用于治疗糖原合酶激酶3相关疾病诸如阿尔茨海默病的咪唑取代的嘧啶
阅读：708发布：2020-06-08
专利汇可以提供用于治疗糖原合酶激酶3相关疾病诸如阿尔茨海默病的咪唑取代的嘧啶专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及新颖的式(I)的化合物，其中R1为氢或氟；R2和R3独立地选自氢或甲基；或其可药用盐、含有所述化合物的药物制剂，涉及所述活性化合物在 治疗 中的用途、在治疗与糖原合酶激酶3相关的障碍有关的病症诸如阿尔茨海默病的用途，以及治疗所述障碍的方法，包括 给药 哺乳动物 ，包括需要这样的治疗的人 治疗有效量 的所述化合物。，下面是用于治疗糖原合酶激酶3相关疾病诸如阿尔茨海默病的咪唑取代的嘧啶专利的具体信息内容。
1.式(I)的化合物或其可药用盐
其中
1
R 为氢或氟；
2 3
R 和R 选自氢或甲基。
1
2.如权利要求1所述的化合物或其可药用盐，其中R 为氟。
2 3
3.如权利要求1或2所述的化合物或其可药用盐，其中R 和R 为氢。
2
4.如权利要求1或2所述的化合物或其可药用盐，其中R 为甲基。
2
5.如权利要求4所述的化合物或其可药用盐，其中R 为(R)-甲基。
2 3
6.如权利要求1或2所述的化合物或其可药用盐，其中R 和R 为甲基。
1 2 3
7.如权利要求1所述的化合物或其可药用盐，其中R 为氟，R 和R 为氢。
8.化合物或其可药用盐，所述化合物为N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺。
9.化合物，其为N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺二琥珀酸盐。
10.化合物，其为N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺半琥珀酸盐。
11.化合物，其为
5-氟 -N-(2- 氟-4-( 吗 啉 代 甲 基 ) 苯 基 )-4-(2-甲 基-1-( 四 氢 -2H- 吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺；
N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2，5-二氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺；
N-(2，5-二氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺；
或其可药用盐。
12.化合物，其为N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
5-氟 -N-(2- 氟-4-( 吗 啉 代 甲 基) 苯 基 )-4-(2-甲 基-1-( 四 氢 -2H- 吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
5-氟-N-(2-氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2-氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
5-氟-N-(2-氟-4-(((R)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2，5-二氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
N-(2，5-二氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
或其游离碱或另一种可药用盐。
13.药物组合物，包括权利要求1-12中任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐以及可药用辅剂、稀释剂或载体。
14.如权利要求1-12中任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐，其用于治疗。
15.如权利要求1-12中任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐，其用于治疗认知障碍或伴有认知缺陷的适应症，诸如：痴呆；包括早老性痴呆(阿尔茨海默病的早期发作)；
老年痴呆(阿尔茨海默型痴呆)；阿尔茨海默病(AD)；家族性阿尔茨海默病；早期阿尔茨海默病；轻至中度的阿尔茨海默型痴呆；阿尔茨海默病的疾病进展的延迟；与阿尔茨海默病有关的神经变性，轻度认知缺损(MCI)；健忘性轻度认知缺损(aMCI)；与年龄有关的记忆缺陷(AAMI)；路易体痴呆；血管性痴呆(VD)；HIV痴呆；艾滋病痴呆综合征；艾滋病神经系统并发症；额颞痴呆(FTD)；帕金森型额颞痴呆(FTDP)；拳击员痴呆；由传染原或代谢紊乱导致的痴呆；变性起源的痴呆；多发梗塞性痴呆；记忆丧失；帕金森病中的认知；多发性硬化症中的认知；与化学治疗有关的认知缺陷；精神分裂症中的认知缺陷(CDS)；包括精神分裂症的情感性分裂障碍；与年龄有关的认知功能减退(ARCD)；非痴呆型认知缺损(CIND)；
由中风或脑缺血导致的认知缺陷；先天性和/或发育障碍；进行性核上性麻痹(PSP)；肌萎缩侧索硬化(ALS)；皮质基质变性(CBD)；创伤性脑损伤(TBI)；脑炎后帕金森综合征；皮克病；尼曼-皮克病；唐氏综合征；亨廷顿病；克-雅病；朊病毒病；多发性硬化症(MS)；运动神经元疾病(MND)；帕金森病(PD)；β-淀粉样血管病；脑淀粉样血管病；三核苷酸串联重复障碍；脊髓性肌萎缩；弗里德赖希氏共济失调；眼脑脊髓病；多系统萎缩症；传染性海绵状脑病；注意力缺陷障碍(ADD)；注意缺陷与多动障碍(ADHD)；双相性精神障碍(BD)，包括急性躁狂症、双相抑郁症、双相性维持；严重抑郁性障碍(MDD)，包括抑郁症、严重抑郁、情绪安定；心境恶劣；失认症；失语症；失用症和情感淡漠。
16.如权利要求1-12中任一项所述的式(I)的化合物或其可药用盐，其用于治疗阿尔茨海默病。
17.治疗认知障碍或伴有认知缺陷的适应症，诸如：痴呆；包括早老性痴呆(阿尔茨海默病的早期发作)；老年痴呆(阿尔茨海默型痴呆)；阿尔茨海默病(AD)；家族性阿尔茨海默病；早期阿尔茨海默病；轻至中度的阿尔茨海默型痴呆；阿尔茨海默病的疾病进展的延迟；与阿尔茨海默病有关的神经变性，轻度认知缺损(MCI)；健忘性轻度认知缺损(aMCI)；
与年龄有关的记忆缺陷(AAMI)；路易体痴呆；血管性痴呆(VD)；HIV-痴呆；艾滋病痴呆综合征；艾滋病神经系统并发症；额颞痴呆(FTD)；帕金森型额颞痴呆(FTDP)；拳击员痴呆；
由传染原或代谢紊乱导致的痴呆；变性起源的痴呆；多发梗塞性痴呆；记忆丧失；帕金森病中的认知；多发性硬化症中的认知；与化学治疗有关的认知缺陷；精神分裂症中的认知缺陷(CDS)；包括精神分裂症的情感性分裂障碍与年龄有关的认知功能减退(ARCD)；非痴呆型认知缺损(CIND)；由中风或脑缺血导致的认知缺陷；先天性和/或发育障碍；进行性核上性麻痹(PSP)；肌萎缩侧索硬化(ALS)；皮质基质变性(CBD)；创伤性脑损伤(TBI)；脑炎后帕金森综合征；皮克病；尼曼-皮克病；唐氏综合征；亨廷顿病；克-雅病；朊病毒病；多发性硬化症(MS)；运动神经元疾病(MND)；帕金森病(PD)；β-淀粉样血管病；脑淀粉样血管病；三核苷酸串联重复障碍；脊髓性肌萎缩；弗里德赖希氏共济失调；眼脑脊髓病；多系统萎缩症；传染性海绵状脑病；注意力缺陷障碍(ADD)；注意缺陷与多动障碍(ADHD)；双相性精神障碍(BD)，包括急性躁狂症，双相抑郁症，双相性维持；严重抑郁性障碍(MDD)包括抑郁症，严重抑郁，情绪安定；心境恶劣；失认症；失语症；失用症和情感淡漠的方法，包括给药哺乳动物，包括需要这样的治疗的人，治疗有效量的如权利要求1-12中任一项所定义的式(I)的化合物或其可药用盐。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述疾病是阿尔茨海默病。
用于治疗糖原合酶激酶3相关疾病诸如阿尔茨海默病的咪
唑取代的嘧啶
技术领域
[0001] 本发明涉及新式(I)化合物或其可药用盐，含有所述化合物的药物制剂以及所述化合物在治疗中的用途。本发明进一步涉及制备所述式(I)化合物的方法。
背景技术
[0002] 糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3，GSK3)是由两种同工型(isoform)(α和β)组成的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，这两种同工型由不同基因编码，但在催化域内具有高的同源性。GSK3在中枢和外周神经系统中高度表达。GSK3使一些底物磷酸化，这些底物包括τ、β-联蛋白、糖原合酶、丙酮酸脱氢酶和延伸起始因子2b(eIF2b)。
胰岛素和生长因子使蛋白激酶B活化，蛋白激酶B在丝氨酸9残基上使GSK3磷酸化并使其灭活(Kannoji et al，Expert Opin.Ther.Targets 2008，12，1443-1455)。
胰岛素和生长因子使蛋白激酶B活化，蛋白激酶B在丝氨酸9残基上使GSK3磷酸化并使其灭活(Kannoji et al，Expert Opin.Ther.Targets 2008，12，1443-1455)。
[0003] 阿尔茨海默病(AD)、痴呆和τ疾病(τ pathies)
[0004] AD的特征在于认知衰退、胆碱能功能紊乱和神经元死亡、神经原纤维缠结和淀粉样蛋白β沉积物所组成的老年斑。AD中这些病情的顺序尚不清楚，但认为所述顺序是相关的。糖原合酶激酶3β(GSK3β)或τ磷酸化激酶选择性地使位于AD大脑中高度磷酸化位点的神经元中的微管相关蛋白τ磷酸化。高度磷酸化的蛋白τ对于微管具有较低的亲和力，并且以配对螺旋丝的形式积聚，所述配对螺旋丝是组成AD大脑中神经原纤维缠结和神经纤维网线(neuropil thread)的主要组分。这导致微管解聚，从而导致轴突枯萎和神经炎性营养不良(Hooper等人，J.Neurochem.2008，104(6)，1433-1439)。神经原纤维缠结一贯地在以下疾病中被发现：诸如AD、肌萎缩性侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis)、关岛震颤麻痹痴呆综合征(parkinsonism-dementia of Gaum)、皮质基质变性(corticobasal degeneration)、拳击员痴呆(dementia pugilistica)和头部创伤、唐氏综合征(Down’s syndrome)、脑炎后帕金森综合征(postencephelatic parkinsonism)、进行性核上麻痹(progressive supranuclear palsy)、尼曼-皮克病(Niemann-Pick’s Disease)和皮克病(Pick’s Disease)。将淀粉样蛋白β加至初级海马培养物(primary hippocampal culture)，这通过诱导GSK3β活性而导致τ高度磷酸化和配对螺旋丝样状态，接下来导致轴突转运破坏和神经元死亡(Imahori and Uchida，J.Biochem.1997，121：179-188)，然后已经推定了GSK3α能调节淀粉样蛋白-β本身的生成(Phiel等人Nature，
2003，423，435-439)。GSK3β优先地标示了神经原纤维缠结，并且已经显示的是，GSK3β在AD大脑的预缠结神经元中具有活性。在AD患者的脑组织中，GSK3蛋白水平也增加50％。
此外，GSK3β使丙酮酸脱氢酶(即糖酵解途径中的关键酶)磷酸化，并且阻止丙酮酸酯转化为乙酰辅酶A(Hoshi等人，PNAS 1996，93：2719-2723)。乙酰辅酶A对于合成乙酰胆碱(即与认知功能相关的神经递质)是关键的。淀粉样蛋白β的聚集是AD的早期事件。GSK转基V717F
因小鼠在大脑中显示出水平提高的淀粉样蛋白-β。另外，饲喂有锂的PDAPP(APP )的转基因小鼠在海马中显示出淀粉样蛋白-β水平降低，同时淀粉样蛋白斑块区域减少(Su等人，Biochemistry 2004，43：6899-6908)。同样地，已经显示的是，GSK3β的抑制降低了淀粉样蛋白沉积与斑块有关的星形细胞的增殖、降低蛋白τ的磷酸化、对防止神经细胞死亡sw vlw
提供保护作用以及在双APP -τ 小鼠模型中预防记忆缺陷(Serenóet al，Neurobiology of Disease，2009，35，359-367)。此外，GSK3已经牵涉在突触可塑性和记忆功能中(Peineau等人，Neuron 2007，53，703-717；Kimura等人，PloS ONE 2008，3，e3540)，已知其在AD患者中是受损的。
2003，423，435-439)。GSK3β优先地标示了神经原纤维缠结，并且已经显示的是，GSK3β在AD大脑的预缠结神经元中具有活性。在AD患者的脑组织中，GSK3蛋白水平也增加50％。
此外，GSK3β使丙酮酸脱氢酶(即糖酵解途径中的关键酶)磷酸化，并且阻止丙酮酸酯转化为乙酰辅酶A(Hoshi等人，PNAS 1996，93：2719-2723)。乙酰辅酶A对于合成乙酰胆碱(即与认知功能相关的神经递质)是关键的。淀粉样蛋白β的聚集是AD的早期事件。GSK转基V717F
因小鼠在大脑中显示出水平提高的淀粉样蛋白-β。另外，饲喂有锂的PDAPP(APP )的转基因小鼠在海马中显示出淀粉样蛋白-β水平降低，同时淀粉样蛋白斑块区域减少(Su等人，Biochemistry 2004，43：6899-6908)。同样地，已经显示的是，GSK3β的抑制降低了淀粉样蛋白沉积与斑块有关的星形细胞的增殖、降低蛋白τ的磷酸化、对防止神经细胞死亡sw vlw
提供保护作用以及在双APP -τ 小鼠模型中预防记忆缺陷(Serenóet al，Neurobiology of Disease，2009，35，359-367)。此外，GSK3已经牵涉在突触可塑性和记忆功能中(Peineau等人，Neuron 2007，53，703-717；Kimura等人，PloS ONE 2008，3，e3540)，已知其在AD患者中是受损的。
[0005] 总之，就与阿尔茨海默病和其它上述疾病相关的进展及认知缺陷而言，抑制GSK3β可能具有有利的效果。
[0006] 急性神经变性疾病
[0007] 已经显示的是，生长因子介导的PI3K/Akt途径的活化在神经元存活中发挥关键的作用。该途径的活化导致对GSK3β的抑制。在神经变性(诸如脑缺血)的细胞和动物模型中，或在生长因子丧失之后，GSK3β活性增加(Bhat等人，PNAS 2000，97，11074-11079)。已经显示的是，一些具有已知的GSK3β抑制作用的化合物在缺血性发作模型大鼠中降低梗死体积。最近的公开文献(Koh et al，BBRC 2008，371，894-899)显示GSK-3的抑制在局灶的脑缺血模型中通过降低局部缺血细胞的死亡、炎症、脑水肿和葡萄糖水平而降低了总的梗塞体积并改善了神经行为的功能。因此，GSK3β抑制剂在衰减急性神经变性疾病的病程中是有用的。
[0009] 双相性精神障碍的特征在于躁狂性发作和抑郁性发作。基于锂的情绪稳定作用，已经将其用于治疗BD。锂的缺点是治疗窗窄和剂量过高时可能导致锂中毒的危险。发现处在治疗浓度的锂可抑制GSK3，该发现增加了上述酶是锂在脑中作用的关键靶标的可能性(Stambolic等人，Curr.Biol.1996，68，1664-1668；Klein and Melton；PNAS 1996，93，8455-8459；Gould等人，Neuropsychopharmacology，2005，30，1223-1237)。已表明GSK3抑制剂可缩短强迫游泳测试中的不动时间(immobilisation时间)、所述测试是评价抑郁行为的模型(O’Brien等人，J Neurosci 2004，24，6791-6798)。GSK3与II型双相性障碍中发现的多态现象有关(Szczepankiewicz等人，Neuropsychobiology.2006，53，51-56)。因此，就治疗BD及患有情感障碍的AD患者而言，抑制GSK3β可能在治疗上与之相关。
[0011] 大量证据表明GSK3在情感障碍和精神分裂症中具有异常活性。在多细胞过程的信号转导级联中，特别是在神经发育期间涉及了GSK3。Kozlovsky等人，Am.J.Psychiatry，2000，157，831-833发现神经分裂症患者的GSK3β水平比对照受试者低41％。这项研究表明精神分裂症涉及神经发育病理学，并且表明异常的GSK3调节可能在精神分裂症中发挥作用。此外，已经报道的是，在表现出精神分裂的患者中，β-联蛋白水平是下降的(Cotter等人，Neuroreport 1998，9，1379-1383)。非典型抗精神病药物例如奥氮平、氯氮平、喹硫平和齐拉西酮通过增强Ser 9磷酸化作用抑制GSK3，这表明抗精神病药物可通过抑制GSK3而发挥其有益作用(Li X.等人，Int.J.of Neuropsychopharmacol，2007，10，7-19)。
[0012] 糖尿病
[0013] 2型糖尿病的特征在于胰岛素耐受和β-细胞衰竭。胰岛素通过脱磷酸化并由此活化糖原合酶来刺激骨骼肌中的糖原合成，并由此增加对葡萄糖的清除。在静止条件下，GSK3通过脱磷酸化来使糖原合酶磷酸化并且使其失活。GSK3在II型糖尿病患者的肌肉中也是过度表达的(Nikoulina等人，Diabetes 2000Feb；49(2)，263-71)。GSK3的抑制可增加糖原合酶的活性，由此通过将葡萄糖转化成糖原来降低葡萄糖水平。在糖尿病的动物模型中，GSK3抑制剂使血浆葡萄糖水平降低的程度高达50％(Cline等人，糖尿病，2002，51：2903-2910；Ring等人，Diabetes 2003，52，588-595)。此外，使用糖尿病背景的单倍不足的(haploinsufficient)GSK3β小鼠获得的结果，显示了降低的GSK3β活性同样防止了β-细胞衰竭(Tanabe等人，PloS Biology，2008，6(2)，307-318)。因此，GSK3的抑制在I型和II型糖尿病的治疗中可能与增强胰岛素敏感度和降低β-细胞衰竭之间具有治疗相关性，并也因此使得治疗与减少糖尿病并发症如糖尿病性神经病变相关。
[0014] 脱发
[0015] GSK3使β-联蛋白磷酸化并且使其降解。β-联蛋白为角蛋白(keratonin)合成途径的效应器。β-联蛋白的稳定化可导致毛发发育的增加。由于GSK3磷酸化位点的突变而表达稳定β-联蛋白的小鼠出现类似于重新形成头发的过程(Gat等人，Cell，1998，95，605-14)。新的囊泡(follicle)形成皮脂腺和真皮乳头，这一般只在胚胎形成时才发生。因此，抑制GSK3可治疗导致多种导致脱发的适应症。
[0016] 炎性疾病
[0017] 发现GSK3抑制剂具有抗炎作用，这使得使用GSK3抑制剂用于治疗性介入炎性疾病愈发成为可能(Martin等人，Nat.Immunol.2005，6，777-784；Jope等人，Neurochem.Res.2007，32，577-595)。炎症是很多种病症(包括阿尔茨海默病和情感障碍)的共同特征。最近的公开文献(Kitazawa et al，Ann.Neurol.2008，64，15-24)显示了GSK3β可能在包涵体肌炎(inclusion body myositis，IBM)中发挥作用。
[0018] 癌症
[0019] GSK3过度表达在卵巢癌、乳癌和前列腺癌细胞中，最新数据表明GSK3β可在促成数种实体瘤类型中的细胞增殖和存活途径中具有一定作用。GSK3在影响细胞增殖和存活的数种信号转导体系中发挥重要作用，这些系统例如为WNT、PI3激酶和NFkB。缺乏GSK3β的MEF表明其在由NFkB途径介导的细胞存活中发挥关键作用(Ougolkov AV and Billadeau DD.，Future Oncol.2006Feb，2(1)，91-100.)。因此，GSK3抑制剂可以抑制实体瘤的生长和存活，所述实体瘤包括胰腺癌、直肠癌和前列腺癌。已经显示的是，多发性骨髓瘤细胞的生长控制是通过抑制GSK3来实现的(Zhou et al 2008 Leuk.Lymphoma，48，1946-1953)。最近的公开文献(Wang et al，Nature 2008，455，1205-1209)显示了GSK3的抑制在白血病的小鼠模型中是有效的。因此，GSK3抑制剂也可能抑制血液肿瘤(包括多发性骨髓瘤)的生长和存活
[0020] 青光眼
[0021] 使用GSK3抑制剂来治疗青光眼也是可行的。升高的眼内压(IOP)是青光眼发展的最重要的危险因素，并且现在的青光眼治疗集中于通过减少房水的生成或通过促进房水的外流来降低IOP。最近公开的表达谱实验(Wang等人，J.Clin.Invest.2008，118，1056-1064)已经揭示，可溶性WNT拮抗剂sFRP-1相对于对照组在青光眼患者的眼细胞中过度表达。通过其中加入重组sFRP-1至离体培养的人眼前段导致房水外流的减少的实验，提供了在WNT信号通道和青光眼之间的功能性连接(functional link)；另外，小鼠的体内实验显示，sFRP-1在眼组织中的过度表达导致眼内压增加，该效应被小分子GSK3抑制剂所拮抗。综上所述，Wang等人(2008)报道的结果说明通过抑制GSK3来激活WNT信号可能代表用于降低青光眼中的眼内压的一种新颖的治疗途径。
[0022] 疼痛
[0023] 最近的公开文献(WO2008/057933)显示了GSK3β抑制剂可能通过调节糖原分解或糖酵解途径而在疼痛(特别是神经性疼痛)的治疗中发挥作用。
[0024] 骨相关的障碍和病症
[0025] 遗传学研究已经在人的骨质量和Wnt信号之间建立了连接(Gong等人，Am.J.Hum.Genet 1996，59，146-51，Little等人，N.Engl.J.Med.，2002，347，943-4)。其后，对小鼠的Wnt信号的遗传学和药理学操作已经证实了上述通道在骨形成的调节中起核心作用。在由Wnts激活的通道中，正是由通过典范(即Wnt/β-连环蛋白)通道的信号通过多种机理包括更新干细胞、刺激前成骨细胞的复制、诱导成骨细胞新生(osteoblastogenesis)以及抑制成骨细胞和骨细胞凋亡而增加了骨量。因此，单独或与合适的手段组合使用GSK3抑制剂来增强Wnt通道信号传导，可以用于治疗骨相关的障碍，或其它涉及更新和增加骨形成的需要的病症，例如骨硬化症(遗传性、医源性的或由衰老/激素失调引起的)、因损伤或外科手术引起的骨折修复(fracture repair)、导致骨丢失的慢性炎性疾病，诸如例如类风湿性关节炎、导致骨损伤的癌症，诸如例如乳腺癌、前列腺癌和肺癌、多发性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、骨纤维肉瘤、癌诱导的骨病、医源性骨病、良性骨病和佩吉特氏病。
[0026] 再生医学
[0027] 自我更新以及组织内稳态和修复的维护要求干细胞的扩张(expansion)和分化。已经显示的是，β-连环蛋白介导的典范Wnt信号通道与干细胞分化的控制有关(Pinto等人，Exp.Cell Res.，2005，306，357-63)。生理学的Wnt应答对于受损组织的再生而言可能是关键的。通过增强Wnt信号，GSK3抑制剂可能对调节干细胞功能以增强离体或体内条件下与组织损伤或组织修复减弱有关的疾病中的组织再生而言是有用的。
[0028] 2007年12月04日公开的WO2007/040440涉及声称对GSK3具有选择性抑制作用以及良好生物利用度的咪唑和苯基取代的嘧啶化合物。
发明内容
[0029] 本发明的目的是提供新颖的化合物，所述化合物具有高GSK3抑制效力以及具有良好的泛激酶(pan-kinase)选择性，如通过CDK2的选择性所证实的，以及在CaCo-2细胞中良好的细胞渗透率。
[0030] 式(I)的化合物
[0031]
[0032] 其中1
[0033] R 为氢或氟；2 3
[0034] R 和R 选自氢或甲基；或其可药用盐。1
[0035] 在一个方面，R 为氟；或其可药用盐。2 3
[0036] 在又一个方面，R 和R 为氢；或其可药用盐。2
[0037] 在另一个方面，R 为甲基；或其可药用盐。2
[0038] 还在另一个方面，R 为(R)-甲基；或其可药用盐。2 3
[0039] 仍在另一个方面，R 和R 为甲基；或其可药用盐。2 3
[0040] 仍还在另一个方面，R 和R 为(S)-甲基；或其可药用盐。1 2 3
[0041] 在一个方面，R 为氟，R 和R 为氢；或其可药用盐。
[0042] 本发明的另一个方面为化合物，其为N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺；或其
可药用盐。
可药用盐。
[0043] 本发明的再一个方面为N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺二琥珀酸盐。
[0044] 本发明的再一个方面为N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺半琥珀酸盐。
[0045] 本发明的还涉及的一个方面为化合物，其为
[0046] 5-氟-N-(2-氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四 氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺；
[0047] N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2，5-二氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺；
[0048] N-(2，5-二氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺；或其可药用盐。
[0049] 本发明的还涉及的一个方面为化合物，其为N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
[0050] 5-氟-N-(2-氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四 氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
[0051] 5-氟-N-(2-氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
[0052] N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2-氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
[0053] 5-氟-N-(2-氟-4-(((R)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
[0054] N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2，5-二氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；
[0055] N-(2，5-二氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐；或其游离碱或另一种可药用盐。
[0056] 本发明的另一个特征涉及化合物，其选自所有以它们的游离碱形式的示例性的盐或其可药用盐之列。
[0058] 本发明还提供化合物，其选自：
[0059] (S)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3-甲基吗啉；
[0060] (3S，5S)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3，5-二甲基吗啉；
[0061] (R)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3-甲基吗啉；
[0062] (3S，5S)-4-(4-氯-2，5-二氟苄基)-3，5-二甲基吗啉；
[0063] (S)-4-(4-溴-2，5-二氟苄基)-3-甲基吗啉；
[0064] 4-溴-2，5-二氟苯甲醛；
[0065] 4-(4-氯-2，5-二氟苄基)吗啉；
[0066] 1-(4-氯-3-氟苄基)-4，4-二氟哌啶；
[0067] 4-(4-氯-3-氟苄基)吗啉；
[0068] 4-(4-溴-3-氟苄基)吗啉；
[0069] 4-(4-溴-2，5-二氟苄基)吗啉；或其盐。
[0070] 所述化合物可用作制备式(I)的化合物方法中的中间体。
[0072] 式(I)的化合物可以以立体异构体的形式存在。因此，其所有对映体、非对映体、外消旋体和混合物包括在本发明的范围之内。可以通过使用常规技术，例如分步结晶或HPLC分离所述化合物的立体异构体混合物来分离各种旋光异构体。可替换地，各种旋光异构体可以直接使用具有光学活性的起始原料来制备。
[0073] 本发明涉及具备GSK3抑制活性的式(I)的化合物的任何以及所有立体异构和互变异构形式。
[0075] 本发明还包括核素标记的本发明的化合物。“同位素的”或“放射标记的”化合物是本发明的化合物，其中一个或多个原子被具有原子质量或质量数不同于典型地在自然界中发现的(即自然发生的)原子质量或质量数的原子代替或取代。可以结合至本发明的化2 3 11 13
合物的适合的稳定或放射性核素包括但不限于 H(氘，也写作D)、H(氚，也写作T)、C、C、
14 13 15 15 17 18 18 35 36 82 75 76 77 123 124 125 131
C、N、N、O、O、O、F、S、Cl、Br、Br、Br、Br、I、 I、I和 I。结合至本申请的放射标记的化合物的放射性核素将会取决于所述的放射标记的化合物的特定应用。例如，
3 14 82 125 131 35
对于体内受体标记和竞争测定，结合有 H、C、Br、I、 I、S的化合物通常将会是最有用
11 18 125 123 124 131 75 76 77
的。对于放射成像的应用，C、F、I、 I、I、 I、Br、Br或 Br通常将会是最有用的。
合物的适合的稳定或放射性核素包括但不限于 H(氘，也写作D)、H(氚，也写作T)、C、C、
14 13 15 15 17 18 18 35 36 82 75 76 77 123 124 125 131
C、N、N、O、O、O、F、S、Cl、Br、Br、Br、Br、I、 I、I和 I。结合至本申请的放射标记的化合物的放射性核素将会取决于所述的放射标记的化合物的特定应用。例如，
3 14 82 125 131 35
对于体内受体标记和竞争测定，结合有 H、C、Br、I、 I、S的化合物通常将会是最有用
11 18 125 123 124 131 75 76 77
的。对于放射成像的应用，C、F、I、 I、I、 I、Br、Br或 Br通常将会是最有用的。
[0076] 应理解，“放射标记的化合物”是已经结合有至少一个放射性核素的化合物。在一3 14 125 35 82
些实施方案中，放射性核素选自下组：H、C、I、S和 Br。
些实施方案中，放射性核素选自下组：H、C、I、S和 Br。
[0077] 本发明也涉及如上文中所定义的式(I)的化合物的用途。
[0078] 用于药物制剂中的盐将会是可药用盐，但其它盐在式(I)的化合物的制备中也可能是有用的。
[0079] 药物制剂
[0080] 根据本发明的一个方面，提供用于治疗与糖原合酶激酶3有关的病症的药物制剂，其包括式(I)的化合物或其可药用盐。
[0081] 用于本发明的制剂可以为适合于口服给药(例如为片剂、丸剂、糖浆剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂)、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、肌内、血管内或输液，为无菌溶液、混悬液或乳液)、外用(为软膏剂、贴剂或乳膏剂、直肠给药(为栓剂)和体腔或骨腔中的局部给药的形式。
[0082] 制剂可以为适合于口服给药(例如为片剂)、胃肠外注射(无菌溶液或混悬液)的形式。通常上述制剂可以使用药用载体或稀释剂，采用常规方法制备。
[0084] 在哺乳动物包括人的治疗中，式(I)的化合物或其可药用盐适合的每日剂量为每次口服给药大约0.01至250mg/kg体重，胃肠外给药约0.001至250mg/kg体重。活性成分的典型的每日剂量在宽的范围内变化，并将取决于各种因素，诸如相关的适应症、给药途径、患者的年龄、体重合性别，并可由内科医师来确定。
[0085] 式(I)的化合物或其可药用盐可单独使用，但将通常会以其中活性成分与可药用稀释剂、辅料或惰性载体联合的药物制剂的形式给药。取决于给药方式，药物制剂可以包含0.05至99％w(重量百分比)、例如0.10至50％w的活性成分，所有的重量百分比是基于组合物总量来计算的。
[0086] 稀释剂或载体的实例可以包括一种或多种下述成分，但不限于：水、含水聚乙二醇、碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖(诸如乳糖)、果胶、糊精、淀粉、西黄蓍胶、微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或可可豆脂。
[0087] 本发明还提供本发明的药物制剂的制备方法，其包括混合上文中所定义的式(I)的化合物或其可药用盐与可药用稀释剂、辅料或惰性载体。
[0088] 本发明的药物制剂的实例是可注射溶液，包括上文中所定义的式(I)的化合物或其可药用盐和无菌水，以及，如果需要的话，碱或酸以使最终制剂的pH值为约4至9，特别是约5的pH值范围内，以及任选的表面活性剂以辅助溶解。适合的碱为氢氧化钠。适合的酸为盐酸。
[0089] 用于本发明的式(I)的化合物的适合的可药用盐为酸加成盐(所述化合物是足够碱性的)，所述酸例如无机酸诸如盐酸、氢溴酸或硫酸，或有机酸诸如琥珀酸、柠檬酸、富马酸、苯甲酸、肉桂酸、甲磺酸、1-羟基-2-萘甲酸和2-萘磺酸(其它实例参见Berge等人，J.Pharm.Sci.1977，66，1-19，和/或Stahl和Wermuth的Handbook of Pharmaceutical salts：Properties，Selection and Use(Wiley-VCH，2002)。
[0090] 另外，对于足够酸性的本发明的化合物，适合的可药用盐为碱金属盐、碱土金属盐或有机碱成的盐，这些有机碱提供生理学上可接受的阳离子。
[0091] 应理解，一些式(I)的化合物可以以溶剂化例如水化，以及非溶剂化的形式存在。应理解，本发明涵盖所有这样的具备GSK3抑制活性的溶剂化的形式。
[0092] 医疗用途
[0093] 已经发现，本发明定义的式(I)的化合物非常适合于抑制糖原合酶激酶3(GSK3)。相应地，所述本发明化合物被期望用于预防和/或治疗与糖原合酶激酶3活性有关的病症，即所述化合物可用于在需要这样的预防和/或治疗的哺乳动物包括人中产生对GSK3的抑制作用。
[0094] GSK3高表达于中枢和周围神经系统以及其它组织。因此，期望本发明的化合物非常适合于预防和/或治疗中枢和周围神经系统中与糖原合酶激酶3有关的病症。特别的，本发明的化合物被期望为适合于预防和/或治疗与认知障碍或伴有认知缺陷的适应症有关的病症，诸如：痴呆；包括早老性痴呆(阿尔茨海默病的早期发作)；老年痴呆(阿尔茨海默型痴呆)；阿尔茨海默病(AD)；家族性阿尔茨海默病；早期阿尔茨海默病；轻至中度的阿尔茨海默型痴呆；阿尔茨海默病的疾病进展的延迟；与阿尔茨海默病有关的神经变性，轻度认知缺损(MCI)；健忘性轻度认知缺损(aMCI)；与年龄有关的记忆缺陷(AAMI)；路易体痴呆；血管性痴呆(VD)；HIV-痴呆；艾滋病痴呆综合征；艾滋病神经系统并发症；额颞痴呆(FTD)；帕金森型额颞痴呆(FTDP)；拳击员痴呆；由传染原或代谢紊乱导致的痴呆；变性起源的痴呆(dementia of degenerative origin)；多发梗塞性痴呆(dementia-Multi-Infarct)；记忆丧失；帕金森病中的认知；多发性硬化症中的认知；与化学治疗有关的认知缺陷；精神分裂症中的认知缺陷(CDS)；情感性分裂障碍，包括精神分裂症；与年龄有关的认知功能减退(ARCD)；非痴呆型认知缺损(CIND)；由中风或脑缺血导致的认知缺陷；先天性和/或发育障碍；进行性核上性麻痹(PSP)；肌萎缩侧索硬化(ALS)；皮质基质变性(CBD)；创伤性脑损伤(TBI)；脑炎后帕金森综合征；皮克病；尼曼-皮克病；
唐氏综合征；亨廷顿病；克-雅病；朊病毒病；多发性硬化症(MS)；运动神经元疾病(MND)；
帕金森病(PD)；β-淀粉样血管病；脑淀粉样血管病；三核苷酸串联重复障碍；脊髓性肌萎缩；弗里德赖希氏共济失调；眼脑脊髓病；多系统萎缩症；传染性海绵状脑病；注意力缺陷障碍(ADD)；注意缺陷与多动障碍(ADHD)；双相性精神障碍(BD)，包括急性躁狂症、双相抑郁症、双相性维持(双相性抑郁)；严重抑郁性障碍(MDD)，包括抑郁症、严重抑郁、情绪安定、心境恶劣；失认症；失语症；失用症和情感淡漠。
唐氏综合征；亨廷顿病；克-雅病；朊病毒病；多发性硬化症(MS)；运动神经元疾病(MND)；
帕金森病(PD)；β-淀粉样血管病；脑淀粉样血管病；三核苷酸串联重复障碍；脊髓性肌萎缩；弗里德赖希氏共济失调；眼脑脊髓病；多系统萎缩症；传染性海绵状脑病；注意力缺陷障碍(ADD)；注意缺陷与多动障碍(ADHD)；双相性精神障碍(BD)，包括急性躁狂症、双相抑郁症、双相性维持(双相性抑郁)；严重抑郁性障碍(MDD)，包括抑郁症、严重抑郁、情绪安定、心境恶劣；失认症；失语症；失用症和情感淡漠。
[0095] 本发明的一个实施方案涉及在预防和/或治疗阿尔茨海默病，特别是在延迟阿尔茨海默病的疾病进展中的用途。
[0096] 本发明的其它实施方案涉及预防和/或治疗选自下组的障碍：注意力缺陷障碍(ADD)、注意缺陷与多动障碍(ADHD)和情感障碍，其中情感障碍为双相性精神障碍，包括急性躁狂症、双相抑郁症、双相性维持(双相性抑郁)、严重抑郁性障碍(MDD)，包括抑郁症、严重抑郁、情绪安定，情感分裂性精神障碍，包括精神分裂症和心境恶劣。
[0097] 本发明的化合物的其它方面是其在治疗下述疾病中的用途：I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病性神经病变；疼痛，包括神经源性疼痛，伤害性疼痛，慢性痛，与癌症有关的疼痛，与风湿性疾病有关的疼痛；脱发；青光眼；炎性疾病；包括包涵体肌炎(IBM)；寻常型天疱疮。
[0098] 本发明的化合物的其它方面是其在治疗良性或恶性肿瘤中的用途，包括非实体瘤诸如白血病，包括MLL白血病；骨髓瘤，包括多发性骨髓瘤；或淋巴瘤；以及实体瘤，例如胆管癌、骨癌、膀胱癌、脑/CNS癌、乳腺癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、头和颈癌、肝癌、肺癌(特别是非小细胞肺癌)、神经元的癌症、食管癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌和外阴癌。
[0099] 本发明的化合物的其它方面还在于其在治疗特定癌症的与骨相关的效应中的用途，例如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、多发性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、骨纤维肉瘤，癌诱导的骨病和医源性骨病。
[0100] 本发明的化合物的再一个方面是其在治疗骨质疏松症(遗传性、医源性的或由衰老/激素失调引起的)、因损伤或外科手术引起的骨折修复(fracture repair)、导致骨丢失的慢性炎性疾病，诸如例如类风湿性关节炎、导致骨损伤的癌症，诸如例如乳腺癌、前列腺癌和肺癌、多发性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、骨纤维肉瘤、癌诱导的骨病、医源性骨病、良性骨病和佩吉特氏病中的用途；在促进骨形成、增加骨矿物质密度、降低骨折率和/或增加骨折愈合率、增加骨松质形成和/或新生骨形成。
[0101] 本发明也涉及如本发明所定义的式(I)的化合物在制备用于预防和/或治疗与糖原合酶激酶3有关的病症的药物中的用途。
[0102] 本发明还提供治疗和/或预防与糖原合酶激酶3有关的病症的方法，包括给药需要这样的治疗和/或预防的哺乳动物(包括人)治疗有效量的本发明所定义的式(I)的化合物。
[0103] 取决于治疗的主体、给药途径和所治疗的疾病的严重度，所述治疗性或预防性治疗特定疾病所需的剂量将会必要地发生变化。
[0104] 对于兽医上的应用，不同组分的用量、剂型和药物的剂量可能会发生变化并将会取决于多种因素，诸如例如所治疗的动物的个体需要。
[0105] 在本说明书的上下文中，术语″治疗″也包括″预防″，除非有特别的相反指示。术语″治疗的″和″治疗地″应当进行相应地解释。
[0106] 在本说明书的上下文中，术语″障碍″也包括″病症″，除非有特别的相反指示。
[0107] 本发明的再一个方面为其中当如本申请所定义的式(I)的化合物或其可药用盐，或包括包含这样的式(I)的化合物的组合的药物组合物或制剂给药时，并存地、同时地、连续地、单独地给药或附加其它药物活性化合物或选自下述的化合物：
[0108] (i)抗抑郁药，诸如阿戈美拉汀、阿米替林、阿莫沙平、丁氨苯丙酮、西酞普兰、氯米帕明、地昔帕明、地昔帕明、度洛西汀、白忧解(elzasonan)、依他普仑、氟伏沙明、氟西汀、吉哌隆、丙咪嗪、伊沙匹隆、马普替林、去甲替林、奈法唑酮、奈法唑酮、苯乙肼、普罗替林、拉米替隆、瑞波西汀、罗巴佐坦、舍曲林、西布曲明、硫代尼索西汀(thionisoxetine)、反苯环丙胺、曲唑酮、曲米帕明、文拉法辛；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0109] (ii)非典型抗精神病药，包括例如喹硫平；以及其药物活性异构体和代谢产物。
[0110] (iii)抗精神病药，包括例如氨磺必利、阿立哌唑、阿莫沙平、benzisoxidil、bifeprunox、卡马西平、氯氮平、氯丙嗪、debenzapine、双丙戊酸钠、度洛西汀、右佐匹克隆、氟哌啶醇、伊潘立酮、拉莫三嗪、洛沙平、美索达嗪、奥氮平、帕潘立酮、哌拉平、奋乃静、吩噻嗪、苯基丁基哌啶、匹莫齐特、丙氯拉嗪、利培酮、舍吲哚、舒必利、舒普罗酮、舒立克隆、硫利达嗪、三氟拉嗪、曲美托嗪、丙戊酸盐、丙戊酸、佐匹克隆、佐替平、齐拉西酮；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0111] (iv)抗焦虑剂，包括例如阿奈螺酮、阿扎哌隆类(azapirone)、地西泮、巴比妥类，诸如阿地唑仑、阿普唑仑、半拉西泮(balezepam)、苯他西泮、溴西泮、溴替唑仑、丁螺环酮、氯硝西泮、氯氮 甲氨二氮 环丙西泮、安定、苯海拉明、艾司唑仑、艾司唑仑、氟硝西泮、氟西泮、膦西泮、劳拉西泮、氯甲西泮、甲丙氨酯、咪达唑仑、硝西泮、奥沙西泮、普拉西泮、夸西泮、瑞氯西泮、曲卡唑酯、曲匹泮、替马西泮、三唑仑、乌达西泮、唑拉西泮；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0112] (v)抗惊厥药，包括例如卡马西平、氯硝西泮、乙琥胺、非尔氨酯、磷苯妥英、加巴喷丁、拉考沙胺、拉莫三嗪(lamotrogine)、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英、普瑞巴林、卢非酰胺、托吡酯、丙戊酸盐、氨己烯酸(vigabatrine)、唑尼沙胺；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0113] (vi)阿尔茨海默病治疗药，包括例如多奈哌齐、利伐斯的明、加兰他敏、美金刚；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0114] (vii)帕金森病治疗药，包括例如左旋多巴、多巴胺拮抗剂(诸如阿扑吗啡、溴隐亭、卡麦角林、普拉克索、罗匹尼罗和罗替戈汀)、MAO-B抑制剂(诸如司来吉兰和雷沙吉兰)、以及其它多巴胺能药(诸如托卡朋和恩他卡朋)、A-2抑制剂、多巴胺再摄取抑制剂、NMDA拮抗剂、烟碱激动剂，以及神经元一氧化氮合酶抑制剂；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0115] (viii)偏头痛治疗药、包括例如阿莫曲坦、金刚烷胺、溴隐亭、布他比妥、卡麦角林、氯醛比林、二氢麦角胺、依来曲普坦、夫罗曲普坦、麦角乙脲、那拉曲坦、培高利特、苯噻啶、普拉克索、利扎曲普坦、罗匹尼罗、舒马普坦、佐米曲坦；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0116] (ix)中风治疗药，包括例如采用例如阿替普酶的血栓溶解治疗药和去氨普酶、阿昔单抗、胞磷胆碱、氯吡格雷、依替巴肽、米诺环素；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0117] (x)尿失禁治疗药，包括例如达非那新、黄酮哌酯、奥昔布宁、丙哌维林、罗巴佐坦、索非那新、托特罗定；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0118] (xi)神经源性疼痛治疗药，包括利多卡因、辣椒碱和抗惊厥药(诸如加巴喷丁、普加巴林)、以及抗抑郁药(诸如度洛西汀、文拉法辛、阿米替林、氯米帕明(klomipramine))；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0119] (xii)伤害性疼痛治疗药，包括对乙酰氨基酚NSAIDS和环氧合酶抑制剂类(诸如塞来考昔、艾托考昔、罗美昔布、伐地考昔、帕瑞考昔、双氯芬酸、洛索洛芬、萘普生、酮洛芬、依布洛芬、萘丁美酮、美洛昔康、吡罗昔康和类罂粟碱)诸如吗啡、羟考酮、丁丙诺啡、曲马多；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0120] (xiii)失眠治疗药，包括例如阿戈美拉汀、阿洛巴比妥、阿洛米酮、异戊巴比妥、苯佐他明、仲丁巴比妥、卡普脲、氯醛、氯哌喹酮、氯乙双酯、环庚吡奎醇、乙氯维诺、依托咪酯、格鲁米特、哈拉西泮、羟嗪、甲氯喹酮、褪黑激素、甲苯比妥、甲喹酮、咪达氟、尼索氨酯、戊巴比妥、苯巴比妥、异丙酚、拉米替隆、罗来米特、三氯福司、司可巴比妥、扎来普隆、唑吡坦；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0121] (xiv)情绪稳定剂，包括例如卡马西平、双丙戊酸钠、加巴喷丁、拉莫三嗪、锂、奥氮平、喹硫平、丙戊酸盐、丙戊酸、维拉帕米；以及其同等物、药物活性异构体和代谢产物。
[0122] 这样的组合产品使用在本申请所描述的剂量范围内的本发明的化合物，和在批准的剂量范围内和/或在公开的文献中描述的剂量的其它药物活性化合物或化合物。
[0123] 在本发明的一个实施方案中，所述组合包括如下面所定义的化合物(a)和(b)的组：
[0124] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂，和(b)第二种治疗药，其为抗精神病药物(antipsychotic)，选自：
[0125] (a)N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺和(b)喹硫平。
[0126] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂，和(b)第二种治疗药，其为α7-烟碱激动剂，选自：
[0127] (a)N-(2，5-二 氟-4-(吗 啉 代 甲 基 )苯 基)-5- 氟-4-(2-甲 基-1-( 四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺，和(b)(R)-5-(5-(吗啉代甲基)呋喃-3-基)-3H-1′-氮杂螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，3′-二环[2.2.2]辛烷]。
[0128] (a)N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺，和(b)((-)-螺[1-氮杂二环[2.2.2]辛烷-3，2′-(2′，3′-二氢呋喃并[2，3-b]吡啶)]；
[0129] 所述组合可以使用任何一种α-7激动剂，包括但不限于公开于美国专利号6,110,914和6,569,865中的那些；以及未决美国申请2008-0139600(A1)、WO96/06098、WO99/03859、WO00/42044、WO01/060821、WO02/096912、WO03/087103、WO2005/030777、WO2005/030778和WO2007/133155。
[0130] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂，和(b)第二种治疗药，其为α4β2-神经元烟碱激动剂，选自：
[0131] (a)N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺，和(b)(2S)-(4E)-N-甲基-5-[3-(5-异丙氧基吡啶)基]-4-戊烯-2-胺；
[0132] (a)N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺，和(b)3-(5-氯-2-糠酰基)-3，7-二氮杂二环[3.3.0]辛烷；
[0133] 可用于本发明的组合的α4β2-神经元烟碱激动剂为描述于US 6,603,011、US6,958,399和WO/2008/057938中的那些，在此引入作为参考。具体的烟碱激动剂为化合物N-甲基-5-[3-(5-异丙氧基吡啶)基]-4-戊烯-2-胺、(4E)-N-甲基-5-[3-(5-异丙氧基吡啶)基]-4-戊烯-2-胺和(2S)-(4E)-N-甲基-5-[3-(5-异丙氧基吡啶)基]-4-戊
烯-2-胺、3-(5-氯-2-糠酰基)-3，7-二氮杂二环[3.3.0]辛烷、上述任何一种的代谢产物或前药和可药用盐、溶剂化物或溶剂化的盐。这些化合物的制备方法描述于所述美国专利中。
烯-2-胺、3-(5-氯-2-糠酰基)-3，7-二氮杂二环[3.3.0]辛烷、上述任何一种的代谢产物或前药和可药用盐、溶剂化物或溶剂化的盐。这些化合物的制备方法描述于所述美国专利中。
[0134] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂，和(b)第二种治疗药，其为BACE抑制剂。
[0135] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺，和(b)
第二种治疗药，其为BACE抑制剂。
第二种治疗药，其为BACE抑制剂。
[0136] 可用于本发明的组合的药物是那些降低或阻断BACE活性，因此应当降低脑中Aβ水平和Aβ片段的水平，并因此延缓淀粉样蛋白斑块的形成和AD或其它牵涉到Aβ或其片段的沉积的疾病的进展。
[0137] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂，和(b)第二种治疗药，其为H3拮抗剂。
[0138] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺，和(b)
第二种治疗药，其为H3拮抗剂。
第二种治疗药，其为H3拮抗剂。
[0139] 已经显示的是，组胺H3受体调节前认知(pro-cognitive)神经递质，诸如例如组胺和乙酰胆碱的释放。一些组胺H3配体，诸如例如组胺H3受体拮抗剂或逆激动剂可以增加脑中这些神经递质的释放。这说明组胺H3受体逆激动剂和拮抗剂可用于改善与神经变性性障碍诸如AD有关的认知缺陷。
[0140] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂，和(b)第二种治疗药，其为Aβ42抑制剂。
[0141] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺，和(b)
第二种治疗药，其为Aβ42抑制剂。
第二种治疗药，其为Aβ42抑制剂。
[0142] 可用于本发明的组合的Aβ42抑制剂是影响γ-分泌酶介导的APP(Aβ淀粉样蛋白前体蛋白)的加工并因此减少Aβ42和Aβ40肽的那些。
[0143] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂，和(b)第二种治疗药，其为5-HT1A和/或5-HT1B受体的部分激动剂或拮抗剂。
[0144] (a)第一种治疗药，其为GSK3抑制剂N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺，和(b)
第二种治疗药，其为5-HT1A和/或5-HT1B受体的部分激动剂或拮抗剂。
第二种治疗药，其为5-HT1A和/或5-HT1B受体的部分激动剂或拮抗剂。
[0145] 5-HT1A和/或5-HT1B受体的部分激动剂或拮抗剂被期望用于预防和/或治疗与通过5-HT1A和/或5-HT1B受体介导的5-HT信号的紊乱有关的病症，即这样的化合物可以用于在需要这样的预防和/或治疗的哺乳动物包括人中产生增加的水平的乙酰胆碱、谷氨酸、5-羟色胺。特别地，5-HT1A和/或5-HT1B受体的部分激动剂或拮抗剂被期望为适合于预防和/或治疗与认知障碍有关的病症和预定的状态(predemented states)，特别是痴呆、阿尔茨海默病(AD)。
[0146] 第一种治疗药(a)以及第二种治疗药(b)可以为游离碱或其可药用盐的形式。
[0147] 制备方法
[0148] 本发明的其它方面提供制备式(I)的化合物或其可药用盐的方法(除非另有说1 2 3
明，其中R，R 和R 如式(I)所定义)、其中该方法包括：
明，其中R，R 和R 如式(I)所定义)、其中该方法包括：
[0149] 方法a)使式(II)的嘧啶：
[0150]
[0151] 其中L是可置换的基团；与式(III)的苯胺反应：
[0152]
[0153] 或
[0154] 方法b)使式(IV)的嘧啶：
[0155]
[0156] 与式(V)的化合物反应：
[0157]
[0158] 其中Y是可置换的基团；
[0159] 并且此后任选地：
[0160] i)将式(I)的化合物转换成另一种式(I)的化合物；
[0161] ii)除去任何保护基；以及
[0162] L是可置换的基团，适合的L的取值是例如卤素或磺酰氧基，例如氯、溴、甲烷磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基.
[0163] Y是可置换的基团，适合的Y的取值是例如卤素或磺酰氧基，例如氯、溴、碘或三氟甲烷磺酰氧基。Y优选为溴或氯。
[0164] 上述反应的具体反应条件如下：
[0165] 方法a)式(II)的嘧啶和式(III)的苯胺可以一起在标准的Buchwald-Hartwig条件(例如参见J.Am.Chem.Soc.，118，7215；J.Am.Chem.Soc.，119，8451；J.Am.Chem.Soc.，125，6653；J.Org.Chem.，62，1568和6066)下，例如在乙酸钯或1，1′-二(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)的存在下，在适合的溶剂例如芳族溶剂(诸如甲苯、苯或二甲苯)或疏质子有机溶剂(诸如1，4-二噁烷)中，与适合的碱例如无机碱(诸如碳酸铯)或有机碱(诸如叔丁醇钾)、在适合的配体(诸如2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-联萘或2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯)的存在下和在约+25至约+120℃的温度范围内反应。
[0166] 式(II)的嘧啶，其中L为氯，可以根据WO 2007/040440中描述的方法来制备。
[0167] 式(III)的苯胺是可商购的化合物，或是在文献中已知的这些，或是通过本领域已知的标准方法制备的这些。
[0168] 方法b)式(IV)的化合物和式(V)的胺可以一起在如方法a所描述的标准的Buchwald条件下反应。式(IV)的嘧啶的合成描述于WO 2007/040440中。
[0169] 式(V)的化合物是可商购的化合物，或是在文献中已知的这些，或是通过本领域已知的标准方法制备的这些。
[0170] 起始原料的制备
[0171] 实施例中的起始原料是可商购的或是通过标准方法从已知材料制备的。5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺可以根据
WO2007/040440；实施例7(e)中的描述来制备。例如，下述反应仅是示例一些实施例中所使用的起始原料，而非限制性的。
WO2007/040440；实施例7(e)中的描述来制备。例如，下述反应仅是示例一些实施例中所使用的起始原料，而非限制性的。
[0172] 方法1
[0173] (S)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3-甲基吗啉
[0174]
[0175] 将(S)-3-甲基吗啉(119mg，0.86mmol)、4-溴-3-氟苯甲醛(175mg，0.86mmol)、三乙胺(132μl，0.95mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(274mg，1.29mmol)溶解于二氯乙烷(2.5ml)中。在氩气环境下将混合物在环境温度搅拌24h。加入盐酸(1M)直至pH值为1-2。用二氯甲烷洗涤混合物。用KOH(1M，aq)使水相呈碱性并用二氯甲烷萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相并真空浓缩，得到(S)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3-甲基吗啉(220mg，89％)。
[0176] 1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 7.64(t，1H)7.31(dd，1H)7.13(dd，1H)3.92(m，1H)3.62(m，2H)3.43(td，1H)3.15(m，2H)2.39(ddd，1H)2.11(ddd，1H)0.97(d，3H)。
[0177] MS(ES+)m/z 288(M+H)+。
[0178] 方法2
[0179] (3S，5S)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3，5-二甲基吗啉
[0180]
[0181] 将4-溴-3-氟苯甲醛(0.250g，1.23mmol)和(3S，5S)-3，5-二甲基吗啉(0.205g，1.35mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)中。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.378g，1.79mmol)并在氩气环境下将混合物在室温搅拌20h。用二氯甲烷稀释混合物并用NaHCO3(水溶液)洗涤。
干燥(MgSO4)有机相并蒸发。通过用氨的甲醇溶液和二氯甲烷梯度洗脱的硅胶柱色谱法纯化残余物。混合并蒸发含有产物的馏份，得到(3S，5S)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3，5-二甲基吗啉(0.113g，30％)，为液体。
1
干燥(MgSO4)有机相并蒸发。通过用氨的甲醇溶液和二氯甲烷梯度洗脱的硅胶柱色谱法纯化残余物。混合并蒸发含有产物的馏份，得到(3S，5S)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3，5-二甲基吗啉(0.113g，30％)，为液体。
1
[0182] H NMR(500MHz，氯 仿 -d)δppm 7.46(m，1H)7.21(dd，1H)7.04(m，1H)3.88(d，1H)3.69(dd，2H)3.38(m，3H)2.81(m，2H)0.99(d，6H)。
+ +
+ +
[0183] MS(ES)m/z 302(M+H)。
[0184] 方法3
[0185] (R)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3-甲基吗啉
[0186]
[0187] 根据方法1中所描述的方法制备标题化合物，得到(R)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3-甲基吗啉(200mg，81％)，为液体。
[0188] 1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 7.64(t，1H)7.31(dd，1H)7.13(dd，1H)3.92(d，1H)3.62(dd，2H)3.43(td，1H)3.15(m，2H)2.39(m，1H)2.11(ddd，1H)0.97(d，3H)。
[0189] MS(ES+)m/z 288(M+H)+。
[0190] 方法4
[0191] (3S，5S)-4-(4-氯-2，5-二氟苄基)-3，5-二甲基吗啉
[0192]
[0193] 将4-氯-2，5-二氟苯甲醛(0.177g，1.0mmol)和(3S，5S)-3，5-二甲基吗啉(0.167g，1.10mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)中。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.307g，1.45mmol)并在氩气环境下将混合物在室温搅拌20h。用二氯甲烷稀释混合物并用
NaHCO3(水溶液)洗涤。干燥(MgSO4)有机相并蒸发。通过用氨的甲醇溶液和二氯甲烷梯度洗脱的硅胶柱色谱法纯化残余物。混合并蒸发含有产物的馏份，得到(3S，5S)-4-(4-氯-2，
5-二氟苄基)-3，5-二甲基吗啉(0.118g，43％)，为液体。
NaHCO3(水溶液)洗涤。干燥(MgSO4)有机相并蒸发。通过用氨的甲醇溶液和二氯甲烷梯度洗脱的硅胶柱色谱法纯化残余物。混合并蒸发含有产物的馏份，得到(3S，5S)-4-(4-氯-2，
5-二氟苄基)-3，5-二甲基吗啉(0.118g，43％)，为液体。
[0194] 1H NMR(400MHz，氯 仿 -d)δppm 7.39(dd，1H)7.11(m，1H)3.80(d，1H)3.71(dd，2H)3.53(d，1H)3.40(dd，2H)2.85(m，2H)1.01(d，6H)
[0195] MS(ES+)m/z 276(M+H)+。
[0196] 方法5
[0197] (S)-4-(4-溴-2，5-二氟苄基)-3-甲基吗啉
[0198]
[0199] 将4-溴-2，5-二氟苯甲醛(331mg，1.5mmol)、(S)-3-甲基吗啉盐酸盐(206mg，1.50mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(461mg，2.18mmol)在二氯乙烷(5mL)中混合。加入三乙胺(0.230mL，1.65mmol)并在氩气环境下将得到的混合物在室温搅拌24h。加入NaHCO3(25mL)，并用二氯甲烷(3x25mL)萃取混合物。用MgSO4干燥合并的有机萃取物，过滤并浓缩，得到(S)-4-(4-溴-2，5-二氟苄基)-3-甲基吗啉(432mg，94％)，为固体。
[0200] 1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 7.22-7.32(m，2H，与残余的CHCl3重叠)3.88(d，1H)3.69-3.78(m，2H)3.58-3.65(m，1H)3.26-3.34(m，2H)2.58-2.64(m，1H)2.54(d，
1H)2.25-2.33(m，1H)1.05(d，3H)。
1H)2.25-2.33(m，1H)1.05(d，3H)。
[0201] MS(ES+)m/z 306(M+H)+。
[0202] 方法6
[0203] 4-溴-2，5-二氟苯甲醛
[0204]
[0205] 向-40℃的1，4-二溴-2，5-二氟苯(10.28g，37.81mmol)于四氢呋喃(80mL)中的溶液中滴加异丙基氯化镁-氯化锂络合物(29.1mL，37.81mmol)。在-40℃1h后，加入N，N-二甲基甲酰胺(58mL，756mmol)，并在-40℃将混合物搅拌30分钟。加入NH4Cl(2M，水溶液，100mL)并用乙酸乙酯萃取混合物。用MgSO4干燥有机相并浓缩，得到4-溴-2，5-二氟苯甲醛(6.20g，74％)，为固体。
[0206] 1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 10.28(d，1H)7.61(dd，1H)7.48(dd，1H)。
[0207] 方法7
[0208] 4-(4-氯-2，5-二氟苄基)吗啉
[0209]
[0210] 将4-氯-2，5-二氟苯甲醛(1g，5.66mmol)、吗啉(0.490ml，5.66mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.741g，8.21mmol)在二氯乙烷(17ml)中混合。在氩气环境下将混合物在环境温度搅拌3天。
[0211] 加入NaHCO3(饱和水溶液，25ml。用二氯甲烷(x3)萃取混合物。用MgSO4干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩，得到4-(4-氯-2，5-二氟苄基)吗啉(0.600g，43％)，为液体。
[0212] 1H NMR(500MHz，氯 仿-d)δppm 7.27(m，1H，与残余 的CHCl3重 叠)7.13(m，1H)3.73(m，4H)3.52(s，2H)2.48(m，4H)。
[0213] MS(ES+)m/z 248(M+H)+。
[0214] 方法8
[0215] 4-(4-氯-3-氟苄基)吗啉
[0216]
[0217] 将4-氯-3-氟苯甲醛(1.0g，6.31mmol)、吗啉(0.546ml，6.31mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.938g，9.14mmol)在二氯乙烷(19ml)中混合，并在氩气环境下将反应在环境温度搅拌过夜。
[0218] 加入1M HCl(水溶液，25ml)。用二氯甲烷(x4)萃取混合物。通过加入KOH，调节pH值至约12。用二氯甲烷(x4)萃取混合物。用MgSO4干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩，得到4-(4-氯-3-氟苄基)吗啉(0.875g，60％)，为液体。
[0219] 1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 7.50-7.54(m，1H)7.54-7.59(m，2H)4.28-4.36(m，2H)4.09-4.15(m，2H)3.95-4.01(m，2H)3.33(d，2H)2.80-2.91(m，2H)。
[0220] MS(ES+)m/z 230(M+H)+。
[0221] 方法9
[0222] 4-(4-溴-3-氟苄基)吗啉
[0223]
[0224] 将4-溴-3-氟苯甲醛(4.69g，23.10mmol)溶解于脱气二氯乙烷(40mL)中，并在氮气下搅拌。加入吗啉(2.015mL，23.10mmol)，随后分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(6.37g，30.03mmol)。将反应搅拌过夜。加入饱和NaHCO3(水溶液)。分离各个相，并用2M HCl(水溶液)洗涤有机相。在分离漏斗中沉淀出固体。过滤分离固体。合并水相和固体，并加入二氯甲烷。通过加入固体KOH，调节pH值至约10。用二氯甲烷(2x)萃取水相，并干燥和浓缩有机相，得到4-(4-溴-3-氟苄基)吗啉(4.45g，70％)，为固体。
[0225] 1H NMR(500MHz， 氯 仿 -d)δppm 7.48(dd，1H)，7.16(dd，1H)，7.00(dd，1H)，3.69-3.74(m，4H)，3.45(s，2H)，2.44(d，4H).
[0226] MS(ES+)m/z 274(M+H)+。
[0227] 方法10
[0228] 4-(4-溴-2，5-二氟苄基)吗啉
[0229]
[0230] 将4-溴-2，5-二氟苯甲醛(15.8g，60.8mmol)溶解于二氯甲烷(150mL)中，并在氮气下搅拌。加入吗啉(5.83mL，66.9mmol)，随后分批(4x)加入三乙酰氧基硼氢化钠(16.74g，79.0mmol)。
[0231] 将混合物在环境温度搅拌过夜。用饱和NaHCO3(水溶液，80mL)结束反应。分离各个相。向有机相中加入盐酸(水溶液，2M，80mL)。将混合物搅拌20min。过滤分离固体。向固体中加入2M NaOH(60mL)、H2O(60mL)和EtOAc(100mL)。将混合物搅拌15min。分离各个相并浓缩有机相，得到标题化合物，为固体(17.8g，60.9mmol，100％)。
[0232] 1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 7.69(dd，5.83Hz，1H)7.42(dd，1H)3.53-3.60(m，4H)3.48(d，2H)2.30-2.47(m，4H)。
[0233] MS(ES+)m/z 292(M+H)+。
[0234] 工作实施例
[0235] 下述工作实施例用于描述而不是限制本发明。
[0236] 实施例1
[0237] 5-氟-N-(2-氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四 氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺
[0238]
[0239] 将5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(5.12g，18.46mmol)、4-(4-溴-3-氟苄基)吗啉(5.06g，18.46mmol)、(1，1′-二(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(0.152g，0.18mmol)、9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨(0.107g，0.18mmol)和叔戊醇钠(4.07g，36.92mmol)于甲苯(70mL)中的溶液混合并脱气。在氮气环境下，将混合物在110℃搅拌过夜。浓缩混合物。加入二氯甲烷和水并分离各个相。浓缩有机相并用制备HPLC纯化粗物质。将混合的流分浓缩至约一半的体积。用EtOAc(×2)萃取残余物。浓缩合并的有机相，并将残余物在40℃真空干燥24h，得到标题化合物(5.34g，61％)，为固体。
[0240] 1H NMR (500MHz，氯仿-d δppm 8.13(t，1H)，7.62(d，1H)，7.21-7.10(m，2H)，7.04(d，1H)，5.22(s，1H)，4.03(dd，2H)，3.73(br.s.，4H)，3.47(s，2H)，3.26(t，2H)，
2.66(s，3H)，2.56-2.34(m，6H)，1.88(dd，2H)。
+
2.66(s，3H)，2.56-2.34(m，6H)，1.88(dd，2H)。
+
[0241] MS：m/z 471(M+H)。
[0242] 5-氟-N-(2-氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四 氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐.
[0243] 将5-氟-N-(2-氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺溶解于二氯甲烷中。加入HCl于乙醚(1M，1当
量)中的溶液并蒸发溶剂，得到标题化合物，为固体。
1
量)中的溶液并蒸发溶剂，得到标题化合物，为固体。
1
[0244] H NMR：(600MHz，CD3OD)：8.42(d，1H)7.85(t，1H)7.46(d，1H)7.23(d，1H)7.15(d，1H)5.15(tt，1H)3.89(dd，2H)3.73(m，6H)3.16(t，2H)2.66(br.s.，4H)2.61(s，3H)2.32(m，
2H)1.79(dd，2H)。
+
2H)1.79(dd，2H)。
+
[0245] MS：m/z 471(M+H)。
[0246] 实施例2
[0247] 5-氟-N-(2-氟-4-(((R)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐
[0248]
[0249] 将(R)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3-甲基吗啉(200mg，0.69mmol)、5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(192mg，0.69mmol)和叔丁醇钾(78mg，0.69mmol)在二噁烷(4ml)中混合，并将混合物在氩气流下搅拌5分钟。加入Pd2(dba)3(76mg，0.08mmol)和X-Phos(79mg，0.17mmol)，随后加入DMF(1ml)，并将反应混合物在120℃微波反应器中加热40分钟。将粗物质滤过硅藻土。用二氯甲烷稀释滤液，并用盐水洗涤。用二氯甲烷(x3)萃取水相。混合有机相，蒸发并通过硅胶柱色谱法纯化，随后通过制备HPLC纯化。混合含有产物的流分，并加入KOH(水溶液，20％)。用二氯甲烷(x3)萃取混合物。用MgSO4干燥合并的有机相并真空浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中并加入HCl于醚中的溶液(1M，0.08ml)。蒸发溶剂，得到标题化合物的盐酸盐(36mg，10％)
1
1
[0250] H NMR(400MHz，MeOH)δppm 8.54(d，1H)7.98(t，1H)7.89(d，1H)7.35(d，1H)7.27(d，1H)5.06(m，1H)4.02(d，1H)3.95(m，4H)3.51(t，1H)3.38(m，1H)3.04(m，
2H)2.77(s，3H)2.25(m，2H)1.87(m，2H)1.41(d，3H)。
+ +
2H)2.77(s，3H)2.25(m，2H)1.87(m，2H)1.41(d，3H)。
+ +
[0251] MS(ES)：m/z 485(M+H)。
[0252] 实施例3
[0253] 5-氟-N-(2-氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐
[0254]
[0255] 将(S)-4-(4-溴-3-氟苄基)-3-甲基吗啉(240mg，0.83mmol)、5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(231mg，0.83mmol)和叔丁醇钾(93mg，0.83mmol)在二噁烷(4ml)中混合，并将混合物在氩气流下搅拌5分钟。加入Pd2(dba)3(92mg，0.10mmol)和X-Phos(95mg，0.20mmol)，随后加入DMF(0.5ml)，并将反应混合物在120℃微波反应器中加热40分钟。将粗物质滤过硅藻土。将滤液在二氯甲烷和盐水之间分层，并用二氯甲烷(x3)萃取水相。混合有机相并蒸发。通过制备HPLC纯化残余物。混合含有产物的流分，并加入20％KOH(水溶液)。用二氯甲烷(x3)萃取混合物，并用MgSO4干燥合并的有机相并真空浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中并加入HCl于醚中的溶液(1M，0.05ml)。蒸发溶剂，得到标题化合物(24mg，5.5％)。
[0256] 1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 9.15(s，1H)8.51(m，1H)7.44(t，1H)7.33(d，1H)7.14(dd，1H)7.08(dd，1H)4.91(m，1H)3.92(d，1H)3.72(m，2H)3.62(m，2H)3.44(dd，
1H)3.14(m，2H)2.95(m，2H)2.40(m，1H)2.08(m，3H)1.57(m，2H)1.00(d，3H)。
1H)3.14(m，2H)2.95(m，2H)2.40(m，1H)2.08(m，3H)1.57(m，2H)1.00(d，3H)。
[0257] MS(ES+)：m/z 485(M+H)+。
[0258] 实施例4
[0259] N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2-氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐
[0260]
[0261] 将(3S，5S)-4-(4-溴-3-氟 苄 基)-3，5-二 甲基 吗啉 (0.110g，0.36mmol)、5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(0.101g，
0.36mmol)和叔丁醇钾(0.041g，0.36mmol)在二噁烷(2mL)和DMF(0.5mL)中混合。向混合物中通入氩气使其起泡2分钟。加入Pd2(dba)3(0.040g，0.04mmol)和X-Phos(0.042g，
0.09mmol)，并将反应混合物在120℃微波反应器中加热40分钟。
0.36mmol)和叔丁醇钾(0.041g，0.36mmol)在二噁烷(2mL)和DMF(0.5mL)中混合。向混合物中通入氩气使其起泡2分钟。加入Pd2(dba)3(0.040g，0.04mmol)和X-Phos(0.042g，
0.09mmol)，并将反应混合物在120℃微波反应器中加热40分钟。
[0262] 用二氯甲烷稀释混合物并滤过硅藻土填料。用二氯甲烷和甲醇洗涤过滤后的填料。浓缩滤液并通过制备HPLC纯化。混合含有产物的流分。加入NaHCO3(水溶液)，并用二氯甲烷(x3)萃取混合物。干燥(MgSO4)合并的有机相并蒸发。将残余物溶解于二氯甲烷(4ml)中并加入HCl(1M于乙醚中的溶液，0.1ml)。蒸发溶剂，得到标题化合物(35mg，18％)，为固体。
[0263] 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.73(br.s.，1H)9.63(s，1H)8.76(d，1H)8.01(s，1H)7.89(d，1H)7.64(t，1H)7.57(m，1H)4.90(m，1H)4.70(dd，1H)4.07(m，2H)3.91(m，
1H)3.73(m，5H)3.56(br.s.，1H)3.10(m，3H)2.74(s，3H)2.08(m，2H)1.75(d，2H)1.38(d，
3H)1.28(d，3H)。
1H)3.73(m，5H)3.56(br.s.，1H)3.10(m，3H)2.74(s，3H)2.08(m，2H)1.75(d，2H)1.38(d，
3H)1.28(d，3H)。
[0264] MS(ES+)：m/z 499(M+H)+。
[0265] 实施例5
[0266] N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺
[0267]
[0268] 将5- 氟-4-(2-甲 基-1-( 四 氢 -2H-吡 喃-4- 基)-1H-咪 唑-5- 基) 嘧啶-2-胺(0.876g，3.16mmol)、4-(4-溴-2，5-二氟苄基)吗啉(0.923g，3.16mmol)、叔戊醇钠(0.696g，6.32mmol)、(1，1′-二(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(0.026g，0.03mmol)和(9，9-二甲基-9H-呫吨-4，5-二基)二(二苯基膦)(0.018g，0.03mmol)于甲苯(10mL)中的溶液混合并脱气。在氮气环境下将混合物在110℃搅拌过夜。浓缩混合物。加入二氯甲烷和水并分离各个相。浓缩有机相，并通过制备HPLC纯化粗物质。将混合的流分浓缩至约一半的体积，并用EtOAc(x2)萃取残余物。浓缩有机相，并将残余物在40℃真空干燥一周以上，得到标题化合物(0.992g，64％)，为固体。
[0269] 1H NMR (500MHz， 氯 仿 -d δppm 8.36(d，1H)8.15(dd，1H)，7.64(d，1H)，7.30(d，1H)，7.19(dd，1H)，5.20-5.33(m，1H)，4.09(dd，2H)，3.73(t，4H)，3.52(s，2H)，
3.25-3.37(m，2H)，2.67(s，3H)，2.38-2.58(m，6H)，1.93(dd，2H)。
3.25-3.37(m，2H)，2.67(s，3H)，2.38-2.58(m，6H)，1.93(dd，2H)。
[0270] MS：m/z 489(M+H)+.
[0271] N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺二琥珀酸盐
[0272] 将5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(33,6g，121,17mmol)、4-(4-溴-2，5-二氟苄基)吗啉(37,5g，128,44mmol)、(1，1′-二(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(0,997g，1,21mmol)、9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨(0,701g，1,21mmol)和叔戊醇钠(20,02g，181,75mmol)在甲苯(260mL)中混合。在氩气环境下在100℃加热混合物24h。加入4-(4-溴-2，5-二氟苄基)吗啉(4.0g，
13.7mmol)，并在氩气环境下将混合物在100℃加热40h。
13.7mmol)，并在氩气环境下将混合物在100℃加热40h。
[0273] 将混合物冷却至室温。加入水(100mL。通过蒸发浓缩混合物。加入二氯甲烷(250ml+250ml)。用水(2×250mL)洗涤混合物。通过蒸发浓缩有机相。残余物溶解于EtOAc(400mL)中，加入柠檬酸(2M，水溶液，500mL)，并在室温将混合物剧烈搅拌30min。分离各个相，并用柠檬酸(2M，水溶液，100mL)萃取有机相。用固体KOH珠使合并的水相碱化至pH值为10-11，并用EtOAc(5×200mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)，过滤并通过蒸发浓缩，得到72g粗的油状物。
[0274] 将粗物质溶解于EtOAc(180mL)并加入溶解于MeOH(280mL)中的琥珀酸(34，8g，295，10mmol)。将混合物在室温搅拌30min，然后加入庚烷(300mL)。将混合物在室温剧烈搅拌过夜。过滤分离形成的固体。用EtOAc∶庚烷＝1∶2(400mL)的混合物洗涤固体。真空干燥固体，得到标题化合物，为二琥珀酸盐(73g，83％)。
[0275] 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.16(br.s.，4H)9.32(s，1H)8.56(d，1H)7.49(dd，1H)7.36(d，1H)7.24(dd，1H)4.95(m，1H)3.75(dd，2H)3.56(t，4H)3.46(s，
2H)2.99(t，2H)2.37(m，4H)2.10(m，2H)1.63(m，2H)
2H)2.99(t，2H)2.37(m，4H)2.10(m，2H)1.63(m，2H)
[0276] MS：m/z 489(M+H)+；
[0277] 熔点162℃。
[0278] 通过X射线粉末衍射(XRPD)分析固体，显示其为晶体。
[0279] 使用XRPD仪器分析结晶度，其为PANalytical X′Pert Pro，Bragg-Brentano，θ-θ，Cu Kα，旋转样品和PIXcel检测器。
[0280] 下面示出用°2θ(Cu Kα)表示的测量的角度的衍射和相对强度：7.12(vs)，9.41(vs)，9.90(s)，10.68(vs)，12.84(vs)，14.27(s)，17.86(vs)，21.45(vs)，24.61(s) 和
25.31(vs)。
25.31(vs)。
[0281] 相对强度是从用可变狭缝测量的衍射图中得到的。所测量的相对强度与最强峰相比，大于50％的称作非常强(vs)，在25和50％之间的称作强(s)。
[0282] 重要的用°2θ(Cu Kα)表示的测量的角度和相对强度为：7.12(vs)，9.41(vs)，9.90(s)，12.84(vs)和25.31(vs)。
[0283] 更重要的用°2θ(Cu Kα)表示的测量的角度和相对强度为：7.12(vs)和12.84(vs)。
[0284] N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺半琥珀酸盐
[0285] 在室温将N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺二琥珀酸盐(1.08g)于乙酸乙酯
(10ml)和甲醇(10ml)的混合物中成浆24hrs。过滤固体，并在40℃真空干燥，得到N-(2，
5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪
唑-5-基)嘧啶-2-胺半琥珀酸盐(0，36g)，为结晶固体。
(10ml)和甲醇(10ml)的混合物中成浆24hrs。过滤固体，并在40℃真空干燥，得到N-(2，
5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪
唑-5-基)嘧啶-2-胺半琥珀酸盐(0，36g)，为结晶固体。
[0286] 熔点177℃。
[0287] 通过X射线粉末衍射(XRPD)分析固体，显示其为晶体。
[0288] 使用XRPD仪器分析结晶度，其为PANalytical X′Pert Pro，Bragg-Brentano，θ-θ，Cu Kα，旋转样品和PIXcel检测器。
[0289] 下面展示了用°2θ(Cu Kα)表示的测量的角度的衍射和相对强度：6.84(vs)、7.84(vs)、11.25(s)、13.08(s)、13.43(m)、16.15(s)、16.97(s)、19.39(s)、19.95(m)、
21.10(vs)、22.25(m)和23.92(s)。
21.10(vs)、22.25(m)和23.92(s)。
[0290] 相对强度是从用可变狭缝测量的衍射图中得到的。所测量的相对强度与最强峰相比，大于50％的称作非常强(vs)，在25和50％之间的称作强(s)。
[0291] 重要的用°2θ(Cu Kα)表示的测量的角度和相对强度为：6.84(vs)、7.84(vs)、11.25(s)、13.08(s)、16.15(s)、19.39(s)、21.10(vs)和23.92(s)。
[0292] 更重要的用°2θ(Cu Kα)表示的测量的角度和相对强度为：6.84(vs)和7.84(vs)。
[0293] 本领域的技术人员将会理解，由于多种原因(包括择优取向)，XRPD强度可能在不同的样品和不同的样品制剂之间发生变化。本领域的技术人员也将会理解，由于多种原因(包括在衍射仪中样品表面水平的变化、源自自动和手动判定的峰的设置的变化)，在所测量的角度中可能会出现小的位移。不应把数值看做是绝对的。
[0295] 熔点是根据熔融吸热的始点来确定的，有时候指的是外推始点。
[0296] 公知的是，DSC始点和峰温度以及能量值可能会变化，因为例如，样品纯度和样本量以及因为仪器参数，特别是温度扫描速度。因此，所提供的DSC数据并不作为绝对值。
[0297] 本领域的技术人员能够为差示扫描热计设置仪器参数，由此可以根据标准方法(例如公开于 ，G.W.H.et al(1996)，Differential Scanning Calorimetry，Springer，Berlin中的那些)来采集可与本申请所提供的数据相比较的数据。
[0298] 实施例6
[0299] N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐
[0300]
[0301] 将5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(432mg，1.56mmol)溶解于1，4-二噁烷(18ml)中，并加入4-(4-氯-2，5-二氟苄基)吗啉(390mg，1.57mmol)和叔丁醇钾(230mg，2.05mmol)。用氩气冲洗混合物，并搅拌5-10分钟。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(144mg，0.16mmol)和2-二环己基膦基-2′，4′，
6′-三-异丙基-1，1′-联苯(150mg，0.31mmol)。在氩气环境下将混合物在102℃加热
3h。
6′-三-异丙基-1，1′-联苯(150mg，0.31mmol)。在氩气环境下将混合物在102℃加热
3h。
[0302] 将粗混合物滤过硅藻土并用二氯甲烷洗涤滤塞。真空浓缩溶液并通过制备HPLC纯化残余物。混合含有产物的流分并加入Na2CO3(aq.)。用二氯甲烷(x3)萃取混合物，用Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中并加入HCl于乙醚中的溶液(1M)。蒸发溶剂，得到N-(2，5-二氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(125mg，15％)，为盐酸盐。
[0303] 1H-NMR：(600MHz，CD3OD)：8.63(br s，1H)，8.22(br s，1H)，7.78(br s，1H)，7.42(br s，1H)，5.18(m，1H)，4.32(s，2H)，4.01(dd，2H)，3.44(m，1H)，3.36(t，3H)，3.33(m，
4H)，3.17(m，1H)，2.77(br s，3H)，2.44(m，2H)。
4H)，3.17(m，1H)，2.77(br s，3H)，2.44(m，2H)。
[0304] MS：m/z 489(M++1)。
[0305] 实施例7
[0306] N-(2，5-二氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺
[0307]
[0308] 将 (S)-4-(4- 溴 -2，5- 二 氟 苄 基 )-3- 甲 基 吗 啉 (430mg，1.40mmol)、5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(389mg，
1.40mmol)和叔丁醇钾(158mg，1.40mmol)在二噁烷(7mL)中混合，并向混合物中通入氩气起泡5分钟。加入Pd2(dba)3(154mg，0.17mmol)和X-Phos(161mg，0.34mmol)，随后加入DMF(1.75mL)，并将反应混合物在120℃微波反应器中加热40分钟。
1.40mmol)和叔丁醇钾(158mg，1.40mmol)在二噁烷(7mL)中混合，并向混合物中通入氩气起泡5分钟。加入Pd2(dba)3(154mg，0.17mmol)和X-Phos(161mg，0.34mmol)，随后加入DMF(1.75mL)，并将反应混合物在120℃微波反应器中加热40分钟。
[0309] 将混合物滤过硅藻土，并用二氯甲烷洗涤滤塞。浓缩滤液，并通过制备HPLC纯化残余物。混合含有产物的流分，用二氯甲烷(x3)萃取，用MgSO4干燥并真空浓缩，得到标题化合物，为固体(104mg，15％)。1
[0310] H NMR(500MHz，氯 仿 -d)δppm 8.35(d，1H)8.11(dd，1H)7.64(d，1H)7.35(d，1H)7.20(dd，1H)5.14-5.29(m，1H)4.08(dd，2H)3.89(d，1H)3.68-3.79(m，2H)3.57-3.66(m，
1H)3.24-3.37(m，3H)2.68(br.s.，1H)2.67(s，2H)2.64(d，1H)2.49-2.57(m，1H)2.44(qd，
2H)2.25-2.33(m，1H)1.92(d，2H)1.08(d，2H)。
+ +
1H)3.24-3.37(m，3H)2.68(br.s.，1H)2.67(s，2H)2.64(d，1H)2.49-2.57(m，1H)2.44(qd，
2H)2.25-2.33(m，1H)1.92(d，2H)1.08(d，2H)。
+ +
[0311] MS(APCI)：m/z 503(M+H)。
[0312] N-(2，5-二氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐
[0313] 将固体(104mg)溶解于二氯甲烷(2ml)中并加入HCl于醚中的溶液(1M，0.25mL)。过滤收集固体，得到N-(2，5-二氟-4-(((S)-3-甲基吗啉代)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(39.0mg)，为盐酸盐。
1
1
[0314] H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 11.41(br.s.，1H)9.81(br.s.，1H)8.82(d，1H)8.01(br.s.，1H)7.75(br.s.，2H)4.96(br.s.，1H)3.90(m，2H)3.83(d，4H)3.15(t，
3H)2.76(s，3H)2.13(m，2H)1.83(d，2H)1.40(br.s.，3H)
+ +
3H)2.76(s，3H)2.13(m，2H)1.83(d，2H)1.40(br.s.，3H)
+ +
[0315] MS(APCI)m/z 503(M+H)。
[0316] 实施例8
[0317] N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2，5-二氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺
[0318]
[0319] 将(3S，5S)-4-(4-氯-2，5-二氟苄基)-3，5-二甲基吗啉(0.118g，0.43mmol)、5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(0.142g，
0.51mmol)和叔丁醇钾(0.058g，0.51mmol)在二噁烷(2mL)和DMF(0.5mL)中混合。向混合物中通入氩气起泡2分钟。加入Pd2(dba)3(0.047g，0.05mmol)和X-Phos(0.049g，
0.10mmol)，并将反应混合物在120℃微波反应器中加热40分钟。用二氯甲烷稀释混合物并滤过硅藻土填料。用二氯甲烷和甲醇洗涤滤塞。浓缩滤液，并通过制备HPLC纯化。混合含有产物的流分。加入NaHCO3(水溶液)，并用二氯甲烷(x3)萃取混合物。干燥(MgSO4)合并的有机相和蒸发，得到标题化合物，为固体(16mg，7.2％)。
0.51mmol)和叔丁醇钾(0.058g，0.51mmol)在二噁烷(2mL)和DMF(0.5mL)中混合。向混合物中通入氩气起泡2分钟。加入Pd2(dba)3(0.047g，0.05mmol)和X-Phos(0.049g，
0.10mmol)，并将反应混合物在120℃微波反应器中加热40分钟。用二氯甲烷稀释混合物并滤过硅藻土填料。用二氯甲烷和甲醇洗涤滤塞。浓缩滤液，并通过制备HPLC纯化。混合含有产物的流分。加入NaHCO3(水溶液)，并用二氯甲烷(x3)萃取混合物。干燥(MgSO4)合并的有机相和蒸发，得到标题化合物，为固体(16mg，7.2％)。
[0320] 1H NMR(500MHz，氯 仿 -d)δppm 8.35(d，1H)8.10(dd，1H)7.64(d，1H)7.31(dd，1H)7.25(br.s.，1H)5.27(m，1H)4.08(dd，2H)3.80(d，1H)3.70(dd，2H)3.52(d，1H)3.40(dd，
2H)3.31(t，2H)2.85(m，2H)2.68(s，3H)2.44(qd，2H)2.01(s，1H)1.93(dd，2H)1.68(br.s.，
1H)1.27(m，1H)1.03(d，6H)。
2H)3.31(t，2H)2.85(m，2H)2.68(s，3H)2.44(qd，2H)2.01(s，1H)1.93(dd，2H)1.68(br.s.，
1H)1.27(m，1H)1.03(d，6H)。
[0321] N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2，5-二氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐
[0322] 将N-(4-(((3S，5S)-3，5-二甲基吗啉代)甲基)-2，5-二氟苯基)-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(16mg)溶解于二氯甲烷(4ml)并加入HCl(1M于乙醚中的溶液，0.05ml)。蒸发溶剂，得到标题化合物(0.015g)，为固体。
[0323] 1H NMR(500MHz，METHANOL-d4)δppm 8.67(d，1H)8.23(br.s.，1H)7.88(d，1H)7.56(dd，1H)5.18(m，1H)4.01(dd，3H)3.39(t，2H)2.83(s，3H)2.41(m，2H)2.01(m，
2H)1.46(br.s.，6H)。
2H)1.46(br.s.，6H)。
[0324] MS(ES+)：m/z 517(M+H)+。
[0325] 一般方法
[0326] 在标明的氘化溶剂中记录400MHz、500MHz或600MHz的1H NMR谱。400MHz谱是用装配有带有Z-梯度的3mm流动注射SEI 1H/D-13C探头的Bruker av400核磁共振波谱仪、用于注射进样的BEST 215液体处理器(liquid handler)或装配有带有Z-梯度的4-核探针的Bruker DPX400核磁共振或Bruker 500MHz ultrashield波谱仪获得的。600MHz谱是用Bruker DRX600核磁共振波谱仪获得的，operating at 600MHz for对1H而言在600MHz下操作，对13C而言在150MHz下操作，对装配有带有Z-梯度的5mm BBO探针的15N而言在60MHz下操作。化学位移是以ppm以下-(ppm down-)和来自TMS的高磁场的形式给出的。
对于共振的相重性，s、d、t、q、m和br分别表示单峰、双峰、三重峰、四重峰、多重峰和宽峰。
对于共振的相重性，s、d、t、q、m和br分别表示单峰、双峰、三重峰、四重峰、多重峰和宽峰。
[0327] LC-MS分析是在装配有Waters X-Terra MS、C8-柱，(3.5μm，100mm x 3.0mm，在白天)的Waters LCMS上记录的。流动相系统是由A：10mM乙酸铵于水/乙腈(95∶5)中的溶液和B：乙腈组成的。使用于4-5分钟内从0％运行至100％B的线性梯度，流速为1.0mL/min。质谱仪装配有在阳或阴离子模式下操作的电喷射离子源(ESI)。毛细管电压为3kV，且质谱仪典型地在m/z100-700之间扫描。可替换地，LC-MS HPLC条件如下：柱：Agilent Zorbax SB-C8(5μm，50mm x 2mm，在白天)流速：1.0mL/min梯度：于5min内从95％A至100％B。A＝含有0.1％甲酸的5％乙腈于水中的溶液，B＝含有0.1％甲酸的乙腈。UV-DAD
210-400nm。
210-400nm。
[0328] 可替换地，LC-MS分析是在装配有Phenomen实施例Luna C18(5μm，50x4.6mm，在白天)的Waters 2790LCMS上记录的。流动相系统是由A：10mM甲酸铵(pH值为4)于水中的溶液和B：乙腈组成的。使用于5分钟内从95％运行至5％B的线性梯度，流速为2.0mL/min。质谱仪装配有在阳或阴离子模式下操作的电喷射离子源(ESI)。毛细管电压为3kV，且质谱仪典型地在m/z 100-700之间扫描。
[0329] 采用大气压化学(APCI或CI)或电喷射(+ESI)电离的自动化系统运行质谱(MS)。通常，只报道了其中观察到母体质量(parent masses)的谱。对于其中同位素分裂导致多重质谱峰(例如当氯存在时)的分子，报道了最小质量的主要离子(the lowest mass major ion)。
[0330] 用装配有Waters X-Terra MS，C8柱(3.0x 100mm，3.5μm)的Agilent HP1100 Series系统进行了HPLC测定。将柱温设定为40℃，流速流设定为1.0mL/min。用二极管阵列检测器在200-300nm之间进行扫描。使用于4min内从0％运行至100％B的线性梯度。流动相A：10mM乙酸铵于水/乙腈(95∶5)中的溶液，流动相B：乙腈。
[0331] 用装配有Genesis AQ，(100×4.6mm，4μm)柱的Dion实施例P680 Series系统进行了HPLC纯度分析。将柱温设定为25℃，流速流设定为1.5mL/min。用二极管阵列检测器在200-300nm之间进行扫描。流动相系统包含：10/90(v/v)乙腈/磷酸盐缓冲液(25mM，pH值为6.8)和B：70/30(v/v)乙腈/磷酸盐缓冲液(25mM，pH值6.8)。使用下表所述的梯度：
[0332]时间(min) ％B
0 5
5 5
20 100
21 5
25 5
0 5
5 5
20 100
21 5
25 5
[0333] 在装配有使用具有所描述的梯度的Waters MS C8柱(19x300mm，7μm)的二极管阵列检测器的Waters Auto纯化HPLC-UV系统上进行了制备HPLC分析。
[0334] 已经使用来自Advanced Chemistry Development，Inc.(ACD/Labs)，Toronto ON，Canada，www.acdlabs.com，2004的软件CambridgeSoft MedChem ELN v2.1或ACD/Name(8.08版本)，或根据IUPAC条约对化合物进行了命名。
[0335] 药理学
[0336] 在闪烁迫近GSK3β测定分析法中的ATP竞争的确定。
[0337] 在384孔底部透明的微量滴定板中用10个浓度的抑制剂一式两份地进行抑制实验。加入终浓度为1mmol/L的生物素化的肽底物(生物素-Ala-Ala-Glu-Glu-Leu-Asp-Ser-Arg-Ala-Gly-Ser(PO3H2)-Pro-Gln-Leu(AstraZeneca，Lund))于含有0.1mU重组人GSK3(邓迪大学，UK)、(1nmol/L活性酶)、10mmol/L吗啉丙磺酸(MOPS)、0.3mmol/L EDTA、0.01％(v/v)β-巯基乙醇、0.003％(w/v)聚乙烯23月桂基醚(苄泽35)、0.4％甘油和
0.02mg牛血清白蛋白(BSA)的测定缓冲液(pH值为7.0)中的溶液，并预孵育10分钟。通过加入0.06mCi[γ-33P]ATP(Amersham，UK)和未标记的ATP于30mmol/L Mg(Ac)2中的溶液(至终浓度为1mmol/L)ATP来启动反应。最终的测定体积为15mL。使用了不含肽底物的空白对照。在室温孵育15min之后，通过加入含有1.3mmol/L EDTA、13mmol/L ATP、0.02％TM
Triton X-100和0.15mg涂覆了抗生蛋白链菌素的SPA珠子的终止溶液来终止反应。在
2000rpm离心5分钟之后，用液体闪烁计数器(1450 MicroBeta Trilux，Perkin Elmer，芬兰)测量放射性。用于计算各种化合物的抑制常数(Ki)的ATP对GSK3的Km值为20μM。
0.02mg牛血清白蛋白(BSA)的测定缓冲液(pH值为7.0)中的溶液，并预孵育10分钟。通过加入0.06mCi[γ-33P]ATP(Amersham，UK)和未标记的ATP于30mmol/L Mg(Ac)2中的溶液(至终浓度为1mmol/L)ATP来启动反应。最终的测定体积为15mL。使用了不含肽底物的空白对照。在室温孵育15min之后，通过加入含有1.3mmol/L EDTA、13mmol/L ATP、0.02％TM
Triton X-100和0.15mg涂覆了抗生蛋白链菌素的SPA珠子的终止溶液来终止反应。在
2000rpm离心5分钟之后，用液体闪烁计数器(1450 MicroBeta Trilux，Perkin Elmer，芬兰)测量放射性。用于计算各种化合物的抑制常数(Ki)的ATP对GSK3的Km值为20μM。
[0338] 在闪烁迫近CDK2测定分析法中的ATP竞争的确定。
[0339] 在96孔底部透明的微量滴定板中用10个浓度的抑制剂一式两份地进行竞争实验。加入相应于稀释80次的部分纯化的杆状病毒感染的昆虫细胞裂解物(cell lysate)于含有50mmol/L HEPES、10mmol/L MnCl2、1mmol/L二硫苏糖醇(DTT)、100μmol/L NaF、100μmol/L钒酸钠、10mmol/L甘油磷酸钠、5μg/mL抑肽酶、2.5μg/mL亮肽酶素和
100μmol/L PMSF，pH值为7.5的缓冲液中的溶液的浓度的Cdk2/细胞周期蛋白E酶。使用了不含酶的空白对照。通过加入1.25μg GST-Rb、0.15μCi[γ-33P]ATP和未标记的终浓度为0.1μmol/L的ATP来启动反应。最终的测定体积为50L。在室温孵育60min之后，通过加入150μL含有45μL的涂覆了蛋白A的SPA珠子于50mmol/L HEPES中的溶液、3.28mg抗谷胱甘肽-S-转移酶、5.5mmol/L EDTA和35mol/L ATP的终止溶液来终止每个反应。将板在2000rpm离心5min，并用液体闪烁计数器(1450 MicroBeta Trilux，Perkin Elmer，芬兰)确定放射性。用于计算各种化合物的抑制常数(Ki)的ATP对Cdk2的Km值为0.5μM。
100μmol/L PMSF，pH值为7.5的缓冲液中的溶液的浓度的Cdk2/细胞周期蛋白E酶。使用了不含酶的空白对照。通过加入1.25μg GST-Rb、0.15μCi[γ-33P]ATP和未标记的终浓度为0.1μmol/L的ATP来启动反应。最终的测定体积为50L。在室温孵育60min之后，通过加入150μL含有45μL的涂覆了蛋白A的SPA珠子于50mmol/L HEPES中的溶液、3.28mg抗谷胱甘肽-S-转移酶、5.5mmol/L EDTA和35mol/L ATP的终止溶液来终止每个反应。将板在2000rpm离心5min，并用液体闪烁计数器(1450 MicroBeta Trilux，Perkin Elmer，芬兰)确定放射性。用于计算各种化合物的抑制常数(Ki)的ATP对Cdk2的Km值为0.5μM。
[0340] CaCo-2细胞渗透性测定
[0341] 将CaCo-2细胞以对24孔板(0.33cm2/孔)而言340500细胞/cm2的密度接种于滤膜上。细胞在包含含有葡萄糖和L-谷氨酰胺、添加了10％胎牛血清、100U/ml青霉素-G和100μg/ml链霉素和1％(v/v)100X非必需氨基酸的达尔伯克改良伊格尔培养基的培养基中生长。每隔两天更换培养基，并将细胞保持在37℃、95％相对湿度和5％CO2中。用培养了21-28天、细胞传代数在25和50之间的细胞单层进行了渗透性研究。
[0342] Alt 1.在实施例3、5、6中使用的CaCo-2渗透率测定和参考实施例。
[0343] 在梯度pH-梯度条件(顶部的pH值为6.5，基地外侧的pH值为7.4)下，在顶部向基底外测的方向进行CaCo-2渗透率测定。将含有25mM HEPES(pH值为7.4)和25mM MES(pH值为6.5)的HBSS用作运送培养液。用运送培养液洗涤完全分化的细胞单层。药物溶液，典型地为10μM，是在pH值为6.5(1％DMSO)的运送培养液中制备的。渗透率实验是通过在顶面加入0.2ml药物溶液而启动的。基地外侧面含有0.8ml运送培养液，pH值为7.4。针对每种药物，对三个含有细胞的嵌入物和一个不含细胞的嵌入物进行了测定。细胞保存在37℃培养箱中并振摇。在45和90min时，从基底外侧面中提取200μl样品。在第一次取样之后，将相同体积的运送缓冲液加入至基底外侧隔室中。化合物的回收率是通过计算累积运送量和留在供体面的量的总和比上药物的初始量来计算的。用液相色谱法串联质谱法(LC/MS/MS)在线分析样品。通过测量实验中每个孔中放射标记的甘露醇(细胞旁的标记分子)的渗透率以确保细胞单层的完整性。通过液体闪烁分析25μl样品。
[0344] Alt 2.在实施例2-4、7-8中使用的CaCo-2A至B的渗透率测定。
[0345] 在pH值为7.4时，在顶部向基底外测的方向进行CaCo-2A至B测定(每个重复两次)。将含有25mM HEPES(pH值7.4)的HBSS用作运送培养液。药物溶液，典型地为10μM，是在运送培养液(1％DMSO)中制备的。对六个化合物的研究可以在一个产生一个96深孔分析板(6个板的最大容量＝36个化合物和6个深孔板)的24孔板中进行。在开始之前，用10分钟时间用HBSS洗涤CaCo-2细胞单层一次。首先，将800μL运送培养液(HBSS，pH值为7.4)施予细胞单层的基面。然后，通过加入225μL的每种化合物(10μM)至顶面来启动测定。立即(供体0)以及在加入测试化合物后60min时(供体结束，受体60)提取样品。分别从供体隔室和受体隔室中提取25μL和150μL。在洗涤步骤和与化合物孵育期间，将transwell板置于480rpm振摇的37℃培养箱中。通过测量0min至60min的时间放14
射标记的[ C]甘露醇(低的被动细胞旁扩散)在供体隔室中的量以监测上皮细胞单层的完整性。用96孔卢马板(Luma Plate)来分析[14C]甘露醇。化合物的回收率是通过计算累积运送量和留在供体面的量的总和比上药物的初始量来计算的。用液相色谱法串联质谱法(LC/MS/MS)在线分析样品。
射标记的[ C]甘露醇(低的被动细胞旁扩散)在供体隔室中的量以监测上皮细胞单层的完整性。用96孔卢马板(Luma Plate)来分析[14C]甘露醇。化合物的回收率是通过计算累积运送量和留在供体面的量的总和比上药物的初始量来计算的。用液相色谱法串联质谱法(LC/MS/MS)在线分析样品。
[0346] 表观渗透率系数按照下述来计算：
[0347]
[0348] 其中ΔQ/Δt为每单位时间运送至受体隔室(receiver chamber)的物质的总量，A为表面积(cm2)、C0为起始供体浓度。
[0349] 表观渗透率Papp以x10-6cm/sec的方式来表达。
[0350] 结果
[0351] 本发明的式(I)化合物的GSKβKi值、CDK2Ki值、GSK3β对CDK2的选择性示于表1中。所有给出的值为平均值。
[0352] 本发明的式(I)的化合物的CaCo-2Papp/CaCo-2A至B Papp示于表2中。所有给出的值为平均值。
[0353]
[0354] 表2
[0355]
[0356] 参考实施例：WO2007/040440，实施例15；5-氟-4-(2-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑-5-基)-N-(4-(吗啉代甲基)苯基)嘧啶-2-胺
[0357]
[0358]
[0359] 使用下述缩写词：
[0360] APCI 大气压化学电离
[0361] ATP 三磷酸腺苷
[0362] BSA 牛血清白蛋白
[0363] CaCo-2 人上皮结直肠腺癌细胞
[0364] CDK2 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2
[0365] CI 化学电离
[0366] Cs2CO3 碳酸铯
[0367] DCM 二氯甲烷
[0368] DMF N，N-二甲基甲酰胺
[0369] DMSO 二甲亚砜
[0370] DTT 二硫苏糖醇
[0371] EDTA 乙二胺四乙酸
[0372] EIS 电喷射电离
[0373] EtOAc 乙酸乙酯
[0374] GSK3 糖原合酶激酶3
[0375] HBSS 汉克平衡盐缓冲液
[0376] HCl 盐酸盐
[0377] HEPES 4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸
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