一种制备蜂毒肽的方法
专利汇可以提供一种制备蜂毒肽的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种 蜂毒 肽的分离纯化方法，属于 生物 技术领域。所述 蜂毒肽 为从蜂毒中提取得来的多肽，采用葡聚糖凝胶色谱、 冷冻干燥 ，结合离心、 乙醇 沉淀的分离方法，获得蜂毒肽。本发明的蜂毒肽，得率较高，生产用时短，工艺简单，纯度为 电泳 纯，保持蜂毒肽原有的结构和最高的生理活性，可应用于医药等领域。，下面是一种制备蜂毒肽的方法专利的具体信息内容。
1.一种制备蜂毒肽的方法，步骤如下：
①蜂毒的除杂
将粗蜂毒加入到pH为4.0-5.5的缓冲溶液中，使其浓度为0.5-1.5mg/mL，以2500-
3500r/min离心3-7min去除不溶性的杂质，得上清液；
②蜂毒肽的分离
将①中所得上清液过葡聚糖凝胶G-25柱，用蒸馏水洗脱，流速控制在25-30mL/h，测定各分离组分的分子量，在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2840Da的层析组分经冷冻干燥得固体样品；
③蜂毒肽的纯化
将②中冷冻干燥所得的固体用2-4倍体积的无水乙醇进行溶解，经2500-3500r/min离心4-6min，沉淀物质即为蜂毒肽。
2.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，粗蜂毒是将蜜蜂蛰刺排出的毒液用蒸馏水溶解，经冷冻干燥所得。
3.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液。
4.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，除杂为除去不溶于缓冲溶液的物质。
5.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围，25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克。
6.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相，流动相与固定相作用力比样品弱，样品各组分按先后顺序从固定相洗出。
7.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程，标准品为抗菌肽标准品（Mr =
1422Da）、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。
8.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，Da为蜂毒肽分子量的单位。
9.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，冷冻干燥为将所得组分冷冻至水的冰点以下，并置于高真空(10-40Pa)的容器中，通过供热使物料中的水分直接从固态冰升华为水汽的一种干燥方法。
10.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，沉淀为不溶于无水乙醇的固体物质。
一种制备蜂毒肽的方法
技术领域
背景技术
发明内容
将粗蜂毒加入到pH为4.0-5.5的缓冲溶液中，使其浓度为0.5-1.5mg/mL，以2500-
3500r/min离心3-7min去除不溶性的杂质，得上清液；
所述粗蜂毒是将蜜蜂蛰刺排出的毒液用蒸馏水溶解，经冷冻干燥所得；
所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液；
所述除杂为除去不溶于缓冲溶液的物质。
所述葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围，25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克；
所述洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相，流动相与固定相作用力比样品弱，样品各组分按先后顺序从固定相洗出；
所述分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程，标准品为抗菌肽标准品（Mr =1422Da）、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。
（2）本发明获得蜂毒肽相对于刘岭、杨文超、张文礼、徐彭（1. 刘岭,李昌全,黄雪强.蜂毒素的纯化方法及体外抗肿瘤作用研究.中国生化药物杂质[J].2003,24（4）：16-17 2. 杨文超, 蜂毒肽的分离纯化及其抗辐射作用机理研究[D],福建农林大学,2007. 3.张文礼,孙井元.蜂毒肽的分离提纯方法:中国, 101089017A [P].2007-12-19. 4. 徐彭,欧阳永伟,黄敬耀,张桂英,肖诚,刘波. 从蜂毒中分离纯化蜂毒肽的实验研究.中草药[J]. 2000,
31(12): 892-894.），得率提高到1-2%，制备时间缩短2-3天。
将粗蜂毒加入到pH为4.75的缓冲溶液中，使其浓度为1.0mg/mL，以3000r/min离心5min去除不溶性的杂质，得上清液；
所述粗蜂毒是将蜜蜂蛰刺排出的毒液用蒸馏水溶解，经冷冻干燥所得；
所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液；
所述除杂为除去不溶于缓冲溶液的物质。
所述葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围，25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克；
所述洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相，流动相与固定相作用力比样品弱，样品各组分按先后顺序从固定相洗出；
所述分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程，标准品为抗菌肽标准品（Mr =1422Da）、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。
将粗蜂毒加入到pH为5.25的缓冲溶液中，1.5mg/mL，以3200r/min离心6min去除不溶性的杂质，得上清液；
所述粗蜂毒是将蜜蜂蛰刺排出的毒液用蒸馏水溶解，经冷冻干燥所得；
所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液；
所述除杂为除去不溶于缓冲溶液的物质。
所述葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围，25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克；
所述洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相，流动相与固定相作用力比样品弱，样品各组分按先后顺序从固定相洗出；
所述分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程，标准品为抗菌肽标准品（Mr =1422Da）、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。
将粗蜂毒加入到pH为4.5的缓冲溶液中，0.5mg/mL，以2800r/min离心4min去除不溶性的杂质，得上清液；
所述粗蜂毒是将蜜蜂蛰刺排出的毒液用蒸馏水溶解，经冷冻干燥所得；
所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液；
所述除杂为除去不溶于缓冲溶液的物质。
所述葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围，25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克；
所述洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相，流动相与固定相作用力比样品弱，样品各组分按先后顺序从固定相洗出；
所述分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程，标准品为抗菌肽标准品（Mr =1422Da）、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。
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