本发明涉及2-苯基噻吩基嘧啶酮衍生物，所述衍生物是有丝分 裂驱动蛋白抑制剂、尤其是有丝分裂驱动蛋白KSP的抑制剂并且可 用于治疗例如以下细胞增殖性疾病：癌症、增生、再狭窄、心脏肥 大、免疫性疾病和炎症。

已知喹唑啉酮及其衍生物具有各种生物学特性，包括催眠、镇 静、镇痛、抗惊厥、镇咳和抗炎活性。

以下文献已经描述了用于特定生物学用途的喹唑啉酮衍生物， 包括美国专利号5,147,875介绍了具有支气管扩张活性的2-(取代苯 基)-4-氧代喹唑啉；美国专利号3,723,432、3,740,442和3,925,548介 绍了一类用作抗炎药的1-取代-4-芳基-2(1H)-喹唑啉酮衍生物；欧洲 专利公布号EP 0 056 637 B1要求保护一类用于治疗高血压的4(3H)- 喹唑啉酮衍生物；以及欧洲专利公布号EP 0 884 319 A1介绍了的喹 唑啉-4-酮衍生物的药物组合物，用于治疗神经变性性疾病、精神活 性药物、药物及酒精诱发的中枢神经系统疾病和周围神经系统疾病。

喹唑啉酮是数量不断增加的一类用于治疗细胞增殖性疾病(包括 癌症)的治疗剂。例如，PCT WO 96/06616介绍了含有喹唑啉酮衍生 物的药物组合物用于抑制血管平滑肌细胞增殖。PCT WO 96/19224 采用同样的喹唑啉酮衍生物来抑制mesengial细胞增殖。美国专利号 4,981,856、5,081,124和5,280,027介绍了使用喹唑啉酮衍生物来抑制 胸苷酸合成酶，该酶催化脱氧尿苷一磷酸甲基化，产生DNA合成所 需的胸苷一磷酸。美国专利号5,747,498和5,773,476介绍了喹唑啉 酮衍生物，用于治疗以酪氨酸受体激酶活性过度或不适当活性为特 征的癌症。美国专利号5,037,829要求保护(1H-吡咯-1-基甲基)取代喹 唑啉组合物，用于治疗上皮细胞中发生的癌症。PCT WO 98/34613 介绍了含有喹唑啉酮衍生物的组合物，用于减缓新血管形成并用于 治疗恶性肿瘤。美国专利5,187,167介绍了包含具有抗肿瘤活性的喹 唑啉-4-酮衍生物的药物组合物。

用于治疗癌症的其它治疗剂包括紫杉烷类和长春花属生物碱。 紫杉烷类和长春花属生物碱作用于各种细胞结构中存在的微管。微 管是有丝分裂纺锤体的基本结构元件。有丝分裂纺锤体负责将基因 组的复制拷贝分配给由细胞分裂形成的两个子细胞中。推测当有丝 分裂纺锤体被这些药物破坏后，导致对癌细胞分裂的抑制并诱导癌 细胞死亡。然而，微管也构成其它类型的细胞结构，包括在神经过 程中用于胞内运输的通道。因为这些药物并不是特异性靶向有丝分 裂纺锤体，所以它们具有的副作用限制其用途。

值得考虑改善用于治疗癌症的药物特异性，因为如果可以降低 给予所述药物相关的副作用，则会认识到治疗的益处。传统上来说， 癌症治疗中的明显改善涉及鉴定通过新机制起作用的治疗药。其实 例不仅包括紫杉烷类，而且包括拓扑异构酶I抑制剂的喜树碱类。从 这两方面看，有丝分裂驱动蛋白是颇具吸引力的新型抗癌药的目标。

有丝分裂驱动蛋白是有丝分裂纺锤体装配和功能必不可少的 酶，但是通常并非其它微管结构(例如神经过程中的微管结构)的组成 部分。有丝分裂驱动蛋白在所有各期有丝分裂期间都起到必不可少 的作用。这些酶是“分子发动机”，它们可将ATP水解释放的能量 转化成机械能，驱动细胞物质沿着微管进行定向运动。执行该任务 的催化结构域是约340个氨基酸的致密结构。在有丝分裂期间，驱 动蛋白将微管组织成为两极结构，即有丝分裂纺锤体。驱动蛋白介 导染色体沿着纺锤体微管运动，并且在与有丝分裂具体各期相关有 丝分裂纺锤体中介导结构变化。实验性干扰有丝分裂驱动蛋白功能， 会引起有丝分裂纺锤体畸形或功能异常，通常会导致细胞周期停滞 和细胞死亡。

在有丝分裂驱动蛋白中，已经鉴定出KSP。KSP属于加有末端 定向的微管发动蛋白的进化上保守的驱动蛋白亚家族，所述发动蛋 白装配到两极由反相平行的同型二聚体组成的同型四聚体中。在有 丝分裂期间，KSP与有丝分裂纺锤体微管连接。将抗KSP的抗体微 量注射到人体细胞内，可在前中期阻止纺锤体两极分离，产生单极 纺锤体并引起有丝分裂停滞，诱导程序性细胞死亡。在其它非人类 生物体中的KSP和相关驱动蛋白束缚反相平行微管并将其彼此相对 放入，因而迫使纺锤体两极分开。KSP也会介导后期B纺锤体伸长 和微管在纺锤体两极聚集。

已经介绍了人KSP(也称为HsEg5)[Blangy等，Cell，83：1159-69 (1995)；Whitehead等，Arthritis Rheum.，39：1635-42(1996)；Galgio等，J. Cell Biol.，135：339-414(1996)；Blangy等，J Biol.Chem.，272：19418-24 (1997)；Blangy等，Cell Motil Cytoskeleton，40：174-82(1998)； Whitehead和Rattner，J.Cell Sci.，111：2551-61(1998)；Kaiser等，JBC 274：18925-31(1999)；GenBank检索号：X85137、NM004523和 U37426]，而且已经介绍了KSP基因片段(TRIP5)[Lee等，Mol Endocrinol.，9：243-54(1995)；GenBank检索号L40372]。已经报道了 爪蟾属(Xenopus)KSP同源物(Eg5)，以及果蝇属(Drosophila)K-LP61 F/KRP 130。

已经介绍了某些喹唑啉酮作为KSP抑制剂(PCT公布号WO 01/30768，2001年5月3日)。目前也已经公开了某些噻吩基嘧啶酮作 为KSP抑制剂(PCT公布号WO 03/050064)。

有丝分裂驱动蛋白对于发现和开发新型有丝分裂化疗药来说是 颇具吸引力的目标。因此，本发明的一个目的是提供用于抑制KSP(一 种有丝分裂驱动蛋白)的化合物、方法和组合物。

发明概述

本发明涉及2-苯基噻吩基嘧啶酮化合物及其衍生物，其可用于 治疗细胞增殖性疾病，用于治疗KSP驱动蛋白活性相关性疾病，并 且用于抑制KSP驱动蛋白。本发明的化合物由下式I表示：

发明详述

本发明的化合物可用于抑制有丝分裂驱动蛋白，由下式I的化 合物或其药物可接受的盐或立体异构体表示：

其中

a为0或1；

b为0或1；

m为0、1或2；

p为1-3；

r为0或1；

s为0或1；

R1选自：

1)H，

2)C1-C10烷基，

3)芳基，

4)C2-C10烯基，

5)C2-C10炔基，

6)C1-C6全氟烷基，

7)C1-C6芳烷基，

8)C3-C8环烷基，和

9)杂环基，

所述烷基、芳基、烯基、炔基、环烷基、芳烷基和杂环基任选 被一个或多个选自R4的取代基取代；

R2独立选自：

1)(C＝O)aObC1-C10烷基，

2)(C＝O)aOb芳基，

3)(C＝O)aObC2-C10烯基，

4)(C＝O)aObC2-C10炔基，

5)CO2H，

6)卤素，

7)OH，

8)ObC1-C6全氟烷基，

9)(C＝O)aNR6R7，

10)CN，

11)(C＝O)aObC3-C8环烷基，

12)(C＝O)aOb杂环基，

13)SO2NR6R7，和

14)SO2C1-C10烷基，

所述烷基、芳基、烯基、炔基、环烷基和杂环基任选被一个或 多个选自R4的取代基取代；

R3a和R3b独立选自氢、卤素和(C1-C6)烷基；

R4独立选自：

1)(C＝O)aObC1-C10烷基，

2)(C＝O)aOb芳基，

3)C2-C10烯基，

4)C2-C10炔基，

5)(C＝O)aOb杂环基，

6)CO2H，

7)卤素，

8)CN，

9)OH，

10)ObC1-C6全氟烷基，

11)Oa(C＝O)bNR6R7，

12)氧代基，

13)CHO，

14)(N＝O)R6R7，

15)(C＝O)aObC3-C8环烷基，

16)SO2C1-C10烷基，或

17)SO2NR6R7，

所述烷基、芳基、烯基、炔基、杂环基和环烷基任选被一个或 多个选自R5的取代基取代；

R5选自：

1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，

2)Or(C1-C3)全氟烷基，

3)(C0-C6)亚烷基-S(O)mRa，

4)氧代基，

5)OH，

6)卤素，

7)CN，

8)(C＝O)rOs(C2-C10)烯基，

9)(C＝O)rOs(C2-C10)炔基，

10)(C＝O)rOs(C3-C6)环烷基，

11)(C＝O)rOs(C0-C6)亚烷基-芳基，

12)(C＝O)rOs(C0-C6)亚烷基-杂环基，

13)(C＝O)rOs(C0-C6)亚烷基-N(Rb)2，

14)C(O)Ra，

15)(C0-C6)亚烷基-CO2Ra，

16)C(O)H，

17)(C0-C6)亚烷基-CO2H，和

18)C(O)N(Rb)2，

所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基和杂环基任选被最多三 个选自以下的取代基取代：Rb、OH、(C1-C6)烷氧基、卤素、CO2H、 CN、O(C＝O)C1-C6烷基、氧代基和N(Rb)2；

R6和R7独立选自：

1)H，

2)(C＝O)ObC1-C10烷基，

3)(C＝O)ObC3-C8环烷基，

4)(C＝O)Ob芳基，

5)(C＝O)Ob杂环基，

6)C1-C10烷基，

7)芳基，

8)C2-C10烯基，

9)C2-C10炔基，

10)杂环基，

11)C3-C8环烷基，

12)SO2Ra，和

13)(C＝O)NRb 2，

所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选被一个或 多个选自R6的取代基取代，或者

R6和R7可以与它们所连接的氮一起形成每个环都为4-7元的单 环杂环或双环杂环，并且除了所述氮之外还任选含有一个或两个选 自N、O和S的额外杂原子，所述单环杂环或双环杂环任选被一个 或多个选自R5的取代基取代；

Ra为(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、芳基或杂环基；和

Rb为H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-NRa 2、(C1-C6)烷基-NH2、(C1-C6) 烷基-NHRa、芳基、杂环基、(C3-C6)环烷基、(C＝O)OC1-C6烷基、 (C＝O)C1-C6烷基或S(O)2Ra。

本发明的第二个实施方案是下式II的化合物或其药物可接受的 盐或立体异构体：

其中a、b、m、r、s、R1、R2、R4、R5、R6、R7、Ra和Rb如上 式I化合物所定义；和

p′为0-2；

R2a选自卤素和(C1-C6)烷基；和

R3a和R3b独立选自氢、卤素和(C1-C6)烷基。

本发明的第三个实施方案是下式III的化合物或其药物可接受的 盐或立体异构体：

其中：

m为0、1或2；

p′为0-2；

r为0或1；

s为0或1；

R2为(C1-C6)亚烷基-NR6R7；所述亚烷基任选被最多三个选自以 下的取代基取代：OH、(C1-C6)烷氧基、卤素、CO2H、CN、O(C＝O)C1-C6 烷基、氧代基和NR6R7；

R2a选自卤素和(C1-C6)烷基；

R3a和R3b独立选自氢、卤素和(C1-C6)烷基；

R4a和R4b独立选自氢、卤素和(C1-C6)烷基，前提条件是至少一 个不为氢；或者

R4a和R4b一起形成选自以下的二价基团：-CH2CH2CH2CH2-、 -CH2CH2CH2-、-CH＝CH-O-和-CH＝CH-N-；

R5选自：

1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，

2)Or(C1-C3)全氟烷基，

3)(C0-C6)亚烷基-S(O)mRa，

4)氧代基，

5)OH，

6)卤素，

7)CN，

8)(C＝O)rOs(C2-C10)烯基，

9)(C＝O)rOs(C2-C10)炔基，

10)(C＝O)rOs(C3-C6)环烷基，

11)(C＝O)rOs(C0-C6)亚烷基-芳基，

12)(C＝O)rOs(C0-C6)亚烷基-杂环基，

13)(C＝O)rOs(C0-C6)亚烷基-N(Rb)2，

14)C(O)Ra，

15)(C0-C6)亚烷基-CO2Ra，

16)C(O)H，

17)(C0-C6)亚烷基-CO2H，和

18)C(O)N(Rb)2，

所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基和杂环基任选被最多三 个选自以下的取代基取代：Rb、OH、(C1-C6)烷氧基、卤素、CO2H、 CN、O(C＝O)C1-C6烷基、氧代基和N(Rb)2；

R6和R7独立选自：

1)H，

2)(C＝O)ObC1-C10烷基，

3)(C＝O)ObC3-C8环烷基，

4)(C＝O)Ob芳基，

5)(C＝O)Ob杂环基，

6)C1-C10烷基，

7)芳基，

8)C2-C10烯基，

9)C2-C10炔基，

10)杂环基，

11)C3-C8环烷基，

12)SO2Ra，和

13)(C＝O)NRb 2，

所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选被一个或 多个选自R5的取代基取代，或者

R6和R7可以与它们所连接的氮一起形成每个环都为4-7元的单 环杂环或双环杂环，并且除了所述氮之外还任选含有一个或两个选 自N、O和S的额外杂原子，所述单环杂环或双环杂环任选被一个 或多个选自R5的取代基取代；

Ra为(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、芳基或杂环基；和

Rb为H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-NRa 2、(C1-C6)烷基-NH2、(C1-C6) 烷基-NHRa、芳基、杂环基、(C3-C6)环烷基、(C＝O)OC1-C6烷基、 (C＝O)C1-C6烷基或S(O)2Ra。

本发明的第四个实施方案是如上所示的式III化合物或其药物可 接受的盐或立体异构体，其中p′、R2a、R3a、R3b、R4a、R4b和R5如式 III所定义，和

R2为(C1-C6)烷基-NR6R7；

R6和R7独立选自：

1)H，

2)C1-C10烷基，

3)芳基，

4)杂环基，

5)C2-C10烯基，

6)C2-C10炔基，和

7)C3-C8环烷基，

所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选被一个或 多个选自R5的取代基取代，或者

R6和R7可以与它们所连接的氮一起形成每个环都为4-7元的单 环杂环或双环杂环，并且除了所述氮之外还任选含有一个或两个选 自N、O和S的额外杂原子，所述单环杂环或双环杂环任选被一个 或多个选自R5的取代基取代。

本发明化合物的一个具体实例是：

2-(2-溴苯基)-3-(4-甲基苯基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4(3H)-酮。

本发明的化合物可具有不对称中心、手性轴和手性面(描述于E.L. Eliel和S.H.Wilen，Stereochemistry of Carbon Compounds，John Wiley &Sons，New York，1994，第1119-1190页)，并且可以外消旋体、外 消旋混合物和各非对映体形式存在，所有可能的异构体及其混合物、 旋光异构体全都包括在本发明之内。另外，本文所公开的化合物可 作为互变异构体存在，即使只描述了一种互变异构体结构，但是两 种互变异构体形式也都包括在本发明范围之内。例如，对以下化合 物A及其混合物的任何权利要求都应理解为包括互变异构体结构B， 反之亦然。

当任何部分中任何可变基团(例如R3、R4、R5等)不止出现一次 时，其每次出现的定义都是独立的。并且，取代基和可变基团的组 合也是允许的，只要所述组合产生稳定的化合物。从取代基向环系 划的线表明所指的键可连接在任一可取代环原子上。如果环系是多 环系的话，该键仅可连接在近侧环的任一合适碳原子上。可以理解， 本领域普通技术人员可以选择本发明化合物上的取代基和取代模 式，以提供化学上稳定的化合物，所述化合物易于通过本领域已知 技术以及下述方法、由易得原料合成。如果取代基本身被不止一个 基团取代，可以理解，这些基团可以在同一碳或不同碳上，只要能 形成稳定结构。短语“任选被一个或多个取代基取代”与短语“任 选被至少一个取代基取代”同义，并且在此情况下，优选的实施方 案将具有0-3个取代基。

本文所用的术语“烷基”和“亚烷基”包括具有指定碳原子数 的支链和直链饱和脂族烃基。例如，“C1-C10烷基”中C1-C10的定义 包括具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳并以直链或支链排 列的基团。例如，“C1-C10烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异 丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、 癸基等。术语“环烷基”是指具有指定碳原子数的单环饱和脂族烃 基。例如，“环烷基”包括环丙基、甲基-环丙基、2，2-二甲基-环丁 基、2-乙基-环戊基、环己基等。

“烷氧基”代表通过氧桥连接的指定碳原子数的环状或非环状 烷基。因此，“烷氧基”包括上述烷基和环烷基的定义。

如果没有指定碳原子数，术语“烯基”是指含有2-10个碳原子 和至少一个碳碳双键的直链、支链或环状非芳族烃基。优选存在一 个碳碳双键，存在至多4个非芳族碳碳双键。因此，“C2-C6烯基” 是指具有2-6个碳原子的烯基。烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、 2-甲基丁烯基和环己烯基。烯基的直链、支链或环状部分可含有双键， 并且如果指定是取代烯基的话，可被取代。

术语“炔基”是指含有2-10个碳原子和至少一个碳碳三键的直 链、支链或环状烃基。最多可存在3个碳-碳三键。因此，“C2-C6炔 基”是指具有2-6个碳原子的炔基。炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔 基、3-甲基丁炔基等。炔基的直链、支链或环状部分可含有三键，并 且如果指定是取代炔基的话，可被取代。

在某些情况下，取代基可用包括零在内的碳范围来限定，例如 (C0-C6)亚烷基-芳基。如果芳基是苯基的话，该定义将包括苯基本身 以及-CH2Ph、-CH2CH2Ph、CH(CH3)CH2CH(CH3)Ph等。

本文所用的“芳基”是指每个环中至多有7个原子的任何稳定 的单环碳环或双环碳环，其中至少一个环为芳环。所述芳基的实例 包括苯基、萘基、四氢萘基、茚满基和联苯基。当芳基取代基为双 环且一个环为非芳环时，可以理解，连接是通过芳环进行的。

本文所用的术语杂芳基代表每个环中至多有7个原子的稳定单 环或双环，其中至少一个环是芳环，并且含有1-4个选自O、N和S的杂原子。在该定义范围内的杂芳基包括但不限于：吖啶基、咔唑 基、噌啉基、喹喔啉基、吡唑基(pyrrazolyl)、吲哚基、苯并三唑基、 呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、异喹啉基、 唑基、异唑基、吲哚基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、 吡咯基、四氢喹啉基。按照以下杂环的定义，“杂芳基”也可理解 为包括任何含氮杂芳基的N-氧化物衍生物。当杂芳基取代基是双环 且一个环是非芳环或者不含杂原子时，可以理解，连接分别可通过 芳环或者含有杂原子的环进行。

本文所用的术语“杂环”或“杂环基”是指含有1-4个选自O、 N和S的杂原子的5-10元芳族或非芳族杂环，并且包括双环基。因 此，“杂环基”包括上述杂芳基及其二氢类似物和四氢类似物。“杂 环基”的更多实例包括但不限于以下基团：苯并咪唑基、苯并呋喃 基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并 唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、 吲哚基、吲嗪基(indolazinyl)、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、 异喹啉基、异噻唑基、异唑基、萘吡啶基(naphthpyridinyl)、二 唑基、唑基、唑啉基、异唑啉基、氧杂环丁烷基、吡喃基、 吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶 基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四唑基、 四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮杂环丁烷 基、1，4-二氧杂环己烷基、六氢吖庚因基、哌嗪基、哌啶基、吡啶-2- 酮基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯 并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并唑基、二氢呋喃基、二氢 咪唑基、二氢吲哚基、二氢异唑基、二氢异噻唑基、二氢二唑 基、二氢唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧 啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二 氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲基 二氧苯甲酰基、四氢呋喃基和四氢噻吩基及其N-氧化物。杂环基取 代基的连接可通过碳原子或通过杂原子进行。

优选的杂环选自2-氮杂酮(2-azepinone)、苯并咪唑基、2-二氮 杂酮(2-diazapinone)、咪唑基、2-咪唑烷酮、吲哚基、异喹啉基、 吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡咯烷基、2-哌啶酮、2-嘧啶酮、 2-吡咯烷酮、喹啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基和噻吩基。

正如本领域技术人员所知，本文所用的“卤素”包括氯、氟、 溴和碘。

烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基取代基可 以是取代或未取代的，除非另有说明。例如，(C1-C6)烷基可以被1、 2或3个选自以下的取代基取代：OH、氧代基、卤素、烷氧基、二 烷基氨基或杂环基(例如吗啉基、哌啶基)等。在此情况下，如果一个 取代基是氧代基，而另一个是OH，则以下基团包括在定义之内： -(C＝O)CH2CH(OH)CH3、-(C＝O)OH、-CH2(OH)CH2CH(O)等。

在某些情况下，在式II化合物中，R4a和R4b的定义使得它们可 以一起形成选自以下的二价基团：-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、 -CH＝CH-O-和-CH＝CH-N-。由此与连接R4a和R4b的苯环一起形成的 部分的实例包括但不限于：

在某些情况下，R6和R7的定义使得它们可以与它们所连接的氮 一起形成每个环都为4-7元的单环杂环或双环杂环，并且除了所述氮 之外还任选含有一个或两个选自N、O和S的额外杂原子，所述杂 环任选被一个或多个选自R5的取代基取代。由此形成的杂环的实例 包括但不限于以下基团，要注意的是所述杂环任选被一个或多个(优 选1、2或3个)选自R5的取代基取代：

在一个实施方案中，R1选自芳基和杂环基，任选被1-3个选自 R4的取代基取代。在另一个实施方案中，R1选自苯基和吲哚基，任 选被1-3个选自R4的取代基取代。在又一个实施方案中，R1为苯基， 任选被1-3个选自R4的取代基取代。

在一个实施方案中，R2选自卤素和(C1-C6)亚烷基-NR6R7。

在一个实施方案中，R2a选自溴和氯。

在另一个实施方案中，对于式II，R2a选自溴和氯，R2为(C1-C6) 亚烷基-NR6R7。

在一个实施方案中，R3a和R3b选自氢、(C1-C6)烷基和卤素。在 另一个实施方案中，R3a和R3b为氢。

在一个实施方案中，p为1或2。在另一个实施方案中，p′为1。

在一个实施方案中，R4定义为卤素、C1-C6烷基、OC1-C6亚烷基 NR6R7、(C＝O)aC0-C6亚烷基-T、(其中T为H、OH、CO2H或OC1-C6 烷基)、SO2NH2、C1-C6亚烷基NR6R7或OC0-C6亚烷基-杂环基，任选 被1-3个选自以下的取代基取代：R5、C0-C6亚烷基NR6R7、(C＝O)NR6R7 或OC1-C3亚烷基-(C＝O)NR6R7。在另一个实施方案中，R4为卤素、C1-C6 烷基或C1-C3亚烷基NR6R7。在另一个实施方案中，R4为卤素或C1-C6 烷基。

在式III化合物的一个实施方案中，R4a和R4b独立选自氢、卤素 和(C1-C6)烷基。前提条件是至少一个不为氢。

式I化合物的游离形式、及其药物可接受的盐和立体异构体都 包括在本发明之内。本文列举的一些具体化合物是胺化合物的质子 化盐。术语“游离形式”是指以非盐形式的胺化合物。所包括的药 物可接受的盐不仅包括本文所述具体化合物的示例性的盐，而且包 括式I化合物游离形式的所有典型的药物可接受的盐。具体的盐化合 物的游离形式可以用本领域已知技术分离。例如，可以通过用合适 的稀碱水溶液(例如稀NaOH、碳酸钾、氨水和碳酸氢钠水溶液)处理， 再生其游离形式。游离形式的物理性质可因其各自盐形式而稍有不 同，例如在极性溶液中的溶解度，但是对于本发明的目的来说，酸 式盐和碱式盐与其各自的游离形式是药学等效的。

可以通过常规化学方法，由含有碱性或酸性部分的本发明化合 物合成本发明化合物的药物可接受的盐。一般而言，碱性化合物的 盐可通过离子交换色谱而制备，或者通过在合适溶剂或不同溶剂组 合中、使化学计量的游离碱与过量的所需成盐无机酸或有机酸反应 而制备。同样，酸性化合物的盐可以通过与合适的无机碱或有机碱 反应而生成。

因此，本发明化合物的药物可接受的盐包括本发明化合物的常 规无毒盐，其是通过使本发明碱性化合物与无机酸或有机酸反应而 生成。例如，常规无毒盐包括由无机酸以及有机酸制备的盐，所述 无机酸例如例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等； 所述有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹 果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、马来酸、羟基马来 酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基 -苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙 磺酸、三氟乙酸等。

当本发明化合物为酸性时，合适的“药物可接受的盐”是指由 药物可接受的无毒碱(包括无机碱和有机碱)制备而成的盐。由无机碱 衍生的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁 盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选的是铵盐、钙 盐、镁盐、钾盐和钠盐。由药物可接受的有机无毒碱衍生的盐包括 伯胺盐、仲胺盐、叔胺盐、取代胺盐(包括天然取代胺盐)、环状胺盐 和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′- 二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、 乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、氨基葡萄糖 (glucosamine)、组氨酸、海巴胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲 基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可 碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。

上述药物可接受的盐和其它典型的药物可接受的盐的制备方法 在以下文献中有更详细的描述：Berg等，″Pharmaceutical Salts，″J. Pharm.Sci.，1977：66：1-19。

还要注意的是，本发明化合物是潜在的内盐即两性离子，因为 在生理条件下所述化合物中去质子化的酸性部分(例如羧基)可以是阴 离子，而且该电荷随后在内部可以被去质子化或烷基化碱性部分(例 如季氮原子)的阳离子电荷平衡掉。

除了文献已知的或实验方法中示例的其它标准操作之外，还可 以采用以下流程所示反应，制备本发明的化合物。因此，以下说明 性流程不受用于说明目的而列举的化合物或任何具体取代基的限 制。流程所示取代基数量并不一定与权利要求书的数量相关，通常， 为了说明，单个取代基显示与化合物的连接，而多个取代基在上文 式I的定义下也是允许的。

                        流程

如流程A所示，可以由合适取代的氨基噻吩甲酸开始，合成本 发明化合物A-4。可以使用各种合适取代的胺，制备脲噻吩A-2，然 后将其皂化，得到二酮A-3。三氟甲磺酸盐的制备和Suzuki置换反 应提供本发明化合物A-4。

流程B说明C-2苯环上的烷基部分怎样被离去基团活化，然后 可以被合适取代的胺置换，得到本发明化合物B-3。

                          流程A

                        流程B

                        实用性

本发明化合物具有多种多样的用途。正如本领域技术人员所知， 可以按各种方法改变有丝分裂；也就是说，人们可以通过增加或降 低有丝分裂途径中某种成分的活性，来影响有丝分裂。换句话说， 可以通过抑制或激活某些成分从而扰乱平衡，影响(例如破坏)有丝分 裂。类似方法也可用于改变减数分裂。

在一个实施方案中，本发明的化合物用于调节有丝分裂纺锤体 的形成，因此在有丝分裂中引起细胞周期停滞延长。本文所用的“调 节”是指改变有丝分裂纺锤体的形成，包括增加和减少纺锤体的形 成。本文所用的“有丝分裂纺锤体的形成”是指通过有丝分裂驱动 蛋白将微管组织成两极结构。本文所用的“有丝分裂纺锤体功能障 碍”是指有丝分裂停滞并形成单极纺锤体。

本发明的化合物可用于与有丝分裂驱动蛋白结合和/或调节有丝 分裂驱动蛋白的活性。在一个实施方案中，有丝分裂驱动蛋白是有 丝分裂驱动蛋白的bimC亚家族成员(描述于美国专利号6,284,480，第 5栏)。在另一个实施方案中，有丝分裂驱动蛋白是人KSP，虽然来 自其它生物体的有丝分裂驱动蛋白的活性也可被本发明化合物调 节。在本文中，调节是指增加或减少纺锤体的两极分离，引起畸形， 即有丝分裂纺锤体两极倾斜，或者引起有丝分裂纺锤体的形态破坏。 对于这些目的而言，KSP定义内也包括KSP的变异体和/或片段。另 外，其它有丝分裂驱动蛋白也可被本发明化合物抑制。

本发明的化合物可用于治疗细胞增殖性疾病。可以被本发明提 供的方法和组合物治疗的疾病包括但不限于癌症(下文有进一步论 述)、自身免疫性疾病、关节炎、移植物排斥、炎性肠病、医学手术(包 括但不限于外科手术、血管成形术)后诱导的增殖等。人们知道，在 某些情况下，细胞不一定处于过度增殖或增殖不足(hypoproliferation) 状态(异常状态)但仍然需要治疗。例如在伤口愈合期间，细胞可以“正 常”增殖，但是加强增殖是需要的。同样，如上所述，在农业上， 细胞可以处于“正常”状态，但是需要增殖调节，以增加庄稼生长， 或者通过抑制植物或生物体生长来负面影响庄稼。因此，在一个实 施方案中，本发明包括对于细胞或个体而言具有实用性，所述细胞 或个体患有任何所述疾病或处于疾病状态或者最终可以患有任何所 述疾病或处于疾病状态。

本文提供的化合物、组合物和方法尤其可用于治疗包括实体瘤 在内的癌症，例如皮肤癌、乳癌、脑癌、宫颈癌、睾丸癌等。具体 地讲，本发明的化合物、组合物和方法可治疗的癌症包括但不限于： 心脏癌：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液 瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤； 肺癌：支气管癌(鳞状细 胞癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌)、蜂窝状癌(细支气 管肺泡癌)、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨瘤性错构瘤、间皮瘤； 胃肠癌：食管癌(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃癌(癌、 淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺癌(导管腺癌、胰岛瘤、胰高血糖素瘤、 胃泌素瘤、类癌瘤(carcinoid tumors)、血管活性肠多肽瘤)、小肠癌(腺 癌、淋巴瘤、类癌瘤、Karposi肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、 神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠癌(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构 瘤、平滑肌瘤)； 泌尿生殖道癌：肾癌(腺癌、维尔姆斯瘤(Wilm’s tumor) [肾母细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱癌和尿道癌(鳞状细胞癌、移 行细胞癌、腺癌)、前列腺癌(腺癌、肉瘤)、睾丸癌(精原细胞瘤、畸 胎瘤、胚性癌、恶性畸胎瘤、绒膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、 纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)； 肝癌：肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管 癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤； 骨癌：骨源性 肉瘤(osteogenic sarcoma)(骨肉瘤(osteosarcoma))、纤维肉瘤、恶性皮 肤纤维瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤(Ewing’s sarcoma)、恶性淋巴瘤(网状 细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性骨巨细胞瘤、脊索瘤、骨软骨瘤(骨 软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液纤维瘤、骨 样骨瘤和巨细胞瘤； 神经系统癌：颅骨癌(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、 黄瘤、畸形性骨炎)、脑膜癌(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)、 脑癌(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖 细胞瘤[松果体瘤]、多形性成胶质细胞瘤、少突神经胶质细胞瘤、神 经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓癌(神经纤维瘤、脑膜 瘤、神经胶质瘤、肉瘤)； 妇科癌症：子宫癌(子宫内膜癌)、宫颈癌(宫 颈癌、肿瘤发生前宫颈发育异常、卵巢癌症(卵巢癌[浆液性囊腺癌、 粘蛋白囊腺癌、未分类癌]、粒层-泡膜细胞瘤、Sertoli-Leydig细胞瘤、 无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴癌(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、 纤维肉瘤、黑素瘤)、阴道癌(明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚 胎横纹肌肉瘤)、输卵管(癌)； 血液癌：血癌(髓细胞性白血病[急性和 慢性]、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴性白血病、骨髓组织增 生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征)、霍奇金病、非霍 奇金淋巴瘤[恶性淋巴瘤]； 皮肤癌：恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状 细胞癌、卡波西肉瘤、发育不良性痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、 血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；以及 肾上腺癌：成神经细 胞瘤。因此，本文所用的术语“癌细胞”包括患上述任何一种已确 定症状的细胞。

本发明的化合物也可用作抗真菌药，即通过调节bimC驱动蛋白 亚群的真菌成员的活性，正如美国专利号6,284,480所述。

本发明的化合物可以单独或与药物组合物中的药物可接受的载 体、赋形剂或稀释剂一起，按照标准药学实践，给予哺乳动物(优选 人)。化合物可以按以下途径给予：口服或胃肠外，包括静脉内、肌 内、腹膜内、皮下、直肠和局部给药途径。

含有活性成分的药物组合物可以是适于口服使用的形式，例如 片剂、糖锭剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散粉剂或颗粒剂、 乳剂、硬质或软质胶囊剂或糖浆剂或酏剂。供口服用的组合物可以 按照本领域任何已知用于制备药物组合物的方法来制备，所述组合 物可含有一种或多种选自以下的试剂：甜味剂、矫味剂、着色剂和 防腐剂，以便提供药用精致适口的制剂。片剂含有活性成分以及适 于片剂制备的无毒药物可接受的赋形剂。这些赋形剂可以是例如惰 性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂 和崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠、玉米淀粉或海藻 酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯胶，以及 润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可以不用包衣或者 可以通过已知技术来包衣，以遮盖令人不快的药味或者在胃肠道延 迟崩解和吸收，因而提供较长时间的持续作用。例如，可以使用水 溶性气味遮盖材料(例如羟丙基-甲基纤维素或羟丙基纤维素)或者使 用时间延迟材料(例如乙基纤维素、醋酸丁酸纤维素)。

供口服用制剂也可以是硬质明胶胶囊剂或软质明胶胶囊剂，在 硬质明胶胶囊剂中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙 或高岭土)混合在一起，而在软质明胶胶凝剂中活性成分与水溶性载 体(例如聚乙二醇)或油性介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合 在一起。

水性混悬剂含有活性成分以及适于制备水性混悬剂的赋形剂。 所述赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基 甲基-纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；分 散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂(例如卵磷脂)或者是环氧烷烃与 脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)或环氧乙烷与长链脂肪醇 的缩合产物(例如十七碳乙烯氧基十六醇(heptadecaethyleneoxycetanol)) 或环氧乙烷与衍生自脂肪酸的偏酯和己糖醇的缩合产物(例如聚氧乙 烯山梨醇单油酸酯)或环氧乙烷与衍生自脂肪酸的偏酯和己糖醇酐的 缩合产物(例如聚乙烯山梨坦单油酸酯)。水性混悬剂也可含有一种或 多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或 多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂(例如蔗糖、糖 精或天冬甜素)。

可以通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻 油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中，配制油性混悬剂。油性混 悬剂可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬质石蜡或鲸蜡醇。可加入例如上 述甜味剂和矫味剂，以提供适口的口服制剂。可以通过加入抗氧化 剂(例如丁基羟基茴香醚或α生育酚)来保存这些组合物。

适于通过加入水来制备水性混悬剂的可分散粉剂和颗粒剂提供 活性成分以及分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂。合适 的分散剂或润湿剂和悬浮剂的实例在上文中已经提及。也可存在其 它赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂。这些组合物可以通过加 入抗氧化剂例如抗坏血酸而保存。

本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂形式。油相可以是植 物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或其混合物。合 适的乳化剂可以是天然存在的磷脂(例如大豆卵磷脂)和衍生自脂肪酸 和己糖醇酐的酯或偏酯(例如山梨坦单油酸酯)和所述偏酯与环氧乙烷 的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨坦单油酸酯)。乳剂也可含有甜味剂、 矫味剂、防腐剂和抗氧化剂。

糖浆剂和酏剂可以与甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖等甜味剂一 起配制。所述制剂也可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和着色剂及抗 氧化剂。

药物组合物也可以是无菌注射用水溶液剂的形式。可以使用的 可接受的溶媒和溶剂是水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。

无菌注射用制剂也可以是无菌注射用水包油微乳剂，其中活性 成分溶于油相。例如，活性成分可以首先溶于大豆油和卵磷脂的混 合物中。再将油溶液加入到水和甘油混合物中，经过处理制成微乳 剂。

注射用溶液剂或微乳剂可以通过局部大剂量注射输入到患者血 流中。或者，可以有利地给予溶液剂或微乳剂，其给予方式使得能 够保持本发明化合物恒定的循环浓度。为了保持所述恒定浓度，可 以使用连续静脉内给药装置。所述装置的实例是Deltec CADD- PLUSTM 5400型静脉注射泵。

药物组合物可以是无菌水性或油性混悬剂的形式，供肌内和皮 下给药用。这样的混悬剂可以按照已知技术，使用上述合适的分散 剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射用制剂也可以是溶于无毒胃 肠外可接受的稀释剂或溶剂(例如1，3-丁二醇溶液)的无菌注射用溶液 剂或混悬剂。另外，无菌的不挥发性油类常规用作溶剂或悬浮介质。 为了该目的，任何无刺激的不挥发性油均可使用，包括合成的甘油 单酯或甘油二酯。另外，脂肪酸例如油酸也可用于注射剂的制备。

式I的化合物也可以栓剂形式给予，供直肠给药用。这些组合 物可通过将药物与合适的无刺激性赋形剂混合在一起而制备，所述 赋形剂在常温下是固体，但在直肠温度下是液体，因此在直肠内可 融化而释放药物。所述材料包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、 不同分子量的聚乙二醇混合物和聚乙二醇的脂肪酸酯。

对于局部使用，使用含有式I化合物的乳膏剂、软膏剂、胶冻 剂、溶液剂或混悬剂等。(对于该应用目的，局部应用将包括漱口水 和含漱剂)。

本发明的化合物可以通过合适的鼻内溶媒和给药装置、以鼻内 形式给药，或者通过经皮途径，使用本领域普通技术人员熟知的经 皮皮肤贴剂的形式给药。为了以经皮给药系统的形式给予，在整个 给药方案中，剂量当然会是连续的，而不是间歇性的。也可作为栓 剂使用基质(例如可可脂、甘油明胶、氢化植物油、不同分子量的聚 乙二醇混合物和聚乙二醇的脂肪酸酯)，给予本发明的化合物。

当本发明化合物给予病人时，日剂量一般将由开处方的医师决 定，所述剂量通常因各患者的年龄、体重、性别和反应以及患者症 状的严重程度而异。

在一个示例性应用中，将合适量的化合物给予正在接受癌症治 疗的哺乳动物。给药量介于约0.1mg/kg体重/天至约60mg/kg体重/天， 优选介于0.5mg/kg体重/天至约40mg/kg体重/天。

本发明化合物也可与已知治疗药和抗癌药联合使用。例如，本 发明化合物可与已知抗癌药联合使用。本文所公开的化合物与其它 抗癌药或化疗药联合使用是在本发明范围之内。所述药物的实例可 以在以下文献中找到：V.T.Devita和S.Hellman(主编)Cancer Principles and Practice of Oncology，第6版(2001年2月15日)， Lippincott Williams & Wilkins Publishers。本领域普通技术人员将会知 道，药物联合使用将根据药物和所涉及的癌症的具体特征来使用。 所述抗癌药包括但不限于以下药物：雌激素受体调节剂、雄激素受 体调节剂、类视黄醇受体调节剂、细胞毒剂/细胞抑制剂、抗增殖药、 异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂和其它血管 生成抑制剂、细胞增殖和存活信号传导抑制剂、细胞凋亡诱导药和 干扰细胞周期关卡的药物。本发明化合物尤其可用于与放射治疗联 合使用。

在一个实施方案中，本发明化合物也可与以下已知抗癌药联合 使用：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视黄醇受体调节 剂、细胞毒剂、抗增殖药、异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA 还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生 成抑制剂。

“雌激素受体调节剂”是指无论以什么机制干扰或抑制雌激素 与受体结合的化合物。雌激素受体调节剂的实例包括但不限于他莫 昔芬、雷洛昔芬、艾多昔芬、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟 维司群、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙 氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯、4，4′-二羟基 二苯甲酮-2，4-二硝基苯基-腙和SH646。

“雄激素受体调节剂”是指无论以什么机制干扰或抑制雄激素 与受体结合的化合物。雄激素受体调节剂的实例包括非那雄胺和其 它5α-还原酶抑制剂、尼鲁米特、氟他胺、比卡鲁胺、利阿唑和醋酸 阿比特龙。

“类视黄醇受体调节剂”是指无论以什么机制干扰或抑制类视 黄醇与受体结合的化合物。所述类视黄醇受体调节剂的实例包括贝 沙罗汀、维A酸、13-顺-视黄酸、9-顺-视黄酸、α-二氟甲基鸟氨酸、 ILX23-7553、反-N-(4′-羟基苯基)视黄酰胺(retinamide)和N-4-羧基苯 基视黄酰胺。

“细胞毒剂/细胞抑制剂”是指主要通过直接干扰细胞功能或者 抑制或干扰细胞有丝分裂(mytosis)而引起细胞死亡或抑制细胞增殖的 化合物，包括烷化剂、肿瘤坏死因子、嵌入剂、低氧活化化合物、 微管抑制剂/微管稳定剂、有丝分裂驱动蛋白抑制剂、参与有丝分裂 进程的激酶抑制剂、抗代谢药；生物反应调节剂；激素/抗激素治疗 剂、造血生长因子(haematopoietic growth factor)、单克隆抗体靶向治 疗剂、拓扑异构酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂和泛蛋白连接酶抑制剂。

细胞毒剂的实例包括但不限于sertenef、恶病质素、异环磷酰胺、 他索纳明、氯尼达明、卡铂、六甲蜜胺、泼尼莫司汀、二溴卫矛醇、 雷莫司汀、福莫司汀、奈达铂、奥沙利铂、替莫唑胺、庚铂(heptaplatin)、 雌莫司汀、甲苯磺酸英丙舒凡、曲磷胺、尼莫司汀、二溴螺氯铵、 嘌嘧替派、洛铂、沙铂、泊非霉素(profiromycin)、顺铂、伊罗夫文、 右异环磷酰胺、顺-胺二氯(2-甲基-吡啶)铂、苄基鸟嘌呤、葡磷酰胺、 GPX100、四氯化(反，反，反)-双-μ-(己烷-1，6-二胺)-μ-[二胺-铂(II)]双 [二胺(氯)铂(II)]、二吖丙啶基精氨(diarizidinylspermine)、三氧化砷、 1-(11-十二烷基氨基-10-羟基十一烷基)-3，7-二甲基黄嘌呤、佐柔比星、 伊达比星、柔红霉素、比生群、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、 戊柔比星、氨柔比星、抗瘤酮、3′-脱氨基-3′-吗啉基-13-脱氧代-10-羟 基洋红霉素、脂质体蒽环霉素(annamycin)、加柔比星、依利萘法德、 MEN10755和4-脱甲氧基-3-脱氨基-3-氮杂环丙烷基-4-甲基磺酰基-柔 红霉素(参见WO 00/50032)。

低氧活化化合物的实例是替拉扎明。

蛋白酶体抑制剂的实例包括但不限于乳胞素和bortezomib。

微管抑制剂/微管稳定剂的实例包括紫杉醇、硫酸长春地辛、3′，4′- 二脱氢-4′-脱氧-8′-去甲长春碱(norvincaleukoblastine)、多西他赛 (docetaxol)、根霉素、多拉司他汀、羟乙磺酸米伏布林、auristatin、 西马多丁、RPR109881、BMS184476、长春氟宁、缩酚酸肽类抗肿 瘤药(cryptophycin)、2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、 脱水长春碱、N，N-二甲基-L-缬氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-缬氨酰-L-脯 氨酰-L-脯氨酸-叔丁基酰胺、TDX258、大环内酯类抗肿瘤药(epothilone) (参见例如美国专利号6,284,781和6,288,237)和BMS188797。

拓扑异构酶抑制剂的一些实例是托泊替康、hycaptamine、伊立 替康、卢比替康、6-乙氧基丙酰基-3′，4′-O-外-苯亚甲基-酵酒菌素、9- 甲氧基-N，N-二甲基-5-硝基吡唑并[3，4，5-kl]吖啶-2-(6H)丙胺、1-氨基-9- 乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3′，4′：b，7]- 中氮茚并[1，2b]喹啉-10，13(9H，15H)二酮、勒托替康、7-[2-(N-异丙基 氨基)乙基]-(20S)喜树碱、BNP1350、BNPI1100、BN80915、BN80942、 磷酸依托泊苷、替尼泊苷、索布佐生、2′-甲氨基-2′-脱氧-依托泊苷、 GL331、N-[2-(二甲氨基)乙基]-9-羟基-5，6-二甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔 唑-1-甲酰胺、asulacrine、(5a，5aB，8aa，9b)-9-[2-[N-[2-(二甲氨基)乙基]- N-甲氨基]乙基]-5-[4-羟基-3，5-二甲氧基苯基]-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃 并(3′，4′：6，7)萘并(2，3-d)-1，3-二氧杂环戊二烯-6-酮、2，3-(亚甲基二氧 基)-5-甲基-7-羟基-8-甲氧基苯并[c]-菲啶(phenanthridinium)、6，9-二 [(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]异喹啉(isoguinoline)-5，10-二酮、5-(3-氨基 丙基氨基)-7，10-二羟基-2-(2-羟乙基氨基甲基)-6H-吡唑并[4，5，1-de]吖 啶-6-酮、N-[1-[2-(二乙氨基)乙氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-噻吨-4-基甲 基]甲酰胺、N-(2-(二甲氨基)乙基)吖啶-4-甲酰胺、6-[[2-(二甲氨基)乙 基]氨基]-3-羟基-7H-茚并[2，1-c]喹啉-7-酮和地美司钠(dimesna)。

有丝分裂驱动蛋白抑制剂、尤其是人有丝分裂驱动蛋白KSP抑 制剂的实例描述于PCT公布号WO 01/30768、WO 01/98278、WO 03/050,064、WO 03/050,122、WO 03/049,527、WO 03/049,679、WO 03/049,678和WO 03/39460和待审的PCT申请号US03/06403(2003 年3月4日申请)、US03/15861(2003年5月19日申请)、US03/15810 (2003年5月19日申请)、US03/18482(2003年6月12日申请)和 US03/18694(2003年6月12日申请)。在一个实施方案中，有丝分裂 驱动蛋白抑制剂包括但不限于KSP抑制剂、MKLP1抑制剂、CENP- E抑制剂、MCAK抑制剂、Kifl4抑制剂、Mphosphl抑制剂和Rab6- KIFL抑制剂。

“参与有丝分裂进程的激酶抑制剂”包括但不限于aurora激酶 抑制剂、Polo样激酶(PLK)抑制剂(尤其是PLK-1抑制剂)、bub-1抑 制剂和bub-R1抑制剂。

“抗增殖药”包括反义RNA和DNA寡核苷酸(例如G3139、 ODN698、RVASKRAS、GEM231和INX3001)以及抗代谢药(例如依 诺他滨、卡莫氟、替加氟、喷司他丁、去氧氟尿苷、三甲曲沙、氟 达拉滨、卡培他滨、加洛他滨、阿糖胞苷ocfosfate、fosteabine sodium hydrate、雷替曲塞、paltitrexid、乙嘧替氟、噻唑呋林、地西他滨、 诺拉曲塞、培美曲塞、nelzarabine、2′-脱氧-2′-亚甲基胞苷、2′-氟亚 甲基-2′-脱氧胞苷、N-[5-(2，3-二氢-苯并呋喃基)磺酰基]-N′-(3，4-二氯苯 基)脲、N6-[4-脱氧-4-[N2-[2(E)，4(E)-十四碳二烯酰基]甘氨酰氨基]-L- 甘油基-B-L-甘露糖基-吡喃庚糖基]腺嘌呤、aplidine、海鞘素 (ecteinascidin)、曲沙他滨、4-[2-氨基-4-氧代-4，6，7，8-四氢-3H-嘧啶并 [5，4-b][1，4]噻嗪-6-基-(S)-乙基]-2，5-噻吩酰基-L-谷氨酸、氨基蝶呤、5- 氟尿嘧啶、亚硝基羟基丙氨酸(阿拉诺新)、11-乙酰基-8-(氨基甲酰氧 基甲基)-4-甲酰基-6-甲氧基-14-氧杂-1，11-二氮杂四环(7.4.1.0.0)-十四 碳-2，4，6-三烯-9-基乙酸酯、八氢吲嗪三醇、洛美曲索、右雷佐生、甲 硫氨酸酶(methioninase)、2′-氰基-2′-脱氧-N4-棕榈酰-1-B-D-呋喃阿糖 基胞嘧啶和3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲。

单克隆抗体靶向治疗剂的实例包括具有细胞毒剂或者与癌细胞 特异性单克隆抗体或靶细胞特异性单克隆抗体连接的放射性同位素 的治疗剂。实例包括托西莫单抗(Bexxar)。

“HMG-CoA还原酶抑制剂”是指3-羟基-3-甲基戊二酰基-辅酶 A还原酶抑制剂。可以使用的HMG-CoA还原酶抑制剂的实例包括 但不限于洛伐他汀(MEVACOR；参见美国专利号4,231,938、4,294,926 和4,319,039)、辛伐他汀(ZOCOR；参见美国专利号4,444,784、 4,820,850和4,916,239)、普伐他汀(PRAVACHOL；参见美国专利号 4,346,227、4,537,859、4,410,629、5,030,447和5,180,589)、氟伐他汀 (LESCOL；参见美国专利号5,354,772、4,911,165、4,929,437、 5,189,164、5,118,853、5,290,946和5,356,896)和阿托伐他汀 (LIPITOR；参见美国专利号5,273,995、4,681,893、5,489,691和 5,342,952)。可用于本发明方法的上述和其它HMG-CoA还原酶抑制 剂的结构式在以下文献中有介绍：M.Yalpani，″Cholesterol Lowering Drugs″，Chemistry & Industry，第85-89页(1996年2月5日)的第87 页，以及美国专利号4,782,084和4,885,314。本文所用的术语HMG- CoA还原酶抑制剂包括所有药物可接受的内酯和开环酸形式(即其中 内酯环打开，以形成游离酸)以及具有HMG-CoA还原酶抑制活性的 化合物的盐和酯形式，因此所述盐、酯、开环酸和内酯形式都包括 在本发明范围之内。

“异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂”是指抑制任何异戊二烯基蛋 白转移酶或其任何组合的化合物，所述酶包括法呢基-蛋白转移酶(FPT 酶)、牻牛儿基牻牛儿基-蛋白转移酶I型(GGPT酶-I)和牻牛儿基牻牛 儿基-蛋白转移酶II型(GGPT酶-II，也称为Rab GGPT酶)。

异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂的实例可以在以下出版物和专利 中找到：WO 96/30343、WO 97/18813、WO 97/21701、WO 97/23478、 WO 97/38665、WO 98/28980、WO 98/29119、WO 95/32987、美国专 利号5,420,245、美国专利号5,523,430、美国专利号5,532,359、美国 专利号5,510,510、美国专利号5,589,485、美国专利号5,602,098、欧 洲专利公布号0 618 221、欧洲专利公布号0 675 112、欧洲专利公布 号0 604 181、欧洲专利公布号0 696 593、WO 94/19357、WO 95/08542、WO 95/11917、WO 95/12612、WO 95/12572、WO 95/10514、 美国专利号5,661,152、WO 95/10515、WO 95/10516、WO 95/24612、 WO 95/34535、WO 95/25086、WO 96/05529、WO 96/06138、WO 96/06193、WO 96/16443、WO 96/21701、WO 96/21456、WO 96/22278、 WO 96/24611、WO 96/24612、WO 96/05168、WO 96/05169、WO 96/00736、美国专利号5,571,792、WO 96/17861、WO 96/33159、WO 96/34850、WO 96/34851、WO 96/30017、WO 96/30018、WO 96/30362、 WO 96/30363、WO 96/31111、WO 96/31477、WO 96/31478、WO 96/31501、WO 97/00252、WO 97/03047、WO 97/03050、WO 97/04785、 WO 97/02920、WO 97/17070、WO 97/23478、WO 97/26246、WO 97/30053、WO 97/44350、WO 98/02436和美国专利号5,532,359。异 戊二烯基蛋白转移酶抑制剂对血管生成的作用实例参见European J. of Cancer，第35卷，第9期，第1394-1401页(1999)。

“血管生成抑制剂”是指无论以什么机制抑制新血管形成的化 合物。血管生成抑制剂包括但不限于酪氨酸激酶抑制剂(例如酪氨酸 激酶受体Flt-1(VEGFR1)抑制剂和酪氨酸激酶受体Flk-1/KDR (VEGFR2)抑制剂)、表皮衍生生长因子抑制剂、成纤维细胞衍生生长 因子抑制剂或血小板衍生生长因子抑制剂、MMP(基质金属蛋白酶) 抑制剂、整联蛋白阻滞剂、干扰素-α、白介素-12、戊聚糖聚硫酸酯 (pentosan polysulfate)、环加氧酶抑制剂(包括非甾体抗炎药(NSAID)， 例如阿司匹林和布洛芬，以及选择性环加氧酶-2抑制剂，例如塞来 考昔和罗非考昔(PNAS，第89卷，第7384页(1992)；JNCI，第69卷，第 475页(1982)；Arch.Opthalmol.，第108卷，第573页(1990)；Anat.Rec.， 第238卷，第68页(1994)；FEBS Letters，第372卷，第83页(1995)； Clin，Orthop.第313卷，第76页(1995)；J.Mol.Endocrinol.，第16 卷，第107页(1996)；Jpn.J.Pharmacol.，第75卷，第105页(1997)； Cancer Res.，第57卷，第1625页(1997)；Cell，第93卷，第705页 (1998)；Intl.J.Mol.Med.，第2卷，第715页(1998)；J.Biol.Chem.，第 274卷，第9116页1999))、甾体类抗炎药(例如皮质类固醇、盐皮质 类固醇、地塞米松、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、倍他米松)、羧 基酰胺三唑、考布他汀A-4、角鲨胺、6-O-氯乙酰基-羰基)-烟曲霉醇 (fumagillol)、沙利度胺、血管生长抑素、肌钙蛋白-1、血管紧张素II 拮抗剂(参见Fernandez等，J.Lab.Clin.Med.105：141-145(1985))和 VEGF的抗体(参见Nature Biotechnology，第17卷，第963-968页(1999 年10月)；Kim等，Nature，362，841-844(1993)；WO 00/44777；和WO 00/61186)。

调节或抑制血管生成并可与本发明化合物联合使用的其它治疗 剂包括调节或抑制凝血和溶纤系统的药物(有关综述参见Clin.Chem. La.Med.38：679-692(2000))。调节或抑制凝血和溶纤途径的所述药物 实例包括但不限于肝素(参见Thromb.Haemost.80：10-23(1998))、低 分子量肝素和羧肽酶U抑制剂(也称为活性凝血酶活化纤溶抑制剂 [TAFIa]的抑制剂)(参见Thrombosis Res.101：329-354(2001))。TAFIa 抑制剂已经描述于PCT公布号WO 03/013,526和美国顺序号 60/349,925(2002年1月18日申请)。

“干扰细胞周期关卡的药物”是指抑制蛋白激酶的化合物，所 述激酶转导细胞周期关卡信号，因而使癌细胞对DNA损伤剂敏感。 所述药物包括ATR抑制剂、ATM抑制剂、Chk1和Chk2激酶抑制剂 和cdk和cdc激酶抑制剂，特别以7-羟基星孢素、黄酮类抗肿瘤药 (flavopiridol)、CYC202(Cyclacel)和BMS-387032为例。

“细胞增殖和存活信号传导途径的抑制剂”是指抑制细胞表面 受体和这些表面受体信号传导级联下游的药物。所述药物包括EGFR 抑制剂的抑制剂(例如吉非替尼和埃罗替尼)、ERB-2抑制剂(例如曲 妥单抗)、IGFR抑制剂、细胞因子受体抑制剂、MET抑制剂、PI3K 抑制剂(例如LY294002)、丝氨酸/苏氨酸激酶(包括但不限于Akt抑制 剂，例如描述于WO 02/083064、WO 02/083139、WO 02/083140和 WO 02/083138)、Raf激酶抑制剂(例如BAY-43-9006)、MEK抑制剂(例 如CI-1040和PD-098059)和mTOR抑制剂(例如Wyeth CCI-779)。所 述药物包括小分子抑制剂化合物和抗体拮抗剂。

“细胞凋亡诱导剂”包括TNF受体家族成员(包括TRAIL受体) 活化剂。

本发明也包括与NSAID联合使用，NSAID是选择性COX-2抑 制剂。对于本说明书的目的，作为选择性COX-2抑制剂的NSAID 定义为具有这样的特异性：当用细胞或微粒体测定来评价COX-2的 IC50与COX-1的IC50的比率时，对COX-2的抑制比对COX-1的抑 制至少高100倍。所述化合物包括但不限于公开于以下文献的化合 物：美国专利5,474,995、美国专利5,861,419、美国专利6,001,843、 美国专利6,020,343、美国专利5,409,944、美国专利5,436,265、美国 专利5,536,752、美国专利5,550,142、美国专利5,604,260、美国专利 5,698,584、美国专利5,710,140、WO 94/15932、美国专利5,344,991、 美国专利5,134,142、美国专利5,380,738、美国专利5,393,790、美国 专利5,466,823、美国专利5,633,272,和美国专利5,932,598，所有这 些文献都通过引用结合到本文中。

尤其可用于本发明治疗方法的COX-2抑制剂是：3-苯基-4-(4-(甲 基磺酰基)苯基)-2-(5H)-呋喃酮(furanone)；和5-氯-3-(4-甲基磺酰基) 苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶；或其药物可接受的盐。

已经作为特异性COX-2抑制剂而描述并因而可用于本发明的化 合物包括但不限于：帕瑞考昔、CELEBREX和BEXTRA或其药物 可接受的盐。

血管生成抑制剂的其它实例包括但不限于内皮生长抑素、 ukrain、豹蛙酶、IM862、(氯乙酰基)氨基甲酸5-甲氧基-4-[2-甲基-3-(3- 甲基-2-丁烯基)环氧乙烷基]-1-氧杂螺[2，5]辛-6-基酯、 acetyldinanaline、5-氨基-1-[[3，5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基]- 1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺、CM101、角鲨胺、考布他汀、RPI4610、 NX31838、硫酸化磷酸甘露戊糖、7，7-(羰基-二[亚氨基-N-甲基-4，2-吡 咯并羰基亚氨基[N-甲基-4，2-吡咯]-羰基亚氨基]-二-(1，3-萘二磺酸酯) 和3-[(2，4-二甲基吡咯-5-基)亚甲基]-2-二氢吲哚酮(SU5416)。

如上所用的“整联蛋白阻滞剂”是指选择性拮抗、抑制或对抗 生理配体与αvβ3整联蛋白结合的化合物，是指选择性拮抗、抑制或对 抗生理配体与αvβ5整联蛋白结合的化合物，是指选择性拮抗、抑制或 对抗生理配体与αvβ3整联蛋白和αvβ5整联蛋白结合的化合物，是指选 择性拮抗、抑制或对抗在毛细血管内皮细胞上表达的特定整联蛋白 的活性的化合物。该术语也指以下整联蛋白的拮抗剂：αvβ6、αvβ8、 α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4。该术语也指以下整联蛋白任何组合 的拮抗剂：αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4。

酪氨酸激酶抑制剂的一些具体实例包括N-(三氟甲基苯基)-5-甲 基异唑-4-甲酰胺、3-[(2，4-二甲基吡咯-5-基)亚甲基]二氢吲哚-2-酮、 17-(烯丙基氨基)-17-脱甲氧基格尔德霉素、4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7- 甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]喹唑啉、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲 氧基乙氧基)-4-喹唑啉胺、BIBX1382、2，3，9，10，11，12-六氢-10-(羟甲 基)-10-羟基-9-甲基-9，12-环氧-1H-二吲哚并[1，2，3-fg：3′，2′，1′-kl]吡咯并 [3，4-i][1，6]苯并二吖辛因-1-酮、SH268、金雀异黄素(genistein)、 STI571、CEP2563、4-(3-氯苯基氨基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧 啶甲烷磺酸酯、4-(3-溴-4-羟基苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉、4-(4′- 羟基苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉、SU6668、STI571A、N-4-氯苯 基-4-(4-吡啶基甲基)-1-二氮杂萘胺和EMD121974。

与并非抗癌化合物的化合物联合使用也包括在本发明方法之 内。例如，将本文要求保护的化合物与PPAR-γ激动剂和PPAR-δ激 动剂联合使用，可用于治疗某些恶性肿瘤。PPAR-γ和PPAR-δ是核过 氧化物酶体增殖物激活受体γ和δ。文献中已经报道了PPAR-γ在内皮 细胞上的表达并参与血管形成(参见J.Cardiovasc.Pharmacol.1998； 31：909-913；J.Biol.Chem.1999；274：9116-9121；Invest.Ophthalmol Vis. Sci.2000；41：2309-2317)。近来，已经显示PPAR-γ激动剂在体外抑制 对VEGF的血管生成反应；曲格列酮和马来酸罗格列酮均在小鼠中 抑制视网膜新血管生成。(Arch.Ophthamol.2001；119：709-717)。 PPAR-γ激动剂和PPAR-γ/α激动剂的实例包括但不限于噻唑烷二酮(例 如DRF2725、CS-011、曲格列酮、罗西格列酮和吡格列酮)、非诺贝 特、吉非贝齐、氯贝丁酯、GW2570、SB219994、AR-H039242、JTT-501、 MCC-555、GW2331、GW409544、NN2344、KRP297、NP0110、 DRF4158、NN622、GI262570、PNU182716、DRF552926、2-[(5，7- 二丙基-3-三氟甲基-1，2-苯并异唑-6-基)氧基]-2-甲基丙酸(公开于 USSN 09/782,856)和2(R)-7-(3-(2-氯-4-(4-氟苯氧基)苯氧基)丙氧基)-2- 乙基苯并二氢吡喃-2-甲酸(公开于USSN 60/235,708和60/244,697)。

本发明的另一个实施方案是本发明公开的化合物与基因治疗联 合使用，用于治疗癌症。有关治疗癌症的基因策略的综述参见Hall 等(Am J Hum Genet 61：785-789，1997)和Kufe等(Cancer Medicine，第 5版，第876-889页，BC Decker，Hamilton 2000)。基因治疗可用于传 递任何肿瘤抑制基因。所述基因的实例包括但不限于p53(其可通过 重组病毒介导的基因转移而传递，参见例如美国专利号6,069,134)、 uPA/uPAR拮抗剂(″Adenovirus-Mediated Delivery of a uPA/uPAR Antagonist Suppresses Angiogenesis-Dependent Tumor Growth and Dissemination in Mice，″Gene Therapy，August 1998；5(8)：1105-13)和干 扰素γ(J Immunol 2000；164：217-222)。

本发明的化合物也可与固有多药耐药性(MDR)抑制剂、尤其是 转运蛋白高水平表达相关的MDR联合给予。所述MDR抑制剂包括 p-糖蛋白(P-gp)抑制剂，例如LY335979、XR9576、OC144-093、 R101922、VX853和PSC833(伐司朴达)。

本发明的化合物可以与止吐药联合使用，用于治疗恶心或呕吐， 包括急性、迟发型、晚期和可预见的呕吐，所述呕吐是因单独使用 本发明化合物或者本发明化合物与放射治疗联用而引起的。为了预 防或治疗呕吐，本发明化合物可与其它止吐药一起使用，所述止吐 药尤其是神经激肽-1受体拮抗剂、5HT3受体拮抗剂(例如昂丹司琼、 格拉司琼、托烷司琼和扎托司琼(zatisetron))、GABAB受体激动剂(例 如巴氯芬)、皮质类固醇(例如地卡特隆(Decadron)(地塞米松))、康宁 乐(Kenalog)、曲安西龙、鼻松、Preferid、Benecorten或其它药物(例 如公开于美国专利号2,789,118、2,990,401、3,048,581、3,126,375、 3,929,768、3,996,359、3,928,326和3,749,712)、抗多巴胺能药例如吩 噻嗪类(例如丙氯拉嗪、氟奋乃静、硫利达嗪和美索达嗪)、甲氧氯普 安或屈大麻酚。在一个实施方案中，选自神经激肽-1受体拮抗剂、5HT3 受体拮抗剂和皮质类固醇的止吐药，作为辅助剂给予，用于治疗或 预防因给予本发明化合物而引起的呕吐。

与本发明化合物联合使用的神经激肽-1受体拮抗剂在例如以下 文献中有充分介绍：美国专利号5,162,339、5,232,929、5,242,930、 5,373,003、5,387,595、5,459,270、5,494,926、5,496,833、5,637,699、 5,719,147；欧洲专利公布号EP 0360390、0394989、0428434、0429 366、0430771、0436334、0443132、0482539、0498069、0499313、 0512901、0512902、0514273、0514274、0514275、0514276、 0515681、0517589、0520555、0522808、0528495、0532456、 0533280、0536817、0545478、0558156、0577394、0585913、 0590152、0599538、0610793、0634402、0686629、0693489、 0694535、0699655、0699674、0707006、0708101、0709375、 0709376、0714891、0723959、0733632和0776893；PCT国际 专利公布号WO 90/05525、90/05729、91/09844、91/18899、92/01688、 92/06079、92/12151、92/15585、92/17449、92/20661、92/20676、 92/21677、92/22569、93/00330、93/00331、93/01159、93/01165、 93/01169、93/01170、93/06099、93/09116、93/10073、93/14084、 93/14113、93/18023、93/19064、93/21155、93/21181、93/23380、 93/24465、94/00440、94/01402、94/02461、94/02595、94/03429、 94/03445、94/04494、94/04496、94/05625、94/07843、94/08997、 94/10165、94/10167、94/10168、94/10170、94/11368、94/13639、 94/13663、94/14767、94/15903、94/19320、94/19323、94/20500、 94/26735、94/26740、94/29309、95/02595、95/04040、95/04042、 95/06645、95/07886、95/07908、95/08549、95/11880、95/14017、 95/15311、95/16679、95/17382、95/18124、95/18129、95/19344、 95/20575、95/21819、95/22525、95/23798、95/26338、95/28418、 95/30674、95/30687、95/33744、96/05181、96/05193、96/05203、 96/06094、96/07649、96/10562、96/16939、96/18643、96/20197、 96/21661、96/29304、96/29317、96/29326、96/29328、96/31214、 96/32385、96/37489、97/01553、97/01554、97/03066、97/08144、 97/14671、97/17362、97/18206、97/19084、97/19942和97/21702； 和英国专利公布号2266529、2268931、2269170、2269590、2271 774、2292144、2293168、2293169和2302689。所述化合物的 制备在上述专利和出版物中都有全面的描述，所述文献通过引用结 合到本文中。

在一个实施方案中，与本发明化合物联合使用的神经激肽-1受 体拮抗剂选自2-(R)-(1-(R)-(3，5-二(三氟甲基)苯基)乙氧基)-3-(S)-(4-氟 苯基)-4-(3-(5-氧代-1H，4H-1，2，4-三唑并)甲基)吗啉或其药物可接受的 盐，其描述于美国专利号5,719,147。

本发明的化合物也可与用于治疗贫血的药物联合给予。所述贫 血治疗药例如连续红细胞生成素受体激活物(例如阿法依泊汀)。

本发明的化合物也可与用于治疗中性白细胞减少症的药物联合 给予。所述中性白细胞减少症治疗药例如调节嗜中性粒细胞的产生 和功能的造血生长因子(hematopoietic growth factor)，例如人粒细胞 集落刺激因子(G-CSF)。G-CSF的实例包括非格司亭。

本发明的化合物也可与免疫增强药(例如左旋咪唑、异丙肌苷和 日达仙)联合给予。

因此，本发明的范围包括将本发明要求保护的化合物与选自以 下的第二种化合物联合使用：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节 剂、类视黄醇受体调节剂、细胞毒剂/细胞抑制剂、抗增殖药、异戊 二烯基蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑 制剂、逆转录酶抑制剂、血管生成抑制剂、PPAR-γ激动剂、PPAR-δ 激动剂、固有多药耐药性抑制剂、止吐药、用于治疗贫血的药物、 用于治疗中性白细胞减少症的药物、免疫增强药、细胞增殖和存活 信号转导抑制剂、干扰细胞周期关卡的药物和细胞凋亡诱导剂。

对于本发明的化合物，术语“给予”及其变体(例如“给予”化 合物)是指将化合物或化合物的前体药物导入需要治疗的动物系统 内。因此，当提供本发明化合物或其前体药物以及一种或多种其它 活性药物(例如细胞毒剂等)时，“给予”及其变体应分别理解为包括 同时和序贯导入化合物或其前体药物以及其它药物。

本文所用的术语“组合物”是指包括含规定剂量的规定成分的 制品以及规定剂量的规定成分的直接或间接地组合产生的任何制 品。

本文所用的术语“治疗有效量”是指由研究人员、兽医、医学 博士或其它临床医师所确定的活性化合物或药物在组织、系统、动 物或人体内引发生物反应或药物反应的量。

术语“治疗癌症”或“癌症治疗”是指给予患有癌症的患者药 物并且是指通过杀伤癌细胞而缓解癌症的效果，也指导致对癌的生 长和/或转移的抑制效果。

在一个实施方案中，可用作第二种化合物的血管生成抑制剂选 自酪氨酸激酶抑制剂、表皮衍生生长因子抑制剂、成纤维细胞衍生 生长因子抑制剂、血小板衍生生长因子抑制剂、MMP(基质金属蛋白 酶)抑制剂、整联蛋白阻滞剂、干扰素-α、白介素-12、戊聚糖聚硫酸 酯、环加氧酶抑制剂、羧基酰胺三唑、考布他汀A-4、角鲨胺、6-O- 氯乙酰基-羰基)-烟曲霉醇、沙利度胺、血管生长抑素、肌钙蛋白-1 或VEGF的抗体。在一个实施方案中，雌激素受体调节剂是他莫昔 芬或雷洛昔芬。

一种治疗癌症的方法也包括在权利要求的范围之内，所述方法 包括给予治疗有效量的式I化合物以及放射治疗和/或与选自以下的 化合物联合使用：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视黄 醇受体调节剂、细胞毒剂/细胞抑制剂、抗增殖药、异戊二烯基蛋白 转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转 录酶抑制剂、血管生成抑制剂、PPAR-γ激动剂、PPAR-δ激动剂、固 有多药耐药性抑制剂、止吐药、用于治疗贫血的药物、用于治疗中 性白细胞减少症的药物、免疫增强药、细胞增殖和存活信号转导抑 制剂、干扰细胞周期关卡的药物和细胞凋亡诱导剂。

本发明的再一个实施方案是一种治疗癌症的方法，所述方法包 括给予治疗有效量的式I化合物以及紫杉醇或曲妥单抗。

本发明还包括治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予治疗 有效量的式I化合物以及COX-2抑制剂。

本发明也包括用于治疗或预防癌症的药物组合物，所述组合物 包含治疗有效量的式I化合物及其选自以下的化合物：雌激素受体调 节剂、雄激素受体调节剂、类视黄醇受体调节剂、细胞毒剂/细胞抑 制剂、抗增殖药、异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶 抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、血管生成抑制剂、 PPAR-γ激动剂、PPAR-δ激动剂、细胞增殖和存活信号转导抑制剂、 干扰细胞周期关卡的药物和细胞凋亡诱导剂。

根据本文所公开的内容，本发明的上述方面和其它方面将会是 显而易见的。

                        测定方法

通过下述测定方法，测定了实施例所述的本发明化合物，发现 它们具有激酶抑制活性。其它测定在文献中是已知的，可以由本领 域技术人员容易地进行(参见例如PCT公布号WO 01/30768，2001年 5月3日，第18-22页)。

I.驱动蛋白ATP酶的体外测定

人聚组氨酸标记的KSP发动蛋白(motor)结构域(KSP(367H))的克隆 和表达

通过PCR，使用pBluescript全长人KSP构建体(Blangy等，Cell，第 83卷，第1159-1169页，1995)作为模板，克隆表达人KSP发动蛋白 结构域构建体的质粒。N端引物5′- GCAACGATTAATATGGCGTCGCAGCCAAATTCGTCTGCGAAG (SEQ.ID.NO.：1)和C端引物5′-GCAACGCTCGAGTCAGTGAT GATGGTGGTGATGCTGATTCACTTCAGGCTTATTCAATAT(SEQ. ID.NO.：2)用于扩增发动蛋白结构域和颈部接头区。PCR产物用AseI 和XhoI消化，连接到pRSETa(InVitrogen)的NdeI/XhoI消化产物上， 转化到大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中。

让细胞在37℃生长至OD600为0.5。将培养物冷却至室温后，用 100μM IPTG诱导KSP表达，然后继续孵育过夜。细胞经离心沉淀， 用冰冷的PBS洗涤一次。沉淀快速冷冻，贮存于-80℃。

蛋白质纯化

将细胞沉淀在冰上融化，重悬于裂解缓冲液(50mM K-HEPES(pH 8.0)、250mM KCl、0.1％吐温(Tween)、10mM咪唑、0.5mM Mg-ATP、 1mM PMSF、2mM benzimidine、1x完全蛋白酶抑制剂混合物(Roche)) 中。细胞悬液与1mg/ml溶菌酶和5mM β-巯基乙醇一起在冰上孵育10 分钟，再进行超声处理(3×30秒)。所有后续步骤都在4℃下进行。将 裂解液以40,000xg离心40分钟。上清液稀释后，上样到SP琼脂糖 凝胶柱(Pharmacia，柱体5ml)的缓冲液A(50mM K-HEPES(pH 6.8)、 1mM MgCl2、1mM EGTA、10M Mg-ATP、1mM DTT)，用0-750mM KCl/ 缓冲液A梯度洗脱。合并含有KSP的流分，与Ni-NTA树脂(Qiagen) 一起保温1小时。树脂用缓冲液B(裂解缓冲液(去掉PMSF)和蛋白 酶抑制剂混合物)洗涤3次，再保温3次，每次15分钟，用缓冲液B 洗涤。最后，保温树脂，用缓冲液C(与缓冲液B相同，只是pH为 60)洗涤15分钟，3次，倒入柱子中。KSP用洗脱缓冲液(与缓冲液 B相同，除了150mM KCl和250mM咪唑之外)洗脱。合并含有KSP 的流分，制成10％的蔗糖溶液，贮藏于-80℃。

用自牛脑分离的微管蛋白来制备微管。在10μM紫杉醇、1mM DTT、1mM GTP/BRB80缓冲液(80mM K-PIPES、1mM EGTA、1mM MgCl2，pH 6.8)存在下，将1mg/ml的纯化微管蛋白(＞97％无MAP) 在37℃聚合。通过超速离心并除去上清液，将所得微管与未聚合微 管蛋白分开。将含有微管的沉淀物轻柔地重悬于10μM紫杉醇、1mM DTT、50μg/ml氨苄青霉素和5μg/ml氯霉素/BRB80中。

驱动蛋白的发动蛋白结构域与微管、1mM ATP(1∶1 MgCl2∶Na- ATP )和化合物一起在含有80mM K-HEPES(pH 7.0)、1mM EGTA、 1mM DTT、1mM MgCl2和50mM KCl的缓冲液中于23℃保温。通过 用由80mM HEPES和50mM EDTA组成的最终缓冲液进行2-10倍稀 释，终止反应。通过喹哪啶红/钼酸铵测定，通过加入150μl猝灭C 缓冲液(含有2∶1比例的猝灭A∶猝灭B)，测定来自ATP水解反应的 游离磷酸。猝灭A含有0.1mg/ml喹哪啶红和0.14％聚乙烯醇；猝灭 B含有123mM四水钼酸铵/1.15M硫酸。将反应物在23℃保温10分 钟，在540nm测定磷钼酸盐络合物的吸光度。

在上述测定中，检测了实施例所述的化合物1-4，发现其IC50 ≤50μM。

II.细胞增殖测定

将细胞接种在96孔组织培养板中，其密度允许在24小时、48 小时和72小时的时间里进行对数生长并允许贴壁过夜。第二天，将 化合物以10点、半对数滴度加入到所有培养板中。每个滴度系列一 式三份，所有测定中保持0.1％的恒定DMSO浓度。也包括单用0.1％ DMSO的对照。在无血清培养基中进行每种化合物的系列稀释。测 定中血清的最终浓度为5％/200μl培养基体积。在24小时、48小时 或72小时，将20微升Alamar blue染色试剂加入到滴定板的每个样 品和对照孔中，再加入药物，然后继续放回37℃孵育。6-12小时后， 在CytoFluor II读板仪上，用530-560nm波长激发光，590nm发射光， 分析Alamar blue荧光。

通过x轴为化合物浓度对y轴为每一滴定点的细胞生长平均％ 抑制作图，求出细胞毒EC50。在该测定中，仅用溶媒处理的对照孔 的细胞生长定义为100％生长，用化合物处理的细胞生长与该值进行 比较。采用内部自有的软件，使用4参数逻辑曲线拟合，计算％细胞 毒性值和拐点。％细胞毒性定义为：

％细胞毒性：(荧光对照)-(荧光样品)×100×(荧光对照)-1

拐点报告为细胞毒EC50。

III.通过FACS对有丝分裂停滞和细胞凋亡的评价

使用FACS分析，通过测定受处理细胞群体中DNA含量，评价 化合物将细胞停滞在有丝分裂并诱导细胞凋亡的能力。以1.4×106细 胞/6cm2组织培养板的密度接种细胞，让其贴壁过夜。然后，用溶媒 (0.1％DMSO)或化合物滴度系列处理细胞8-16小时。处理后，在指 定时间，通过胰蛋白酶消化收获细胞，离心沉淀。细胞沉淀物用PBS 漂清，在70％乙醇中固定，贮藏于4℃过夜或更长时间。

对于FACS分析，沉淀至少500,000个固定细胞，通过抽吸除去 70％乙醇。然后细胞在4℃与RNA酶A(50Kunitz单位/ml)和碘化丙 锭(50μg/ml)一起孵育30分钟，用Becton Dickinson FACSCaliber进行 分析。用Modfit细胞周期分析模型软件(Verity Inc.)分析数据(来自 10,000个细胞)。

通过x轴为化合物浓度对y轴为每一滴定点处于细胞周期G2/M 期时的％细胞(通过碘化丙锭荧光测定)作图，求出有丝分裂停滞的 EC50。用SigmaPlot程序进行数据分析，用4参数逻辑曲线拟合，求 出拐点。拐点报告为有丝分裂停滞的EC。采用类似方法，确定化合 物对于细胞凋亡的EC50。在此，每个滴定点的凋亡细胞％(通过碘化 丙锭荧光测定)在y轴上作图，如上所述进行类似分析。

IV.免疫荧光显微镜术检测单极纺锤体

DNA、微管蛋白和粒周蛋白的免疫荧光染色方法基本按照以下 文献的描述进行：Kapoor等(2000)J.Cell Biol.150：975-988。对于细 胞培养的研究，将细胞接种在组织培养物处理的玻璃小室的玻片上， 让其贴壁过夜。然后细胞与目标化合物一起孵育4-16小时。完成孵 育后，吸出培养基和药物，将小室和垫片从玻片上拿掉。然后，按 照参考方案，让细胞经过透化、固定、洗涤并封闭非特异性抗体结 合。石蜡包埋的肿瘤切片用二甲苯脱蜡，通过乙醇系列复水，然后 封闭。将玻片与第一抗体(小鼠单克隆抗α-微管蛋白抗体，克隆 DM1A，来自Sigma，1∶500稀释；兔多克隆抗粒周蛋白抗体，来自 Covance，1∶2000稀释)一起在4℃孵育过夜。洗涤后，玻片与稀释至 15μg/ml的缀合的第二抗体(针对微管蛋白的FITC-缀合的驴抗小鼠 IgG；针对粒周蛋白的得克萨斯红缀合的驴抗兔IgG)一起在室温下孵 育1小时。然后洗涤玻片，用Hoechst 33342复染色，显现DNA。在 Nikon表面荧光显微镜上，使用Metamorph重叠合法(deconvolution) 和图像软件，用100x油浸物镜观察免疫染色样品。

                        实施例

所提供的实施例是为了进一步理解本发明。所用的具体材料、 种类和条件都是为了说明本发明，而不应视为对本发明合理范围的 限制。

                        流程1

步骤1：2-({[(4-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)噻吩-3-甲酸乙酯(1-2)

将3-氨基噻吩甲酸甲酯(1-1，按照文献方法制备，4.23g，24.7mmol， 1当量)的二氯甲烷(25ml)溶液冷却至0℃，再用氯甲酸4-硝基苯酯 (5.98g，29.6mmol，1.20当量)和N，N-二异丙基乙胺(6.46ml，37.1mmol， 1.50当量)处理。所得混合物在0℃搅拌15分钟，然后升温至23℃并 搅拌45分钟。所得黄色溶液用二氯甲烷(75ml)稀释，用H2O(85ml) 洗涤。有机层经Na2SO4干燥并浓缩。黄色残余物溶于二烷(25ml)， 用对甲苯胺(3.97g，37.1mmol，1.50当量)和N，N-二异丙基乙胺(6.46ml， 37.06mmol，1.5当量)处理。反应混合物在80℃搅拌3小时，然后冷 却至23℃并搅拌16小时。反应混合物在乙酸乙酯(2×65ml)和H2O(75ml)之间分配，合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩。残余的黄色 油状物用快速柱色谱法纯化(SiO2：100％己烷逐渐至60∶40己烷∶ EtOAc)，得到2-({[(4-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)噻吩-3-甲酸乙酯(1- 2)，为黄色油状物。LRMS m/z：C15H16N2O3S(M+H)的计算值305.4， 实测值305.3。

步骤2：3-(4-甲基苯基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(1-3)

2-({[(4-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)噻吩-3-甲酸乙酯(1-2，3.80g， 13.1mmol，1当量)的乙醇(30ml)溶液，用含乙醇的KOH(1M，23.6ml， 23.6mmol，1.80当量)处理，溶剂化完毕，在23℃搅拌1小时。浓缩 反应混合物，再在乙酸乙酯(2×65ml)和10∶1H2O∶饱和NaCl水溶液 (75ml)中分配。合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩。所得固体用1∶1 己烷∶乙醚研磨，然后用快速柱色谱法纯化(SiO2：100％己烷逐渐至 60∶40己烷∶EtOAc)，得到3-(4-甲基苯基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-2，4(1H，3H)- 二酮(1-3)，为黄褐色固体。LRMS m/z：C13H10N2O2S(M+H)的计算值 259.3，实测值259.3。

步骤3：2-(2-溴苯基)-3-(4-甲基苯基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4(3H)-酮(1-4)

将3-(4-甲基苯基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(1-3，486mg， 1.88mmol，1当量)的无水二氯甲烷(15ml)悬浮液冷却至0℃，用2，6- 二甲基吡啶(0.263ml，2.26mmol，1.20当量)处理，再用三氟甲烷磺酸 酐(0.348ml，2.07mmol，1.10当量)处理。所得混合物升温至23℃并搅 拌3小时。反应混合物在二氯甲烷(50ml)和H2O(55ml)之间分配，有 机层经Na2SO4干燥并浓缩。残余物、2-溴苯基硼酸(378mg，1.88mmol， 1.00当量)、磷酸钾(399mg，1.88mmol，1.00当量)和四(三苯基膦)合钯 (109mg，0.094mmol，0.050当量)的无水二烷(10ml)的脱氧溶液一起 在90℃搅拌41小时。反应混合物在乙酸乙酯(2×55ml)和NaHCO3水 溶液(60ml)之间分配，合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩。残余物 用反相HPLC纯化(乙腈：H2O梯度，含0.1％TFA)，得到2-(2-溴苯 基)-3-(4-甲基苯基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4(3H)-酮(1-4)，为褐色油状物。

1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.57(d，1H，J＝5.9Hz)，7.51(d，1H， J＝5.9Hz)，7.46(d，1H，J＝7.6Hz)，7.41(dd，1H，J＝6.1，1.5Hz)，7.29 (bd，1H，J＝6.6Hz)，7.24(bt，1H，J＝6.8Hz)，7.17(td，1H，J＝6.4，1.7 Hz)，7.15-7.08(m，3H)，2.24(s，3H)。

发明背景