本发明的目的就是为了解决上述
现有技术中存在的不足之处,提供一种 杀虫剂及其应用。该杀虫剂由一个新的链霉菌属菌种产生,它适用于防治昆 虫等,特别是鳞翅目(Lepidoptera)和
双翅目(Diptera)的害虫,而且它不 污染环境,具有吸引人的杀虫效果。
本发明首先提供一个新的链霉菌属菌种的菌株,所述菌株被命名为 Streptomyces sp.GAAS7310,它是从
土壤样品中分离所得,所述菌株于2003 年7月7日在位于武汉的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏,保藏编 号为CCTCC NO:M 203058。
本发明所述的一种杀虫剂是新化合物,其特征是,它具有如下分子式:
本发明所述的一种杀虫剂的应用,其特征是,它适用于防治螨、蜱和其 它昆虫,包括甜菜夜蛾、烟夜蛾、
棉铃虫、菜粉蝶、玉米螟、小菜蛾、卷叶 蛾、地老虎、亚热带粘虫、谷蛾科、印度谷斑螟、红铃麦蛾;也对鞘翅目和
象鼻虫有效果,包括
马铃薯甲虫、黄瓜十一星叶甲、黄瓜三条叶甲、日本狐 丽金龟、棉象虫;还对双翅目害虫有效,包括对
家蝇、蚊科、果蝇、
角蝇以 及潜蝇科有效;对虱目、等翅目和膜翅目蚁和螨有效,包括柑橘红蜘蛛、叶 螨;同时对动物寄生虫有很好防治效果,包括水蚤、中华锚
头虱。
为了更好地实现本发明,所述杀虫剂在应用时配制成
乳油制剂,其重量 百分配比为:杀虫剂1~30%、乳化剂5~20%、
溶剂50~94%;其最佳配比 为:杀虫剂5~10%、乳化剂8~15%、溶剂75~87%,配制过程为:把杀虫 剂与所选用的
表面活性剂置于反应釜中,在
温度35℃、转速为320转/分钟 的条件下反应35分钟,然后再加入
有机溶剂,继续搅拌35分钟,搅拌均匀 后即可。其中,乳化剂包括农乳2201、农乳0203B、YZ960;溶剂包括异丙 醇、丙
酮、二甲基甲酰胺。
本发明所述的杀虫剂,可以通过下述方法制得:
第一步将GAAS7310接种入营养培养基,在28℃和250rpm的振荡下 生长48小时;取成熟的第一阶段营养培养物接种营养培养基,取得二次营养 培养物,在28℃和300rpm条件下培养48小时,将成熟的菌种
发酵培养,在 28℃和300rpm下保持培养4天。
第二步 发酵完毕,用板框压滤的方法分离获取菌丝,将菌丝用1∶2 的丙酮溶液浸取10小时,将浸取液浓缩去丙酮,再用乙酸乙酯萃取有效物, 将乙酸乙酯萃取液减压浓缩获取油状物,提取浓缩液拌
硅胶过柱,用乙酸乙 酯、石油醚多次硅胶柱层析和浓缩,获得油状物质纯品。
本发明所述菌株GAAS7310的培养物特征如表1所示。
本发明所述菌株GAAS7310的形态特征为:其生产菌株为链霉菌金色类 群。
本发明所述菌株GAAS7310的生理特征为:明胶不
液化,
牛奶胨化,水 解
淀粉,
纤维素上微弱生长,不产生H2S,细胞壁化学成分为I型,全细胞 糖属于C型。可利用:山梨糖、甘露糖、菊糖,不利用:麦芽糖、果糖、乳 糖、半乳糖、鼠李糖、肌醇。
表1GAAS7310的培养物特征
培养基 基丝 气丝 色素
高氏1号 IV(6-6’) 深烟灰 III(6-6’) 察氏培养基 无色或粉白 III(7-1’)
葡萄糖天
门天冬素 III(1-1’) IV(6-1’) III(2-2’) 无机盐淀粉 荔肉白 无 苹果酸
钙 II(2-1’) 无 象牙黄 燕麦粉 玳瑁黄 III(6-1’) II(2-3’) 葡萄糖
酵母膏 III(3-4’) III(6-1’) 玳瑁黄 马铃薯
块 鹿角棕 象灰 IIII(4-5’)
本发明与现有技术相比,具有如下优点和有益效果:
1.本发明的抗生素为新结构化合物,其制剂制备工艺简单、易操作、易 制备。
2.本发明的杀虫剂对小菜蛾等害虫防治效果好,比常规药剂用量少,可 以克服小菜蛾等害虫对常规农药的抗药性。
3.本发明的杀虫剂使用安全,不污染环境,是一种无公害的
生物农药。
附图说明
图1是本发明所述菌株GAAS7310产孢丝和孢子的形状示意图。
本发明菌株Streptomyces sp.GAAS7310于2003年7月7日在位于武汉的 中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏,保藏编号为CCTCC NO:M 203058。
下面结合附图和
实施例,对本发明做进一步地详细说明。
实施例一
通过在发酵培养基中培养菌株GAAS7310而制备杀虫剂。将1ml的冷冻 的GAAS7310营养培养基融化,接种入500ml三角瓶内的100ml营养培养基, 在28℃和250rpm的振荡下生长48小时。
取3500ml成熟的第一阶段营养培养物用于接种50L搅拌式
发酵罐的35L 的营养培养基的二次营养培养物,在28℃和300rpm条件下培养48小时,将 成熟的菌种接种到500L的搅拌式发酵罐中,发酵培养在28℃300rpm下保持 培养4天。可用合适的溶剂提取成熟的发酵物,并通过色谱分离而获得代谢 物——杀虫剂。
表2营养培养基成分
成分名称 含量(%) 葡萄糖 淀粉 大米粉 酵母膏 豆饼粉 NaCl (NH4)2SO4 CaCO3 pH 2 1 1 1 1.5 0.5 0.5 0.5 7.2
实施例二
本发明通过测试发酵液的提取物而在发酵期间
跟踪杀虫剂的制备,例如 通过生物测定法分析发酵液提取物。
发酵完毕,来自500L的发酵物,用板框压滤的方法分离获取菌丝,将 菌丝用1∶2的丙酮溶液浸取10小时,将浸取液浓缩去丙酮,再用乙酸乙酯 萃取有效物,将乙酸乙酯萃取液减压浓缩获取油状物,提取浓缩液拌硅胶过 柱,用乙酸乙酯、石油醚多次硅胶柱层析和浓缩,获得油状物质纯品。
该化合物为油状液体,从1H和13CNMR可知分子为具有长链的化合物。 MS m/z327[M-1]+,结合13CNMR及DEPT可推出该化合物的分子式为 C19H36O4,不
饱和度U=2。
IR(KBr)在1734cm-1处的峰和13C NMR谱在δ173.6(C)处的
信号, 说明分子中存在一个羰基。13C NMR谱中δ130.5(CH),128.1(C)和1H NMR 谱中δ5.3(t,5.5Hz,1H)说明分子中存在一个三取代双键,13CNMR谱中 δ70.7(CH),66.1(CH2)和63.9(CH2)和1HNMR谱中δ4.10(d,5Hz, 1H),4.05(dd,6,11Hz,1H),3.74(dd,6,6Hz,1H),3.56(dd,5, 10Hz,1H),3.53(dd,6,11Hz,1H)揭示了分子中存在-OCH、-2× OCH2基团;1H NMR谱中δ1.30ppm处的甲基呈单峰,说明它与季
碳相连, 而13CNMR中显示的季碳除羰基外,只有一个三取代双键[δ128.1(C)], 说明这个甲基与双键碳相连。另有两个甲基裂分为两重峰且偶合常数相同[δ 0.86(d,6.5Hz,6H)],说明分子中存在末端异丙基。
实施例三、四、五
发明人经过长期的试验、研究,有很多成功的实施例,下面举三例列于 下表所示:
表3
实施例六
本发明所述杀虫剂适用于防治昆虫、螨和蜱,包括在昆虫、螨和蜱的场 所使用昆虫、螨和蜱抑制量。昆虫、螨和蜱的场所表示这样的环境:其中, 昆虫、螨和蜱的幼虫、成虫和卵,包括空气、食物和所
接触的物体。例如, 食植物的昆虫或螨可通过将所述活性化合物适用到昆虫和螨食或寄生的植物 部分(特别是叶子)来控制。通过本发明所述杀虫剂来防治昆虫的效果与使 用次数和使用方法有关,同时与被防治的昆虫的种有关。
将小白菜盆栽,长至5片叶时,每盆接入低龄抗性小菜蛾幼虫50~60 头,待试虫活动稳定后喷本发明制剂,处理两天后开始调查死亡虫数量、死 亡状态。每个处理设4次重复,计算死亡率,使用结果如下表所示。
表4杀虫剂对抗性小菜蛾的防治效果
药剂及浓度 供试虫数(头/盆) 处理2天后死亡率 本化合物制剂 100ppm 52 97.62 50ppm 49 88.64 25ppm 50 78.23
实施例七
用池塘里自然繁殖生长的水蛛作为参照物,来检测本发明制剂的杀虫效 果。取含有水蛛的池塘水,分别加入不同浓度的本发明制剂及晶体敌百虫, 同时设不加药物的对照组,连续观察3天,统计计算本发明制剂对水蛛的杀 灭效果。使用结果如下表所示。
表5杀虫剂对水蛛的杀灭效果
药物 浓度 (ppm) 杀灭效果(%) 24hr 48hr 72hr 本化合物制剂 0.020 88 100 100 0.010 81 92 95 0.005 61 72 81 敌百虫 0.5 90 92 93
从试验结果看出,本发明制剂效果很好,不但对抗性小菜蛾防治效果很 好,而且对水蛛的效果也很好,对环境没有污染。同时,可以克服害虫对药 剂的抗药性。作为害虫的防治剂,将有利于农业的稳产和高产,从而产生较 大的经济和社会效益。
如上所述,即可较好地实现本发明。