一种复方紫锥菊制剂及其制备方法和应用
阅读：117发布：2021-02-04
专利汇可以提供一种复方紫锥菊制剂及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 为一种复方紫锥菊制剂，其中有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的用量比例为（4～1） : 1，两者用量共占20%，辅料 蔗糖 占64%、糊精占16%。本发明中所选用的紫锥菊提取物，是采用 碱 性 乙醇 溶液及溶菌酶对紫锥菊药材进行两次提取获得；其中：多糖含量≥21.50%，多酚含量≥8.10%，菊苣酸含量≥5.00%。本发明复合制剂具有提高动物免疫 力 ，抗菌、抗病毒功能，可用作 预防 和 治疗 动物 疾病 特别是预防和治疗因大肠杆菌感染引发的鸡病的药物。，下面是一种复方紫锥菊制剂及其制备方法和应用专利的具体信息内容。
1.一种复方紫锥菊制剂，其特征在于有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的质量用量比例为（4～1 ） :1。
2.如权利要求1所述的复方紫锥菊制剂，其特征在于有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的质量用量比例为3 :1。
3.如权利要求1所述的复方紫锥菊制剂，其特征在于是由20%有效成分与辅料蔗糖和糊精加工的一种20%复方颗粒制剂。
4.如权利要求3所述的复方紫锥菊制剂，其特征在于所说的复方颗粒制剂中，紫锥菊提取物与溶菌酶的用量比例为3:1，各组分的质量份数为紫锥菊提取物15%、溶菌酶5%、蔗糖64%、糊精16%。
5.如权利要求1-4所述的复方紫锥菊制剂的制备方法，其特征在于具体操作工艺步骤如下：
取紫锥菊提取物与溶菌酶混合，加入混合物质量1.2倍的纯化水，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精和蔗糖，混合均匀，投入流化床，然后在50℃条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的复方紫锥菊颗粒制剂。
6.如权利要求1-4所述的复方紫锥菊制剂，其特征在于所使用的紫锥菊提取物是采用碱性乙醇溶液及溶菌酶对紫锥菊药材进行两次提取获得；其中：多糖含量≥21.50%，多酚含量≥8.10%，菊苣酸含量≥5.00% 。
7.如权利要求6所述复方紫锥菊制剂的制备方法，其特征在于采用先将紫锥菊药材在pH为12的10～60%乙醇溶液中回流提取，然后，再将滤渣用1%的溶菌酶水溶液浸泡提取的两步提取方法。
8.如权利要求6或7所述复方紫锥菊制剂的制备方法，其特征在于具体制备方法如下：
取8份浓度为10%至60%的乙醇溶液，用Ca(OH)2调节pH值至12；将1份紫锥菊药材，去杂质、粉碎，浸泡于上述碱性乙醇溶液中1小时，并回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，得滤液与滤渣两部分；滤渣加10倍量1%的溶菌酶水溶液，37℃浸泡12 小时，过滤，弃去沉淀，滤液与之前的醇提液合并，得紫锥菊提取液；将滤液用HCl调节pH至4~6，静置3小时，过滤，沉淀干燥粉碎，得紫锥菊沉淀粉；滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至密度为
1.15g/ml，喷雾干燥，所得紫锥菊粉末与紫锥菊沉淀粉混合，得紫锥菊提取物。
9.如权利要求4-7所述的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方颗粒制剂，其特征在于其具有提高动物免疫力，抗应激，杀菌、抗病毒功能，可用于制备预防和治疗猪的蓝耳病、流感、圆环病毒病及鸡传染性法氏囊炎、非典型性新城疫、传染性喉气管炎、传染性支气管炎、流感病毒疾病的药物。
10.如权利要求4-7所述的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方颗粒制剂，其特征在于用作预防和治疗因大肠杆菌、沙门氏菌等感染引发的鸡病的药物。
一种复方紫锥菊制剂及其制备方法和应用
[0001]
技术领域
背景技术
[0003] 紫锥菊是原产于北美和加拿大南部的一种松果菊属植物，我国部分地区有引种。紫锥菊中含多糖、多酚（包括菊苣酸、咖啡酸的衍生物）、黄酮类、精油、多炔、烷基胺和生物碱。具有提高免疫力及抗菌消炎作用。多糖类可以激发身体的细胞去对抗感染；多酚类、黄酮类及咖啡酸衍生物能提高机体的免疫力，它们能刺激免疫系统细胞活动，当这些细胞有活性时，白血球更迅速把引起疾病的侵略者包围，使病毒或细菌死亡，防止他们繁殖，或停止他们的活动。尤其是菊苣酸，是紫锥菊中极为重要的免疫活性成分之一。近年来的药理研究表明，菊苣酸具有增强免疫功能和抗炎作用，并能抑制透明质酸酶，保护胶原蛋白免受可导致降解的自由基的影响。国外有将紫锥菊及其制剂用于猪的繁殖与呼吸道综合征的治疗，国内临床试验也证实紫锥菊对猪的圆环病毒病、繁殖与呼吸道综合征以及鸡的传染性法氏囊炎、传染性支气管炎、非典型性新城疫等疾病有较好的疗效。
[0004] 然而，单独使用紫锥菊在治疗重度疾病时，仅靠刺激机体的免疫系统，提高机体的免疫力，其杀菌消炎作用较弱。治愈效果并不理想，因此，寻找能够与紫锥菊功能互补的其他类型的药物，与之构建复合制剂，则是进一步开发紫锥菊用途的另一条出路。
[0005] 溶溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，具有杀菌作用的天然抗感染物质。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。溶菌酶的抗菌谱较广，不仅局限于革兰氏阳性菌，对部分革兰氏阴性菌也有抑制效果。溶菌酶的直接杀灭致病菌功能，能够弥补紫锥菊的不足。但溶菌酶本身无增强免疫力的作用，单用溶菌酶，对于长期感染细菌、病毒而导致的机能下降的机体，疗效不显著。而紫锥菊提高机体免疫力功能极强，能激发身体的细胞去对抗感染，刚好弥补溶菌酶的不足。
[0006] 然而，国内外对紫锥菊以及溶菌酶的复合研究仍然较少，两者多是单独使用。
发明内容
[0009] 其中，优选的紫锥菊提取物与溶菌酶的质量用量比例为 3 : 1。
[0010] 本发明所述的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方制剂是一种复方颗粒制剂，其中，有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的总用量为20%，辅料蔗糖和糊精的总用量80%，其中，蔗糖用量为64%，糊精用量为16%。
[0011] （本发明原料用量均以质量计，以下同）本发明所述的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方颗粒制剂的制备方法如下：
取紫锥菊提取物与溶菌酶混合，加入混合物质量1.2倍的纯化水，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精和蔗糖，混合均匀，投入流化床，然后在50℃条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的复方紫锥菊颗粒制剂。
取紫锥菊提取物与溶菌酶混合，加入混合物质量1.2倍的纯化水，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精和蔗糖，混合均匀，投入流化床，然后在50℃条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的复方紫锥菊颗粒制剂。
[0012] 也可以取紫锥菊提取物与溶菌酶混合，然后加入糊精和蔗糖，混合均匀，再加入混合物总质量30%的80%乙醇溶液，并混合均匀，制成紫锥菊提取物-溶菌酶软材，将此软材通过摇摆制粒机制得湿颗粒，再将湿颗粒在50℃烘干，即获得有效成分为20%的紫锥菊-溶菌酶复方颗粒制剂。
[0013] 本发明所提供的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方制剂，是由本发明人研究制备的紫锥菊提取物与溶菌酶为有效成分，添加适当辅助成分复配加工制成的，所使用的紫锥菊提取物中，多酚含量≥8.10%，菊苣酸含量≥5.00%；所使用的溶菌酶执行的卫生部部颁标准（生化药品第一册）标准，含量为6350单位/mg。
[0014] 上述复方紫锥菊制剂具有提高动物免疫力，抗菌、抗病毒功能，可用作预防和治疗动物疾病的药物。
[0015] 由于目前市场上的紫锥菊提取物的提取方法主要是简单的水浸和醇提取，致使提取效率偏低，存在某一有效成分含量偏高，而其余有效成分含量较低的缺点，从而影响了使用效果。为保证其疗效，本发明人研究提供了一种独特的提取方法，使所制得的提取物中的多糖、多酚及菊苣酸的含量都明显高于目前市场上常规方法所制得的紫锥菊提取物。
[0016] 本发明所提供的紫锥菊提取物是采用碱性乙醇溶液及溶菌酶对紫锥菊药材进行两次提取而获得的，其中：多糖含量≥21.50%，多酚含量≥8.70%，菊苣酸含量≥5.00% 。
[0017] 本发明所提供的紫锥菊提取物的制备方法，是采用先将紫锥菊药材在pH为12的10～60%乙醇溶液中回流提取，然后，再将滤渣用1%的溶菌酶水溶液浸泡提取的两步提取方法。
[0018] 本发明所述的紫锥菊提取物的具体制备方法如下：取8份浓度为10%至60%的乙醇溶液（优选30%），用Ca(OH)2调节pH值至12，取1份紫锥菊药材，去杂质、粉碎，浸泡于上述碱性乙醇溶液中1小时，并回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，得滤液与滤渣两部分；滤渣加10倍量1%的溶菌酶水溶液，37℃浸泡12 小时，过滤，弃去沉淀，滤液与之前的醇提液合并，得紫锥菊提取液。将滤液用HCl调节pH至4~6，静置3小时，过滤，沉淀干燥粉碎，得紫锥菊沉淀粉；滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至密度为1.15g/ml，喷雾干燥，所得紫锥菊粉末与紫锥菊沉淀粉混合，得紫锥菊提取物（本发明中所涉及的用量份数或百分数除特别注明外，均为以质量份数或质量%计，以下同）。
[0019] 上述提取方法中，使用了pH为12的碱性乙醇溶液对紫锥菊药材进行回流提取，有利于提高提取物中多酚及菊苣酸的含量，大大提高了所得提取物的有效性； 植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，溶菌酶可破坏其结构，在乙醇提取后的滤渣中，加入适量的溶菌酶，可以使紫锥菊细胞的细胞壁破坏，使其中的有效成分多糖、多酚和菊苣酸进一步释放出来，提高了紫锥菊的提取率。
[0020] 本发明还提供了一种复方紫锥菊制剂，将紫锥菊的提取物与溶菌酶作为主要有效成分，在有效的增效配比范围内，进行复配，使两者产生协同互补和增效作用，提高杀菌和抗病功能；添加辅料制成复方紫锥菊颗粒制剂，既可以使给药方便，又能改善紫锥菊的口味，还能便于贮藏、运输。
[0021] 紫锥菊能提高机体免疫力，激发身体的细胞去对抗感染，溶菌酶能直接杀灭致病菌，两者联用，即可提高机体免疫力，又能直接杀灭致病菌，起到消炎作用，标本兼治。本发明复合制剂，实现了紫锥菊与溶菌酶的联用，比单独使用任何一种的疗效更好，并且紫锥菊、溶菌酶与抗生素相比，在使用中均不会产生耐药性。溶菌酶的直接杀灭致病菌功能，能够弥补紫锥菊的不足，但无增强免疫力的作用；单用溶菌酶，对于长期感染细菌、病毒而导致的机能下降的机体，疗效甚微，而紫锥菊提高机体免疫力功能极强，能激发身体的细胞去对抗感染，刚好弥补溶菌酶的不足。试验证明，两者联用，即可提高机体免疫力，又能直接杀灭致病菌，起到消炎作用，标本兼治，具有协同增效作用。
[0022] 单独使用紫锥菊在治疗重度疾病时，仅靠刺激机体的免疫系统，提高机体的免疫力，治愈效果并不理想，单独使用紫锥菊杀菌消炎作用甚微。而单独使用溶菌酶，由于溶菌酶无增强免疫力的作用，对于长期感染细菌、病毒而导致的机能下降的机体几无任何疗效。 本发明所提供的复合紫锥菊制剂，实现了紫锥菊与溶菌酶的联用，比单独使用任何一种的疗效更好，并且紫锥菊、溶菌酶与抗生素相比，在使用中均不会产生耐药性，且无复发、无药物残留，安全性更高。
[0023] 临床试验结果显示，本发明的复方紫锥菊颗粒制剂对治疗鸡大肠杆菌病效果良好。
[0024] 具体用法用量如下：（1）预防疾病混饮：每1000kg水中；复方紫锥菊颗粒制剂用量：鸡100g；猪500-1000g，连用10天。
[0025] （2） 治疗疾病混饮：每1000kg水，复方紫锥菊颗粒制剂用量：鸡200g；猪1500-2500g，连用5天。
[0026] 下面结合试验方法来说明本发明的合理性。
具体实施方式
[0027] 实施例一. 本发明所述紫锥菊提取物与溶菌酶复方制剂的制备方法。
[0028] 实施例一.1. 紫锥菊提取物 : 溶菌酶=4 : 1复方颗粒制剂的制备取紫锥菊提取物160g，溶菌酶40g，加纯化水240g，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精160g、蔗糖640g，混合均匀，投入流化床；然后在50℃条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的紫锥菊溶菌酶复方颗粒制剂；其中，紫锥菊提取物16%，溶菌酶4%，蔗糖64%，糊精16%。
[0029] 实施例一.2. 紫锥菊提取物 : 溶菌酶=3 : 1复方颗粒制剂的制备取紫锥菊提取物150g，溶菌酶50g，加纯化水240g，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精160g、蔗糖640g，混合均匀，投入流化床；然后在50℃条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的紫锥菊-溶菌酶复方颗粒制剂；其中，紫锥菊提取物15%，溶菌酶5%，蔗糖64%，糊精16%。
[0030] 实施例一.3. 紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 1复方颗粒制剂的制备取紫锥菊提取物100g，溶菌酶100g，加纯化水240g，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精160g、蔗糖640g，混合均匀，投入流化床；然后在50℃条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的紫锥菊溶菌酶复方颗粒制剂；其中，紫锥菊提取物10%，溶菌酶10%，蔗糖64%，糊精16%。
[0031] 实施例二.本发明所述复方紫锥菊制剂中，有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的用量比例的优选及效果对比试验。
[0032] 实施例二.1.不同比例的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方制剂的体外抑制大肠杆菌的效果比较（一）实验材料
试验菌株：肉鸡源大肠杆菌。
试验菌株：肉鸡源大肠杆菌。
[0033] 培养基：Ⅲ号培养基（按中国兽药典2010版一部制备）。
[0034] 复方制剂处方：处方1：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=5 : 1，
处方2：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=4 : 1，
处方3：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=3.5 : 1，
处方4：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=3 : 1 ，
处方5：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=2.5 : 1，
处方6：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=2 : 1，
处方7：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1.5 : 1，
处方8：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 1，
处方9：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 2，
分别制成有效成分含量20%的复合颗粒制剂，
阴性对照组：生理盐水。
处方2：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=4 : 1，
处方3：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=3.5 : 1，
处方4：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=3 : 1 ，
处方5：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=2.5 : 1，
处方6：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=2 : 1，
处方7：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1.5 : 1，
处方8：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 1，
处方9：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 2，
分别制成有效成分含量20%的复合颗粒制剂，
阴性对照组：生理盐水。
[0036] （二）实验内容细菌平板的制备：取直径约90mm，高16～17mm的平底双碟，分别注入60℃无菌Ⅲ号培养基20ml，使在碟底内均匀摊布，放置水平台面上使凝固，作为底层。另取培养基适量加热溶化后，放冷至48～50℃，加入肉鸡源大肠杆菌悬液适量5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置在水平台上冷却后，制成细菌平板。
[0037] 大肠杆菌对不同处方的药敏实验：纸片法 将以上不同处方的颗粒溶液制成药敏纸片，测定抑菌圈的大小。方法：取直径为0.6厘米的灭菌滤纸片在不同处方的颗粒溶液中浸泡40分钟，取出备用，在已制备好的细菌平板中，无菌操作放置药敏纸片，每种药物贴6片，然后将平板置37℃培养箱中培养24小时后测定抑菌圈的大小，取其平均值。并将其平均值与阴性对照组数据进行比较，并用SAS统计软件进行数据分析。
[0038] （三）实验结果处方号 处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 处方6 处方7 处方8 处方9 阴性对照组抑菌圈（mm） 0.81 1.64 2.77 3.03 3.10 3.12 3.11 3.13 3.12 0
显著性差异 P>0.05 P<0.05P<0.05P<0.05P<0.05 P<0.05P<0.05P<0.05P<0.05 -由以上数据可以看出，当紫锥菊提取物 : 溶菌酶 为4 : 1 时， 随着溶菌酶所占比例的增大，其抑菌效果明显增强；当紫锥菊提取物 : 溶菌酶达到3 : 1之后，随着溶菌酶所占比例的升高，其抑菌效果增加不明显。因此单从体外抑菌效果看，紫锥菊提取物 : 溶菌酶的用量比例为4 : 1至1 : 1抑菌效果均较理想；综合考虑，可将紫锥菊提取物 : 溶菌酶的优选用量比例确认为 3 : 1 。
显著性差异 P>0.05 P<0.05P<0.05P<0.05P<0.05 P<0.05P<0.05P<0.05P<0.05 -由以上数据可以看出，当紫锥菊提取物 : 溶菌酶 为4 : 1 时， 随着溶菌酶所占比例的增大，其抑菌效果明显增强；当紫锥菊提取物 : 溶菌酶达到3 : 1之后，随着溶菌酶所占比例的升高，其抑菌效果增加不明显。因此单从体外抑菌效果看，紫锥菊提取物 : 溶菌酶的用量比例为4 : 1至1 : 1抑菌效果均较理想；综合考虑，可将紫锥菊提取物 : 溶菌酶的优选用量比例确认为 3 : 1 。
[0039] 实施例二.2.以肉鸡的体重为指标，筛选紫锥菊提取物及溶菌酶的用量比例
试验地点：山东佳宜养殖场
试验鸡情况：健康肉鸡，4周龄。
试验地点：山东佳宜养殖场
试验鸡情况：健康肉鸡，4周龄。
[0040] 试验处方：处方1：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=5 : 1，
处方2：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=4 : 1，
处方3：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=3 : 1，
处方4：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=2 : 1，
处方5：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 1，
处方6：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 2，
处方7：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 3，
处方8：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 4，
处方9：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 5，
处方10：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 0，
处方11：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=0 : 1，
分别制成有效成分含量20%的复合颗粒制剂100g，兑水500kg，供试验肉鸡饮用，连用
5天；
阴性对照组：生理盐水自由饮。
处方2：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=4 : 1，
处方3：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=3 : 1，
处方4：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=2 : 1，
处方5：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 1，
处方6：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 2，
处方7：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 3，
处方8：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 4，
处方9：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 5，
处方10：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=1 : 0，
处方11：紫锥菊提取物 : 溶菌酶=0 : 1，
分别制成有效成分含量20%的复合颗粒制剂100g，兑水500kg，供试验肉鸡饮用，连用
5天；
阴性对照组：生理盐水自由饮。
[0041] 实验分组及处理：试验肉鸡300羽，随机分为12组，每组25羽。按治疗方案给药。
[0042] 效果对比：最后一次给药后第二日，称重，并与阴性对照组进行显著性差异比较。
处方 肉鸡平均体重（kg） 显著性差异
处方1 1.54 P>0.05
处方2 1.66 P<0.05
处方3 1.71 P<0.05
处方4 1.64 P<0.05
处方5 1.58 P<0.05
处方6 1.55 P>0.05
处方7 1.54 P>0.05
处方8 1.50 P>0.05
处方9 1.52 P>0.05
处方10 1.51 P>0.05
处方11 1.46 P>0.05
阴性对照组 1.43 — 。
处方 肉鸡平均体重（kg） 显著性差异
处方1 1.54 P>0.05
处方2 1.66 P<0.05
处方3 1.71 P<0.05
处方4 1.64 P<0.05
处方5 1.58 P<0.05
处方6 1.55 P>0.05
处方7 1.54 P>0.05
处方8 1.50 P>0.05
处方9 1.52 P>0.05
处方10 1.51 P>0.05
处方11 1.46 P>0.05
阴性对照组 1.43 — 。
[0043] 由以上数据可以看出，当紫锥菊提取物与溶菌酶比例在4 : 1～1 : 1之间，肉鸡体重增重明显，与阴性对照组比较具有显著性差异；并且，当紫锥菊提取物 : 溶菌酶=3 : 1时，肉鸡体重增重最明显，说明，紫锥菊提取物与溶菌酶的最佳比例为3 : 1。
[0045] 试验鸡情况：试验鸡总数4000羽，8周龄。
[0046] 治疗方案及对比：自提紫锥菊组：单给自提紫锥菊提取物20g+蔗糖64g+糊精16g，兑水500kg，连用5天。
[0047] 市售紫锥菊组：单给市售紫锥菊提取物20g+蔗糖64g+糊精16g，兑水500kg，连用5天。
[0048] 溶菌酶组：单给溶菌酶20g+蔗糖64g+糊精16g，兑水500kg，连用5天。
[0049] 复方紫锥菊颗粒组1：紫锥菊提取物：溶菌酶=3：1，按实施例1方法制备颗粒，100g复方紫锥菊颗粒兑水500kg，连用5天。
[0050] 复方紫锥菊颗粒组2：紫锥菊提取物：溶菌酶=4：1，按实施例1方法制备颗粒，100g复方紫锥菊颗粒兑水500kg，连用5天。
[0051] 复方紫锥菊颗粒组3：紫锥菊提取物：溶菌酶=1：1，按实施例1方法制备颗粒，100g复方紫锥菊颗粒兑水500kg，连用5天。
[0052] 阳性对照组：硫酸粘杆菌素可溶性粉，100g兑水400kg，连用5天。
[0053] 实验分组及处理：试验鸡共3000羽病鸡，随机分为6组，每组500羽。按治疗方案给药。
[0054] 疗效判定标准：治愈：经治疗而症状消失，粪便、饮食欲及精神恢复正常；有效：症状明显减轻，粪便、精神、饮食欲有好转；无效或死亡：经治疗其症状无好转或死亡，剖检有明显的心包炎，肝包膜炎病变。
[0055] 治愈率=（组内治愈病鸡数/组内用药病鸡数）×100%有效率=（组内有效病鸡数/组内用药病鸡数）×100%
死亡率=（组内死亡病鸡数/组内用药病鸡数）×100%
疗效对比：
最后一次给药后第二日，观察疗效。
死亡率=（组内死亡病鸡数/组内用药病鸡数）×100%
疗效对比：
最后一次给药后第二日，观察疗效。
[0056] 由以上结果可以看出，自提紫锥菊组较市售紫锥菊组治愈率高，死亡率低，并且体重增加明显，说明自提紫锥菊提取物疗效较市售紫锥菊提取物疗效明显要好；复方紫锥菊颗粒在对病鸡治愈率与体重增重效果上较单用紫锥菊、溶菌酶及阳性对照组有显著性差异，治愈率明显升高，死亡率显著降低并且体重增加明显；尤其是当紫锥菊提取物：溶菌酶=3：1时，死亡率明显下降。
[0057] 实施例三.紫锥菊提取物的制备方法及试验对比实施例三.1.在pH为 12的30%乙醇溶液中回流提取，滤渣再用1%的溶菌酶水溶液浸泡提取
取紫锥菊药材2kg，加16kg浓度为30%的乙醇溶液，用Ca(OH)2调节pH至12，浸泡1小时，并回流提取3次，每次2小时，合并提取液，双层滤纸抽滤，合并滤液，得醇提液；滤渣加入20kg1%的溶菌酶水溶液，37℃浸泡12 小时，过滤，弃去滤渣，提取液用双层滤纸抽滤，滤液与之前的醇提液合并，用盐酸调pH值至4.7，静置3小时；过滤，沉淀干燥后粉碎得紫锥菊沉淀粉124g，滤液减压回收至无醇味并浓缩至密度为1.15g/ml，喷雾干燥得紫锥菊粉末281g，与紫锥菊沉淀粉混合得405g紫锥菊提取物。
取紫锥菊药材2kg，加16kg浓度为30%的乙醇溶液，用Ca(OH)2调节pH至12，浸泡1小时，并回流提取3次，每次2小时，合并提取液，双层滤纸抽滤，合并滤液，得醇提液；滤渣加入20kg1%的溶菌酶水溶液，37℃浸泡12 小时，过滤，弃去滤渣，提取液用双层滤纸抽滤，滤液与之前的醇提液合并，用盐酸调pH值至4.7，静置3小时；过滤，沉淀干燥后粉碎得紫锥菊沉淀粉124g，滤液减压回收至无醇味并浓缩至密度为1.15g/ml，喷雾干燥得紫锥菊粉末281g，与紫锥菊沉淀粉混合得405g紫锥菊提取物。
[0058] 通过紫外分光光度仪对上述紫锥菊提取物中多糖和多酚的含量进行检测，结果为含多糖24.71%，含多酚8.66%；通过高效液相色谱仪对上述紫锥菊提取物中菊苣酸含量进行检测，结果为含菊苣酸5.22%。
[0059] 实施例三.2.在pH为 12的10%乙醇溶液中回流提取，滤渣再用1%的溶菌酶水溶液浸泡提取取紫锥菊药材2kg，加16kg浓度为10%的乙醇溶液，用Ca(OH)2调节pH至12，浸泡1小时，并回流提取3次，每次2小时，合并提取液，双层滤纸抽滤，合并滤液，得醇提液；滤渣加入20kg1%的溶菌酶水溶液，37℃浸泡12 小时，过滤，弃去滤渣，提取液用双层滤纸抽滤，滤液与之前的醇提液合并，用盐酸调pH值至4.7，静置3小时；过滤，沉淀干燥后粉碎得紫锥菊沉淀粉121g，滤液减压回收至无醇味并浓缩至密度为1.15g/ml，喷雾干燥得紫锥菊粉末287g，与紫锥菊沉淀粉混合得408g紫锥菊提取物。
[0060] 通过紫外分光光度仪对上述紫锥菊提取物中多糖和多酚的含量进行检测，结果为含多糖25.23%，含多酚8.11%；通过高效液相色谱仪对上述紫锥菊提取物中菊苣酸含量进行检测，结果为含菊苣酸5.05%。
[0061] 实施例三.3.在pH为 12的60%乙醇溶液中回流提取，滤渣再用1%的溶菌酶水溶
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