结缔组织、细胞外基质组分和基底膜是所有哺乳动物需要的组 分。这些组分是给生物系统包括人和其它哺乳动物提供刚性、分化、 连接并在一些情况下提供弹性的生物物质。结缔组织组分包括，例如， 胶原，弹性蛋白，蛋白多糖，纤连蛋白和核纤层蛋白。这些生化物质 构成了如下结构或者是如下结构的组分，如皮肤、骨、牙齿、腱、软 骨、基底膜、血管、角膜和玻璃体。
在正常条件下，结缔组织更新和/或修复过程是是受到控制和处 于平衡的。不论何种原因造成的此平衡的丧失都会导致一些疾病。抑 制造成平衡丧失的酶给该组织的分解提供了控制机制，并因此为这 些疾病提供了治疗手段。
结缔组织或结缔组织组分的退化是通过宿主组织细胞和/或侵入 的炎性或肿瘤细胞所释放的蛋白酶的作用进行的。参与此功能的主要 类型的酶是锌金属蛋白酶(metalloproteinase)(金属蛋白酶 (metalloprotease)，或MMP)。
所述金属蛋白酶分为若干类，其中一些成员具有若干不同的通 用名。实例为：胶原酶I(MMP-1，成纤维细胞胶原酶；EC 3.4.24.3)； 胶原酶II(MMP-8，嗜中性白细胞胶原酶；EC 3.4.24.34)，胶原酶 III(MMP-13)，溶基质素1(MMP-3；EC 3.4.24.17)，溶基质素 2(MMP-10；EC 3.4.24.22)，蛋白聚糖酶，基质蛋白溶素 (matrilysin)(MMP-7)，明胶酶A(MMP-2，72kDa明胶酶，基底膜胶 原酶；EC 3.4.24.24)，明胶酶B(MMP-9，92kDa明胶酶；EC 3.4.24.35)，溶基质素3(MMP-11)，金属弹性蛋白酶(MMP-12，HME， 人巨噬细胞弹性蛋白酶)和膜MMP(MMP-14)。MMP是代表基质金属蛋 白酶术语的缩写或首字母缩略词，其后缀接数字，以示MMP组的特定 成员之间的区别。
金属蛋白酶造成的结缔组织非控制性破坏是很多疾病的特征。实 例包括类风湿性关节炎，骨关节炎，脓毒性关节炎；角膜、表皮或胃 溃疡；肿瘤转移、侵入或血管生成；牙周病；蛋白尿；早老性痴呆；冠 状动脉血栓形成和骨疾病。也可以发生有缺陷的损伤修复过程。这可 以造成不适当的伤口愈合，导致修复性差、粘连和疤痕。由于术后粘 连，后面的这些缺陷可导致损形和/或永久性残疾。
基质金属蛋白酶还参与肿瘤坏死因子(TNF)的生物合成并抑制 TNF和相关化合物的生成或作用，并且是重要的临床疾病治疗机制。， 例如，TNF-α，是目前被认为开始以28kD的结合细胞分子的形式产生 的细胞因子。其以具有活性的17kD的形式释放，在体外和体内可以 介导大量的有害作用。例如，TNF可以引起和/或造成炎性作用、类 风湿性关节炎，自身免疫性疾病，多发性硬化，移植物排斥反应，纤 维化疾病，癌症，传染病，疟疾，分支杆菌感染，脑膜炎，发烧，牛 皮癣，心血管/肺作用如局部缺血后再灌注损伤、充血性心力衰竭、 出血、凝血、氧过多性肺泡损伤，放射伤害和急相反应如在传染病和 败血症中所见以及在休克如脓毒性休克和血液动力性休克中所见。活 性TNF的慢性释放可以引起恶病质和厌食。TNF可以是致命的。
TNF-α转化酶是参与活性TNF-α形成的金属蛋白酶。抑制TNF-α 转化酶就抑制了活性TNF-α的产生。抑制两种MMP活性的化合物已公 开于国际专利申请WO 94/24140、WO 94/02466、WO 97/20824和 EP0780386 A1。需要有效的MMP和TNF-α转化酶抑制剂。已表明抑制 MMP如胶原酶、溶基质素和明胶酶的化合物抑制TNF的释放(Gearing 等，Nature 376，555-557(1994)，McGeehan等，Nature 376， 558-561(1994))。
MMP也参与哺乳动物的其它生化过程。其中包括控制排卵、产后 子宫恢复、可能的移植、APP(β-淀粉样前体蛋白)裂解为淀粉样斑及 灭活α1-蛋白酶抑制剂(α1-PI)。对这些金属蛋白酶的抑制给生育控制 及治疗或预防早老性痴呆提供了可能。此外，增加并维持内源性或外 源性给药的丝氨酸蛋白酶抑制剂药物或生化物质如α1-PI的水平，有 利支持了对如下疾病的治疗和预防：例如，肺气肿、肺病、炎性疾病 和老化病如皮肤或器官拉伸和回弹性的丧失。
在其它情况下选择性抑制MMP也可能是需要的。治疗癌症和/或 抑制转移和/或抑制血管生成是对治疗疾病进行研究的实例，其中选 择性抑制的溶基质素(MMP-3)、明胶酶(MMP2)、明胶酶B(MMP-9)或胶 原酶III(MMP-13)是所要抑制的相对来说最重要的一种或多种酶，特 别是与胶原酶I(MMP-1)相比时。不能抑制胶原酶I的药物可以具有 优异的治疗价值。骨关节炎，另一种普遍的疾病，据信其中发炎关节 中的软骨退化至少部分是由细胞如激活的软骨细胞释放的MMP-13引 起的，可以通过使用其作用方式之一是抑制MMP-13的药物得到最好 的治疗。见，例如，Mitchell等，J.Clin.Invest.，97：761-768 (1996)和Reboul等，J.Clin.Invest.，97：2011-2019(1996)。
金属蛋白酶的抑制剂是已知的。实例包括天然生化物质如金属蛋 白酶的组织抑制剂(TIMP)、α2-巨球蛋白及其类似物或衍生物。这些 是高分子量的蛋白分子，它们与金属蛋白酶形成灭活的复合物。对一 些较小的抑制金属蛋白酶的肽类化合物已进行了描述。巯基酰胺肽基 衍生物已显示出了体外和体内的ACE抑制性。血管紧张素转化酶(ACE) 有助于血管紧张素II的产生，血管紧张素II是哺乳动物中强的增高 血压的物质，而抑制此酶导致血压的降低。
以含有硫醇基团的酰胺或肽基酰胺为基础的金属蛋白酶(MMP)抑 制剂是已知的，例如，见WO95/12389、WO96/11209和U.S. 4,595,700。含有异羟肟酸酯基团的MMP抑制剂公开于一些公开的专 利申请中，如WO 95/29892、WO 97/24117、WO 97/49679和EP 0 780 386，其公开了碳骨架的化合物，以及WO 90/05719、WO 93/20047，WO 95/09841和WO 96/06074，其公开了具有肽基骨架或拟肽基骨架的 异羟肟酸酯，正如Schwartz等，Progr.Med.Chem.，29：271-334 (1992)和Rasmussen等，Pharmacol.Ther.，75(1)：69-75(1997) 及Denis等，Invest.New Drugs，15(3)：175-185(1997)所述。
已知MMP抑制剂可能带来的问题之一是这些化合物常常对每种 MMP酶表现出相同或相似的抑制作用。例如，据报告称为巴马司他的 拟肽异羟肟酸酯对MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7和MMP-9中的每一 种的IC50值都是约1至约20nM。据报告另一种拟肽异羟肟酸酯 Marimastat，是另一种广谱的MMP抑制剂，其具有与巴马司他非常 相似的酶抑制谱，不同的是marimastat对MMP-3的IC50值为230nM。 Rasmussen等，Pharmacol.Ther.，75(1)：69-75(1997)。
对晚期的、恶化迅速的、难以医治的实体瘤癌(结肠直肠、胰腺、 卵巢、前列腺)患者用marimastat进行的I/II期研究得到的数据进 行系统分析(Meta analysis)，在用作生物活性替代标记物的癌症特 异性抗原的出现方面显示出了剂量依赖性的降低。虽然借助于这些标 记物marimastat显示出了一些效力指标，但是毒副作用很显著。在 这些临床实验中marimastat的最普通的与药物有关的毒性，是肌肉 与骨骼的疼痛和强直，常常开始于手的小关节，向手臂和肩部扩展。 短期停药1-3周后，接着降低剂量，使治疗得以延续。Rasmussen等， Pharmacol.Ther.，75(1)：69-75(1997)。人们认为对多种MMP的 抑制作用缺乏特异性可能是此副作用的诱因。
综观异羟肟酸酯MMP抑制剂化合物在治疗若干疾病的重要性，以 及临床现在使用的两种效力较强药物的酶特异性的缺乏，如果发现酶 特异性更大的异羟肟酸酯，将带来极大的益处。如果所述异羟肟酸酯 抑制剂对与若干病症有关的MMP-2、MMP-9或MMP-13中的一种或多 种表现出了强抑制活性，同时对相对而言普遍存在且尚没有与任何 病症相关的酶MMP-1表现出有限的抑制性，则切中下怀。如果一种化 合物抑制上述MMP的一种或多种，同时较少抑制MMP-1，还不抑制TNF 的产生，则其也是有利的。下面的公开内容描述了具有所需活性的一 类异羟肟酸酯MMP抑制剂。
发明概述
本发明涉及一类分子，其除了其它性质以外，抑制基质金属蛋白 酶(MMP)活性，并特别抑制一种或多种MMP-2、MMP-9或MMP-13的活 性，同时一般对MMP-1几乎不表现出活性。所涉及的化合物对TNF 的产生也几乎不表现出抑制。本发明还涉及制备所述化合物的方法以 及治疗患有与病理性基质金属蛋白酶活性有关病症的哺乳动物的方 法。
简言之，本发明的一个实施方案涉及具有基质金属蛋白酶抑制 剂活性的α-氨基-β-磺酰基碳环、杂环、芳基或杂芳基异羟肟酸化合 物。这些化合物相应于式A结构：
其中
R2选自如下基团：氢原子(hydrido)、C1-C4烃基、羟基-C1-C4烃 基、C1-C4烃基氧基、卤代-C1-C4烃基、C1-C4烃基氧基甲基、芳基、 芳基C1-C4烃基、氨基甲基、(N-C1-C3烃基)氨基甲基、(N，N-二-C1-C3 烃基)氨基甲基、(N-吗啉代)甲基、(N-吡咯烷子基(pyrrolidino)) 甲基、或(N-硫代吗啉代)甲基。R2优选氢原子、羟基、羟基甲基、甲 氧基甲基或甲基-N-吗啉基。
R1是一个取代基，其含有任选被取代的5或6元碳环、杂环、芳 基或杂芳基，其直接与所述SO2-基团键接，其具有大于延展的戊基并 小于约延展的二十烷基的长度，并优选具有大于延展的己基并小于 延展的硬脂基的长度。此外，以SO2-键接的1位与6元环基团的4 位连线为轴或者以SO2-键接的1位与5元环基团的3、4位键的中心 连线为轴旋转，R1限定三维体积，其横向距旋转轴的最大宽度约为一 个呋喃基环至约两个苯环的宽度。
R6和R7独立地选自如下基团：氢原子、烷基羰基、烷氧羰基、芳 基羰基、芳烷基羰基、羧基烷基、羧基烷基羰基、烷氧羰基氨基烷基 羰基、杂环羰基、杂环烷基羰基、芳氧羰基氨基烷基羰基、芳基烷氧 羰基氨基烷基羰基、全氟烷基羰基、三氟甲基烷基羰基、烷硫基烷基 羰基、芳硫基烷基羰基、芳烷硫基烷基羰基、杂芳烷硫基烷基羰基、 或任何所述硫代取代基的砜或亚砜、烷基磺酰基、芳基磺酰基、及氨 基羰基烷基或氨基羰基烷基羰基，
其中氨基羰基烷基或氨基羰基烷基羰基的氮原子是(i)未被取 代的，或(ii)是氨基酸的反应后的胺，或(iii)被选自如下的一个 或两个基团取代：烷基、羟基烷基、羟基杂芳烷基、环烷基、芳烷基、 三氟甲基烷基、杂环烷基、苯并稠合的杂环烷基、苯并稠合的杂环烷 基、苯并稠合的环烷基和N，N-二烷基取代的烷基氨基烷基，或(iv) 羧酰氨基氮原子和其上连接的两个取代基一起形成5至8元杂环、杂 芳基或苯并稠合的杂环烷基环，其本身未被取代或或被1或2个独立 地选自如下的基团取代：烷基、烷氧羰基、硝基、杂环烷基、羟基、 羟基羰基、芳基、芳烷基、杂芳烷基和氨基，或者
R6和R7与所述氮原子一起形成饱和或不饱和环酰亚胺取代基，其 中该环含有5至8个原子。
R20是(a)-O-R21，其中R21选自如下基团：氢原子、C1-C6-烷基、 芳基、芳基-C1-C6-烷基和药学可接受的阳离子，(b)-NR13-O-R22，其 中R22是可选择除去的保护基如2-四氢吡喃基、苄基、对甲氧基苄基 (MOZ)、羰基-C1-C6-烷氧基、三取代的甲硅烷基或邻硝基苯基、肽合 成树脂等，其中三取代的甲硅烷基被C1-C6-烷基、芳基或芳基-C1-C6- 烷基取代，而R13是氢原子、C1-C6-烷基或苄基，或(c)-NR13-O-R14，其 中R13定义如上，而R14是氢原子、药学可接受的阳离子或C(W)R15基 团，其中W是O或S，且R15选自如下基团：C1-C6-烷基、芳基、C1- C6-烷氧基、杂芳基-C1-C6-烷基、C3-C8环烷基-C1-C6-烷基、芳氧基、 芳基-C1-C6-烷氧基、芳基-C1-C6-烷基、杂芳基和氨基C1-C6-烷基，其 中氨基烷基的氮原子是(i)未被取代或(ii)被1或2个独立地选自如 下基团的取代基取代：C1-C6-烷基、芳基、芳基-C1-C6-烷基、C3-C8- 环烷基-C1-C6-烷基、芳基-C1-C6-烷氧羰基、C1-C6-烷氧羰基和C1-C6- 烷酰基，或(iii)其中氨基C1-C6-烷基的氮原子和连接在其上的两个 取代基形成5至8元杂环或杂芳基环。
直接与所述SO2-基团键接的5或6元碳环、杂环、芳基或杂芳基 构成R1基团，其中R1的5或6元碳环、杂环、芳基或杂芳基本身任 选地被-A-R-E-Y取代基取代。在这样的-A-R-E-Y取代基中，A选自 如下的基团：
(1)-O-；
(2)-S-；
(3)-NRk-；
(4)-CO-N(Rk)或-N(Rk)-CO-；
(5)-CO-O-或-O-CO-；
(6)-O-CO-O-；
(7)-HC＝CH-；
(8)-NH-CO-NH-；
(9)-C≡C-；
(10)-N＝N-；
(11)-NH-NH-；
(12)-CS-N(Rk)-或-N(Rk)-CS-；
(13)-CH2-；
(14)-O-CH2-或-CH2-O-；
(15)-S-CH2-或-CH2-S-；
(16)-SO-；而
(17)-SO2-；或
(18)A不存在而R直接键接至所述的SO2-键接的5-或6-元环基 团。
部分R选自如下的基团：烷基、烷氧基、卤素、烷氧基烷基、芳 基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、环 烷基、环烷氧基烷基、杂环烷氧基烷基、芳氧基烷基、杂芳氧基-烷 基、芳硫基烷基、杂芳硫基烷基、环烷硫基烷基和杂环烷硫基烷基，其 中所述芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基取代基(i)未被取代或(ii) 被1或2个选自如下的基团取代：卤素、烷基、全氟烷基、全氟烷氧 基、全氟烷硫基、三氟甲基烷基、氨基、烷氧羰基烷基、烷氧基、C1-C2- 亚烷二氧基、羟基羰基烷基、羟基羰基烷基氨基、硝基、羟基、羟基 烷基、烷酰基氨基和烷氧羰基。
基团E选自如下的基团：
(1)-CO(Rg)-或-(Rg)CO-；
(2)-CON(Rk)-或-(Rk)NCO-；
(3)-CO-；
(4)-SO2-Rg或-RgSO2-；
(5)-SO2-；
(6)-N(Rk)-SO2-或-SO2-N(Rk)-；或
(7)E不存在而R直接键接Y；而
Y不存在或选自如下基团：氢原子、烷基、烷氧基、卤代烷基、 芳基、芳烷基、环烷基、杂芳基、羟基、腈、硝基、芳氧基、芳烷氧 基、杂芳氧基、杂芳烷基、Rc氧基烷基、全氟烷氧基、全氟烷硫基、 三氟甲基烷基、链烯基、杂环烷基、环烷基、三氟甲基、烷氧羰基和 氨基烷基，其中所述芳基、杂芳基或杂环烷基(i)未被取代或(ii)被 1或2个独立地选自如下的基团取代：烷酰基、卤素、硝基、腈、卤 代烷基、烷基、芳烷基、芳基、烷氧基和氨基，其中氨基氮原子(i) 未被取代或(ii)被1或2个独立地选自如下的基团取代：氢原子、烷 基和芳烷基。
优选，-R1取代基是取代基-G-A-R-E-Y，其中
G是芳基或杂芳基；
取代基A选自如下的基团：
((1)-O-；
(2)-S-；
(3)-NRk-；
(4)-CO-N(Rk)或-N(Rk)-CO-；
(5)-CO-O-或-O-CO-；
(6)-O-CO-O-；
(7)-HC＝CH-；
(8)-NH-CO-NH-；
(9)-C≡C-；
(10)-N＝N-；
(11)-NH-NH-；
(12)-CS-N(Rk)-或-N(Rk)-CS-；
(13)-CH2-；
(14)-O-CH2-或-CH2-O-；
(15)-S-CH2-或-CH2-S-；
(16)-SO-；和
(17)-SO2-；或
(18)A不存在而R直接键接N-杂环基团，G。
R部分选自如下的基团：烷基、烷氧基、卤素、烷氧基烷基、芳 基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、环 烷基、环烷氧基烷基、杂环烷氧基烷基、芳氧基烷基、杂芳氧基烷基、 芳硫基烷基、杂芳硫基烷基、环烷硫基烷基和杂环烷硫基烷基，其中 所述芳基或杂芳基或环烷基或杂环烷基取代基(i)未被取代或(ii)被 1或2个选自如下的基团取代：卤素、烷基、全氟烷基、全氟烷氧基、 全氟烷硫基、三氟甲基烷基、氨基、烷氧羰基烷基、烷氧基、C1-C2- 亚烷二氧基、羟基羰基烷基、羟基羰基烷基氨基、硝基、羟基、羟基 烷基、烷酰基氨基和烷氧羰基；
E部分选自如下的基团：
(1)-CO(Rg)-或-(Rg)CO-；
(2)-CON(Rk)-或-(Rk)NCO-；
(3)-CO-；
(4)-SO2-Rg-或-Rg-SO2-；
(5)-SO2-；
(6)-N(Rk)-SO2-或-SO2-N(Rk)-；或
(7)E不存在而R直接键接Y；而
Y部分不存在或选自如下基团：氢原子、烷基、烷氧基、卤代烷 基、芳基、芳烷基、环烷基、杂芳基、羟基、腈、硝基、芳氧基、芳 烷氧基、杂芳氧基、杂芳烷基、RC氧基烷基、全氟烷氧基、全氟烷硫 基、三氟甲基烷基、链烯基、杂环烷基、环烷基、三氟甲基、烷氧羰 基和氨基烷基，其中所述芳基、杂芳基或杂环烷基(i)未被取代或(ii) 被1或2个独立地选自如下的基团取代：烷酰基、卤素、硝基、腈、 卤代烷基、烷基、芳烷基、芳基、烷氧基和氨基，其中氨基氮原子(i) 未被取代或(ii)被1或2个独立地选自如下的基团取代：氢原子、烷 基和芳烷基；而其中
Rd和Re独立地选自如下基团：氢原子、烷基、链烯基、链烯基、 芳基烷基、芳基、烷酰基、芳酰基、芳基烷基羰基、烷氧羰基或芳烷 氧羰基；
Rf选自如下基团：硝基、羟基、烷基、卤素(halo；F、Cl、Br、 I)、芳基、烷氧基、氰基和RdRe氨基；
Rg选自如下基团：氢原子、芳基、杂芳基、杂环、芳酰基、烷酰 基、杂芳酰基、卤素(F、Cl、Br、I)、氰基、醛基(aldehydo)(CHO、 甲酰基)、羟基、氨基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环链烯基、 烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、链烯基氧基、链炔基氧基、烷氧基芳基、 烷氧基杂芳基、RhRi-氨基、烷氧基烷基、亚烷二氧基、芳氧基烷基、 全氟烷基、三氟烷基、烷硫基、芳硫基、烷氧羰基、烷氧羰基氧基、 芳氧羰基、芳烷氧羰基、芳烷氧羰基氨基、芳氧羰基氧基、羧基、RhRi- 氨基羰基氧基、RhRi-氨基羰基、RhRi-氨基烷酰基、羟基氨基羰基、 RhRi-氨基磺酰基、RhRi-氨基羰基(Rh)氨基、三氟甲基磺酰基-(Rh)氨 基、杂芳基磺酰基(Rh)氨基、芳基磺酰基(Rh)氨基、芳基磺酰基(Rh) 氨基羰基、烷基磺酰基(Rh)氨基、芳基羰基(Rh)氨基磺酰基和烷基磺 酰基(Rh)氨基羰基取代基；
其中Rh选自如下基团：芳基烷基、芳基、杂芳基、杂环、烷基、 链炔基、链烯基、烷氧基烷基、被取代的或未被取代氨基烷基、烷氧 羰基、芳烷氧羰基、羧基烷基、卤代烷基、烷酰基、芳酰基、被取代 的或未被取代氨基烷酰基、卤代烷酰基和羟基烷基，其中各基团任选 地被1或2个独立地选自Rj的取代基取代，如被取代的氨基烷基和 被取代的氨基烷酰基的取代基；
Ri选自如下基团：芳基烷基、芳基、杂芳基、杂环、烷基、链炔 基、链烯基、烷氧基烷基、烷氧基烷基、被取代的或未被取代氨基烷 基、烷氧羰基、芳烷氧羰基、羧基烷基、卤代烷基、烷酰基、芳酰基、 被取代的或未被取代氨基烷酰基、卤代烷酰基和羟基烷基，其中各基 团任选地被1或2个Rj取代基取代；
Rj选自如下基团：芳基烷基、芳基、杂芳基、杂环、烷基、链炔 基、链烯基、烷氧基烷基、烷氧基烷基、被取代的或未被取代氨基烷 基、烷氧羰基、芳烷氧羰基、羧基烷基、卤代烷基、烷酰基、芳酰基、 被取代的或未被取代氨基烷酰基、卤代烷酰基和羟基烷基，其中被取 代的氨基烷基和被取代的氨基烷酰基的取代基选自如下的基团：烷 基、链烯基、链烯基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、芳氧 羰基和烷氧羰基；而
Rk选自氢原子，烷基，链烯基，链烯基，芳基，芳基烷基，杂芳 基，杂芳基烷基，芳氧羰基，烷氧羰基，RcRd氨基羰基，RcRd氨基磺 酰基，RcRd氨基烷酰基和RcRd氨基烷基磺酰基而Ra、Rc、Rd和Rg如上 所述。
本发明也涉及了治疗患有与病理性基质蛋白酶活性有关病症的 宿主哺乳动物的方法。该方法包含给患有此病症的哺乳动物使用抑制 MMP酶有效量的相应于式B结构的化合物，其选择性抑制一种或多种 MMP，同时对至少MMP-1表现出较小的活性。所述化合物还基本上不 抑制TNF的产生。
其中R1、R2、R6、R7、R13和R14定义如上。优选，R2、R6和R13是 氢原子，而R7是R7A，其中R7A选自如下的基团：烷基羰基、烷氧羰基、 芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基烷基羰基、氨基芳烷基羰 基、烷氧羰基氨基烷基羰基、烷氧羰基氨基芳烷基羰基、环烷氧羰基 氨基烷基羰基、环烷氧羰基氨基芳烷基羰基、芳氧羰基氨基烷基羰 基、芳氧羰基氨基芳烷基羰基、芳基烷氧羰基氨基烷基羰基、芳基烷 氧羰基氨基烷基羰基、杂芳氧羰基氨基烷基羰基和杂芳氧羰基氨基芳 烷基羰基。
还涉及特别优选的式A化合物制备中的中间体化合物。这些化合 物具有相应于下式C的结构，
其中R2、R6、R7和R20如上所述而D是亲核性可置换的离去基团 如-F或-NO2。
用于制备所述MMP抑制剂的特别优选的中间体相应于下式D的结 构，其中R1、R2、R6、R7和R13如上所述。
在本发明的若干利益和优点中，包括提供了多种化合物和组合 物，它们有效抑制牵涉与结缔组织失控破坏有关的疾病和紊乱的金 属蛋白酶。
更具体地讲，本发明的一个利益是提供了一种化合物和组合物， 其有效抑制金属蛋白酶，特别是MMP-13和/或MMP-2，及有关的病症， 例如，类风湿性关节炎，骨关节炎，脓毒性关节炎，角膜，表皮或胃 溃疡，肿瘤转移、侵入或血管生成，牙周病，蛋白尿，早老性痴呆，冠 状动脉血栓形成，斑形成和骨疾病。
本发明的有关优点是提供了制备这些化合物和组合物的方法。 另一个益处是提供了治疗与异常基质金属蛋白酶活性有关病症的方 法。
本发明的另一个益处是所涉及的化合物一般抑制MMP-2的能力 等于至大于抑制MMP-13的能力，同时维持少量的(较小的)对MMP-1 的抑制活性。
本发明的另一个优点是提供了，通过对其活性是正常身体功能 必需或需要的的其它蛋白酶例如MMP-1的抑制所导致副作用最小的 同时，选择性抑制与这种病症相关的金属蛋白酶如MMP-13和MMP-2 而有效治疗病症的化合物、组合物和方法。
所涉及化合物的另一个优点是对肿瘤坏死因子释放和/或肿瘤坏 死因子受体释放的选择性，这种选择性为帮助医师给特定患者选择 最佳药物提供了其它因素。虽然不希望受限于任何理论，据信对于所 述此类选择性存在若干因素。
首先是肿瘤坏死因子的存在可能是该生物体中控制癌症所需要 的，只要TNF不过量存在造成毒性。因此，对TNF释放的抑制的失控 可能是不利的，而即使在癌症患者中实际上可能也成为副作用。此 外，与肿瘤坏死因素受体释放的抑制有关的选择性也可以是理想的。 受体的存在可能是通过结合过量的TNF来维持哺乳动物体内可控制 的肿瘤坏死水平所需要的。
从如下公开的内容中，本领域技术人员显而易见本发明的其它 益处和优点。
发明详述
按照本发明，已发现某些α-氨基-β-磺酰基碳环、杂环、芳基或 杂芳基异羟肟酸(异羟肟酸酯)特别是有效抑制被公认为与结缔组织 破坏的失控或换言之结缔组织的病理性破坏有关的基质金属蛋白酶 (“MMP”)。具体地讲，已发现这些某种α-氨基-β-磺酰基碳环、杂环、 芳基或杂芳基异羟肟酸化合物有效抑制胶原酶III(MMP-13)及明胶 酶A(MMP-2)，其如果存在或者以异常量或浓度产生则对组织可以特 别具有破坏性，并因此表现出病理活性。
此外，现已发现多种这样的α-氨基-β-磺酰基碳环、杂环、芳基 或杂芳基异羟肟酸选择性抑制与病症有关的MMP，而不过量抑制正常 身体功能如组织更新和修复所必需的其他胶原酶。更具体地讲，已发 现特别优选的α-氨基-β-磺酰基碳环、杂环、芳基或杂芳基异羟肟酸 化合物在抑制MMP-13和/或MMP-2方面特别具有活性，同时对MMP- 1具有有限的或最小的作用。此点在下文中详述并举例说明于下文的 抑制表中。
本发明的一个实施方案涉及α-氨基-β-磺酰基碳环、杂环、芳基 或杂芳基异羟肟酸化合物，可以作为基质金属蛋白酶抑制剂的所述 化合物的可药用盐，所述化合物的前体或其前药形式。所述化合物相 应于式A的结构，
其中
R2选自如下基团：氢原子、C1-C4烃基、羟基-C1-C4烃基、C1-C4 烃基氧基、卤代-C1-C4烃基、C1-C4烃基氧基甲基、芳基、芳基C1-C4 烃基、氨基甲基、(N-C1-C3烃基)氨基甲基、(N，N-二-C1-C3烃基)氨基 甲基、(N-吗啉代)甲基、(N-吡咯烷子基)甲基或(N-硫代吗啉代)甲 基。R2优选氢原子、羟基、羟基甲基、甲氧基甲基、C1-C4烃基(如甲 基)、芳基(苯基)或甲基-N-吗啉基，其中更优选苯基或C1-C4烃基；
R1是一个取代基，其含有任选被取代的5或6元碳环、杂环、芳 基或杂芳基，其直接与所述SO2-基团键接，其具有大于延展的戊基并 小于约延展的二十烷基的长度。此外，以SO2-键接的1位与6元环基 团的4位连线为轴或者以SO2-键接的1位与5元环基团的3、4位键 的中心连线为轴旋转，R1限定三维体积，其横向距旋转轴的最大宽度 约为一个呋喃基环至约两个苯环的宽度；R1优选具有大于延展的己基 并小于延展的硬脂基的长度。
R6和R7独立地选自如下基团：氢原子、烷基羰基、烷氧羰基、芳 基羰基、芳烷基羰基、羧基烷基、羧基烷基羰基、烷氧羰基氨基烷基 羰基、杂环羰基、杂环烷基羰基、芳氧羰基氨基烷基羰基、芳基烷氧 羰基氨基烷基羰基、全氟烷基羰基、三氟甲基烷基羰基、烷硫基烷基 羰基、芳硫基烷基羰基、芳烷硫基烷基羰基、杂芳烷硫基烷基羰基、 或任何所述硫代取代基的砜或亚砜、烷基磺酰基、芳基磺酰基和氨基 羰基烷基或氨基羰基烷基羰基，
其中氨基羰基烷基或氨基羰基烷基羰基氮原子(i)未被取代，或 (ii)是氨基酸的反应后的胺，或(iii)被1或2个选自如下的基团 取代：烷基、羟基烷基、羟基杂芳烷基、环烷基、芳烷基、三氟甲基 烷基、杂环烷基、苯并稠合的杂环烷基、苯并稠合的杂环烷基、苯并 稠合的环烷基和N，N-二烷基取代的烷基氨基烷基，或(iv)羧酰氨基 氮原子和其上连接的两个取代基一起形成5至8元杂环、杂芳基或苯 并稠合的杂环烷基环，其本身未被取代或被1或2个独立地选自如下 的基团取代：烷基、烷氧羰基、硝基、杂环烷基、羟基、羟基羰基、 芳基、芳烷基、杂芳烷基和氨基，或
R6和R7与所述氮原子一起形成饱和或不饱和环酰亚胺取代基，其 中该环含有5至8个原子；
R6是优选氢原子，而R7是优选烷基羰基、烷氧羰基、芳基羰基、 烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基烷基羰基或被取代的氨基烷基羰基如 烷氧羰基氨基烷基羰基、环烷氧羰基氨基烷基羰基、芳氧羰基氨基烷 基羰基、芳基烷氧羰基氨基烷基羰基或杂芳氧羰基氨基烷基羰基；
R20是(a)-O-R21，其中R21选自如下基团：氢原子、C1-C6-烷基、 芳基、芳基-C1-C6-烷基和药学可接受的阳离子，(b)-NR13-O-R22，其 中R22是可选择除去的保护基如2-四氢吡喃基、苄基、对甲氧基苄基 (MOZ)、羰基-C1-C6-烷氧基、三取代的甲硅烷基或邻硝基苯基、肽合 成树脂等，其中三取代的甲硅烷基被如下基团取代：C1-C6-烷基、芳 基或芳基-C1-C6-烷基，而R13是氢原子、C1-C6-烷基或苄基，或(c) -NR13-O-R14，其中R13如上所述，而R14是氢原子、药学可接受的阳离 子或C(W)R15基团，其中W是O或S，而R15选自如下基团：C1-C6-烷 基、芳基、C1-C6-烷氧基、杂芳基-C1-C6-烷基、C3-C8环烷基-C1-C6- 烷基、芳氧基、芳基-C1-C6-烷氧基、芳基-C1-C6-烷基、杂芳基和氨 基C1-C6-烷基，其中氨基烷基的氮原子(i)未被取代或(ii)被1或2 个独立地选自如下基团的取代基取代：C1-C6-烷基、芳基、芳基-C1- C6-烷基、C3-C8环烷基-C1-C6-烷基、芳基-C1-C6-烷氧羰基、C1-C6-烷 氧羰基和C1-C6-烷酰基，或(iii)其中氨基C1-C6-烷基的氮原子和连 接在其上的两个取代基形成5至8元杂环或杂芳基环；
直接与所述SO2-基团键接的5或6元碳环、杂环、芳基或杂芳基 构成R1基团，其中R1的5或6元碳环、杂环、芳基或杂芳基本身任 选地被-A-R-E-Y取代基取代。在这样的-A-R-E-Y取代基中，A选自 如下的基团：
(1)-O-；
(2)-S-；
(3)-NRk-；
(4)-CO-N(Rk)或-N(Rk)-CO-；
(5)-CO-O-或-O-CO-；
(6)-O-CO-O-；
(7)-HC＝CH-；
(8)-NH-CO-NH-；
(9)-C≡C-；
(10)-N＝N-；
(11)-NH-NH-；
(12)-CS-N(Rk)-或-N(Rk)-CS-；
(13)-CH2-；
(14)-O-CH2-或-CH2-O-；
(15)-S-CH2-或-CH2-S-；
(16)-SO-；而
(17)-SO2-；或
(18)A不存在而R直接键接至所述的SO2-键接的5-或6-元环基 团。
R部分选自如下的基团：烷基、烷氧基、卤素、烷氧基烷基、芳 基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、环 烷基烷基、环烷氧基烷基、杂环烷氧基烷基、芳氧基烷基、杂芳氧基 -烷基、芳硫基烷基、杂芳硫基烷基、环烷硫基烷基和杂环烷硫基烷 基，其中所述芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基取代基(i)未被取代 或(ii)被1或2个选自如下的基团取代：卤素、烷基、全氟烷基、全 氟烷氧基、全氟烷硫基、三氟甲基烷基、氨基、烷氧羰基烷基、烷氧 基、C1-C2-亚烷二氧基、羟基羰基烷基、羟基羰基烷基氨基、硝基、 羟基、羟基烷基、烷酰基氨基和烷氧羰基。
基团E选自如下的基团：
(1)-CO(Rg)-或-(Rg)CO-；
(2)-CON(Rk)-或-(Rk)NCO-；
(3)-CO-；
(4)-SO2-Rg或-RgSO2-；
(5)-SO2-；
(6)-N(Rk)-SO2-或-SO2-N(Rk)-；或
(7)E不存在而R直接键接Y；而
Y不存在或选自如下基团：氢原子、烷基、烷氧基、卤代烷基、 芳基、芳烷基、环烷基、杂芳基、羟基、腈、硝基、芳氧基、芳烷氧 基、杂芳氧基、杂芳烷基、Rc氧基烷基、全氟烷氧基、全氟烷硫基、 三氟甲基烷基、链烯基、杂环烷基、环烷基、三氟甲基、烷氧羰基和 氨基烷基，其中所述芳基、杂芳基或杂环烷基(i)未被取代或(ii)被 1或2个独立地选自如下的基团取代：烷酰基、卤素、硝基、腈、卤 代烷基、烷基、芳烷基、芳基、烷氧基和氨基，其中氨基氮原子(i) 未被取代或(ii)被1或2个独立地选自如下的基团取代：氢原子、烷 基和芳烷基。
优选，-R1取代基是取代基-G-A-R-E-Y，其中
G是芳基或杂芳基；
取代基A选自如下的基团：
(1)-O-；
(2)-S-；
(3)-NRk-；
(4)-CO-N(Rk)或-N(Rk)-CO-；
(5)-CO-O-或-O-CO-；
(6)-O-CO-O-；
(7)-HC＝CH-；
(8)-NH-CO-NH-；
(9)-C≡C-；
(10)-N＝N-；
(11)-NH-NH-；
(12)-CS-N(Rk)-或-N(Rk)-CS-；
(13)-CH2-；
(14)-O-CH2-或-CH2-O-；
(15)-S-CH2-或-CH2-S-；
(16)-SO-；和
(17)-SO2-；或
(18)A不存在而R直接键接N-杂环基团，G。
R部分选自如下的基团：烷基、烷氧基、卤素、烷氧基烷基、芳 基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环烷基、环 烷基烷基、环烷氧基烷基、杂环烷氧基烷基、芳氧基烷基、杂芳氧基 烷基、芳硫基烷基、杂芳硫基烷基、环烷硫基烷基和杂环烷硫基烷基， 其中所述芳基或杂芳基或环烷基或杂环烷基取代基(i)未被取代或 (ii)被1或2个选自如下的基团取代：卤素、烷基、全氟烷基、全氟 烷氧基、全氟烷硫基、三氟甲基烷基、氨基、烷氧羰基烷基、烷氧基、 C1-C2-亚烷二氧基、羟基羰基烷基、羟基羰基烷基氨基、硝基、羟基、 羟基烷基、烷酰基氨基和烷氧羰基；
E部分选自如下的基团：
(1)-CO(Rg)-或-(Rg)CO-；
(2)-CON(Rk)-或-(Rk)NCO-；
(3)-CO-；
(4)-SO2-Rg-或-Rg-SO2-；
(5)-SO2-；
(6)-N(Rk)-SO2-或-SO2-N(Rk)-；或
(7)E不存在而R直接键接Y；而
Y部分不存在或选自如下基团：氢原子、烷基、烷氧基、卤代烷 基、芳基、芳烷基、环烷基、杂芳基、羟基、腈、硝基、芳氧基、芳 烷氧基、杂芳氧基、杂芳烷基、RC氧基烷基、全氟烷氧基、全氟烷硫 基、三氟甲基烷基、链烯基、杂环烷基、环烷基、三氟甲基、烷氧羰 基和氨基烷基，其中所述芳基、杂芳基或杂环烷基(i)未被取代或(ii) 被1或2个独立地选自如下的基团取代：烷酰基、卤素、硝基、腈、 卤代烷基、烷基、芳烷基、芳基、烷氧基和氨基，其中氨基氮原子(i) 未被取代或(ii)被1或2个独立地选自如下的基团取代：氢原子、烷 基和芳烷基；而其中
Rd和Re独立地选自如下基团：氢原子、烷基、链烯基、链烯基、 芳基烷基、芳基、烷酰基、芳酰基、芳基烷基羰基、烷氧羰基或芳烷 氧羰基；
Rf选自如下基团：硝基、羟基、烷基、卤素(halo；F、Cl、Br、 I)、芳基、烷氧基、氰基和RdRe氨基；
Rg选自如下基团：氢原子、芳基、杂芳基、杂环、芳酰基、烷酰 基、杂芳酰基、卤素(F、Cl、Br、I)、氰基、醛基(CHO、甲酰基)、 羟基、氨基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环烯基、烷氧基、芳 氧基、杂芳氧基、链烯基氧基、链炔基氧基、烷氧基芳基、烷氧基杂 芳基、RhRi-氨基、烷氧基烷基、亚烷二氧基、芳氧基烷基、全氟烷基、 三氟烷基、烷硫基、芳硫基、烷氧羰基、烷氧羰基氧基、芳氧羰基、 芳烷氧羰基、芳烷氧羰基氨基、芳氧羰基氧基、羧基、RhRi-氨基羰基 氧基、RhRi-氨基羰基、RhRi-氨基烷酰基、羟基氨基羰基、RhRi-氨基 磺酰基、RhRi-氨基羰基(Rh)氨基、三氟甲基磺酰基-(Rh)氨基、杂芳 基磺酰基(Rh)氨基、芳基磺酰基(Rh)氨基、芳基磺酰基(Rh)氨基羰基、 烷基磺酰基(Rh)氨基、芳基羰基(Rh)氨基磺酰基和烷基磺酰基(Rh)氨 基羰基取代基；
其中Rh选自如下基团：芳基烷基、芳基、杂芳基、杂环、烷基、 链炔基、链烯基、烷氧基烷基、烷氧基烷基、被取代的或未被取代氨 基烷基、烷氧羰基、芳烷氧羰基、羧基烷基、卤代烷基、烷酰基、芳 酰基、被取代的或未被取代氨基烷酰基、卤代烷酰基和羟基烷基，其 中各基团任选地被1或2个独立地选自Rj的取代基取代，如被取代 的氨基烷基和被取代的氨基烷酰基的取代基；
Ri选自如下基团：芳基烷基、芳基、杂芳基、杂环、烷基、链炔 基、链烯基、烷氧基烷基、烷氧基烷基、被取代的或未被取代氨基烷 基、烷氧羰基、芳烷氧羰基、羧基烷基、卤代烷基、烷酰基、芳酰基、 被取代的或未被取代氨基烷酰基、卤代烷酰基和羟基烷基，其中各基 团任选地被1或2个Rj取代基取代；
Rj选自如下基团：芳基烷基、芳基、杂芳基、杂环、烷基、链炔 基、链烯基、烷氧基烷基、烷氧基烷基、被取代的或未被取代氨基烷 基、烷氧羰基、芳烷氧羰基、羧基烷基、卤代烷基、烷酰基、芳酰基、 被取代的或未被取代氨基烷酰基、卤代烷酰基和羟基烷基，其中被取 代的氨基烷基和被取代的氨基烷酰基的取代基选自如下的基团：烷 基、链烯基、链烯基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、芳氧 羰基和烷氧羰基；而
Rk选自氢原子，烷基，链烯基，链烯基，芳基，芳基烷基，杂芳 基，杂芳基烷基，芳氧羰基，烷氧羰基，RcRd氨基羰基，RcRd氨基磺 酰基，RcRd氨基烷酰基和RcRd氨基烷基磺酰基而Ra、Rc、Rd和Rg如上 所述。
更优选的本发明的化合物相应于式下B1结构，
其中R1和R14定义如上，而R7A选自如下的基团：烷基羰基、烷氧 羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基烷基羰基、氨基芳 烷基羰基、烷氧羰基氨基烷基羰基、烷氧羰基氨基芳烷基羰基、环烷 氧羰基氨基烷基羰基、环烷氧羰基氨基芳烷基羰基、芳氧羰基氨基烷 基羰基、芳氧羰基氨基芳烷基羰基、芳基烷氧羰基氨基烷基羰基、芳 基烷氧羰基氨基烷基羰基、杂芳氧羰基氨基烷基羰基和杂芳氧羰基氨 基芳烷基羰基。
还包括用于制备特别优选的式A化合物的中间体化合物。这样的 中间体之一具有下式C的结构，
其中R2、R6、R7和R20如上所述，而D是亲核性可置换的离去基 团如-F或-NO2。此处，R20通常是-O-R21，其中R21一般是氢原子。
用于制备本发明MMP抑制剂的另一个特别优选的中间体相应于 下式D的结构，其中R1、R2、R6、R7和R13如上所述。
优选在式D中，R2、R6和R13优选氢原子，而R7优选是R7A。
当沿着众多原子的最长链检定时，R1取代基，包括其自身可能存 在的取代基，具有的总长度大于5个碳原子(戊基)的完全延展的饱和 链，即等于或大于交叉构象形式的己基链的长度。R1取代基还具有小 于约20个碳原子(二十烷基)的完全延展的饱和链的长度。虽然环结 构或取代基中可以存在更多的原子，但是，优选该链长大于己基而小 于硬脂基的长度。
更一般地且脱离其构成的特定部分来看，R1取代基(根、基团或 部分)具有等于或大于戊基的链长。这样的R1取代基还具有小于二十 烷基的链长。就是说R1是链长大于完全延展的饱和5碳原子链而小 于完全延展的饱和的20碳原子链的取代基，且更优选链长大于己基 而小于硬脂基的长度。这些基团链长是沿着该基团中最长的线形原子 链测量的，其次是环的骨架原子(如果需要)。在该链中每个原子，例 如，碳原子、氧原子或氮原子，都被假设为碳原子以易于计算。
这些链长可以通过如下方法容易地检测：用公开的键角、键长和 原子半径(如果需要)来绘制和检测链长，或通过用键角、键长和原子 半径位可接受的公开数值的商购试剂盒来构建模型。虽然上述检测方 式是优选的，但是(取代基)长度也可以通过假设来不很精确地设定， 本文中正是如此，即所有原子具有饱和碳的键长，不饱和和芳香键具 有与饱和键相同的长度，且不饱和键的键角与饱和键的相同。例如， 用本发明的检测方式，4-苯基或4-吡啶基具有4个碳原子链的长度， 正如丙氧基，而4-卤代苯基具有5个碳原子链的链长，而联苯基具 有约8个碳原子链的链长。
此外，R1取代基，以SO2-键接的1位与6元环基团的4位连线为 轴或者以SO2-键接的1位与5元环基团的3、4位键的中心连线为轴 旋转，限定的三维体积，其横向距旋转轴的最大宽度约为一个呋喃基 环至约两个苯环的宽度。
当使用此宽度或体积标准时，稠环系统如萘基或嘌呤基被看作 位6或5元环，其在距SO2-键的适当位置被取代，而如上所述该SO2-键被确认位1位。因此，当用上述旋转宽度标准检测时，就宽度而言 2-萘基取代基或8-嘌呤基取代基是适当大小的R1取代基。另一方面， 1-萘基或7-或9-嘌呤基因旋转时太大而被排除。
作为这些长度和宽度要求的结果，R1取代基如4-(苯基)苯基[联 苯基]、4-(4’-甲氧基苯基)-苯基、4-(苯氧基)苯基、4-(苯硫基)苯 基[4-(苯硫基)苯基]、4-(苯偶氮基)苯基[4-(苯基脲基)苯基]、4- (苯氨基)苯基、4-(烟酰氨基)苯基、4-(异烟酰氨基)苯基、4-(吡啶 酰氨基)苯基和4-(苯甲酰氨基)苯基是特别优选的R1取代基，其中首 选4-(苯氧基)苯基和4-(苯硫基)苯基。
SO2-键接的环烃基、杂环、芳基或杂芳基是5或6元单环，该单 环本身被一个其它取代基R4取代。SO2-键接的单环形式的环烃基、杂 环、芳基或杂芳基，当其是6元环时R4-取代在其自身的4位，而当 其是5元环时，取代在其自身的3位或4位。在一些实施方案中，与 R4键接的环烃基、杂环、芳基或杂芳基优选苯基，故R1优选PhR4，其 中R4键接在SO2-键接的苯基(Ph)基团的4位，而其中R4自身可以如 下文所述任选地被取代。在另一个实施方案中，杂环或杂芳基比苯基 更为优选，相对于环和SO2基团之间的价键而言R4取代基连接在4 位。
所述R4取代基可以是单环形式的环烃基、杂环、芳基或杂芳基或 具有3至约14碳原子链长的其它取代基如烃基或烃基氧基[如，C3- C14烃基或O-C2-C14烃基]、苯基、苯氧基[-OC6H5]，硫代苯氧基[苯硫 基；-SC6H5]，苯氨基[-NHC6H5]，苯偶氮基基团[-N2C6H5]，苯基脲基[苯 胺羰基氨基；-NHC(O)NH-C6H5]，苯甲酰氨基基团[-NHC(O)C6H5]，烟 酰氨基基团[3-NHC(O)C5H4N]，异烟酰氨基基团[4-NHC(O)C5H4N]或吡 啶酰氨基基团[2-NHC(O)C5H4N]。所述其它R4取代基包括杂环、杂环 烃基、芳基烃基、芳基杂环烃基、杂芳基烃基、杂芳基杂环-烃基、 芳基烃基氧基烃基、芳氧基烃基、烃酰基烃基、芳基烃酰基烃基、芳 基羰基烃基、芳基偶氮芳基、芳基肼基芳基、烃基-硫烃基，烃基硫芳 基、芳硫基烃基、杂芳硫基烃基，烃基硫芳基烃基、芳基烃基硫烃基、 芳基烃基硫芳基、芳基烃基氨基、杂芳基烃基氨基或杂芳硫基。
所述R4取代基本身也可以在6元环的间和/或对位被一个或多个 取代基取代，该取代基为单个原子或最多含10个原子(不包括氢原子) 的最长链取代基。示例性取代基包括卤素、烃基、烃基氧基、硝基、 氰基、全氟烃基、三氟甲基烃基、羟基、巯基、羟基羰基、芳氧基、 芳硫基、芳基氨基、芳基烃基、芳基、杂芳氧基、杂芳硫基、杂芳基 氨基、杂芳烃基、烃基氧基羰基烃基、杂环氧基、羟基羰基烃基、杂 环硫基、杂环氨基、环烃基氧基、环烃硫基、环烃基氨基、杂芳基烃 基氧基、杂芳基烃硫基、杂芳基烃基氨基、芳基烃基氧基、芳基烃基 硫基、芳基烃基氨基、杂环基、杂芳基、羟基羰基烃基氧基、烷氧羰 基烷氧基、烃基酰基、芳基羰基、芳基烃酰基、烃酰氧基、芳基烃酰 氧基、羟基烃基、羟基烃基氧基、烃硫基、烃基氧基烃基硫基、烃基 氧基羰基、羟基羰基烃基氧基、烃基氧基羰基烃基、烃基羟基羰基- 烃硫基、烃基氧基羰基烃基氧基、烃基氧基羰基烃硫基、氨基、烃基 羰基氨基、芳基羰基氨基、环烃基羰基氨基、杂环烃基羰基氨基、芳 基烃基羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳基烃基羰基氨基、杂环烃基 氧基、烃基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、芳基烃基磺酰基氨基、杂 芳基磺酰基氨基、杂芳基烃基磺酰基氨基、环烃基磺酰基氨基、杂环 烃基磺酰基氨基和N-一取代的或N，N-二取代的氨基烃基，其中氮原 子上的取代基(一个或多个)选自如下的基团：烃基、芳基、芳基烃 基、环烃基、芳基烃基氧基羰基、烃基氧基羰基和烃酰基，或其中氮 原子和连接在其上的两个取代基形成5至8元杂环或杂芳基环基团。
制备抑制MMP化合物的中间体化合物也包括在本发明中。一种优 选的中间体相应于下式C的结构，
其中R2、R6、R7和R20如上所述，而D是亲核性可置换的离去基 团如-F或-NO2。此处R2和R6优选氢原子，R7优选是R7A，而R20优选 -O-R21，其中R21是氢原子。
另一优选的中间体化合物相应于下式D的结构，在下式D结构 中，其中R1、R2、R6、R7和R13如上所述。
在式D化合物优选的实施方案中，R2、R6和R13是氢原子，而R7 是R7A。
下表1至表9举例说明了本发明所包括的并用于本发明方法中的 若干合成化合物。这些化合物在体外实验中对MMP-1和MMP-13的抑 制数据在下文中提供。
表1
表2
表4
表5
表6
表7
表8
表9
在本文所用的，术语“烷基”，单独或组合，指直链或支链烷基， 其中含有1至约12个碳原子，优选1至约10个碳原子，和更优选1 至约6个碳原子。这样的基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙 基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、辛基 等。
术语“链烯基”，单独或组合，指直链或支链烃基，其中具有一个 或多个双键并含有2至约12个碳原子，优选2至约10个碳原子，并 更优选2至约6个碳原子。适宜的链烯基的实例包括乙烯基(vinyl)、 2-丙烯基、3-丙烯基、1，4-戊二烯基、1，4-丁二烯基、1-丁烯基、 2-丁烯基、3-丁烯基、癸烯基等。
术语“链炔基”，单独或组合，指直链烃基，其中具有一个或多个 三键并含有2至约12个碳原子，优选2至约10个碳原子，并更优选 2至约6个碳原子。链炔基的实例包括乙炔基、2-丙炔基、3-丙炔基、 癸炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基等。
术语“羰基”或“氧代”，单独或组合，指-C(＝O)-基团，其中剩余 的两个键(价)可以独立地被取代。术语羰基还包括水合的羰基 -C(OH)2-。
术语“硫醇”或“巯基”，单独或组合，指-SH基团。术语“硫代”或 “硫杂“(“thio”或“thia”)，单独或组合，指硫醚基团；即其中醚氧 原子被硫原子代替的醚基团。
术语“氨基”，单独或组合，指胺或-NH2基团，其中术语单取代的 氨基，单独或组合，指被取代的胺-N(H)(取代基)基团，其中氨基的 一个氢原子被取代基代替，而二取代的胺指-N(取代基)2，其中氨基 的两个氢原子被独立选择的取代基代替。
根据氨基氮原子的取代度将胺、氨基和酰胺化合物指定为伯 (I°)、仲(II°)或叔(III°)或者未被取代的、单取代的或N，N-二取代 的。季胺(铵)(IV°)指带有正电荷并伴有相反离子的具有四个取代基 的氮原子[-N+(取代基)4]，而N-氧化物指一个取代基是氧原子且该基 团表示为[-N+(取代基)3-O-]，即电荷由内部平衡。
术语“氰基”，单独或组合，指-C-三键-N(-C≡N)基团。术语“叠 氮基”，单独或组合，指-N-三键-N(-N≡N)基团。术语“羟基”，单独 或组合，指-OH基团。术语“硝基”，单独或组合，指-NO2基团。术语 “偶氮”，单独或组合，指-N＝N-基团，其中末端位置的键可以独立地 被取代。
术语“肼基”，单独或组合，指-NH-NH-基团，其中所述剩余的两 个键(价)可以独立地被取代。该肼基的氢原子可以独立地被取代基代 替且氮原子可以形成酸加成盐或被季铵化。
术语“磺酰基”，单独或组合，指-SO2-基团，其中所述剩余的两 个键(价)可以独立地被取代。术语“亚磺酰基(sulfoxido)”，单独或 组合，指-SO-基团，其中所述剩余的两个键(价)可以独立地被取代。
术语“砜”，单独或组合，指-SO2-基团，其中所述剩余的两个键 (价)可以独立地被取代。术语“亚磺酰胺”，单独或组合，指-SON＝基 团，其中所述剩余的三个键(价)可以独立地被取代其中。术语“硫化 物”，单独或组合，指-S-基团，其中所述剩余的两个键(价)可以独立 地被取代。
术语“烷氧基”，单独或组合，指烷基醚基团，其中术语烷基定义 如上。适宜的烷基醚基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异 丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
术语“环烷基”，单独或组合，指含3至约8个碳原子的环烷基。 术语“环烷基烷基”指定义如上的烷基被含3至约8，优选3至约6个 碳原子的环烷基取代。所述环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊 基、环己基等。
杂环(杂环基)或杂环羰基、杂环氧基羰基、杂环烷氧基羰基或杂 环烷基等的杂环部分是饱和或部分不饱的单环、双环或三环的杂环， 其中含有一个或多个选自氮原子、氧原子和硫原子的杂原子。杂环化 合物包括苯并稠合的杂环化合物如苯并-1，4-二噁烷。
这样的部分可以在一个或多个环碳原子上任选地取代有卤素、羟 基、羟基羰基、烷基、烷氧基、氧代基团等，且/或所述环的仲氮原 子(即-NH-)上可以取代有烷基、芳烷氧羰基、烷酰基、芳基或芳基烷 基，或在叔氮原子(即，＝N-)上被氧化且其通过碳原子相连。带有三 个取代基的叔氮原子也可以连接形成形成N-氧化物[＝N(O)-]基团。
术语“芳基”，单独或组合，指环中都是碳原子的含5或6元碳环 芳香环的部分或含2或3个环的稠合环系；即碳环芳基。示例性碳环 芳基包括苯基、茚基和萘基。
术语“杂芳基”，单独或组合，指环中具有碳原子并也具有一个或 多个杂原子如硫原子、氧原子和氮原子的含5或6元芳香环的部分或 含有2或3个环的稠合环系(基团)。这样的杂环或杂芳基的实例为吡 咯烷基，哌啶基，哌嗪基，吗啉基，硫杂吗啉基，吡咯基，咪唑基(如， 咪唑-4-基，1-苄氧羰基咪唑-4-基等)，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧 啶基，呋喃基，四氢呋喃基，噻吩基，三唑基，噁唑基，噁二唑基，噻 唑基，噻二唑基，吲哚基(如，2-吲哚基等)，喹啉基，(如，2-喹啉 基，3-喹啉基，1-氧化-2-喹啉基等)，异喹啉基(如，1-异喹啉基，3- 异喹啉基等)，四氢喹啉基(如，1，2，3，4-四氢-2-喹啉基等)，1， 2，3，4-四氢异喹啉基(如，1，2，3，4四氢-1-氧代-异喹啉基等)，喹喔 啉基，β-咔啉，2-苯并呋喃羰基，苯并噻吩基，1-、2-、4-或5-苯 并咪唑基等基团。
当芳基或杂芳基是取代部分(基团、取代基或原子团)时，其本身 可以被取代，所述最后命名的取代基独立地选自如下基团：氰基，全 氟烷基，三氟甲氧基，三氟甲硫基，卤代烷基，三氟甲基烷基，芳烷 氧羰基，芳氧羰基，羟基，卤素，烷基，烷氧基，硝基，硫醇，羟 基羰基，芳氧基，芳硫基，芳烷基，芳基，芳基羰基氨基，杂芳氧 基，杂芳硫基，杂芳烷基，环烷基，杂环氧基，杂环硫基，杂环氨 基，环烷基氧基，环烷硫基，杂芳烷氧基，杂芳烷硫基，芳烷氧基，芳 烷硫基，芳烷基氨基，杂环，杂芳基，芳基偶氮，羟基羰基烷氧基，烷 氧羰基烷氧基，烷酰基，芳基羰基，芳烷酰基，烷酰基氧基，芳烷酰基 氧基，羟基烷基，羟基烷氧基，烷硫基，烷氧基烷硫基，烷氧羰基，芳 氧基烷氧基芳基，芳硫基烷硫基芳基，芳氧基烷硫基芳基，芳硫基烷 氧基芳基，羟基羰基烷氧基，羟基羰基烷硫基，烷氧羰基烷氧基，烷 氧羰基烷硫基，氨基，
    其中氨基的氮原子(i)未被取代，或(ii)被独立地选自如下
基团的1或2个取代基取代：烷基，芳基，杂芳基，芳烷基，环
烷基，芳烷氧羰基，烷氧羰基，芳基羰基，芳烷酰基，杂芳基羰
基，杂芳烷酰基和烷酰基，或(iii)其中氨基氮原子和其上连接
的两个取代基形成其中含有O至2个选自氮原子、氧原子或硫原
子的其它杂原子的5至8元杂环或杂芳基环，且该环本身(a)未
被取代或(b)被独立地选自如下的1或2个取代基取代：芳基，烷
基，杂芳基，芳烷基，杂芳烷基，羟基，烷氧基，烷酰基，环
烷基，杂环烷基，烷氧羰基，羟基烷基，三氟甲基，苯并稠合的
杂环烷基，羟基烷氧基烷基，芳烷氧羰基，羟基羰基，芳氧羰基，
苯并稠合的杂环烷氧基，苯并稠合的环烷基羰基，杂环烷基羰基
和环烷基羰基， 羰基氨基
其中羰基氨基的氮原子(i)未被取代的，或(ii)是氨基酸的反应 后的胺，或(iii)被选自如下的1或2个基团取代：烷基，羟基烷基， 羟基杂芳烷基，环烷基，芳烷基，三氟甲基烷基，杂环烷基，苯并稠 合的杂环烷基，苯并稠合的杂环烷基，苯并稠合的环烷基和N，N-二 烷基取代的烷基氨基-烷基，或(iv)此羧酰氨基的氮原子和其上连接 的两个取代基一起形成5至8元杂环、杂芳基或苯并稠合的杂环烷基 环，其本身未被取代或被1或2个独立地选自如下的基团取代：烷基， 烷氧羰基，硝基，杂环烷基，羟基，羟基羰基，芳基，芳烷基，杂 芳烷基和氨基，
        其中氨基氮原子(i)未被取代的，或(ii)被1或2个独
    立地选自如下基团的取代基取代：烷基，芳基和杂芳基，或
    (iii)其中氨基氮原子和其上连接的两个取代基形成5-至
    8-元杂环或杂芳基环， 和氨基烷基
    其中氨基烷基的氮原子(i)未被取代的，或(ii)被独立地选
自如下的1或2个取代基取代：烷基，芳基，芳烷基，环烷基，芳
烷氧羰基，烷氧羰基和烷酰基，或(iii)其中氨基烷基的氮原子
和连接在其上的两个取代基形成5至8元杂环或杂芳基环。
术语“芳烷基”，单独或组合，指定义如上的烷基，其中一个氢原 子被定义如上的芳基代替，如苄基，2-苯基乙基等。
术语“芳烷氧羰基”，单独或组合，指式芳烷基-O-C(O)-的基团， 其中术语“芳烷基”定义如上。芳烷氧羰基的实例是苄氧羰基。
术语“芳氧基”指式芳基-O-的基团，其中术语芳基定义如上。苯 氧基是示例性芳氧基。
术语“杂芳烷基”和“杂芳氧基”指结构类似于芳烷基和芳氧基、得 自杂芳基的基团。示例性基团分别包括4-皮考啉基和2-嘧啶氧基。
术语“烷酰基”或“烷基羰基”，单独或组合，指得自链烷羧酸的酰 基，其实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、4-甲基 戊酰基等。
术语“环烷基羰基”指得自单环或桥接环烷基羧酸的酰基如环丙 烷羰基、环己烷羰基、金刚烷羰基等，或得自苯并稠合的单环环烷羧 酸，其任选地被例如烷酰基氨基取代，例如，1，2，3，4-四氢-2-萘甲 酰基、2-乙酰氨基-1，2，3，4-四氢-2-萘甲酰基。
术语“芳烷酰基”或“芳烷基羰基”指得自芳基-取代的烷基羧酸的 酰基如苯基乙酰基、3-苯基丙酰基(氢化肉桂酰基)、4-苯基丁酰基、 (2-萘基)乙酰基、4-氯氢化肉桂酰基、4-氨基氢化肉桂酰基、4-甲氧 基氢化肉桂酰基等。
术语“芳酰基”或“芳基羰基”得自芳族羧酸的酰基。这样的基团的 实例包括芳香羧酸、任选被取代的苯甲酸或萘甲酸如苯甲酰基、4- 氯苯甲酰基、4-羧基苯甲酰基、4-(苄氧羰基)苯甲酰基、1-萘甲酰基、 2-萘甲酰基、6-羧基-2-萘甲酰基、6-(苄氧羰基)-2-萘甲酰基、3- 苄氧基-2-萘甲酰基、3-羟基-2-萘甲酰基、3-(苄氧基甲酰氨基)-2- 萘甲酰基等。
术语“环烷基烷氧羰基”指式环烷基烷基-O-CO-的酰基，其中环 烷基烷基定义如上。术语“芳氧基烷酰基”指式芳基-O-烷酰基的酰基， 其中芳基和烷酰基定义如上。术语“杂环氧基羰基”指式杂环-O-CO-的酰基，其中杂环定义如上。
术语“杂环烷酰基”是式杂环-取代的烷基羧酸的酰基，其中杂环 定义如上。术语“杂环烷氧羰基”指式杂环-取代的烷基-O-CO-的酰基， 其中杂环定义如上。术语“杂芳氧羰基”指式杂芳基-O-CO-表示的酰基， 其中杂芳基定义如上。
术语“氨基羰基”(甲酰氨基)，单独或组合，指氨基-取代的羰基 (氨基甲酰基)，其得自胺与羧酸的反应，其中氨基(酰氨基氮原子) 是未被取代(-NH2)或被取代的伯或仲氨基，其含有1或2取代基选自 如下的基团：氢原子、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基 等，如上所述。异羟肟酸酯是N-羟基甲酰胺。
术语“氨基烷酰基”指得自氨基取代的链烷羧酸的酰基，其中氨 基可以是伯或仲氨基，其中含有独立地选自如下的取代基：烷基、芳 基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基等。
术语“卤素”或“halo”指氟、氯、溴或碘原子。术语“卤代烷基” 指其中一个或多个氢原子被卤原子代替的如上定义的烷基。这样的卤 代烷基的实例包括氯甲基、1-溴乙基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、 1，1，1-三氟乙基等。
术语“全氟代烷基”指其中各氢原子都被氟原子代替的烷基。这样 的全氟代烷基的实例，除三氟甲基外，包括全氟代丁基、全氟代异丙 基、全氟代十二烷基和全氟代癸基。
术语“全氟烷氧基”，单独或组合，指全氟代烷基醚基团，其中术 语全氟烷基定义如上。这样的全氟烷氧基的实例，除三氟甲氧基 (F3C-O-)外，为全氟丁氧基、全氟异丙氧基、全氟十二烷氧基和全氟 癸氧基。
术语“全氟烷硫基”，单独或组合，指全氟烷基硫醚基团，其中术 语全氟烷基定义如上。这样的全氟烷硫基的实例，除三氟甲硫基 (F3C-S-)外，为全氟丁硫基、全氟异丙硫基、全氟十二烷硫基和全氟 癸硫基。
术语“芳香环”在组合形式如被取代的芳香环砜或被取代的芳香 环亚砜中，指如上定义的芳基或杂芳基。
术语“可药用”在本文中用作形容词时，指其所修饰的名词是适 用于药物产品中的。药用阳离子包括金属离子和有机离子。更优选的 金属离子包括但不限于适当的碱金属(Ia族)盐、碱土金属(IIa族) 盐及其它生理可接受的金属离子。示例性离子以其通常的化合价排列 包括铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌离子。优选的有机离子包括质子化 的叔胺和季铵阳离子，部分包括，三甲基胺、二乙胺、N，N’-二苄基 亚乙基二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、亚乙基二胺、葡甲胺(N- 甲基葡糖胺)和普鲁卡因。示例而非限制性的药用酸包括盐酸、氢溴 酸、磷酸、硫酸、甲磺酸，乙酸、甲酸、酒石酸、马来酸、苹果酸、 枸橼酸、异枸橼酸、琥珀酸、乳酸、葡糖酸、葡糖醛酸、丙酮酸、草 乙酸、富马酸、丙酸、天门冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸等。
治疗方法
本发明还包括治疗患有与病理性基质金属蛋白酶活性有关的病 症的哺乳动物宿主的方法。该方法包含给患有此病症的哺乳动物宿主 使用抑制MMP酶有效量的结构相应于式B的化合物，该化合物选择性 抑制一种或多种MMP，同时对至少MMP-1表现出较小的活性。所述化 合物还基本上不抑制TNF的产生。特别包括多次重复给药的应用。 其中R1、R2、R6、R7、R13和R14定义如上。 用于此方法的更优选的所述化合物相应于下式B1的结构，
其中R1和R14定义如上，且是选自如下的取代基：烷基羰基、烷 氧羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基烷基羰基、氨基 芳烷基羰基、烷氧羰基氨基烷基羰基、烷氧羰基氨基芳烷基羰基、环 烷氧羰基氨基烷基羰基、环烷氧羰基氨基芳烷基羰基、芳氧羰基氨基 烷基羰基、芳氧羰基氨基芳烷基羰基、芳基烷氧羰基氨基烷基羰基、 芳基烷氧羰基氨基烷基羰基、杂芳氧羰基氨基烷基羰基和杂芳氧羰基 氨基芳烷基羰基。
所述化合物用于患有与病理性基质金属蛋白酶活性有关病症的 哺乳动物体宿主如小鼠、大鼠、兔、狗、马、灵长类如猴、黑猩猩或 人。
本发明还包括所述化合物在可能受到金属蛋白酶如TNF-α转化 酶活性影响的疾病的治疗中具有类似的用途。这些疾病的实例为休克 和败血症的急相反应，血凝固反应，出血和心血管作用，发烧和炎症， 厌食和恶病质。
在与病理性基质金属蛋白酶活性有关病症的治疗中，如果适当， 可以以得自无机酸或有机酸的胺盐形式使用所述的MMP抑制剂化合 物。酸盐的实例包括但不限于：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、枸橼酸 盐、门冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸 盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐(digluconate)、环戊烷丙酸盐、十二 烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸 盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺 酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、 棕榈酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸 酯、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸酯、甲磺酸 盐和十一烷酸盐。
此外，含有碱性氮原子的基团可以用如下试剂进行季铵化：低级 烷基(C1-C6)卤化物，如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘 化物；硫酸二烷基酯如硫酸二甲基、二乙基、二丁基和二戊基酯，长 链(C8-C20)卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和十二烷基氯化物、溴 化物和碘化物，芳烷基卤化物如苄基和苯乙基溴化物，以及其它提供 高水溶性的试剂。于是按照需要获得了水或油溶解性或分散性产物。 通过将这些碱性化合物与所需的酸结合形成这些盐。
用于本发明的其它作为酸的化合物也可以形成盐。实例包括与碱 金属或碱土金属如钠、钾、钙或镁形成的盐，或者与有机碱或碱性季 铵盐形成的盐。
在一些情况下，在本发明化合物的分离、纯化或拆分中可以使用 这些盐作为辅助手段。
以抑制MMP酶有效量的单剂量或均分剂量给哺乳动物宿主使用 的总日剂量可以是，例如，约0.001至约100mg/kg体重每天，优选 约0.001至约30mg/kg体重每天并更通常约0.01至约10mg。剂量 单元组合物可以含有这些量或其多个亚剂量以构成日剂量。适宜的剂 量可以以多个亚剂量每天使用。每天多个剂量还可以增加总日剂量， 只要这样的剂量是遵医嘱使用此药物的患者需要的。
用本发明的化合物和/或组合物治疗病症的剂量方案应按照多种 因素进行选择，包括患者的类型、年龄、体重、性别、饮食和健康状 况，疾病的严重性，给药途径，药理学因素如所用特定化合物的活 性、效果、药代动力学和毒性，是否使用药物转运系统以及所用化合 物是否是药物联合形式的一部分。因此，实际使用的剂量方案可以变 化很大并因此可以偏离上述优选的剂量方案。
用于本发明的化合物可以配制为药物组合物。然后这样的组合物 可以以含所需的常规无毒药用载体、辅剂和赋形剂的单位制剂的形式 口服、非肠道、吸入喷雾、直肠或局部给药。局部给药还包括应用透 皮给药如透皮贴剂或离子电渗疗法器。本文中术语“非肠道”包括皮下 注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射，或者输液技术。有关药物制剂 的讨论见，例如，Hoover，John E.，Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania；1975 和Liberman，H.A.和Lachman，L.，Eds.，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，New York，N.Y.，1980。
注射剂，例如，灭菌水性或油性混悬剂，可以按照本领域一般知 识用适宜的分散剂或湿润剂及助悬剂进行配制。此灭菌注射剂还可以 是存在于无毒非肠道给药可用稀释剂或溶剂中的灭菌注射液或混悬 剂，例如作为1，3-丁二醇溶液。可以使用的的可接受的载体和溶剂 为水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，灭菌的固定油常用作溶 剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成的单或 二甘油酯。此外，脂肪酸如油酸可以用于制备注射剂。可以使用二甲 基乙酰胺、包括离子型和非离子型洗涤剂的表面活性剂、聚乙二醇。 也可以使用如上所述的溶剂和湿润剂的混合物。
直肠给药用栓剂可以通过将此药物与适宜的非刺激性赋形剂如 可可脂、合成单、二或三甘油酯、脂肪酸和聚乙二醇类混合来制备，这 些赋形剂在室温下为固体而在直肠温度下为液体，因此其在直肠中 熔化并释放出药物。
口服给药用固体剂型可以包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。 在这些固体剂型中，本发明的化合物一般与适于所指定给药途径的 一种或多种辅剂混合。如果口服，这些化合物可以与如下物质混合： 乳糖、蔗糖、淀粉、链烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂 酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、 藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇，然后压片或装入胶囊以便 给药。这些胶囊或片剂可以含有快速制剂，这可以由活性化合物的羟 丙甲基纤维素的分散液提供。对于胶囊、片剂和丸剂，这些剂型还可 以含有缓冲剂如枸橼酸钠、碳酸镁或碳酸钙或者碳酸氢镁或碳酸氢 钙。片剂和丸剂还可以进行肠溶包衣。
为了治疗目的，非肠道给药制剂可以是含水或不含水的等渗灭 菌注射溶液或混悬剂。这些溶液剂和混悬剂可以由含有在口服给药制 剂中所提及的一种或多种载体或稀释剂的灭菌散剂或颗粒剂来制 备。这些化合物可以溶解于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、 棉籽油、花生油、芝麻油、苄醇、氯化钠和/或多种缓冲剂中。其它 辅剂和给药方式是制药领域熟知的。
口服给药用液体剂型包括药用乳液、溶液、混悬剂、糖浆和酏剂， 其中含有本领域常用的惰性稀释剂如水。这些组合物也可以含有辅剂， 如湿润剂、乳化剂和助悬剂，以及甜味剂、矫味剂和芳香剂。
可以与载体物质混合以制备单个剂型的活性组分的量随所治疗 的哺乳动物宿主和特定的给药方式而变化。
化合物的制备
本发明的化合物可以通过若干合成途径来制备，正如以下特定 实施例所示。此外，下列方案1A和1B举例说明了合成方法的实例以 及本发明化合物制备中的优选的中间体的使用。
因此，如方案1A所示，N-乙酰基丙烯酸甲酯(化合物1)在溶剂 如甲醇中与对氟苯硫酚在三乙胺的存在下在0℃通过Michael加成 (步骤1)进行反应，并在步骤2中将所得氟苯硫醚用Oxone氧化以形 成相应的砜(化合物2)。在含有氢氯酸的冰醋酸中在0℃下水解此甲 基酯得到相应的酸(化合物3)。化合物3与苯硫酚在DMF中在约10 ℃下在碳酸钾的存在下反应，得到苯硫醚(化合物4)。在冰醋酸和氢 氯酸中在11℃下，化合物4进行反应裂解掉N-乙酰基，得到此胺的 盐酸盐(化合物5)。
化合物5在水中与N-保护的氨基酸如CBZ-甘氨酸(CBZ-Gly)在 水溶性碳化二亚胺[1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)-丙基]碳二亚胺盐酸 盐；EDC]、1-羟基苯并三唑(HOBT)和N-甲基吗啉(NMM)的存在下进行 反应，得到相应的N-芳氧羰基氨基烷基羰基衍生物(化合物6)，见 方案1B。化合物6与O-四氢-2H-吡喃-2-基-羟胺在THF中在HOBT 和EDC的存在下进行反应，得到THP-保护的异羟肟酸(化合物7)。 化合物7与酸如甲苯磺酸或盐酸反应裂解THP保护基得到异羟肟酸 (化合物8)。
                         方案1A
                        方案1B
上述合成，正如本文中讨论的所有反应，如果需要则可以在干燥 的惰性气氛如氮气、氦气或氩气氛下进行。本领域技术人员已知的所 选择的反应可以在干燥的气体如干燥的空气中进行，而气体合成步 骤，例如，利用酸或碱水溶液将酯或酰胺水解，可以在实验室空气下 进行。
总的来说，正如本领域技术人员熟知的那样，起始物和反应条件 的选择是可以变化的。通常来说，因为可以按照需要进行变化且本领 域技术人员可以进行选择，故没有任何一组条件是限制性的。也可以 按照需要选择条件以适合特殊的目的如小批量制备或大规模生产。在 这两种情况下，应将安全性差或对环境不利的物质或试剂的使用降 低至最少程度。这样的不可取的物质为重氮甲烷、乙醚、重金属盐、 二甲硫、氯仿、苯等。
上述方案中示例的多种反应可以是碱介导的，其中使用催化量 的一些碱，或者可以通过加入其它试剂与一当量或更多的碱反应，或 者此硫醇试剂可以是事先形成的硫醇盐如苯硫酚的钠盐。可以使用的 碱包括，例如，金属氢氧化物如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂或氢 氧化镁，金属氧化物如钠、钾、锂、钙或镁的氧化物，金属碳酸盐如 钠、钾、锂、钙或镁的碳酸盐，金属碳酸氢盐如碳酸氢钠或碳酸氢钾， 伯(I°)、仲(II°)或叔(III°)有机胺如烷基胺、芳基烷基胺、烷基芳 基烷基胺、杂环基胺或杂芳基胺，氢氧化铵或季铵化的氢氧化铵。
作为非限制性实例，这样的胺可以包括三乙胺、三甲基胺、二异 丙基胺，甲基二异丙基胺、二氮杂双环壬烷、三苄基胺、二甲基苄基 胺、吗啉、N-甲基吗啉、N，N’-二甲基哌嗪、N-乙基哌啶、1，1，5，5- 四甲基哌啶、二甲基氨基吡啶、吡啶、喹啉、四甲基亚乙基二胺等。 氢氧化铵的非限制性实例，通常由胺和水制备，可以包括氢氧化铵、 三乙基氢氧化铵、三甲基氢氧化铵、甲基二异丙基氢氧化铵、三苄基 氢氧化铵、二甲基苄基-氢氧化铵、吗啉鎓氢氧化物、N-甲基吗啉鎓 氢氧化物、N，N’-二甲基哌嗪鎓氢氧化物、N-乙基哌啶鎓氢氧化物等。 作为非限制性实例，季铵化的氢氧化铵可以包括四乙基-氢氧化铵、 四甲基氢氧化铵、二甲基二异丙基氢氧化铵、苄基甲基二异丙基氢氧 化铵、甲基二氮杂双环壬基氢氧化铵、甲基三苄基氢氧化铵、N，N- 二甲基吗啉鎓氢氧化物、N，N，N’，N’-四甲基哌嗪鎓氢氧化物和N-乙基 -N’-己基哌啶鎓氢氧化物等。
金属氢化物、氨化物或醇化物如氢化钙、氢化钠、氢化钾、氢化 锂、甲醇钠、叔丁醇钾、乙醇钙、乙醇镁、氨化钠、二异丙基氨化钾 等也是适宜的试剂。有机金属去质子化试剂如烷基或芳基锂试剂如甲 基、苯基或丁基锂，Grignard试剂如甲基溴化镁或甲基氯化镁，或 者有机镉试剂如二甲基镉等也可以用作引起盐形成或催化此反应的 碱。季铵化的铵的氢氧化物或混合的盐也可以用来帮助相转移偶联或 作为相转移试剂。
此反应介质可以包含单一溶剂、相同或不同类型的混合溶剂或者 作为单一或混合溶剂体系中的试剂。这些溶剂可以是质子溶剂、非质 子性溶剂或偶极质子惰性溶剂。质子溶剂的非限制性实例包括水、甲 醇(MeOH)、变性或纯度95％或纯乙醇、异丙醇等。典型的非质子性溶 剂包括丙酮、四氢呋喃(THF)、二噁烷、乙醚、叔丁基甲基醚(TBME)， 芳香化合物的如二甲苯、甲苯或苯、乙酸乙酯、乙酸甲基酯、乙酸丁 基酯、三氯乙烷、二氯甲烷、亚乙基二氯、己烷、庚烷、异辛烷、环 己烷等。偶极质子惰性溶剂包括化合物如二甲基甲酰胺(DMF)、二甲 基乙酰胺(DMAc)、乙腈、硝基甲烷、四甲基脲、N-甲基吡咯烷酮等。
可以用作溶剂或混合溶剂系统一部分的试剂的非限制性实例， 包括有机或无机单或多质子酸或碱如氢氯酸、磷酸、硫酸、乙酸、甲 酸、枸橼酸、琥珀酸、三乙胺、吗啉、N-甲基吗啉、哌啶、吡嗪、哌 嗪、吡啶、氢氧化钾、氢氧化钠、制备本发明产物用的酯或酰胺或硫 醇的制备用的醇或胺等。
室温或者稍低或中度加温(-10℃至60℃)是此反应优选的温 度。如果需要，则此反应温度可以是约-76℃至此反应溶剂或溶剂混 合物的回流温度。
中间体硫醚如4-氟苯硫基醚可以用两个当量的氧化剂一步氧化 为砜。用于此方法的试剂的非限制性实例，包括过一硫酸(OXONE)、 过氧化氢、间氯过苯甲酸、过苯甲酸、过乙酸、过乳酸、叔丁基过氧 化物、叔丁基过氧化氢、次氯酸叔丁基酯、次氯酸钠、次氯酸、偏高 碘酸钠、高碘酸等。可以选择质子、非质子、偶极质子惰性溶剂，无 论纯的或混合的，例如，甲醇/水。
氧化反应可以在约-78至约50℃，一般在约-10℃至约40℃下的 温度进行。所需砜的制备可以以两步法进行，用约一当量的氧化剂在 约0℃下先形成亚砜。然后再氧化为砜。
可以随这些选择性氧化反应使用上述溶剂，例如，温度为约-10 ℃至30℃时甲醇或甲醇/水是优选的。在氧化剂活性较强的情况下， 可能需要(但不是总需要)这些反应在惰性气体氛下进行，对溶剂进 行或不进行脱气。
通过酯与一或多个当量的羟胺盐酸盐在室温或高于室温下在例 如上述溶剂或溶剂混合物中反应，由相应的酯制备异羟肟酸酯。此交 换过程可以进一步通过加入额外的酸进行催化。
或者，碱如某种醇的盐用作溶剂，例如，在甲醇中的甲醇钠时， 可以就地形成羟胺，其可以与酯或酰胺进行交换。在该酯是四氢吡喃 基(THP)或苄基(Bn)酯的化合物中，可以用被保护的羟胺如O-四氢- 2H-吡喃-2-基-羟胺(四氢吡喃基羟胺；THPONH2)、苄基羟胺(BnONH2) 等进行此交换反应。
需要时，例如，在该分子的另一部分进一步转化后或保存后，对 保护基的除去可以通过本领域熟知的标准方法完成，如用酸如甲苯 磺酸或氢氯酸将THP基团酸水解，或者用氢气和金属催化剂如钯、 铂、钯/炭或镍还原除去苄基。
可氧化的官能基是本领域技术人员容易识别的，且可以用交替 的合成方法如保护/脱保护反应序列。
用本领域熟知的试剂可以将酸转变为活化的羰基化合物，所述 领域包括肽和蛋白质合成及氨基酸偶联或轭合领域。这样的试剂的实 例为亚硫酰氯、草酰氯、磷酰氯、1-羟基苯并三唑(HOBT)、氯甲酸异 丁基酯等。这些有利用价值的活化的羰基中间体可以再转变为异羟肟 酸或异羟肟酸衍生物如H、苄基或THP。羟胺或羟胺衍生物化合物或 酸或酰胺或酯的制备或它们之间的相互转变可以由本领域技术人员 用上述方法或通过其它技术进行。
这些中间体化合物中的胺官能基使用保护基以便有利于此转 变。本领域技术人员可以对保护基及其使用进行选择决定。特别有利 的是用于蛋白质、肽和氨基酸偶联和转化化学中的技术和试剂。叔丁 氧羰基(BOC)、苄氧羰基(Z或CBZ)和N，N-二苄基的使用及其合成和 除去是这样的保护方案的实例。
前体(中间体)化合物的氨基酸、氨基酸酯、氨基酸异羟肟酸酯或 异羟肟酸酯衍生物及氨基酸酰胺与，例如，其它氨基酸、胺、醇、酰 胺或酸偶联也可以通过本领域熟知的方法进行，例如，活性酯或混合 酸酐与优选的碱偶联，如果需要则该碱可以是温和的叔胺如N-甲基 吗啉。对也可以作为保护基或阻断基团如乙酰基等的已存在基团的除 去，也可以用标准水解条件完成，例如，碱水解或交换或者酸交换或 水解。
对于具有氨基的化合物，有时需要使用酸性条件，用试剂如过氧 化氢，和/或与酸性试剂如高碘酸、过乙酸等联合。本领域技术人员 还应注意乙酰基的水解或交换可能或可能不引起酯、酰胺或异羟肟酸 酯官能基的水解或交换。
异羟肟酸酯羟基上也可以使用选择性可除去的保护基P(R22)。这 样的保护基可以包括酰基、氨基甲酰基、醚、烷氧基烷基醚、环烷基 氧基醚、芳基烷基、三取代的甲硅烷基等。所述保护基的实例包括乙 酰基、THP、苄基、Z、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)。制备这样保 护的异羟肟酸酯以及除去这些保护基是本领域及技术人员公知的。
本发明的化合物可以通过用本领域已知的方法将得自被保护的 羧酸的负碳离子(亲核试剂)烷基化进行制备。羧基官能基的保护基包 括，例如，酯如叔丁基酯。用于形成阴离子的碱可以是有机金属试剂 如叔丁基锂、金属氨化物如二异丙基氨化锂(LDA)或醇盐如叔丁醇 钾。其它可利用的碱如上所述。
在此阴离子形成期间或之后，加入烷基化试剂(亲电子试剂)，进 行亲核取代反应。用于置换的亲电底物可以包括，例如，二卤代烷如 1，2-二卤代烷或者单-卤代-单硫酸化烷基酯或者二磺酸烷基酯。1，2- 二-溴乙烷类、1-氯-2-溴乙烷类、1-氯-2-甲苯磺酰基乙烷类和1，2- 二-甲苯磺酰基乙烷类是所述双亲电试剂的实例。1-溴-2-氯-乙烷是 优选的亲电试剂。
活化的酯基团是本领域熟知的并可包括，例如，二-酯如丙二酸 酯，酯-酮如乙酰基乙酸酯或酯-醛，它们进行羰基加成反应。用一个 当量的烷基化试剂进行烷基化，接着，例如，用有机金属试剂将新的 ω羰基衍生化，或者将其还原为醇，该醇可再衍生为碳-卤原子键或 活性酯如硫酸酯。这些ω-取代的化合物可以作为上述硫醇化物 (thioate)置换和氧化反应的底物，以形成本发明的羧酸化合物或中 间体。
ω-卤代醇可以是用上述交替合成序列制备本发明化合物的可利 用的起始物。它们可作为R1硫醇化物置换(SN2)的底物以提供4-硫化 物(硫醚)，其可再被氧化为所需的砜。HS-R1化合物可如下所述制备 并如上所述进行氧化。通过中间体如氟代苯硫酚，接着用第二种亲核 试剂置换氟离子，来制备本发明的化合物或中间体，可形成R1基团。 氟代苯硫酚和苯酚和2，3-二甲基苯酚分别是优选的硫醇类和苯酚 类。砜醇可以氧化为相应的羧酸及相应的醛。
通过形成醇盐并将此亲核试剂用亲电试剂如卤化物或活性酯如 硫酸酯处理，可以进行醚的制备。通过用如上所述的碱处理该醇形成 该盐。所述碱的实例为烷基锂、金属氢化物或胺的金属盐如LDA。
卤化物可以是卤化物、溴化物、碘化物，而硫酸酯可以是，例如， 苯磺酸酯、甲苯磺酸酯、甲磺酸酯或三氟甲磺酸酯。优选的亲电试剂 的实例是2-氯甲基吡啶而优选的碱是氢化钠。或者，该醇可以转变 为离去基团(亲电试剂)并再用亲核试剂处理。所述离去基团的实例包 括硫酸酯如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯和三氟甲磺酸酯，它们的制备如上 所述。三氟甲磺酸酯是优选的离去基团。
用亲核试剂置换这些基团是本领域熟知的并讨论和/或举例说明 如上。亲核试剂可以是氢氧化物以带来立体化学的转化，烷氧化物形 成醚，胺或氨形成取代的胺或者叠氮阴离子形成叠氮化物。优选的亲 核试剂是四-(正丁基)叠氮化铵。叠氮基化合物，例如，可以还原为 氨基酸。还原反应如上所述并是本领域熟知的。优选的方法是用钯/ 炭作为催化剂氢化。
本发明的胺，包括氨基酸，可以通过本领域熟知的方法进行酰基 化或烷基化。形成的酰胺可以被看作得到保护的胺或作为本发明的终 产物。上文中讨论了用叔丁氧羰基和苄氧羰基酰化形成这样的衍生 物。其它酰基(Ac)可以是，例如，乙酰基、卤代乙酰基、芳酰基、被 取代的芳酰基、杂芳酰基、被取代的杂芳酰基或需要的其它基团。所 述胺可以用酸酐、混合酸酐、酰氯或活性酯进行酰化。所述酰化通常 在如上所述及本领域熟知的碱存在下进行。实例为N-甲基-吗啉、三 乙胺等。
用于此处的具有酰胺取代基的羧基化合物可以如上所述进行处 理、转化或互变以形成本发明的产物。此外，卤代酰基化合物如优选 的2-氯乙酰胺衍生物，可以用胺作为亲核试剂处理以得到氨基酸。 同样，这些反应是本领域熟知的。优选的胺是吗啉。
用碱先形成阴离子，可以在距羰基的α碳原子上对氨基酸进行烷 基化以形成可利用的化合物。碱的实例另行讨论。优选的碱是强碱， 其是位阻性和/或非亲核性的，如氨化锂、金属氢化物或烷基锂。优 选的碱是存在于偶极质子惰性溶剂或THF中的二异丙基氨化锂 (LDA)。
所述阴离子形成期间或之后，加入烷基化试剂(亲电试剂)，进行 亲核取代反应。所述烷基化试剂的非限制性实例为1，2-二卤代烷或 被活性酯基取代的卤代烷。活性酯基是本领域熟知的，并可以包括， 例如，2-卤代-醇的酯，如溴、碘或卤代乙烷对甲苯磺酸酯、三氟甲 磺酸酯或甲磺酸酯。优选的烷基化试剂是1-溴-2-氯乙烷。
在本发明化合物的氨基酸部分中的氮原子取代基是可变的。此外， 根据本领域技术人员制备本发明化合物的需要和目的，其可以完成 于该合成序列中的不同阶段。
N-侧链的变化形式可以包括用下列基团取代氢原子(hydrido)取 代基：烷基、芳基烷基、链烯基或链炔基。其可以通过本领域熟知的 方法完成，例如，用亲核试剂如所需侧链的卤代衍生物或硫酸酯(活 性酯)衍生物将该胺烷基化。该反应可以在如上所述的碱的存在下并 在如上所述的纯溶剂或混合溶剂中完成。优选的碱是碳酸钾而优选的 溶剂是DMF。
如果需要，所述链烯基或链炔基可以被还原为本发明的烷基或 芳烷基化合物，例如，通过用金属催化剂和氢气氢化，而所述链炔基 或芳基链炔基在如上所述的催化氢化条件下或者用减活的金属催化 剂可以还原为链烯基或烷基。催化剂可以包括，例如，Pd、钯/炭、 Pt、PtO2等。弱催化剂包括Pb-BaCO3或者Pd加喹啉或/和硫。
胺氮原子烷基化的另一种方法是还原烷基化。该方法是本领域熟 知的，其中在还原剂如硼烷、硼烷：THF、硼烷：吡啶、氢化锂铝的存 在下，用醛或酮处理仲胺。或者，还原烷基化可以在金属催化剂的存 在下在氢化反应的条件下进行。催化剂、氢气压力和温度如上所述且 是本领域熟知的。优选的还原烷基化催化剂是硼烷：吡啶复合物。
本发明的化合物包括如上所述氨基酸的氮原子上的取代基提供 氨基酸氨基甲酸酯的化合物。这些氨基甲酸酯的非限制性实例为苄氧 羰基(Z，CBZ，苯酯基)、异丁氧羰基和叔丁氧羰基(BOC，t-BOC)化 合物。如上所述，这些物质可以根据需要并由本领域技术人员决定， 在该合成的不同阶段用本领域熟知的方法制备。
可利用的合成技术和试剂包括用于蛋白质、肽和氨基酸合成、偶 联及转化化学的那些。叔丁氧羰基(BOC)和苄氧羰基(Z)的利用及其合 成和除去是上述保护或合成方案的实例。本发明的氨基酸、氨基酸 酯、氨基酸异羟肟酸酯、氨基酸异羟肟酸酯衍生物及氨基酸酰胺或者 用于本发明中的化合物的转变，可以如上所述和/或如上所示进行。 这包括，例如，活性酯或混合酸酐偶联，其中优选的碱(如果需要) 是叔胺如N-甲基吗啉。
用于保护被保护的氨基酸的氨基的试剂包括苄氧羰基氯、氯甲酸 异丁基酯、叔丁氧羰基氯、二碳酸二-叔丁基酯等，它们与所述胺在 非质子或偶极质子惰性溶剂如DMF或THF或溶剂混合物中反应。优选 的试剂是二碳酸二-叔丁基酯而优选的溶剂是THF。本发明的环氨基 酸的进一步转化包括烷基化、用硫醇或硫醇化物置换、氧化为砜，且 可以如本文中所述进行向异羟肟酸或异羟肟酸酯衍生物的转化。
砜化合物，如其中R1是硝基芳基的化合物，可以作为本发明化 合物制备如下：合成硫醇或硫醇化物亲核试剂、用亲核性硫醇或硫醇 化物置换亲电试剂(X)并将该产物硫醚(硫化物)氧化为砜。例如，用 硝基苯硫醇置换亲电基团X可以得到R1是硝基苯的化合物，其可还 原为可利用的其中R1是苯胺的氨基化合物，该化合物可以酰化成苯 甲酰氨基化合物，如表8中的化合物61-64。应注意硝基苯硫醇只是 一个实例而不应被看作是限制性的或必需的。当需要时，所述硫醚产 物的氧化可以如下所述进行。
将硝基还原为氨基的方法是本领域熟知的，其中氢化反应是优 选的方法。其中常存在金属催化剂如Rh、Pd、Pt、Ni等，存在或不 存在额外的载体如碳、碳酸钡等。按照需要，溶剂可以是质子溶剂或 非质子性溶剂或者混合溶剂。该还原反应可以在常压至若干个大气压 下进行，优选常压至约40磅/平方英寸(psi)。如果需要，则该氨基 可以进行烷基化或用如芳酰基氯、杂芳基氯或其它胺羰基形成试剂进 行酰基化以形成R1酰胺。
氨基砜或硫醚也可以与碳酸酯酰氯、磺酰基氯、氨基甲酰基氯或 异氰酸酯反应生产相应的氨基甲酸酯、磺酰胺或脲。此类胺的酰化是 本领域熟知的而试剂也是已知的。
通常，这些反应在质子惰性溶剂中，在惰性气体氛下和/或干燥 的气氛下，在约45℃至约-10℃下进行。一当量的非竞争性碱通常与 磺酰氯、酰氯或碳酰氯试剂一起使用。在此酰化步骤之后或之前，可 以按照所讨论的方法合成本发明的异羟肟酸产物。
其它硫醇试剂也可用于制备本发明的化合物。实例为氟芳基、氟 杂芳基、叠氮基芳基或叠氮基杂芳基或杂芳基硫醇试剂。如上所述， 这些硫醇试剂可以使用为亲核试剂。然后可以氧化为相应的砜。可以 用亲核试剂如氨、伯胺、季铵或金属叠氮化物盐处理氟代砜，如果需 要则加压，以提供叠氮基、氨基或被取代的氨基，它们再与活性苯甲 酸或被取代的苯甲酸衍生物反应形成苯甲酰胺。例如，用氢气和金属 催化剂或金属螯合物催化剂，或者用活性氢化物转移试剂可以将叠 氮化物还原为氨基。亚肼基化合物可以氧化为偶氮化合物，而偶氮化 合物可以还原为亚肼基化合物。可以如上所述将胺酰基化。
制备本发明的胺硫醇中间体的优选方法包括用三苯甲基氯保护 芳基或杂芳基硫醇以形成三苯甲基硫醇衍生物，用试剂如芳酰氯或 杂芳酰氯处理所述胺以形成酰胺，用酸除去三苯甲基形成硫醇。优选 的酰化试剂包括苯甲酰氯，而优选的除去三苯甲基的试剂包括三氟 乙酸和三异丙基硅烷。
氟代砜中间体上的氟原子也可以被其它芳基或杂芳基亲核试剂 替换以形成本发明的化合物。所述亲核试剂的实例包括苯酚类、苯硫 酚类的盐，含-OH基团的芳族杂环化合物或含-SH的杂芳基化合物。
特别包括所述基团偶氮基、亚肼基、-OH或-SH的互变异构体作 为可利用的异构体。在被取代的砜的合成中制备中间体的优选方法， 是通过将由氟代苯乙酮制备的适当的苯乙酮氧化(例如，用过氧化单 硫酸酯)，形成相应的苯酚-醚。用二甲基硫代氨基甲酰基氯将所述苯 酚-醚转变为其二甲基硫代氨基甲酰基衍生物，接着加热重排此二甲 基硫代氨基甲酰基衍生物，得到制备所述硫醚中间体需要的硫醇。
按照常规方式制备本发明化合物或中间体的盐，其中酸性化合 物与如上所述的碱反应得到含金属或氮原子的阳离子的盐。可以用酸 处理碱性化合物如胺以形成胺盐。优选的胺盐是游离碱与氯化氢或氢 氯酸反应形成的盐酸盐。
本发明的化合物可以具有一个或多个不对称碳原子，并因此可 以以旋光异构体及其外消旋或非外消旋混合物的形式存在。可以按照 本领域熟知的常规方法拆分外消旋混合物来获得旋光异构体，例如， 通过用旋光性酸或碱处理以形成非对映异构的盐。适当的酸的实例是 酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二甲苯甲酰基酒石酸 和樟脑磺酸，然后通过重结晶将非对映异构体的混合物分离，接着从 这些盐中游离出旋光性碱。分离旋光异构体的不同方法包括使用手性 色谱柱，选择最佳的色谱柱以最大程度地分离对映异构体。
另一种方法是通过式I的化合物与活化形式的旋光性酸、旋光性 二醇或旋光性异氰酸酯反应，合成共价结合的非对映异构分子，例如， 酯、酰胺、缩醛、缩酮等。所合成的非对映异构体可以通过常规方法 如色谱、蒸馏、结晶或升化进行分离，然后水解释放对映异构体纯的 化合物。在一些情况下，在给患者用药前没有必要水解成母体旋光性 药物，因为所述化合物可以作为前药。式I的旋光性化合物还可以通 过使用旋光性起始物获得。
除上述旋光异构体或潜在的旋光异构体外，其它类型的异构体 要特别包括在此讨论和本发明中。实例包括顺式异构体、反式异构 体、E异构体、Z异构体、顺式(同分)异构体、反式(同分)异构体、 互变异构体等。芳基，杂环基或杂芳基互变异构体，杂原子异构体或 邻、间或对位取代的异构体也包括在异构体中。溶剂化物或溶剂加成 化合物如水合物或乙醇合物也特别包括在本发明的化学制剂中，并 包括在，例如，给药用制剂或药物组合物中。
本发明的最佳实施方式
无需赘述，相信本领域技术人员可以凭借上述说明书，最充分地 利用本发明。因此，下列优选的特定实施方案仅仅是举例说明，而不 是以任何方式限定所公开的范围其余部分。
在以下特定的实例中试剂和溶剂常常使用缩写形式。所用缩写及 其含义如下：
BOC＝叔-丁氧羰基
DEAD＝偶氮二甲酸二乙酯
DMF＝二甲基甲酰胺
DMPU＝1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮
EtOAc＝乙酸乙酯
EDC＝1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)-丙基]碳化二亚胺盐酸盐
Et2O＝乙醚
HOBT＝1-羟基苯并三唑
MeOH＝甲醇
MeCl2＝二氯甲烷
MsCl＝甲烷磺酰基氯
NMMOL或NMM＝N-甲基吗啉
THF＝四氢呋喃
TsCl＝甲苯磺酰基氯
THP-O-羟胺＝O-四氢吡喃-羟胺和O-四氢-2H-吡喃-2-基-羟胺
Z＝苄氧羰基
实施例1：制备N-羟基-3-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-2-[(甲基 羰基)氨基]丙酰胺
部分A：装备有磁力搅棒和氮气入口的250mL圆底烧瓶中，向 100mL脱气的MeOH中，加入10.0g N-乙酰基脱氢丙氨酸甲基酯、 9.9g对甲氧苯硫酚和10mL NEt3。将此反应混合物搅拌1小时然后 真空浓缩以除去NEt3。粗品残余物回收于200mL MeOH-150mL H2O并用89g(2.0eq)Oxone处理；将此反应搅拌1小时，过滤并将 此滤液真空浓缩。在EtOAc-水之间分配接着用水、盐水洗涤，并真 空浓缩。将粗品灰白色固体用乙醚研磨得到14g纯酯砜。
部分B：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在8 mL MeOH/8mL THF中，加入500mg酯砜、1.2mL(2.0当量)50％ 羟胺水溶液。将此反应搅拌过夜(约18小时)，然后真空浓缩成固体。 用乙酸乙酯研磨得到380mg的所需异羟肟酸酯。
实施例2：制备2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]-N-羟 基-3-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]丙酰胺
部分A：装备有磁力搅棒和氮气入口的250mL圆底烧瓶中，在50 mL乙酸和50mL浓盐酸中，加入7.4实施例1部分A的产物。将此 反应加热回流4小时。此反应混合物真空浓缩成灰白色固体，用甲苯 处理2次，然后真空干燥得到6.55g氨基酸盐酸盐。
部分B：装备有磁力搅棒和氮气入口的250mL圆底烧瓶中，在 70mL MeOH中，加入6.5g上述产物氨基酸盐酸盐和2.5mL(1.5当 量)的SOCl2。将此反应加热回流3小时，然后真空浓缩为固体粗品。 用乙醚研磨得到6.9g氨基酯盐酸盐。用EtOAc-碳酸氢盐水溶液产 生游离碱，且其不用进一步纯化，可直接使用。
部分C：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在 20mL MeCl2中，加入900mg上述氨基酯和288mg异氰酸叔丁基酯。 将此反应搅拌过夜(约18小时)，然后真空浓缩。在热的EtOAc-水之 间分配，然后用水、盐水洗涤，并真空浓缩得到850mg纯酯脲。
部分D：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在2 mL MeOH/2mL THF中，加入90mg上述酯脲和0.2mL(12.0eq)50％ 羟胺水溶液。将此反应搅拌过夜(约18小时)，然后真空浓缩成固体。 用乙醚研磨并过滤得到50mg纯异羟肟酸酯。
实施例3：制备N-羟基-3-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-2-[(苯基 羰基)氨基]丙酰胺
部分A：在装备有磁力搅棒和氮气入口的500mL圆底烧瓶中，在 50mL乙酸和50mL浓盐酸中，加入5.0g(15.9mmol)的实施例1 部分A的酯。将此反应加热回流4小时。此反应混合物真空浓缩成白 色固体，然后加入两个等份的水并蒸除，加入两个等份的甲苯并蒸除， 然后真空干燥得到4.6g纯氨基酸盐酸盐，m/z＝260(M+H)，为盐酸 盐。m/z＝260。
部分B：在装备有磁力搅棒和氮气入口的500mL圆底烧瓶中，在 100mL MeOH中，加入4.6g(15.7mmol)部分A的氨基酸盐酸盐产 物。将此溶液在冰浴中冷却，然后用1.7mL(2.8g，23.5mmol)亚硫 酰氯处理。将此反应加热回流3小时，然后真空浓缩。此残余物在乙 酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，分层，且水层用EtOAc(1X)萃 取。合并有机层并用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，并真空浓缩得到2.9g 适于下步反应的产物。
部分C：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在 10mL CH2Cl2中，加入0.7g(2.7mmol)部分B的产物和0.6mL(0.4g， 4.0mmol)三乙胺。将此溶液在冰浴中冷却并用0.4mL(0.5g，3.2 mmol)苯甲酰基氯处理。搅拌1小时后，将此反应真空浓缩，此残余 物在EtOAc和水之间分配，且水层用EtOAc(1X)萃取。
合并有机层，用5％枸橼酸溶液、饱和碳酸氢盐溶液和盐水洗涤， 干燥(硫酸钠)，并真空浓缩得到0.8g粗品酰胺产物。粗品酰胺产物 在硅胶上进行色谱纯化，用50％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到0.6g纯 酰胺，m/z＝378(M+H)。
部分D：装备有磁力搅棒和氮气入口的250mL圆底烧瓶中，加入 存在于THF(20mL)的0.6g(1.6mmol)的部分C的纯酰胺。将此溶 液用0.5mL(0.5g，8.21mmol)50％羟胺水溶液处理。搅拌65小时， 此反应没有反应完全，将0.1g(4.3mmol)的钠金属和5mL MeOH 加入到此反应中使其反应完全。
此反应用干冰停止反应并再真空浓缩。此残余固体在EtOAc/2N HCl溶液之间分配。固体沉淀通过过滤分离，用水和EtOAc洗涤，然 后干燥得到0.3g纯异羟肟酸酯，m/z＝379(M+H)。
实施例4：制备N-羟基-3-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-2-[(丁基 羰基)氨基]丙酰胺
部分A：在装备有磁力搅棒和氮气入口的500mL圆底烧瓶中，在 50mL乙酸和50mL浓盐酸中，加入5.0g(15.9mmol)实施例1部 分A的产物。将此反应加热回流4小时。将此反应混合物真空浓缩成 白色固体，加入两个等份的水并蒸除，加入两个等份的甲苯并蒸除， 然后真空干燥得到4.6g纯氨基酸，m/z＝260(M+H)，为盐酸盐。m/z＝ 260。
部分B：装备有磁力搅棒和氮气入口的250mL圆底烧瓶中，在70 mL MeOH中，加入6.5g上述产物氨基酸和2.5mL(1.5当量)SOCl2。 此反应加热回流3小时然后真空浓缩得到粗品固体。用乙醚研磨得到 6.9g适于下步反应的氨基酯盐酸盐。
部分C：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在 10mL二氯甲烷中，加入1.0g(3.2mmol)得自部分B的氨基酯盐酸 盐产物和1.4mL(1.0g，9.7mmol)三乙胺。将此反应浆液在冰浴中 冷却并用0.5mL(0.5g，3.9mmol)戊酰基氯处理。搅拌1小时，此 反应没有反应完全，再加入0.5mL三乙胺和0.4mL戊酰基氯。将 此反应再搅拌2小时以上，然后真空浓缩。将此残余物在EtOAc和水 之间分配，且水层用EtOAc(1X)萃取。合并有机层，用5％枸橼酸溶 液、饱和碳酸氢盐溶液和盐水洗涤，干燥(硫酸钠)，并真空浓缩得到 1.3g粗产物。粗产物用乙醚化浆，过滤并干燥得到0.8g纯酰胺， m/z＝358(M+H)。
部分D：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在 THF(20mL)和MeOH(10mL)中，加入0.8g(2.3mmol)得自部分C的 纯酰胺。将此溶液用2.5mL(1.4g，46.4mmol)50％羟胺水溶液处理。 搅拌16小时后，将此反应混合物真空浓缩，将此残余物在EtOAc/水 之间分配，分层，且有机层用盐水洗涤，干燥(硫酸钠)，并真空浓缩 得到白色固体。固体用乙醚化浆，过滤分离，然后干燥得到0.6g 纯异羟肟酸酯，m/z＝359(M+H)。
实施例5：制备N-羟基-3-[(4-溴苯基)磺酰基]-2-[(甲基-羰基) 氨基]丙酰胺
部分A：在装备有磁力搅棒和氮气入口的1000mL圆底烧瓶中，在 400mL脱气的MeOH，加入25.0g(132.2mmol)4-溴苯硫酚和19.9 g(138.8mmol)乙酰氨基丙烯酸甲基酯。将此溶液在冰浴中冷却并用 19.4mL(14.0g，138.8mmol)三乙胺处理。将此反应搅拌1小时并 产生白色固体沉淀。过滤分离此固体，用MeOH洗涤并干燥得到27.6 g适于下步反应的产物。
部分B：在装备有磁力搅棒和氮气入口的1000mL圆底烧瓶中， 在400mL MeOH中，加入11.0 g(33.1mmol)部分A的产物。将此浆 液加温得到溶液，然后用40mL水和61.1g(99.3mmol)Oxone处理。 将此反应混合物搅拌4小时，然后过滤。滤饼用MeOH洗涤，并将此 滤液真空浓缩。此残余物在EtOAc和水之间分配，分层且水层用 EtOAc萃取(2X)。合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，干 燥(MgSO4)，并真空浓缩得到6.7g纯产物，m/z＝370(M+Li)。
部分C：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在 THF(5mL)和MeOH(5mL)中，加入0.7g(1.9mmol)得自部分B的固 体。此溶液用2.1mL(1.2g，38.4mmol)50％羟胺水溶液处理。搅拌 17小时后，将此反应真空浓缩，此残余物在EtOAc/水之间分配，得 到三相系统--有机相，水相和和在分界面的固体沉淀。过滤分离此固 体，用乙醚洗涤，过滤分离，然后干燥得到0.2g纯异羟肟酸酯，m/z＝ 387(M+Na)。
实施例6：制备苯基甲基-[2-[[2-(羟基氨基)-2-氧代-1-[[[4- 甲氧基-苯基]磺酰基]甲基]乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸酯
部分A：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在8 mL干燥的DMF中，加入1.0g Z-Gly-OH、920mg(1.0eq)EDC、960 mg(1.5eq)HOBT。将此反应活化10分钟，然后用1.0g得自实施 例2部分B的游离氨基酯处理。搅拌17小时后，此反应在EtOAc/饱 和碳酸氢钠之间分配。合并的有机相用10％ KHSO4、水、盐水洗涤，并 真空浓缩得到1.25g酰胺酯(＞95％，经HPLC鉴定)。
部分B：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在 5mL THF中，加入700mg酰胺酯、2.0mL 50％羟胺水溶液。将此 反应搅拌2小时，然后用干冰停止反应。用标准方法处理，接着从 二氯甲烷中蒸发得到所需的异羟肟酸酯，为干燥的泡沫(＞97％经 HPLC鉴定)。
实施例7：制备4-[[1-[(羟基氨基)-羰基]-2-[(4-甲氧基苯基) 磺酰基]乙基]氨基-4-氧代丁酸苄基酯
部分A：制备反应混合物，其中在8mL干燥的DMF中含有2.36g 琥珀酸单苄基酯(1.15当量)、2.18g(1.15当量)EDC和2.0g(1.5 当量)HOBT。将此反应活化10分钟，然后用2.7g实施例2部分B 的游离氨基酯处理。搅拌17小时后，将此反应在EtOAc/饱和碳酸氢 钠之间分配。将合并的有机相用10％ KHSO4、水、盐水洗涤，并真 空浓缩得到3.8g粗品酰胺(82％经HPLC鉴定)。用EtOAc进行闪式 色谱得到3.1g纯二酯产物。
部分B：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在20 mL MeOH和5mL THF中，加入436mg纯二酯和1.3mL 50％羟胺 水溶液。此反应搅拌过夜(约18小时)然后浓缩得到粗产物(35％，经 HPLC鉴定)。在乙酸乙酯/水之间分配得到200mg粗产物(75％经 HPLC鉴定)。用100％THF进行闪式色谱得到100mg纯异羟肟酸酯。
实施例8：制备4[[1-[(羟基氨基)-羰基]-2-[(4-甲氧基苯基) 磺酰基]-乙基]氨基-4-氧代丁酸
部分A：在装备有磁力搅棒的300mL Paar烧瓶中，加入436mg 实施例7部分A的二酯、存在于35mL甲醇中的100mg 10％ Pd-C、 30mL AcOH，然后加入60mL THF。将此反应混合物在50psi下氢化 过夜(约18小时)。清除氮气后，此反应通过硅藻土板过滤并浓缩为 粗品油状物。此产物用甲苯处理两次然后用乙醚研磨得到630mg(78 ％)该酯，为白色固体。
部分B：装备有磁力搅棒和氮气入口的100mL圆底烧瓶中，在4 mL MeOH和5mL THF中，加入373mg部分A的该酯和1.0mL 50％ 羟胺水溶液。将此反应搅拌过夜(约18小时)，浓缩成粗品灰白色固 体用甲苯处理2次然后用乙醚研磨得到250mg标题异羟肟酸酯。
实施例9a：制备O-(4-苯氧基苯基)-N，N-二甲基硫代氨基甲酸 酯
按照Newman[Org.Syn.，51，139-142]描述的一般方法，在氩 气氛下将4-苯氧基苯酚(150mmol，27.9g)加入到0℃的氢氧化钾 (150mmol，8.4g)水(100mL)溶液中。苯酚部分溶解后，将存在于 四氢呋喃(THF；40mL)中的二甲基硫代氨基甲酰基氯(150mmol， 24.8g)加入到此反应容器中，加入速度保持烧瓶的内部温度不超过 12℃(在约20分钟内)。加毕，除去冰浴，并再继续搅拌10分钟。加 入KOH水溶液(10％，50mL)，并将此反应混合物用甲苯(3×100mL) 萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥，通过短硅胶塞过滤，浓缩，加入 以前的样本作为晶种，并保存于0℃下。所得固体用二氯甲烷(10mL) 研磨，得到25.9g标题化合物，为固体(63％)。DSC 1℃/分钟： 52.5-56.2℃。
实施例9b：制备S-(4-苯氧基苯基)-N，N-二甲基硫代氨基甲酸酯
将实施例9a的产物(25.91g)在氩气氛下加热至32℃(内部)并 在此温度下维持15分钟。让此暗色油状物冷却，进行光谱鉴定，并 直接用于下步反应。
实施例9c：制备4-(苯氧基)苯硫醇
将乙二醇(75mL)、水(10mL)和氢氧化钾(9g)加入到上述暗色 油状物中，并将此混合物加热回流1小时。冷却后，将此混合物倒在 冰上(约200mL)，并用氯仿(2×150mL)洗涤。用浓盐酸酸化水层， 并用氯仿(3×75mL)萃取此产物。收集有机层，干燥(MgSO4)，通过 短硅胶塞过滤，并浓缩得到标题化合物，为油状物(9.5g，49％，由 实施例9b计算)
实施例9d：制备N-乙酰基-3-[(4-苯氧基苯基)磺酰基]丙氨酸， 甲基酯
将实施例9c的产物(15mmol，3.03g)用甲醇稀释。加入2-(乙 酰基氨基)-2-丙烯酸甲酯(15mmol，2.14g)，接着加入三乙胺(15 mmol，2.1mL)。此溶液在室温下搅拌1小时，在45-50℃下搅拌2 小时。再用50mL甲醇将粗品反应混合物清洗到较大的烧瓶中甲醇并 冷却至0℃。加入Oxone(30mmol，18.45g)的水(100mL)溶液。5 分钟后，除去冰浴。将此混合物室温下搅拌1小时，然后再用水(200 mL)稀释，并用氯仿(200mL，然后2×50mL)萃取。将合并的有机 层干燥(硫酸镁)，过滤，浓缩，并进行色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯1∶ 1)，得到标题化合物，为白色固体(2.185g，39％)。DSC 1℃/分钟： 127.0-129.8。此产物进行光谱鉴定。元素分析：理论值C18H19NO6S：C， 57.28；H，5.07；N，3.71。实测值：C，57.10；H，4.94；N，3.51。
实施例9e：制备N-乙酰基-3-[(4-苯氧基苯基)磺酰基]丙氨酸
将实施例9d的产物(2.1mmol，800mg)用乙酸(2mL)和浓盐酸 (2mL)稀释并加热至70℃，保持1小时。将此反应混合物浓缩，并 与甲苯(3×5mL)共沸，得到标题化合物，为固体(定量)。MS MH+理 论值C17H17NO6S 364，实测值364。DSC 1℃/分钟：193.0-195.1。 此产物进行光谱鉴定。
实施例9f：制备N2-乙酰基-3-[(4-苯氧基苯基)磺酰基]-N1- (3，4，5，6-四氢-2H-吡喃-2-基)丙氨酸酰胺
将实施例9e的酸(2.1mmol)与羟基苯并三唑(2.7mmol，365 mg)、O-四氢吡喃羟胺(3mmol，0.35g)、N，N二甲基甲酰胺(4mL) 和N-甲基吗啉(13mmol，1.43mL)混合。加入EDC(2.7mmol，518mg) 并将此混合物室温下搅拌过夜(约18小时)。将此混合物用饱和碳酸 氢钠(20mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL)萃取。有机相用盐水(20mL) 洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并进行硅胶色谱纯化(6％甲 醇在氯仿中)，得到标题化合物，为玻璃状物(472mg，50％)。此产 物进行光谱鉴定。
实施例9g：制备N2-乙酰基-N1-羟基-3-[(4-苯氧基苯基)磺酰基] 丙氨酸酰胺
将实施例9f的产物(1.0mmol，450mg)溶解于二噁烷(5mL)。 加入6N HCl(0.5mL)，并将此混合物搅拌1小时。浓缩接着进行色 谱纯化得到标题化合物，为玻璃状物(120mg，32％)。MS MH+理论 值C17H18N2O6S 378，实测值379
实施例10a：制备3-[(4-苯氧基苯基)-磺酰基]丙氨酸，单盐酸 盐
将实施例9d的标题化合物(3.27g，8.66mmol)的冰醋酸(18.5 mL)溶液加热至所有固体溶解，然后加入浓盐酸(18.5mL)。将此溶 液加热回流4小时。将此混合物浓缩成灰白色固体。此固体用甲苯处 理，浓缩，并用乙醚研磨得到标题氨基酸，为白色固体(3.04g， 98％)。元素分析：理论值C15H16NO5SCl：C，50.35；H，4.51；N，3.91； S，8.96。实测值：C，50.21；H，4.43；N，3.92；S，9.04。
实施例10b：制备N-[(1，1-二甲基乙基)-羰基]-3-[(4-苯氧基 苯基)-丙氨酸酰胺
将上述氨基酸(1.4mmol，500mg)溶解于水(2mL)、三乙胺(5.6 mmol，0.79mL)和丙酮(3mL)的混合物中，并冷却至0℃。在5分钟 内加入新戊酰氯(1.8mmol，0.22mL)。在1小时内将此反应加温至 室温并搅拌过夜(约18小时)，然后浓缩并与乙腈(10mL)共沸。色谱 纯化(20％甲醇/氯仿)得到标题化合物，为三乙胺盐。将此三乙胺盐 溶解于氯仿(150mL)并用2N HCl(20mL)洗涤。有机层用硫酸镁干燥， 过滤，浓缩并再进行色谱纯化得到标题化合物，为白色泡沫(485 mg)。此产物进行光谱鉴定。
实施例10c：制备N2-(1，1-二甲基乙基)-3-[(4-苯氧基苯基)磺 酰基]-N1-3，4，5，6-四氢-2H-吡喃-2-基)丙氨酸酰胺
将实施例10b所得酸(0.89mmol，455mg)悬浮于四氢呋喃。加 入EDC(1.00mmol，192mg)。15分钟后，加入THP-O-羟胺。将此混 合物室温下搅拌20小时，用饱和碳酸氢钠稀释，并用乙酸乙酯(125 mL)萃取。有机层用盐水(5mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩并 进行色谱纯化(6％甲醇/氯仿)得到标题化合物，为固体(260mg， 58％)。此产物进行光谱鉴定。元素分析：理论值C24H31N2O7S(1/4 H2O)： C，59.10；H，6.25；N，5.51。实测值：C，59.10；H，6.50；N，5.31。
实施例10d：制备N2-[(1，1-二甲基乙基)-氨基甲酰基]-N1-羟基 -3-[(4-苯氧基-苯酚)-磺酰基]丙氨酸酰胺
将实施例10c的产物(，250mg)悬浮于甲醇(10mL)并加入甲苯 磺酸(10mg)。2小时后，再加入甲苯磺酸(10mg)，并再继续搅拌1 小时。将此反应混合物浓缩，并将此残余物进行色谱纯化(6％甲醇/ 氯仿)，得到所需的异羟肟酸酯，为白色泡沫(166mg)。此产物进行 光谱鉴定。元素分析：理论值C20H24N2O6S：C，57.13；H，5.75；N， 6.66。实测值：C，52.67；H，5.32；N，5.91。
实施例11a：制备N-乙酰基-3-[(4-氟苯基)磺酰基]丙氨酸，甲 基酯
向冷却至0℃的、2-乙酰氨基丙烯酸甲酯(10.0g，69.9mmol)的 100ml甲醇溶液中，加入4-氟苯硫酚(7.44mL，69.9mmol)，接着 加入三乙胺(9.74mL，69.9mmol)。将此混合物在氮气氛下搅拌4 小时。将此溶液倒入Oxone(86g，140mmol)在H2O(250mL)和 MeOH(125mL)的浆液中。室温下搅拌18小时后，将此混合物在 EtOAc(200mL)和H2O之间分配，并用饱和NaHCO3(3×100mL)和盐 水(1×100mL)洗涤。真空浓缩后，用乙醚研磨得到标题化合物，为 白色固体(16.3g，77％)：MS MH+理论值C12H14NO5SF：304，实测值 304。HRMS理论值C12H14NO5SF：303.0577，实测值：303.0581。
实施例11b：制备N-乙酰基-3-[(4-氟苯基)磺酰基]丙氨酸
将实施例11a的标题化合物(17.9g，59.0mmol)在冰醋酸(135 mL)和浓盐酸(135mL)中的溶液，加热至7℃，保持2小时。此溶液 在氮气流下浓缩得到标题化合物，为白色固体(17.0g，定量收率)： MS MH+理论值C11H12NO5SF：290，实测值290。HRMS理论值C11H13NO5SF： 290.0499，实测值：290.0520。
实施例11c：制备N-乙酰基-3-[[4-(苯硫基)苯基]磺酰基]丙氨 酸
将苯硫酚(7.27g，71.0mmol)加入到实施例11b标题化合物 (17.0g，59.0mmol)和K2CO3(24.4g，177mmol)的DMF(200mL)溶液 中。在9℃下加热2小时后，将此混合物在氮气流下浓缩。用1M KHSO4将此溶液酸化至pH＝1，用EtOAc萃取(2X)，有机相用盐水洗涤并用 硫酸镁干燥。将此溶液真空浓缩得到标题化合物，为白色固体且不经 进一步纯化直接使用。
实施例11d：制备3-[[4-(苯硫基)-苯基]磺酰基]丙氨酸，单盐 酸盐
将实施例11c标题化合物(30.0g)的冰醋酸(100mL)和浓盐酸 (100mL)溶液加热至11℃，保持19小时。此溶液浓缩并用乙醚研磨 得到标题化合物，为白色固体(17.1g，三步收率78％)：元素分析：理 论值C15H15NO4S2·1.1 HCl·0.25 H2O：C，47.16；H，4.38；N，3.67； Cl，10.21。实测值：C，47.16；H，4.27；N，3.91；Cl，9.95。
实施例11e：制备N-(1-氧代戊基)-3-[[4-(苯硫基)苯基]磺酰 基]丙氨酸
向冷却至0℃的、实施例11d标题化合物(1.0g，2.68mmol)的 H2O(3mL)和丙酮(2mL)溶液中，加入三乙胺(1.17mL，8.43mmol)， 接着滴加在丙酮(2mL)中的戊酰基氯(0.30mL，2.52mmol)。室温 下搅拌18小时后，将此混合物浓缩。所得水相残余物用1M KHSO4酸 化并用二氯甲烷萃取(3X)。合并的有机相用1M KHSO4(1×25mL)和 盐水(1×25mL)洗涤并用硫酸镁干燥。此溶液真空浓缩得到标题化 合物，为无色油状物(690mg，61％)：MS M+理论值C20H23NO5S2：421， 实测值421。HRMS理论值C20H23NO5S2：421.1018，实测值：421.1025。
实施例11f：制备N-[2-氧代-1-[[[4-(苯硫基)苯基]磺酰基]甲 基]-2-[[(3，4，5，6-四氢-2H-吡喃-2-基)-氧基]氨基]乙基]戊酰胺
向冷却至0℃的、实施例11e标题化合物(690mg，1.64mmol) 和O-四氢-2H-吡喃-2-基-羟胺(192mg，1.64mmol)的无水THF(40mL) 溶液中，加入EDC(330mg，1.72mmol)和HOBT(264mg，1.72mmol)。 在0℃下搅拌5小时，并在室温下搅拌18小时后，将此溶液浓缩。 将此残余物溶解于EtOAc(50mL)并用1M KHSO4(2×50mL)、饱和 NaHCO3(2×50mL)和盐水(1×50mL)洗涤并用硫酸钠干燥。通过色 谱纯化(1∶1 EtOAc/己烷)得到标题化合物，为无色油状物(500mg， 59％)：元素分析：理论值C25H32N2O6S2：C，57.67；H，6.19；N，5.38。 实测值：C，57.48；H，6.37；N，5.11。
实施例11g：制备N-[1-[(羟基氨基)-羰基]-2-[[4-(苯硫基)苯 基]磺酰基]乙基]戊酰胺
向实施例11f标题化合物(500mg，0.96mmol)的甲醇(20mL) 溶液中，加入对甲苯磺酸一水合物(40mg，0.21mmol)。室温下搅 拌2小时后，将此溶液浓缩。通过色谱纯化(6∶94 MeOH/CHC13)得到 标题化合物，为淡棕色固体(170mg，40％)：元素分析：理论值 C20H24N2O5S2·0.5H2O：C，53.91；H，5.66；N，6.29；S，14.39。实 测值：C，53.98；H，5.44；N，6.20；S，14.47。
实施例12a：制备
将对甲苯磺酰基氯(TsCl；0.779g，4.19mmol)的2.4mL丙酮 溶液，滴加到实施例12a标题化合物(1.50g，4.19mmol)和三乙胺 (2.36mL，16.9mmol)在2.4mL丙酮和6.4mL H2O中的、0℃的混 合物中。室温下放置3小时后，将此混合物浓缩，用甲苯稀释，并浓 缩得到白色固体。固体用水和甲苯洗涤，再通过色谱纯化(5∶95 MeOH/CHC13)得到所述化合物，为白色固体(0.75g，38％收率)。1H NMR 光谱证实其为所述化合物。
实施例12b：制备
向实施例12a所述化合物(0.75g，1.6mmol)、HOBT(0.253g，1.7 mmol)和O-四氢-2H-吡喃-2-基-羟胺(0.18g，1.6mmol)的干燥 THF(22mL)溶液中，在0℃下加入EDC(0.316g，1.7mmol)。将此混 合物缓慢升温至室温并在室温下搅拌过夜(约18小时)。将此溶液浓 缩，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。用硫酸镁干燥后，将此滤 液浓缩为白色固体。此固体通过色谱纯化(40∶60丙酮/己烷)得到标 题化合物，为白色固体(0.22g，24％收率)。质子NMR光谱证实其为 标题化合物。
实施例12c：制备
将实施例12b所述化合物(0.220g，0.383mmol)和对甲苯磺酸 一水合物(20mg，0.105mmol)的MeOH(5mL)溶液室温下搅拌2小时。 将此溶液浓缩并用乙醚研磨得到所述化合物，为灰白色固体(50mg， 43％)：MS M+理论值C22H22N2O7S2 490，实测值490。HRMS理论值 C22H22N2O7S2：490.0868；实测值：490.0863。
实施例13a：制备3-[(4-苯氧基苯基)-磺酰基]-N-[(苯基甲氧 基)-羰基]丙氨酸
按照实施例10b的方法制备此标题化合物，其中使用(0.892g， 2.5mmol)34a的氨基酸，并用苄氧羰基氯(0.43mL，3mmol)代替新 戊酰氯。产物为黄色泡沫(689mg，66％)，并进行光谱鉴定。MS MH+ 理论值C23H21NO7S 456，实测值456。元素分析：理论值C23H21NO7S：C， 59.47；H，4.77；N，3.02。实测值：C，59.49；H，4.35；N，3.09。
实施例13b：制备苯基甲基[2-氧代-1-[[(4-苯氧基苯基)磺酰基] 甲基]-2-[[3，4，5，6-四氢-2H-吡喃-2-基)-氧基]氨基]乙基氨基甲 酸酯
通过实施例10c的方法由实施例15a的酸(669mg，1.6mmol)， 制备标题O-THP异羟肟酸酯，色谱纯化后得到208mg产物，为黄色 泡沫。用光谱方法证实其结构。
实施例13c：制备苯基甲基[1-[(羟基氨基)羰基]-2-[(4-苯氧基 苯基)磺酰基]乙基]氨基甲酸酯
将得自实施例13b的O-THP异羟肟酸酯(203mg，0.36mmol)用 甲醇(10mL)稀释，并加入甲苯磺酸(20mg)。将此混合物搅拌1小 时，浓缩，并进行色谱纯化，得到标题异羟肟酸酯(74mg，20％)，为 白色泡沫，将其进行光谱鉴定。MS MH+理论值C23H22N20O7S 470，实 测值470。元素分析：理论值C23H22N20O7S(H2O)：C，56.53；H，4.90； N，5.65。实测值：C，56.55；H，4.95；N，5.73。
实施例14a：制备N-[(苯基甲氧基)-羰基]-3-[[4-(苯硫基)苯 基]-磺酰基]丙氨酸
向冷却至0℃的、实施例11d标题化合物(1.5g，4.0mmol)的 H2O(5mL)和丙酮(3mL)溶液中，加入三乙胺(1.8mL，12.6mmol)， 接着滴加存在于丙酮(3mL)中的氯甲酸苄基酯(0.57mL，4.0mmol)。 室温下搅拌6小时，将此混合物浓缩。所得含水残余物用1M KHSO4酸 化并用二氯甲烷萃取(3X)。合并的有机相用1M KHSO4(1×25mL)和 盐水(1×25mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。此溶液真空浓缩得到标题 化合物，为黄色油状物(1.4g，72％)。
实施例14b：制备苯基甲基-[2-氧代-1-[[[4-(苯硫基)苯基]磺 酰基]甲基]-2-[[3，4，5，6-四氢-2H-吡喃-2-基]-氧基]氨基]乙基] 氨基甲酸酯
向冷却至0℃的、实施例14a标题化合物(1.35g，2.87mmol) 和O-四氢-2H-吡喃-2-基-羟胺(336mg，2.87mmol)的无水DMF(20mL) 溶液中，加入EDC(578mg，3.01mmol)和HOBT(461mg，3.01mmol)。 在0℃下搅拌1小时并在室温下搅拌2小时后，将此溶液在EtOAc和 水之间分配。所得有机相用1M KHSO4(2×50mL)、饱和NaHCO3(2× 50mL)和盐水(1×50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。通过色谱纯化(1∶ 1 EtOAc/己烷)得到标题化合物，为无色油状物(500mg，31％)：
实施例14c：制备苯基甲基-[2-(羟基氨基)-2-氧代-1-[[[4-(苯 硫基)-苯基]磺酰基]甲基]-乙基]氨基甲酸酯
向实施例14b标题化合物(500mg，0.96mmol)的乙腈(20mL) 溶液中，加入对甲苯磺酸一水合物(40mg，0.21mmol)。室温下搅 拌1.5小时，浓缩此溶液。用乙醚研磨得到标题化合物，为白色固体 (120mg，28％)：元素分析：理论值C23H22N2O6S2·0.2H2O：C，56.36； H，4.61；N，5.72；S，13.08。实测值：C，56.18；H，4.21；N，5.50； S，13.31。
实施例15a：制备2-(乙酰基氨基)-3-[[4-(苯硫基)苯基]磺酰 基]-N-[(3，4，5，6-四氢-2H-吡喃-2-基]氧基]丙酰胺
向冷却至0℃的、实施例11c标题化合物(930mg，2.45mmol) 和O-四氢-2H-吡喃-2-基-羟胺(287mg，2.45mmol)的无水DMF(40mL) 溶液中，加入EDC(493mg，2.57mmol)和HOBT(393mg，2.57mmol)。 在0℃下搅拌1小时并在室温下搅拌3小时，此溶液在EtOAc和水之 间分配。所得有机相用1M KHSO4(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL) 和盐水(1×50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。通过色谱纯化(1∶1 EtOAc/ 己烷)得到标题化合物，为无色油状物(400mg，34％)。
实施例15b：制备2-(乙酰基氨基)-N-羟基-3-[[4-(苯硫基)苯 基]-磺酰基]丙酰胺
向实施例15a标题化合物(400mg，0.84mmol)的甲醇(40mg) 溶液中，加入对甲苯磺酸一水合物(40mg，0.21mmol)。室温下搅 拌2小时，浓缩此溶液。通过闪式色谱纯化(4∶96 MeOH/CHCl3)得 到标题化合物，为白色固体(140mg，42％)：元素分析：理论值 C17H18N2O5S2·0.8H2O：C，49.94；H，4.83；N，6.85；S，15.68。实 测值：C，50.23；H，4.62；N，6.80；S，15.29。
实施例16a：制备3-[[4-(苯硫基)-苯基]磺酰基]丙氨酸，甲基酯
将亚硫酰氯(0.44mL，6.0 mmol)滴加到实施例11d标题化合物 (1.5g，4.0mmol)的甲醇(20mL)溶液中。将此溶液加热回流5小时 和然后浓缩。加入EtOAc后，通过真空过滤除去不溶物。将此滤液用 饱和NaHCO3(2×50mL)和盐水(1×50mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。 浓缩此溶液得到标题化合物，为黄色油状物(570mg，41％)：
实施例16b：制备N-[2-[[(苯基甲氧基)-羰基]氨基]乙酰基]- 3-[[4-(苯硫基)苯基]磺酰基]丙氨酸，甲基酯
将羧基苄氧基甘氨酸琥珀酰亚胺基酯(500mg，1.6mmol)，加 入到冷却至0℃的、实施例16a标题化合物(570mg，1.6mmol)的二 氯甲烷(20mL)溶液中。室温下搅拌20小时，真空下除去溶剂，并此 残余物溶解于EtOAc。有机层用1M KHSO4(2×50mL)、饱和NaHCO3(2 ×50mL)和盐水(1×50mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。真空浓缩得到 标题化合物，为无色油状物(800mg，93％)。
实施例16c：制备苯基甲基-[2-[[2-(羟基氨基)-2-氧代-1- [[[4-(苯硫基)-苯基]磺酰基]甲基]乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基 甲酸酯
向实施例16b标题化合物(440mg，0.81mmol)的四氢呋喃(9mL) 和甲醇(3mL)溶液中，加入NH2OH(50％水溶液，0.74mL，12mmol)。 室温下搅拌20小时，浓缩此溶液。通过闪式色谱纯化(5∶95 MeOH/CHCl3)得到标题化合物，为白色固体(80mg，18％)：元素分析： 理论值C25H25N3O7S2·0.25H2O：C，54.78；H，4.69；N，7.67；S， 11.70。实测值：C，54.78；H，4.72；N，7.46；S，11.53。
实施例17a：制备
向实施例11d标题化合物(1.6g，4.28mmol)的H2O(6mL)和丙 酮(3mL)溶液中，在0℃下加入三乙胺(2.8mL，38.2mmol)，接着 滴加存在于丙酮(3mL)中的甲苯磺酰基氯(TsCl；1.24g，65.0 mmol)。室温下搅拌18小时后，将此混合物浓缩。此残余物用10％ KHSO4水溶液和二氯甲烷处理，得到一悬浮液，将其过滤得到所需的 产物，为白色粉末(1.3g，61.9％)。HRMS理论值C22H21NO6S3： 492.0609。实测值：492.0607。
实施例17b：制备
向实施例17a所述化合物(0.6g，1.22mmol)的无水THF(12mL) 和无水DMF(3mL)溶液中，在0℃下加入EDC(0.280g，1.46mmol) 和HOBT(0.198g，1.46mmol)。在0℃下搅拌30分钟，加入O-四氢 -2H-吡喃-2-基-羟胺(0.172g，1.46mmol)并将此反应溶液室温下搅 拌16小时。然后，将此溶液浓缩并将此残余物溶解于EtOAc(50mL)， 并连续用10％枸橼酸(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)和盐水 (1×50mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。通过色谱纯化(1.5/60/40 MeOH/EtOAc/己烷)得到所述化合物，为白色固体(0.47g，65.3％)。
实施例17c：制备
将对甲苯磺酸一水合物(47mg，0.25mmol)加入到实施例17b 所述化合物(430mg，0.72mmol)的甲醇(13mL)溶液中。室温下搅 拌1.5小时后，出现白色沉淀，过滤得到白色固体。用乙醚研磨得到 所述化合物(280mg，75.7％)：元素分析：理论值C22H22N2O6S3：C， 51.12；H，4.58；N，7.95；S，18.20。实测值：C，51.06；H，4.59； N，7.83；S，18.45。
实施例18a：制备
向16a标题化合物(0.5g，1.4mmol)的MeOH(2mL)和THF(2mL) 溶液中，加入50％ NH2OH水溶液(1mL，13.5mmol)。将此反应溶液 搅拌2小时，期间出现白色沉淀。将所得悬浮液过滤，并将所得白色 粉末用乙醚(10mL×3)洗涤，得到所述化合物。元素分析：理论值 C15H16N2O4S2：C，51.12；H，4.58；N，7.95；S，18.20。实测值：C， 51.06；H，4.59；N，7.83；S，18.45。
实施例19a：制备
向Cbz-丙氨酸(1.43g，6.4mmol)的DMF溶液中，在0℃下加 入EDC(1.23g，6.4mmol)和HOBT(0.87g，6.4mmol)。在0℃放置 30分钟后，将实施例11d标题化合物(2g，5.36mmol)加入到此溶液 中，接着加入N-甲基吗啉(1.82mL，16.5mmol)。此反应溶液在室 温下放置搅拌过夜(约18小时)。浓缩此反应并将所得残余物溶解于 10％ KHSO4水溶液中。此水溶液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用10％ KHSO4水溶液洗涤，用硫酸镁干燥并蒸发得到所述化合物。
实施例19b：制备
向实施例19a所述化合物(1.0g，1.84mmol)的干燥的DMF(10mL) 溶液中，在0℃下加入EDC(0.422g，2.2mmol)和HOBT(0.299g，2.2 mmol)。在0℃下搅拌30分钟后，加入O-四氢-2H-吡喃-2-基-羟胺 (0.323g，2.6mmol)。然后，将此反应溶液在室温下搅拌16小时。 浓缩此溶液得到残余物，将其溶解于EtOAc(50mL)，并用10％枸橼 酸(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)和盐水(1×50mL)洗涤，然 后用硫酸镁干燥。蒸发得到残余物，将其通过在硅胶上进行色谱纯化 (2/50/50 MeOH/EtOAc/己烷)得到所述化合物，为白色固体(0.6g， 50.8％)。元素分析：理论值C31H35N3O8S2：C，58.02；H，5.5；N，6.55； S，9.99。实测值：C，57.69；H，5.59；N，6.35；S，10.33。
实施例19c：制备
将对甲苯磺酸一水合物(25mg，0.13mmol)加入到实施例19b 标题化合物(170mg，0.26mmol)的甲醇(1mL)和乙腈(4mL)溶液中。 室温下搅拌过夜(约18小时)后，将此反应溶液浓缩成残余物，将此 残余物通过在硅胶上进行色谱纯化(5/100 MeOH/CH2Cl2)得到标题化 合物，为白色固体(82mg，55.5％)：元素分析：理论值C26H27N3O7S2： C，56.00；H，4.88；N，7.54；S，11.50。实测值：C，56.11；H，5.22； N，7.28；S，11.22。
实施例20a：制备
向实施例16a标题化合物(0.43g，1.2mmol)的CH2Cl2溶液中，加 入异氰酸叔丁基酯(0.48mL，4.2mmol)。室温下搅拌3天后，将此 反应溶液用乙酸乙酯(50mL)稀释并依次用10％枸橼酸(2×50mL)、 饱和NaHCO3(2×50mL)和盐水(l×50mL)洗涤，然后用硫酸镁干燥。 蒸发溶剂得到标题化合物，为白色固体结晶。元素分析：理论值 C21H26N2O5S2：C，55.98；H，5.82；N，6.22；S，14.25。实测值：C， 55.78；H，6.00；N，6.09；S，14.25。
实施例20b：制备
将NH2OH水溶液(0.9mL，15.8mmol)加入到实施例20a所述化 合物(0.47g，1.04mmol)的MeOH(2mL)和THF(2mL)溶液中。室温 下搅拌过夜(约18小时)后，将此反应溶液浓缩成残余物，将此残余 物通过在硅胶上进行色谱纯化(5/100 MeOH/CH2Cl2)得到所述化合物， 为白色固体(287mg，61.0％)：元素分析：理论值C20H25N3O5S2·H2O：C， 51.16；H，5.80；N，8.95；S，13.66。实测值：C，51.34；H，5.60； N，9.41；S，13.57。
实施例化合物21-70与上述类似地制备。
实施例21：体外金属蛋白酶抑制作用
在体外实验中，检测按照上述实施例所述方式制备的化合物的 活性。该检测按照Knight等，FEBS Lett.296(3)：263(1992) 的方法。简言之，将4-氨基苯基醋酸汞(APMA)或胰蛋白酶-活化的MMP 与不同浓度的抑制剂化合物在室温下一起孵育5分钟。
更具体地讲，按照常规实验室方法在受让人的实验室中制备重 组人MMP-13和MMP-1酶。如V.A.Luckow，Insect Cell Expression Teehnology，183-218页，in Protein Engineering：Principes and Practice，J.L.Cleland等编辑，Wiley-Liss，Inc.，(1996)所 讨论的，用杆状病毒以酶原的形式由全长cDNA克隆表达MMP-13。杆 状病毒表达系统用法的细节，也可参见Luckow等，J.Virol.，67： 4566-4579(1993)；O′Reilly等，Baculovirus Expression Vectors： A Laboratory Manual，W.H.Freeman and Company，New York，(1992)；及King等，The Baculovirus Expression System：A Laboratory Guide，Chapman & Hall，London(1992)。被表达的酶 先经肝素琼脂糖柱纯化，然后通过螯合的氯化锌柱纯化。用APMA激 活酶原以用于此实验中。
在转染HT-1080细胞中表达的MMP-1由Washington University， St.Louis，MO的Dr.Harold Welgus提供。此酶也用APMA激活，然 后通过异羟肟酸柱纯化。这些酶的制备和使用的进一步说明可参阅描 述这些酶的科学文献中。例如，见，Enzyme Nomenclature，Academic Press，San Diego，Ca(1992)及其中引用的参考文献，以及Frije 等，J.Biol.Chem.，26(24)：16766-16773(1994)。
此酶底物是含甲氧基香豆素的序列如下的多肽：
MCA-ProLeuGlyLeuDpaAlaArgNH2，其中MCA是甲氧基香豆素而 Dpa是3-(2，4-二硝基苯基)-L-2，3-二氨基丙酰基丙氨酸。此底物可 以购自Baychem，产物M-1895。
用于实验的缓冲液含有100mmol Tris-HCl、100mmol NaCl、 10mmol CaCl2和0.05％聚乙二醇(23)月桂基醚，其pH值为7.5。实 验在室温下进行，用最终浓度为1％的二甲基亚砜(DMSO)来溶解抑制 剂化合物。
用MicrofluorTM White Plates(Dynatech)，将存在于DMSO/ 缓冲液中的被测抑制剂化合物与等量的不含抑制剂的DMSO/缓冲液 对照相比较。将抑制剂或对照溶液在板中放置10分钟，加入底物至 最终浓度为4μM。
在抑制剂活性不存在的情况下，萤光肽在gly-leu肽键裂解，将 高度荧光肽与2，4-二硝基苯基淬灭剂分离，导致荧光强度增加(在328nm 激发/在415nm发射)。使用Perkin Elmer L550板读数器，通过作为抑 制剂浓度的函数的荧光强度的降低来检测抑制性。由这些数值计算IC50 值。结果阐述于下面抑制表中，以纳摩尔(nM)量为单位报告IC50值。
                    抑制表
                 MMP酶抑制特性
                  (nM，IC50)   实施例     MMP-1     MMP-2     MMP-13     1     300     15.0     2     1500     15.0     3     2000     25.0     4     400     3.5     5     100     200     6     40     ＜1.0     7     200     2.5     8     600     60.0     9g     770     1.1     10d     1600     2.7     11g     10000     6.0     12c     400     ＜0.1     0.6     13c     1400     1.1     14c     ＞10000     3.7     15b     ＞10000     2.2     5.9     16c     ＞10000     0.8     17c     600     0.4     18a     ＞10000     24.0     19a     ＞10000     0.8     20b     ＞10000     4.0     21     300     15.0     22     250     15.0     23     ＞10000     1500     24     5200     650     25     1.0     1.0     26     27     ＞10000     14.0     28     ＞10000     5.5     13.0     29     ＞10000     7.0     30     10000     0.5     2.9     31     3000     0.8     0.4     32     8000     0.4     33     500     0.2     0.3     34     ＞10000     5.0     35     3000     0.2     36     ＞10000     2.5     37     350     0.25     0.4     38     170     0.5     0.5     39     114，225     0.3，0.8     0.3，1.1     40     1600     0.3     0.3     41     440，670     0.3，0.5     0.4，1.0     42     ＞10000     40.0     41.5     43     90.0     0.2     0.2     44     900     0.3     0.8     45     ＞10000     5.0     46     1310     0.3     1.1     47     258     0.6     45.3     48     475     ＜0.1     0.2     49     ＞10000     80.0     160     50     316     0.3     0.3     51     295     0.3     0.4     52     ＞10000     5.0     24.0     53     8100     0.3     2.1     54     345     0.2     0.3     55     1600     1.3     1.6     56     1200     0.2     0.3     57     ＞10000     540     580     58     4400     3.2     2.4     59     580     0.4     0.8     60     440     0.3     0.4     61     ＞10000     1.1     60.0     62     72.3     23.9     1200     63     3050     1.0     21.5     64     7000     0.4     8.1     65     ＞10000     184     161     66     2350     0.5     1.1     67     2400     1.3     2.4     68     ＞10000     0.4     1.4     69     700     0.2     0.6     70     130     0.2     0.4
实施例22：肿瘤坏死因子实验
细胞培养
用于此实验的细胞是人单核细胞系U-937(ATCC CRL-1593)。这 些细胞生长于RPMI w/10％ FCS和PSG添加物(R-10)中，且不让其过 度生长。该实验进行如下：
1.计数，然后离心收集细胞。将细胞颗粒再悬浮于R-10补加培 养基中，浓度为1.540×106细胞/mL。
2.将存在于65μL R-10中的被测化合物加到96孔平底组织培 养板的适当的孔中。由DMSO贮存液(100mM化合物)的起始稀释度制 备400μM溶液，由该溶液再进行5个三倍的系列稀释。每个稀释度 65μL(一式三份)得到如下的最终化合物被测浓度100μM，33.3μM， 11.1μM，3.7μM，1.2μM和0.4μM。
3.将存在于130μL中的已计数、洗涤并再悬浮的细胞(200000 细胞/孔)加入到孔中。
4.在水份饱和的容器中，在37℃下，在5％二氧化碳中，培养 45分钟至1小时。
5.向每个孔中加入含有160ng/mL PMA(Sigma)的R-10(65μL)。
6.将此检测系统在37℃下，在5％ CO2中，在100％湿度下，过 夜培养(18-20小时)。
7.从每个孔中小心地移出150μL上清液用于ELISA检测。
8.对于毒性，将含5mL R-10、5mL MTS溶液的50μL一等份 的工作液[CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay Cat.#G358/0，1(Promega Biotech)]和250μL PMS溶液加 入到装有剩余上清液和细胞的每个孔中，并将细胞在37℃下在5％二 氧化碳中培养直到显色。将此系统在570nM下激发并在630nm下读 数。
TNFα ELISA检测
Coat Immulon2板，其中加入0.1mL/孔的1μg/mL的存在于 0.1M碳酸氢钠pH8.0缓冲液中的Genzyme mAb，在4℃下放置过夜(约 18-20小时)，用Saran包封膜紧密地覆盖。
轻轻弃去包被溶液并用0.3mL/孔封闭缓冲液封闭板，在4℃下， 用Saran包封膜覆盖，过夜放置。
用洗涤缓冲液彻底洗涤各孔(4次)并彻底除去所有的洗涤缓冲 液。加入0.1mL/孔的样本或rhTNFα标准物。如果需要，就在适当的 稀释液(例如，组织培养基)中稀释这些样本。在相同的稀释液中稀释 标准物。标准物和样本应一式三份。
在潮湿的容器在37℃下孵育1小时。
按照所述方法洗涤培养板。加入0.1mL/孔的1∶200稀释度的 Genzyme兔抗-hTNFα。
重复培养。
重复洗涤。加入0.1mL/孔的1μg/mL Jackson绵羊抗-兔IgG(H +L)-过氧化酶。
在37℃下培养30分钟。
重复洗涤步骤。加入0.1mL/孔的过氧化物-ABTS溶液。
在室温下孵育5-20分钟。
在405nm读数OD。
12种试剂为：
Genzyme小鼠抗-人TNF单克隆(Cat.#80-3399-01)
Genzyme兔抗-人TNF多克隆(Cat.#IP-300)
Genzyme重组人TNF(Cat.#TNF-H)。
Jackson Immunoresearch过氧化物轭合的绵羊抗兔 IgG(H+L)(Cat.#111-035-144)。
Kirkegaard/Perry过氧化物ABTS溶液(Cat#50-66-01)。
Immulon 2 96-孔微量滴定板。
封闭溶液是存在于含1x硫汞撒的PBS中的1mg/mL明胶。
洗涤缓冲液是0.5mL Tween20在1升PBS中。
结果：
               表2
          抑制TNF？释放 实施例号 以微摩尔浓度(μM)为单位 的TNF？释放的抑制百分率 或者IC50(μM)[平均]     3   3.72％ @ 10μM (n＝5)     7   IC50＝＞50μM     4   -3.8％ @10 (n＝3)   IC50＝＞50μM     8   IC50＝＞50μM     22   IC50＝＞29μM     5   -10.8％ @10 (n＝3)   IC50＝＞50μM     23   IC50＝＞50μM     24   IC50＝＞50μM     25   IC50＝14.0μM
如上所述，应注意到在不背离本发明的实质和新内容的范围的 前提下，可以完成许多修改和变化。应理解所给出的特定实施例不应 视为或者推断为限制性的。由所附的权利要求书包括此公开内容，所 有这些改变形式都落入权利要求书的范围之内。