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植物病毒移动蛋白和其使用方法

阅读：370发布：2022-07-10

专利汇可以提供植物病毒移动蛋白和其使用方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文公开包含至少一种细胞表面配体；至少一种辅助脂质组分；和 转染 增强剂的转染复合物。另外，公开包含所述公开的转染复合物和药学上可接受的载剂的药物组合物。另外，公开转染细胞的方法，所述方法包含以下步骤：获得如所公开的转染复合物；和使细胞与所述转染复合物 接触 。，下面是植物病毒移动蛋白和其使用方法专利的具体信息内容。

1.一种转染复合物，其包含转染增强剂和细胞表面配体，所述细胞表面配体含有粘附
肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽。
2.根据权利要求1所述的转染复合物，其中所述转染增强剂为肽。
3.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽为两亲性肽。
4.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽为融合肽。
5.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由SEQ ID NO:1-580组成的群
组。
6.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:
107、205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、
326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、352、353、
354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、450、
452、454和503。
7.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:
205、237、268、326、328、335、336、342、347、348、352、353、355、357、358、365、367、377、379、
381、450、454和503。
8.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:
205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、
327、328、332、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、352、353、354、355、
357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、450、452、454和
503。
9.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:
236、358和373。
10.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:107、205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、
323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、352、
353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、
450、452、454和503。
11.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:216、224、226、236、236、323、327、341、343、347、348、349、350、351、354、358、360、373、
383、450、454和503。
12.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自以下组成的群组：SEQ ID NO:
205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、
327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、350、351、352、353、354、355、
357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、450、452、454、
501、502和503。
13.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:218、230、237、239、256、323、326、328、335、336、342、343、345、347、348、352、357、359、
367、375、379、381、450、452、454、501、502和503。
14.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、
326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、352、353、
354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、450、
452、454、501和503。
15.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:205、218、219、229、230、335、336、342、344、348、349、350、351、353、355、357、361、367、
369、375、379、381、450、454、501和503。
16.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、
326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、352、353、
354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、450、
452、454、501和503。
17.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:218、349和358。
18.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:220、236、238、323、327、336、338、341、343、347、348、350、351、352、354、367、369、373、
375、377和454。
19.根据权利要求1所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:219、229、230、239、323、328、332、341、343、350、351、357、358、375、450和454。
20.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:218、219、230、328、336、344、350、351、353、355、365和375。
21.根据权利要求2所述的转染复合物，其中所述肽选自由以下组成的群组：SEQ ID 
NO:205、216、218、219、220、226、229、230、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、
332、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、352、353、354、355、357、358、
359、360、361、365、367、369、373、375、377、379、381、393、450、452、454、501和503。
22.根据权利要求1到21中任一项所述的转染复合物，其进一步包含至少一种辅助脂质
组分。
23.根据权利要求22所述的转染复合物，其中所述辅助脂质组分选自由以下组成的群
组：聚乙二醇化脂质、阳离子脂质、聚乙二醇化阳离子脂质、中性脂质、聚乙二醇化中性脂质、核外体混合物、来自核外体的总脂质、衍生自核外体的总脂质和蛋白质、阳离子聚合物、聚乙二醇化阳离子聚合物、靶向部分和其组合。
24.根据权利要求22所述的转染复合物，其中所述辅助脂质选自由以下组成的群组：胆固醇、胆固醇衍生物、固醇、植物固醇、动物固醇和类何帕醇。
25.根据权利要求22所述的转染复合物，其中所述阳离子脂质选自由以下组成的群组：
N-(2-溴乙基)-N,N-二甲基-2,3-双(9-十八碳烯氧基)-溴化丙铵(BMOP)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺5-羧基精胺基酰胺(DDPES)、DSPC、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、鲸蜡基三甲基溴化铵(CATB)和DOPE(CTAB:DOPE)的配制物、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱
(POPC)、DMG、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、二肉豆蔻酰磷酯酰乙醇胺(DMPE)、DOMG、DMA、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二棕榈酰乙基磷脂酰胆碱(DPEPC)、二油酰二甲基氯化铵(DODAC)、1,3-二-油酰基氧基-2-(6-羧基精胺基)-丙基酰胺(DOSPER)、N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、二十二基甲基溴化铵
(DDAB)、N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基-甲基硫酸铵(DOTAP)、DOTAP.Cl、
3,β-N,(N′,N′-二甲基氨基乙烷)-氨基甲酰基]胆固醇(DC-chol)、2-(精胺甲酰氨基)乙基)-N,N-二甲基-三氟乙酸铵(DOSPA)、氯化O,O′-二(十四酰基)-N-(α三甲基铵基乙酰基)二乙醇胺(DC-6-14)、二己酰磷脂酰乙醇胺(DCPE)、二月桂基氧基丙基-3-二甲基羟基乙基溴化铵(DLRIE)、1,2-二油酰基-3-二甲基铵-丙烷(DODAP)、乙基-PC、2,3-二油酰基氧基-N-[2-(精胺羧基酰氨乙基]-N,N-二-甲基-1-三氟乙酸丙铵(DOSPA)、二十八烷基酰氨基甘氨酰羧基精胺(DOGS)、N-[1-(2,3二棕榈烷氧基)丙基]-N,N-二甲基-N-(2-羟乙基)溴化铵(DMRIE)、二油酰基乙基-磷酸胆碱(DOEPC)、N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N-[1-(2-羟乙基)]-N,N二甲基碘化铵(DOHME)、溴化N-(3-氨丙基)-N,N-二甲基-2,3-双(十二烷氧基)-
1-亚丙胺/二油酰磷脂酰乙醇胺(GAP-DLRIE:DOPE)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-[二氧磷基-外消旋-(3-己二胺酰基(1-甘油)).Cl(DOPG)、N-月桂酰肌氨酸、(R)-(+)-柠檬烯、卵磷脂(和其衍生物)；磷脂酰乙醇胺(和其衍生物)；磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺)、二植烷酰磷脂酰乙醇胺(DPhPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、3-β-胆固醇(O-Chol)、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺(POPE)；二硬脂酰磷脂酰乙醇胺；磷脂酰胆碱；磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)；二硬脂酰磷脂酰胆碱；磷脂酰甘油；哌嗪类阳离子脂质；磷脂酰甘油；二油酰磷脂酰甘油(DOPG)；二棕榈酰磷脂酰-甘油(DPPG)；二硬脂酰磷脂酰甘油；磷脂酰丝氨酸(和其衍生物)；磷脂酰丝氨酸；二油酰或二棕榈酰磷脂酰丝氨酸；二季铵盐；1,4-双[(3-(3-氨基-2-羟丙基)-棕榈氨基)丙基]哌嗪；溴化N-(3-氨丙基)-N,N'-双-(十二烷氧基乙基)-哌嗪鎓；溴化N-3-氨基-丙基)-N,N'-双-(油基氧基乙基)-哌嗪鎓；溴化N-(3-氨丙基)-N,N'-双-(棕榈基氧基乙基)-哌嗪鎓；溴化N-(3-氨丙基)-N,N'-双-(肉豆蔻基-氧基乙基)-哌嗪鎓；溴化N-(3-氨丙基)-N'-甲基-N,N'-(双-2-十二烷氧基-乙基)-哌嗪鎓；溴化N-(3-氨丙基)-N'-甲基-N,N'-(双-2-油基氧基乙基)-哌嗪鎓；溴化N-(3-氨丙基)-N'-甲基-N,N'-(双-2-棕榈基氧基乙基)-哌嗪鎓；溴化N-(3-氨丙基)-N'-甲基-N,N'-(双-2-肉豆蔻基氧基乙基)-哌嗪鎓；1,4-双[(3-(3-氨丙基)-油基氨基)-2-羟基-丙基]-哌嗪；1,4-双[(3-(3-氨丙基)-肉豆蔻基氨基)-2-羟基-丙基]哌嗪；或1,4-双[(3-(3-氨丙基)-棕榈基氨基)-2-羟基-丙基]哌嗪；3-烷基氧基-2-羟基-1-组氨酰酰氨基丙烷、3-烷基氧基-2-羟基-1-氨基丙烷；4-烷基氧基-3-羟基-1-组氨酰酰氨基丙烷、4-烷基氧基-3-羟基-1-氨基丙烷；5-烷基氧基-4-羟基-
1-组氨酰酰氨基丙烷、5-烷基氧基-4-羟基-1-氨基丙烷；6-烷基氧基-5-羟基-1-组氨酰酰氨基丙烷；6-烷基氧基-4-羟基-1-氨基丙烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-羧基精胺酰氨基)氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-组氨酰酰氨基)氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-精氨酰-酰氨基)氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-赖氨酰酰氨基)氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N'-鸟氨酰酰氨基)氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-丝氨酰酰氨基)氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-高丝氨酰基-酰氨基)氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-(二氨基丁基)酰氨基)氨基-丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-(二氨基丙基)酰氨基)氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,
4-双(N-甲基-N-(2-羟基丙胺))氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-(2-二氨基丙基))氨基丁烷；2,3-二烷氧基-1,4-和双(N-甲基-N-丙胺)氨基丁烷N；N′-二油基-N,N,N′,N′-四甲基-1,2-乙二胺(TmedEce)；N,N′-二油基-N,N,N′,N′-四甲基-1,3-丙二胺
(PropEce)；N,N′-二油基-N,N,N′,N′-四甲基-1,6-己二胺(HexEce)；和其对应的N,N′-二鲸蜡基饱和类似物(TmedEce、PropEce和HexEce)；二磷脂酰甘油；脂肪酸酯；单阳离子型转染脂质；1-脱氧-1-[二十六烷基(甲基)铵基]-D-木糖醇；1-脱氧-1-[甲基(二十四烷基)铵基]-D阿拉伯糖醇；1-脱氧-1-[二十六烷基(甲基)铵基]-D-阿拉伯糖醇；1-脱氧-1-[甲基(二十八烷基)-铵基]-d阿拉伯糖醇；甘油酯；鞘脂；卡多耳脂；脑甘脂；神经酰胺；脂质丝氨酸；和其组合。
26.根据权利要求22所述的转染复合物，其中所述中性脂质选自由以下组成的群组：胆固醇和其衍生物、3βOH-固醇和其衍生物、磷脂酰基胆碱、
(N,N',N",N"'-四甲基-N,N,N',N",N"'-四棕榈基精胺(TMTPS)、二油酰磷脂酰乙醇胺
(DOPE)的1:1.5(M/M)配制物、 GS  2888
和
TFXNTTM、
TRANSFASTTM、 维他米定(vectamidine)(3-
十四烷氨基-N-叔丁基-N′-十四烷基丙脒(也称为二C14-脒)、OLIGOFECTAMINE 
MessengerMAX、GeneInTM、TransfeXTM、LipofectAmine 3000、 DMRIE-C、
HD、
DNA-In、TransfectinTM、SilentFectTM、 ViaFectTM、DC-chol、
DharmaFect DharmaFect DharmaFect DharmaFect EscortTMIII、EscortTMIV和
DOGS。
27.根据权利要求22所述的转染复合物，其中所述辅助脂质为式I的所述阳离子脂质：
或其药学上可接受的盐，其中
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，y＝0；或W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2；y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，y＝0；或
1 2 3 4 5 3 4 5
W＝H，W＝CH2-N(RR)CH2-R；R＝R＝CH3；R＝H，y＝0；或
W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-氨基酸侧链，y＝0；或
W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-N+(CH3)3Cl，y＝0；或
W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(O-)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)qW ＝W＝CH2-N(R R)，R＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3，R ＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝
1；或
1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)qW＝W＝CH2-N(RR)，R＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3；R＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1；或
3 1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)q-N(R)-(CH2)q，W＝W ＝CH2-N(RR)，R ＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R ＝CH3，R＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)p-N(R3)-(CH2)p，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
3 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)q-N(R)-(CH2)q，W1＝W＝CH2-N(RR)，R ＝R＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3，R＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1；或
3 1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)q-N(R)-(CH2)q，W＝W ＝CH2-N(RR)，R ＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R ＝CH3，R＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)qW1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝COCH2
(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝0或1；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
1 2 3 4 1 2 3 4
W＝W＝-CH2-B-CH2-N(RR)，R＝R＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3，R＝-C(＝O)-C(OH)-
CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
1 2 3 4 1 2 3 4
W＝W＝-CH2-B-CH2-N(RR)，R＝R＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3；R＝H，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，y＝0；或
1 2 3 4 1 2 3 4
W＝W ＝-CH2-B-CH2-N(RR)，R＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3；R ＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-
5；或
W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或W1＝H W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)CH2-R5；R3＝R4＝CH3；R5＝H，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-氨基酸侧链，y＝0；或
W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-N+(CH3)3Cl，y＝0；或
W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(O-)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)qW ＝W＝-CH2-B-CH2-N(RR)，R＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R ＝CH3，R ＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝
1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或Z＝(CH2)qW1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)q，W ＝W ＝-CH2-B-CH2-N(R R)，R ＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R ＝CH3；R ＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)p-N(R3)-(CH2)p，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
3 1 2 3 4 1 2 3
Z＝(CH2)q-N(R)-(CH2)q，W＝W＝-CH2-B-CH2-N(R R)，R＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R ＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝
4
CH3，R ＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
3 1 2 3 4 1 2 3
Z＝(CH2)q-N(R)-(CH2)q，W＝W＝-CH2-B-CH2-N(R R)，R＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R ＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
1 2 3 4 1 2 3
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W ＝W＝-CH2-B-CH2-N(R R)，R＝R＝C8-C22烷基，X＝O；R ＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝
4
CH3，R ＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
1 2 3 4 1 2 3
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W ＝W＝-CH2-B-CH2-N(R R)，R＝R＝C8-C22烷基，X＝O；R ＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)qW1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W ＝W＝CH2-N(RR)，R ＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3，R＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W ＝W＝CH2-N(RR)，R ＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3，R＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1；或
1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W ＝W＝CH2-N(RR)，R＝R ＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3；R＝H，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
1 2 3 4 1 2 3 4
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W＝W ＝CH2-N(RR)，R＝R＝C8-C22烷基，X＝O；R ＝CH3；R＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
1 2 3 4 1 2 3
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W＝W＝-CH2-B-CH2-N(RR)，R＝R＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，
4
R＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；
R4＝H，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝
1-5；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；
R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
1 2 3 4 1 2 3
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W＝W＝-CH2-B-CH2-N(RR)，R＝R＝C8-C22烷基，X＝O；R＝CH3；
R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；
4
R ＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5。
28.根据权利要求22所述的转染复合物，其中所述辅助脂质为式I的所述阳离子脂质：
或其药学上可接受的盐，其中
R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O，W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0；
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，y＝0；
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2；y＝
0。
29.根据权利要求22所述的转染复合物，其中所述辅助脂质为式I的所述阳离子脂质：
或其药学上可接受的盐，其中
R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O，W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0。
30.根据权利要求22所述的转染复合物，其中所述辅助脂质为式I的所述阳离子脂质：
或其药学上可接受的盐，其中
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2；y＝
0。
31.根据权利要求22所述的转染复合物，其中所述辅助脂质为式I的所述阳离子脂质：
或其药学上可接受的盐，其中
R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O，W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0；或
W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，y＝0。
32.根据权利要求1到31中任一项所述的转染复合物，其中含有粘附肽、所述植物病毒
移动蛋白、或由其衍生的肽的所述细胞表面配体包含核酸结合部分。
33.根据权利要求32所述的转染复合物，其中所述核酸结合部分为DNA结合域。
34.根据权利要求32所述的转染复合物，其中所述核酸结合部分包含选自由以下组成
的群组的基团：聚阳离子肽序列、多元胺、肽核酸、精胺、亚精胺、羧基亚精胺、羧基精胺、精胺和亚精胺类似物、以及核酸嵌入剂。
35.根据权利要求32所述的转染复合物，其中所述核酸结合部分包含肽。
36.根据权利要求35所述的转染复合物，其中所述肽包含衍生自细胞结合粘附蛋白或
植物病毒移动蛋白的氨基酸序列。
37.根据权利要求34所述的转染复合物，其中植物病毒移动获自双生病毒。
38.根据权利要求35所述的转染复合物，其中所述肽包含所述细胞结合粘附蛋白或植
物病毒移动蛋白的至少5个氨基酸残基。
39.根据权利要求1到38中任一项所述的转染复合物，其中含有粘附肽、所述植物病毒
移动蛋白、或由其衍生的肽的所述细胞表面配体有助于将核酸分子递送到细胞或组织中。
40.根据权利要求1到39中任一项所述的转染复合物，其中所述递送到所述细胞或所述
组织中是在体内或体外。
41.根据权利要求32所述的转染复合物，其中所述核酸结合部分结合到选自由以下组
成的群组的核酸分子：引物、探针、寡核苷酸、载体、构筑体、质粒、基因、转基因、基因组DNA、cDNA、RNA、mRNA、tRNA、miRNA、RNAi、siRNA、shRNA、stRNA、向导-RNA、PCR产物、限制片段、mRNA重编程分子、端粒酶mRNA分子、编码gRNA的Cas9mRNA或DNA分子、CRE mRNA分子、含有LoxP的DNA分子和SV40T抗原mRNA和DNA分子。
42.根据权利要求32所述的转染复合物，其中所述核酸结合部分包含选自由SEQ ID 
NO:93和97-137组成的群组的序列。
43.根据权利要求32所述的转染复合物，其中所述核酸结合部分为核酸缩合肽。
44.根据权利要求43所述的转染复合物，其中所述核酸缩合肽包含选自由以下组成的
群组的序列：SEQ ID NO:33、93、97-127、129、132-137和147-149。
45.根据权利要求32所述的转染复合物，其中所述核酸结合部分通过包含共价键或间
隔基的键功能性地键联到含有粘附肽、所述植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽、或脂质的所述细胞表面配体的氨基酸序列。
46.根据权利要求45所述的转染复合物，其中所述间隔基包含：
i)亲水性部分并且包含约6到30个碳原子；
ii)聚醚；
iii)亲水性聚合物；
iv)序列APYKAWK(SEQ ID NO:505)的肽；或
v)GPI锚肽FTLTGLLGTLVTMGLLT(SEQ ID NO:504)。
47.根据权利要求32所述的转染复合物，其中所述核酸结合部分包含精胺、精胺衍生
物、亚精胺、组蛋白或其片段、鱼精蛋白或其片段、HMG蛋白或其片段、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚组氨酸、多元胺、阳离子肽、核酸嵌入剂、蛋白核酸序列和适体。
48.根据权利要求47所述的转染复合物，其中所述阳离子肽包含赖氨酸或精氨酸的重
复序列。
49.根据权利要求48所述的转染复合物，其中所述阳离子肽包含8-20个之间的赖氨酸
残基(K8-K20)(SEQ ID NO:583)或8-20个之间的精氨酸残基(R8-R20)(SEQ ID NO:584)。
50.根据权利要求1到49中任一项所述的转染复合物，所述植物病毒移动蛋白、或由其
衍生的肽与选自由SEQ ID NO:202-500组成的群组的所述细胞表面配体组合使用。
51.根据权利要求1到50中任一项所述的转染复合物，其中所述转染增强剂选自由以下
组成的群组：肽或非肽转染增强剂、核外体、核外体混合物、来自核外体的总脂质、衍生自核外体的总脂质和蛋白质、核定位蛋白或肽、促融肽或非肽剂、肽或非肽核内体释放剂、病毒肽或蛋白、嗜溶酶体剂、细胞渗透剂、核靶向剂、细胞表面配体和其组合。
52.根据权利要求51所述的转染复合物，其中所述病毒肽或蛋白衍生自选自由以下组
成的群组的病毒：包膜或非包膜病毒、流感病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒、α病毒、胜利基森林病毒(Semliki Forest Virus)、肝炎病毒、疱疹病毒、HIV病毒和猿猴病毒。
53.根据权利要求51所述的转染复合物，其中所述转染增强剂选自由以下组成的群组：
胰岛素、转铁蛋白、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、细胞靶向抗体或来自抗体的片段、乳铁传递蛋白、粘连蛋白、腺病毒五邻体碱基、球节(Knob)、六邻体蛋白、水泡性口炎病毒糖蛋白、胜利基森林病毒核心蛋白、流感血细胞凝集素、B型肝炎核心蛋白、HIV Tat蛋白、单纯疱疹病毒VP22蛋白、组蛋白蛋白、富精氨酸细胞透过性蛋白、高移动性基团蛋白和侵袭素蛋白、内化蛋白蛋白、内毒素、白喉毒素、志贺杆菌属毒素、蜂毒肽、爪蟾抗菌肽、短杆菌肽、天蚕抗菌肽、防御素、抗微生物肽、鲎素、硫素、吲哚力西丁、牛抗菌肽、果蝇霉素、蜜蜂抗菌肽、组织蛋白酶抑制素、杀菌渗透性增强蛋白、乳链菌肽、蟾蜍苷元和其片段。
54.根据权利要求51所述的转染复合物，其中所述核定位蛋白或肽为选自由SEQ ID 
NO:1到SEQ ID NO:40组成的群组的序列。
55.根据权利要求1所述的转染复合物，其中所述转染增强剂包含氯奎、嗜溶酶体化合
物或其组合。
56.根据权利要求1所述的转染复合物，其进一步包含生物活性剂。
57.根据权利要求1所述的转染复合物，其进一步包含与所述细胞表面配体组合的一种
或多种转染辅助子或靶向部分。
58.根据权利要求57所述的转染复合物，其中所述靶向部分为将转染复合物靶向到特
定组织或细胞类型以用于将生物剂靶向递送到其的分子。
59.根据权利要求58所述的转染复合物，其中所述靶向部分为肽、经修饰肽、抗体、经修饰抗体、受体分子、经修饰受体分子、单或双链核酸分子、经修饰单或双链核酸分子、肽或核酸适体、经修饰肽或核酸适体、有机分子和多糖。
60.根据权利要求1到59中任一项所述的转染复合物，其进一步包含融合剂。
61.根据权利要求60所述的转染复合物，其中所述融合剂为选自SEQ ID NO:42-92组成
的群组的序列。
62.根据权利要求1到61中任一项所述的转染复合物，其进一步包含细胞渗透剂。
63.根据权利要求62所述的转染复合物，其中所述细胞渗透剂为选自SEQ ID NO:74和
93-96组成的群组的序列。
64.根据权利要求1到63中任一项所述的转染复合物，其进一步包含选自由以下组成的
群组的肽或蛋白：胶原蛋白、粘连蛋白、核纤层蛋白、vero连接素、钙粘素、巢蛋白、血纤维蛋白原、弹性蛋白、骨去唾液酸蛋白、骨桥蛋白、腱生蛋白-C、Avadin、胰岛素、转铁蛋白、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、细胞靶向抗体、乳铁传递蛋白、腺病毒五邻体碱基、球节蛋白、六邻体蛋白、水泡性口炎病毒糖蛋白、胜利基森林病毒核心蛋白、流感血细胞凝集素、B型肝炎核心蛋白、HIV Tat蛋白、单纯疱疹病毒VP22蛋白、组蛋白蛋白、富精氨酸细胞透过性蛋白、高移动性基团蛋白、侵袭素蛋白、内化蛋白蛋白、内毒素、无毒白喉毒素、无毒志贺杆菌属毒素、蜂毒肽、爪蟾抗菌肽、短杆菌肽、天蚕抗菌肽、防御素、抗微生物肽、鲎素、硫素、吲哚力西丁、牛抗菌肽、果蝇霉素、蜜蜂抗菌肽、抗菌肽、杀菌渗透性增强蛋白、乳链菌肽、蟾蜍苷元、其片段，和选自由SEQ ID NO:150-197组成的群组的序列。
65.根据权利要求1到64中任一项所述的转染复合物，其进一步包含选自由以下组成的
群组的至少一种多元胺部分：致密星形树枝状大分子、PAMAM树枝状大分子、NH3核心树枝状大分子、乙二胺核心树枝状大分子、5代或更高的树枝状大分子、具有取代基团的树枝状大分子、具有一种或多种氨基酸的树枝状大分子、接枝的树枝状大分子、激活的树枝状大分子、聚乙烯亚胺和聚乙烯亚胺共轭物、聚阳离子肽，如聚赖氨酸、聚鸟氨酸、聚组氨酸、聚精氨酸。
66.一种药物组合物，其包含根据权利要求1到65中任一项所述的转染复合物和药学上
可接受的载剂。
67.一种转染细胞的方法，所述方法包含以下步骤：
获得根据权利要求1到62中任一项所述的转染复合物；和
使细胞与所述转染复合物接触。
68.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞选自由以下组成的群组：原代细胞培养物、传代细胞培养物、悬浮细胞系和附接细胞系。
69.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞为HeLa细胞并且所述转染复合物包含
选自由以下组成的群组的肽：SEQ ID NO:107、205、216、218、219、220、224、226、229、230、
234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、
344、345、347、348、349、350、351、352、353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、
369、371、373、375、377、379、381、383、450、452、454和503。
70.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞为HuVec细胞并且所述转染复合物包含
选自由以下组成的群组的肽：SEQ ID NO:205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、
236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、336、338、341、342、343、344、345、
347、348、349、350、351、352、353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、
373、375、377、379、381、383、450、452、454和503。
71.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞为NL-1iPS细胞并且所述转染复合物包
含选自由以下组成的群组的肽：SEQ ID NO:107、205、216、218、219、220、224、226、229、230、
234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、
344、345、347、348、349、350、351、352、353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、
369、371、373、375、377、379、381、383、450、452、454和503。
72.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞为C2C12细胞并且所述转染复合物包含
选自由以下组成的群组的肽：SEQ ID NO:205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、
236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、
345、347、348、350、351、352、353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、
373、375、377、379、381、383、450、452、454、501、502和503。
73.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞为人类成纤维细胞并且所述转染复合
物包含选自由以下组成的群组的肽：SEQ ID NO:205、216、218、219、220、224、226、229、230、
234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、
344、345、347、348、349、350、351、352、353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、
369、371、373、375、377、379、381、383、450、452、454、501和503。
74.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞为Jurkat细胞并且所述转染复合物包
含选自由以下组成的群组的肽：SEQ ID NO:205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、
236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、
345、347、348、349、350、351、352、353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、
371、373、375、377、379、381、383、450、452、454、501和503。
75.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞为大鼠皮层神经元细胞并且所述转染
复合物包含选自由以下组成的群组的肽：SEQ ID NO:220、236、238、323、327、336、338、341、
343、347、348、350、351、352、354、367、369、373、375、377和454。
76.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞为THP-1细胞并且所述转染复合物包含
选自由以下组成的群组的肽：SEQ ID NO:219、229、230、239、323、328、332、341、343、350、
351、357、358、375、450和454。
77.根据权利要求67所述的方法，其中所述细胞为人类骨骼肌细胞并且所述转染复合
物包含选自由以下组成的群组的肽：SEQ ID NO:218、219、230、328、336、344、350、351、353、
355、365和375。

说明书全文

植物病毒移动蛋白和其使用方法

[0001] 相关申请
[0002] 本申请要求Jessee等人的2016年3月1日提交且名为“植物病毒移动蛋白和其使用方法”的美国临时申请第62/302,155号和Jessee等人的2016年3月3日提交且名为“植物病毒移动蛋白和其使用方法”的美国临时申请第62/303,278号的优先权。这两个申请的全部公开内容都以全文引用的方式并入本文中。
[0003] 序列陈述
[0004] 与本申请相关的序列表以电子格式经由EFS-Web申请且由此以全文引用的方式并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是LT01229_SL.txt。文本文件的大小为195千字节，且文本文件创建于2017年3月1日。

技术领域

[0005] 本发明处于适合于将一种或多种生物活性剂递送到细胞的转染复合物及其使用的方法和试剂盒的领域。

背景技术

[0006] 脂质聚集体(如脂质体或阳离子聚合物)可有助于大分子(如DNA、RNA和蛋白)引入到活细胞中。包含阳离子脂质组分的聚集体可用于实现大阴离子分子(如核酸)递送到某些类型的细胞中。
[0007] 从超过25年以前阳离子脂质引入开始，阳离子脂质的使用已经越来越受欢迎。已经在文献中描述若干种阳离子脂质，并且这些阳离子脂质中的一些是可商购的。DOTMA(N-[1-(2,3-二油基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵；IUPAC:1,2-二-O-十八烯基-3-三甲基-铵丙烷(氯化物盐)；CAS号：104872-42-6)为出于核酸转染的目的而合成的第一阳离子脂质。DOTMA可单独或可与DOPE(二油酰磷脂酰乙醇胺)组合配制到脂质体中，并且这类脂质体可用于将质粒递送到一些细胞中。随后已经由各种基团合成其它类别的脂质。举例来说，DOGS(5-羧基精胺基甘氨酸双十八烷基酰胺)为制备的第一聚阳离子脂质并且此后已经制备其它聚阳离子脂质。脂质DOSPA(2,3-二油基氧基-N-[2(精胺-甲酰氨基)乙基]-N,N-二甲基-1-丙铵)已被描述为有效递送剂。
[0008] 在其它实例中，已经制备胆固醇类阳离子脂质，如DC-Chol(N,N-二甲基-N-乙基甲酰氨基胆固醇)并且用于转染。另外，制备1,4-双(3-N-油基氨基-丙基)哌嗪并且与组蛋白H1组合以生成报导比其它试剂毒性小的递送试剂。可商购的脂质的一些实例包括(DOTMA：DOPE)(加利福尼亚州卡尔斯巴德的赛默飞世尔(Thermo-Fisher,
Carlsbad,CA)、LipofectAmineTM(DOSPA:DOPE)(赛默飞世尔)、LipofectAmine2000TM(赛默飞世尔)、Lipofectamine 3000(赛默飞世尔)、 (DOGS)、ViaFect
(普洛麦格(Promega))、DNA-In、GeneIn(MTI-GlobalStem) 和DC-Chol。另外的实
例为PEI聚合物和树枝状大分子如jetPEI(PolyPlus)和Superfect(凯杰(Qiagen))。这些试剂都不能对所有细胞通用。鉴于不同类型细胞膜的组成的变化以及可限制细胞外物质进入细胞中的屏障，此可能不出乎意料。此外，阳离子脂质将核酸递送到细胞中的机理未得到明确理解。试剂比病毒递送方法低效并且对细胞具有毒性，但毒性程度随试剂不同而变化。
[0009] 然而，包括阳离子脂质、阴离子脂质、阳离子聚合物、核外体和病毒颗粒的转染剂并不是在所有细胞类型中普遍有效。不同细胞转染的有效性取决于特定转染剂组成。一般来说，在转染真核细胞中，聚阳离子脂质比单阳离子脂质更高效。在许多情况下，单独阳离子脂质对于转染无效或仅部分有效，因此辅助脂质或转染增强剂可与阳离子脂质组合使用。
[0010] 许多生物材料经由受体介导的内吞作用被细胞吸收，其中表面配体结合到细胞表面受体，导致配体结合受体的群集，并且形成涂布的凹点，之后配体内化到内体中。包膜病毒(比如流感病毒和α病毒)和非包膜病毒(比如腺病毒)经由内吞机理感染细胞。通过氯奎(趋溶酶体剂)增强一些细胞的树枝状大分子介导的转染表明内吞作用涉及至少一些转染。
[0011] 将外来DNA序列引入到通过病毒感染介导的真核细胞中一般比用阴离子脂质、阳离子脂质、PEI、肽或树枝状大分子转染剂转染高效数个数量级。在培养液中所有细胞的病毒感染需要每个细胞少于10个病毒粒子。虽然未完全理解详细的融合机理并且融合机理在病毒中变化，但是病毒融合通常涉及特定促融剂，如病毒蛋白、病毒刺突糖蛋白和病毒刺突糖蛋白的肽。另外，可借助结合细胞受体的肽增强、加速细胞结合和内化或使其具有选择性。举例来说，腺病毒涂层的五邻体碱基蛋白含有肽基序RGD(Arg--Gly--Asp)，其经由受体介导的内吞作用介导病毒结合到整合素和病毒内化。
[0012] 阳离子脂质转染的效率经证实通过将全部病毒粒子添加到转染混合物增强。某些病毒组分还可增强阳离子脂质介导的转染的效率。举例来说，已表明“LipofectinTM”介导的转染可通过将流感病毒血细胞凝集素肽添加到转染混合物增强3-4倍。已证实抗体增强阳离子脂质转染并且已证实转铁蛋白聚赖氨酸或去唾液酸糖蛋白聚赖氨酸增强阳离子脂质转染。
[0013] 尽管如此，这些方法并不是对所有细胞类型都起作用，需要相对复杂的方案并且为不便的。因此，显然非常期望用于将大分子且具体来说核酸引入到细胞中的新颖和改进的方法。具体来说，非常期望用于将核酸引入到更广泛多种细胞中且具体来说到原代细胞中的改进的方法。

发明内容

[0014] 本文公开的是包含至少一种细胞表面配体或植物病毒移动蛋白；至少一种辅助脂质组分；和转染增强剂的转染复合物。另外，公开的是包含所述公开的转染复合物和医药学上可接受的载剂的药物组合物。另外，公开的是转染细胞的方法，所述方法包含以下步骤：获得如公开的转染复合物；和使细胞与所述转染复合物接触。

具体实施方式

[0015] 定义和缩写
[0016] 应理解，本发明不限于特定装置或生物体系，其当然可变化。还应理解，除非上下文另外明确指示，否则如本说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一(a/an)”和“所述(the)”包括单数和复数指示物。因此，例如提及“脂质”包括一种或多种脂质。还应理解，在本文中所用的任何术语仅仅出于描述特定实施例的目的且并不旨在为限制性的。
[0017] 除非另外说明，否则如本文所用的以下术语、定义和缩写旨在具有以下含义：
[0018] 如本文所用，术语“标记”旨在意指化合物具有至少一种元素、同位素或附接以使得能够通过使用放射性或重同位素标记检测化合物的化学化合物，或免疫标记，如抗体或抗原或衍生自有色、发光、磷光或荧光染料的标记。采用例如经一个或多个卤素部分取代的邻、间和对叠氮基苯甲酰基(包括但不限于4-叠氮基-2,3,5,6-四氟苯甲酸)的光亲和性标记用于直接阐明在生物体系中的分子间相互作用。
[0019] 如本文所用，术语“个体”和“动物”同义，并且是指人类以及非人类动物，包括例如哺乳动物(例如啮齿动物、鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、灵长类或猪)、鸟类、爬行动物、两栖动物和鱼。
[0020] 术语“细胞”一般是指任何类型和来自任何来源的真核细胞。真核细胞的类型包括来自原代细胞、肿瘤细胞或永生化细胞系的上皮细胞、成纤维细胞、神经元、造血细胞等。这类细胞的来源包括任何动物，如人类、犬、鼠、仓鼠、猫、牛、猪、猴、猿、绵羊、鱼、昆虫、真菌和包括作物植物、海藻、观赏性植物和树的任何植物。
[0021] “递送”用于表示将期望化合物转移到靶细胞使得期望化合物最终定位在靶细胞内部或在靶细胞膜中或在靶细胞膜上所借助的过程。在本发明的化合物的许多用途中，期望化合物并不能容易地被靶细胞吸收和经由脂质聚集体或转染复合物递送(用于将期望化合物递送到在细胞内的适当细胞隔室的方式)。在某些用途中，尤其在体内情况下，递送到具体靶细胞类型为优选的并且可通过包含本发明的表面配体的转染复合物促进。
[0022] 药物是指在人或动物疾病的预防、诊断、缓解、治疗或治愈中所用的除食物之外的任何治疗剂或预防剂。
[0023] “试剂盒”是指包括本发明的化合物中的一种或多种或其混合物的转染或蛋白表达试剂盒。这类试剂盒可包含经分隔以紧密约束方式容纳一个或多个容器装置(如小瓶、试管等等)的携带装置。这类容器装置中的每一个都包含执行转染所需的组分或组分混合物。这类试剂盒可包括选自以下的一种或多种组分：核酸(优选地一种或多种载体)、细胞、一种或多种本发明的化合物、脂质聚集体形成化合物、转染增强剂、生物活性物质等。
[0024] 术语“与……缔合”当在分子相互作用的背景中使用时是指通过直接或间接共价或非共价相互作用(如氢键、范德华力(van der Waals)相互作用、疏水性相互作用、磁相互作用、静电相互作用等)键联的两个实体。
[0025] 如本文所用，术语“生物相容性”是指对细胞无毒的化合物。如果化合物添加到体外细胞导致小于或等于20％细胞死亡并且其体内施用不诱发炎症或其它这类不利影响，那么化合物为生物相容性的。
[0026] 如本文所用，术语“可生物降解”是指当引入到细胞中时分解为细胞可再使用或弃置而对细胞没有显著毒性作用(即，当组分添加到体外细胞时少于约20％的细胞被杀灭)的组分的化合物。组分不诱发体内炎症或其它不利影响。所依赖的分解可生物降解化合物的化学反应通常为未催化的。如本文关于活性剂所用，术语“有效量”是指引起期望生物响应必需的量。试剂或装置的有效量可根据如期望生物端点、待递送的试剂、囊封基质的组成、靶组织等的这类因素的而变化。递送“有效量的分子”为以足够的量将分子递送到细胞中使得分子引发生物响应，例如调节在细胞中的一种或多种基因的表达。在具体实施例中，将有效量的分子递送到细胞，使得可获得与细胞相关的疾病、病状或病症的改善或好转。递送“有效量的siRNA”或“有效量或RNAi”为以足够的量将siRNA或其它RNAi递送到细胞中以引起在细胞中靶基因表达的降低。
[0027] 术语“生物活性剂(biologically active agent/bioactive agents)”等一般是指具有生物效应或改性、引起、促进、增强、阻断或降低生物效应，或增强或限制具有生物效应的第二分子的产量或活性，与所述第二分子反应和/或结合到所述第二分子的组合物、复合物、化合物或分子。第二分子可为但不必为内源性分子(例如，如通常存在于靶细胞中的蛋白或核酸的分子)。生物效应可为但不限于：刺激或引起免疫反应性响应的生物效应；影响在细胞、组织或生物体(例如在动物中)中的生物过程的生物效应；在病原体或寄生虫中赋予生物过程的生物效应；产生或引起产生的可检测信号的生物效应；调节蛋白或多肽表达的生物效应；停止或抑制蛋白或多肽表达的生物效应；或引起或增强蛋白或多肽表达的生物效应。生物活性组合物、复合物、化合物或分子可用于研究、治疗、防治性和诊断方法和组合物中。生物活性剂可包括但不限于药物、细胞代谢物、蛋白质、营养素(维生素、氨基酸、脂质、核苷酸和碳水化合物)和核外体。
[0028] 术语“阳离子脂质”是指可用于转染并且在生理条件下具有至少一个正电荷的任何阳离子脂质。同时应理解形成本公开的基础的某些细胞表面配体可用阳离子脂质配制，阳离子脂质可被视为辅助脂质。
[0029] 术语“趋溶酶体剂”为抑制防止或减缓溶酶体隔室的酸化的溶酶体功能的任何化合物或分子。
[0030] 如本文所用，术语“核酸结合部分”是指能够结合到核酸的化合物或分子。在一些实施例中，结合分子能够非共价结合到核酸，同时在其它实施例中，结合分子共价连接到细胞结合粘附序列、植物病毒移动蛋白或肽片段、核定位序列、转染增强剂、和/或融合剂。结合分子可包括但不限于精胺、精胺衍生物、亚精胺、组蛋白或其片段、鱼精蛋白或其片段、HMG蛋白或其片段、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚组氨酸、多元胺和阳离子肽、核酸嵌入剂、蛋白核酸序列或适体。此外，这包括但不限于以上化合物的类似物或衍生物。非限制性实例为作为赖氨酸或精氨酸的重复序列的阳离子肽，例如具有在8-20个之间的赖氨酸残基(K8-K20)(SEQ ID NO:583)或在8-20个之间的精氨酸残基(R8-R20)(SEQ ID NO:584)的序列。
[0031] “靶细胞”或“靶组织”是指使用脂质聚集体或转染复合物作为用于期望化合物的载剂将期望化合物递送到的任何细胞或组织。
[0032] 本文中使用转染意指将任何核酸、蛋白质、肽、脂质、细胞营养物、医药剂、分子或其它大分子递送到体外或体内靶细胞或组织(即，在动物、植物或人类中)，使得在细胞中核酸、蛋白质或其它大分子表达，赋予细胞表现型，在细胞中引起增强生长、蛋白质表达、或具有生物功能。
[0033] 术语“可表达的核酸”与分子量无关地包括DNA和RNA两者，且术语“表达”意指在细胞内核酸的功能性存在的任何表现，包括但不限于瞬时表达和稳定表达两者。
[0034] 如本文所用，术语“融合剂”是指能够分解核内体膜或细胞膜并且将转染剂释放到细胞的细胞质中的任何化学物质或分子。此术语包括但不限于病毒、合成化合物、蛋白质、融合肽、细胞渗透肽或蛋白质、或其衍生物。由于存在融合剂，膜可经历溶解、融合或重组或所有三个。
[0035] 术语“融合肽”是指渗透膜使得损失膜的结构组织和完整性的任何肽分组。融合肽为融合剂。
[0036] 如本文所用，术语“转染剂”一般是指能够将分子递送到细胞的组合物。转染剂可为有机的，如脂质、碳水化合物、阳离子聚合物、树枝状大分子、肽或蛋白类或根据所靶向的细胞类型或组织的那些的组合。转染剂还可为无机的，如钙盐。其包括阳离子脂质、阴离子脂质、阳离子肽、阳离子蛋白质、聚阳离子病毒杂交体、阳离子聚合物、核外体和以上各者的组合。如本文所用，转染剂可任选地包括任选地与以下组合的转染化合物中的至少一种或多种：一种或多种辅助脂质、一种或多种聚乙二醇化脂质、一种或多种来自核外体的脂质、完整脂质混合物形式核外体、任选地一种或多种靶向部分、任选地一种或多种细胞表面配体、任选地一种或多种核定位序列、任选地一种或多种融合剂、任选地一种或多种缩合剂、任选地一种或多种细胞渗透剂、任选地一种或多种植物移动蛋白或肽片段、任选地一种或多种核外体、和任选地一种或多种趋溶酶体剂。
[0037] 如本文所用，术语“转染增强剂”是指当添加到转染剂时提高转染效率(即，提高经转染的细胞的百分比)，提高转染剂的表达水平，或降低得到生物响应所需要的核酸或蛋白的量的要求，或以上增强的任何组合的化合物。在一些实施例中，转染增强剂还有助于递送帮助下调表达的分子，如siRNA、LNA等。
[0038] 术语“表面配体”或“细胞表面配体”是指将结合到细胞的表面受体的化学物质或结构。如本文所用，术语“细胞表面受体”是指表面配体可附接、接触或与其缔合的在细胞表面上的特定化学团基。表面配体为靶向部分。此外，表面配体包括能够结合到细胞并且通过细胞增多(例如内吞作用、摄液作用和胞饮作用)进入细胞的任何物质。
[0039] 如本文所用，术语“转染复合物”一般是指被配制成用于将生物活性剂(如核酸、蛋白质、大分子、细胞营养物、生物活性分子等)递送到体内或体外细胞或组织的组合物。如本文所用，转染复合物可包括与待递送的生物活性化合物组合，任选地与以下组合的转染化合物或转染剂中的至少一种或多种：除了待递送的生物活性剂之外的一种或多种辅助脂质、一种或多种聚乙二醇化脂质、一种或多种靶向部分、一种或多种核定位序列、一种或多种融合剂、一种或多种缩合剂、一种或多种细胞渗透剂、一种或一种或多种植物移动蛋白或肽片段、完整核外体、自核外体分离的总脂质提取物、一种或多种核外体脂质、一种多种核外体蛋白质组分，和一种或多种趋溶酶体剂。出于本文所描述的目的，术语“转染复合物”可被认为与生物活性剂接触的脂复合体或脂质聚集体。因此，在以下公开内容中的一些情况下，如脂复合体、脂质聚集体等的术语可用于参考不含一种或多种生物活性剂或“有效负载”的转染复合物。
[0040] 如本文所用，术语“辅助脂质”一般是指适合用于制备和形成本文公开的转染复合物的脂质。合适的辅助脂质可包括但不限于DOPE、DPhPE、饱和和不饱和DPPE、饱和和不饱和DMPE、DOPC、Lyso-PE(1-酰基-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、Lyso-PC(1-酰基-3-羟基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)、3-烷基氧基-2-羟基-1-乙酰氨基丙烷、4-烷基氧基-3-羟基-1-乙酰氨基丙烷、5-烷基氧基-4-羟基-1-乙酰氨基丙烷、胆固醇、胆固醇衍生物、固醇(包括植物固醇、动物固醇和类何帕醇)或已知允许或有助于将外源生物活性分子引入到细胞或组织内部的中性或阳离子脂质中的任一种。在一些实施例中，多于一种辅助脂质可用于本文所描述的转染复合物的配制物中。设想用于制备本发明所公开的转染络合物复合物的示例性但非限制性的中性或阳离子脂质可包括选自以下的一种或多种脂质：N-(2-溴乙基)-N,N-二甲基-2,3-双(9-十八碳烯氧基)-溴化丙铵(BMOP)、二棕榈酰油酰磷脂酰-乙醇胺5-羧基精胺基酰胺(DDPES)、DSPC、二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、鲸蜡基三甲基溴化铵(CATB)和DOPE(CTAB:DOPE)的配制物、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POPC)、DMG、1,2-二肉豆蔻氧基氨基丙烷(DMAP)、二肉豆蔻酰基磷酯酰乙醇胺(DMPE)、DOMG、DMA、二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、二棕榈酰乙基磷脂酰胆碱(DPEPC)、二油酰二甲基氯化铵(DODAC)、1,3-二-油酰基氧基-2-(6-羧基精胺基)-丙基酰胺(DOSPER)、N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、N-[1-(2,3-二棕榈酰基油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DPTMA)、二十二基甲基溴化铵(DDAB)、N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基-甲基硫酸铵(DOTAP)、DOTAP.Cl、3,β-N,(N′,N′-二甲基氨基乙烷)-氨基甲酰基]胆固醇(DC-chol)、2-(精胺甲酰氨基)乙基)-N,N-二甲基-三氟乙酸铵(DOSPA)、氯化O,O′-二(十四酰基)-N-(α三甲基铵基乙酰基)二乙醇胺(DC-6-14)、二己酰基磷脂酰乙醇胺(DCPE)、二月桂基氧基丙基-3-二甲基羟基乙基溴化铵(DLRIE)、1,2-二油酰基-3-二甲基铵-丙烷(DODAP)、乙基-PC、2,3-二油酰基氧基-N-[2-(精胺羧基酰氨乙基]-N,N-二-甲基-1-三氟乙酸丙铵(DOSPA)、二十八烷基酰氨基甘氨酰羧基精胺(DOGS)、N-[1-(2,3二棕榈烷氧基)丙基]-N,N-二甲基-N-(2-羟乙基)溴化铵(DMRIE)、二油酰基乙基-磷酸胆碱(DOEPC)、N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N-[1-(2-羟乙基)]-N,N二甲基碘化铵(DOHME)、溴化N-(3-氨丙基)-N,N-二甲基-2,3-双(十二烷氧基)-1-亚丙胺/二油酰磷脂酰乙醇胺(GAP-DLRIE:DOPE)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-[[二氧磷基-外消旋-(3-己二胺酰基(1-甘油)).Cl(DOPG)、N-月桂酰肌氨酸、(R)-(+)-柠檬烯、卵磷脂(和其衍生物)；磷脂酰乙醇胺(和其衍生物)；磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺)、二植烷酰磷脂酰乙醇胺(DPhPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、3-β-[[1-鸟氨酸酰胺氨基甲酰基]-胆固醇(O-Chol)、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺(POPE)；二硬脂酰磷脂酰乙醇胺；磷脂酰胆碱；磷脂酰胆碱、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)棕榈酰油酰-磷脂酰胆碱(POPC)；二硬脂酰磷脂酰胆碱；磷脂酰甘油；哌嗪类阳离子脂质、磷脂酰甘油、二油酰基磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰油酰基磷脂酰-甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油；磷脂酰丝氨酸(和其衍生物)；磷脂酰丝氨酸、二油酰基或二棕榈酰磷脂酰丝氨酸；二季铵盐；N,N′-二油酰基N,N,N′,N′-四甲基-1,2-乙二胺(TmedEce)、N,N′-二油酰基-N,N,N′,N′-四甲基-1,3-丙二胺(PropEce)(N,N′-二油酰基-N,N,N′,N′-四甲基-1,6-己二胺HexEce)和其对应的N,N′-二鲸蜡基饱和类似物(TmedEce、PropEce和HexEce)、二磷脂酰甘油；脂肪酸酯；单阳离子型转染脂质；1-脱氧-1-[二十六烷基(甲基)铵基]-D-木糖醇；1-脱氧-1-[甲基(二十四烷基)铵基]-D-阿拉伯糖醇；1-脱氧-1-[[二十六烷基(甲基)铵基]-D-阿拉伯糖醇；1-脱氧-1-[甲基(二十八烷基)-铵基]-d阿拉伯糖醇、甘油酯；鞘脂；卡多耳脂；
脑甘脂；神经酰胺；核外体或自核外体分离的脂质混合物；和其组合。
[0041] 辅助脂质还包括中性脂质胆固醇和其它3βOH-固醇以及其衍生物、磷脂酰胆碱或可商购的阳离子脂质混合物，例如 (N,N,N',N",N"'-四甲基-N,N,N',N",N"'-四棕榈基精胺(TMTPS)和二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)的1:1.5(M/M)配制物、 GS  2888 和
LIPOFECTAMINE LIPOFECTAMINE
TFXNTTM、TRANSFASTTM、
维他米定(vectamidine)(3-十四烷氨基-N-叔丁基-N′-十四烷基
丙脒(也称为二C14-脒)、OLIGOFECTAMINE MessengerMAX、GeneInTM、TransfeXTM、
LipofectAmine 3000、 DMRIE-C、
HD、 DNA-In、TransfectinTM、SilentFectTM、
ViaFectTM、DC-chol、 DharmaFect DharmaFect
TM TM
DharmaFect DharmaFect Escort III、Escort IV、DOGS等等。另外，还设想上文列出的辅助脂质、核外体和自核外体分离的脂质混合物的组合的任何混合物。
[0042] 自核外体分离的脂质实例的实例包括但不限于：Lyso-PC(非限制性实例包括C-18、C-16、C-14和混合物)、溶血-双磷脂酸(非限制性实例包括C-18、C-16和C-14)、鞘磷脂、脑酰胺(非限制性实例包括C-8和C-24)、二饱和PC(非限制性实例包括DSPC、DPPC、DMPC和具有Cn长度的化合物(其中n＝8-25))、二不饱和PC-MIX(非限制性实例包括DOPC和DP(db)PC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、二饱和PE(非限制性实例包括DSPE、DPPE和DMPE)、二不饱和PE-MIX(非限制性实例包括DOPE和DP(db)PE)、磷脂酰甘油(PG)(非限制性实例包括C-18-C-22)、胆固醇和二甘油酯，如心磷脂。
[0043] 另外，设想上文列出的辅助脂质、核外体、和自核外体分离的脂质混合物的组合的任何混合物。
[0044] 以下专利文件、专利申请或参考文献以全文引用的方式并入本文中并且尤其对于可用于本文公开的转染复合物中的含有阳离子和中性辅助脂质的转染剂的公开内容：美国专利第6,075,012号；第6,020,202号；第5,578,475号；第5,736,392号；第6,051,429号；第6,376,248号；第5,334,761号；第5,316,948号；第5,674,908号；第5,834,439号；第6,110,
916号；第6,399,663号；第6,716,882号；第5,627,159号；第7,915,230号；第7,531,693号；
第8,034,977号；第7,166,745号；第5,994,109号；第6,033884号；第6,150,168号；第6,177,
554号；第6,083,741号第6,458,026号；第7,598,421号；第7,820,624号；第7,256,043号；第
7,704,969号；第8,026,341号；第7,145,039号；第7,531,693号；和第8,785,200号；和国际公开WO 2004/063342、WO 0027795、WO2004/105697、WO 2007/130073、WO 2012/142622和WO 
2013/158127。
[0045] 如本文所用，术语“聚乙二醇化脂质”一般是指共价共轭到一个或多个聚乙二醇部分的脂质。用于本文中的脂复合体实施例的聚乙二醇化脂质包括磷脂酰乙醇胺(PE)类聚乙二醇化脂质，例如1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-MW]，其中MW是指聚乙二醇部分的平均MW。这类二肉豆蔻酰基-PEG-PE脂质通常命名为14:0PEG(MW)PE。举例来说，聚乙二醇部分的平均MW可为25、350、550、750、1000、2000、3000、5000、6000、8000或12000。磷脂酰乙醇胺类聚乙二醇化脂质的脂肪酸链可包括(例如)如用于18:
1PEG(MW)PE的1,2-二油酰基、如用于16:0PEG(MW)PE的1,2-二棕榈酰基，或如用于18:0PEG(MW)PE的1,2-二硬脂酰基。另外磷脂酰乙醇胺(PE)类聚乙二醇化脂质包括例如1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[MOD(聚乙二醇)-MW]，也被称作DSPE-MOD PEG(MW)，其中MOD是指官能部分，如胺、生物素、羧酸、叶酸、顺丁烯二酰亚胺、PDP或羧基荧光素部分。举例来说，MW可为2000或5000。用于本文所描述的实施例的聚乙二醇化脂质还包括神经酰胺类聚乙二醇化脂质，例如N-辛酰基-神经鞘胺醇-1-{琥珀酰基[甲氧基(聚乙二醇)MW]}，命名为C8PEG(MW)神经酰胺，其中MW为例如750、2000或5000。或者，脂肪酸部分可具有如用于C16PEG(MW)神经酰胺的N-棕榈酰基(C16)基团。
[0046] “脂质体组合物”一般为包括一种或多种脂质体的配制物。在一些情况下，术语“脂质体组合物”可与术语“转染复合物”互换使用。这些配制物通常为胶体，但还可为干燥配制物。脂质体为由自组装两亲性分子构成的囊泡胶态粒子。本文公开的表面配体、植物病毒移动蛋白或其片段可并入到单独或任选地与一种或多种辅助脂质(即，中性脂质、胆固醇或胆固醇衍生物、溶血脂质或阳离子脂质)组合的一种或多种阳离子脂质或一种或多种阴离子脂质或一种或多种pH敏感脂质的脂质体组合物中，所述辅助脂质使用标准方法加工以形成含脂质体胶体悬浮液。本文公开的脂质体组合物为含有一种或多种阳离子脂质、一种或多种辅助脂质，任选地与一种或多种中性和/或辅助脂质、核外体、来自核外体的总脂质提取物、靶向部分、融合剂、细胞渗透剂、亲溶酶体剂组合的那些，其通过在不受限制的情况下本领域中已知的任一种标准方法处理以形成脂质体。脂质体组合物可任选地含有一种或多种融合剂。脂质体组合物可任选地含有可通过粒径测量彼此区分的一种或多种脂质体组合物。不同组合物将呈现粒径差异和粒径均一性(例如平均粒径)和多分散性。不同组合物将呈现呈脂质体形式的组合物程度差异。在一些非限制性实施例中，脂质体组合物将呈现在120nm和800nm范围内的粒径并且一般将呈现较低多分散性。脂复合体粒径(具有siRNA或其它负荷)可在约40nm到135nm的范围内。在一些实施例中，脂复合体粒径为50nm到120nm、
50nm到100nm、60nm到90nm、70nm到90nm或约85nm。
[0047] 术语“脂质聚集体”或“脂复合体”为包括所有类型(单层和多层两者)的脂质体以及囊泡、微胞、核外体、微泡等等无定形聚集体的通用术语。阳离子脂质聚集体为包含一种或多种阳离子化合物的组合，其任选地与非阳离子脂质(包括中性脂质)、核外体组合使得脂质聚集体具有净正电荷的脂质聚集体。本文所公开的表面配体或植物病毒移动蛋白或其片段可并入到脂质聚集体中，所述脂质聚集体任选地具有辅助脂质并且进一步任选地具有一种或多种聚乙二醇化脂质和/或一种或多种靶向部分、一种或多种融合剂、一种或多种细胞渗透剂和一种或多种趋溶酶体剂、一种或多种核外体，其在与合适的生物活性剂接触时可随后形成脂质-生物活性剂复合物。本文所用的术语“脂质聚集体”或“脂复合体”一般是指“裸”转染复合物，即，一般不含待递送到体外或体内细胞或组织的生物活性剂的有效负载的转染复合物。
[0048] 术语“核外体”是指通过含有转运到在组织的不同位置处的其它细胞的蛋白质、脂质和基因材料和其它生物分子的细胞特异性有效负载的大部分细胞分泌的小膜囊泡。可以认为核外体是脂质体颗粒。自其获得的核外体或脂质混合物可与其它转染剂或辅助脂质混合物组合使用。核外体也被称为微泡、epididimosomes、argosomes、核外体样囊泡、微粒子、promininosomes、prostasomes、dexosomes、texosomes、archeosomes和oncosomes。在核外体的脂质成分的一个实例中是Lyso-PC(其中非限制性实例为C-18、C-16、C-14和混合物)、溶血-双磷脂酸(其中非限制性实例为C-18、C-16和C-14)、鞘磷脂、脑酰胺(非限制性实例C-8-C-24)、二饱和PC(非限制性实例DSPC、DPPC、DMPC等，其中Cn(n＝8-25))、二不饱和PC-MIX(其中非限制性实例是DOPC、DP(db)PC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、二饱和PE(非限制性实例DSPE、DPPE和DMPE)、二不饱和PE-MIX(非限制性实例包括DOPE和DP(db)PE)、磷脂酰甘油(PG)(其中非限制性实例是C-18-C-22)、胆固醇、二甘油酯，如心磷脂。
[0049] 术语“脂质-生物活性剂”一般是指在脂质或脂质聚集体和生物活性剂(核酸、核苷酸、氨基酸、肽、多肽、蛋白质、蛋白质核复合物、营养物、核外体等)之间的非共价缔合。
[0050] 如本文所用，“核酸”和其语法等效物将包括全范围的单或双链核苷酸的聚合物且包括自天然源分离的核酸(包括DNA、RNA和DNA-RNA杂交分子、连接核酸(LNA)、桥接核酸(BNA))；使用如PCR扩增或化学合成的技术体外制备的核酸；例如经由重组DNA技术体内制备的核酸；或通过任何已知方法制备或获得的核酸。核酸通常是指由两个或更多个核苷酸(脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸)的线性链或其变体、衍生物和/或类似物构成的聚核苷酸分子。准确的尺寸将取决于许多因素，其继而取决于如本领域中众所周知的用途的最终条件。本发明的核酸包括但不限于引物、探针、寡核苷酸、载体、构筑体、质粒、基因、转基因、基因组DNA、cDNA、LNA、BNA、RNA、mRNA、tRNA、miRNA、RNAi、siRNA、shRNA、stRNA、向导-RNA、gBlock、PCR产物、限制片段、寡核苷酸等。
[0051] 如本文所用，术语“核苷酸”包括含有糖部分(戊糖)、磷酸酯和含氮杂环碱基的DNA或RNA的任何单体单元并且还可包括这类核苷酸的单、二和三磷酸酯形式。碱基通常经由糖苷碳(在戊糖的1′碳处)键联到糖部分，并且碱基和糖的组合被称作“核苷”。碱基表征核苷酸具有为腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)的四个惯用DNA碱基。肌苷(I)为可用于替代四种天然存在的碱基(A、C、G或T)中任一种的合成碱基的实例。四种RNA碱基为A、G、C和尿嘧啶(U)。因此，核酸可为包含通过在相邻戊糖的3′与5′碳之间的磷酸二酯键连接的核苷酸的线性阵列的核苷酸序列。已知其它经修饰核苷酸并且可用于本发明的实践中。术语核苷酸包括核苷三磷酸酯ATP、UTP、ITP、CTG、GTP或衍生物，如(但不限于)[αS]ATP、7-脱氮-GTP和7-脱氮-ATP、5-methyCTP、pseudoUTP、4-thioUTP和脱氧核苷三磷酸酯，如dATP、dCTP、dITP、dUTP、dGTP、dTTP或其衍生物。这类衍生物包括例如带来对含有其的核酸分子的核酸酶抗性的[αS]dATP、7-脱氮-dGTP和7-脱氮-dATP、5-methydCTP、pseudodUTP、4-thiodUTP、LNA-三磷酸核苷和核苷酸衍生物。如本文所用，术语核苷酸还指双脱氧核苷三磷酸酯(ddNTP)和其衍生物。双脱氧核苷三磷酸酯的说明实例包括但不限于ddATP、ddCTP、ddGTP、ddITP和ddTTP。如在此所用的术语核苷酸还指含有可修饰基团的核苷酸。具有可修饰基团的核苷酸的说明实例包括但不限于烯丙胺-CTP、烯丙胺dCTP、烯丙胺UTP、烯丙胺dUTP。根据本发明，“核苷酸”可未标记或通过众所周知的技术可检测地标记。可检测标记包括例如生物素、放射性同位素、荧光标记、化学发光标记、生物发光标记和酶标记。本领域中已知的各种标记方法可用于本发明的实践中。本发明的转染复合物可用于将核苷酸递送到活细胞以允许经修饰核苷酸并入核酸中。
[0052] “RNA”或“RNA分子”是指来自任何来源(包括RNA病毒、原核和真核生物)的任何大小、自复制和具有任何序列的任何RNA分子或其功能性部分。RNA分子可化学修饰并且呈包括但不限于线性或环形和单或双链的任何形式。RNA分子的非限制性实例包括mRNA、rRNA、tRNA、miRNA、mtRNA、tmRNA、RNAi、siRNA、shRNA、向导RNA和stRNA。在一些实施例中，适用于本发明的实践的siRNA分子包括例如在美国专利公开第2004/0014956号、第2004/0054155号、第2006/0009409号、第2009/0023216号和第2010/0136695号中描述；和如在国际公开WO 2003/064626和WO03/064625中描述的那些，所述专利全部以引用的方式并入本文中。适用于本发明的实践的其它siRNA分子包括例如在国际公开WO 2009/039173中描述的那些，所述申请以引用的方式并入本文中。
[0053] 如本文所用，术语“肽”或“多肽”或“蛋白质”是指通过肽键键联在一起的至少三个氨基酸的链带。术语“蛋白质”和“肽”可互换使用，但一般理解“多肽”或“蛋白质”大于肽。“肽”可是指单独的肽或肽的集合。
[0054] 如本文所用，术语“聚核苷酸”或“寡核苷酸”是指核苷酸的聚合物。通常，聚核苷酸包含至少三个核苷酸。聚合物可包括天然核苷(即，腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)、核苷类似物(例如2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、C5-丙炔基胞苷、C5-丙炔基尿苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-甲基胞苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟嘌呤和2-硫代胞苷)、经化学修饰的碱基、经生物修饰的碱基(例如甲基化碱基)、插入的碱基、经修饰糖(例如2′-氟核糖、核糖、2′-脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)，或经修饰磷酸酯基团(例如硫代磷酸酯和5′-N-胺基磷酸酯键)。术语“脂质”是指包括脂肪、油和甘油三酯的疏水性或两亲性有机化合物。
[0055] 公开的方面和实施例
[0056] 本文提供适合于将一种或多种生物活性剂递送到体外或体内细胞或组织的转染复合物。本文所描述的转染复合物包括与作为转染复合物的一部分的转染剂组合增强转染的一种或多种细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或其片段。在一些实施例中，本文公开的转染复合物任选地进一步包含选自由以下组成的群组的一种或多种组分：一种或多种辅助脂质、一种或多种聚乙二醇化脂质、一种或多种阳离子脂质、一种或多种阳离子聚合物、一种或多种靶向部分、核外体、自核外体分离的总脂质、总脂质和蛋白质分离形式核外体和其组合。在一些实施例中，本文公开的转染复合物进一步包含选自由以下组成的群组的一种或多种组分：由肽或非肽表面配体组成的肽或非肽转染增强剂、细胞渗透肽或非肽细胞渗透剂、促融肽或非肽融合剂、肽或非肽核内体释放剂、嗜溶酶体剂、核靶向剂(例如，含有一种或多种核定位序列的肽)和其组合。
[0057] 植物病毒移动蛋白涉及使用植物宿主细胞机构以及植物病毒移动蛋白使植物病毒的基因组在细胞间移动并且从细胞膜移动到细胞核且回到细胞膜且随后进入邻近细胞。所有植物病毒都具有移动蛋白但尚未全部研究。这些病毒移动蛋白或其片段适用于将真核细胞中的DNA或RNA从细胞质移动到细胞核或从细胞核移动到细胞膜。烟草花叶病毒组、香石竹病毒组、伞形植物病毒属、雀麦花叶病毒组、南瓜花叶病毒组、菜豆金黄花叶病毒属、马铃薯Y病毒组、Hordei样病毒、Potex样病毒、菜豆金黄花叶病毒属、联体病毒科的病毒属和病毒家族具有将核酸移动到细胞膜和从细胞膜移动到细胞核的病毒移动蛋白的实例(如果为DNA病毒)。公开使用这些植物蛋白增强DNA和RNA两者的转染。
[0058] 在一些实施例中，适合用于制备和形成本文公开的转染复合物中的辅助脂质包括但不限于胆固醇、胆固醇衍生物、一种或多种固醇(包括植物固醇、动物固醇和类何帕醇)或已知允许或有助于将外源生物活性分子引入到细胞或组织内部的中性或阳离子脂质中的任一种。辅助脂质或辅助脂质可来源于核外体或完整核外体。在一些实施例中，超过一种辅助脂质用于本文所描述的转染复合物的配制物中。在一些实施例中，本文公开的转染复合物不包含辅助脂质。
[0059] 根据本文中阐述的实施例中的一些，适用作辅助脂质的说明性但非限制性的中性或阳离子脂质包括胺、酰胺或其衍生物的饱和和不饱和烷基和脂环醚和酯。在一些实施例中，阳离子脂质的直链或支链烷基和亚烷基含有1到约25个碳原子。在某些实施例中，直链或支链烷基或亚烷基具有六或更多个碳原子。在一些实施例中，直链或支链烷基或亚烷基具有八到约二十个碳原子。在其它实施例中，脂环基团含有约6到30个碳原子或者八到二十个碳原子。在一些实施例中，脂环基团包括胆固醇和其它类固醇基团。在某些实施例中，用尤其包括：卤离子(即，Cl-、Br-、I-、F-)、乙酸根、三氟乙酸根、硫酸根、亚硝酸根、三氟甲磺酸根和硝酸根的多种抗衡离子(阴离子)制备阳离子脂质
[0060] 适合用于制备和形成本文公开的转染复合物中的聚乙二醇化脂质的实施例为与形成本文所描述的转染复合物和与其向动物或人类体内施用或向组织或细胞体外施用相容的任何脂质或脂质的混合物。用于本发明描述的转染复合物的聚乙二醇化脂质包括但不限于分子量在约250道尔顿和约12,000之间，或在一些实施例中，约350道尔顿和约6,000道尔顿，或在一些实施例中，在约500道尔顿和约1,000道尔顿之间，或在一些实施例中，在约1,000道尔顿和约2,000道尔顿之间，或在一些实施例中，在约2,000道尔顿和5,000道尔顿之间的PEG聚合物。
[0061] 在一些实施例中，本发明所公开的转染复合物包括待递送到体外或体内细胞或靶组织的一种或多种生物活性剂。合适的生物活性剂包括但不限于能够与本发明描述的转染剂形成转染复合物并且当递送到在体内或体外的细胞内部或组织时引发生物响应的任何分子。在一些实施例中，设想用于本发明所描述的实施例中的生物活性剂为阳离子、中性或阴离子试剂。在一些实施例中，适合于在本发明所公开的转染复合物中的配制物的生物活性剂包括单独或以多种组合与其它蛋白质、DNA或RNA分子组合的蛋白质、DNA或RNA分子，但不限于；核酸(包括但不限于包括cDNA分子的单或双链线性或环形DNA分子、单或双链RNA分子、mRNA、具有提高稳定性的经修饰mRNA、小干扰RNA(siRNA)分子、小发夹RNA(shRNA)分子、向导RNA(gRNA)、Cas9蛋白、Cas9蛋白/向导RNA、Cas9DNA/向导RNA、Cas9mRNA/向导RNA、Cas9mRNA/gRNA/ssDNA/RecA蛋白、Cas9mRNA/gRNA/ssDNA/重组蛋白、Cas9蛋白/gRNA/ssDNA/RecA蛋白、Cas9蛋白/gRNA/ssDNA/重组蛋白、微RNA(miRNA)分子、寡核苷酸、反义寡核苷酸、有义寡核苷酸)、多肽、抗体、寡肽、治疗肽或蛋白分子、肽核酸(PNA)、阳离子、阴离子或中性有机分子或药物，除了其药学上可接受的盐之外。在另一个实施例中，细胞生长所需的营养物或可用于增强蛋白质表达的营养物可通过本文所公开的转染复合物递送到细胞中。
[0062] 在某些非限制性说明性实施例中，本文公开的转染复合物将核酸分子递送到体外或体内细胞或组织中，包括将RNA干扰分子(RNAi)或小干扰RNA分子(siRNA、shRNA或miRNA)递送到细胞中以用于抑制基因表达。
[0063] 在一些实施例中，细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、其肽片段、或本发明所公开的转染复合物用于将mRNA分子或mRNA和DNA分子的混合物递送到体内或体外细胞或组织中以促进特定蛋白质的表达。mRNA重编程分子或端粒酶为mRNA分子的非限制性实例。编码含有gRNA、CRE mRNA和LoxP的DNA分子、SV40T抗原mRNA和具有SV40复制起点的DNA分子的Cas9mRNA和DNA分子为具有实用性的mRNA和DNA对的非限制性实例。含有mRNA的预先形成的转染复合物为本文公开的转染复合物的非限制性说明性实施例。本文公开作为培养基补充剂的端粒酶mRNA转染复合物或端粒酶mRNA和SV40大T-抗原复合物。在一些实施例中，制备含有mRNA的预先形成的转染复合物并且将DNA分子稍后添加到复合物。
[0064] 在一些实施例中，细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或其肽片段、或本发明所公开的转染复合物用于将DNA分子(包括cDNA分子)递送到体内或体外细胞或组织中以促进特定蛋白质的表达或合成特定RNA分子，还提供包括但不限于mRNA分子或RNAi或miRNA或shRNA分子。
[0065] 在一些实施例中，本发明所公开的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或其肽片段用于将蛋白质或蛋白质核酸复合物递送到体内或体外细胞或组织以实现蛋白质的功能，如例如在基因编辑中。在一些实施例中，本文所描述的转染复合物含有一种或多种表面配体、一种或多种促融肽、一种或多种核靶向肽、一种或多种阳离子脂质或一种或多种中性脂质。蛋白质和蛋白质核酸复合物的非限制性实例包括重组酶、CRISPR酶、Cre重组酶和Cre融合蛋白、转录活化剂(比如效应子核酸酶(TALEN))、基因组编辑蛋白和CRISPR-Cas9核酸酶/向导RNA复合物。
[0066] 在一些实施例中，蛋白质(如RNA聚合酶、RNA结合蛋白或肽和转录因子)结合到核酸并且与本文公开的转染剂一起递送到细胞。在某些实施例中，通过添加被设计成附接到蛋白质的阴离子肽或阴离子聚合物使蛋白成阴离子的，或阴离子氨基酸添加到蛋白质的C端或N端。
[0067] 在一些实施例中，本文所描述的转染复合物可任选地包括一种或多种促融或细胞渗透肽。促融或细胞渗透肽为能够促进含脂质复合物融合到细胞膜(质膜或核内体膜)的任何肽分子。多种促融或细胞渗透肽为本领域中已知的，并且完全落入从业者的技术水平内以在不需过度实验的情况下识别合适的促融或细胞渗透肽和在本发明中其使用条件。
[0068] 在一些实施例中，本文所描述的转染复合物任选地包括与本文所描述的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或其肽片段组合的一种或多种转染辅助子或靶向部分。在一些实施例中，靶向部分为肽、经修饰肽、抗体、经修饰抗体、受体分子、经修饰受体分子、单或双链核酸分子、经修饰单或双链核酸分子、肽或核酸适体、经修饰肽或核酸适体、有机分子、多糖、核外体、或能够将转染复合物靶向到特定组织或细胞类型以用于将生物剂靶向递送到其上的任何其它分子，如对于具有在所属领域中普通技术水平的人员将显而易见。在一些实施例中，肽、抗体、核酸、适体等的修饰包括将肽、抗体、核酸、适体等共轭到PEG部分。或者，所述修饰包括将肽、抗体、核酸、适体等共轭到PEG-脂质部分。多种靶向部分对于本领域的技术人员广泛已知，并且均设想用于本发明所描述的实施例而不受限制。
[0069] 在一些实施例中，本文公开的转染复合物稳定至多一年并且在形成之后紧接着或立即与待转染的细胞或组织接触或向个体施用。在一些实施例中，本文公开的转染复合物在与细胞或组织接触或向个体施用之前任选地存储一段时间。转染复合物为稳定的，并且可在室温下，或在大于冷冻到约室温的温度下存储至少30分钟、至少45分钟、至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少10小时、至少15小时、至少20小时、至少24小时、至少48小时、至少72小时、至少5天、至少7天、至少14天、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月或至少1年的时间段。在一些实施例中，本文所描述的配制物包括一种或多种稳定剂、防腐剂、缓冲剂等，其有助于生物活性配制物的长期稳定和存储，如将由生物和药学领域的技术人员容易地理解，并且不需要过度实验实现。还应理解，存储期可在前述时间段中的任一个之间，例如在31分钟和1小时之间或在1小时和24小时之间。
[0070] 在另一个方面，本文公开的是用于制备含有细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或尤其衍生的肽的功能性转染复合物的方法，所述复合物如本文所描述。在一些实施例中，功能性转染复合物可用于制备含有生物活性大分子的合成核外体或外来体。在一些实施例中，方法包括以下步骤：形成含有一种或多种植物病毒移动蛋白或肽片段或来自本文中所描述的表面配体的脂质体或核外体组合物，其任选地与一种或多种辅助脂质、稳定脂质、转染辅助子、外来体脂质或脂质提取物、聚乙二醇化脂质、靶向部分、融合剂、细胞渗透剂、趋溶酶体剂组合。在一些实施例中，方法包括以下步骤：通过在含有本文所描述的一种或多种表面配体、植物病毒蛋白、或其肽片段的组合物中囊封生物活性剂形成脂质-聚集体，其任选地与一种或多种辅助脂质、稳定脂质、转染辅助子、聚乙二醇化脂质、靶向部分、融合剂、趋溶酶体剂组合。在一些实施例中，方法替代地包括：1)在水溶液、醇/水溶液或醇溶液中混合一种或多种表面配体、植物病毒移动蛋白或其肽片段与一种或多种转染化合物，所述转染化合物任选地包括一种或多种辅助脂质、核外体、表面配体、稳定脂质、转染辅助子、靶向部分、融合剂、趋溶酶体剂，任选地具有一种或多种聚乙二醇化脂质或其盐，其中醇浓度<10％、<25％、<50％、或<99％；2)以摩尔百分比混合一种或多种表面配体、植物病毒移动蛋白或其肽片段与一种或多种转染化合物，所述转染化合物任选地包括一种或多种辅助脂质、核外体、稳定脂质、转染辅助子、靶向部分、表面配体、融合剂、细胞渗透剂、趋溶酶体剂和一种或多种聚乙二醇化脂质或其盐，使得一种或多种转染化合物以1％-90％存在；3)以摩尔百分比混合一种或多种表面配体、植物病毒移动蛋白或其肽片段与一种或多种转染化合物，所述转染化合物任选地包括一种或多种辅助脂质、核外体、稳定脂质、转染辅助子、靶向部分、表面配体、融合剂、趋溶酶体剂、一种或多种聚乙二醇化脂质或其盐，使得聚乙二醇化脂质以<50％存在；和4)混合一种或多种表面配体、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽与一种或多种转染化合物，所述转染化合物任选地包括一种或多种辅助脂质、核外体、稳定脂质、转染辅助子、靶向部分、表面配体融合剂、细胞渗透剂、趋溶酶体剂、一种或多种聚乙二醇化脂质或其盐，其中聚乙二醇化脂质的聚乙二醇分子量为约2000-12000并且脂肪酸链长度为C6-C20烷基或C10-C20烯基；和在水溶液、醇/水溶液或醇溶液中络合脂质聚集体与生物活性剂以形成转染复合物，其中醇浓度<50％，优选地小于40％(如果聚乙二醇化脂质存在)。在一些实施例中，醇为乙醇。在一些实施例中，醇为药学上可接受的醇，如在约室温下为液体的醇，例如乙醇、丙二醇、2-(2-乙氧基乙氧基)乙醇(TranscutolTM)、苄醇、甘油、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400或其混合物。在一些实施例中，用于混合的醇与用于络合的醇不同。如上文所提供的脂质聚集体的配制物可在0％到100％乙醇中提供。在一些实施例中，辅助脂质为中性脂质。阳离子与中性脂质的比率可在100％到0.1％阳离子脂质的范围内变化。
[0071] 在另一个实施例中，使含有阳离子、阴离子和或中性脂质的预先形成的脂质聚集体、核外体、阳离子核外体或脂质体与本文所描述的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽混合。在某些实施例中，脂质聚集体、核外体或脂质体任选地配制有一种或多种转染增强剂(如辅助脂质、稳定脂质、转染辅助子、聚乙二醇化脂质、其它靶向部分、细胞表面配体、融合剂、细胞渗透剂和或趋溶酶体剂)。在一些实施例中，本文所描述的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽在生物活性剂载入到转染复合物中之前或在其之后任一点处添加到这些配制物。
[0072] 在另一个实施例中，使阳离子脂质、中性脂质和或核外体的总脂质提取物的混合物溶解于有机溶剂(如氯仿)中并且与任选地含有缓冲剂和一种或多种细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽和任选地一种或多种转染增强剂、一种或多种融合剂、一种或多种细胞渗透剂、一种或多种核定位剂的水溶液混合，并且经历反向蒸发以去除有机溶剂，在溶液中留下脂质聚集体或脂质体。
[0073] 在另一实施例中，使阳离子脂质、中性脂质和或核外体的总脂质提取物的混合物溶解于有机溶剂(如氯仿或乙醇)中并且与任选地含有缓冲剂和一种或多种植物病毒移动蛋白或源自植物病毒移动蛋白的肽和任选地一种或多种转染增强剂、一种或多种融合剂、一种或多种核定位剂、一种或多种细胞表面配体的水溶液混合，并且经历反向蒸发以去除有机溶剂，在溶液中留下脂质聚集体或脂质体。
[0074] 在另一实施例中，将阳离子脂质和脂质(核外体的总脂质提取物、来自核外体的脂质、中性脂质)在水、醇中或在醇水混合物中的混合物添加到醇溶液或醇水溶液，所述醇溶液或醇水溶液含有缓冲液和植物病毒移动蛋白或源自植物病毒移动蛋白的肽、和任选地一种或多种转染增强剂、一种或多种核外体、一种或多种融合剂、一种或多种核定位剂、一种或多种表面配体且此溶液任选地经微流化、挤压或音波处理以形成脂质聚集体或脂质体。
[0075] 在另一个实施例中，将阳离子脂质和中性脂质在水、醇中或在醇/水混合物中的混合物添加到含有缓冲剂和一种或多种细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽和任选地一种或多种转染增强剂、一种或多种核外体、一种或多种融合剂、一种或多种细胞渗透剂、一种或多种核定位剂、一种或多种表面配体的水溶液，并且此溶液任选地经微流化、挤压或超声处理以形成脂质聚集体或脂质体。
[0076] 在另一个方面，本文公开的是用于筛选转染复合物或细胞类型的基于组织的递送的方法。在一些实施例中，方法包含以下步骤：制备多种转染复合物，每种转染复合物具有至少一种细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽，以及促进检测递送到组织或细胞类型的至少一种核酸。在一些实施例中，核酸为编码可直接检测的蛋白质(例如，绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白、荧光素酶等)或编码影响可直接检测的蛋白质的表达的蛋白质的RNA分子或DNA分子。
[0077] 在一实施例中，用于筛选至少一种测试细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的基于细胞或基于组织的递送的方法包含以下步骤：制备多种独特转染复合物，每种转染复合物至少具有细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽，以及编码可检测蛋白或特定转录因子的mRNA或cDNA。每种独特转染复合物静脉内、皮下递送到在培养液中的细胞或递送到个体的组织。在预定量的时间之后，收获在培养液中的细胞或来自个体的组织，并且通过宏观检查、组织学检查或通过分子检测(PCR，西方墨点法(Western blotting)等)或使用 成像系统(Caliper)体内成像检测在各种组织中的可检测蛋白的表达，以确定含有特定转染化合物的转染复合物递送到哪些组织。
[0078] 在一实施例中，用于筛选转染复合物的基于培养液中的细胞或基于组织的递送的方法包含以下步骤：制备多种独特转染复合物，每种转染复合物至少具有测试细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽，以及编码特定转录因子的mRNA或cDNA。每种独特转染复合物可静脉内、皮下递送到在培养液中的细胞，递送到在特定转录因子的控制下表达报导基因(例如，荧光素酶)的转基因动物的组织。在预定量的时间之后，可收获来自转基因动物的组织，并且可通过宏观检查、组织学检查或通过分子检测(PCR、西方印迹法等)检测在各种组织中报导基因的表达。如果报导基因为荧光素酶，那么可使用 成像系统(Caliper)体内完成检测。
[0079] 在一些实施例中，本发明所公开的转染复合物的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽用于将核外体递送到体内或体外细胞或组织中以实现在核外体中生物负荷的功能。在一些实施例中，本文中所描述的转染复合物包含一种或多种促融肽、一种或多种细胞渗透剂、一种或多种核靶向肽、一种或多种阳离子脂质、一种或多种植物病毒移动蛋白或源自植物病毒移动蛋白的肽、一种或多种表面配体或一种或多种中性脂质。在某些实施例中，本文所描述的转染复合物包含在式I中描述的阳离子脂质中的一种或多种。
[0080] 在另一个方面，本文公开的是提供将分子和大分子(如核酸、蛋白质、肽、营养物和药物)引入到细胞中的改进效率的组合物和方法。因此，本文提供的是包含核酸分子、转染剂和转染增强剂的组合物。
[0081] 在一些实施例中，转染增强剂为包含衍生自细胞结合粘附蛋白的氨基酸序列的表面配体。胶原蛋白、粘连蛋白、核纤层蛋白、vero连接素、钙粘素、巢蛋白、血纤维蛋白原、弹性蛋白、骨去唾液酸蛋白、骨桥蛋白和腱生蛋白-C为细胞结合粘附蛋白的非限制性实例。在一些实施例中，表面配体为上文列出的全长蛋白。在其它实施例中，表面配体为长度大于5个氨基酸的上文列出的蛋白质的片段。在其它实施例中，上文列出的蛋白质片段的长度大于5个氨基酸、大于10个氨基酸、大于15个氨基酸、大于20个氨基酸、大于25个氨基酸、大于30个氨基酸、大于35个氨基酸，或大于40个氨基酸。
[0082] 在一些实施例中，细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽蛋白和本文中描述包含功能性地键联到细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽蛋白的氨基酸序列的核酸结合部分。合适的核酸结合部分包括但不限于聚阳离子肽序列、多元胺、肽核酸、精胺、亚精胺、羧基亚精胺、羧基精胺、精胺和亚精胺类似物、核酸嵌入剂等。在某些实施例中，核酸结合部分共价键联到包含粘附蛋白氨基酸序列的转染促进细胞表面配体。在另外的实施例中，转染剂为阳离子脂质(如下文描述的那些)、多元胺、聚阳离子肽序列、阳离子树枝状大分子等。在一些实施例中，细胞表面配体粘附序列或衍生自植物移动蛋白的肽为自身或其它粘附序列的多聚体。在某些实施例中，细胞结合粘附或衍生自植物移动蛋白胺基序列的肽经环化。在其它实施例中，表面配体或衍生自植物移动蛋白的肽还含有增强转染效率的其它肽序列，如键联基团、间隔基或核靶向序列。
[0083] 在一些实施例中，本文所描述的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽通过共价键结直接附接到结合分子或经由间隔基连接到结合分子。如本文所用，在本文中可互换地使用的术语“间隔基”或“键联基团”是指将两个分子彼此键联的化学结构。在一些实施例中，间隔基结合在间隔基分子的不同部分上的每个分子。在其它实施例中，间隔基为亲水性部分并且包含约6到30个碳原子。在其它实施例中，间隔基包含聚醚，例如-CH2-O-(CH2-CH2-O-)iCH2-。在其它实施例中，间隔基包含亲水性聚合物，例如[(gly)i(ser)j]k(SEQ ID NO:585)。在这些式中，i在1到6的范围内，j在1到6的范围内，并且k在3到20的范围内。在一些实施例中，间隔基为序列APYKAWK(SEQ ID NO:505)的肽。在其它实施例中，间隔基为通过肽酶体内降解的序列。
[0084] 在一些实施例中，本文所描述的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽功能性地键联到脂质(如阳离子或中性脂质)。在这些实施例的一些中，键联部分用于将大分子递送到细胞中。举例来说，细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽或细胞结合粘附肽序列氨基酸序列使用本领域中已知的方法共价键联到脂质(如阳离子脂质)。
[0085] 在某些实施例中，本文所描述的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽序列还功能性地键联到将自身插入到脂质膜中的氨基酸序列(如膜锚肽或蛋白质)。在其它实施例中，细胞表面配体肽序列键联到与脂质缔合的化学组合物。
[0086] 在其它实施例中，具有本文所描述的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的转染复合物或脂质体组合物还包含其它转染增强剂，如核定位蛋白或肽、促融肽或蛋白、转运肽或蛋白、病毒肽或蛋白、或嗜溶酶体剂。在某些实施例中，病毒肽衍生自病毒(包膜或非包膜病毒)，例如流感病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒、α病毒、胜利基森林病毒(Semliki Forest Virus)、肝炎病毒、疱疹病毒、HIV病毒或猿猴病毒。在一些实施例中，转染增强剂为例如胰岛素、转铁蛋白、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、细胞靶向抗体或来自抗体的片段、乳铁传递蛋白、粘连蛋白、腺病毒五邻体碱基、球节(Knob)、六邻体蛋白、水泡性口炎病毒糖蛋白、胜利基森林病毒核心蛋白、流感血细胞凝集素、B型肝炎核心蛋白、HIV Tat蛋白、单纯疱疹病毒VP22蛋白、组蛋白蛋白、富精氨酸细胞透过性蛋白、高移动性基团蛋白和侵袭素蛋白、内化蛋白蛋白、内毒素、白喉毒素、志贺杆菌属毒素、蜂毒肽、爪蟾抗菌肽、短杆菌肽、天蚕抗菌肽、防御素、抗微生物肽、鲎素、硫素、吲哚力西丁、牛抗菌肽、果蝇霉素、蜜蜂抗菌肽、组织蛋白酶抑制素、杀菌渗透性增强蛋白、乳链菌肽、蟾蜍苷元或其片段。在其它实施例中，转染增强剂为氯奎、嗜溶酶体化合物或其组合。在其它实施例中，核外体或外来体衍生的脂质或蛋白质是转染增强剂。在其它实施例中，转染增强剂剂包含相同或不同肽或蛋白质的多聚体。
[0087] 在转染复合物或脂质体组合物中包括的合适的核定位肽或蛋白质包括但不限于选自如阐述于下表1或序列表中的SEQ ID NO:1-41组成的群组的序列。
[0088] 蛋白质(如组蛋白、鱼精蛋白、HMG蛋白和病毒核心蛋白或外壳蛋白)包含核定位蛋白。在一些实施例中，这些蛋白质或其片段用于增强转染。在一些实施例中，核定位肽例如经由共价键任选地键联到核酸结合部分。间隔基序列任选地在DNA结合序列与核定位序列之间使用。在一些实施例中，核定位序列键联到与脂质双层缔合的辅助脂质或其它肽蛋白或化合物。
[0089] 在一些实施例中，本文所描述的组合物还包含融合剂或融合剂的组合，其在一些实施例中还充当两亲性肽。合适的融合肽包括但不限于选自如阐述于下表1或序列表中的SEQ ID NO:42-92组成的群组的序列。
[0090] 在一些实施例中，融合剂例如经由共价键任选地键联到核酸结合部分。肽KK、KKK、KKKK(SEQ ID NO:97)、RR、RRR、RRRR(SEQ ID NO:105)可键联到SEQ ID NO:42-92的融合剂。在某些实施例中，融合肽键联到与脂质双层缔合的辅助脂质、阳离子脂质或其它肽或蛋白质。间隔基序列任选地在DNA结合序列与融合剂序列之间使用。
[0091] 在某些实施例中，本文公开的组合物包含细胞渗透剂或细胞渗透剂的组合。合适的细胞渗透剂包括但不限于选自如阐述于下表1或序列表中的SEQ ID NO:93-96组成的群组的序列。
[0092] 在一些实施例中，细胞渗透剂例如经由共价键任选地键联到核酸结合部分。在其它实施例中，细胞渗透剂键联到与脂质双层缔合的辅助脂质、阳离子脂质或其它肽或蛋白质。
[0093] 在一些实施例中，核定位序列、融合剂、细胞表面配体或细胞渗透剂键联到GPI锚肽，序列FTLTGLLGTLVTMGLLT(SEQ ID NO:504)为非限制性实例。
[0094] 在一些实施例中，根据附接需要的官能团、核酸的缩合和核酸从核酸结合部分释放的速率，键联到不同转染增强剂并且为转染复合物的一部分的核酸结合部分具有对核酸的不同结合亲和力。合适的核酸结合部分包括但不限于聚阳离子肽序列、多元胺、肽核酸、精胺、亚精胺、羧基亚精胺、羧基精胺、精胺和亚精胺类似物、核酸嵌入剂等。
[0095] 在一些实施例中，本文所描述的组合物包含不同转染增强剂与不同核酸结合部分的组合。合适的核酸结合肽包括但不限于如阐述于下表1或序列表中的SEQ ID NO:97-149的序列。
[0096] 在一些实施例中，核酸结合部分当结合到核酸时还充当转染增强剂或者充当缩合剂。合适的核酸缩合肽包括但不限于选自如阐述于下表1或序列表中的SEQ ID NO:97-149的肽组成的群组的序列。在一些实施例中，还合成这些肽的多聚体并且用作缩合剂。在一些实施例中，核定位序列如果具有足够的阳离子电荷还用作缩合剂。
[0097] 合适的核酸结合部分包括但不限于聚阳离子肽序列、多元胺、肽核酸、精胺、亚精胺、羧基亚精胺、羧基精胺、精胺和亚精胺类似物、核酸嵌入剂等。
[0098] 本领域的技术人员将容易地认识到所选择的表面配体取决于所结合的受体。因为不同类型的细胞具有不同受体，根据所使用的细胞表面配体，这提供将核酸、肽、蛋白和化合物靶向到特定细胞类型的方法。因此，优选的细胞表面配体可取决于靶向的细胞类型。
[0099] 在一些实施例中，与本文公开的细胞表面配体、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽组合使用的转染增强剂包括但不限于选自由以下组成的群组的肽或蛋白质：胶原蛋白、粘连蛋白、核纤层蛋白、vero连接素、钙粘素、巢蛋白、血纤维蛋白原、弹性蛋白、骨去唾液酸蛋白、骨桥蛋白、腱生蛋白-C、Avadin、胰岛素、转铁蛋白、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、细胞靶向抗体、乳铁传递蛋白、包膜病毒、非包膜病毒、腺病毒五邻体碱基、球节蛋白、六邻体蛋白、水泡性口炎病毒糖蛋白、胜利基森林病毒核心蛋白、流感血细胞凝集素、B型肝炎核心蛋白、HIV Tat蛋白、单纯疱疹病毒VP22蛋白、组蛋白蛋白、富精氨酸细胞透过性蛋白、高移动性基团蛋白、侵袭素蛋白、内化蛋白蛋白、内毒素、无毒白喉毒素、无毒志贺菌属毒素、蜂毒肽、爪蟾抗菌肽、短杆菌肽、天蚕抗菌肽、防御素、抗微生物肽、鲎素、硫素、吲哚力西丁、牛抗菌肽、果蝇霉素、蜜蜂抗菌肽、组织蛋白酶抑制素、杀菌渗透性增强蛋白、乳链菌肽、蟾蜍苷元、其片段，和选自如阐述于下表1或序列表中的SEQ ID NO:150-503组成的群组的序列。
[0100] 在一些实施例中，转染增强剂为氯奎、嗜溶酶体化合物或其组合。在某些实施例中，转染增强剂剂包含相同或不同肽增强剂的多聚体、转染增强剂的蛋白或蛋白片段。
[0101] 在一些实施例中，前述肽任选地键联到选自以下组成的群组的部分：核酸结合部分、辅助脂质、阳离子脂质、阳离子聚合物、和GPI锚肽。
[0102] 在某些实施例中，前述肽任选地键联到式I的化学部分，
[0103]
[0104] 或其药学上可接受的盐，其中
[0105] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0；或
[0106] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，y＝0；或
[0107] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0；或
[0108] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝0；或
[0109] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0；或
[0110] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，y＝0；或
[0111] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，y＝0；或
[0112] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，y＝0；或[0113] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，y＝0；或
[0114] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，y＝0；或
[0115] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，y＝0；或
[0116] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2；y＝0；或
[0117] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，y＝0；或
[0118] W1＝H，W2＝CH2-N(R3R4)CH2-R5；R3＝R4＝CH3；R5＝H，y＝0；或
[0119] W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
[0120] W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-氨基酸侧链，y＝0；或[0121] W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-N+(CH3)3Cl，y＝0；或
[0122] W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(O-)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
[0123] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0124] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0125] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0126] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1；或
[0127] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0128] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0129] Z＝(CH2)qW1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1；或
[0130] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1；或
[0131] Z＝(CH2)qW1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0132] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0133] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0134] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1；或
[0135] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1；或
[0136] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0137] Z＝(CH2)p-N(R3)-(CH2)p，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0138] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0139] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，4
R＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1；或
[0140] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0141] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，4
R＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0142] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1；或
[0143] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1；或
[0144] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0145] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0146] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；4
R＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0147] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1；或
[0148] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；4
R＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1；或
[0149] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0150] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0151] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0152] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1；或
[0153] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0154] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0155] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1；或
[0156] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1；或
[0157] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0158] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0159] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0160] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1；或
[0161] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1；或
[0162] Z＝(CH2)qW1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝0或1；或
[0163] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0164] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0165] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0166] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0167] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0168] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0169] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0170] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0171] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或[0172] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0173] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，y＝0；或
[0174] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0175] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0176] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0177] W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或[0178] W1＝H W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)CH2-R5；R3＝R4＝CH3；R5＝H，y＝0，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0179] W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
[0180] W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-氨基酸侧链，y＝0；或[0181] W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-N+(CH3)3Cl，y＝0；或
[0182] W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(O-)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
[0183] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0184] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0185] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0186] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0187] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0188] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0189] Z＝(CH2)qW1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0190] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0191] Z＝(CH2)qW1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0192] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0193] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0194] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0195] Z＝(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0196] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0197] Z＝(CH2)p-N(R3)-(CH2)p，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；3 4
R＝CH3，R＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0198] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0199] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0200] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0201] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0202] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0203] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0204] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；3 4
R ＝CH3；R ＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0205] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0206] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0207] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0208] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0209] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0210] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R34
＝CH3，R ＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0211] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0212] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0213] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0214] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0215] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0216] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0217] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R34
＝CH3；R＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0218] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0219] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0220] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0221] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0222] Z＝(CH2)qW1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0223] Z＝(CH2)q-S-S-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R34
＝CH3；R＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0224] Z＝(CH2)q-N(R3)-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝COCH2(OCH2CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0225] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0226] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0227] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0228] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1；或
[0229] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0230] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1；或
[0231] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1；或
[0232] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1；或
[0233] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0234] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0235] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1；或
[0236] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2，q＝1-3，y＝1；或
[0237] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)n-NH2，q＝1-3，y＝1；或
[0238] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0239] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝4
CH3，R ＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-OH，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0240] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(OH)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0241] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH-异丁基)-CH2-(CH2)n-O-异丁基，n＝0-6，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0242] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0243] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-His，n＝0-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0244] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0245] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝H，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0246] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH2；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0247] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-C(＝O)-精胺；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5；或
[0248] Z＝(CH2)q-O-(CH2)q，W1＝W2＝-CH2-B-CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝CH2(CH2)m-NH-(C＝O)-氨基酸侧链；m＝1-6，q＝1-3，y＝1，其中B选自以下基团：-O(CH2)i、-S(CH2)i、-S-S(CH2)i、-SO2-(CH2)i，i＝1-5。
[0249] 在一些实施例中，式(I)化合物是以下化合物，其中：
[0250] R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O，W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；
[0251] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0；
[0252] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，y＝0；
[0253] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0；或
[0254] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2；y＝0。
[0255] 在其它实施例中，式(I)化合物是以下化合物，其中：
[0256] R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O，W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；或
[0257] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0。
[0258] 在其它实施例中，式(I)化合物是以下化合物，其中：
[0259] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-NH2，n＝0-6，y＝0；或
[0260] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3；R4＝(CH2)m(CH-OH)(CH2)m-NH2；y＝0。
[0261] 在其它实施例中，式(I)化合物是以下化合物，其中：
[0262] R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O，W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；
[0263] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0；或
[0264] W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R2＝C8-C22烷基，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-精胺，y＝0。
[0265] 在一些实施例中，转染剂包含来自式I的至少一种或多种阳离子脂质并且还可任选地含有一种或多种中性脂质；DOPE、DPhPE、饱和和不饱和DPPE、饱和和不饱和DMPE、胆固醇、DOPC、Lyso-PE(1-酰基-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、Lyso-PC(1-酰基-3-羟基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)、3-烷基氧基-2-羟基-1-乙酰酰氨基丙烷、4-烷基氧基-3-羟基-1-乙酰酰氨基丙烷、5-烷基氧基-4-羟基-1-乙酰酰氨基丙烷或6-烷基氧基-5-羟基-1-乙酰酰氨基丙烷。在一些实施例中，在以上清单中的烷基氧基选自由以下组成的群组：肉豆蔻基氧基、亚肉豆蔻基氧基月桂基氧基、棕榈基氧基、棕榈油基氧基、油基氧基和硬脂基氧基。在一些实施例中，转染剂含有溶血-磷脂酰胆碱、鞘磷脂、二饱和磷脂酰胆碱、饱和和不饱和磷脂酰胆碱、二饱和磷脂酰乙醇胺、饱和和不饱和磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰环己六醇、溶血-双磷脂酸、胆固醇和二甘油酯。辅助脂质可包括完整的核外体溶液，自核外体分离的脂质的总提取物。
[0266] 在其它实施例中，转染剂包含式I的至少一种或多种阳离子脂质。在某些实施例中，转染剂任选地包含阳离子脂质中的一种或多种，而在其它实施例中，转染剂任选地包含一种或多种中性脂质或一种或多种核外体、或核外体的脂质提取物。在某些实施例中，转染剂包含一种或多种阳离子脂质和一种或多种中性脂质。
[0267] 在一些实施例中，阳离子脂质选自由以下组成的群组：GeneInTM(MTI-GlobalStem)、TransfeXTM(ATCC)、LipofectAmineTM2000、LipofectAmine 3000、
TM
LipofectAmine 、 DMRIE-C、 (英杰(Invitrogen))、
(英杰)、 (英杰)、 (普洛麦格(Promega))、
HD(普洛麦格)、 (普洛麦格)、 (普洛麦格)、 (普洛麦
格)、 (普洛麦格)、DNA-In(MTI-GlobalStem)、TransfectinTM(加利福尼亚州埃库莱
TM
斯的伯乐(BioRad,Hercules,CA))、SilentFect (伯乐)、 (加利福尼亚州巴伦西
亚的凯杰(Qiagen,Valencia,CA))、DC-chol(Avanti Polar Lipids)、 (加利
福尼亚州圣地亚哥的基因治疗系统(Gene Therapy Systems,San Diego,CA))、DharmaFect(科罗拉多州拉斐特的达尔马肯(Dharmacon,Lafayette,CO))、DharmaFect (达尔马
肯)、DharmaFect (达尔马肯)、DharmaFect (达尔马肯)、EscortTMIII(密苏里州圣路易斯的西格玛(Sigma,St.Louis,MO))、EscortTMIV(西格玛)、ViaFectTM(普洛麦格)、DOTMA、DOTAP、DMRIE、DC-Chol、DDAB、DOSPA、DOSPER、DOGS、TMTPS、TMTOS、TMTLS、TMTMS、TMDOS、N-1-二甲基-N-1-(2,3-二元油酰基氧基丙基)-2-羟基丙烷-1,3-二胺、N-1-二甲基-N-1-(2,3-二元肉豆蔻基氧基丙基)-2-羟基丙烷-1,3-二胺、N-1-二甲基-N-1-(2,3-二元棕榈基氧基丙基)-2-羟基丙烷-1,3-二胺、N-1-二甲基-N-1-(2,3-二元油酰基-氧基丙基)-2-(3-氨基-
2-羟基丙基氧基)丙烷-1,3-二胺、N-1-二甲基-N-1-(2,3-二元肉豆蔻基氧基丙基)-2-(3-氨基-2-羟基丙基氧基)丙烷-1,3-二胺、N-1-二甲基-N-1-(2,3-二元棕榈基氧基丙基)-2-(3-氨基-2-羟基丙基氧基)丙烷-1,3-二胺、L-精胺-5-羧基-3-(DL-1,2-二棕榈酰基-二甲氨基丙基-β-羟乙胺、3,5-(N,N-二-己二胺酰基)-二氨基苄酰基-甘氨酰基-3-(DL-1,2-二棕榈酰基-二-甲基氨基丙基-β-羟乙胺)、L-赖氨酸-双(O,O'-油酰基-β-羟乙基)-酰胺二氢氯化物、L-赖氨酸-双-(O,O'-棕榈酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、1,4-双[(3-(3-氨丙基)-烷氨基)-2-羟丙基)哌嗪、L-赖氨酸-双-(O,O'-肉豆蔻酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、L-鸟氨酸-双-(O,O'-肉豆蔻酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、L-鸟氨酸-双-(O,O'-油酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、1,4-双[(3-(3-氨丙基)-油基氨基)-2-羟丙基]哌嗪、L-鸟氨酸-双-(O,O'-棕榈酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、1,4,-双[(3-氨基-2-羟丙基)-油基氨基]-丁烷-2,3-二醇、1,4,-双[(3-氨基-2-羟丙基)-棕榈基氨基]-丁烷-2,3-二醇、1,
4,-双[(3-氨基-2-羟丙基)-肉豆蔻基氨基]-丁烷-2,3-二醇、1,4-双[(3-油基氨基)丙基]哌嗪、L-精氨酸-双-(O,O'-油酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、双[(3-(3-氨丙基)-肉豆蔻基氨基)2-羟丙基]哌嗪、L-精氨酸-双-(O,O'-棕榈酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、L-丝氨酸-双-(O,O'-油酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、1,4-双[(3-(3-氨丙基)-棕榈氨基)-
2-羟丙基]哌嗪、甘氨酸-双-(O,O'-棕榈酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、肌氨酸-双-(O,O'-棕榈酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、L-组氨酸-双-(O,O'-棕榈酰基-β-羟乙基)酰胺二氢氯化物、胆固醇基-3β-羧基-酰氨基亚乙基三甲基碘化铵、1,4-双[(3-肉豆蔻基氨基)丙基]-哌嗪、碘化1-二甲氨基-3-三甲铵基-DL-2-丙基-胆固醇基甲酸酯、胆固醇基-3β-羧基酰氨基亚乙基胺、胆固醇基-3β-氧基琥珀酰氨基亚乙基三甲基碘化铵、碘化1-二甲氨基-
3-三甲基铵基-DL-2-丙基-胆固醇基-3β-氧基琥珀酸酯、碘化2-[(2-三甲基铵基)-乙基甲基氨基]乙基-胆固醇基-3β-氧基琥珀酸酯、3β[N-(N',N'-二甲基氨基乙烷)氨基甲酰基]-胆固醇和3β-[N-(聚乙二亚胺)-氨基甲酰基]胆固醇、1,4-双[(3-棕榈氨基)丙基]哌嗪、L-鸟氨酰基甘氨酰基-N-(1-十七烷基十八烷基)甘氨酸-酰胺、N2,N5--双(3-氨丙基)-L-鸟氨酰基甘氨酰基-N-(1-十七烷基十八烷基)甘氨酸-酰胺、1,4-双[(3-(3-氨基-2-羟丙基)-烷氨基)-2-羟丙基]哌嗪N2-[N2,N5--双(3-氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二十八烷基-L-谷氨酰胺、N2-[N2,N5--双(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二十八烷基-L-α-谷氨酰胺、1,4-双[(3-(3-氨基-2-羟丙基)-油基氨基)2-羟丙基]哌嗪、N2-[N2,N5-双(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二十八烷基-L-α-天冬酰胺、N-[N2-[N2,N5-双[(1,1-二甲基乙氧基)-羰基]-N2,N5-双[3-[(1,
1-二甲基乙氧基)羰基]氨丙基]-L-鸟氨酰基-N-N-二十八烷基-L-谷酰胺酰基]-L-谷氨酸、
2 2 5 2 2 5
N-[N ,N-双(3-氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N,N-二油基-L-谷氨酰胺、N-[N ,N -双(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二油基-L-α-谷氨酰胺、4-双[(3-(3-氨基-2-羟丙基)-肉豆蔻基氨基)-
2-羟丙基]哌嗪、N2-[N2,N5-双(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二油基-L-α-天冬酰胺、N-[N2-[N2,N5-双[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-N2,N5-双[3-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-氨丙基]-L-鸟氨酰基-N-N-二油基-L-谷酰胺酰基]-L-谷氨酸、1,4-双[(3-(3-氨丙基)-油基氨基)丙基]哌嗪、N2-[N2,N5-双(3-氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N,N-二棕榈基-L-谷氨酰胺、N2-[N2,N5-双(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二棕榈基-L-α-谷氨酰胺、N2-[N2,N5-双(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二棕榈基-L-α-天冬酰胺、N-[N2-[N2,N5-双[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-N2,N5-双[3-[(1,1-二甲基乙氧基)-羰基]氨丙基]-L-鸟氨酰基-N-N-二棕榈基-L-谷酰胺酰基]-L-谷氨酸、N2-[N2,N5-双(3-氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N,N-二肉豆蔻基-L-谷氨酰胺、N2-[N2,N5-双-(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二肉豆蔻基-L-α-谷氨酰胺、N2-[N2,N5-双(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二肉豆蔻基-L-α-天冬酰胺、1,4-双[(3-(3-氨基-2-羟丙基)-棕榈氨基)-2-羟丙基]哌嗪、N-[N2-[N2,N5-双[(1,1-二甲基乙氧基)-羰基]-N2,N5-双[3-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨丙基]-L-鸟氨酰基-N-N-二肉豆蔻基-L-谷酰胺酰基]-L-谷氨酸、1,4-双[(3-(3-氨丙基)-肉豆蔻基氨基)-丙基]哌嗪、N2-[N2,N5-双(3-氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N,N-二月桂基-L-谷氨酰胺、N2-[N2,N5-双(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二月桂基-L-α-谷氨酰胺、N2-[N2,N5-双(氨丙基)-L-鸟氨酰基]-N-N-二月桂基-L-α-天冬酰胺、N-[N2-[N2,N5-双[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-N2,N5-双[3-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-丙基]-L-鸟氨酰基-N-N-二月桂基-L-谷酰胺酰基]-L-谷氨酸、3-[N',N"-双(2-叔丁基氧基羰基氨基乙基)胍基]-N,N-二十八烯-9-基丙酰胺、3-[N',N"--双(2-叔丁基氧基羰基氨基乙基)胍基-N,N-二棕榈基丙酰胺、3-[N',N"-双(2-叔丁基氧基羰基氨基乙基)胍基]-N,N-二肉豆蔻基丙酰胺、1,4-双[(3-(3-氨丙基)-棕榈基氨基)丙基]哌嗪、1,4-双[(3-(3-氨基-2-羟丙基)-油基氨基)丙基]哌嗪、N,N-(2-羟基-3-氨丙基)-N-2-羟丙基-3-N,N-二油基氨基丙烷、N,N-(2-羟基-3-氨丙基)-N-2-羟丙基-3-N,N-二棕榈基氨基丙烷、N,N-(2-羟基-3-氨丙基)-N-2-羟丙基-3-N,N-二肉豆蔻基氨基丙烷、1,4-双[(3-(3-氨基-2-羟丙基)-肉豆蔻基氨基)丙基]哌嗪、[(3-氨丙基)-双-(2-十四烷基氧基乙基)]甲基溴化铵、[(3-氨丙基)-双-(2-油基氧基乙基)]甲基溴化铵、[(3-氨丙基)-双-(2-棕榈基氧基乙基)]甲基溴化铵、油酰基-2-羟基-3-N,N-二甲基氨基丙烷、2-二癸酰基-1-N,N-二甲基氨基-丙烷、棕榈酰基-2-羟基-3-N,N-二甲基氨基丙烷、1,2-二棕榈酰基-1-N,N-二甲基氨基丙烷、肉豆蔻酰基-2-羟基-3-N,N-二甲基氨基丙烷、1,2-二肉豆蔻酰基-1-N,N-二甲基氨基丙烷、(3-氨基-丙基)->4-(3-氨基-丙基-氨基)-4-十四烷基氨基甲酰基-丁基氨基甲酸胆固醇酯、(3-氨基-丙基)->4-(3-氨基-丙氨基-4-氨基甲酰基丁基氨基甲酸胆固醇酯、(3-氨基-丙基)->4-(3-氨基-丙氨基)-4-(2-二甲基氨基-乙基氨基甲酰基)-丁基氨基甲酸胆固醇酯、精胺-5-羧基甘氨酸(N'-硬脂基-N'-油基)酰胺四三氟乙酸盐、精胺-5-羧基甘氨酸(N'-硬脂基-N'-反油基)酰胺四三氟乙酸盐、胍丁胺基(Agmatinyl)羧基胆固醇乙酸盐、精胺-5-羧基-β-丙氨酸胆固醇酯四三氟乙酸盐、2,6-二氨基己酰基β-丙胺酸胆固醇酯双三氟乙酸盐、2,4-二氨基丁酰基β-丙氨酸胆固醇酯双三氟乙酸盐、N,N-双(3-氨丙基)-3-氨基丙酰基β-丙氨酸胆固醇酯三三氟乙酸盐、[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙基]氨基羧基胆固醇酯、硬脂基肉碱酯、棕榈基肉碱酯、肉豆蔻基肉碱酯、氯化硬脂基硬脂酰基肉碱酯盐、L-硬脂基硬脂酰基肉碱酯、氯化硬脂基油酰基肉碱酯、氯化棕榈基棕榈酰基肉碱酯、氯化肉豆蔻基肉豆蔻酰基肉碱酯、氯化L-肉豆蔻基肉豆蔻酰基肉碱酯、1,4-双[(3-(3-氨基-2-羟丙基)-棕榈基氨基)-丙基]哌嗪、溴化N-(3-氨丙基)-N,N'-双-(十二烷基氧基乙基)-哌嗪鎓、溴化N-(3-氨丙基)-N,N'-双-(油基氧基乙基)-哌嗪鎓、溴化N-(3-氨丙基)-N,N'-双-(棕榈基氧基乙基)-哌嗪鎓、溴化N-(3-氨丙基)-N,N'-双-(肉豆蔻基氧基乙基)-哌嗪鎓、溴化N-(3-氨丙基)-N'-甲基-N,N'-(双-2-十二烷基氧基乙基)-哌嗪鎓、溴化N-(3-氨丙基)-N’-甲基-N,N'-(双-2-油基氧基乙基)-哌嗪鎓、溴化N-(3-氨丙基)-N'-甲基-N,N'-(双-2-棕榈基氧基乙基)-哌嗪鎓、溴化N-(3-氨丙基)-N'-甲基-N,N'-(双-2-肉豆蔻基氧基乙基)-哌嗪鎓、1,4-双[(3-(3-氨丙基)-油基氨基)-2-羟基-丙基]哌嗪、1,4-双[(3-(3-氨丙基)-肉豆蔻基氨基)-2-羟基-丙基]哌嗪，或1,
4-双[(3-(3-氨丙基)-棕榈氨基)-2-羟基-丙基]哌嗪、3-烷基氧基-2-羟基-1-组氨酰基酰氨基丙烷、3-烷基氧基-2-羟基-1-氨基丙烷、4-烷基氧基-3-羟基-1-组氨酰基酰氨基丙烷、
4-烷基氧基-3-羟基-1-氨基丙烷、5-烷基氧基-4-羟基-1-组氨酰基酰氨基丙烷、5-烷基氧基-4-羟基-1-氨基丙烷、6-烷基氧基-5-羟基-1-组氨酰基酰氨基丙烷、6-烷基氧基-4-羟基-1-氨基丙烷；2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-羧基精胺酰氨基)-氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-组氨酸基酰氨基)氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-精氨酰基酰氨基)氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-赖氨酰基酰氨基)氨基丁烷、2,
3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N'-鸟氨酰基-酰氨基)氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-丝氨酰基酰氨基)氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-高丝氨酰基酰氨基)氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-(二氨丁基)酰氨基)氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,
4-双(N-甲基-N-(二-氨丙基)酰氨基)氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-(2-羟丙基-胺))氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,4-双(N-甲基-N-(2-二氨丙基))氨基丁烷、2,3-二烷氧基-1,4-和双(N-甲基-N-丙胺)氨基丁烷。在以上清单中的烷氧基可为肉豆蔻基氧基、亚肉豆蔻基氧基月桂基氧基、棕榈基氧基、棕榈油基氧基、油基氧基和硬脂基氧基。
[0268] 在一些实施例中，转染剂含有溶血-磷脂酰胆碱、鞘磷脂、二饱和磷脂酰胆碱、饱和和不饱和磷脂酰胆碱、二饱和磷脂酰乙醇胺、饱和和不饱和磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰环己六醇、溶血-双磷脂酸、胆固醇和二甘油酯。辅助脂质可包括完整的核外体溶液，自核外体分离的脂质的总提取物。辅助脂质可以配制成如脂质粒子的核外体，使得溶血-磷脂酰胆碱为总脂质含量的3.75到6.21％，鞘磷脂、神经鞘氨醇或神经酰胺为总脂质含量的8.26到12.41％，二饱和磷脂酰胆碱为总脂质含量的3.00到4.81％，磷脂酰乙醇胺混合物为总脂质含量的12.00到19.22％，磷脂酰丝氨酸为5.17到6.89％，磷脂酰环己六醇为5.17到
6.89％，二饱和磷脂酰乙醇胺为2.61到2.85％，磷脂酰乙醇胺混合物为13.42到14.65％，胆固醇为13.01到16.61％，二甘油酯为4.76到7.05％且阳离子脂质可以为此类配制物中的剩余百分比。阳离子脂质可以被鞘磷脂、神经鞘氨醇或神经酰胺取代或与其组合使用。取决于细胞类型，辅助脂质的组合物百分比可以用各种转染增强剂调节以最优化合成核外体的配制物。
[0269] 当组合物含有中性脂质时，所述脂质为饱和或不饱和，或混合酰基磷脂酰乙醇胺(PE)或磷脂酰胆碱(PC)(例如DOPE、DPhPE、饱和和不饱和DPPE、饱和和不饱和DMPE、胆固醇、DOPC、Lyso-PE(1-酰基-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、Lyso-PC(1-酰基-3-羟基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)、3-烷基氧基-2-羟基-1-乙酰酰氨基丙烷、4-烷基氧基-3-羟基-1-乙酰酰氨基丙烷、5-烷基氧基-4-羟基-1-乙酰酰氨基丙烷或6-烷基氧基-5-羟基-1-乙酰酰氨基丙烷)。在以上清单中的烷基氧基可为肉豆蔻基氧基、亚肉豆蔻基氧基月桂基氧基、棕榈基氧基、棕榈油基氧基、油基氧基或硬脂基氧基。在一些实施例中，转染剂可含有这些中性脂质或核外体、来自核外体的脂质或来自核外体组合物的总脂质提取物中的超过一种。
[0270] 在其它实施例中，转染剂包含至少一种多元胺部分。合适的多元胺包括致密星形树枝状大分子、PAMAM树枝状大分子、NH3核心树枝状大分子、乙二胺核心树枝状大分子、5代或更高的树枝状大分子、具有取代基团的树枝状大分子、具有一种或多种氨基酸的树枝状大分子、接枝树枝状大分子、激活树枝状大分子、聚乙烯亚胺和聚乙烯亚胺共轭物、聚阳离子肽，如聚赖氨酸、聚鸟氨酸、聚组氨酸、聚精氨酸。
[0271] 在其它实施例中，含有粘附肽序列的细胞表面配体共轭到核酸结合基团。在这些实施例的一些中，核酸结合基团键联到多元胺或肽核酸。多元胺任选地包含至少一种精胺部分。
[0272] 含有衍生自细胞粘附蛋白的粘附肽序列的合适的细胞表面配体包括但不限于选自如阐述于下表1或序列表中的SEQ ID NO:202-503组成的群组的序列。
[0273] 在一些实施例中，SEQ ID NO:202-503的肽任选地键联到核酸结合部分、辅助脂质、阳离子脂质、阳离子聚合物、GPI锚肽或与转染复合物缔合的其它化学部分。
[0274] 在一些实施例中，SEQ ID NO:202-500的肽与其它表面配体(如来自噬菌体呈现的抗体、抗体片段、单链抗体、适体或肽)一起使用。在某些实施例中，这些表面配体任选地附接到核酸结合部分、脂质或脂质缔合部分。
[0275] 在特定实施例中，转染剂包含至少一种阳离子脂质，并且还任选地含有与一种或多种中性和/或辅助脂质、靶向部分、细胞渗透剂、融合剂和亲溶酶体剂的各种组合。
[0276] 在一些实施例中，本发明所公开的复合物包含一种更多种选自以下组成的群组的试剂：促融剂、核定位序列、细胞渗透剂、转运肽、受体-配体或细胞粘附肽。
[0277] 应理解，虽然在一种特定用途的上下文中本文公开一些肽，但是本发明所公开的所有肽同样可用于其它用途。因此，仅借助于实例，公开SEQ ID NO:1-41的肽为核定位肽。然而，这些肽可用作核酸结合肽、核酸缩合肽、转染增强剂。
[0278] 在具体实施例中，含有粘附肽序列的细胞表面配体共价键联到转染剂、阳离子脂质、中性脂质、辅助脂质、与脂质或脂质体和/或多元胺缔合的化学基团。
[0279] 在具体实施例中，植物病毒移动蛋白或衍生自植物病毒移动蛋白的肽共价键联到转染剂、阳离子脂质、中性脂质、辅助脂质、与脂质或脂质体和/或多元胺缔合的化学基团。
[0280] 在其它实施例中，植物病毒移动蛋白或衍生自植物病毒移动蛋白的肽共轭到核酸结合基团。在这些实施例的一些中，核酸结合基团键联到多元胺或肽核酸。多元胺任选地包含至少一种精胺部分。
[0281] 合适的病毒移动蛋白和衍生自植物病毒移动蛋白的肽序列包括但不限于选自如阐述于下表1或序列表中的SEQ ID NO:506-580组成的群组的序列。
[0282] 在一些实施例中，SEQ ID NO:506-580的肽任选地键联到核酸结合部分、辅助脂质、阳离子脂质、阳离子聚合物、GPI锚肽或与转染复合物缔合的其它化学部分。
[0283] 在一些实施例中，SEQ ID NO:506-580的肽与其它表面配体(如来自噬菌体呈现的抗体、抗体片段、单链抗体、适体或肽)一起使用。在某些实施例中，这些表面配体任选地附接到核酸结合部分、脂质或脂质缔合部分。
[0284] 在特定实施例中，转染剂包含至少一种阳离子脂质，并且还任选地含有与一种或多种中性和/或辅助脂质、靶向部分、表面配体、融合剂和亲溶酶体剂的各种组合。
[0285] 在一些实施例中，本发明所公开的复合物包含一种更多种选自以下组成的群组的试剂：促融剂、细胞渗透剂、核定位序列、转运肽、植物移动蛋白或自其衍生的肽、受体-配体、表面配体或细胞粘附肽。
[0286] 应理解，虽然在一种特定用途的上下文中本文公开一些肽，但是本发明所公开的所有肽同样可用于其它用途。因此，仅借助于实例，公开SEQ ID NO:1-41的肽为核定位肽。然而，这些肽可用作核酸结合肽、核酸缩合肽、转染增强剂。
[0287] 在另一个方面，本文公开的是含有如本文所描述的复合物和医药学上可接受的载剂的药物组合物。
[0288] 在另一个方面，本文公开的是通过使细胞与如本文所描述的复合物接触转染细胞的方法。在一些实施例中，细胞选自由以下组成的群组：原代细胞培养物、传代细胞培养物、悬浮细胞系和附接细胞系。合适的细胞包括所有人类细胞系和所有动物细胞系。在一些实施例中，细胞为血液衍生细胞或细胞为干细胞，而在其它实施例中，细胞为神经元。
[0289] 在一种方法中，使核酸、蛋白质或肽或药物与含有能够与核酸、蛋白质、肽或药物缔合的粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽接触，并且将所得混合物添加到转染剂，然后接触细胞。
[0290] 在转染方法的一个实施例中，含有粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的细胞表面配体与能够与核酸、蛋白质、肽或医药组合物缔合的转染剂接触，随后添加核酸、蛋白质、肽或药物，然后接触细胞。
[0291] 在另一种方法中，含有键联到核酸结合部分的粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的的细胞表面配体与能够与核酸、蛋白质、肽或药物缔合的转染剂接触，随后添加核酸、蛋白质、肽或药物，然后接触细胞。
[0292] 在另一种方法中，含有粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的细胞表面配体与转染剂接触，随后添加融合剂，并且然后与核酸、蛋白质、肽或药物接触，然后接触细胞。
[0293] 在另一种方法中，含有键联到核酸结合部分的粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的细胞表面配体与转染剂接触，随后添加融合剂，并且然后与核酸、蛋白质、肽或药物，然后接触细胞。
[0294] 在另一种方法中，含有粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的细胞表面配体与融合剂接触，随后添加转染剂，并且然后与核酸、蛋白质、肽或药物接触，然后接触细胞。
[0295] 在另一种方法中，含有键联到核酸结合部分的粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的细胞表面配体与融合剂接触，随后添加转染剂，并且然后与核酸、蛋白质、肽或药物接触，然后接触细胞。
[0296] 在另一种方法中，含有键联到核酸结合部分的粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的细胞表面配体与转染剂接触，随后与核酸、蛋白质、肽或药物接触，然后与融合剂接触，并且然后接触细胞。
[0297] 在另一种方法中，含有键联到核酸结合部分的粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的细胞表面配体与含有核外体、或来自核外体的脂质提取物的转染剂接触，随后与核酸、蛋白质、肽或药物接触，然后与融合剂接触，并且然后接触细胞。
[0298] 在另一种方法中，使以下转染增强剂的水溶液与可含有阳离子脂质、辅助脂质、核外体或核外体的总脂质提取物的脂质或此类脂质或脂质粒子的各种混合物的乙醇或水溶液混合：可以任选地含有一种或多种植物病毒移动蛋白、或衍生自键联到核酸结合部分的植物病毒移动蛋白的肽的转染增强剂；可以任选地含有缓冲液的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种细胞表面配体的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种核定位剂的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种细胞渗透肽的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种融合肽或蛋白质的转染增强剂，这些转染增强剂中的全部或一些可以任选地键联到核酸结合域。混合物随后与核酸、蛋白质、肽、核外体、生长增强剂接触，并且随后与细胞接触。
[0299] 在另一种方法中，使以下转染增强剂的乙醇溶液与可含有阳离子脂质、辅助脂质、核外体或核外体的总脂质提取物的脂质或此类脂质或脂质粒子的各种混合物的乙醇或水溶液混合：可以任选地含有一种或多种植物病毒移动蛋白、或衍生自键联到核酸结合部分的植物病毒移动蛋白的肽的转染增强剂；可以任选地含有缓冲液的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种细胞表面配体的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种核定位剂的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种细胞渗透肽的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种融合肽或蛋白质的转染增强剂，这些转染增强剂中的全部或一些可以任选地键联到核酸结合域。混合物随后与核酸、蛋白质、肽、核外体、生长增强剂接触，并且随后与细胞接触。
[0300] 在另一种方法中，使以下转染增强剂的水溶液与可含有阳离子脂质、辅助脂质、核外体或核外体的总脂质提取物的脂质或此类脂质或脂质粒子的各种混合物的乙醇或水溶液混合：可以任选地含有一种或多种植物病毒移动蛋白、或衍生自键联到核酸结合部分的植物病毒移动蛋白的肽的转染增强剂；可以任选地含有缓冲液的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种细胞表面配体的转染增强剂；可以任选地一种或多种核定位剂的转染增强剂；可以任选地含有一种或多种细胞渗透肽的转染增强剂，这些转染增强剂中的全部或一些可以任选地键联到核酸结合域。随后使此混合物与可以任选地处于缓冲液中的一种或多种融合肽或蛋白质接触。随后使混合物与核酸、蛋白质、肽、核外体、生长增强剂接触，并且随后与细胞接触。
[0301] 在另一种方法中，转染复合物与核酸、蛋白质或肽接触，然后与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的细胞表面配体接触，并且然后接触细胞。
[0302] 本领域的技术人员应理解，根据待转染的细胞或体内应用优化各种组分的浓度，所述各种组分如阳离子脂质、辅助脂质、植物病毒蛋白或由其衍生的肽、细胞表面配体、促融剂、核配体、阳离子聚合物、缩合剂、细胞渗透剂、嗜溶酶体剂、核外体或来自核外体的核外体脂质或蛋白、外来体蛋白质衍生的肽和转染增强剂。在一些实施例中，根据溶解度和配制物溶剂，每种组分的浓度在0.001到20mg/mL的范围内。
[0303] 在一些实施例中，本文公开的植物病毒移动蛋白衍生的肽适合用于所公开的转染增强剂中以增强转染到HeLa细胞、HuVec细胞、iPS细胞、NL-1细胞、C2C12细胞、人类成纤维细胞、干细胞、Jurkat细胞、大鼠皮层神经元、THP-1细胞和人类骨骼肌细胞等中。
[0304] 在一些实施例中，适用于增强HeLa细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:107、205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、
352、353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、
383、450、452、454和503，其可以与植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽组合使用。在这些实施例的一些中，适用于增强HeLa细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:205、
237、268、326、328、335、336、342、347、348、352、353、355、357、358、365、367、377、379、381、
450、454和503，其可以与植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽组合使用。在一些实施例中，适用于增强HuVec细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:205、216、218、219、
220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335 
336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、352、353、354、355、357、358、359、
360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、450、452、454和503，其可以与植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽组合使用。一些实施例中，适用于增强HuVec细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:236、358、373，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。
[0305] 在一些实施例中，适用于增强NL-1iPS细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:107、205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、
256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、
351、352、353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、
381、383、450、452、454和503，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。在这些实施例的一些中，适用于增强NL-1iPS细胞的转染转染肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:216、224、226、236、236、323、327、341、343、347、348、349、
350、351、354、358、360、373、383、450、454和503，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。
[0306] 在一些实施例中，适用于增强C2C12细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、350、351、352、353、
354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、450、
452、454、501、502和503，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。在这些实施例的一些中，适用于增强C2C12细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:218、230、237、239、256、323、326、328、335、336、342、343、345、347、
348、352、357、359、367、375、379、381、450、452、454、501、502和503，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。
[0307] 在一些实施例中，适用于增强人类成纤维细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、
352、353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、
383、450、452、454、501和503，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。在这些实施例的一些中，适用于增强人类成纤维细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:205、218、219、229、230、335、336、342、344、348、349、
350、351、353、355、357、361、367、369、375、379、381、450、454、501和503，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。
[0308] 在一些实施例中，适用于增强Jurkat细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:205、216、218、219、220、224、226、229、230、234、236、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、335、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、352、
353、354、355、357、358、359、360、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、
450、452、454、501和503，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。在这些实施例的一些中，适用于增强Jurkat细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:218、349、358，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。
[0309] 在一些实施例中，适用于增强大鼠皮层神经元细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:220、236、238、323、327、336、338、341、343、347、348、350、351、352、354、367、369、373、375、377和454，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。
[0310] 在一些实施例中，适用于增强THP-1细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:219、229、230、239、323、328、332、341、343、350、351、357、358、375、450和454，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。
[0311] 在一些实施例中，适用于增强人类骨骼肌细胞的转染的肽选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:218、219、230、328、336、344、350、351、353、355、365和375，其可以与含有粘附肽、植物病毒移动蛋白或由其衍生的肽的细胞表面配体组合使用。
[0312] 在一些实施例中，对于给定细胞类型具有偏好的不同表面配体的组合混合在一起以靶向在单一配制物中的多种细胞类型。
[0313] 在另一个方面，本文公开的是试剂盒，所述试剂盒含有转染剂和肽或蛋白质或经含有如本文所述的粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽的细胞表面配体修饰的肽或修饰的蛋白质。在一些实施例中，试剂盒进一步包含用于制备和使用转染复合物的说明书。在某些实施例中，试剂盒进一步包含用于各种组分的单独隔室。在某些实施例中，转染剂可包含适用于体内或体外转染细胞的选自SEQ ID NO 1-505以及SEQ ID NO506-580的各种肽。
[0314] 实例
[0315] 实例1：细胞配体
[0316] 接种细胞使得在转染当天细胞70％汇合在96孔组织培养液板中。在水中2mg/mL的DOMTA/DOPE脂质溶液(1:1摩尔比)与相等体积的表面配体混合，所述表面配体含有粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽，其具有在肽合成期间共价键联到每个肽的N端或C端的核酸结合部分RRRRRRRRRRRR(SEQ ID NO:109)或KKKKKKKKKKKKKKKK(SEQ ID NO:102)。肽在水中为2mg/mL。DOTMA/DOPE和含有细胞表面配体表面配体肽的溶液在水中经1:1(v/v)稀释，所述细胞表面配体含有粘附肽、植物病毒移动蛋白、或由其衍生的肽。将DOMTA/DOPE/肽溶液添加到0.1mL在OptiMEM中为10μg/mL的质粒DNA溶液(EF1Alpha eGFP质粒)。
[0317] 所有溶液均处于室温下。将0.2mL体积的10μg/mL溶液的DNA等分到非组织培养处理板的每个孔中。分别将1-12μL转染剂添加到DNA溶液。通过上下吸液两次混合转染剂和DNA溶液。持续10分钟形成转染复合物。在10分钟之后，将0.01或0.02mL转染复合物添加到细胞。HuVEC、HeLa、人类成人角化细胞、人类原代成人成纤维细胞和A549细胞均分别接受0.01mL转染复合物。人类骨骼肌细胞、鼠C2C12细胞和Jurkat细胞接受0.02mL转染复合物。
细胞在37℃下于5％CO2下培育42小时。在荧光板读取器上读取板。还用荧光显微镜在显微镜下视觉检查细胞以评定转染程度(根据经转染细胞的百分比)。还可使用其它分析模式，例如用B-牛乳糖或荧光素酶报告质粒的量化。如果板读取器未示出足够的信噪比，那么板针对经转染的细胞进行评分，并且标注示出相比于单独DOTMA提高的那些肽。
[0318] 即使建议表面配体用于将细胞附接到组织培养液板，但是并非全部表面配体都提高转染效率。相比于没有表面配体的脂质DOTMA引起GFP的表达提高的表面配体被视为增强转染，或具有较高经转染细胞百分比被视为增强转染。以粗体标注产生大于2倍增强的肽，并且可通过添加不同转染增强剂进一步优化或可与不同阳离子脂质或聚合物一起使用。
[0319] 下表2-7提供在各种细胞类型下转染增强的结果，同时表8列出通过视觉检查确定的相比于脂质DOTMA增强标示细胞系的转染的肽。
[0320] 对于一些检查的细胞类型，以下序列相比于无肽对照提高转染表达和经转染细胞百分比：SEQ ID NO:205、216、218、219、220、226、229、230、236、237、238、239、256、268、323、326、327、328、332、336、338、341、342、343、344、345、347、348、349、350、351、352、353、354、
355、357、358、359、360、361、365、367、369、373、375、377、379、381、393、450、452、454、501和
503。
[0321] 证实相比于单独DOTMA转染效率提高的各种DOTMA/肽转染剂进一步配制有促融肽(SEQ ID NO:72)。将促融肽添加到DOMTA/肽配制物，以实现0.1mg/mL的最终浓度，以查看转染剂是否通过添加促融肽进一步增强和可提供比可商购的脂染胺2000更高的HeLa细胞转染效率和表达。结果在表9中示出。
[0322] 下表1列出本文中参考的肽序列。
[0323] 表1
[0324]
[0325]
[0326]
[0327]
[0328]
[0329]
[0330]
[0331]
[0332]
[0333]
[0334]
[0335]
[0336]
[0337]
[0338]
[0339] 表2：HeLa细胞转染的相对荧光
[0340]
[0341] *：RF＝相对荧光
[0342] 表3：HuVec细胞转染的相对荧光
[0343]
[0344]
[0345] *：RF＝相对荧光
[0346] 表4：NL-1 iPS细胞转染的相对荧光
[0347]
[0348] *：RF＝相对荧光
[0349] 表5：C2C12细胞转染的相对荧光
[0350]
[0351] *：RF＝相对荧光
[0352] 表6：人类成纤维细胞转染的相对荧光
[0353]
[0354]
[0355] *：RF＝相对荧光
[0356] 表7：Jurkat细胞转染的相对荧光
[0357]
[0358] *：RF＝相对荧光
[0359] 表8：细胞的转染的视觉确认
[0360]
[0361] 表9：与用于HeLa细胞转染的脂染胺2000相比较的DOTMA/SEQ ID NO:72/肽的相对荧光
[0362]
[0363] *：RF＝相对荧光
[0364] 在96孔板的孔中以μL为单位的DOTMA/SEQ ID NO:72/肽的体积
[0365] #：脂染胺2000
[0366] §：没有额外肽的DOTMA和SEQ ID NO:72
[0367] 与DOTMA/SEQ ID NO:72混合的肽
[0368] 实例2：植物移动蛋白
[0369] 接种细胞使得在转染当天细胞70％汇合在96孔组织培养液板中。在水中为2mg/mL的DOMTA/DOPE脂质溶液(1:1摩尔比)与相等体积的植物病毒移动蛋白衍生的肽混合，所述肽具有在肽合成期间共价键联到每个肽的N端或C端的核酸结合部分RRRRRRRRRRRR(SEQ ID NO:109)或KKKKKKKKKKKKKKKK(SEQ ID NO:102)。肽在水中为2mg/mL。DOTMA/DOPE和植物病毒移动肽溶液在水中经1:1(v/v)稀释。将DOMTA/DOPE/肽溶液添加到0.1mL在OptiMEM中为10μg/mL的质粒DNA溶液(EF1Alpha eGFP质粒)。
[0370] 所有溶液均处于室温下。将0.2mL体积的10μg/mL溶液的DNA等分到非组织培养处理板的每个孔中。分别将1-6μL转染剂添加到DNA溶液。通过上下吸液两次混合转染剂和DNA溶液。持续10分钟形成转染复合物。在10分钟之后，将0.01或0.02mL转染复合物添加到细胞。HuVEC、HeLa、人类成人角化细胞、人类原代成人成纤维细胞和A549细胞均分别接受0.01mL转染复合物。人类骨骼肌细胞、鼠C2C12细胞和Jurkat细胞接受0.02mL转染复合物。
细胞在37℃下于5％CO2下培育42小时。在荧光板读取器上读取板。还用荧光显微镜在显微镜下视觉检查细胞以评定转染程度(根据经转染细胞的百分比)。还可使用其它分析模式，例如用B-牛乳糖或荧光素酶报告质粒的量化。如果板读取器未示出足够的信噪比，那么板针对经转染的细胞进行评分，并且标注示出相比于单独DOTMA提高的那些肽。
[0371] 表10：HeLa细胞转染的相对荧光
[0372]
[0373]
[0374] 表11：人类原代成纤维细胞转染的相对荧光
[0375]
[0376] 表12：HuVec细胞转染的相对荧光
[0377]
[0378] 实例3：配制物1
[0379] 配制物1包含如上文所述的阳离子脂质、中性脂质和肽的组合。具体地说，配制物1中所用的阳离子脂质包括DPePE-Sp-OMe和DPB-Arg。这些阳离子脂质是式1化合物，其中：
[0380] DPePE-Sp-OMe＝R1＝R2＝C16H31，X＝O，W1＝H；W2＝CH2-O-P(＝O)(OMe)-O-CH2CH2-NH-C(＝O)-精胺，y＝0；
[0381] DPB-Arg＝W1＝W2＝CH2-N(R3R4)，R1＝R2＝C16H31，X＝O；R3＝CH3，R4＝-C(＝O)-C(NH2)-CH2-(CH2)n-C(＝NH)-NH2，n＝0-6，y＝0。
[0382] 中性脂质包括二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二植烷酰磷脂酰乙醇胺(DPhPE)和3-油基氧基-2-羟基-1-乙酰酰氨基丙烷(HOAP)。
[0383] 阳离子脂质和中性脂质以1:8(阳离子脂质:中性脂质)的比值合并于乙醇中。配制物1通过以0.2:1:1(脂质混合物:水:肽混合物)的比值混合脂质与水和肽获得。具体地说，使用以下肽制备配制物1：
[0384] 肽A：共价键联到SEQ ID NO:109的SEQ ID NO:507(在HEPES中为4.1mg/mL)；
[0385] 肽B：SEQ ID NO:540(在HEPES中为4.1mg/mL)
[0386] 肽C：共价键联到SEQ ID NO:109的SEQ ID NO:350(在HEPES中为4.1mg/mL)；
[0387] 肽D：SEQ ID NO:47(在TRIS中为1mg/mL)。
[0388] 对于配制物1，脂质组分包含莫耳比为0.50:0.50:2.666:2.666:2.666(DPePe-Sp-OMe:DPB-Arg:DOPE:DPhPE:HOAP)的脂质。这翻译为1:8的阳离子脂质:中性脂质。配制物中肽的混合物以按体积计1:2:2:0.5(肽A:肽B:肽C:肽D)的比值存在。
[0389] 实例4：转染
[0390] 人类成人皮肤成纤维细胞获自ScienCell研究实验室(加利福尼亚州卡尔斯巴德)且根据制造商的说明书生长。人类成人角化细胞获自赛默飞世尔科学(ThermoFisher Scientific)且在Keratinocyte-SFM中根据制造商说明书生长。接种细胞从而在转染当天在96孔组织培养处理板中获得约细胞70％汇合。在这些实验中使用绿色荧光蛋白表达质粒。根据制造商的说明书制备用于脂染胺3000的转染复合物。用于形成转染复合物的全部溶液均在室温下用于转染。将1.0、1.5、2.0、3.0、4.0和6.0μL配制物1转染剂等分到含有
0.05mL OptIMEM的非组织培养处理板的每个孔中。将OptiMEM中的0.05mL体积的20μg/mL溶液的DNA等分到含有转染剂等分试样的非组织培养处理板的每个孔中。通过上下吸液两次混合转染剂和DNA溶液。在室温下持续10分钟形成转染复合物。在10分钟之后，将0.01mL转染复合物添加到细胞。细胞在37℃下于5％CO2下培育42小时。在荧光板读取器上读取板。结果展示在表13和14中。还用荧光显微镜在显微镜下视觉检查细胞以评定转染程度(根据经转染细胞的百分比)。还可使用其它分析模式，例如用B-牛乳糖或荧光素酶报告质粒的量化。
[0391] 表13：人类原代成人成纤维细胞的相对荧光
[0392]转染剂体积/孔 配制物1 脂染胺3000 空白
0.1μL 21851 9648 9373
0.15μL 21359 10041 9017
0.2μL 26793 12509 9135
0.3μL 35137 15193 9088
0.4μL 42224 16971 9200
0.6μL 42154 18095 9345
[0393] 表14：人类原代成人角化细胞转染的相对荧光
[0394]转染剂体积/孔 配制物1 脂染胺3000 空白
0.1μL 41003 15028 13843
0.15μL 36375 15981 13820
0.2μL 33300 15538 13674
0.3μL 23132 14780 13412
0.4μL 19578 15176 13987
0.6μL 17126 14934 13704
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