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蛇附子在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用

阅读：1031发布：2020-09-10

专利汇可以提供蛇附子在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种蛇附子在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用，本发明应用中药蛇附子治疗畜禽病毒性传染病，特别是鸡新城疫、鸡法氏囊病、鸡传染性支气管炎、猪蓝耳病与圆环病毒混合感染，疗效高，副作用小，为临床治疗畜禽病毒性传染病提供了一种新的选择。，下面是蛇附子在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用专利的具体信息内容。

权利要求

1.蛇附子在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用，所述的畜禽病毒性传染病为鸡法氏囊病、猪蓝耳病与圆环病毒混合感染；所述的蛇附子包括蛇附子生药材、蛇附子提取物、蛇附子炮制品或以蛇附子为活性成分的制剂。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的蛇附子提取物为水或有机溶剂提取物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的有机溶剂为乙醇或甲醇。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的有机溶剂为质量百分比浓度为
75%～85%乙醇或甲醇。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的制剂为蛇附子生药材或其提取物直接粉碎制成散剂或加入药学上可接受的辅料制成口服制剂或注射剂。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述口服制剂为合剂、片剂或口服液。

说明书全文

蛇附子在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及蛇附子及其提取物在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用。

背景技术

[0002] 随着社会经济的发展，人们对畜禽产品的质量要求越来越高，畜禽传染病对养殖业危害很大。对于病毒性传染病，抗生素、磺胺类药物无治疗作用，虽然金刚烷胺、利巴韦林、阿昔洛韦等少数药物，具有一定疗效，但抗病毒谱窄、毒副作用大、价格高昂、且易产生耐药毒株。因此，寻求新型抗病毒药物迫在眉睫。

[0003] 蛇附子又叫三叶青，为葡萄科植物三叶崖爬藤Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg的块根，多年生长绿草质藤本。产于浙江、江西、湖南、湖北、福建、广东、广西和云南等地，具有清热解毒、祛风活血的功效。常用于高热惊厥、肺炎、咳喘、肝炎、肾炎、风湿痹痛、跌打损伤、痈疔疮疖等证，还有提高机体细胞免疫功能的作用。

[0004] 迄今，尚未见有蛇附子防治畜禽病毒性传染病的报道。

发明内容

[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供蛇附子在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用。

[0006] 本发明的技术问题是通过以下技术方案实施的：

[0007] 蛇附子在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中应用，所述的畜禽病毒性传染病可为鸡新城疫、鸡法氏囊病、鸡传染性支气管炎、猪蓝耳病与圆环病毒混合感染。前述蛇附子不仅仅指蛇附子生药材本身，还包括蛇附子炮制品、蛇附子提取物，以蛇附子为活性成分的制剂或以蛇附子为活性成分之一的制剂，优选为蛇附子提取物或以蛇附子为活性成分的制剂。

[0008] 本发明蛇附子提取物为蛇附子水或有机溶剂提取物，可采用二氧化碳超临界萃取法、渗漉、煎煮、加热回流等常规技术进行提取得到的提取物。所述的有机溶剂是指乙醇、甲醇等不同极性的溶剂，优选采用质量百分比浓度为75%～85%的乙醇或甲醇。

[0009] 水提取物优选按照如下方法制备得到：

[0010] 取蛇附子，按药材重量的5～20倍加水浸泡后，煎煮1~4次，每次1~3h，合并煎煮液，脱水浓缩至稠膏状烘干即得蛇附子提取物。

[0011] 有机溶剂提取物优选按照如下方法制备得到：

[0012] 取蛇附子，粉碎，按药材重量的5～20倍重量的75%～85%乙醇或甲醇（质量百分比浓度）浸泡1~4小时后，渗漉，回收乙醇或甲醇，浓缩至稠膏状,低温减压烘干,得到提取物。

[0013] 蛇附子生药材或其提取物可直接粉碎制成散剂，或加入药学上可接受的辅料采用常规方法制成口服制剂或注射剂。所述口服制剂优选为合剂、片剂或口服液。

[0014] 中等家畜（如猪、羊等）每次服用蛇附子折合生药材为5～12g，日服两次，家禽用量是中等家畜的1/10～1/5。

[0015] 本发明的有益效果：发明人以蛇附子或其提取物治疗鸡新城疫、鸡法氏囊病、鸡传染性支气管炎、猪伪狂犬病、猪蓝耳病与圆环病毒混合感染等畜禽病毒性传染病，疗效确实稳定。本发明提供了蛇附子用于制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用，为临床治疗畜禽病毒性传染病提供了一种新的选择。

具体实施方式

[0016] 以下通过实例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

[0017] 下面就本发明的临床效果进一步说明本发明的疗效：

[0018] 一、蛇附子鸡胚接种抗新城疫病毒和伪狂犬病病毒试验

[0019] 1、药品：

[0020] （1）蛇附子样品1：按照实施例1方法制备得到，用生理盐水配成每mL药液含1g生药的浓度。

[0021] （2）蛇附子样品2：按照实施例2方法制备得到，用生理盐水配成每mL药液含1g生药的浓度。

[0022] （3）蛇附子样品3：按照实施例10方法制备得到。

[0023] （4）西药对照药：50mg/mL利巴韦林溶液。

[0024] 2、鸡新城疫毒株由江苏畜牧兽医职业技术学院预防兽医教研室提供，鸡胚尿囊液的HA效价9log2，经测定，最小致死量为1:3000万倍稀释。

[0025] 3、伪狂犬病毒株容A株AV25伪狂犬病毒株，由中国兽医监察所提供，最小致死量为1：50倍稀释。

[0026] 4、SPF试验鸡胚购自山东实验鸡场。

[0027] 5、试验分组SPF鸡胚144个，具体分组情况见表1、表2。

[0028] 6、试验方法

[0029] （1）药物毒性实验将蛇附子样品1、蛇附子样品2和蛇附子样品3分别用生理盐水稀释，将原液及不同浓度的药液分别接种于3只10日龄鸡胚的尿囊腔中，每只0.2mL，置37.5℃温箱孵育72h，每天观察存活情况，鸡胚全部存活的最高药液浓度为正式实验起始浓度，同时设生理盐水对照组，药物对鸡胚毒性实验结果见表3。

[0030] 表1鸡新城疫实验组情况

[0031]编号组别数量(枚) 处理
1 试验I组 12 蛇附子样品10.2mL,鸡新城疫病毒尿囊液0.1mL
2 试验II组 12 蛇附子样品20.2mL,鸡新城疫病毒尿囊液0.1mL
3 试验III组 12 蛇附子样品30.2mL,鸡新城疫病毒尿囊液0.1mL
4 试验IV组 12 利巴韦林注射液0.2mL,鸡新城疫病毒尿囊液0.1mL
5 阳性对照组 12 接种病毒尿囊液，按试验量给生理盐水
6 空白对照组 12 不接种、不给药

[0032] 表2伪狂犬病实验组情况

[0033]编号组别数量(枚) 处理
1 试验I组 12 蛇附子样品10.2mL,伪狂犬病毒尿囊液0.1mL
2 试验II组 12 蛇附子样品20.2mL,伪狂犬疫病毒尿囊液0.1mL
3 试验III组 12 蛇附子样品30.2mL,伪狂犬疫病毒尿囊液0.1mL
4 试验IV组 12 利巴韦林注射液0.2mL,伪狂犬病毒尿囊液0.1mL
5 阳性对照组 12 接种病毒尿囊液，按试验量给生理盐水
6 空白对照组 12 不接种、不给药

[0034] 表3中药对鸡胚毒性实验结果（n=4）

[0035]

[0036] *分母为接种胚数，分子为存活胚数。

[0037] （2）具体方法：

[0038] ①新城疫实验组

[0039] 试验I组每个鸡胚尿囊腔同时接种蛇附子样品1原液0.2mL，新城疫病毒稀释液0.1mL。

[0040] 试验Ⅱ组每个鸡胚尿囊腔同时接种蛇附子样品2原液0.2mL，新城疫病毒稀释液0.1mL。

[0041] 试验III组每个鸡胚尿囊腔同时接种蛇附子样品3原液0.2mL，新城疫病毒稀释液0.1mL。

[0042] 试验IV组每个鸡胚尿囊腔同时接种50mg/mL的利巴韦林0.2mL，新城疫病毒稀释液0.1mL。

[0043] 阳性对照组每个鸡胚尿囊腔同时接种生理盐水0.2mL，新城疫病毒稀释液0.1mL。

[0044] 空白对照组不接种病毒，不给药。

[0045] ②伪狂犬病实验组

[0046] 试验I组每个鸡胚尿囊腔同时接种蛇附子样品1原液0.2mL，伪狂犬病毒稀释液0.1mL。

[0047] 试验Ⅱ组每个鸡胚尿囊腔同时接种蛇附子样品2原液0.2mL，伪狂犬病毒稀释液0.1mL。

[0048] 试验III组每个鸡胚尿囊腔同时接种蛇附子样品3原液0.2mL，伪狂犬病毒稀释液0.1mL。

[0049] 试验IV组每个鸡胚尿囊腔同时接种50mg/mL的利巴韦林0.2mL，伪狂犬病毒稀释液0.1mL。

[0050] 阳性对照组每个鸡胚尿囊腔同时接种生理盐水0.2mL，伪狂犬病毒稀释液0.1mL。

[0051] 空白对照组不接种病毒，不给药。

[0052] 上述鸡胚在37.5℃恒温箱中继续孵化，每天照蛋2～3次，弃去24h内死胚，收取24～72h死胚和72h活胚的尿囊液，低温保存备用。以血凝（HA）实验检测鸡胚尿囊液的病毒效价。

[0053] （3）蛇附子对鸡新城疫病毒和伪狂犬病病毒增殖的影响，结果见表4、表5。

[0054] 表4蛇附子对鸡新城疫病毒增殖的抑制作用测定结果

[0055]分组 24～72h死亡胚数 72h活胚数 HA效价
蛇附子样品1原液 2** 10** 0**
蛇附子样品2原液 1** 11** 0**
蛇附子样品3原液 6* 6* 0**
利巴韦林组 10* 2* 5log2*
阳性对照组 12 0 9log2
空白对照组 0 12 0

[0056] 与阳性对照组比较：*P<0.05，**P<0.01

[0057] 表5蛇附子对伪狂犬病毒增殖的抑制作用测定结果

[0058]分组 24～72h死亡胚数 72h活胚数 HA效价
蛇附子样品1原液 3** 9** 0**
蛇附子样品2原液 2** 10** 0**
蛇附子样品3原液 7* 5* 0**
利巴韦林组 9* 3* 4log2*
阳性对照组 12 0 6log2
空白对照组 0 12 0

[0059] 与阳性对照组比较：*P<0.05，**P<0.01

[0060] 二、本发明对实验性鸡新城疫的治疗试验

[0061] 1、试验动物：本试验用35日龄艾维茵肉鸡150只，随机分为10组，每组15只，即蛇附子样品1(按实施例3方法制备)预防组与治疗组，蛇附子样品2(按实施例4方法制备)预防组与治疗组，蛇附子样品3(按实施例10方法制备)预防组与治疗组，西药预防组与治疗组，感染对照组，空白对照组。

[0062] 2、鸡新城疫毒株由江苏畜牧兽医教研室提供，鸡胚尿囊液的HA效价为9log2。

[0063] 3、试验方法：

[0064] （1）先测定尿囊液最小致死量，经测定尿囊液的最小致死量为100倍稀释，每只鸡滴鼻与点眼稀释后的尿囊液0.2mL。

[0065] （2）操作空白对照组的鸡不用药，不接种尿囊液，其余9组的鸡在同一时间里每只滴鼻点眼稀释后的尿囊液0.2mL。

[0066] （3）用药方法与疗效蛇附子样品1预防组在接种尿囊液的同时，开始用蛇附子样品1口服，每只鸡每次1mL，每天用药2次，连用4d。蛇附子样品1治疗组在接种尿囊液3d后（出现病状）用药，每只鸡每次1mL，每天用药2次，连用4d。蛇附子样品2预防组在接种尿囊液的同时，用蛇附子样品2口服，每只鸡每次1mL，每天用药2次，连用4d；蛇附子样品2治疗组在接种尿囊液3d后（出现病状）用药，每只鸡每次1mL，每天用药2次，连用4d。蛇附子样品3预防组在接种尿囊液的同时，开始用蛇附子样品3口服，每只鸡每次1mL，每天用药2次，连用4d。蛇附子样品3治疗组在接种尿囊液3d后（出现病状）用药，每只鸡每次
1mL，每天用药2次，连用4d。西药预防组在接种尿囊液的同时，开始用50mg/mL的利巴韦林口服，每只鸡每次1mL，每日2次，连用4d。西药治疗组用50mg/mL的利巴韦林，在接种尿囊液3d后（出现症状）用药，每只鸡每次1mL口服，每天用药2次，连用4d。感染对照组的鸡只接种尿囊液，不用任何药物，结果见表6。

[0067] 表6鸡新城疫预防与治疗结果

[0068]

[0069] 三、本发明对鸡新城疫治疗的临床观察

[0070] 鸡新城疫由新城疫病毒引起的一种急性高度接触性传染病，各种日龄的鸡均可发病，常呈败血症经过，主要特征是呼吸困难，下痢，神经机能紊乱，粘膜和浆膜出血，死亡率高，可造成很大经济损失。用蛇附子样品1（按实施例3方法制备）、蛇附子样品2（按实施例4方法制备），蛇附子样品3（按实施例10方法制备），每只鸡每次口服1mL，每天用药两次，连用4天。在江苏省苏州市、常州市、南通市、盐城市对发病鸡进行药物治疗试验，治愈数通过用药3～4d后存活数进行评价，结果见表7、表8、表9。

[0071] 表7蛇附子样品1对鸡新城疫临床疗效结果单位：只·%

[0072]

[0073] 表8蛇附子样品2对鸡新城疫临床疗效结果单位：只·%

[0074]

[0075] 表9蛇附子样品3对鸡新城疫临床疗效结果单位：只·%

[0076]

[0077] 可见，本发明所制作的药物治疗鸡新城疫一千余例，均取得较好疗效，治疗2d后停止死亡，3～4d后可治愈，治愈后一般不复发，表明本发明治疗鸡新城疫有甚高疗效。

[0078] 四、本发明对鸡法氏囊病的临床治疗结果

[0079] 2012年4月20日，江苏泗洪某鸡场，有24日龄雏鸡220只，出现精神萎顿，羽毛松乱，采食减少，畏寒，常聚堆。随后病鸡出现腹泻，排出白色粘稠或水样稀粪。剖检4只鸡，在腿部和胸部肌肉有出血；法氏囊水肿和出血，体积增大。用琼脂凝胶沉淀试验诊断为法氏囊病。立即用本发明药物治疗组1（按实施例3方法制备得到）、药物治疗组2（按实施例4方法制备得到）、药物治疗组3（按照实施例9方法制备得到）、药物治疗组4（按实施例10方法制备得到）的药物治疗，并用黄芪多糖为对照药物，共治疗3天，每只雏鸡每次口服1mL，每天用药2次；治疗结果见表10。

[0080] 表10鸡法氏囊病临床疗效结果单位：只·%

[0081]

[0082] 五、本发明对鸡传染性支气管炎的临床治疗结果

[0083] 2012年5月5日，江苏靖江某鸡场，有35日龄雏鸡165只，突然出现伸颈、张口呼吸、咳嗽、打喷嚏，有特殊的啰音，昏睡、翅下垂，下痢。剖检3只鸡，支气管有卡他性渗出物，气囊混浊，肾肿大、苍白，呈斑驳状的“花斑肾”。用血球凝集抑制试验，诊断为鸡传染性支气管炎。用本发明药物治疗组1（按实施例3方法制备得到）、药物治疗组2（按实施例4方法制备得到）、药物治疗组3（按照实施例9方法制备得到）、药物治疗组4（按照实施例10方法制备得到）的药物治疗，并用黄芪多糖为对照药物，共治疗4天，每只雏鸡每次口服1mL，每天用药2次；治疗结果见表11。

[0084] 表11鸡传染性支气管炎临床疗效结果单位：只·%

[0085]

[0086] 六、本发明对猪蓝耳病与圆环病毒病的临床治疗结果

[0087] 2011年11月5日，江苏宜兴某规模猪场，有60日龄仔猪77头，出现精神沉郁，食欲减退或废绝。11月6日，体温上升到40.5℃左右，呼吸困难，全身皮肤发红，腹泻，腹股沟淋巴结肿大。剖检5头，剖检变化：喉头充血肿胀，肺呈点状和斑块状出血，切面呈大理石样变化，肾水肿、出血，呈土黄色。心包膜和胸腔存在大量积液，心脏有大量出血斑。肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结出血。取病料送江苏农科院，用RT-PCR（反转录聚合酶链式反应）检测，诊断为猪蓝耳病病毒与圆环病毒混合感染。立即用本发明药物治疗组1（按照实施例5方法制备得到）、本发明药物治疗组2（按照实施例6方法制备得到）和本发明药物治疗组3（按照实施例7方法制备得到）治疗，并用黄芪多糖为对照药物，共治疗4天，每头仔猪每次5mL，每天用药2次，治疗结果见表12。

[0088] 表12猪蓝耳病与圆环病毒混合感染临床疗效结果单位：头·%

[0089]

[0090] 通过临床应用结果得出，本发明中药注射液和口服液治疗鸡法氏囊病、鸡传染性支气管炎、猪蓝耳病和圆环病毒混合感染，疗效比黄芪多糖效果明显。表明本发明中药制剂，治疗畜禽病毒性传染病有显著疗效。

[0091] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述：

[0092] 实施例1本发明提取物1的制备

[0093] 蛇附子500g，按药材重量的10倍加蒸馏水浸泡6h后，置煎煮罐熬1h，滤出药液，再加药材重量的10倍蒸馏水煎1h，滤出药液，合并两次药液，脱水浓缩至稠膏状，低温减压烘干，共得50g提取物。

[0094] 实施例2本发明提取物2的制备

[0095] 取蛇附子500g，粉碎，用蛇附子粉末重量10倍量，质量百分浓度为80%乙醇浸泡4小时后，渗漉，回收乙醇，浓缩至稠膏状,低温减压烘干,共得30g提取物。

[0096] 实施例3本发明口服液1的制备

[0097] 蛇附子500g，按药材重量的8倍加水浸泡6h，置煎煮罐熬2h，滤出药液，再加药材重量的8倍水煎2h，滤出药液，合并两次药液，浓缩至500mL，装瓶，封口、灭菌即可。

[0098] 实施例4本发明口服液2的制备

[0099] 取蛇附子500g，溶于蛇附子药材重量10倍量浓度为75%乙醇浸泡4小时后，渗漉，回收乙醇，浓缩至500mL，装瓶，封口、灭菌即可。

[0100] 实施例5本发明注射剂1的制备

[0101] 蛇附子1000g，按药材重量的12倍加蒸馏水浸泡6h，置煎煮罐熬1h，滤出药液，再加10倍水煎1h，滤出药液，合并两次药液，脱水浓缩至稠状，加入质量百分浓度为95%的乙醇，使含醇量达60%，放置24h后，抽滤，回收乙醇。滤液再加入质量百分浓度为95％的乙醇，使含醇量达70％，放置24h后，抽滤，回收乙醇。将滤液加蒸馏水至800mL。加入8克的活性炭，煮沸恒温30min，滤液加蒸馏水至1000mL，加热至80℃，加入20mL苯甲醇，反复抽滤至澄明，调pH至7.0，灌封，灭菌30min，备用。

[0102] 实施例6本发明注射剂2的制备

[0103] 取蛇附子1000g，粉碎,溶于蛇附子药材重量10倍量，浓度为85%乙醇中，浸泡4h后过滤,残渣再用85%乙醇浸泡4h过滤,合并两次滤液,回收乙醇至无醇味,将药液浓缩至800mL,加入8克活性炭，煮沸恒温30min，抽滤，滤液加蒸馏水至1000mL，加热至80℃，加入20mL苯甲醇，反复抽滤至澄明，灌封，灭菌30min，备用。

[0104] 实施例7本发明注射剂3的制备

[0105] 取蛇附子1000g，粉碎,溶于蛇附子药材重量8倍量，浓度为75%甲醇中,浸泡5h后过滤,残渣再用75%甲醇浸泡5h过滤,合并两次滤液,回收甲醇至无醇味,将药液浓缩至800mL,加入8克活性炭，煮沸恒温30min，抽滤，滤液加蒸馏水至1000mL，加热至80℃，

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