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治疗和诊断组合物

阅读：687发布：2021-02-19

专利汇可以提供治疗和诊断组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 总的来说涉及 治疗 和/或 预防 动物和 鸟 中肠道 疾病 的治疗组合物，所说的疾病是由Lawsonia intracellularis或者类似的或以其它方式相关的 微 生物 引起或加剧的。本发明也涉及治疗和/或预防这样的肠道疾病的方法，并涉及用于检测Lawsonia intracellularis或者类似的或以其它方式相关的微生物的诊断 试剂 和方法。，下面是治疗和诊断组合物专利的具体信息内容。

1.一种用于预防或治疗动物和鸟中由Lawsonia intracellularis 或相关微生物引起的感染的疫苗组合物，所说的疫苗组合物含有免疫原 性的非致病形式的L.intracellularis或相关微生物或者其免疫原性组 分，以及一种或多种适于兽医学上或药学上使用的载体、稀释剂和/或佐 剂，其中所述相关微生物为L.intracellularis或Lawsonia属的其它 种之分离株或亚种。
2.按照权利要求1的疫苗组合物，其中所说的疫苗组合物是用于 在猪中治疗或预防由L.intracellularis或相关微生物引起的感染的， 其中所述相关微生物为L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之 分离株或亚种。
3.按照权利要求2的疫苗组合物，其中所说的非致病形式的L. intracellularis或相关微生物是所说微生物的减毒株，其中所述相关微 生物为L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种。
4.按照权利要求2的疫苗组合物，其中所说的非致病形式的L. intracellularis或相关微生物是所说微生物的杀灭制剂，其中所述相关 微生物为L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种。
5.按照权利要求4的疫苗组合物，其中所说的非致病形式的L intracellularis是所说微生物的福尔马林杀灭制剂。
6.按照权利要求1的疫苗组合物，其中所说的组合物含有诱导抗 L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫反应有效量的、来源于 L.intracellularis或相关微生物的肽、多肽、蛋白质、碳水化合物、 脂质或核酸分子或它们的组合体，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种。
7.按照权利要求6的疫苗组合物，其中所说的组合物含有来源于 L.intracellularis或相关微生物的肽、多肽、蛋白质，其中所述相关 微生物为L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种。
8.按照权利要求7的疫苗组合物，其中所说的肽、多肽或蛋白质 是重组体形式的。
9.按照权利要求7或8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有重 折叠/热激蛋白质、鞭毛基体杆形蛋白质、S-腺苷甲硫氨酸、tRNA核 糖基转移酶-异构酶、自溶素、烯酰-(酰基-载体-蛋白质)还原 酶或葡糖二酸转运蛋白。
10.按照权利要求9的疫苗组合物，其中所说的蛋白质是具有 SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列的GroEl，或者是具有与该序列 至少约40％的相似性的蛋白质，其中所述蛋白质能在猪中诱导保护性 免疫反应。
11.按照权利要求9的疫苗组合物，其中所说的蛋白质是具有 SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列的GroES，或者是具有与该序列 至少约40％的相似性的蛋白质，其中所述蛋白质能在猪中诱导保护性 免疫反应。
12.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：1的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相似 性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够 在猪中诱导保护性免疫反应。
13.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：3的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相似 性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够 在猪中诱导保护性免疫反应。
14.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：5的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相似 性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够 在猪中诱导保护性免疫反应。
15.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：6的核苷酸序列或者具有该序列至少约40％的相似性 的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够在 猪中诱导保护性免疫反应。
16.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：9的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相似 性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够 在猪中诱导保护性免疫反应。
17.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：12的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
18.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：15的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
19.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：21的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
20.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：28的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
21.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：29的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
22.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：30的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
23.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：31的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
24.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：32的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
25.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：33的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
26.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：7或8的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的 相似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质 能够在猪中诱导保护性免疫反应。
27.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：10的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
28.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：11的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
29.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：13或14的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％ 的相似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白 质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
30.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：16-20中任一项的核苷酸序列或者具有与该序列至少 约40％的相似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽 或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
31.按照权利要求8的疫苗组合物，其中所说的组合物含有由包 含SEQ ID NO：22-27中任一项的核苷酸序列或者具有与该序列至少 约40％的相似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽 或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
32.非致病形式的L.intracellularis或相关微生物或者其免疫原性 组分用于制备权利要求1的疫苗组合物的用途，其中所述相关微生物 为L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种。
33.按照权利要求32的用途，其中所说的动物是猪。
34.按照权利要求33的用途，其中所说的非致病形式的L. intracellularis或相关微生物是所说微生物的减毒株，其中所述相 关微生物为L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或 亚种。
35.按照权利要求33的用途，其中所说的非致病形式的L. intracellularis或相关微生物是所说微生物的杀灭制剂
36.按照权利要求35的用途，其中所说的非致病形式的L. intracellularis是所说微生物的福尔马林杀灭制剂，其中所述相关微生 物为L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种。
37.按照权利要求32的用途，其中所说的免疫原性组分包括诱导 抗L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫反应有效量的，来源 于L.intracellularis或相关微生物的肽、多肽、蛋白质、碳水化合物、 脂质或核酸分子或它们的组合体，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种。
38.按照权利要求37的用途，其中所说的免疫原性组分包括来源 于L.intracellularis或相关微生物的肽、多肽、蛋白质，其中所述相 关微生物为L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚 种。
39.按照权利要求38的用途，其中所说的肽、多肽或蛋白质是重 组形式的。
40.按照权利要求38或39的用途，其中所说的免疫原性组分是 重折叠/热激蛋白质、鞭毛基体杆形蛋白质、S-腺苷甲硫氨酸、tRNA 核糖基转移酶-异构酶、自溶素、烯酰-(酰基-载体-蛋白质)还 原酶或葡糖二酸转运蛋白。
41.按照权利要求40的用途，其中所说的蛋白质是具有SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列的GroEL，或者是具有与该序列至少约 40％的相似性的蛋白质，其中所述蛋白质能在猪中诱导保护性免疫反 应。
42.按照权利要求40的用途，其中所说的蛋白质是具有SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列的GroEL，或者是具有与该序列至少约 40％的相似性的蛋白质，其中所述蛋白质能在猪中诱导保护性免疫反 应。
43.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：1的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相似 性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够 在猪中诱导保护性免疫反应。
44.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：3的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相似 性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够 在猪中诱导保护性免疫反应。
45.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：5的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相似 性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够 在猪中诱导保护性免疫反应。
46.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：6的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相似 性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够 在猪中诱导保护性免疫反应。
47.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：9的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相似 性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够 在猪中诱导保护性免疫反应。
48.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：12的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
49.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：15的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
50.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：21的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
51.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：28的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
52.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：29的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
53.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：30的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
54.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：31的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
55.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：32的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
56.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：33的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
57.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：7或8的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的 相似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质 能够在猪中诱导保护性免疫反应。
58.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：10的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
59.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：11的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
60.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：13的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
61.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：16-20中任一项的核苷酸序列或者具有与该序列至少 约40％的相似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽 或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
62.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：22-27中任一项的核苷酸序列或者具有与该序列至少 约40％的相似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽 或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
63.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：1所示的核 苷酸序列或者与SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列具有至少40％的相 似性的核苷酸序列，这种核苷酸序列能够在低严格条件下与SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
64.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：3所示的核 苷酸序列或者与SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列具有至少40％的相 似性的核苷酸序列，这种核苷酸序列能够在低严格条件下与SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
65.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：5所示的核 苷酸序列或者与SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列具有至少40％的相 似性的核苷酸序列，这种核苷酸序列能够在低严格条件下与SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
66.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：6所示的核 苷酸序列或者与SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列具有至少40％的相 似性的核苷酸序列，这种核苷酸序列能够在低严格条件下与SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
67.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：9所示的核 苷酸序列或者与SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列具有至少40％的相 似性的核苷酸序列，这种核苷酸序列能够在低严格条件下与SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
68.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：12所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序列能够在低严格条件下与SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis 或相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为 L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述 肽，多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
69.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：15所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序能够在低严格条件下与SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
70.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：21所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：21所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序能够在低严格条件下与SEQ ID NO：21所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
71.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：28所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：28所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序能够在低严格条件下与SEQ ID NO：28所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
72.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：29所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：29所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序能够在低严格条件下与SEQ ID NO：29所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
73.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：30所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：30所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序能够在低严格条件下与SEQ ID NO：30所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
74.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：31所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：31所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序能够在低严格条件下与SEQ ID NO：31所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
75.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：32所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：32所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序能够在低严格条件下与SEQ ID NO：32所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
76.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：33所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：33所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序能够在低严格条件下与SEQ ID NO：33所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis或 相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
77.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：1所示的 核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低严 格条件下与SEQ ID NO：1杂交的DNA序列，该DNA能够在猪中表 达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫反应 有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L.intracellularis 或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽，多肽或蛋白质 能够在猪中诱导保护性免疫反应。
78.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：3所示的 核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低严 格条件下与SEQ ID NO：3杂交的DNA序列，该DNA能够在猪中表 达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫反应 有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L.intracellularis 或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽，多肽或蛋白质 能够在猪中诱导保护性免疫反应。
79.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：5所示的 核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低严 格条件下与SEQ ID NO：5杂交的DNA序列，该DNA能够在猪中表 达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫反应 有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L.intracellularis 或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽，多肽或蛋白质 能够在猪中诱导保护性免疫反应。
80.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：6所示的 核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低严 格条件下与SEQ ID NO：6杂交的DNA序列，该DNA能够在猪中表 达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫反应 有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L.intracellularis 或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽，多肽或蛋白质 能够在猪中诱导保护性免疫反应。
81.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：9所示的 核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低严 格条件下与SEQ ID NO：9杂交的DNA序列，该DNA能够在猪中表 达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫反应 有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L.intracellularis 或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽，多肽或蛋白质 能够在猪中诱导保护性免疫反应。
82.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：12所示 的核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低 严格条件下与SEQ ID NO：12杂交的DNA序列，该DNA能够在猪 中表达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫 反应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
83.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：15所示 的核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低 严格条件下与SEQ ID NO：15杂交的DNA序列，该DNA能够在猪 中表达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫 反应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
84.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：21所示 的核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低 严格条件下与SEQ ID NO：21杂交的DNA序列，该DNA能够在猪 中表达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫 反应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
85.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：28所示 的核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低 严格条件下与SEQ ID NO：28杂交的DNA序列，该DNA能够在猪 中表达产生对诱导针对L.intraeellularis或相关微生物之保护性免疫 反应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
86.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：29所示 的核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低 严格条件下与SEQ ID NO：29杂交的DNA序列，该DNA能够在猪 中表达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫 反应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
87.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：30所示 的核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低 严格条件下与SEQ ID NO：30杂交的DNA序列，该DNA能够在猪 中表达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫 反应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
88.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：31所示 的核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低 严格条件下与SEQ ID NO：31杂交的DNA序列，该DNA能够在猪 中表达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫 反应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
89.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：32所示 的核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低 严格条件下与SEQ ID NO：32杂交的DNA序列，该DNA能够在猪 中表达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫 反应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
90.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：33所示 的核苷酸序列的或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低 严格条件下与SEQ ID NO：33杂交的DNA序列，该DNA能够在猪 中表达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫 反应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为L. intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述肽， 多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
91.按照权利要求8的疫苗组合物，其中组合物含有包含SEQ ID NO：34的核苷酸序列或具有与该序列至少约40％的相似性的序列编 码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够在猪中诱导 保护性免疫反应。
92.按照权利要求38的用途，其中所说的免疫原性组分包括由包 含SEQ ID NO：34的核苷酸序列或者具有与该序列至少约40％的相 似性的序列编码的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能 够在猪中诱导保护性免疫反应。
93.一种分离的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：34所示的 核苷酸序列或者与SEQ ID NO：34所示的核苷酸序列具有至少40％ 的相似性的核苷酸序列，这种核苷酸序列能够在低严格条件下与SEQ ID NO：34所示的核苷酸序列杂交，并且编码来源于L.intracellularis 或相关微生物的免疫原性肽、多肽或蛋白质，其中所述相关微生物为 L.intracellularis或Lawsonia属的其它种之分离株或亚种，其中所述 肽，多肽或蛋白质能够在猪中诱导保护性免疫反应。
94.一种基因工程疫苗，该疫苗包含具有SEQ ID NO：34所示 的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似性的或者能够在低严 格条件下与SEQ ID NO：34杂交的DNA序列，该DNA能够在猪中 表达产生对诱导针对L.intracellularis或相关微生物之保护性免疫反 应有效量的肽、多肽或蛋白质，其中所述肽，多肽或蛋白质能够在猪 中诱导保护性免疫反应。

说明书全文

本发明总的来说涉及治疗和/或预防动物和鸟中肠道疾病的治疗组 合物，所说的疾病是由Lawsonia intracellularis或者类似的或以其 它方式相关的微生物引起或加剧的。本发明也涉及治疗和/或预防这样 的肠道疾病的方法，并涉及用于检测Lawsonia intracellularis或者 类似的或以其它方式相关的微生物的诊断试剂和方法。

在本文描述的末尾，收集了本说明书中以编号提及的出版物的详细 目录。在参考书目之后定义了本说明书中提及的核苷酸和氨基酸的序 列识别号(SEQ ID Nos.)。

在本说明书全文中，除非上下文有其它需要，“包含”一词将被理解 为意指包括所述的组分或整体或者组分或整体组，但不包括任何其它 的组分或整体或者组分或整体组。

肉类产业在澳大利亚(实际上在世界上大多数国家)是整个畜牧业的 重要方面。然而，由于作用于动物的疾病和公认的由动物携带的人类 疾病的影响，肉类产业经历着快速的经济衰退。因此，具有完全确定 的可用于处理人和动物中的感染或潜在感染的治疗、预防和诊断方法 是很重要的。

猪是肉类产业中的重要组成部分。然而，猪对宽范围的肠道疾病(统 称为猪增殖性肠道病(PPE))很敏感。这类肠道疾病以前已知为肠腺瘤 病综合症(1)，猪肠腺瘤病(PLA)，坏死性肠炎(2)，增殖性出血性肠道 病(3)，局部回肠炎(4)，出血性肠道综合症(5)，猪增殖性肠炎和 Campylobacter spp引发的肠炎(6)。

PPE有两种主要形式：非出血性形式(代表是经常导致生长迟缓和轻 微腹泻的肠腺瘤病)和出血性形式(通常是致命的，代表是增殖性出血 性肠道病(PHE)，此时远端小肠腔充血)。PPE在许多动物物种中被报 道过，包括猪(14)、仓鼠(7)、雪貂(15)、豚鼠(16)、兔子(17)及鸟类 物种(18)。

PPE的病原生物体是类似于弯曲杆菌属的生物体，本文称为 “Lawsonia intracellularis”(26)。此生物体以前也称为Ileal symbiont intracellularis(7)。其它病原体(例如弯曲杆菌属的不同 种)也可引起猪的类似于PPE的疾病(8)。

Lawsonia intracellularis是一种细胞内(可能是专性细胞内)细 菌。它只能用组织培养细胞进行体外培养(9，26)。患有PPE的猪以 多个变态未成熟小囊为特征，L.intracellular位于这些小囊细胞 的细胞质中。

猪产业中PPE是花费相当大的组成部分，尤其是家畜损失、药品花 费、猪生长率的下降及饲养费用的增长。PPE同样导致一些下游间接 花费，比如，用于处理抗生素残余物污染和防止这些生物体传播或携 带到其它动物或人的控制方法上的额外的雇工费用和环境费用。

当前控制PPE的策略依赖于抗生素的使用。然而，这一策略被认为 是短期的到中期的，尤其是由于政府的政策法规上的压力倾向于指向 仅受预防性抗生素支持的畜牧业实践。因此，需要研制出有效、安全 和低价的替代品，以替代使用的抗生素。同样需要将这种对抗生素的 替代延伸到感染其它动物(例如人)的类似生物体。

在导致本发明的工作中，发明人试图研制出用于预防和治疗动物及 鸟类PPE的疫苗。本发明的这些疫苗提供了对使用的抗生素的有效的 替代品，具有一定的养殖和医疗利益。

因此，本发明的一个方面提供了一种用于预防或治疗动物或鸟类由 Lawsonia intracellularis或者类似的或以其它方式相关的微生物引 起的感染的疫苗组合物，该疫苗组合物包含免疫原性的非致病形式的 L.intracellularis或相关微生物，或其免疫原性组分，以及适合兽 医或制药业用途的一种或多种载体、稀释剂和/或佐剂。

本发明在预防和/或治疗猪L.intracellularis感染中特别有用， 这一点以下将被例证。然而，通过了解本发明延伸到预防和治疗所有 动物(包括人和鸟类)由L.intracellularis或相关微生物引起的感 染，就可以明白这一点。本发明涉及的动物包括但不限于人、灵长类、 宠物(如猫、狗)、家养动物(如猪、绵羊、牛、马、驴、山羊)、实验 动物(如小鼠、大鼠、豚鼠、兔)和捕获的野生动物(如袋鼠、狐狸、鹿)。 本发明也包括鸟类，例如家禽、供娱乐的鸟和笼养鸟。

此外，本发明延伸到L.intracellularis所有分离物和亚型以及 Lawsonia属的其它种，或在核苷酸、生化、结构、生理和/或免疫相互 作用水平上与其相关的其它微生物。下文涉及到的“Lawsonia intracellularis”或其缩写“L.intracellularis”包括所有与此微生 物类似的或在其它方面相关的微生物。例如，相关微生物在染色体或 染色体外水平上可以与L.intracellularis染色体或染色体外因子内 的所有或部分核苷酸序列具有至少约60％，优选地至少约70％，更优选 地大于至少约80％的核苷酸序列相似性。例如，这些百分相似性可以与 SEQ ID NO：5所示的序列有关。这一序列是L.intracellularis染色 体的一部分。

因此，本发明的这一方面涉及用于预防或治疗猪因L. intracellularis引起的感染的疫苗组合物，该疫苗组合物包含免疫原 性的非致病形式的L.intracellularis或相关微生物，或其免疫原性 组分，以及适合兽医或制药业用途的一种或多种载体、稀释剂和/或佐 剂。

术语“免疫原性组分”指L.intracellularis(以减毒的非病原体或 杀死的形式)，或L.intracellularis的组分，包括由得自或来源于 L.intracellularis的DNA编码的并且能在猪中诱导保护性免疫反应 的肽、多肽或蛋白质。保护性免疫反应可以在体液和/或细胞水平上， 并且一般引起猪中PPE症状的实质上的减轻。该疫苗组合物包含有效 量的免疫原性成分，例如使得可以诱导保护性免疫反应。

按照本发明的这一方面，本发明提供了用于预防或治疗猪因L. intracellularis引起的感染的疫苗组合物，上述疫苗组合物包含在所 说的猪中诱导针对L.intracellularis或相关微生物的保护性免疫反 应有效量的至少一种L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组 分，该疫苗组合物还包含一种或多种适合兽医或制药业用途的载体、 佐剂和/或稀释剂。

所说的免疫原性组分可以是从L.intracellularis或其细胞培养 物中分离出的天然存在的肽、多肽或蛋白质、碳水化合物、脂类或核 酸(如DNA)或它们的任何组合体，或由得自或来源于L. intracellularis的DNA编码的重组形式的肽、多肽或蛋白质，或者 是上述肽、多肽或蛋白质的衍生物。

L.intracellularis的分离的组分是经过至少一个纯化步骤，或 者从含有L.intracellularis的细胞培养液或从L.intracellularis 细胞的裂解制剂经过至少部分浓缩后的组分。在通过分子量、免疫原 活性或其它合适的方法测定时，具有所需免疫原性性质的L. intracellularis的这一组分的纯度优选地至少约为40％，优选地至少 约为50％，较优选地至少约为70％，更优选地至少约为80-90％或更高(相 对于制剂中的其它组分而言)。

所说疫苗的一种特别有用的形式是全细胞疫苗，包括减毒的或其它 非致病形式的L.intracellularis或杀灭的细胞或其各种组分。

减毒的或非致病的细胞包括经过各种方法(例如，热、福尔马林或其 它化学处理、电击或高压)制备的杀灭的L.intracellularis细胞， 而且这些细胞在本发明的实施中非常有用。

按照本发明的这一方面，本发明提供了用于预防和/或治疗猪因L. intracellularis或相关微生物引起的感染的疫苗组合物，该疫苗组合 物包含L.intracellularis或相关微生物或者其免疫原性部分杀灭的 制剂，以及适合兽医或制药业用途的一种或多种载体、佐剂和/或稀释 剂。

在另一个实施方案中，使用了重组疫苗。此重组疫苗可以包含来源 于L.intracellularis的一种或多种重组肽、多肽或蛋白质，或者是 与来源于L.intracellularis的肽、多肽或蛋白质在免疫上相关的重 组分子，或者可以是一种融合分子，该分子既具有包含来源于L. intracellularis的肽、多肽或蛋白质的第一部分，又具有有用(例如， 作为载体分子或佐剂或免疫刺激分子，如细胞因子)的第二异源肽、多 肽或蛋白质。来源于L.intracellularis的特别有用的重组蛋白质包 括来源于L.intracellularis细胞表面或膜的肽、多肽或蛋白质，其 是在L.intracellularis代谢途径中的一种酶或是重新折叠和/或热 休克蛋白。在优选的实施方案中，所说的蛋白质是重新折叠的/热休克 蛋白，例如但不限于GroEL和GroES。其它推定的候选疫苗包括鞭毛 基体杆状蛋白、S-腺苷甲硫氨酸：tRNA核糖转移酶-异构酶、烯酰基 -(酰基-载体-蛋白)还原酶、N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶(自溶 素)，UOP-3-0-[3-羟基肉豆蔻酰]葡糖胺N-乙酰转移酶和葡糖二酸转 运蛋白。

按照优选的实施方案，本发明涉及用于预防和/或治疗猪因L. intracellularis或相关微生物引起的感染的疫苗组合物，该疫苗组合 物包含至少一种来源于L.intracellularis的重组肽、多肽或蛋白 质，并且其中所说的重组肽、多肽或蛋白质能够在猪体内诱导抗L. intracellularis的保护性免疫反应，此外，该疫苗组合物还包括一种 或多种适合兽医或制药业用途的载体、佐剂和/或稀释剂。

在特别优选的实施方案中，所说的重组蛋白是具有SEQ ID NO：2所 示的氨基酸序列的GroEL，或者是一种蛋白质，其具有与SEQ ID NO：2 所示的氨基酸序列的全部或部分至少约40％，至少约60％，或较优选的 至少约70％和甚至更优选的至少约80-90％或更大的相似性的预定的氨 基酸序列。

在另一个实施方案中，所说的重组分子是具有SEQ ID NO：4所示 的氨基酸序列的GroES，或者是这样一种分子，其具有与SEQ ID NO：4 所示的氨基酸序列的全部或部分至少约40％，至少约60％，或较优选的 至少约70％和甚至更优选的至少约80-90％或更大的相似性的氨基酸序 列。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：21所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：28所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：29所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：30所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：31所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：32所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：33所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

本发明的另一个实施方案包括和包含这样的肽、多肽或蛋白质，其 由SEQ ID NO：34所示的核苷酸序列或者与该序列具有至少40％的相似 形或能够在低严格性条件下与该序列杂交的核苷酸序列(该核苷酸序 列编码L.intracellularis或相关微生物的免疫原性组分)编码。

优选的百分相似性包括至少约50％或至少约60％或至少约70-90％。

这里提及的在42℃下的低严格条件包括和包含从至少约1％v/v 到至少约15％v/v的甲酰胺与从至少约1M到至少约2M的用于杂交的 盐，和至少约1M到至少约2M的用于洗涤条件的盐。另一个严格条件 可以在需要时采用，比如中等严格条件(它包括和包含从至少约16％v/v 到至少约30％v/v的甲酰胺与从至少约0.5M到至少约0.9M用于杂交的 盐，和从至少约0.5M到至少约0.9M的用于洗涤条件的盐)或者高严格 条件(它包括和包含从至少约31％v/v到至少约50％v/v的甲酰胺与从至 少约0.01M到至少约0.15M用于杂交的盐，和从至少约0.01M到至少 约0.15M用于洗脱条件的盐)。

本发明也包括肽、多肽或蛋白质，它们具有实质上如SEQ ID NO：7-8或 10或11或13-14或16-20或22-27所示的氨基酸序列者具有与它们的全部或 部分至少40％的相似性的氨基酸序列。优选的百分相似性包括至少约 50％或至少约60％或至少约70-90％。

本发明进一步延伸到一种疫苗，该疫苗包含一种重组疫苗载体， 所述疫苗载体编码来源于L.intracellularis或以上描述的相关微生 物的肽、多肽或蛋白质。该疫苗载体可以来源于病毒、酵母或细菌并 能以有效诱导保护性免疫反应的方式表达一段基因序列，该序列编码 得自L.intracellularis的肽、多肽或蛋白质。例如，可以制备一种 非致病细菌，其包含能够编码来自L.intracellularis的肽、多肽或 蛋白质的重组序列。该重组序列是在组成型或诱导性启动子控制下的 表达载体形式的。该细菌被允许定居在猪肠的适当位置，并被允许生 长和以足够诱导抗L.intracellularis的保护性免疫反应的量产生重 组肽、多肽或蛋白质。

在另一个可替的实施方案中，该疫苗可以是DNA疫苗，它包含编 码得自L.intracellularis的肽、多肽或蛋白质的DNA分子，其在足 够允许上述DNA瞬时表达的条件下注射到猪的肌肉组织或其他适当的 组织中，以产生诱导保护性免疫反应有效量的肽、多肽或蛋白质。

本发明的这些疫苗可以含有单一肽、多肽或蛋白质或一系列肽、 多肽或蛋白质，其涵盖了不同的或类似的表位。另外或可替地，可以 提供具有多表位的单一多肽。后一类型的疫苗被称为多价疫苗。多表 位包括两个或多个重复表位。

疫苗的形成方法是本领域公知的，并且可以方便地参考 Remington’s药物科学，第17版，Mack出版公司，Easton，宾西 法尼亚州，USA。    

因此，本发明涉及药物组合物或疫苗组合物，其包含产生免疫有 效量的以下一种或多种组分：

(i)得自L.intracellularis的免疫原性成分；

(ii)得自l.intracellularis的具有免疫原性的重组肽、多肽或蛋白 质；和/或；

(iii)得自L.intracellularis的全细胞或其成分或组分。

在下文中，上述成分被称为“活性成分”。这里所涉及的疫苗组 合物的活性成分在根据特定病情施用一定量时表现出极好的治疗活 性，例如在治疗和/或预防PPE中。例如，对于重组分子，可以施用从 约0.5微克到约20毫克的量。其他有用的有效量包括1微克到约10 毫克，10微克到约5毫克和50微克到约1毫克。其重要特征是施用 得足以诱导有效的保护性免疫反应。上述施用量可以固定施用或根据 每千克体重计算后施用。剂量可以调整以获得最好的治疗性反应。例 如，许多分开的剂量可以每天施用或根据治疗的病情的需要所示按比 例缩减剂量。加强施用也可能是需要的。    

所述活性成分可以用一种便捷的方式施用，比如通过口头、静脉 (此时是水溶性的)、肌肉、皮下、鼻内、皮内或塞药途径或植入(如 运用缓释技术)。根据施用途径，活性成分(其包括，例如肽、多肽或 蛋白质)可能需要包被在一定的物质中，以保护上述成分免受酶类、酸 类和其他可以灭活所说成分的自然条件的作用。

术语“佐剂”以其最广泛的含义使用，包括任何免疫刺激化合物(如 干扰素)。本文所谈及的佐剂包括间苯二酚、非离子表面活性剂(如聚 氧乙烯油醚和正十六烷基聚乙烯醚、弗氏完全和不完全佐剂。

活性化合物也可以在肠胃外或腹膜内施用。分散剂可以用甘油、 液态聚乙二醇和它们的混合物以及油制备。在一般贮存和使用条件 下，这些制剂包含有防腐剂，以防止微生物生长。

适用于注射用的药物形式包括无菌水溶液(此时为水溶性的)或分 散液和用来即时制备无菌注射液或分散液的无菌粉剂。除非药物形式 是固体或半固体的(如在运用缓释技术时)，否则所有情况下药物形式 都必须是液态的，以便易于注射。在任何情况下，药物必须在生产和 贮存条件下保持稳定并必须能防止微生物的污染作用。

载体可以是溶剂或分散介质，包括如：水、酒精、多元醇(如甘油、 丙二醇和液态聚乙二醇等)、它们的合适的混合物和植物油。适当的流 动性可以保持，例如，通过包衣(如licithin)、通过保持分散液所需 的颗粒大小和通过运用superfactants。防止微生物作用则可以通过 各种抗细菌和抗真菌剂实现，例如：羟苯甲酸酯、氯丁醇、酚、山梨 酸、乙基汞硫代水杨酸钠等。在许多情况中，其中最好包括等渗剂(如 糖类或氯化钠)是优选的。延长可注射组合物的吸收可通过运用延迟吸 收剂组合物而实现，这些吸收剂如单硬脂酸铝和明胶。

通过将所需量的活性化合物掺入到适当的溶剂中制备无菌的可注 射液，溶剂中含有上面列举的各种其他成分。如果需要，接着进行过 滤灭菌。一般来说，通过将各种灭菌活性成分掺入到无菌载体中制备 分散液，所说的无菌载体包括碱性分散介质和上述列举的所需的其他 成分。在用于制备无菌注射液的无菌粉剂的情况下，优选的制备方法 是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生具有活性成分和任何来自前面的 其无菌过滤液的其他所需成分的粉末。

载体和稀释剂包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗 真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。在疫苗中运用这些介质和药剂在本领 域中是熟知的。除任何常规介质或药剂不能与活性成分共存外，在治 疗组合物中运用它们是可以预期的。补充的活性成分也可以掺入到这 些组合物中。

本发明的另一个方面涉及针对来自L.intracellularis的肽、多 肽或蛋白质或其重组形式或非蛋白质分子(如碳水化合物)的抗体，这 些抗体可以是单克隆的或多克隆的，并可以选自针对L. intracellularis的天然产生的抗体或者是针对特定分子、全细胞或其 组分或片段特异性产生的抗体。本发明的抗体在免疫治疗和免疫接种 中特别有用，并且也可以用作为感染的诊断工具或用于监测免疫接种 或治疗方案的进程。

例如，重组L.intracellularis肽、多肽或蛋白质可以用于筛选 针对L.intracellularis的天然产生的抗体。另外，特异性抗体也可 以用于筛选L.intracellularis。用于这些测定的技术是本领域公知 的，包括，如夹心测定和ELISA。在下文中，免疫原性组分被认为包 括L.intracellularis的免疫原性组分并包括重组分子、全细胞和细 胞提取物。

按照本发明的这一方面，免疫原性组分在筛选针对L. intracellularis的抗体时特别有用，因此，本发明提供了一种用于检 测L.intracellularis感染的诊断方案。另外，采用针对免疫原性组 分所产生的抗体，可以直接就L.intracellularis筛选生物样品。

因此，本发明提供了一种用于诊断猪中L.intracellularis感染 的方法，该方法包括在足以使免疫原性组分-抗体复合物形成的条件 下，将来自所述猪的生物样品与结合免疫原性组分有效量的抗体接触 一段时间，并检测所述复合物。

免疫原性组分(或抗体)在猪血液、血清或其他体液中的存在可以 通过许多种免疫测定技术检测，例如在美国专利4,016,043、 4,424,279和4,018,653中所描述的那些。这包括非竞争型单位点和双 位点或“夹心”测定以及传统的竞争结合测定。夹心测定是最有用和最 常用的测定方法，也适用于本发明。存在各种类型的测定技术且都可 以用于本发明。

简言之，在典型的前述测定方法中，将免疫原性组分特异性抗体 固定在固体支持物上，形成第一复合物，将免疫原性组分的待测样品 引入其中与结合的分子接触。在温育足以使得可以形成抗体-免疫原性 组分第二复合物的一段适当的时间后，接着添加由能产生可检测信号 的报道分子标记的第二免疫原性组分抗体并温育使得足以可以形成第 三复合物的一段时间。洗掉所有没参加反应的物质，通过对报道分子 产生的信号的观察检测结合的标记抗体的存在。结果可以定性或定 量，定性是通过简单的可视信号观察而定量则是通过与对照样品比 较。本发明涉及一系列主题测定的变化方案，包括采用例如来源于L. intracellularis的重组肽、多肽或蛋白质测定L.intracellularis 抗体。

固体支持物典型地是玻璃或聚合物，最常用的聚合物有纤维素、 聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。固体支持物可以 是管、珠、圆盘或微碟状的或任何适于进行免疫测定的其他表面。结 合方法是本领域熟知的，一般包括交联共价结合或物理吸附分子到不 可溶载体上。

本说明书中使用的“报道分子”意指一种分子，由于其本身的化 学特性，其产生分析上可辨认的信号，这种信号使得可以检测抗原结 合抗体。检测可以是定性或定量的。在这一类型的测定中最常用的报 道分子是酶、荧光团或包含放射性核素的分子(即放射性同位素)。在 酶免疫测定的情况下，将酶缀合到第二抗体上，其一般是采用戊二醛 或过碘酸盐方法。然而，正如容易想到的，有大量的不同的缀合技术 存在，它们是本领域技术人员易于使用的。通常使用的酶包括辣根过 氧化物酶、葡糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶等。与特定的酶 一起使用的底物一般选择来在经相应的酶水解后产生可检测的颜色变 化。使用产生荧光的底物也是可能的，它可以产生荧光产物。

另外，荧光复合物(如荧光素和罗丹明)可以经化学方法偶联到抗 体上而不改变它们的结合能力。经特定波长光照活化后，荧光团标记 的抗体吸收光能，诱导分子的激发状态，然后可发射出特有颜色的光， 这种光可以用光学显微镜检测到。如在EIA中，使得荧光标记的抗体 可以结合到第一抗体-半抗原复合物上。在洗去未结合的试剂后，将剩 下的第三复合物暴露在适当波长的光下，可见荧光即表明存在兴趣半 抗原。免疫荧光和EIA技术都是本领域非常成熟的并特别适用于本发 明的方法，然而，其他报道分子如放射性同位素、化学发光或生物发 光分子也都可以使用。如何变更方法以适应于预期目的对技术人员来 说是显而易见的。

可以运用一系列遗传诊断测定，如聚合酶链反应(PCR)测定、杂交 测定或蛋白质截短测定。所有这些测定方法在本发明中都适用。

本发明进一步由下列非限制性附图和/或实施例描述。

在附图中：

图1是显示被接种的猪识别的L.intracellularis抗原的Western 分析的照片。第1道(395)用来源于已用福尔马林杀灭全L. intracellularis疫苗免疫三次的猪(395)的猪血清探查。第2至5道 (Y10，Y12，Y14，Y16)用第0天分别来源于猪Y10，Y12，Y14和Y16 获得的血清探查。

图2是第20天从猪Y1获得的小肠的照片。

图3是第20天从猪Y2获得的小肠的照片。

图4是第20天从猪Y4获得的小肠的照片。

下列单和三字母缩写用于表示氨基酸残基：

氨基酸          三字母缩写       单字母符号

丙氨酸             Ala               A

精氨酸             Arg               R

天冬酰胺           Asn               N

天冬氨酸           Asp               D

半胱氨酸           Cys               C

谷氨酰胺           Gln               Q

谷氨酸             Glu               E

甘氨酸             Gly               G

组氨酸             His               H

异亮氨酸           Ile               I

亮氨酸             Leu               L

赖氨酸             Lys               K

甲硫氨酸           Met               M

苯丙氨酸           Phe               F

脯氨酸             Pro               P

丝氨酸             Ser               S

苏氨酸             Thr               T

色氨酸             Trp               W

酪氨酸             Tyr               Y

缬氨酸             Val               V

任何残基           Xaa               X

                      序列鉴别号概述

SEQ ID NO.         描述

1            GroEL的核苷酸序列

2            GroEL的氨基酸序列

3            GroES的核苷酸序列

4            GroES的氨基酸序列

5            L.intracellularis组分的核苷酸序列

6            L.intracellularis组分的核苷酸序列

7和8         SEQ ID NO：6的氨基酸序列

9            L.intracellularis组分的核苷酸序列

10           SEQ ID NO：9的氨基酸序列(第一编码序列)

11           SEQ ID NO：9的氨基酸序列(第二编码序列)

12           L.infracellularis组分的核苷酸序列

13和14       SEQ ID NO：12的氨基酸序列

15           L.intracellularis组分的核苷酸序列

16-20        SEQ ID NO：15的氨基酸序列

21           L.intracellularis组分的核苷酸序列

22-27        SEQ ID NO：21的氨基酸序列

28           L.intracellularis组分的核苷酸序列

29           L.intracellularis组分的核苷酸序列

30           L.intracellularis组分的核苷酸序列

31           L.intracellularis组分的核苷酸序列

32           L.intracellularis组分的核苷酸序列

33           L.intracellularis组分的核苷酸序列

34           L.intracellularis组分的核苷酸序列

              实施例1  猪组织的来源

感染的猪肠

从由PPE天然感染的或者经实验感染的猪取得很厚的回肠(ilea) 段。采用特异性单克隆抗体的免疫荧光染色(10)证实回肠中L. intracellularis细菌的存在。合适的抗体的例子是可以从英国 Edinburgh大学获得的单克隆抗体IG4。

实施例2  从感染的猪回肠分离LAWSONIA INTRACELLULARIS细菌

通过过滤直接从PPE损伤抽提Lawsonia intracellularis细菌并 在Percoll(Pharmacia，Uppsala，瑞典)梯度上进一步纯化。从猪收 集感染的回肠，在于-80℃贮存之前，经组织学检测证实Lawsonia intracellularis细菌的存在。解冻回肠段，并从肠壁刮削大约8g受 感染的粘膜。采用Sorvall综合性混合器(omnimixer)在半速下运行10  秒以40ml无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)匀化粘膜。将这一悬浮液在 2000xg下离心4分钟。弃去上清液，将细胞沉淀重悬于40ml PBS中并 再离心。将这一洗涤步骤重复两次。把细胞沉淀重悬于20ml PBS中， 并且在全速下运行1分钟进行匀化，以释放L.intracellularis细菌。

将这一匀浆在1000xg下离心4分钟，给出包含匀化的上皮细胞和 肠道细菌的粗混合物的沉淀。采用具有3μm，1.2μm和0.8μm孔径大小 的滤膜(Millipore公司，MA，美国)过滤上清液。滤液在8000xg下离 心30分钟，产生L.intracellularis细菌的少量沉淀。按照如下方 法采用45％自形成珀可梯度进一步纯化L.intracellularis细菌：经 倒置将2ml细菌制剂混合进30ml 45％自形成珀可(Pharmacia LKB， Uppsala，瑞典)梯度液(45％v/v珀可，150mM NaCl)。于4℃下在 20,000rpm下，在Sorval离心机中用SS34转鼓离心该梯度液30分 钟。通常，一些带在梯度液内形成。收集包含L.intracellularis细 菌的带(通常位于离管底大约10-20mm处)，用PBS使体积达到16ml。 然后在8000rpm下离心该溶液15分钟。在重悬于最终体积约1ml中之 前用PBS洗涤所形成的沉淀。

实施例3  LAWSONIA INTRACELLULARIS基因组DNA的纯化

通过Anderson等(11)和Sambrook等(12)描述的方法，从珀可- 梯度纯化的Lawsonia intracellularis细菌(从受感染的猪回肠刮削 回收的(实施例2))提取基因组DNA。

              实施例4  基因组文库的免疫筛选

以每150mm L-肉汤琼脂平板2,000个噬斑-形成单位(pfu)将λZAP II L.intracellularis基因组文库平板接种到大肠杆菌XLI-Blue(23) 细胞菌苔上。用在Protoblot技术手册(Promega，WI，USA)中所描述 的方法以兔抗L.intracellularis血清筛选该文库。用包含10mM Tris HCl(pH8.0)，150mM NaCl，0.05％吐温20，1％w/w明胶的缓冲液封 阻滤膜。挑取在初步筛选中鉴定的阳性噬斑，以较低的密度再接种， 并且再筛选，直到单个的阳性噬斑被鉴别。

            实施例5  cDNA插入物的分离和测序

通过在由Stratagene(CA，美国)推荐的条件下体内切除 pBluescript噬粒分离阳性λZAPII噬菌体克隆的噬粒DNA。如制造厂 商(应用生物系统)所推荐的，用Birnboim和Doly的方法提取质粒DNA 并由链终止法(21)测序cDNA插入序列，或者用PEG-沉淀法提取质粒 DNA并由染料-终止剂法循环-测序。

                    实施例6  抗血清

在兔和猪中产生针对L.intracellularis的抗血清。用与双-乳 剂混合的珀可梯度-纯化的L.intracellularis细菌的制剂肌内注射 兔，所说的双乳剂是经与油佐剂(弗氏不完全佐剂，CSL有限公司，墨 尔本，澳大利亚)，然后与吐温80增强剂一起加工制备的。分开在4 周给予两次3ml注射(含有9mg蛋白质)。在免疫前和第二次注射后两 周从边际耳静脉收集血样。

通过肌内注射珀可梯度-纯化的L.intracellularis细菌(如用于 兔的，用弗氏不完全佐剂制备的)超免疫6-周龄猪(395)。分开在4周 施用所制备的抗原的三次注射，在最后一次注射后两周从颈静脉采 血。在室温和轻轻搅拌下用100μl大肠杆菌DH5α(24)裂解物预吸收稀 释的猪血清(1ml，1∶200)1小时。所说的裂解物是由冻结-解冻大肠杆 菌在PBS中的悬浮液制备的。

实施例7  十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)

在于1％w/v SDS-12％w/v PAGE垂直平板凝胶(13)上电泳分离溶解 的蛋白质之前，将蛋白质样品重悬于50μl样品缓冲液(62.4mM HCl， 2％w/v SDS，10％v/v甘油，5％v/v 20巯基乙醇，0.002％溴酚蓝， pH6.8)中，并且加热至95℃5分钟。

               实施例8  western印迹分析

在含有CAPS(3-[环己氨基]-1-丙烷磺酸，pH11，西格玛，MI， 美国)和10％v/v甲醇的缓冲液中，在100V下电泳1小时将蛋白质转移 到在Trans-印迹池(BioRad，CA，美国)中的Immobilon-P(Millipore 公司，MA，美国)膜上。然后在室温和轻轻摇动下用在PBS中的5％w/V Blotto(Diploma脱脂奶粉，墨尔本，澳大利亚)封阻膜30分钟。接着 将滤膜转移到用5％w/v Blotto，PBS稀释的抗血清上。以1∶200稀释 预吸收的猪抗血清。将滤膜在猪抗血清中温育1小时，其后用PBS洗 涤3次。

在1∶2000稀释度下使用HRP缀合的抗-猪免疫球蛋白(DAKO，CA， 美国)。将增强的化学发光(ECL，Amersham，IL，美国)用来区别L. intracellularis蛋白质。在ECL检测之前，将印迹洗涤3次，每次7 分钟。在显影之前，使滤膜对放射自显影胶片(Agfa，NJ，美国)曝光 不足1分钟。

              实施例9  GroEL和GroES的鉴别

采用在实施例5中详细描述的方案测序按照实施例4中所描述的 免疫筛选方法发现为阳性的克隆。一个分离的克隆代表GroEL蛋白质。 SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2中显示了GroEL的核苷酸序列与对应的 氨基酸序列。SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4中显示了GroES的核苷 酸序列与对应的氨基酸序列。

      实施例10  猪粪便中的LAWSONIA INTRACELLULARIS

                  细胞的免疫荧光检测

用棉签取粪便，然后将样品涂布到玻片上。在使其风干10分钟之 后，通过加热到60℃约10秒钟使涂布物热固定。然后用PBS冲洗玻 片。加入30μl量的1/200稀释的含有IG4单克隆抗体(参见实施例1) 的小鼠腹水，在玻片上盖上玻璃片，在室温下温育玻片40分钟。移去 覆盖的玻璃片，并洗涤玻片(PBST，7分钟，3次)。加入30μl量的 1/40稀释的FITC缀合的抗小鼠抗血清(Silenus，墨尔本，澳大利亚)， 在玻片上盖上玻璃片，在室温下温育玻片40分钟。移去覆盖的玻璃片， 并洗涤玻片(PBST，7分钟，3次)。将玻片最终在PBS中冲洗。加入1 滴10％v/v甘油PBS，在玻片上盖上玻璃片。使用Lietz laborlux S 显微镜在高倍(X1200)下于340nm观察荧光细菌。计数20个区域，结 果以每一高倍区域的L.intracellularis细菌的平均数表示。

      实施例11  福尔马林-杀灭的L.INTRACELLUSARIS疫苗

将珀可梯度纯化的细菌L.intracellularis沉淀重悬于1％福尔马 林盐水中，在4℃温育过夜。然后将珀可梯度-纯化的L. intracellularis细菌混合进双-乳剂中，所说的双乳剂是通过用油佐 剂(弗氏不完全佐剂，联邦血清实验室，墨尔本，澳大利亚)，然后用 吐温80增强剂加工制备的。

                  实施例12  接种方案

从Pig Improvement公司养猪场购得十二头断奶猪(与Large White杂交的Landrace)，用新-土霉素(0.25g/kg)处理5天。七天后 (第-40天)，如所描述的方法接种猪Y10，Y12，Y14和Y16。在第 -34天，用长效土霉素治疗猪Y3，Y11和Y13的脓肿。

将十二头猪分成三组，并按照如下进行处理：

第1组  感染的对照

将四头猪(耳签号Y1-Y4)与接种的猪一起圈养。

第2组  全细菌疫苗

在第-33和-12天，用福尔马林杀灭的L.intracellularis细菌(用 0.5ml PBS/弗氏不完全佐剂乳化的)免疫四头猪(耳签号Y10，Y12， Y14和Y16)。

第3组  未感染的对照

四头猪(耳签号Y9，Y11，Y13和Y15)不接受处理，并且在与接 种的猪和感染的对照猪分开的区域圈养。

              实施例13  感染猪的口头激发

从如实施例1所描述的猪收集感染的回肠，在于-80℃贮存之前， 经组织学分析证实L.intracellularis的存在。解冻回肠段，从肠壁 刮削下约150g感染的粘膜。采用Sorvall综合性混合器在半速下运行 20秒以等体积的无菌PBS匀化粘膜。将这一悬浮液用无菌PBS稀释2 倍，以形成激发悬液。

在第0天，以5％w/v碳酸氢钠溶液(10ml/kg)对第1组和第2组的 猪用药，接着以30ml激发悬液用药。在第1天和第2天重复此操作。

从第11天起，在各猪粪便中的L.intracellularis的数量用免疫 荧光监测。监测猪的疾病征兆和排出的L.intracellularis细菌。由 于伦理的原因，宰杀掉排出每个高放大率区域100个细菌和腹泻的猪。

在第22天，采用温和的方式处死存活的猪，回收小肠。从接近回 盲肠连接处5cm和17cm除去两段小肠。将这些段在10％v/v福尔马林 中固定，进行蜡封，并将它们送到不知情的兽医病理学家进行分析。

实施例14被接种的猪识别的LAWSONIA INTRACELLULARIS蛋白质

通过Western印迹分析，接着通过ECL(Amersham，IL，美国)检 测(如实施例8所描述的)分析由猪产生的针对接种后的L. intracellularis蛋白质的抗体。结果在图1中显示。接种猪产生针对 一系列L.intracellularis蛋白质的抗体。大多数所识别的免疫显性 蛋白质为大约62.7Kda，58.7Kda，57.2Kda，44Kda，36.7Kda 和两种来自24-26Kda和22-23.5Kda的涂抹物。次要的免疫活性带大 约具有下列分子量：67Kda，52.5Kda，50.5Kda，50Kda，48.2 KDa，47.9Kda，44.7Kda，43.5Kda，42.5Kda，41.5Kda， 40.5Kda，39Kda，35.3Kda，17Kda，15.5Kda，12Kda和7Kda。 所识别的蛋白质的分子量会有高达5％的变化，这取决于用于评价的方 法。

     实施例15  在试验期间L.INTRACELLULARIS细菌从猪排出

在例号12(Y1，Y2和Y4)中，口头激发后的第19天，1组的3头 猪(感染的对照)在其粪便中排出的L.intracellularis细菌每个高放 大率区域超过100个(表1)。这些猪的2头(Y2和Y4)具有带血的腹泻。 在第20天温和地处死所有三头猪。在感染试验过程中，Y3排出低水 平的L.intracellularis细菌。Y3的最大细菌排出量是每个高放大 率区域16个细菌。

用实施例12中提出的全细菌接种的3组中的所有猪所排出的L. intracellularis细菌每个高放大率区域都不超过3个。与1组猪比 较，通过接种猪，接种福尔马林杀灭的L.infracellularis疫苗降低 L.infracellularis细菌的总细菌排出达98.5％。

在试验过程中，3组猪(未感染的对照)没有排出任何L. infracellularis细菌。

每头猪排出的L.infracellulari细菌的结果示于表1中。

          实施例16  试验A的肉眼可见的病理特征

1组  感染的对照

Y1   约5cm末端回肠非常厚。经肉眼观察，没有其它PPE体征是明 显的。研究结果与肠腺瘤病相一致(参见图2)

Y2   发现肠非常厚，绒膜有特征性脑形形式(图3)。涉及肠的2.5 米的范围。发现肠内腔含有新鲜血液，并且纤维蛋白的脱落明显。增 殖性出血性肠病。

Y3  没有肉眼可见的PPE体征是明显的。

Y4  发现肠具有坏死性肠炎(图4)。粘膜表面由纤维蛋白的假膜代 替。肠系膜水肿非常明显。涉及肠的2.0米的范围。

2组  全L.intracellularis细胞疫苗

Y10  没有肉眼可见的PPE体征。

Y12  没有肉眼可见的PPE体征。

Y13  没有肉眼可见的PPE体征。

Y13  没有肉眼可见的PPE体征。

3组  未感染的对照

Y9  没有肉眼可见的PPE体征。

Y11  没有肉眼可见的PPE体征。

Y13  没有肉眼可见的PPE体征。

Y15  没有肉眼可见的PPE体征。

           实施例17  试验的病理组织学报告

报告基于Jubb等(20)中所建立的病理组织学描述。

1组  感染的对照组

Y1  猪肠腺瘤病(PIA)的许多微病灶/汇合损伤与派伊尔氏淋巴集 结相关。

Y2  猪肠腺瘤病的严重的普遍(环形)损伤。

Y3  没有PIA的结论性证据。稀疏的微病灶损伤，暗示非特异性 温和反应性(恢复性)增生(而非腺瘤病)。

Y4  PIA严重的普遍(环形)损伤。

2组  全L.intracellularis细胞疫苗

Y10  没有PIA的结论性证据。

Y12  没有PIA的结论性证据。

Y14  没有PIA的结论性证据。

Y16  没有PIA的结论性证据。PIA的可能的单一微病灶与派伊尔 氏淋巴集结相关。    

3组  未感染的对照

Y11  没有PIA的结论性证据。

Y9  没有PIA的结论性证据。

Y13  没有回收肠，因为在第15天跛行，猪被宰杀掉。

Y15  不可能诊断，由于差的品质段。 实施例18  利用实验血清从接种的猪免疫筛选L.INTRACELLULARIS文

                           库

按照实施例3中的描述纯化L.intracellularis基因组DNA。以 限制性核酸内切酶Sau3A(Promega)部分消化DNA，并且连接到λZAPII Express(Stratagene)上。将λ文库以每150Mm L-肉汤琼脂平板10,000 pfu的密度平板接种到大肠杆菌XLI-Blue细胞菌苔上。如实施例4的 描述，用Y12的血清筛选文库。如实施例11和12的描述用福尔马林 杀灭的L.intracellularis免疫猪Y12。如实施例14所述，接种的 猪产生针对一系列L.intracellularis蛋白质的抗体。鉴别表达L. intracellularis蛋白质的一些噬菌体克隆。

     实施例19 L.INTRACELLULARIS表达噬菌体克隆的分析

在制造商(Stratagene)推荐的条件下，经体内切割分离阳性λZAP II Express噬菌体克隆的噬粒DNA。通过碱性裂解(如Sambrook等(12) 的描述)抽提供限制性分析的质粒DNA，并且如制造商(Boehringer Mannheim)的推荐，用高纯质粒试剂盒自动测序。经自动测序(ABI Biosystems)的染色-终止子法完成插入物的DNA测序。所确定的序列 在SEQ ID NOS：5-34中显示(参见实施例20)。

          实施例20  L.INTR4 CELLULARIS组分的鉴定

采用BLAST(27)鉴别DNA分子的序列类似性，所说的DNA分子编码 实施例18和19限定的推定的疫苗候选者。核苷酸序列SEQ ID NO：6 和其对应的氨基酸序列SEQ ID NO：7-8具有与鞭毛基体杆状蛋白质的序 列相似性。SEQ ID NO：9(核苷酸)和SEQ ID NO：10和11(氨基酸)具 有与自溶素的序列相似性。SEQ ID NO：12(核苷酸)和SEQ ID NO：13-14 (氨基酸)具有与S-腺苷甲硫氨酸：tRNA核糖基转移酶-异构酶 (queuosine生物合成蛋白质queA)的序列相似性。

SEQ ID NO：5(核苷酸)和SEQ ID NO：16-20(氨基酸)显示出与烯 酰-(酰基-载体-蛋白质)还原酶的序列相似性。SEQ ID NO：21(核苷 酸)和SEQ ID NO：22-27(氨基酸)显示出与葡糖二酸转运蛋白的序列相似 性。编码推定的疫苗候选者的其它核苷酸序列是SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：31，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34。

本领域技术人员会认识到本文所描述的本发明易于进行变化和修 改，而不限于具体描述的那些。应当理解，本发明包括所有这样的变 化和修改。本发明也包括被说明书中提及的或暗示的所有步骤、特征、 组合物和化合物(单一的或集合的)，以及任何两个或多个所说步骤或 特征的任何或所有组合。

表1     32A     32B 表1     接种      激发     -40天 -33天 -26天 -12天 0天 1天 2天 11天 12天 13天 14天 15天 16天 17天  18天 19天 1感染的                                 1+   1+   0    0    5+   10+  50+   100+ 15 对照 2感染的                                 0    1+   1+   1+   3+   1+   70+   100+ 100 对照 3感染的                                 0    0    0    0    0    0    1+    4    16 对照 4感染的                                 1+   0    0    10+  0    5+   60+   200+ 80 对照 20天 21天 22天 5cm的增厚   PHE 2.5M   1+   0    1   PHE 2.0M 10全细 1ml杀灭的全细胞1ml杀灭的全细胞   0    0    0    0    0    1+   1+    0    0 菌接种 的猪 12全细 1ml杀灭的全细胞1ml杀灭的全细胞   1+   0    0    0    0    2+   0     0    0 菌接种 的猪 0    0    0     0    0    0 14全细  1ml杀灭的全细胞1ml杀灭的全细胞    0    0    0    0   0    1+   0    ＜1  ＜1 菌接种 的猪 16全细  1ml杀灭的全细胞1ml杀灭的全细胞    0    0    0    0   0    0    0    3    ＜1 菌接种 的猪     0    0    0         0    0    0 9未感染                                   0    0    0    0   0    0    0    0    0 的对照 11未感                                    0    0    0    0   0    0    0    0    0 染的对 照 13未感                                    0    0    0    0  杀灭的道 染的对 照 15未感                                    0    0    0    0   0    0    0    0    0 染的对 照     0    0    0       0    0    0               0    0    0

                          参考文献

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5.O′Neil，I.P.A.(1970)兽医学档案87：742-747。

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7.Stills，H.F.(1991).感染和免疫学59：3227-3236。

8.Gebhert，C.J.，Ward，G.E.，Chang，K.和Kurtz，H.J.(1983).美 国兽医学研究杂志44：361-367。

9.Lawson，G.H.K.，McOrist，S.，Jansi，S.和Mackie，R.A.(1993) 临床微生物学杂志31：1136-1142。

10.McOrist，S.，Bold，R.，Lawson，G.H.K.和McConnell，I.(1987) 兽医学档案121：421-422。

11.Anderson，B.J.，M.M.Bills，J.R.Egerton，和J.S.Mattick. (1984)细菌学杂志160：748-754。

12.Sambrook，J.，E.F.Fritsch，和T.Maniatis.(1989)分子克隆， 实验室手册，第二版，冷泉港实验室，冷泉港，N.Y。

13.Laemmli，U.K.(1970)自然227：680-685。

14.McOrist，S，Jasni，S，Mackie，RA，MacIntyre，N，Neef，N.和 Lawson GHK(1993)感染和免疫学61：4286-4292。

15.Fox，JG，Murphy，JC，Otto，G Pecquet-Goad，ME，Larson，QHK 和Scott JA(1989)兽医病理学26：515-517。

16.Elwell，MR，Chapman，AL和Frenkel，JK(1981)兽医病理学18： 136-139。

17.Schodeb，TR和Fox JG(1990)兽医病理学27：73-80。

18.Mason，RW，Monkton，P和HasseD(1995)澳大利亚兽医学杂志(已 出版)。

19.Manthorpe，M，Cornefert-Jensen，F.，Hartikka，J.，Felgner， J，Rundell，A，Margalith，M和Dwarki，V.(1993)人类基因治疗4： 419-431。

20.Jubb KVC，Kennedy，PC和Palmer，NC(1993).家养动物病理学， 第四版，San Diego，CA，学院出版社pp229-233。

21.Birnboim，HC和Doly J(1979)核酸研究7：1513。

22.Sanger，F，Nicklen，S和Coulson，AR(1977)国家科学院院报74： 5463。

23.Block，WO，Fernandes，JM和Short，JM(1987)生物技术5： 376-79。

24.Woodcock，DM等(1989)核酸研究17：3469-78。

25.Studier，FW等(1990)酶学方法185：60-89。

26.McOrist，S等(1995)国际系统细菌学杂志45：820-825。

27.Gish，W和States，D.J.(1993)自然遗传学3：266-272。

                                    序列表

(1)GENERAL INFORMATION：

    (i)APPLICANT：AGRICULTURE VICTORIA SERVICES PTY LTD AND PIG RESEARCH AND

                DEVELOPMENT CORPORATION

    (ii)TITLE OF INVENTION：THERAPEUTIC AND DIAGNOSTIC COMPOSITIONS

    (iii)NUMBER OF SEQUENCES：34

    (iv)CORRESPONDENCE ADDRESS：

         (A)ADDRESSEE：CCPIT PATENT AND TRADEMARK LAW OFFICE

         (B)STREET：VANTONE NEW WORLD PLAZA，8TH FLOOR

         (B)STREET：2 FUCHENGMENWAI STREET

         (C)CITY：BEIJING

         (D)STATE：

         (E)COUNTRY：CHINA

         (F)ZIP：100037

    (v)COMPUTER READABLE FORM：

         (A)MEDIUM TYPE：Floppy disk

         (B)COMPUTER：IBM PC compatible

         (C)OPERATING SYSTEM：PC-DOS/MS-DOS

         (D)SOFTWARE：PatentIn Release #1.0，Version #1.25

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         (B)FILING DATE：30-NOV-1995

    (viii)ATTORNEY/AGENT INFORMATION：

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 50                  55                  60 AAG TTT GAA AAT ATG GGC GCT CAA ATG GTT AAA GAA GTA GCT CCC AAA    240 Lvs Phe Glu Asn Met Gly Ala Gln Met Val Lys Glu Val Ala Pro Lys  65                  70                  75                  80 ACT AGC GAT ATT GCT GGT GAT GGA ACT ACA ACA GCA ACA GTC CTT GCA    288 Thr Ser Asp Ile Ala Gly Asp Gly Thr Thr Thr Ala Thr Val Leu Ala

             85                  90                  95 CAA GCT ATT TAT CGT GAA GGT GTA AAA CTT GTA GCA GCT GGT CGT AAT    336 Gln Ala Ile Tyr Arg Glu Gly Val Lys Leu Val Ala Ala Gly Arg Asn

        100                 105                 110 CCT ATG GCC ATT AAA CGT GGC ATA GAT AAA GCT GTT GTT GCT GTT ACT    384 Pro Met Ala Ile Lys Arg Gly Ile Asp Lys Ala Val Val Ala Val Thr

    115                 120                 125 AAA GAA CTA AGC GAC ATT ACA AAG CCT ACT CGT GAC CAA AAA GAA ATA    432 Lys Glu Leu Ser Asp Ile Thr Lys Pro Thr Arg Asp Gln Lys Glu Ile

130                 135                 140 GCT CAA GTT GGA ACC ATT TCT GCA AAC TCT GAT ACA ACA ATA GGT AAT         480 Ala Gln Val Gly Thr Ile Ser Ala Asn Ser Asp Thr Thr Ile Gly Asn 145                 150                 155                 160 ATC ATA GCT GAA GCT ATG GCT AAA GTT GGA AAA GGA GGT GTT ATC ACA         528 Ile Ile Ala Glu Ala Met Ala Lys Val Gly Lys Gly Gly Val Ile Thr

            165                 170                 175 GTT GAG GAA GCT AAA GGT CTT GAA ACT ACA TTA GAT GTG GTT GAA GGA         576 Val Glu Glu Ala Lys Gly Leu Glu Thr Thr Leu Asp Val Val Glu Gly

        180                 185                 190 ATG AAG TTT GAC CGT GGC TAC CTC TCT CCA TAC TTT GTA ACT AAT CCT         624 Met Lys Phe Asp Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Tyr Phe Val Thr Asn Pro

    195                 200                 205 GAG AAA ATG GTT TGT GAA CTT GAT AAC CCT TAT ATC CTT TGT AAT GAG         672 Glu Lys Met Val Cys Glu Leu Asp Asn Pro Tyr Ile Leu Cys Asn Glu

210                 215                 220 AAA AAG ATT ACT AGC ATG AAA GAC ATG CTA CCA ATC TTA GAA CAA GTT         720 Lys Lys Ile Thr Ser Met Lys Asp Met Leu Pro Ile Leu Glu Gln Val 225                 230                 235                 240 GCT AAA GTA AAC CGT CCA CTC CTT ATT ATT GCT GAA GAC GTA GAA GGT         768 Ala Lys Val Asn Arg Pro Leu Leu Ile Ile Ala Glu Asp Val Glu Gly

            245                 250                 255 GAA GCA CTT GCA ACA CTT GTA GTC AAT AAG CTC CGT GGA GCA CTC CAA         816 Glu Ala Leu Ala Thr Leu Val Val Asn Lys Leu Arg Gly Ala Leu Gln

        260                 265                 270 GTT GTA GCC GTA AAA GCT CCT GGT TTT GGT GAA CGC CGT AAA GCT ATG         864 Val Val Ala Val Lys Ala Pro Gly Phe Gly Glu Arg Arg Lys Ala Met

    275                 280                 285 CTT GAA GAT ATT GCT ATC CTT ACT GGA GGA GAA GCA ATA TTT GAA GAT         912 Leu Glu Asp Ile Ala Ile Leu Thr Gly Gly Glu Ala Ile Phe Glu Asp

290                 295                 300 CGT GGT ATA AAG CTT GAA AAT GTA AGC TTG TCT TCT TTA GGA ACA GCT         960 Arg Gly Ile Lys Leu Glu Asn Val Ser Leu Ser Ser Leu Gly Thr Ala 305                 310                 315                 320 AAA CGT GTA GTT ATT GAC AAA GAA AAT ACT ACT ATC GTT GAT GGT GCT        1008 Lys Arg Val Val Ile Asp Lys Glu Asn Thr Thr Ile Val Asp Gly Ala

            325                 330                 335 GGA AAA TCA GAA GAT ATT AAA GCT CGA GTT AAA CAA ATT CGT GCA CAA        1056 Gly Lys Ser Glu Asp Ile Lys Ala Arg Val Lys Gln Ile Arg Ala Gln

        340                 345                 350 ATT GAA GAA ACA AGC TCA GAT TAT GAT CGT GAA AAA CTT CAA GAA CGT        1104 Ile Glu Glu Thr Ser Ser Asp Tyr Asp Arg Glu Lys Leu Gln Glu Arg

    355                 360                 365 CTT GCA AAA CTT GTT GGT GGA GTA GCT GTT ATC CAT GTT GGA GCT GCT        1152 Leu Ala Lys Leu Val Gly Gly Val Ala Val Ile His Val Gly Ala Ala

370                 375                 380 ACT GAA ACT GAA ATG AAA GAG AAG AAG GAT CGT GTA GAA GAT GCT CTA        1200 Thr Glu Thr Glu Met Lys Glu Lys Lys Asp Arg Val Glu Asp Ala Leu 385                 390                 395                 400 AAT GCA ACA AGA GCT GCG GTT GAA GAA GGT ATT GTC CCT GGT GGT GGT        1248 Asn Ala Thr Arg Ala Ala Val Glu Glu Gly Ile Val Pro Gly Gly Gly

            405                 410                 415 ACT GCT TTT GTC CGC TCC ATT AAA GTC CTT GAT GAT ATT AAA CCT GCT        1296 Thr Ala Phe Val Arg Ser Ile Lys Val Leu Asp Asp Ile Lys Pro Ala

        420                 425                 430 GAT GAT GAT GAA CTT GCT GGA CTT AAT ATC ATC CGT CGT TCT CTT GAA        1344 Asp Asp Asp Glu Leu Ala Gly Leu Asn Ile Ile Arg Arg Ser Leu Glu

    435                 440                 445 GAG CCT TTA CGT CAA ATT GCT GCA AAT GCT GGC TAT GAA GGT TCT ATT        1392 Glu Pro Leu Arg Gln Ile Ala Ala Asn Ala Gly Tyr Glu Gly Ser Ile

450                 455                 460 GTT GTA GAA AAA GTT CGT GAA CCA AAA GAT GGT TTT GGA TTT AAT GCT        1440 Val Val Glu Lys Val Arg Glu Pro Lys Asp Gly Phe Gly Phe Asn Ala 465                 470                 475                 480 GCA TCA GGA GAA TAT GAA GAC CTT ATT AAA GCT GGT GTC ATT GAT CCT        1488 Ala Ser Gly Glu Tyr Glu Asp Leu Ile Lys Ala Gly Val Ile Asp Pro

            485                 490                 495 AAA AAA GTT ACA CGT ATT GCA TTA CAA AAT GCA GCA TCA GTA GCC TCC        1536 Lys Lys Val Thr Arg Ile Ala Leu Gln Asn Ala Ala Ser Val Ala Ser

        500                 505                 510 TTA CTT CTA ACT ACA GAA TGC GCT ATT GCT GAA AAA CCA GAA CCT AAA        1584 Leu Leu Leu Thr Thr Glu Cys Ala Ile Ala Glu Lys Pro Glu Pro Lys

    515                 520                 525 AAA GAT ATG CCT ATG CCT GGC GGT GGT ATG GGT GGT ATG GGT GGT ATG    1632 Lys Asp Met Pro Met Pro Gly Gly Gly Met Gly Gly Met Gly Gly Met

530                 535                 540 GAC GGT ATG TAC TAG                                                1647 Asp Gly Met Tyr 545 (2)INFORMATION FOR SEQID NO：2：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：548 amino acids

    (B)TYPE：amino acid

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：protein

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：2： Met Ala Ser Lys Glu Ile Leu Phe Asp Ala Lys Ala Arg Glu Lys Leu   1               5                  10                  15 Ser Arg Gly Val Asp Lys Leu Ala Asn Ala Val Lys Val Thr Leu Gly

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 50                  55                  60 Lys Phe Glu Asn Met Gly Ala Gln Met Val Lys Glu Val Ala Pro Lys  65                  70                  75                  80 Thr Ser Asp Ile Ala Gly Asp Gly Thr Thr Thr Ala Thr Val Leu Ala

             85                  90                  95 Gln Ala Ile Tyr Arg Glu Gly Val Lys Leu Val Ala Ala Gly Arg Asn

        100                 105                 110 Pro Met Ala Ile Lys Arg Gly Ile Asp Lys Ala Val Val Ala Val Thr

    115                 120                 125 Lys Glu Leu Ser Asp Ile Thr Lys Pro Thr Arg Asp Gln Lys Glu Ile

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    195                 200                 205 Glu Lys Met Val Cys Glu Leu Asp Asn Pro Tyr Ile Leu Cys Asn Glu

210                 215                 220 Lys Lys Ile Thr Ser Met Lys Asp Met Leu Pro Ile Leu Glu Gln Val 225                 230                 235                 240 Ala Lys Val Asn Arg Pro Leu Leu Ile Ile Ala Glu Asp Val Glu Gly

            245                 250                 255 Glu Ala Leu Ala Thr Leu Val Val Asn Lys Leu Arg Gly Ala Leu Gln

        260                 265                 270 Val Val Ala Val Lys Ala Pro Gly Phe Gly Glu Arg Arg Lys Ala Met

    275                 280                 285 Leu Glu Asp Ile Ala Ile Leu Thr Gly Gly Glu Ala Ile Phe Glu Asp

290                 295                 300 Arg Gly Ile Lys Leu Glu Asn Val Ser Leu Ser Ser Leu Gly Thr Ala 305                 310                 315                 320 Lys Arg Val Val Ile Asp Lys Glu Asn Thr Thr Ile Val Asp Gly Ala

            325                 330                 335 Gly Lys Ser Glu Asp Ile Lys Ala Arg Val Lys Gln Ile Arg Ala Gln

        340                 345                 350 Ile Glu Glu Thr Ser Ser Asp Tyr Asp Arg Glu Lys Leu Gln Glu Arg

    355                 360                 365 Leu Ala Lys Leu Val Gly Gly Val Ala Val Ile His Val Gly Ala Ala

370                 375                 380 Thr Glu Thr Glu Met Lys Glu Lys Lys Asp Arg Val Glu Asp Ala Leu 385                 390                 395                 400 Asn Ala Thr Arg Ala Ala Val Glu Glu Gly Ile Val Pro Gly Gly Gly

            405                 410                 415 Thr Ala Phe Val Arg Ser Ile Lys Val Leu Asp Asp Ile Lys Pro Ala

        420                 425                 430 Asp Asp Asp Glu Leu Ala Gly Leu Asn Ile Ile Arg Arg Ser Leu Glu

    435                 440                 445 Glu Pro Leu Arg Gln Ile Ala Ala Asn Ala Gly Tyr Glu Gly Ser Ile

450                 455                 460 Val Val Glu Lys Val Arg Glu Pro Lys Asp Gly Phe Gly Phe Asn Ala 465                 470                 475                 480 Ala Ser Gly Glu Tyr Glu Asp Leu Ile Lys Ala Gly Val Ile Asp Pro

            485                 490                 495 Lys Lys Val Thr Arg Ile Ala Leu Gln Asn Ala Ala Ser Val Ala Ser

        500                 505                 510 Leu Leu Leu Thr Thr Glu Cys Ala Ile Ala Glu Lys Pro Glu Pro Lys

    515                 520                 525 Lys Asp Met Pro Met Pro Gly Gly Gly Met Gly Gly Met Gly Gly Met

530                 535                 540 Asp Gly Met Tyr 545 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：3：

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(xi)SEOUENCE DESCRIPTION：SEO ID NO：3： ATG AAC CTG AAA CCT TTG AAT GAC CGT GTT TTA GTA AAA CGT CTT GAA         48 Met Asn Leu Lys Pro Leu Asn Asp Arg Val Leu Val Lys Arg Leu Glu   1               5                  10                  15 TCT GAA GAA AAA ACA GCT GGT GGA CTC TAT ATC CCT GAT ACT GCT AAA         96 Ser Glu Glu Lys Thr Ala Gly Gly Leu Tyr Ile Pro Asp Thr Ala Lys

         20                  25                  30 GAA AAA CCA TCT CGT GGT GAA GTT GTT GCT GTT GGA CCT GGT AAA CAT        144 Glu Lys Pro Ser Arg Gly Glu Val Val Ala Val Gly Pro Gly Lys His

     35                  40                  45 ACA GAT GAT GGT AAA TTA ATA CCT ATG GCT GTA AAA GCA GGA GAT ACA        192 Thr Asp Asp Gly Lys Leu Ile Pro Met Ala Val Lys Ala Gly Asp Thr

 50                  55                  60 GTT CTT TTT AAT AAG TAT GCA GGA ACA GAA GTA AAG CTT GAT GGT GTA        240 Val Leu Phe Asn Lys Tyr Ala Gly Thr Glu Val Lys Leu Asp Gly Val  65                  70                  75                  80 GAG CAT CTA GTT ATG CGT GAA GAT GAC ATC CTA GCT GTT ATT ACT GGA        288 Glu His Leu Val Met Arg Glu Asp Asp Ile Leu Ala Val Ile Thr Gly

             85                  90                  95 GAA ACT GGC CGC AAG TGA                                                306 Glu Thr Gly Arg Lys

        100 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：4：

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(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：4： Met Asn Leu Lys Pro Leu Asn Asp Arg Val Leu Val Lys Arg Leu Glu   1               5                  10                  15 Ser Glu Glu Lys Thr Ala Gly Gly Leu Tyr Ile Pro Asp Thr Ala Lys

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 50                  55                  60 Val Leu Phe Asn Lys Tyr Ala Gly Thr Glu Val Lys Leu Asp Gly Val  65                  70                  75                  80 Glu His Leu Val Met Arg Glu Asp Asp Ile Leu Ala Val Ile Thr Gly

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    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

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Ser Leu Phe Ile Xaa Ala Asn Arg Tyr Glu Asn Pro

1               5                   10 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：8：

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(ii)MOLECULE TYPE：peptide

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(v)FRAGMENT TYPE：C-terminal

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：8：

Xaa Arg Xaa Gly Thr Val Ser Asn Asn Ile Ala Asn Ala Asn Thr Ile

1               5                   10                  15

Gly Tyr Lys Gln Gln Gln Val Val Phe Gln Asp Leu  Phe  Ser Gln Asp

            20                  25                    30

Leu Ala Ile Gly Phe Thr Gly Ser Gln Gly Pro Asn Gln Ala Gly Met

        35                  40                  45

Gly Ala Gln Val Gly Ser Val Arg Thr Ile Phe Thr Gln Gly Ala Phe

    50                  55                  60

Glu Pro Gly Asn Ser Val Thr Asp Pro Ala Ile Gly Gly Lys Gly Phe

65                  70                  75                  80

Phe Gln Val Thr Leu Glu Asp Lys Val His Tyr Thr Arg Ala Gly Asn

                85                  90                  95

Phe Arg Phe Thr Gln Asp Gly Phe Leu Asn Asp

            100                 105 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：9：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：1450 base pairs

    (B)TYPE：nucleic acid

    (C)STRANDEDNESS：single

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(ii)MOLECULE TYPE：DNA(genomic)

(iii)HYPOTHETICAL：NO

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(ix)FEATURE：

    (A)NAME/KEY：CDS

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(ix)FEATURE：

    (A)NAME/KEY：CDS

    (B)LOCATION：1080..1448

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：9： GATCTAAAGA GTCTACATAT ATTGCCCGAA TTGAAAATTC TACAAGTGAA AAAACACTAA       60  ATGATCTTGA TATACTTTTA AAAGATGTGA TGTTAACATC AAAAAAGCAT GAATCACGTA       120 GACTTGCAGA GTCTGTACAT CAAAATATTC TTACCCACCT TATACAAAAA AATTATAATA       180 CTCACAATGG TGGGATAAAA TCTGCACCTT TTCATGTTCT TATAGGACCC AAAATACCAA       240 GTATTCTTGT TGAAGTAGGT TACTGTAGTA ATAAAGCTGA AGCACAGCGT CTGGCATCTA       300 GTAATTACCA AAAAGCATTA ATAGAAGGAT TAGCTAAAGG TATTTTCTGT TACCTAAAAA       360 AACTACATCA CCTTGATATT TACTCTAGTT TTATYCTATC TAATTGCACT TAATAGCTTG       420 GACAATTATT ATATGAAGGG TATCCATGTG AAGGTACCTG GTTAAGCTTT TAAATGTAAA       480 AATTATGCAA CCATACYTTA TTCCTTCAGA GGAGCTTCAT TATGAAAGTA AAAACTCTTT       540 CCATGGCTAT TTTAGCTTGT TTATTAGTAG CTAACAGTGC ATTTTCGGCT GACTTCCCTA       600 TTGGTGTCTT TAATTCTCAA TCCATTGCCA TGGAGAGTGA AGCAGCTAAG GCCGCTCAAA       660 AAAAATTACA ATCAGAATTT GGTAATGAAA AAACACAACT TGAAAACAAG CAAAAGWTTG       720 CMAACAAAAG CTGATGATTT ACAAGCTWAG TCAGCAGCTA TGTYTAACCA AGCACGTGAA       780 GATAAACAAA GAGAATTTCT TGAACTTCGT CGTAATTTCG AAGAAAAATY TCGTGACTTT       840 GCAATACGTG TCGAACAAGC TGAAAACACA TTACGTCAAT ATNTAGCTGA ACAAATNTAT       900 NTTGCTGCTG AAACTATAGC AAAAAAGAAA GGGTTAAACT TGTTTTGATA GTGTTAGGGA       960 AGTGTAATGT ACCTTGAAAA AAATTTAGAT ATTACAAAGA AATTYTTGAA GCCATAAATG      1020 CTGCATGGAA AAAAGGTGGA AGTAAACTTC CAGAGATGGC AAACCGGAAA AAATAACAGA      1080 TGCCCCAGTA TAAACTTTCA GAAATTGCTA AACTTTTAAA CTTAACATTA CAAGGTGATG      1140 ATATTGAAGT TGTAGGCGTA AATACACTTC AAGATGCATC ACCAAATGAG ATAAGTTTTC      1200 TAGCAAATGC TAAATATATT CACCAGCTTG TTTTGTCACA GGCTGGTGCT ATTATTCTTT      1260 CAAAAGAATA TGCTAGTCGT GTTCCACGAG CACTAATCAG TACTGAACCA TATAGAGATT      1320 TTGGTAGAGT TCTTTCTTTA TTCTCTATAC CTCAAGGATG TTTTGATGGT ATAAGTCATC      1380 AAGCTTATAT ACACCCTACA GCACAAGTCT CTAAAACAGC TACTATCTAT CCTTTNGTTT      1440 TTATAGGATC                                                             1450 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：10：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

     (A)LENGTH：136 amino acids

     (B)TYPE：amino acid

     (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：protein

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：10： Ser Lys Glu Ser Thr Tyr Ile Ala Arg Ile Glu Asn Ser Thr Ser Glu   1               5                  10                  15 Lys Thr Leu Asn Asp Leu Asp Ile Leu Leu Lys Asp Val Met Leu Thr

         20                  25                  30 Ser Lys Lys His Glu Ser Arg Arg Leu Ala Glu Ser Val His Gln Asn

     35                  40                  45 Ile Leu Thr His Leu Ile Gln Lys Asn Tyr Asn Thr His Asn Gly Gly

 50                  55                  60 Ile Lys Ser Ala Pro Phe His Val Leu Ile Gly Pro Lys Ile Pro Ser  65                  70                  75                  80 Ile Leu Val Glu Val Gly Tyr Cys Ser Asn Lys Ala Glu Ala Gln Arg

             85                  90                  95 Leu Ala Ser Ser Asn Tyr Gln Lys Ala Leu Ile Glu Gly Leu Ala Lys

        100                 105                 110 Gly Ile Phe Cys Tyr Leu Lys Lys Leu His His Leu Asp Ile Tyr Ser

    115                 120                 125 Ser Phe Ile Leu Ser Asn Cys Thr

130                 135 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：11：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：123 amino acids

    (B)TYPE：amino acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：protein

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：11：

Met Pro Gln Tyr Lys Leu Ser Glu Ile Ala Lys Leu Leu Asn Leu Thr

1               5                   10                  15

Leu Gln Gly Asp Asp Ile Glu Val Val Gly Val Asn Thr Leu Gln Asp

            20                  25                  30

Ala Ser Pro Asn Glu Ile Ser Phe Leu Ala Asn Ala Lys Tyr Ile His

        35                  40                  45

Gln Leu Val Leu Ser Gln Ala Gly Ala Ile Ile Leu Ser Lys Glu Tyr

    50                  55                  60

Ala Ser Arg Val Pro Arg Ala Leu Ile Ser Thr Glu Pro Tyr Arg Asp

65                  70                  75                  80

Phe Gly Arg Val Leu Ser Leu Phe Ser Ile Pro Gln Gly Cys Phe Asp

                85                  90                  95

Gly Ile Ser His Gln Ala Tyr Ile His Pro Thr Ala Gln Val Ser Lys

            100                 105                 110

Thr Ala Thr Ile Tyr Pro Xaa Val Phe Ile Gly

        115                 120 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：12：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：559 base pairs

    (B)TYPE：nucleic acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：DNA(genomic)

(iii)HYPOTHETICAL：NO

(iv)ANTI-SENSE：NO

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(ix)FEATURE：

    (A)NAME/KEY：CDS

    (B)LOCATION：3..296

(ix)FEATURE：

    (A)NAME/KEY：CDS

    (B)LOCATION：300..557

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：12： GATCAAAGCC GCATTTACNG CAAGAGTTAG AAATTGAAGT TTTGAAAAAA GAAGACTTTG        60 GGCGTCATAT TGTTAAATTA TGCTGGAAAG GTTCTTTATC AAATATCTTT TTTTCCTATG       120 GGGATATCCC GCACCCACCT TATATACATC AAAGTAATAA GGTTCAGGAT AAGGAAAGAT       180 ATCNTACNGT ATACTCTATA TTACATAANC TGGGTTCTGT AGCAGCTCCT ACAGCTGGAT       240 TACNCTTTTC TGAAACTAGC CGTNATAAAT TACACAAANA TGGTATTAGT TGGGCATAAA       300 TCCCTCTTCA CGTGGGATAT GGAACATTCA GTCCCGTCCT CTGCAATGAC ATCCCAAAAC       360 ATCTTATCCN TTCTGAGTTT GTTCACTTTC CTGAAACTAC NTTTTCCACT ATATTAAATG       420 CACGGTTTGC ANGGGAATAC CTATGTTCTG CCATAGGGGA CCCACTGTTG TCCCCACCAT       480 TGGANGGGTG TTATCTTACC CCTTTCGCCC GGGGTTCCCC TCCCCAACCC TATTCCATTG       540 NGTTTTCCTC TCAAATTAT                                                    559 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：13：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：98 amino acids

    (B)TYPE：amino acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：peptide

(v)FRAGMENT TYPE：internal

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：13：

Ser Lys Pro His Leu Xaa Gln Glu Leu Glu Ile Glu Val Leu Lys Lys

1               5                   10                  15

Glu Asp Phe Gly Arg His Ile Val Lys Leu Cys Trp Lys Gly Ser Leu

            20                  25                  30

Ser Asn Ile Phe Phe Ser Tyr Gly Asp Ile Pro His Pro Pro Tyr Ile

        35                  40                  45

His Gln Ser Asn Lys Val Gln Asp Lys Glu Arg Tyr Xaa Xaa Val Tyr

     50                 55                  60

Ser Ile Leu His Xaa Leu Gly Ser Val Ala Ala Pro Thr Ala Gly Leu

65                  70                  75                  80

Xaa Phe Ser Glu Thr Ser Arg Xaa Lys Leu His Lys Xaa Gly Ile Ser

                85                  90                  95

Trp Ala (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：14：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：86 amino acids

    (B)TYPE：amino acid

    (C)STRANDEDNESS：single

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    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

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Ile Pro Leu His Val Gly Tyr Gly Thr Phe Ser Pro Val Leu Cys Asn

1               5                   10                  15

Asp Ile Pro Lys His Leu Ile Xaa Ser Glu Phe Val His Phe Pro Glu

            20                  25                  30

Thr Xaa Phe Ser Thr Ile Leu Asn Ala Arg Phe Ala Xaa Glu Tyr Leu

        35                  40                  45

Cys Ser Ala Ile Gly Asp Pro Leu Leu Ser Pro Pro Leu Xaa Gly Cys

    50                  55                  60

Tyr Leu Thr Pro Phe Ala Arg Gly Ser Pro Pro Gln Pro Tyr Ser Ile

65                  70                  75                  80

Xaa Phe Ser Ser Gln Ile

                85 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：15：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：477 base pairs

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(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：3 amino acids

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     (A)ORGANISM：LAwsonia intracellularis

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Ile Lys His

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(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：17：

Xaa Leu Xaa Tyr Leu Asp Phe Lys Lys Ile Phe Asn Tyr Ile Gly Glu

1               5                   10                  15

His Ser Pro Leu Lys Arg Asn Val Xaa Met Glu Asp Val Gly Lys Ser

20                              25                  30

Ala Val Phe Leu Ala Ser Asp Xaa Ser Ser Gly Val Thr Gly Glu Xaa

        35                  40                  45

Phe Leu Leu Met Leu Xaa Gln

    50                  55 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：18：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：13 amino acids

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    (C)STRANDEDNESS：single

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(ii)MOLECULE TYPE：peptide

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(v)FRAGMENT TYPE：internal

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：18：

Phe Arg Tyr Leu Thr Ile His Ala Leu Tyr Asn Ile Leu

1               5                   10 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：19：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：11 amino acids

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(ii)MOLECULE TYPE：peptide

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(v)FRAGMENT TYPE：internal

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    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：19：

Val Thr Ile Ala Ile Thr His Leu Tyr Ser Ile

1               5                   10 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：20：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：9 amino acids

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    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：20：

Asn Asn Asn Arg Ile Phe Phe Met Thr

1               5 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：21：

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    (A)LENGTH：525 base pairs

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    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

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    (A)NAME/KEY：CDS

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(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：21： GGAATTGTTA GTATTCTCCC AGAACAGAAG CCAAAATATT TGGCTACTTA CATTACCTAT     60 TTTTGTGTTA GGTATAGCAC AAGGTATATC ATTTCCTTTA GTAAACAGCC ACATTACATC    120 ACTTGCACCA ACATCCAACA GAGCTATTGT TATGGCTATA AACAGTACAT TTATGAGGTT    180 AAGTCAGAGT ATTTCGCAAA TGGTTTTTGG TATTGGATGG TCATTTTTTG GTTGGCCTGG    240 TCCTTTTATA TTTGGTCTTT TTACTTCTAT TATATTAGCC CTCTTAATTA TGAAGTATTT    300 TCAAGATGTA ACCCAATATC ACCTATTTTT GATAAGTAGT AAATTTTATT ATTAAAAAGC    360 TTAGTTAGTT AAGATTACAT ATATTATATA CAATTACTAT AACATTAACT AATTACTAAC    420 TATTACTTCC AATTGATTAA TTGATGCTAT TTAAAGAGGA TATATTAATG ATGTCATGGC    480 TCACAATAGG TGTTATCCTT GGATTAGTGC ATGGGATCCA GGTCC                    525 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：22：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：117 amino acids

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(ii)MOLECULE TYPE：peptide

(iii)HYPOTHETICAL：NO

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    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：22：

Glu Leu Leu Val Phe Ser Gln Asn Arg Ser Gln Asn Ile Trp Leu Leu

1               5                   10                  15

Thr Leu Pro Ile Phe Val Leu Gly Ile Ala Gln Gly Ile Ser Phe Pro

            20                  25                  30

Leu Val Asn Ser His Ile Thr Ser Leu Ala Pro Thr Ser Asn Arg Ala

        35                  40                  45

Ile Val Met Ala Ile Asn Ser Thr Phe Met Arg Leu Ser Gln Ser Ile

    50                  55                  60

Ser Gln Met Val Phe Gly Ile Gly Trp Ser Phe Phe Gly Trp Pro Gly

65                  70                  75                  80

Pro Phe Ile Phe Gly Leu Phe Thr Ser Ile Ile Leu Ala Leu Leu Ile

                85                  90                  95

Met Lys Tyr Phe Gln Asp Val Thr Gln Tyr His Leu Phe Leu Ile Ser

            100                 105                 110

Ser Lys Phe Tyr Tyr

        115 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：23：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：2 amino acids

    (B)TYPE：amino acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：peptide

(iii)HYPOTHETICAL：NO

(v)FRAGMENT TYPE：internal

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：23：

Lys Ala

1 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：24：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：15 amino acids

    (B)TYPE：amino acid

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(ii)MOLECULE TYPE：peptide

(iii)HYPOTHETICAL：NO

(v)FRAGMENT TYPE：internal

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：24：

Leu Val Lys Ile Thr Tyr Ile Ile Tyr Asn Tyr Tyr Asn Ile Asn

1               5                   10                  15 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：25：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：7 amino acids

    (B)TYPE：amino acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：peptide

(v)FRAGMENT TYPE：internal

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracelllularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：25：

Leu Leu Thr Ile Thr Ser Asn

1               5 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：26：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：5 amino acids

    (B)TYPE：amino acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：peptide

(iii)HYPOTHETICAL：NO

(v)FRAGMENT TYPE：internal

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：26：

Leu Ile Asp Ala Ile

1               5 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：27：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：23 amino acids

    (B)TYPE：amino acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：peptide

(iii)HYPOTHETICAL：NO

(v)FRAGMENT TYPE：internal

(vi)ORIGINAL SOURCE：

    (A)ORGANISM：Lawsonia intracellularis

(xi)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：27：

Arg Gly Tyr Ile Asn Asp Val Met Ala His Asn Arg Cys Tyr Pro Trp

1               5                   10                  15

Ile Ser Ala Trp Asp Pro Gly

            20

(2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：28：

    (i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

        (A)LENGTH：846 base pairs

        (B)TYPE：nucleic acid

        (C)STRANDEDNESS：single

        (D)TOPOLOGY：linear

    (ii)MOLECULE TYPE：DNA

    (iii)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：28：

TATTTACTCG CGCGGCCGGG CGTCTTACAC AAATGGATCC CTTGCANTAA TCCAAGGATA     60

ACNCCTATTG TGANCCATGA ACATCATCAN NATATCCTCT TTANATAGCA TCNANNNNTC    120

AANNGGAATT AACAGTTACT ANNTAGTTAA TGTCATAGTA ATTGTCNATA ATATATGTAA    180

TCTTAACTAA CTAAGCTNNT TAATAATAAA ATTNACTACT TATCAANAAT AGGTGATATN    240

GGGTTACATC TTGAAAATAC TTNCCATAAT TANGAGGGCT AATATAATNG AANTAAAAAG    300

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CGAAAATACT CTGACTTAAC CTCANAAATG TACTGTTTAT AGCCATATCA ATAGCTCTGT    420

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GAATAATNNC AAGTCCTTGG GAAATNAANT TACNNCCAGC CAGCTATNNT AAGCAGTTCT    600

NTGGTGACTA TACGTCCTAC TNAANTCGTG CCAAAGATTA AATANNCGAT AATCGCNCTN    660

CCTAAANCAN GCAATACTAA AATGGTTTCT NCCTANCTTG GNATANGGTG GAAGCNCGGA    720

CAGAATTNAN TTCGCNANTT TANANNGGAA NATNCGTNAA NTTANTCGGG GCCCANNCCN    780

AAATTCCTNA NTCNATANAN NAACTNNCTN CTNTAAAANG GCCNACTGGA NTNGTTAAAT    840

GAAATA                                                               846

(2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：29：

    (i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

        (A)LENGTH：855 base pairs

        (B)TYPE：nucleic acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：DNA

(iii)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：29： GATTNTTTAT CGATCACTNT AGACGCGATT TGGGNAACAC TTACCTGGTA NCCACCCGGG     60 TGGAAAAATC GATGGGCCCG CGGCCGCTCT AGAAGTACTC TCGAGAAGCT TTTTGAATTC    120 TTTGGATCCT CAACACAGGG TATGGATTAA AACAACTTTA GCTCTAACAG GAGCATTTTA    180 TAATATATTC CCTGGTAGAA CAATATCTAC TCAAGAAAAT CTGTCTATTG GTTTTCAACT    240 AAAAAAAACT TTTAAACCTT TTCATTGGAC CATCTTACTC TTAGATGAAC ATTATATGTC    300 TTCGCCAAGA ATTGCAGCAG CAATTATGCC TGCACAGCTT GCTGGAGTTA AAAACATTAT    360 AGCTGTTTGG ACCAGTAAAA ATAACCGACT GACCGCTGAA AAAATCTCAC CTGCTTTACT    420 AACAACATTA GAACTTTCAG GAGTTAACAT AGCCCTAACA CTTACCCACA CTGAAACTGA    480 ACTTCTTATT CATCAATTAA TGAAAATAGG TATTGGAAAC CTGTTATATT TTTTAAAAGA    540 AGAAGACATA CTACATATAT CTACTATACC TGTACTACCT TTCTGGAAAG AATATACTTC    600 TCATCGACTT GTTATAGAAA AAGATGCTGG CNTTAATACA GAAATCCTCC AATGGGCNCA    660 TCCTCATTCA ATTATTGAAC AAATAGCAAC AGAACCATAC TCTGAAANAT ATCCCAGATG    720 CACTTTACTG TGCTAGCTCA TCCANTAAAA ACTATNCTCA TANAGNATCC CCAGAATTTT    780 TCATNATGGA CTTGAACCTA TTTGGATTCA NCCCAACNCT TCCTCCAANC CTCCTTTCTC    840 CATACACCAT GGGGA                                                     855 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：30：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：1082 base pairs

    (B)TYPE：nucleic acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：DNA

(iii)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：30： TATCTNGTTG ANTCAATAAA ACTTTTGGGG CCCNTNAAAN TTTCATNANN AAAAAAACAA        60 NATTNCTGGG GGNCCCNTCC CAAAAAANNC AATCANTNNG AANCTTGNCT TCTTATTNNG       120 NTTTTNANAC TATAATATNT NTTATCNATA ATNNATCNNT ATACTNATTT CTNATTCANT       180 NACANNGGNN AGNAANNTTA ATCTNAAANA CTNCNAAGGG GGNNNTNATA NTNTTTNTTT       240 NTTTNTCCCN TNNAATNNAT AACCNNNCAC CCNNATTANT TNNAATNNAT ACCATANCNN       300 CCTTTCAAAC TGTACACATA NTANNNAANN ACACTCNANC NTTTTNCATC CTCTCTANTN       360 CCNACTCCNA TNNANCTNTT CCCCCATNCC TATNTNTCNC TGCTTCCCAG NTTNNACNTN       420 NCTTNNTTTC ACANTATTCC TATCCAANCT AACATNTNTN NTNTCNTNCT CCTTNTNTNT       480 TATNTNTTTC TNNTACCTNN CACTGACANT CTATNANTNA NNTCNNATAC TNNTATANCT       540 NTANGCNANT NTATCTANAA NTNTANCNNN NNATCNTNAC NGCCGTNNAT NTNNNNNCAN       600 TTANNTANNN CTANCNTNNC CAANNNCNTA TNTATNAATA ACNACTATCC NATATTNNAT       660 TNNNTNNTNT CNTANNCAAA TNATTTANGC NCACNNCACT ANGTNATATN ANNATTNTAT       720 ATTNTGAANC TTCTNGGCTT CNCNAATANT ACCANTNNNC ANCNTCNNNT NCATCTNNNT       780 NTACTTCNTA CCATANCGCT CTCNAGNNTC ACTACTTCTA NTAGTNATCN TCTACTGCCN       840 ATGGCNNNNN GCNNNNCGAN AGNTATNCAC NTACANTNNC NTCTACTATN TANATCTANN       900 NCNTCCGNNG CCTNCNGTAC GNNTNGGCNA ANTCGNNTAC TTTNCNTNTA TCTAGTCNCA       960 TCAGNNNTNG ANTCCTCAAN CNNGCTCTAN TTACATGTNN NNTNATGCNC TANANCGNNA      1020 CNTCTATCCT TCNANTCTGC NCTNANTNTA TANACTCTNN NNNATCNNCN AANCTATNTC      1080 CC                                                                     1082 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：31：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：354 base pairs

    (B)TYPE：nucleic acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：DNA

(iii)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：31： CTCCCNTNNC NCTAAGTGGA NTCGCGCGCT GCAGGTCGAC ACTAGTGGAT CTTGATATAC        60 TTTTAAAAGA TGTGATGTTA ACATCAAAAA AGCATGAATC ACGTTAGACT TGCAGAGTCT       120 GTACATCAAA ATATTCTTTA CCCACCTTAA TACGAAAANA AATNNTTATN CNCCNCNATG       180 GGTGGGGNTN AAATCCTNGC CCCNTTNCCC TGTTCNTTTA GGGAACCCCC NAATTCCCCN       240 NGTTATTCCT CTGTTTGAAA NTTCTGGTTN CCCGGCCCTN TNACCAANAG CTTGANNNCC       300 NCCCCGTCCT GGGGCATCCT CNTGTTTATT TTCCCTCNAN CNCCCCCTTN ACTN             354 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：32：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：477 base pairs

    (B)TYPE：nucleic acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：DNA

(iii)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：32： GGATCTTTTT GTGTTTTACA TGGTTTTATA GGAAATACTT CAAGTTTACC TGGTCGGGGT     60 TCACTATGGT ATTGAAGTAC TTCTTCTTTT GTNACTAAAG CCATAACCGC TCCTTTAAGT    120 TGTTCTCAAA AAGAATATAG TCTTATATGT ATTAATCTAT TTACTATTGT ATAGATACAA    180 TAGGTCATAA AAAATATTCT ATTATTATTC TACTGTTATT ATATAGAATA TAAATGTGTT    240 ATGGCTATTG TAACTCACAA TATGTTGTAT AAAGCATGTA TGGTTAAATA CCTAAATTAT    300 TGTNCCAGCA TCAACAAAAA NAATTCACCG GTTACTCCTG ATGANAGGTC TGAAGCTAAA    360 AAAACAGCAG ATTTACCTAC ATCTTCCATA NTTACATTAC GTTTTAATGG TGAATGTTCT    420 CCTATATAAT TAAAAATTTT TTTGAAGTCC AAATACNAAA GNCGCTAATG TTTTATA       477 (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：33：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：568 base pairs

    (B)TYPE：nucleic acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：DNA

(iii)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：33： GATCATTTAA AAAACCATCT TGAGTAAAAC GAAAATTCCC TGCTCGTGTA TAGTGTACTT     60 TATCCTCTAA TGTAACCTGA AAAAAACCTT TTCCACCAAT AGCAAGATCT GTTACACTAT    120 TGCCAGGTTC AAAAGCACCC TGTGTAAAAA TTGTGCGAAC ACTTCCAACC TGTGCTCCCA    180 TACCAGCCTG GTTTGGCCCC TGACTTCCAG TAAAACCTAT TGCTAAATCT TGACTAAACA    240 GGTCTTGAAA CACTACCTGT TGCTGCTTAT ACCCAATGGT ATTTGCGTTA GCAATATTAT    300 TGGAGACAGT ACCANCCCTG TNCTATGGGT TTTCATACCT GTTGGCANCA ATAAACAAAC    360 TCCCCATCAT GATAACATCT CCTAAAAAAT AATTTCATGG NGGNAAAAAT GTTACCTACA    420 CATCTCTATT TTNAAAGCAA AAAACCCATG CCCAANAAAA TTTTTGGGCC NAATTAATAT    480 ACTTAATCTA ATAAACTTTT TTGGGTAATN AAAAAAAATT AATTTTTTAA ACTTGGTTTN    540 ACCAACCTTT TCTCCTTACT TTTTAACC (2)INFORMATION FOR SEQ ID NO：34：

(i)SEQUENCE CHARACTERISTICS：

    (A)LENGTH：477 base pairs

    (B)TYPE：nucleic acid

    (C)STRANDEDNESS：single

    (D)TOPOLOGY：linear

(ii)MOLECULE TYPE：DNA

(iii)SEQUENCE DESCRIPTION：SEQ ID NO：34：

GGTACCCCAC CCGGGTGGAA AATCGATGGG CCCGCGGCCG CTCTAAAANT     50

ACTCTCGAGA AGCTTTTTGA ATTCTTTGGA TCCCCAGGAA TAACTTGTTG    100

ACGGAATTTT ACATTTTCTA TCCCTGCAAA TANAAAAACT TTACCTTGTA    150

GTTCATTAAT AGGAAAAGAT TGGAGTACTG TGATTCCACC TGATTGCGCC    200

ATAGCTTCTA AAATTAGAAC TCCAGGCATG ACAGGAAATC CAGGGGAAAT    250

GACCCNGAAA AAATGGTTCA TTAATACTAA CATTTTTATA AGCTTTAATA    300

TATTTGCCAG CATTAAATTC AATAACTCTA TCTACAATTA AAAAGGGATA    350

ACGGTGGGGA ATTTACTGTA AAATTTCTTG GATATTTTGG AGGTATGGAT    400

GGGGACATTA ATTTTCCTAT ATATATGCTC TTTTTCTTTT CNAAAATTTT    450

TCAGCTTTTT TATCCCNTAA AAACCTC                             467

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