使用免疫活性剂的病毒感染早期干预 |
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| 申请号 | CN200880020541.3 | 申请日 | 2008-06-18 | 公开(公告)号 | CN101790534A | 公开(公告)日 | 2010-07-28 |
| 申请人 | 半球生物制药公司; | 发明人 | W·A·卡特; D·斯特拉耶; | ||||
| 摘要 | 通过向暴露于病毒的受试者 给药 保护性的或症状减轻量的dsRNA和持续给药直至受试者的症状改善，减轻 病毒感染 的症状。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种减轻病毒感染的症状的方法，包括向暴露于病毒的受试者给药保护性的或减轻症状剂量的dsRNA和持续给药直到受试者的症状改善。 |
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| 说明书全文 | 使用免疫活性剂的病毒感染早期干预[0001] 相关申请的交叉引用 [0002] 本申请要求2007年6月18日提交的美国临时申请60/929,203的优先权。 [0003] 发明的技术领域 [0004] 本发明涉及在受试的特殊人群中观察到病毒感染的初期的体征之前(即预防地)或同时，和在患者中的病毒载量增加之前进行的、使用免疫活性剂的用途，通过由一系列无毒的免疫作用保护血脑屏障，以获得不成比例地在增加和/或保持存活上的强作用。有效结果为防止其他致死性病毒的多数毒株。 [0005] 发明背景 [0006] 过去，病毒感染的治疗中没有使用过鼻内给药的治疗试剂。进行了一项备有充分证明文件的研究，其中使用灭活的鼻内流感疫苗。当时，很多研究者认为，对于感染试剂诱导粘膜免疫和系统免疫来说，鼻的途径是最有效的途径。并且当鼻内给药所述灭活流感疫苗时，通过疫苗引起针对流感病毒的临床上有效的抗体反应，但是大量的接受者发生贝尔麻痹。然后，在瑞士经授权使用的该产品迅速退出市场。参见Mutsch等人(N.Engl.J.Med.350(9)：896-903，2004)和860-861页的编者的注释和观点。因为这些事件及其他考虑(包括鼻出血和严重的局部刺激)，用于抗病毒物质的鼻内给药途径基本上已经被避免。 [0007] 与Mutsch的经验相反，我们发现另一类治疗试剂dsRNA(例如 )可以在预防基础上或规定的受试者中症状学的体征开始时，安全地，优选鼻内或其他途径给药于患者，而不用担心毒性，并且是抗病毒感染的有效治疗，特别是当治疗在病毒感染的早期进行时。病毒感染的早期体征可以包括低烧和易疲劳性。 [0008] 发明概述 [0009] 本发明的目的是向需要治疗的(即暴露于病毒的或处于上述暴露危险中的)受试者(例如人或其他动物)提供一种或多种免疫活性剂(例如，dsRNA和/或干扰素)。 [0010] 可以在临近在暴露于病毒之前，观察到病毒感染的初期体征时，或在附近的任何时间，将所述免疫活性剂给药给需要治疗的受试者(例如从暴露之前48小时至暴露之后48小时的时间范围内，优选暴露24小时内，暴露后24小时以前或暴露后12小时以前单剂量或多剂量给药)。可选地，可以在受试者中的病毒载量增加到引起严重的病毒感染的症状(即，严重的症状学)之前，进行一种或多种免疫活性剂给药。该免疫活性剂优选为鼻内施用于受试者时耐受良好的。其可以同时或连续地局部联合给药(例如，鼻内或另外的口粘膜途径)。 [0011] 与未治疗的受试者相比，受试者血液中，作为病毒感染目标的组织中，或任何其他便于分析的样品(例如，对于影响呼吸系统的病毒，洗鼻液)中的病毒滴定度可以减少至少90％。 [0012] 本发明一方面，通过对暴露的受试者给药一定量的一种或多种对防止病毒感染或减轻与此相关症状有效的dsRNAs，减轻了病毒感染的症状。dsRNAs给药可以持续至少24小时至72小时，或直至受试者的症状改善。 [0013] 可以给药dsRNAs以增强受试者血脑屏障的完整性，从而阻碍经由受试者身体的鼻通道和口腔隔室(compartment)进入身体的病毒的进一步内移。dsRNA可以经由受试者的气管内的TLR3受体特异性地作用以有效地使其他致死性病毒的多数遗传变体丧失能力。dsRNAs可以防止疫苗组分移入受试者的嗅球及其他脑神经。 [0014] 另一方面，提供了包含所述免疫活性剂的药物(例如药物组合物)。任选的，药物的其他组分包括无菌包装在一个或多个单独的容器(例如鼻用喷雾器或注射液瓶)中的赋形剂和载体(例如，缓冲水溶液或注射用水)。还提供使用和制备所述药物的方法。进一步的方面将由以下描述和权利要求，及另外的任何的概括表明。 [0015] 发明的特定的实施方案的描述 [0016] 虽然免疫活性剂通常用于病毒感染的治疗或预防，但它们不能通过血脑屏障(BBB)。然而dsRNAs，特别是 可以方便而无困难地提供给脑。假定各种致病病毒对显著的死亡率所负的部分责任是因为它们能通过BBB进入脑部。因此，认为用于增强BBB对病毒渗透的抵抗和减少BBB的渗透性和所涉及的组织的相关可能的炎症的方法将会增强后续抗病毒治疗的成功的结果。 [0017] 在一项研究中，在两种病毒性脑炎的小鼠模型中评估了血脑障壁渗透性的改变。在用Banzi或Semliki Forest viruses毒株接种的动物中测定荧光素钠(NaFl)穿透BBB从血清进入中枢神经系统的能力。为了检验血脑屏障渗透性增加与不好的疾病结果有关这一假设，随后的实验在用干扰素诱导剂 (polyI：poly C12U)治疗的同时测量血脑屏障渗透性。用Banzi病毒病毒接种前24小时或4-6小时前，而非24小时后，单一腹膜内注射 (1mg/kg)给药，在存活率，病毒脑滴度，体重变化和BBB渗透 性上有显著的改善。相比之下，在用Semliki Forest virus接种前24小时或4-6小时用给药的相似的治疗能够显著地改善体重变化和BBB渗透性，但是只有在病 毒接种前4-6小时接受 的动物表现出显著改善的死亡率。通常，据发现BBB 渗透性的评价，相比体重变化或脑病毒滴度，是疾病结果和 抗病毒功效的更灵敏的指标。 [0018] 对于我们早期的药物干预有一项理论。病毒致病机理的研究已经清楚地指明致病机理的第一步是病毒进入宿主受试者中。进入人的主要途径之一是经由呼吸道。呼吸道填充有上皮细胞和树突状细胞。上皮细胞具有(posses)多种分子表面结构，其可以用作细胞受体，其与病毒粘附蛋白相互作用。作为″哨兵细胞″的树突状细胞具有(posses)识别病原相关分子模式(PAMPs)的分子表面结构。这些PAMPs包括一系列特异性识别双链RNA的Toll样受体(TLRs)。已知该TLR为Toll样受体3(TLR3)。 [0019] 如已知的，流感病毒可以引起上呼吸道和下呼吸道疾病。该病毒的自然感染通常2 5 由相对少的病毒颗粒的接种物引起(例如10-10PFU)。当经由口腔或鼻部通道进入呼吸道中时，流感病毒的病毒颗粒将分散到易感的上皮细胞和树突状细胞之间。这一系列随机事件导致相对少的细胞的初期感染成功。在该病毒致病的非常早期阶段， 或 经口粘膜途径给药，通过直接或间接抑制(inhabitation)受感染细胞中 的病毒增殖，将显著影响感染结果。通过 和/或 的作用 (其是经由几种不同的机理的抗病毒状态的强诱导剂)，未感染的上皮细胞和树突状细胞能够被诱导产生α/β-IFN。 [0020] 在该策略中要认识的关键点在于，临床疾病的发展作为自然发生的感染的结果，其需要在宿主体内初期病毒接种物的扩增。明显地， 和/或的早期给药有效地减少了后轮(later round)感染中将被感染的易感细胞 的数目。 [0021] 因为已知A/H5N1禽流感病毒感染胃粘膜中的细胞，用能够局部地在呼吸道中作用的和全身性地作用的有效药物进行干预是非常重要的。病毒的扩增能够在许多器官和组织中发生。通常原发性或继发性病毒血症在病毒增殖的轮次(round)之间发生。预期早期的和持续的治疗干预可以减少疾病的严重程度和持续时间。 [0022] 已经发现低水平的病毒引起病毒感染并且当病毒在其他组织中复制时，形成病毒载量。在这期间逐渐产生病毒感染的症状。接受治疗的受试者中的病毒水平极其重要，因为高病毒载量可以克服治疗试剂的抗病毒效果。在某些情况下，遇到低水平的病毒，并且当症状出现时，用抗病毒药物进行治疗。根据本发明，可能对较高的病毒载量变得无效的药物将对较低的病毒载量显示出功效并且因此成为有效的。 [0023] 错配的dsRNA可能是通式rIn·r(C11-14U)n，其优选为rln·r(C12U)n，其中n为从40至40,000的整数。在这个和后面的其它通式中r＝ribo。本发明中使用的其他错配dsRNA为基于选自聚(Cm，U)和聚(Cm，G)的共-多核苷酸(co-polynucleotides)，其中m为从4至29的整数，还为多核糖肌苷酸和多核糖胞啶酸的复合物的错配类似物，其通过将rln·rCn修饰为沿polyribocytidylate(rCm)链插入不配对碱基(尿嘧啶或鸟嘌砱)而形成。可选地，dsRNA可以通过修饰多核糖肌苷酸(rln)的核糖基骨架(例如通过包括2′-O-甲基核糖基)由r(I)·r(C)dsRNA衍生而来。错配物可以与RNA稳定化聚合物例如赖氨酸纤维素复合。rln·rCn的这些错配类似物中，优选为具有通式rln·r(C11-14，U)n或rln·r(C29，G)n的，并且已由Ts′o&Carter在美国专利4,024,222和4,130,641中描述；所公开的该内容通过引用并入本文。根据本发明，其中描述的dsRNA通常适用。 [0024] 本发明使用的错配dsRNA的其他的例子包括： [0025] r(I)·r(C4，U)， [0026] r(I)·r(C7，U)， [0027] r(I)·r(C13，U)， [0028] r(I)·r(C22，U)， [0029] r(I)·r(C20，G)和 [0030] r(I)·r(Cp23，G＞p)。 [0031] 对于一个受试者(例如150英磅的人)，在感染前或病毒感染的症状开始出现时，dsRNA的剂量可以为从0.1至25,000μg，优选从0.5至5,000μg。一旦受试者中发生病毒感染的症状，dsRNA的剂量可以为从0.1至25,000μg，优选从0.5至5,000μg。优选鼻内给药。 [0032] 可选的，dsRNA可以是配对的(即非错配形式)。因此，也可以使用与多聚尿苷酸复合的多聚腺苷酸(polyA·polyU)。配对的dsRNA可以静脉内，肌内，鼻内或局部给药。 [0033] 用于给药的制剂包括水溶液，糖浆，酏剂，散剂，颗粒，片剂和胶囊，其通常包含常规的赋形剂例如粘合剂，填充剂，润滑剂，崩解剂，润湿剂，助悬剂，乳化剂，防腐剂，缓冲盐，调味剂，着色剂和/或甜味剂。它们可以用喷雾或喷雾器经鼻给药。应当了解优选的途径将随受试者的健康状况和年龄，感染的种类和所选择的活性成分而改变。 [0034] 任选的本发明的α-干扰素组分优选为 注射剂，在美国可获得的唯一被批准的天然多种α-干扰素。其为第一种天然来源的多种干扰素并且其为至少七种α-干扰素的相容混合物。干扰素优选是至少七种人α-干扰素的天然混合剂。相反，其他可用的α-干扰素为单一分子种类的α-干扰素，其在细菌中使用DNA重组技术产生。这些单一分子种类的α-干扰素还缺乏重要的结构碳水化合物组分，因为在细菌加工期间不进行这种糖基化步骤。 [0035] 不同于重组技术生产的α-干扰素种类， 注射剂是由能够糖基化多个α-干扰素种类的人白细胞生产的。反向HPLC研究显示 注射剂是至 少七种α-干扰素(α2，α4，α7，α8，α10，α16和α17)的相容性混合物。该天然来源的干扰素具有区别于遗传工程的干扰素的独特的抗病毒性质。 注射剂的高 纯度和其作为七种干扰素(其中一些，如8b类，比其他种类，例如2b类，其是的唯一组分，具有更高的抗病毒活性)的天然混合物的优点。已经报道，与其他可获得的重组干扰素例如 和 相比， 注射剂在例如慢性C 型肝炎病毒(HCV)和HIV感染的治疗中具有较高的抗病毒活性和耐受性。 注射剂可作为包含5,000,000国际单位(IU)/ml的可注射溶液得到。 [0036] 为了内用，α-干扰素可以例如用于经口，经鼻或含服给药的常规方式配制。用于经口给药的制剂包括水溶液，糖浆，酏剂，散剂，颗粒，片剂和胶囊，其通常包含常规的赋形剂例如粘合剂，填充剂，润滑剂，崩解剂，润湿剂，助悬剂，乳化剂，防腐剂，缓冲盐，调味剂，着色剂和/或甜味剂。α-干扰素可以优选通过合适的途径包括经口，鼻，肠道外(包括注射)或局部(包括经皮，含服和舌下)给药。应当了解优选的途径将随接受者的健康状况和年龄，感染的种类和所选的活性成分而改变。 [0037] 组分的推荐剂量将取决于患者的临床状况和临床医师治疗类似感染的经验。作为一般的准则，用于全身感染的 注射剂的剂量为5百万至1千万单位(例如，皮下注射)，每周三次。迄今为止的经验为使用剂量为3IU/英磅患者体重以上。口服的α-干扰素( )已经以溶液形式以500-10,000IU/天给药并且以150磅 的人为基础计算，其为每天3.3至66.0IU/英磅。 [0038] 我们的经验表明以超过450IU的α-干扰素剂量水平获得了有益的结果，该剂量大于3IU/磅体重。这些量不同于并且大于Cummin在美国专利5,910,304中经口或以锭剂或片剂给药给咽粘膜的α-干扰素的使用。 [0039] 据报道受试者的oromucosa暴露于低剂量的α-干扰素导致人和动物中的生物学效应。然而，健康护理提供者将能够确定低剂量口服α-干扰素的合适剂量和时间表，以获得全身性抗病毒效果。天然来源的α-干扰素( 注射剂)已经被批准用于尖锐湿疣的治疗。以显著低于使用重组α-干扰素的剂量其也有活性。 [0040] 实施例1 [0041] 在雄性和雌性CD-1小鼠中反复鼻内滴注4周后评估 的潜在毒性。结果表明其未赋予(give)之前报道的其他TLR活性剂具有的毒性。 [0042] 以一周0.4，2和10μg/注射剂的剂量水平，连续4周，治疗三组小鼠。对照组用0.9％氯化钠滴注。在研究的存活期间(during the in-life phase of thestudy)，观察小鼠的发病率和死亡率，临床体征和体重的变化。死后，评估临床病理参数，器官重量，肉眼尸 |
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