一种菜心炭疽病菌中长期保存方法
专利汇可以提供一种菜心炭疽病菌中长期保存方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于公开一种菜心 炭疽病 菌中长期保存方法， 植物 保护 技术领域。该方法包括如下步骤：菜心炭疽病菌分离与培养；制备SNA斜面培养基，即取融解后SNA培养基加入到冻存管内，倾斜放置，待其 凝固 后即制成；取菜心炭疽病菌的菌落边缘菌丝 块 接种到冻存管SNA斜面培养基上，拧紧封盖口并用 封口膜 密封管口后放入冻存管盒，培养后置于4～15℃保存。该方法操作简便，无需昂贵的设备；无需较大空间；保存时间较长：菜心炭疽病菌在SNA斜面培养基上低温保存的环境下可以存活4年以上，且保持较强的致病 力 。该方法简便、实用，用于长期监测菜心炭疽病菌致病力差异，抗药性变化、评价菜心品种的抗病性 水 平以及筛选高活性 杀菌剂 等研究。，下面是一种菜心炭疽病菌中长期保存方法专利的具体信息内容。
1.一种菜心炭疽病菌中长期保存方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)菜心炭疽病菌分离与培养；
(2)制备SNA斜面培养基：取融解后SNA培养基，加入到冻存管内，倾斜放置，待SNA培养基凝固后即制成SNA斜面培养基；
(3)菜心炭疽病菌保存：取步骤(1)已纯化的菜心炭疽病菌的菌落边缘菌丝块接种到步骤(2)冻存管SNA斜面培养基上，拧紧封盖口并用封口膜密封管口，培养后置于4～15℃保存。
2.根据权利要求1所述的菜心炭疽病菌中长期保存方法，其特征在于还包括：
(4)保存菌株的活化：从4℃冰箱中取出装有菜心炭疽病菌的冻存管，挑取带菌的培养基块，置于PDA培养基上活化培养，即见菌丝长出，备用。
3.根据权利要求1或2所述的菜心炭疽病菌中长期保存方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的菜心炭疽病菌分离与培养，包括如下步骤：
采集菜心炭疽病样，选取带有典型病斑的组织，用清水冲洗干净，在病健交界处剪取组织块；依次在75％的酒精和1％的次氯酸钠溶液中消毒处理后，在无菌水中漂洗3次；取出后用灭菌的滤纸吸去多余的水分，在超净工作台吹干后置于PDA平板上，培养；待长出菌丝后，挑取菌落边缘菌丝块进行再培养；采用单菌丝挑取法或单孢分离法对所分离的菌株进行纯化，经科赫氏法则验证后得到菜心炭疽病菌。
4.根据权利要求3所述的菜心炭疽病菌中长期保存方法，其特征在于：
所述的消毒的时间为15s～45s。
5.根据权利要求3所述的菜心炭疽病菌中长期保存方法，其特征在于：
所述的培养的温度为25℃～30℃。
6.根据权利要求1或2所述的菜心炭疽病菌中长期保存方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的SNA培养基：1g/L KH2PO4，1g/L KNO3，0.5g/L MgSO4·7H2O，0.5g/L KCl，0.2g/L葡萄糖，0.2g/L蔗糖，15g/L琼脂粉；120℃灭菌20min后备用。
7.根据权利要求1或2所述的菜心炭疽病菌中长期保存方法，其特征在于：
步骤(3)中所述的培养的条件为25℃～30℃培养2d～5d。
8.根据权利要求1或2所述的菜心炭疽病菌中长期保存方法，其特征在于：
步骤(3)中所述的保存时间至少长达4年。
9.根据权利要求2所述的菜心炭疽病菌中长期保存方法，其特征在于：
步骤(4)中所述的活化培养的条件为25℃～30℃活化培养3d～7d。
一种菜心炭疽病菌中长期保存方法
技术领域
背景技术
发明内容
20min后备用。
具体实施方式
5
生孢子，用血球计数板测量孢子悬浮液浓度，并稀释至1×10个孢子/mL。将孢子悬浮液用手持喷雾器接种到3～4片真叶期的菜心叶片上，叶面布满小水珠但不下滴，黑暗保湿12h后，置于25±2℃温室内，早上和傍晚花洒浇一次水。接种5d后调查叶片的发病情况。如此随机测试3株不同来源的菌株的致病力。测定结果表明，保存4年的3株菜心炭疽病菌均能使菜心叶片发病，发病叶面积占全部叶面积的50％以上，说明保存4年的菜心炭疽病菌仍具有强致病力(图5)。
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