利用颜色和外来蜂群提取物刺激提高胡蜂毒采集量的方法
阅读：1043发布：2020-07-18
专利汇可以提供利用颜色和外来蜂群提取物刺激提高胡蜂毒采集量的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种利用 颜色 和外来蜂群提取物刺激提高胡 蜂毒 采集量的方法。其特征在于将取毒器涂上外来蜂群 蜂巢 或蜂体等提取物的挥发性溶液，再以红色 衬垫 做底色配合外框涂成红色的取毒器对胡蜂进行双重刺激，从而惹怒胡蜂群的职蜂加强攻击 力 度、增大其排毒量和攻击次数。该双重刺激采毒法比仅用常规采毒器的蜂毒采集量高出23～35%。本关键技术可以用于对胡蜂总科（Vespoidea）中的长腹胡蜂科、铃腹胡蜂科、异腹胡蜂科、狭腹胡蜂科、 马 蜂科、胡蜂科等膜翅目昆虫进行毒素采集，具有显著的经济价值，满足市场的短缺和采毒创新技术的不足。，下面是利用颜色和外来蜂群提取物刺激提高胡蜂毒采集量的方法专利的具体信息内容。
1.一种获取胡蜂蜂毒类活性物质的方法，其特征是：从胡蜂巢穴中用颜色和外来蜂群提取物双重刺激获取大量蜂毒类活性物质；其中，外来蜂群提取物是指从外来蜂群整体或者局部的蜂巢、蜂体得到的提取物，用以提取的溶剂是指水或甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一种或多种；外来蜂群是指与待取毒胡蜂同种或不同种的能对被采毒胡蜂形成生物信息素干扰的附近的胡蜂蜂群，附近是指距被采毒蜂巢方圆50公里范围以内。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：该方法是在白天对野生或养殖的胡蜂取毒时，使用红色衬垫铺在地上，再将涂有外来蜂群提取物挥发性溶液的取毒器通电，打开胡蜂巢，引诱胡蜂的职蜂进行排毒，从而惹怒蜂体使其加强攻击意愿，增大了排毒量和攻击次数而得以实现。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征是：采用的红色衬垫是指采用红色塑料布、红色油毡布、红色棉布、红色玻璃板、红色铝板材质制成的衬垫。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征为所述的取毒器外框为红色，用以增加对胡蜂职蜂的刺激性，增大其排毒量和攻击次数。
5.根据权利要求2～4任一的方法，其特征为所述外来蜂群提取物挥发性溶液是指使用挥发性溶剂溶解了外来蜂群提取物配置成的溶液；其中，挥发性溶液是指乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一种或多种；外来蜂群提取物是指从外来蜂群整体或者局部的蜂巢、蜂体、蜂排泄物和/或蜂毒中得到的提取物，用以提取的溶剂是指水或甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一种或多种；外来蜂群是指与待取毒胡蜂同种或不同种的能对被采毒胡蜂形成生物信息素干扰的附近的一群或多群胡蜂蜂群，附近是指距被采毒蜂巢方圆50公里范围以内。
6.根据权利要求1～5任一的方法，其特征为所述的胡蜂是指胡蜂总科Vespoidea中的长腹胡蜂科、铃腹胡蜂科、异腹胡蜂科、狭腹胡蜂科、马蜂科、胡蜂科的膜翅目昆虫。
利用颜色和外来蜂群提取物刺激提高胡蜂毒采集量的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种利用昆虫生理特性提高胡蜂毒素采集量的技术。其关键技术特征在于将外框涂成红色的取毒器上涂上外来蜂群的蜂巢、蜂体、蜂排泄物和/或蜂毒中得到的提取物的挥发性溶液，再以红色衬垫做底色对胡蜂进行双重刺激，增大蜂群的排毒量和攻击次数。本法的蜂毒采集量比使用常规采毒器的蜂毒采集量提高了23～35%。本方法适用于对长腹胡蜂科、铃腹胡蜂科、异腹胡蜂科、狭腹胡蜂科、马蜂科、胡蜂科等胡蜂总科的经济昆虫进行生物毒素采集，满足市场的短缺和采毒创新技术的不足，增加贫困山区经济昆虫养殖户收入，具有显著的经济价值和社会效益。
背景技术
[0002] 蜂毒是具有高度生物学活性和药理学活性的复杂混合物。胡蜂毒不仅具有过敏性，且可以造成血纤维蛋白溶解作用、对骨骼肌的破坏、神经系统症状和视觉障碍引发的过敏性休克等（Lombardini,C等,Am J Emerg Med,2009,153:131-135；Patriarca,G等 ,Intl J Immunopathol Pharmacol,2008,21:669-677；Schultze-Werninghaus,C等 ,PediatrAllergy Immunol,1999,10:133-137；Puchalska-Niedbal,L 等 ,Ann Acad Med Stetin,2007,53Suppl1:90-93；Rocha,T 等 ,Toxicon,2007,50:589-599）；胡 蜂毒还显示对心血管、降压、抗菌、抑制乙酰胆碱酯酶等许多有前景的生理活性（Rubin,Y等,Cardiovascular haemodynamics of oriental hornet venom sac extract,Pharmacol Toxicol,1993,72:268-272；Ho,CL等，Structures and biological activities of new wasp venom peptides isolated feom the black-bellied hornet(Vespa basalis)venom.Toxicon,1998,36:609-617；Konno,K 等 ,Molecular determinants of binding of a wasp toxin(PMTXs)and its analogs in the Na+channels proteins.Neurosci Lett,2000,285:29-32；Ho,CL等,Enhancing the hypotensive effect and diminishing the cytolytic activity of hornet mastoparan B by D-amino acid substitution,Toxicon,2001,39:1561-1566；Dami,MP 等 ,Antibacterial and proteolytic activity in venom from the endoparasitic wasp Pimpla hypochondriaca(Hymenoptera:Ichneumonidae),J Insect Physiol,2003,49:945-954；Wang,JL 等 ,Isolated prolongation of activated partial thromboplastin time following wasp sting,Acta Paediatr Taiwan,2005,46:164-165；Abt,M 等 ,Characterization of phenoloxidase activity in venom from the ectoparasitoid Nasonia vitripennis(Walker)(Hymenoptera:Pteromalidae),J Invertebr Pathol,2007,94:108-118；Polsinelli,GA等 ,Insect-specific irreversible inhibitors of acetylcholineesterase in pests including the bed bug,the eastern yellowjacket,German and American cockroaches,and the confused flour beetle,Chem Biol Interact,2010,187:142-147；Ye,J等,A defensin antimicrobial peptide from the venoms of Nasonia vitripennis,Toxicon,2010,56:101-106）。
[0003] 胡蜂是膜翅目（Hymenoptera），细腰亚目（Apocrita），针尾部（Aculeata），胡蜂总科（Vespoidea）昆虫的总称，世界上已知有5000多种，中国记载的有200余种，在中国南部分布着大量的胡蜂种群。胡蜂毒在国际市场上的售价居高不下，国外基本垄断了其研究和关键技术。开发蜂毒系列产品，对于我国战略性新兴产业的发展，以及增进山区养殖户的经济收入、脱贫都具有重要意义。广阔的医药前景也给蜂毒采集工作者带来了机遇和挑战。如何采取得到大量的、质量可控的胡蜂蜂毒是摆在我国科研工作者面前的关键技术之瓶颈。我国目前常见的采取蜂毒的模式是：用捕捉到的职蜂取毒囊分离出蜂毒；或者用电脉冲法刺激职蜂用尾针蛰刺取毒器上的玻璃板，将蜂毒留在取毒器玻璃板上，再予以收集。
[0004] 从我国专利技术发展的历史看，李光宏和黄世梅在1986年申请了实用新型专利《封闭式蜜蜂蜂毒采集器》（CN85203663U）；1989年李铁生和郭凡修共同申请了实用新型专利《电动闪光型胡蜂蜂毒自动采集器》（CN2037925U）；其中描述了使用红白光束诱使胡蜂排毒的一种仪器。1994年徐文龙等申报的实用新型专利《继箱型蜂毒采集器》（CN2168397Y），其原理也是基于通过电流使蜜蜂进入尺寸形状与蜂箱之继箱一致的采毒箱进行毒液收集。2000年张金华设计的实用新型《速冻式蜂毒原液采集器》（CN2391418Y），其特色是采用液氮冷冻室避免了采集过程中蜂毒的挥发。2006年，杨雷等公开了一种《自动采集蜂毒的方法及装置》（CN1714631A），描述了由电源、自动控制器、收集器组成的采集蜂毒的装置；2007年，张文礼等设计并申请了实用新型专利《副盖式蜜蜂电子取毒器》（CN2927685Y）：主要是发明了将取毒板面向下朝向蜂箱，避免了空气中尘埃和杂质落在采毒的面板上，保证了蜂毒的纯度。
[0005] 但是，上述方法都无法解决胡蜂蜂毒采毒过程中遭遇到的无法控制胡蜂群攻击的强烈程度，取毒量小，浪费大，毒素采集成本居高不下等问题。再者，已公开的许多方法都是仅适用于蜜蜂（中蜂和意蜂）毒素的采集，而非针对攻击性较强的胡蜂总科的蜂群采毒而言。如何创建一种有效的采集蜂毒的关键技术，能够有效提高解决并提高价值较高的胡蜂蜂毒采集量，使采集或者养殖一窝胡蜂可以得到更多的蜂毒量，扩大农村山区养殖户的单产量及收入，增加山区贫困养殖户的脱贫数量，已有的报道及经验尚十分缺乏。而市场是急需一批创新性的养殖和采集蜂毒技术的集成及综合应用的。
[0006] 因此，如何巧妙地应用昆虫生理学特性，结合现代视觉刺激技术、生物信息素技术、结合利用常规的电脉冲取毒器手段，发掘出更多职蜂攻击力度增大所带来的蜂毒量增加，是迫在眉睫的。基于此，本发明人经过长期艰苦而危险的多批次实验，最终设计并验证了能够强效刺激蜂群攻击和排毒、使单位排毒量迅速有效增加的关键技术方法。
发明内容
[0007] 本发明的目的是提供了一种从胡蜂巢穴中用颜色刺激和外来蜂群的生物信息素“双重刺激”获取超出常规采集量蜂毒类活性物质的方法和关键技术；此处所述的胡蜂是指膜翅目胡蜂总科（Vespoidea）中的长腹胡蜂科、铃腹胡蜂科、异腹胡蜂科、狭腹胡蜂科、马蜂科、胡蜂科昆虫；外来蜂群指的是在被采毒胡峰蜂巢方圆50公里范围以内的同种或不同种的、能对该窝胡蜂形成生物信息素干扰的胡蜂蜂群，优选距离被采毒胡蜂蜂巢5公里范围内的其它胡蜂蜂群。
[0008] 本发明的另一目的是提供对胡峰产生“双重刺激”的红色衬垫和红色边框的取毒器、以及涂抹于取毒器上的外来胡蜂蜂群挥发性物质，用以对待采毒胡蜂群进行刺激，惹怒胡蜂群使其加强攻击意愿，增大了排毒量和攻击次数的取毒方法；其中，外来胡蜂蜂群挥发物质是指使用挥发性溶剂溶解了外来蜂群提取物配置成的溶液；挥发性溶液是指乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一种或多种；外来蜂群提取物是指从外来蜂群整体或者局部的蜂巢、蜂体、蜂排泄物和/或蜂毒中得到的提取物，用以提取的溶剂是指水或甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、汽油、醋酸乙酯、苯溶液中的一种或多种；外来蜂群是指与待取毒胡蜂同种或不同种的能对被采毒胡蜂形成生物信息素干扰的附近的一群或多群胡蜂蜂群，附近是指距被采毒蜂巢方圆50公里范围以内；优选距离被采毒胡蜂蜂巢5公里范围内的其它胡蜂蜂群。
[0009] 本发明的再一目的是提供了一种使用红色衬垫和红色边框的取毒器结合涂抹外来胡蜂群挥发性物质的一种关键技术装置。
[0010] 本发明的又一目的是提供了一种从膜翅目胡蜂总科中的长腹胡蜂科、铃腹胡蜂科、异腹胡蜂科、狭腹胡蜂科、马蜂科、胡蜂科昆虫中得到具有经济效益的胡蜂蜂毒，作为制药企业使用的原料药物。
[0011] 发明人长期观察后发现：一般来说，胡蜂蜂群对采毒器进行攻击时，总有30～50%的职蜂不参与积极进攻采毒器的行动，造成蜂群职蜂攻击次数不足和排毒总量偏小的事实。而提高对蜂群的刺激强度后，更多的胡蜂职蜂参与到攻击和排毒进程中来，其总体排毒量就增加。我们为了寻找数量更多的总蜂毒多肽类有效部位，尝试应用各种颜色对蜂群进行高强度的刺激，针对蜂群对多种颜色刺激后产毒的量进行了统计和研究，发现了在固定其它采毒条件下，使用红色的垫料和红色边框的采毒器最能吸引蜂群的攻击。
[0012] 发明人还经过多次实验和对比后发现：胡蜂群出于维护自己领地、水源、果源、食物源的生存需要，对方圆数十公里范围内有意入侵其领地的其它同种属或不同种属的胡蜂群予以攻击时排毒量迅速增加，据此现象，我们尝试使用了已经采集到的附近5公里范围内外来胡蜂群的提取物，在提取物中保留大量外来蜂群的气味、挥发性物质等生物信息素；对待采毒的胡蜂群进行外源性刺激时，发现待采毒胡蜂群确能感到威胁，几乎倾巢出动，参与攻击；大大提高了每次攻击的次数和效率；采毒量大大增加。且所采集的胡蜂毒质量不变。实验结果证实：使用外来蜂群提取物进行涂抹诱发攻击时，胡蜂群对外来蜂群提取物挥发性溶液比较敏感，易被激怒。此处外来蜂群指的是在被采毒蜂巢附近的同种属或不同种属的、能对该窝胡蜂形成生物信息素干扰的胡蜂蜂群。
[0013] 本发明人首次创造性地将上述二种刺激胡蜂群的技术有机地结合起来，作为采集胡蜂蜂毒的一种新的关键技术，从而发明了创新性的“双重刺激”采毒技术。发明人发现：在使用同一蜂群、同一取毒器、同一取毒电压、同一采毒操作员的情况下，用红色垫料和红色边框配合涂抹其他外来蜂群的提取物挥发性溶液的采毒器能使蜂毒采毒量提高20%以上（平行4次试验）；在物理和生理生化多重刺激因素作用下，行之有效地刺激了更多的职蜂出巢攻击取毒器，单位时间内蜂群攻击取毒板的职蜂个数和攻击取毒器次数也大大增加。显著提高了职蜂排毒量，每次取毒得到的胡蜂毒素产率得到大大提高，且保证蜂毒质量与原先原始取毒器（无刺激源）时完全一样。
[0014] 使用该“双重刺激”采毒技术与仅用常规采毒器而未采用“双重刺激”的采毒法相比，每次蜂毒采集量可以高出23%～35%。该取毒效果属于意想不到的发现，且对蜂群可持续采毒无影响，蜂群攻击后调整10～15天后可以继续再次采集蜂毒。该关键技术对于贫困山区胡蜂养殖农民有着显著的经济效益和推广应用前景。本发明人经查新发现，以往国内外专利及文章专著中均无同时使用红色垫料和边框为红色的取毒器作为一种刺激源、用外来蜂群的提取物作为生物信息素的另一种刺激源，对待采毒胡蜂蜂群同时使用上述两种刺激源的“双重刺激”技术实施综合作业的生物毒素采集方法的相关报道。该生理生物采毒技术具有确切的新颖性和创造性，从而构成本发明。
[0015] 本发明的关键技术及其有益之处在于：本发明利用昆虫生理生化特性，在常规蜂毒取毒器上涂上外来蜂群蜂巢或蜂体提取物挥发性溶液，再以红色衬垫做底色配合外框涂成红色的该取毒器对胡蜂进行双重刺激，从而惹怒胡蜂群的职蜂加强攻击力度，增大其排毒量和攻击次数；该双重刺激采毒法比仅用常规采毒器的蜂毒采集量高出23%～35%。本关键技术可以用于对胡蜂总科中的多种昆虫进行毒素采集，具有显著的经济价值，满足市场的短缺和采毒创新技术的不足。本发明中的技术及方法使用的原料来源方便易得，制备步骤简便，利于产业化。对于开发市场广大的生物毒素药物提供了新的物质基础来源，以及获取胡蜂毒素的普适关键技术。通过规范化养殖胡蜂及采毒又能给连片特困地区的农民增加收入、脱贫，具有显著的巨大社会效益和经济效益。具体实施方案
[0016] 为了更好地理解本发明的实质，下面分别用对胡蜂总科Vespoidea中的长腹胡蜂科、铃腹胡蜂科、异腹胡蜂科、狭腹胡蜂科、马蜂科、胡蜂科的膜翅目昆虫进行毒素采集的实验结果，说明其在昆虫生物毒素研发领域中的关键制备技术和功效。本发明所有实施例都是在严格控制变量的基础上进行的。实施例中各实验所采取之胡蜂毒均经过《药用特种昆虫开发国家地方联合工程研究中心》质检室进行HPLC（Agilent1200）指纹图谱检测，SDS-PAGE电泳检测。经检验，同一个实施例之不同实验所获得之胡蜂毒均属于品质相同的胡蜂毒。
[0017] 必须说明，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
[0018] 实施例1：胡蜂科金黄虎头蜂Vespa mandarinia Smith的常规采毒与“双重刺激”技术采毒所得蜂毒量的比较试验
[0019] 1.1胡蜂科金黄虎头蜂Vespa mandarinia Smith的常规采毒
[0020] 1.1.1采集胡蜂毒地点：云南德宏州梁河县境内高山，海拔1382米，林中。蜂体标本经云南省大理学院药用特种昆虫开发国家地方联合工程研究中心毛本勇教授鉴定为Vespa mandarinia Smith（金环胡蜂，又名金黄虎头蜂）。
[0021] 1.1.2采集胡蜂毒装置：使用经过本工程研究中心改装的副盖式蜂毒采集器，木框，长80公分，宽50公分；内嵌4片长20公分/宽33公分取毒玻璃；输入电压12V，输出自动间歇脉动电压。
[0022] 1.1.3采集胡蜂毒方法：将未经涂装的采毒器置于蜂巢前，按照常规采毒规程，对该巢金黄虎头蜂蜂群职蜂采毒30分钟。打开取毒器电源开关，敲击地面及蜂巢口，吸引金黄虎头蜂胡蜂出来攻击蜂毒采集器。30分钟后，关闭电源，扫掉不再排毒的金黄虎头蜂，收集玻璃板上的蜂毒，装入特制冷冻瓶中，梅特勒十万分之一电子天平称重。
[0023] 1.1.4结果分析：本次采集，经高速摄影录像分析，取毒板共被金黄虎头蜂攻击1316次；收集得到的金黄虎头蜂胡蜂蜂毒为860毫克。
[0024] 1.2胡蜂科金黄虎头蜂Vespa mandarinia Smith的“双重刺激”技术采毒[0025] 1.2.1采集胡蜂毒地点：（与本实施例1.1.1项下的胡蜂巢距离为1.8公里处，大小及生长状态环境相似的一窝金黄虎头蜂），蜂体标本经云南省大理学院药用特种昆虫开发国家地方联合工程研究中心毛本勇教授鉴定为Vespa mandarinia Smith（金环胡蜂，又名金黄虎头蜂）。
[0026] 1.2.2采集胡蜂毒装置：基本装置同本实施例之1.1.2；使用本工程研究中心改装的同一批次的取毒器，但是木框事先以红色油漆涂成红色；再一关键技术是在木框上预先涂抹20毫升浓度为15毫克/毫升的1.1.1项下的蜂巢及蜂体提取物挥发性溶液（制备方法：将100克蜂巢及80只职蜂蜂体匀浆磨碎，加入20毫升蒸馏水，以醋酸乙酯萃取2次、每次20毫升；萃取液减压蒸干溶剂后，以乙醚溶解，配制成15毫克/毫升的提取物挥发性溶液）；采集蜂毒前20分钟涂抹外来蜂群提取物挥发性溶液。
[0027] 1.2.3采集胡蜂毒方法：将该取毒器放置于铺有大红色塑料布的地上，略微倾斜15度，形成对蜂巢蜂群的强烈刺激信号。然后打开取毒器电源开关，敲击地面及蜂巢口，吸引金黄虎头蜂出来攻击蜂毒采集器。30分钟后，关闭电源，扫掉不再排毒的金黄虎头蜂，收集玻璃板上的蜂毒，装入特制冷冻瓶中，梅特勒十万分之一电子天平称重。
[0028] 1.2.4结果分析：本次采集，经高速摄影录像分析，取毒板共被胡蜂攻击1645次；收集得到的金黄虎头蜂蜂毒为1135毫克。
[0029] 1.3针对常规采毒法采毒的金黄虎头蜂交叉使用“双重刺激”法采毒验证试验[0030] 1.3.1采集胡蜂毒地点：实施例1.1.1中所述采集地。同一窝胡蜂在经1.1所述的釆毒后第15天，再次进行采毒，釆毒方法为采“双重刺激”技术实施采毒。
[0031] 1.3.2采集胡蜂毒装置：采集胡蜂毒装置同本实施例之1.2.2。严格使用了与本实施例1.2.2同一装置、与本实施例1.1同一操作者及完全相同的采毒时间；使用本实施例之1.2.2中所述之“木框事先以红色油漆涂成红色；及采集蜂毒前20分钟在木框上预先涂抹
20毫升浓度为15毫克/毫升的另外一窝金黄虎头蜂的蜂巢及蜂体提取物挥发性溶液（制备方法：同本实施例1.2.1所述）”。
20毫升浓度为15毫克/毫升的另外一窝金黄虎头蜂的蜂巢及蜂体提取物挥发性溶液（制备方法：同本实施例1.2.1所述）”。
[0032] 1.3.3采集胡蜂毒方法：同本实施例之1.2.3。将同一取毒器放置于铺有大红色塑料布的地上，略微倾斜15度，形成对蜂巢蜂群的强烈刺激信号。然后按1.2.3所述之方法，打开取毒器电源开关，敲击地面及蜂巢口，吸引胡蜂出来攻击蜂毒采集器。30分钟后，关闭电源，扫掉不再排毒的金黄虎头蜂，收集玻璃板上的蜂毒，装入特制冷冻瓶中，梅特勒十万分之一电子天平称重。采毒过程与本实施例1.1和1.2为同一操作人员执行。
[0033] 1.3.4结果分析：本次采集，经高速摄影录像分析，取毒板共被胡蜂攻击1603次；收集得到的金黄虎头蜂蜂毒为1098毫克。
[0034] 1.3.5结果说明：在实施例1.1中采用常规取毒法取毒后的同一窝胡蜂，在换用“双重刺激”关键技术进行高强度刺激后，排毒量比前一次（实施例1.1）取毒高出了27.7%；大大提高了金黄虎头蜂排毒量。
[0035] 1.4针对“双重刺激”法采毒采毒的金黄虎头蜂交叉使用常规采毒法验证试验[0036] 1.4.1采集胡蜂毒地点：实施例1.2.1中所述采集地。该窝胡蜂在经本实施例1.2中所述的“双重刺激”技术采毒后第15天，再次进行按本实施例1.1所述之常规釆毒技术实施的采毒。
[0037] 1.4.2采集胡蜂毒装置：采集胡蜂毒装置同本实施例之1.1.2。使用经过本工程研究中心改装的副盖式蜂毒采集器，木框，长80cm，宽50cm；内嵌4片长20cm/宽33cm取毒玻璃；输入电压12V，输出自动间歇脉动电压；本实验严格使用了与本实施例之1.1.2同一装置、与实施例1.2同一操作者、完全相同的采毒时间。
[0038] 1.4.3采集蜂毒方法：同本实施例之1.1.3。将同一取毒器（未经涂装的采毒器）置于蜂巢前，然后用1.2.2所述之同一方法，打开取毒器电源开关，敲击地面及蜂巢口，吸引胡蜂出来攻击蜂毒采集器。30分钟后，关闭电源，扫掉不再排毒的胡蜂，收集玻璃板上的金黄虎头蜂蜂毒，装入特制冷冻瓶中，梅特勒十万分之一电子天平称重。采毒过程与本实施例1.1和1.2为同一操作人员。
[0039] 1.4.4结果分析：本次采集，经高速摄影录像分析，取毒板共被金黄虎头蜂攻击1298次；收集得到的金黄虎头蜂蜂毒为845毫克。
[0040] 1.4.5结果说明：在实施例1.2中采用常规取毒法取毒后的同一窝金黄虎头蜂，在换用常规采毒方法后，排毒量比前一次实施“双重刺激”技术时（实施例1.2）获取蜂毒量降低了21.1%；胡蜂攻击次数减少了25.6%。差别显著。
[0041] 1.5重复试验：在接下来的2个月内，每隔15天对上述2窝金黄虎头蜂各进行一次取毒实验；统计胡蜂攻击次数和采毒量的变化，检验“双重刺激”技术对于金黄虎头蜂取毒与常规取毒法的效果之差别。4次取毒比较的结果是：使用“双重刺激”技术作为单一变量，对于金黄虎头蜂的取毒量比常规取毒法高出32±9%；胡蜂攻击次数比常规采毒法高出25±8%。具有显著的差异。
[0042] 1.6结果说明：根据常规采毒与“双重刺激”技术采毒对金黄虎头蜂进行的比较试验、交叉验证试验、重复试验所获得的胡蜂蜂毒量可知，使用“双重刺激”技术采集胡蜂科昆虫毒素有着较大的先进性和实用性。
[0043] 实施例2：马蜂科黄裙马蜂（Polistes sagittarius Saussure）的常规采毒与“双重刺激”技术采毒所得蜂毒量的比较试验
[0044] 2.1实验地点：云南文山州富宁县。2窝黄裙马蜂相距1.5公里左右。山林中。蜂体标本经云南省大理学院药用特种昆虫开发国家地方联合工程研究中心杨自忠教授鉴定为马蜂科黄裙马蜂（Polistes sagittarius Saussure）。
[0045] 2.2常规采毒装置及方法：同实施例1中1.1.2、1.1.3。
[0046] 2.3“双重刺激”技术采毒装置及方法：同实施例1中1.2.2、1.2.3。其关键技术是在木框上预先涂抹20毫升浓度为15毫克/毫升的另外一窝黄裙马蜂的蜂巢及蜂体提取物挥发性溶液（制备方法：将80克蜂巢及60只黄裙马蜂职蜂蜂体匀浆磨碎，加入20毫升蒸馏水，以醋酸乙酯萃取2次、每次20毫升；萃取液减压蒸干溶剂后，以乙醚溶解，配制成15毫克/毫升的黄裙马蜂提取物挥发性溶液）；采集蜂毒前20分钟涂抹在采毒器上。自然挥干溶剂。
[0047] 2.4实验内容：同实施例1.1至1.5。具体而言，按照实施例1.1至1.5的实验设计思路，进行了黄裙马蜂常规采毒、常规采毒后使用“双重刺激”技术采毒，比较二者采毒量之差异；再于另外一窝黄裙马蜂先用“双重刺激”技术采毒，14天后用常规采毒法再次采毒。比较不同技术采获的黄裙马蜂毒量。2个月内平行进行4次试验，进行结果统计与分析。
[0048] 2.5实验结果与说明：使用“双重刺激”技术采集黄裙马蜂毒素比常规采毒法得到的黄裙马蜂毒素平均重量高出30±6%；黄裙马蜂攻击取毒器次数增加20±4%。说明使用“双重刺激”技术采集马蜂科昆虫毒素有着较大的先进性和实用性。
[0049] 实施例3：铃腹胡蜂科带铃腹胡蜂（Popalidia fasciata Fabricius）的常规采毒与“双重刺激”技术采毒所得蜂毒量的比较试验
[0050] 3.1实验地点：云南省文山州广南县那伦乡。2窝带铃腹胡蜂相距1.3公里左右。海拔890公尺公路边山林中。蜂体标本经云南省大理学院药用特种昆虫开发国家地方联合工程研究中心杨自忠教授鉴定为膜翅目铃腹胡蜂科带铃腹胡蜂（Popalidia fasciata Fabricius）。
[0051] 3.2常规采毒装置及方法：同实施例1中1.1.2、1.1.3。
[0052] 3.3“双重刺激”技术采毒装置及方法：同实施例1中1.2.2、1.2.3。其关键技术是在木框上预先涂抹20毫升浓度为15毫克/毫升的另外一窝带铃腹胡蜂的蜂巢及蜂体提取物挥发性溶液（制备方法：将86克蜂巢及63只带铃腹胡蜂职蜂蜂体匀浆磨碎，加入20毫升蒸馏水，以醋酸乙酯萃取2次、每次20毫升；萃取液减压蒸干溶剂后，以乙醚溶解，配制成15毫克/毫升的带铃腹胡蜂提取物挥发性溶液）；采集带铃腹胡蜂蜂毒前20分钟涂抹在采毒器上。自然挥干溶剂。
[0053] 3.4实验内容：同实施例1.1至1.5。具体而言，按照实施例1.1至1.5的实验设计思路，进行了带铃腹胡蜂常规采毒、常规采毒后使用“双重刺激”技术采毒，比较二者采毒量之差异；再于另外一窝带铃腹胡蜂先用“双重刺激”技术采毒，14天后用常规采毒法再次采毒。比较不同技术采获的带铃腹胡蜂毒量。2个月内平行进行4次试验，进行结果统计分析。
[0054] 3.5实验结果与说明：使用“双重刺激”技术采集带铃腹胡蜂毒素比常规采毒法得到的带铃腹胡蜂毒素平均重量高出24±5%；带铃腹胡蜂攻击取毒器次数增加23±7%。说明使用“双重刺激”技术采集铃腹胡蜂科昆虫毒素有着较大的先进性和实用性。
[0055] 实施例4：异腹胡蜂科变侧异腹胡蜂（Parapolybia varia varia Fabricius）的常规采毒与“双重刺激”技术采毒所得蜂毒量的比较试验
[0056] 4.1实验地点：云南省文山州麻栗坡县。2窝变侧异腹胡蜂相距1.8公里左右。海拔672公尺公路边山林中。蜂体标本经云南省大理学院药用特种昆虫开发国家地方联合工程研究中心杨自忠教授鉴定为膜翅目异腹胡蜂科变侧异腹胡蜂（Parapolybia varia varia Fabricius）。
[0057] 4.2常规采毒装置及方法：同实施例1中1.1.2、1.1.3部分。
[0058] 4.3“双重刺激”技术采毒装置及方法：同实施例1中1.2.2、1.2.3部分。其关键技术是在木框上预先涂抹20毫升浓度为15毫克/毫升的另外一窝变侧异腹胡蜂的蜂巢及蜂体提取物挥发性溶液（制备方法：将90克蜂巢及68只变侧异腹胡蜂职蜂蜂体匀浆磨碎，加入20毫升蒸馏水，以醋酸乙酯萃取2次、每次20毫升；萃取液减压蒸干溶剂后，以乙醚溶解，配制成15毫克/毫升的变侧异腹胡蜂提取物挥发性溶液）；采集变侧异腹胡蜂蜂毒前20分钟涂抹在采毒器上。自然挥干溶剂。
[0059] 4.4实验内容：同实施例1.1至1.5。具体而言，按照实施例1.1至1.5的实验设
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