或容器容纳用于开始和/或维持生酮饮食的说明书，以及使用胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的至少一种抑制剂、至少一种葡萄糖代谢调节剂或其组合的说明书。例如，说明书可以包括用于混合生酮饮食的组分的方法、用于获得生酮饮食的补充组分的方法、食用生酮饮食的组分的时间表或其组合。 [0158] 本文所述的组合物、试剂盒和/或方法可用于治疗细胞增殖疾病如癌症或细胞增殖病症、代谢病症、神经退行性疾病或炎性疾病。例如，与对照相比，本文所述的组合物、试剂盒和/或方法可以将此类疾病的发生率或进展降低1％或更多、2％或更多、3％或更多、 5％或更多、7％或更多、10％或更多、15％或更多、20％或更多、25％或更多、30％或更多、 40％或更多、或50％或更多。这样的对照可以是受试者疾病的初始频率或以前的进展速率。 所述对照也可以是疾病的平均频率或进展速率。例如，当治疗癌症时，本文所述的组合物和/或方法可以使所治疗受试者的肿瘤体积与对照相比减少1％或更多、2％或更多、3％或更多、5％或更多、7％或更多、10％或更多、15％或更多、20％或更多、25％或更多、30％或更多、40％或更多、或50％或更多。这样的对照可以是初始肿瘤体积。在一些情况下，与对照相比，本文所述的组合物和/或方法可以将此类疾病的发生率或进展降低至少2倍、或至少3倍、或至少5倍、或至少10倍。 [0159] 实例 [0160] 以下实例是为了说明公开的各种实施例而给出的，并不意味着以任何方式限制本公开。其中的变化和由权利要求书的范围所定义的包含在本公开的精神内的其它用途将被本领域的技术人员所认识。附录A提供了对本文所述方法和组合物的开发所涉及的实验工作的进一步描述。 [0161] 概述 [0162] 编码胰岛素激活的磷酸肌醇‑3‑激酶(PI3K)的PIK3CA的功能获得突变和PTEN(降解PI3K产生的磷酸肌醇脂质的磷酸酶)的功能丧失突变是人类癌症中最常见的事件之一。然而，使用不同类别的抑制剂对PI3K进行药理抑制已导致人类临床反应不同，从而提出了存在对PI3K抑制的内在耐药机制的可能性。在此，本发明人表明，药理阻断PI3K不仅会升高血清葡萄糖，而且会显著提高血清胰岛素。这种高胰岛素血症在给药后一小时或两小时内重新激活肿瘤中的PI3K和mTOR信号传导途径，从而损害阻断PI3K的有效性。本发明人在本+ 文中展示了多种降低血清胰岛素的干预措施，包括二甲双胍、Na /葡萄糖共转运蛋白抑制剂和生酮饮食。本发明人发现，当小鼠处于生酮饮食时，人类肿瘤类器官和作为小鼠肿瘤生长的细胞系以及基因工程小鼠肿瘤的不同组别都对PI3K抑制剂表现出增强的反应。在具有或没有PIK3CA突变的肿瘤中都发现了增强的反应。这些结果表明，在多种癌症中使患者保持生酮饮食或施用葡萄糖代谢调节剂(例如，降低血清胰岛素的疗法)可以增强患者对PI3K抑制剂的反应。 [0163] PI3K途径是人类癌症中最常发生突变的途径之一，其中观察到PIK3CA的突变与KRAS的突变频率相似。已有二十多种PI3K抑制剂进入临床试验，但仅两种(艾德昔布和考帕昔布)被批准用于癌症疗法。这些药剂主要靶向PIK3CD编码的酶p110Δ，而不是更广泛突变的PIK3CA编码的酶p110α，从而有效治疗淋巴瘤。几种靶向p110α的药物已经进入批准试验，然而毒性概况(包括高血糖症)一直难以控制，并且反应并没有像预期的那样与PIK3CA突变相关。由于p110α几乎介导了所有对胰岛素的细胞反应，因此高血糖症是p110α抑制剂的预期中靶(on‑target)效应。阻断胰岛素信号传导促进肝脏的葡萄糖释放，并防止葡萄糖摄取到骨骼肌和脂肪中。由此引起的急性高血糖症因患者而异，并且由于胰腺代偿性释放胰岛素，常在药物施用后数小时内缓解。许多临界(borderline)胰岛素抵抗的患者由于在疗法期间不能用二甲双胍等降糖药物内源性控制血清葡萄糖水平而必须中断疗法。受长期PI3K抑制的实验受试者会表现出葡萄糖耐量降低和胰岛素抵抗增加。 [0164] 在此，本发明人表明，即使在PI3K抑制剂存在的情况下，由该途径的靶向抑制引起的全身葡萄糖‑胰岛素反馈也会激活几种肿瘤中的PI3K信号传导。本文所公开的反馈性高胰岛素血症可以使用饮食或药物方法进行预防，这大大提高了胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径抑制剂的疗效/毒性比。这些发现对正在进行临床试验的多种p110α抑制剂具有直接的临床意义，并为众多肿瘤类型的患者提供了一种显著提高治疗效果的手段。 [0165] 实例1：使用治疗剂量的靶向胰岛素受体/PI3K/mTOR途径中各种激酶的化合物破坏全身性葡萄糖稳态 [0166] 高血糖症在很大程度上被作为一种与治疗相关的并发症来治疗，仅在高血糖症持续存在的部分患者中才需要进行管理。由于身体正常的血糖调节，用这些药剂治疗的患者会出现一定程度的全身性高胰岛素血症，因为胰腺试图使血清葡萄糖水平正常化。由于胰岛素是肿瘤中PI3K信号传导的强效刺激物，并且可以对癌症进展产生深远的影响，因此本发明人假设治疗诱导的高胰岛素血症限制了靶向PI3K途径的药剂的治疗潜力。 [0167] 用治疗剂量的靶向胰岛素受体/PI3K/mTOR途径中的多种激酶的化合物，包括INSR/IGFR、PI3K、AKT和mTOR的抑制剂来治疗野生型小鼠，在治疗后，随着时间的推移监测其血糖水平(图1A、图5A、图5B)。本发明人观察到，这些药剂中的许多会引起血糖水平的显著增加。重要的是，本发明人注意到，高血糖症仅在几个小时后就消失了，无需额外的干预，这表明尽管存在药物，但肌肉和肝脏中的PI3K信号传导已被重新激活。对于每一种引起血糖增加的药剂，如通过ELISA随时间推移对胰岛素(图1B)和c‑肽进行测量，血清中释放的胰岛素量也有增加，c‑肽在临床上用作胰岛素随的替代物(图1C、图5C、图5D)。 [0168] 为了评估这些PI3K抑制剂引起的葡萄糖和胰岛素的峰值是否影响肿瘤，本发明人对胰腺中携带原位Kras‑Tp53‑Pdx‑Cre(KPC)肿瘤同种异体移植物的小鼠进行了氟脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描FDG‑PET。本发明人观察到，与媒剂处理的小鼠相比，在PI3K抑制后的急性环境中，这些肿瘤的葡萄糖摄取量增加，表明胰岛素的峰值可能会导致这些肿瘤中葡萄糖摄取量的短暂增加(图1D)。 [0169] 实例2：胰岛素在PI3K抑制的情况下刺激PI3K信号传导 [0170] 为了测试胰岛素的这些峰值是否在PI3K抑制的情况下刺激PI3K信号传导，在存在或不存在10ng/ml胰岛素的情况下，用PI3K抑制剂体外处理KPC细胞，10ng/ml胰岛素是在药物施用后15‑30分钟内在小鼠中观察到的水平(图1D)。这一水平的胰岛素足以在PI3K抑制剂继续存在的情况下部分挽救PI3K信号传导，如磷酸化AKT(pAKT)的部分重新激活和磷酸化S6(pS6)的几乎完全重新激活所示，磷酸化S6是通过mTORC1复合物进行生长信号传导的报告分子(图2A)。此外，这种增强的信号传导与细胞增殖的部分恢复相关(图2B‑2C)。 [0171] 在PI3K抑制剂存在的情况下，胰岛素刺激增殖的类似效果在各种其它肿瘤细胞系和来自乳腺、子宫内膜和前列腺肿瘤的患者来源的器官中观察到(图6A‑6G)。刺激的量在所有细胞系中并不一致，这在具有胰岛素受体的可变表达和生长对PI3K信号传导的不同依赖性的肿瘤中是可以预期的。这些观察结果支持以下结论：在某些肿瘤中，胰岛素是PI3K信号传导的强效激活剂，PI3K抑制剂施用后血清胰岛素的升高可以在正常组织和肿瘤中重新激活PI3K信号传导和可能对胰岛素的其它PI3K非依赖性反应。 [0172] 实例3：二甲双胍、SGLT2抑制剂、生酮饮食 [0173] 对糖尿病患者的研究和护理已致使开发出许多方法来管理血糖和胰岛素水平。利用这些工具，本发明人试图确定通过规避急性葡萄糖/胰岛素反馈来增强PI3K抑制剂疗法的方法。在我们的小鼠癌症模型中，对二甲双胍和钠‑葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂以及生酮饮食进行了评估。 [0174] 在用BKM120进行单次处理之前，将携带KPC同种异体移植物的未处理小鼠置于生酮饮食或用二甲双胍处理10天。在此处理期间，监测血糖，并在3小时后评估c‑肽(血液胰岛素的替代物)(图3A‑3B)。在一些小鼠中，在90分钟时收获肿瘤并对pS6进行染色(图3C‑3D)。 这些结果表明，用二甲双胍进行预处理对PI3K抑制剂诱导的血糖和胰岛素水平的升高或通过mTORC1的生长信号传导仅具有最小的影响。相比之下，SGLT2抑制剂和生酮饮食方法都降低了由此产生的高血糖，并减少了响应于BKM120治疗而释放的总胰岛素，并且这些效果与肿瘤中通过mTORC1的信号传导减少有关。在用p110α特异性抑制剂BYL‑719处理的小鼠中看到了类似的效果，其中本发明人观察到KPC同种异体移植物对BYL‑719的反应增强，其方式与每种治疗降低血清胰岛素水平的相对能力一致(图3E‑G，图7A‑D)。 [0175] 实例4：胰岛素受体的敲低或抑制 [0176] 在PI3K抑制的情况下，各种激素和代谢物可以重新激活生长。为了测试肿瘤信号传导和生长的增强是否由胰岛素直接介导，本发明人生成了一种多西环素诱导的shRNA来靶向KPC肿瘤中的胰岛素受体(图4A)。在没有PI3K抑制剂的情况下，诱导该发夹对肿瘤生长几乎没有影响。然而，在BYL719治疗开始时诱导该发夹导致肿瘤缩小，其几乎与生酮饮食一样有效(图4A)。这一结果表明，直到用PI3K抑制剂治疗后释放出超生理量的胰岛素，胰岛素受体才在这种肿瘤的生长中发挥主要作用。通过将PI3K抑制剂BKM120与胰岛素受体/IGF1受体抑制剂OSI‑906组合，进一步证实了这种效果的特异性，其对KPC同种异体移植物的生长产生比单独使用任何一种药物都要有效的反应(图8B‑8G)。 [0177] 实例5：外源性胰岛素 [0178] 为了进一步测试在处于生酮饮食状态时对PI3K抑制剂反应的改善是否是降低血液胰岛素水平的结果，本发明人试图使用外源性胰岛素来“挽救”PI3K的重新激活。用生酮饮食和BYL‑719的组合处理一组携带Pik3ca突变型乳腺同种异体移植物的小鼠，然后在每次给药PI3K抑制剂后15分钟给予0.4mU的胰岛素(图4B)。胰岛素的添加大大降低了生酮饮食补充PI3K抑制剂疗法的治疗益处，胰岛素的添加也挽救了同种异体移植KPC肿瘤的肿瘤生长(图8H)。应注意，生酮饮食、胰岛素和BYL‑719的组合在幼小鼠中的耐受性不好，因此在治疗仅一周后，由于KPC肿瘤重量减轻，达到了伦理终点。 [0179] 这些数据共同证明了葡萄糖代谢的调节通过降低血液胰岛素和随之而来的胰岛素激活肿瘤中胰岛素受体的能力来改善对PI3K抑制剂的反应。如本文所证明，葡萄糖代谢的调节改善了具有广泛遗传畸变的肿瘤对PI3K抑制剂的反应。在晚期子宫内膜腺癌(具有PTEN缺失和PIK3CA突变)和膀胱癌(FGFR扩增)的患者来源的异种移植物以及Pik3ca突变型乳腺癌和MLL‑AF9驱动的急性骨髓性白血病的同基因同种异体移植物中观察到治疗益处 (图4C，图9A‑9E，图10A‑10E，图11A‑11E)。 [0180] 葡萄糖代谢的调节改善一系列靶向PI3K途径的药剂的药物疗效，所述药剂除了BKM120和BYL719外还包括泛PI3K抑制剂GDC‑0941、PI3K‑β节制性化合物GDC‑0032、mTOR/PI3K双重抑制剂GDC‑0980和最近批准的PI3K‑α/δ抑制剂考帕昔布(图5)。在一些情况下，单独的生酮饮食在不同的肿瘤模型中具有不同的效果，表明饮食变化本身不足以引起在各鼠模型中观察到的肿瘤反应。在一些情况下，如AML模型，单独的生酮饮食加速了疾病的进展，表明这种饮食在单独使用时可能对一些癌症患者不利。 [0181] 本文显示的数据表明，胰岛素反馈限制PI3K抑制在各种血液恶性肿瘤和实体肿瘤中的疗效。通过降低全身性胰岛素反应，在PTEN/PIK3CA突变型子宫内膜PDX肿瘤中，与单独用BKM120处理的小鼠肿瘤相比，向BKM120添加生酮饮食降低胰岛素信号传导的免疫组织化学标志物。在这些示例性肿瘤中，生酮饮食增强了BKM120降低磷酸化胰岛素受体、磷酸化AKT和磷酸化S6水平的能力，并且这种信号传导的降低与Ki67染色所示的增殖水平的降低和裂解的胱天蛋白酶3染色所示的凋亡水平的增加相关(图4D‑E)。 [0182] 虽然这些数据并不排除将PI3K抑制与抗血糖疗法组合的胰岛素非依赖性效应，但它们证明了这种对葡萄糖代谢的调节显著增加了这些途径抑制剂的治疗功效。鉴于这些结果，思考常见的临床实践，如静脉内葡萄糖施用、糖皮质激素的使用或为患者提供富含葡萄糖的营养补充剂可能会如何影响治疗反应可能也很重要。靶向这一关键致癌途径的治疗剂应配合如施用葡萄糖代谢调节剂或生酮饮食等策略，以限制这种适得其反的全身性反馈。 [0183] 实例6：靶向葡萄糖/胰岛素反馈的多种方法 [0184] 本实例说明了同时靶向葡萄糖/胰岛素反馈的多种方法的体内影响。 [0185] 图12A‑12C以图形方式示出了在用单剂量BKM120与单独的二甲双胍预处理、SGLT2抑制剂(SGLT2i)预处理、生酮饮食或这些处理的组合处理后，携带同基因K8484 KPC同种异体移植肿瘤的野生型c57/bl6小鼠的血糖、酮和c‑肽水平(N＝4/臂)。这些数据表明，将这些方法组合起来可以在控制葡萄糖/胰岛素反馈方面产生额外的效果，并且可以通过显著地增强全身代谢对PI3K抑制的反应来提高治疗功效。 [0186] 实例7：方法 [0187] 小鼠的采购和处理 [0188] 所有动物研究都是按照IACUC批准的威尔康奈尔医学院(Weill Cornell Medicine)的动物方案(#2013‑0116)和哥伦比亚大学(Columbia University)的动物方案(AC‑AAAQ5405)进行的。小鼠保持在12小时光/暗循环下温度和湿度受控的无特定病原体的条件下，并接受正常的饲料饮食(PicoLab啮齿动物20 5053实验室饮食，St.Louis,MO)或生酮饮食(Thermo‑Fisher AIN‑76A)，并自由获得饮用水。饮食的组成如表3所示。 [0189] 表3：生酮饮食与正常饮食的比较 [0190] 正常饮食 生酮饮食蛋白质 21％ 8.6％ 脂肪 11.3％ 75.1％ 纤维 4.6％ 4.8％ 灰分 7％ 3.0％ 碳水化合物 62％ 3.2％ [0191] 对于实体肿瘤研究，裸(基因型)小鼠和C57/BL6小鼠在8周龄时从Jackson实验室6 (Bar Harbor,ME)购买。向它们注射含0.5‑1×10 个细胞的生长培养基和基质胶 (Trevigen，#3433‑005‑R1)的1:1混合物，并在开始处理前使肿瘤生长到最小直径为0.6cm。 在处理开始时不符合这一标准的肿瘤不用于实验。 [0192] 对于AML研究，将10‑12周龄雄性C57BL/6J小鼠用于MLL‑AF9 Ds‑Red AML研究(批准的方案AC‑AAAQ5405)。对于MLL‑AF9 Ds‑Red细胞的预处理研究，生酮组和生酮/BKM组小5 鼠在经侧尾静脉注射MLL‑AF9 Ds‑Red细胞(每只小鼠2×10个，200μl)前给予生酮饮食10天。静脉内注射后的第二天，通过经口管饲法给予小鼠0.5％羧甲基纤维素(CMC)作为媒剂对照或BKM120(37.5mg/kg)，持续两周(7天中的5天)。处理两周后对小鼠实施安乐死，以检查骨髓中AML的进展。同时通过IVIS光谱仪监测肿瘤进展。 [0193] 对于MLL‑AF9 Ds‑Red细胞的同步处理研究，小鼠经侧尾静脉注射MLL‑AF9 Ds‑Red5 细胞(每只小鼠2×10 个，200μl)。静脉内注射后的第二天，通过经口管饲法给予小鼠媒剂或BKM120(37.5mg/kg)，持续两周。生酮组或生酮/BKM组同日改为生酮饮食。处理两周后对小鼠实施安乐死，以检查骨髓中AML的进展。 [0194] 为了检查生酮/BKM处理是否影响AML植入，给予生酮组和生酮/BKM组小鼠生酮饮食10天，然后通过经口管饲法用媒剂或BKM120处理两周。然后经侧尾静脉向小鼠注射MLL‑ 5 AF9 Ds‑Red细胞(每只小鼠2×10个，200μl)。静脉内注射后两周，对小鼠实施安乐死，以检查骨髓中的AML负担。 [0195] 存活研究、预处理研究和同步处理同时进行。小鼠用媒剂或BKM120处理(7天中的5天)，直到自发死亡，或者当小鼠出现非常不适(自发活动减少、皮毛蓬乱和外观脱水)、实现体重下降超过20％或表现出肢体瘫痪的迹象时，将其安乐死。为了检查生酮/BKM处理是否影响骨髓细胞群体，C57BL/6J小鼠在9天内用8个剂量的媒剂或BKM120进行处理。对小鼠实施安乐死，并从每只小鼠中取出一根股骨和胫骨。用PBS(2％FBS)冲洗骨髓细胞。用ACK裂解缓冲液(Invitrogen)裂解红细胞。 [0196] 用于流式细胞术的抗体如下：eBioscience的CD34(RAM34)，Biolegend的c‑Kit(2B8)、Sca‑1(D7)、CD3ε(145‑2C11)、B220(RA3‑6B2)、CD150(TC‑15‑12F2.2)、CD49b(DX5)和CD48(HM48‑1)。‘谱系混合液’包括CD3、CD4、Gr‑1、Mac‑1(CD11b)、B220和Terr‑119。DAPI用于排除死细胞。 [0197] 化合物 [0198] GDC‑0032、MK2206、BEZ235、BKM‑120、GDC‑0941、GDC‑0980和卡格列净均购自medchem express(Monmouth Junction,NJ)，并通过经口管饲法给予100μl。二甲双胍购自Sigma Aldrich(St.Louis,MO)。Bay‑80 6946和OSI‑906分别来自Sellechem目录#S2802和#S1091。这些化合物的靶向信息显示在表4中。IC50数据从Selleck Chem网站(Selleckchem.com)获得。在PI3K途径抑制剂之前60分钟施用卡格列净，使其最佳功效与葡萄糖峰值水平相一致。在BKM120处理前，将用二甲双胍处理的小鼠预处理10天。除非另有说明，否则生酮饮食是在初始PI3K抑制剂处理时开始的。多西环素购自Sigma(St.Louis, Missouri)目录号D3072‑1ML，并通过腹膜内注射施用，每天一次，剂量为3mg/kg。 [0199] 表4：示例性途径抑制剂 [0200] [0201] 细胞系 [0202] 小鼠胰腺细胞系由哥伦比亚大学Kenneth Olive博士赠予。小鼠乳腺细胞系由西奈山医学院(Mount Sinai School of Medicine)的Ramon Parsons博士赠予。PDX模型由英格兰德精密医学研究所(Englander Institute of Precision Medicine)提供。细胞系 HEK293、HCC‑38、MDA‑MB‑468、PC‑3、BT‑549是从ATCC购买的，并在补充有10％FBS和1％Pen/Strep的DMEM中生长。具有或不具有PTEN缺失的HCT‑116及DLD‑1等基因系均由Todd Waldman实验室友情提供。表5中提供了所使用的细胞/类器官的图表，其中已知的致癌改变如上面引用的出版物中所述或可从ATCC获得(参见网站atcc.org/～/media/PDFs/ Culture％20Guides/Cell_Lines_by_Gene_Mutation.ashx)。 [0203] 表5：示例性细胞系 [0204] [0205] 信号传导测定 [0206] 对于信号传导测定，将细胞在PBS中洗涤1次，并根据细胞系在饥饿培养基(‑FBS)中放置6‑18小时，并在收获前用所指示的PI3K抑制剂单独处理1小时或在收获前用所指示的PI3K抑制剂与胰岛素组合处理10分钟。如先前所述，运行患者来源的类器官的三维培养和剂量反应实验。简而言之，将约1000个细胞接种到96孔血管生成板的10μl的1:1基质胶:培养基中，并在37度下凝固30分钟，然后添加70μl培养基。然后以对数标度的剂量反应一式三份处理类器官，并在96小时进行CellTiter‑Glo测定(Promega)以确定IC50值。在二维培养中进行增殖测定，如图例所示。 [0207] 使用多西环素诱导的shRNA策略实现胰岛素受体的敲低。为了生成miR‑E shRNA，购买编码预测shRNA的97聚体寡核苷酸(IDT Ultramers)，使用siRNA预测工具Splash RNA(参见网站splashrna.mskcc.org/)预测shRNA。 [0208] 使用引物miRE‑Xho‑fw(5'‑TGAACTCGAGAAGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCG‑3'，SEQ ID NO:1)和miRE‑Eco‑rev(5'‑TGAACTCGAGAAGGTATATTGCTGTTGACAGT GAGCG‑3'，SEQ ID NO:2)对寡核苷酸进行PCR扩增。纯化PCR产物，并将PCR产物和LT3GEPIR载体(Fellmann,C.等人,用于有效单拷贝RNAi的优化的微RNA主链(An optimized microRNA backbone for effective single‑copy RNAi)《. 细胞报告》(Cell Rep)5,1704‑1713)用EcoRI‑HF和XhoHI进行双重消化。将PCR产物和载体主链连接并在Stbl3感受态细胞中转化，并在32°下生长过夜。使用引物miRE‑fwd(5'‑TGTTTGAATGAGGCTTCAGTAC‑3'，SEQ ID NO:3)对菌落进行筛选。 [0209] Renilla(SEQ ID NO:4)： [0210] TGCTGTTGACAGTGAGCGCAGGAATTATAATGCTTATCTATAGTGAAGCCACAGA [0211] TGTATAGATAAGCATTATAATTCCTATGCCTACTGCCTCGGA [0212] INSR4(SEQ ID NO:5)： [0213] TGCTGTTGACAGTGAGCGCGGGGTTCATGCTGTTCTACAATAGTGAAGCCACAG [0214] ATGTATTGTAGAACAGCATGAACCCCATGCCTACTGCCTCGGA [0215] 免疫印迹法 [0216] 在1x CST细胞裂解缓冲液#9803(Danvers MA)中制备细胞裂解物。用BCA试剂盒(Pierce)23227)评估总蛋白浓度。使裂解物在4‑20％Tris‑甘氨酸凝胶(ThermoFisher,Carlsbad CA)上流出。针对pAKT473、pAKT308、pS6、pTYR、AKT和S6的初级抗体购自Cell Signaling(Danvers,MA)，并在5％牛血清白蛋白中以1:1000使用过夜。肌动蛋白和微管蛋白抗体来自Sigma Aldrich，并在5％牛奶中以1:5,000使用。所有这些抗体均用来自 Jackson Immuno的HRP偶联二抗在5％牛奶中以1:5000显色。 [0217] 免疫组织化学 [0218] 肿瘤切片(3μm)用10mmol/L柠檬酸、0.05％Tween 20，pH 6.0进行抗原修复，并用所指示的抗体(Ki67(Abcam,ab16667)1:500；裂解的胱天蛋白酶‑3(Asp175；5A1E；Cell Signaling Technology，9664)1:200；磷酸‑INSR(Tyr 1162；Thermo Fisher#AHR0271)1:100；磷酸‑AKT(Ser473；Cell Signaling Technology，8101)1:20；和磷酸‑S6核糖体蛋白(Ser235/236；Cell Signaling Technology，2211)1:300)进行培育。 [0219] 血液测量 [0220] 为了评估血糖，使用OneTouch Ultra血糖仪在处理前(时间0)从小鼠尾部抽取10μl血液，然后在指定时间点(15、30、60、90、120、180分钟)再次抽取。在终点时，从小鼠抽取>100μl的血液到EDTA管中(Sarstedt#16.444)。将血液离心(在4℃下10,000×g离心10分 钟)，血浆在‑20℃下保存。血浆β‑羟丁酸、甘油三酯(Stanbio Laboratory,Boerne,TX)、血清胰岛素和c‑肽(APLCO Diagnostics,Salem,NH)水平通过ELISA来定量。 [0221] FDG‑PET [0222] 向携带原位胰腺癌同种异体移植物的雄性c57/bl6小鼠(n＝4/臂)的尾静脉中注89 射含200‑250μCi[ Zr]脂质体(3‑4μmol脂质)的200‑250μL PBS溶液。在BKM120注射后90分钟血液胰岛素反馈峰值时，对动物进行麻醉，然后使用Inveon PET/CT扫描仪(Siemens Healthcare Global)进行扫描。进行全身PET扫描，记录最少5000万个重合事件，持续时间为10分钟。能量和重合时间窗口为350‑750keV和6ns。将数据标准化以校正PET响应的不均匀性、死区时间计数损失、正电子分支比和注入时间的物理衰减。重建图像中的计数率通过 89 使用从含有 Zr的体模成像中得出的系统校准因子转换为活性浓度(每克组织的注射剂量 百分比[％ID])。使用ASIPro VMTM软件(Concorde Micro‑systems)分析图像。通过在胰腺肿瘤相邻切片上绘制的至少5个感兴趣范围(ROI)中的最大值的平均值来量化活性浓度。 [0223] 代谢组学 [0224] 使用80％甲醇从细胞或组织中提取代谢物。将每个样品转移到预冷(干冰)的2mL均质管中，该管中含有单个不锈钢珠(5mm)。向每个样品中添加预冷的80％甲醇(1mL)，并使用Qiagen TissueLyser II进行均质化。然后将样品在4℃下以14,000rpm离心15分钟。萃取上清液，并根据组织重量进行标准化。在与Vanquish UPLC系统(Thermo Scientific)耦接的Q Exactive Orbitrap质谱仪(Thermo Scientific)上进行针对性的LC/MS分析。Q Exactive在极性切换模式下运行。使用Sequant ZIC‑HILIC色谱柱(2.1mm i.d.×150mm, Merck)分离代谢物。流速为150μL/min。缓冲液由A的100％乙腈和B的0.1％NH4OH/20mM CH3COONH4水溶液组成。梯度在20分钟内从85％升至30％A，然后用30％A洗涤并在85％A下重新平衡。根据5ppm内的精确质量和标准保留时间鉴定代谢物。基于每种代谢物的峰面积进行相对代谢物定量。所有数据分析均使用内部编写的脚本进行。 [0225] 参考文献： [0226] 1 Kandoth,C.等人.12种主要癌症类型的突变态势和重要性(Mutational landscape and significance across 12major cancer types)《. 自然》(Nature)502, 333‑339,doi:10.1038/nature12634(2013)。 [0227] 2 Millis,S.Z.,Ikeda,S.,Reddy,S.,Gatalica,Z.和Kurzrock,R.19784种多样的实体肿瘤的磷脂酰肌醇‑3‑激酶途径的变化态势(Landscape of Phosphatidylinositol‑ 3‑Kinase Pathway Alterations Across 19784Diverse Solid Tumors)《. 美国医学会杂志‑肿瘤学卷》(JAMA Oncol)2,1565‑1573,doi:10.1001/jamaoncol.2016.0891(2016)。 [0228] 3 Massacesi,C.等人,PI3K抑制剂作为新的癌症治疗剂：对临床试验设计的影响(PI3K inhibitors as new cancer therapeutics:implications for clinical trial design.)《肿瘤靶标和治疗》(Onco Targets Ther)9,203‑210,doi:10.2147/OTT.S89967(2016)。 [0229] 4 Mayer,I.A.等人,PI3Kα特异性抑制剂阿普昔布(BYL719)与来曲唑一起用于ER+/HER2‑转移性乳腺癌的Ib期研究(A Phase Ib Study of Alpelisib(BYL719),a PI3Kalpha‑Specific Inhibitor,with Letrozole in ER+/HER2‑Metastatic Breast Cancer.)《临床癌症研究》(Clin Cancer Res)23,26‑34,doi:10.1158/1078‑0432.CCR‑16‑ 0134(2017)。 [0230] 5 Bendell,J.C.等人,口服泛I类PI3K抑制剂BKM120在晚期实体肿瘤患者中的I期剂量递增研究(Phase I,dose‑escalation study of BKM120,an oral pan‑Class I PI3K inhibitor,in patients with advanced solid tumors).《临床肿瘤学杂志》(J Clin Oncol)30,282‑290,doi:10.1200/JCO.2011.36.1360(2012)。 [0231] 6 Juric,D.等人,口服PI3K抑制剂塔瑟昔布在晚期实体肿瘤患者中的I期剂量递增研究(Phase I Dose‑Escalation Study of Taselisib,an Oral PI3K Inhibitor,in Patients with Advanced Solid Tumors)《. 癌症发现》(Cancer Discov)7,704‑715,doi: 10.1158/2159‑8290.CD‑16‑1080(2017)。 [0232] 7 Patnaik,A.等人,静脉内泛I类磷脂酰肌醇3‑激酶抑制剂考帕昔布(BAY 80‑6946)在晚期实体肿瘤和非霍奇金氏淋巴瘤中的首次人类I期研究(First‑in‑human phase I study of copanlisib(BAY 80‑6946),an intravenous pan‑class I phosphatidylinositol 3‑kinase inhibitor,in patients with advanced solid tumors and non‑Hodgkin's lymphomas)《. 肿瘤学年鉴》(Ann Oncol)27,1928‑1940,doi: 10.1093/annonc/mdw282(2016)。 [0233] 8 Gallagher,E.J.等人,在胰岛素抵抗和高胰岛素血症的小鼠模型中，抑制PI3K可减少乳腺肿瘤的生长并诱导高血糖(Inhibiting PI3K reduces mammary tumor growth and induces hyperglycemia in a mouse model of insulin resistance and hyperinsulinemia)《. 致癌基因》(Oncogene)31,3213‑3222,doi:10.1038/onc.2011.495(2012)。 [0234] 9 Hopkins,B.D.,Goncalves,M.D.和Cantley,L.C.肥胖和癌症机制：癌症代谢(Obesity and Cancer Mechanisms:Cancer Metabolism).《临床肿瘤学杂志》(J Clin Oncol)34,4277‑4283,doi:10.1200/JCO.2016.67.9712(2016)。 [0235] 10 Fruman,D.A.等人,人类疾病中的PI3K途径(The PI3K Pathway in Human Disease)《. 细胞》(Cell)170,605‑635,doi:10.1016/j.cell.2017.07.029(2017)。 [0236] 11 Belardi,V.,Gallagher,E.J.,Novosyadlyy,R.和LeRoith,D.肥胖相关乳腺癌中的胰岛素和IGF(Insulin and IGFs in obesity‑related breast cancer)《. 乳腺生物学与瘤形成研究杂志》(J Mammary Gland Biol Neoplasia)18,277‑289,doi:10.1007/ s10911‑013‑9303‑7(2013)。 [0237] 12 Gallagher,E.J.和LeRoith,D.微评：IGF、胰岛素和癌症(Minireview:IGF,Insulin,and Cancer).《内分泌学》(Endocrinology)152,2546‑2551,doi:10.1210/ en.2011‑0231(2011)。 [0238] 13 Klil‑Drori,A.J.,Azoulay,L.和Pollak,M.N.癌症、肥胖、糖尿病和抗糖尿病药物：迷雾是否散去？(Cancer,obesity,diabetes,and antidiabetic drugs:is the fog clearing？)《自然评论:临床肿瘤学》(Nat Rev Clin Oncol)14,85‑99,doi:10.1038/nrclinonc.2016.120(2017)。 [0239] 14 Ma,J.等人,男性血浆C肽与结直肠癌风险的前瞻性研究(A prospective study of plasma C‑peptide and colorectal cancer risk in men)《. 美国国立癌症研究所杂志》(J Natl Cancer Inst)96,546‑553(2004)。 [0240] 15 Xu,J.等人,葡萄糖代谢标志物与结肠直肠癌风险之间的关联性(Association between markers of glucose metabolism and risk of colorectal cancer)《.英国医学杂志》(BMJ Open)6,e011430,doi:10.1136/bmjopen‑2016‑011430(2016)。 [0241] 16 Ma,J.等人,前列腺癌男性的诊断前体重指数、血浆C‑肽浓度和前列腺癌特异性死亡率：长期存活分析(Prediagnostic body‑mass index,plasma C‑peptide concentration,and prostate cancer‑specific mortality in men with prostate cancer:a long‑term survival analysis).《柳叶刀肿瘤学》(Lancet Oncol)9,1039‑ 1047,doi:10.1016/S1470‑2045(08)70235‑3(2008)。 [0242] 17 Olive,K.P.等人,抑制刺猬信号传导增强了胰腺癌小鼠模型中化学疗法的递送(Inhibition of Hedgehog signaling enhances delivery of chemotherapy in a mouse model of pancreatic cancer)《. 科学》(Science)324,1457‑1461,doi:10.1126/science.1171362(2009)。 [0243] 18 Pauli,C.等人,个性化的体外和体内癌症模型指导精准医学的发展(Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine)《. 癌症发现》7,462‑477,doi:10.1158/2159‑8290.CD‑16‑1154(2017)。 [0244] 19 Komoroski,B.等人,一种新型的选择性SGLT2抑制剂达格列净在2周内改善了2型糖尿病患者的血糖控制(Dapagliflozin,a novel,selective SGLT2 inhibitor, improved glycemic control over 2weeks in patients with type 2diabetes mellitus)《. 临床药理学与治疗学》(Clin Pharmacol Ther)85,513‑519,doi:10.1038/clpt.2008.250(2009)。 [0245] 20 Demin,O.,Jr.,Yakovleva,T.,Kolobkov,D.和Demin,O.使用半机械模型分析SGLT2抑制剂的疗效(Analysis of the efficacy of SGLT2 inhibitors using semi‑ mechanistic model).《药理学前沿》(Front Pharmacol)5,218,doi:10.3389/ fphar.2014.00218(2014)。 [0246] 21 Pollak,M.二甲双胍和其它双胍类药物在肿瘤学中的应用：推进研究议程(Metformin and other biguanides in oncology:advancing the research agenda). 《癌症预防研究》(Cancer prevention research)3,1060‑1065,doi:10.1158/1940‑ 6207.CAPR‑10‑0175(2010)。 [0247] 22 Pollak,M.双胍类药物在肿瘤学中的潜在应用(Potential applications for biguanides in oncology).《临床研究杂志》(J Clin Invest)123,3693‑3700,doi:10.1172/JCI67232(2013)。 [0248] 23 Saura,C.等人,布帕昔布加曲妥珠单抗在基于曲妥珠单抗的疗法已取得进展的HER2阳性晚期或转移性乳腺癌患者的Ib期研究(Phase Ib study of Buparlisib plus Trastuzumab in patients with HER2‑positive advanced or metastatic breast cancer that has progressed on Trastuzumab‑based therapy)《. 临床癌症研究》20, 1935‑1945,doi:10.1158/1078‑0432.CCR‑13‑1070(2014)。 [0249] 24 Juvekar,A.等人,PI3K抑制剂与PARP抑制剂的组合可为BRCA1相关乳腺癌提供有效的治疗方法(Combining a PI3K inhibitor with a PARP inhibitor provides an effective therapy for BRCA1‑related breast cancer)《. 癌症发现》2,1048‑1063,doi: 10.1158/2159‑8290.CD‑11‑0336(2012)。 [0250] 25 Puchalska,P.和Crawford,P.A.酮体在能量代谢、信号传导和治疗中的多维作用(Multi‑dimensional Roles of Ketone Bodies in Fuel Metabolism,Signaling,and Therapeutics)《.细胞代谢》(Cell Metab)25,262‑284,doi:10.1016/j.cmet.2016.12.022(2017)。 [0251] 26 Sampaio,L.P.用于癫痫治疗的生酮饮食(Ketogenic diet for epilepsy treatment.)《神经精神档案》(Arq Neuropsiquiatr)74,842‑848,doi:10.1590/0004‑ 282X20160116(2016)。 [0252] 27 Xia,J.,Sinelnikov,I.V.,Han,B.和Wishart,D.S.MetaboAnalyst 3.0‑使代谢组学更有意义(MetaboAnalyst 3.0‑‑making metabolomics more meaningful)《.核酸研究》(Nucleic Acids Res)43,W251‑257,doi:10.1093/nar/gkv380(2015)。 [0253] 28 Xia,J.和Wishart,D.S.使用MetaboAnalyst 3.0进行全面的代谢组学数据分析(Using MetaboAnalyst 3.0for Comprehensive Metabolomics Data Analysis)《. 生物信息学实验室指南》(Curr Protoc Bioinformatics)55,14 10 11‑14 10 91,doi: 10.1002/cpbi.11(2016)。 [0254] 29 Xia,J.和Wishart,D.S.基于网络的代谢组学工具，用于途径分析和可视化(MetPA:a web‑based metabolomics tool for pathway analysis and visualization).《生物信息学》(Bioinformatics)26,2342‑2344,doi:10.1093/bioinformatics/btq418(2010)。 [0255] 30 Xia,J.和Wishart,D.S.使用MetaboAnalyst进行代谢组学数据处理，分析和解释(Metabolomic data processing,analysis,and interpretation using MetaboAnalyst).《生物信息学实验室指南》第14章,第14 10节,doi:10.1002/ 0471250953.bi1410s34(2011)。 [0256] 31 Douris,N.等人,氨基酸代谢的适应性变化可使食用低碳水化合物生酮饮食的小鼠正常长寿(Adaptive changes in amino acid metabolism permit normal longevity in mice consuming a low‑carbohydrate ketogenic diet)《. 生物化学与生物物理学报》(Biochim Biophys Acta)1852,2056‑2065,doi:10.1016/ j.bbadis.2015.07.009(2015)。 [0257] 32 Pauli,C.等人,细胞病理学在精准肿瘤学中的新兴作用(An emerging role for cytopathology in precision oncology)《. 癌症细胞病理学》(Cancer Cytopathol) 124,167‑173,doi:10.1002/cncy.21647(2016)。 [0258] 33 Lee,C.,Kim,J.S.和Waldman,T.PTEN基因靶向揭示了人类癌细胞中辐射诱导的大小检查点(PTEN gene targeting reveals a radiation‑induced size checkpoint in human cancer cells)《. 癌症研究》(Cancer Res)64,6906‑6914,doi:10.1158/0008‑ 5472.CAN‑04‑1767(2004)。 [0259] 34 Pelossof,R.等人,用顺序分类算法预测有效的shRNA(Prediction of potent shRNAs with a sequential classification algorithm)《. 自然·生物技术》(Nat Biotechnol)35,350‑353,doi:10.1038/nbt.3807(2017)。 [0260] 35 Fellmann,C.等人,用于有效单拷贝RNAi的优化的微RNA主链(An optimized microRNA backbone for effective single‑copy RNAi)《. 细胞报告》(Cell Rep)5,1704‑ 1713,doi:10.1016/j.celrep.2013.11.020(2013)。 [0261] 本文引用或提及的所有专利和出版物均指示了本发明所属领域的技术人员的技术水平，并且每个这样引用的专利或出版物特此通过引用以相同的程度特别地并入本文，就好像其已通过引用单独地整体并入或通过引用整体在本文中阐述一样。申请人保留将来自任何这样引用的专利或出版物的任何和所有材料和信息实体并入本说明书的权利。 [0262] 以下陈述旨在根据说明书中的前述描述来描述和总结本发明的各种实施例。 [0263] 陈述： [0264] 1.一种治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的葡萄糖代谢调节剂；以及向所述受试者施用有效量的胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径的途径抑制剂。 [0265] 2.根据陈述1所述的方法，其中所述葡萄糖代谢调节剂是葡萄糖摄取抑制剂，其任选地选自由钠‑葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)抑制剂、钠‑葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂或SGLT1/SGLT2双重抑制剂组成的组。 [0266] 3.根据陈述2所述的方法，其中所述葡萄糖摄取抑制剂选自由达格列净、恩格列净、卡格列净、伊格列净、托格列净、依碳酸舍格列净、依碳酸瑞格列净、埃格列净、索格列净和卡纳格列净组成的组。 [0267] 4.根据陈述1所述的方法，其中所述葡萄糖代谢调节剂是二甲双胍。 [0268] 5.根据陈述1所述的方法，其中所述葡萄糖代谢调节剂是胰岛素受体/IGF1受体抑制剂，其中任选地，所述胰岛素受体/IGF1受体抑制剂是林斯替尼(OSI‑906)。 [0269] 6.根据陈述1‑5中任一项所述的方法，其中所述途径抑制剂能够抑制选自由INSR/IGFR、PI3K、AKT和mTOR组成的组中的一种或多种激酶。 [0270] 7.根据陈述6所述的方法，其中所述途径抑制剂选自由艾德昔布、考帕昔布、布帕昔布(BKM120)、阿普昔布(BYL719)、塔瑟昔布(GDC‑0032)、匹克昔布(GDC‑0941)、阿哌昔布(GDC‑0980)、塞来昔布(TAK‑117)、达妥昔布、艾坡昔布、MK2206和林斯替尼(OSI‑906)组成的组。 [0271] 8.根据陈述1‑7中任一项所述的方法，其中所述与PI3K信号传导相关的疾病或病症是癌症或细胞增殖病症、代谢病症、神经退行性疾病或炎性疾病。 [0272] 9.根据陈述1‑8中任一项所述的方法，其中所述与PI3K信号传导相关的疾病或病症是神经退行性疾病，任选地是脑创伤、脊髓创伤、外周神经系统创伤、阿尔茨海默氏病、皮克氏病、弥漫性路易体病、进行性核上麻痹(斯蒂尔‑理查德森综合征)、多系统变性(夏伊‑德尔格综合征)；运动神经元疾病，包括肌肉萎缩性侧索硬化、退行性共济失调、皮质基底变性、关岛型ALS‑帕金森氏‑痴呆复合征、亚急性硬化性全脑炎、亨廷顿氏病、帕金森氏病、突触核蛋白病、原发性进行性失语症、纹状体黑质变性、马查多‑约瑟夫病/脊髓小脑性共济失调3型和橄榄体脑桥小脑变性、妥瑞氏病、延髓和假性延髓麻痹、脊髓和脊髓延髓肌肉萎缩(肯尼迪病)、原发性侧索硬化症、家族性痉挛性截瘫、沃尼‑霍夫曼病、库‑韦二氏病、台‑萨氏病、桑德霍夫病、家族性痉挛病、沃‑库‑韦三氏病、痉挛性截瘫、进行性多病灶脑白质病和朊病毒病(包括克雅二氏、格施谢三氏病、库鲁病和致命性家族性失眠症)、年龄相关性痴呆、血管性痴呆、弥漫性白质病(宾斯旺格病)、内分泌或代谢源性痴呆、头部创伤和弥漫性脑损伤的痴呆、拳击员痴呆或额颞叶痴呆、由大脑局部缺血或梗塞包括栓塞性闭塞和血栓性闭塞以及任何类型的颅内出血导致的神经退行性病症、颅内和椎管内病变、遗传性脑血管病、遗传性淀粉样蛋白、唐氏综合征、巨球蛋白血症、继发性家族性地中海热、穆‑韦二氏综合征、多发性骨髓瘤、胰腺相关淀粉样变性、心脏相关淀粉样变性、慢性血液透析性关节病、芬兰淀粉样变性、爱荷华淀粉样变性或其组合。 [0273] 10.根据陈述1‑8中任一项所述的方法，其中所述与PI3K信号传导相关的疾病或病症是炎性病症，任选地是II型糖尿病、胰岛素抗性心血管疾病、心律不齐、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、高甘油三酯血症、血脂异常、视网膜病变、肾病变、神经病变、肥胖症和黄斑水肿、回肠炎、溃疡性结肠炎、巴雷特氏综合征或克罗恩氏病。 [0274] 11.根据陈述1‑8中任一项所述的方法，其中所述与PI3K信号传导相关的疾病或病症是代谢疾病，任选地是II型糖尿病、胰岛素抗性心血管疾病、心律不齐、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、高甘油三酯血症、血脂异常、视网膜病变、肾病变、神经病变、肥胖症或黄斑水肿。 [0275] 12.根据陈述1‑10或11中任一项所述的方法，其中所述受试者在治疗期间食用或被施用生酮饮食。 [0276] 13.一种治疗与PI3K信号传导相关的疾病或病症的方法，其包括施用有效量的胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的至少一种途径抑制剂，其中受试者在治疗期间食用或被施用生酮饮食。 [0277] 14.根据前述陈述中任一项所述的方法，其与单独施用途径抑制剂相比，破坏了全身葡萄糖稳态并提高了途径抑制剂治疗的功效。 [0278] 15.一种葡萄糖代谢调节剂和/或胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径抑制剂用于治疗受试者的与PI3K信号传导相关的疾病或病症的用途。 [0279] 16.根据陈述15所述的用途，其与所述受试者使用生酮饮食相结合。 [0280] 17.一种药物组合物，其包含葡萄糖代谢调节剂和抑制胰岛素受体/PI3K/AKT/mTOR途径中至少一种激酶的途径抑制剂。 [0281] 18.根据陈述17所述的药物组合物，其中所述葡萄糖代谢调节剂是葡萄糖摄取抑制剂、钠‑葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)抑制剂、钠‑葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂或SGLT1/SGLT2双重抑制剂。 [0282] 19.根据陈述17或18所述的药物组合物，其中所述葡萄糖摄取抑制剂选自由达格列净、恩格列净、卡格列净、伊格列净、托格列净、依碳酸舍格列净、依碳酸瑞格列净、埃格列净、索格列净和卡纳格列净组成的组。 [0283] 20.根据陈述17、18或19所述的药物组合物，其中所述葡萄糖代谢调节剂是二甲双胍。 [0284] 21.根据陈述17‑19或20所述的药物组合物，其中所述葡萄糖代谢调节剂是胰岛素受体/IGF1受体抑制剂，其中任选地，所述胰岛素受体/IGF1受体抑制剂是林斯替尼(OSI‑906)。 [0285] 22.根据陈述17‑20或21中任一项所述的药物组合物，其中所述途径抑制剂能够抑制选自由INSR/IGFR、PI3K、AKT和mTOR组成的组中的一种或多种激酶。 [0286] 23.根据陈述17‑21或22所述的药物组合物，其中所述途径抑制剂选自由艾德昔布、考帕昔布、布帕昔布(BKM120)、阿普昔布(BYL719)、塔瑟昔布(GDC‑0032)、匹克昔布(GDC‑0941)、阿哌昔布(GDC‑0980)、塞来昔布(TAK‑117)、达妥昔布、艾坡昔布、MK2206和林斯替尼(OSI‑906)组成的组。 [0287] 24.一种抑制细胞增殖或细胞增殖疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的葡萄糖摄取抑制剂；以及向所述受试者施用有效量的PI3K抑制剂。 [0288] 25.根据陈述24所述的方法，其中所述葡萄糖摄取抑制剂选自由达格列净、恩格列净、卡格列净、伊格列净、托格列净、依碳酸舍格列净、依碳酸瑞格列净、埃格列净、索格列净和卡纳格列净组成的组。 [0289] 26.根据陈述24或25所述的方法，其中所述PI3K抑制剂选自由艾德昔布、考帕昔布、布帕昔布(BKM120)、阿普昔布(BYL719)、塔瑟昔布(GDC‑0032)、匹克昔布(GDC‑0941)、阿哌昔布(GDC‑0980)、塞来昔布(TAK‑117)、达妥昔布、MK2206、林斯替尼(OSI‑906)和艾坡昔布组成的组。 [0290] 27.根据陈述24‑25或26中任一项所述的方法，其中与在没有葡萄糖摄取抑制剂的情况下施用所述PI3K抑制剂相比，对细胞增殖或细胞增殖疾病的抑制作用增强。 [0291] 本文描述的具体组合物和方法是代表性的、示例性的，并且不意图作为对本发明范围的限制。本领域技术人员在考虑本说明书后将想到其它目的、方面和实施例，并且这些目的、方面和实施例包括在由权利要求书的范围所限定的本发明的精神内。对于本领域技术人员将显而易见的是，在不脱离本发明的范围和精神的情况下，可以对本文所公开的本发明进行各种替换和修改。已经使用的术语和表达被用作描述性术语而非限制性术语，并且在使用这些术语和表达时无意排除所示出和描述的特征或其部分的任何等同物，但是应当认识到，在所要求保护的本发明的范围内可以进行各种修改。因此，应当理解，尽管已经通过实施例和可选特征具体公开了本发明，但是本领域技术人员可以对本文公开的概念进行修改和变化，并且这些修改和变化被认为在由所附权利要求书和本发明的陈述所限定的本发明的范围内。 [0292] 本文说明性描述的本发明可在不存在本文未具体公开为必要的任何一个或多个要素或一个或多个限制的情况下实践。本文说明性描述的方法和工艺可以不同的步骤顺序来实践，并且所述方法和工艺不必限于本文或权利要求书中指示的步骤顺序。 [0293] 如本文和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数个指代物，除非上下文另外明确指出。因此，例如，对“一种化合物”或“一种药物”或“一种抑制剂”的提及包括多个这样的化合物、或药物、或抑制剂，等等。在本文件中，术语“或”用于指代非排它性或，使得除非另有指示，否则“A或B”包括“A而非B”、“B而非A”以及“A和B”。 [0294] 在任何情况下，本专利均不得解释为限于本文具体公开的具体实例或实施例或方法。在任何情况下，本专利均不得解释为受任何审查员或专利商标局任何其它官员或雇员作出的任何陈述的限制，除非此类陈述具体且无任何限定或保留地在申请人的回应书中明确采用。 [0295] 本文中已经广泛和概括地描述了本发明。属于一般公开内容的每个较狭义的种类和亚类分组也构成本发明的一部分。这包括对本发明的一般性描述，其附带条件或否定限制从所述属中去除了任何主题，无论本文中是否具体叙述了删除的材料。另外，在根据马库什组(Markush group)描述本发明的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，本发明也因此根据马库什组的任何单个成员或成员的子组进行描述。 |
||||||
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈