吲哚化合物和治疗内脏痛的方法
阅读：536发布：2020-12-13
专利汇可以提供吲哚化合物和治疗内脏痛的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了 治疗 哺乳动物 体内由一 氧 化氮合成酶(NOS)作用或由血清素5HT1D/1B受体作用所造成的内脏痛或症状的方法，通过给予有需要的患者 治疗有效量 的用化学式(I)表示的吲哚化合物、或它的药用盐或药物前体。本发明的方法还可以包括给予其他治疗剂。本发明还提供了化学式(I)表示的新化合物，它的药物组合物以及分离对映体混合物的方法。，下面是吲哚化合物和治疗内脏痛的方法专利的具体信息内容。
1.一种治疗内脏痛的方法，所述方法包括给予有需要的患者治疗
有效量的具有以下化学结构式的化合物：
或它的药用盐或药物前体，其中，
1
R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C1-4烷基杂环基或可选取代的C3-8环烷基；
2 3
R 和R 分别独立地为H、Hal、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9桥连的杂环基、可选取代的C1-4桥连的烷基杂环基、可选取代的C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；
4 7
R 和R 分别独立地为H、F、C1-6烷基或C1-6烷氧基；
5 5A 5B 5A
R 为H、R C(NH)NH(CH2)r5或R NHC(S)NH(CH2)r5，其中r5为0至2的整数，R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基、可选取
5B
代的芳酰基或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；而R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基或可选取代的芳酰基；并且
6 6A 6B 6A
R 为H、F、R C(NH)NH(CH2)r6或R NHC(S)NH(CH2)r6，其中r6为0到2的整数，R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基、可选
6B
取代的芳酰基、或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；而R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基、或可选取代的芳酰基。
6
2.根据权利要求1所述的方法，其中R 为H。
1
3.根据权利要求2所述的方法，其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C1-4烷芳基或可选取代的C1-4烷基杂环基。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述内脏痛继发于过敏性肠综合征、炎性肠综合征、胰腺炎、憩室炎、克罗恩氏病、腹膜炎、心包炎、肝炎、阑尾炎、结肠炎、胆囊炎、肠胃炎、子宫内膜异位、痛经、间质性膀胱炎、前列腺炎、胸膜炎、上胃肠道消化不良、肾绞痛、或胆石绞痛。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述内脏痛由赘生物、感染或损伤造成。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述内脏痛是炎性的。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述内脏痛是非炎性的。
5A
8.根据权利要求1所述的方法，其中R 为甲基、氟甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、硫代甲氧基、硫代乙氧基、硫代正丙氧基、硫代异丙氧基、硫代正丁氧基、硫代异丁氧基、硫代叔丁氧基、苯基、苄基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噁唑、4-噁唑、5-噁唑、2-噻唑、4-噻唑、5-噻唑、2-异噁唑、3-异噁唑、4-异噁唑、2-异噻唑、
3-异噻唑和4-异噻唑。
1 2 3
9.根据权利要求1所述的方法，其中R、R 和R 中的一个或多个不是H。
1 1 1
10.根据权利要求1所述的方法，其中R 为(CH2)m1X，其中X 选自：
其中
R1A和R1B分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基；
R1C和R1D分别独立地为H、F、OH、CO2R1E或NR1FR1G，其中R1E、R1F和R1G分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基，或R1C和R1D连同与它们键合的碳为C＝O。
Z1为NR1H、NC(O)R1H、NC(O)OR1H、NC(O)NHR1H、NC(S)R1H、NC(S)NHR1H、NS(O)2R1H、O、S、S(O)或S(O)2，其中R1H为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基；
m1为0至6的整数；
n1为1至4的整数；
p1为0至2的整数；和
q1为0至5的整数。
1
11.根据权利要求10所述的方法，其中当X 为 时，
X1选自
2 2 2
12.根据权利要求1所述的方法，其中R 为(CH2)mX，其中X 选自：
其中
2A 2B
R 和R 分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基；
2C 2D 2E 2F 2G 2E 2F 2G
R 和R 分别独立地为H、F、OH、CO2R 、或NR R ，其中R 、R 和R 分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳
2C 2D
基、C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基，或R 和R 连同与它们键合的碳为C＝O；
2 2H 2H 2H 2H
Z 为NR 、NC(O)R 、NC(O)OR 、NC(O)NHR 、
2H 2H 2H 2H
NC(S)R 、NC(S)NHR 、NS(O)2R 、O、S、S(O)、或S(O)2，其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基；
m2为0至6的整数；
n2为1至4的整数；
p2为0至2的整数；和
q2为0至5的整数。
2 2
13.根据权利要求12所述的方法，其中当X 为 时，x 选自
3 3 3
14.根据权利要求1所述的方法，其中R 为(CH2)mX，其中X 选自：
和
其中
R3A和R3B分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基；
R3C和R3D分别独立地为H、F、OH、CO2R3E或NR3FR3G，其中R3E、R3F和R3G分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基，或R3C和R3D连同与它们键合的碳为C＝O；
Z3为NR3H、NC(O)R3H、NC(O)OR3H、NC(O)NHR3H、NC(S)R3H、NC(S)NHR3H、NS(O)2R3H、O、S、S(O)或S(O)2，其中R3H为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基；
m3为0至6的整数；
n3为1至4的整数；
p3为0至2的整数；和
q3为0至5的整数。
3 3
15.根据权利要求14所述的方法，其中当X 为 时，X 选自
2
16.根据权利要求1所述的方法，其中R 为
2J2 2J3 2J4 2J5 2J6
其中R 、R 、R 、R 和R 分别独立地为H、C1-6烷基；OH；C1-6烷氧基；SH；C1-6硫代
2Ja 2Jb 2Ja 2Jb
烷氧基；卤素；NO2；CN；CF3；OCF3；NR R ，其中R 和R 分别独立地为H或C1-6烷基；C(O)
2Jc 2Jc 2Jd 2Jd 2Je 2Jf
R ，其中R 为H或C1-6烷基；CO2R ，其中R 为H或C1-6烷基；四唑基；C(O)NR R ，其
2Je 2Jf 2Jg 2Jg 2Jh
中R 和R 分别独立地为H或C1-6烷基；OC(O)R ，其中R 为C1-6烷基；NHC(O)R ，其中
2Jh 2Ji 2Jj 2Ji 2Jj
R 为H或C1-6烷基；SO3H；S(O)2NR R ，其中R 和R 分别独立地为H或C1-6烷基；S(O)
2Jk 2Jk 2Jl 2Jl
R ，其中R 为C1-6烷基；和S(O)2R ，其中R 是C1-6烷基。
17.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物选自：2-乙基-1-(1H-吲
哚-5-基)-异硫脲；N-(1H-吲哚-5-基)-噻吩-2-甲脒；N-[1-(2-二甲氨基-乙
基)-1H-吲哚-6-基]-噻吩-2-甲脒；N-{1-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]-1H-吲哚-6-基}-噻吩-2-甲脒；1-[1-(2-二甲氨基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-2-乙基-异
硫脲；N-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-噻吩-2-甲脒；N-(1-苯乙
基-1H-吲哚-6-基)-噻吩-2-甲脒；N-[3-(2-二甲氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-噻吩-2-甲脒；N-(1-{2-[2-(4-溴-苯基)-乙胺基]-乙基}-1H-吲哚-6-基)-噻吩-2-甲脒；(+)-N-{1-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]-1H-吲哚-6-基}-噻吩-2-甲
脒；(-)-N-{1-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]-1H-吲哚-6-基}-噻吩-2-甲脒；
N-[1-(1-甲基-氮 -4-基)-1H-吲哚-6-基]-噻吩-2-甲脒；和N-[1-(2-哌啶-1-基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-噻吩-2-甲脒。
1 3
18.根据权利要求1所述的方法，其中R 或R 为 或
X
其中Z为NR，o为0-3的整数，p为1至2的整数，q为0至2的整数，r为从0至1的
1 3
整数，s为1至3的整数，u为0至1的整数，而t为3至7的整数，其中所述R 或R 取代基x
包括0至6个碳-碳双键或0或1个碳-氮双键，并且其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基。
19.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有以下化学结构式：
其中X为O或S。
20.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物选自：
21.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有以下化学结构式：
22.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有以下化学结构式：
23.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有以下化学结构式：
24.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有以下化学结构式：
(-)-顺式-对映体， 反式-对映体的混合物，
反式-对映体的混合物， 顺式-对映体的混合物，
四种异构体的混合物。
25.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有以下化学结构式：
26.根据权利要求1所述的方法，进一步包括给予5HT1B或5HT1D受体激动剂。
27.根据权利要求1所述的方法，进一步包括给予曲普坦。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述曲普坦为舒马曲普坦、利扎曲普坦、那拉曲普坦、佐米曲普坦、依来曲普坦、阿莫曲普坦或夫罗曲普坦。
29.根据权利要求1所述的方法，进一步包括给予所述患者一种或多种选自镇痛剂、抗抑郁剂和抗惊厥剂的药剂。
30.根据权利要求1所述的方法，其中所述内脏痛继发于肝、肾、卵巢、子宫、膀胱、肠、胃、食管、十二指肠、肠、结肠、脾、胰腺、阑尾、心脏或腹膜疾病。
31.一种具有 结构的化合物，或其药用盐。
32.一种具有 结构的化合物，或其药用盐。
33.一种药物组合物，包含 和药用载体。
34.一种药物组合物，包含 和药用载体。
35.一种具有 结构的化合物或其盐。
36.一种具有 结构的化合物或其盐。
37.一种具有 结构的化合物或其盐。
38.一种具有 结构的化合物或其药用盐。
39.一种药物组合物，包含 和药用载体。
40.一种合成 的对映异构体的方法，所述方法
包括下列步骤：
a.将3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺与氯甲酸苄基酯反应以形成
(±)3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯；
b.将(±)3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯进行手性HPLC
或SFC(超临界流体色谱法)以分离3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯的对映异构体；
c.通过氢化使3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯的一个对映异构体脱保护以得到3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺的一个对映异构体；以及d.将3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺的一个对映异构体与噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯反应。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述对映异构体为(+)对映异构体。
42.根据权利要求40所述的方法，其中所述对映异构体为(-)对映异构体。
43.一种治疗哺乳动物体内由一氧化氮合成酶(NOS)作用造成的症状的方法，其中所述方法包括给予所述哺乳动物有效量的根据权利要求1所述的化合物。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述哺乳动物为人。
45.根据权利要求43所述的方法，其中所述症状为偏头痛(有或者没有先兆)、慢性紧张型头痛(CTTH)、偏头痛伴异常性疼痛、神经性疼痛、中风后疼痛、慢性头痛、慢性疼痛、急性脊髓损伤、糖尿病性神经病变、三叉神经痛、糖尿病性肾病、炎症疾病、中风、再灌注伤害、头外伤、心源性休克、CABG相关的神经损伤、HCA、AIDS相关的痴呆、神经毒性、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、ALS、杭廷顿氏舞蹈病、多发性硬化、偏亚锑酸引起的神经毒性、药物成瘾、吗啡/阿片样物质引起的耐药性、依赖性、痛觉过敏或脱瘾、酒精耐受性、依赖性或脱瘾、癫痫、焦虑、抑郁、注意力不集中的多动症或精神病。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述症状为中风、再灌注伤害、神经变性、头外伤、CABG相关的神经损伤、偏头痛(有或者没有先兆)、偏头痛伴异常性疼痛、慢性紧张型头痛、神经性疼痛、中风后疼痛、鸦片类物质引起的痛觉过敏或慢性疼痛。
47.根据权利要求43所述的方法，其中所述化合物为3，5-取代的吲哚并且所述症状为偏头痛或慢性紧张型头痛。
48.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物鸦片类物质。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述鸦片类物质为阿芬太尼、布托啡诺、丁丙诺啡、右吗拉胺、地佐辛、右丙氧芬、可待因、双氢可待因、地芬诺酯、埃托啡、芬太尼、氢可酮、氢吗啡酮、凯托米酮、洛哌丁胺、左啡诺、左美沙酮、哌替啶、美普他酚、美沙酮、吗啡、吗啡-6-葡糖苷酸、纳布啡、纳洛酮、羟考酮、羟吗啡酮、喷他佐辛、哌替啶、哌腈米特、丙氧芬、瑞芬太尼、舒芬太尼、替利定和曲马多。
50.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物抗抑郁剂。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述抗抑郁剂为选择性血清素再摄取抑制剂。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述选择性血清素再摄取抑制剂为西酞普兰、依他普仑、氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀或舍曲林。
53.根据权利要求50所述的方法，其中所述抗抑郁剂为去甲肾上腺素再摄取抑制剂。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述去甲肾上腺素再摄取抑制剂为阿米替林、去甲阿米替林、氯米帕明、多塞平、丙米嗪、丙米嗪氧化物、曲米帕明、阿地唑仑、阿米替林氧化物、阿莫沙平、地昔帕明、马普替林、去甲替林、普罗替林、阿米庚酸、布替林、地美替林、二苯西平、二甲他林、度琉平、氟西嗪、伊普吲哚、洛非帕明、美利曲辛、美他帕明、诺洛帕明、诺昔替林、奥匹哌醇、哌拉平、苯噻啶、丙吡西平、奎纽帕明、瑞波西汀或噻奈普汀。
55.根据权利要求50所述的方法，其中所述抗抑郁剂为选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂。
56.根据权利要求55所述的方法，其中选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂为阿托莫西汀、安非他酮、瑞波西汀或托莫西汀。
57.根据权利要求50所述的方法，其中所述抗抑郁剂为血清素/去甲肾上腺素再摄取双重抑制剂。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述血清素/去甲肾上腺素再摄取双重抑制剂为度洛西汀、米那普仑、米氮平、奈法唑酮或文拉法辛。
59.根据权利要求50所述的方法，其中所述抗抑郁剂为单胺氧化酶抑制剂。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述单胺氧化酶抑制剂为阿米夫胺、异丙烟肼、异卡波肼、M-3-PPC(Draxis)、吗氯贝胺、帕吉林、苯乙肼、反苯环丙胺或伐诺司林。
61.根据权利要求50所述的方法，其中所述抗抑郁剂为可逆性单胺氧化酶A型抑制剂。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述可逆性单胺氧化酶A型抑制剂为巴嗪普令、贝氟沙通、溴法罗明、西莫沙酮或氯吉兰。
63.根据权利要求50所述的方法，其中所述抗抑郁剂为三环化合物。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述三环化合物为阿米替林、氯米帕明、地昔帕明、多塞平、丙米嗪、马普替林、去甲替林、普罗替林或曲米帕明。
65.根据权利要求50所述的方法，其中所述抗抑郁剂为阿地唑仑、阿拉丙酯、阿米庚酸、阿米替林/氯氮 的组合、阿替美唑、米塔扎平、巴嗪普令、苯呋拉林、二苯美伦、双胺苯吲哚、比培那醇、溴法罗明、卡罗沙酮、西文氯胺、氰帕明、西莫沙酮、西酞普兰、氯美醇、氯伏胺、氮 尼尔、地阿诺、地美替林、二苯西平、度琉平、屈昔多巴、乙非辛、艾司唑仑、依托哌酮、非莫西汀、酚加宾、非唑拉明、氟曲辛、咪唑克生、吲达品、茚洛秦、伊普吲哚、左丙替林、锂、利托西汀；洛非帕明、美地沙明、美他帕明、美曲吲哚、米安色林、米那普仑、米那匹林、米氮平、孟替瑞林、奈拉西坦、奈福泮、尼亚拉胺、诺米芬辛、诺氟西汀、奥替瑞林、奥沙氟生、匹那西泮、吡吲哚、苯噻啶、利坦色林、咯利普兰、色洛雷敏、司普替林、西布曲明、舒布硫胺、舒必利、替尼沙秦、托扎啉酮、促甲状腺素释放素、噻奈普汀、替氟卡宾、曲唑酮、托芬那辛、托非索泮、托洛沙酮、托莫西汀、维拉必利、维洛沙秦、维喹啉、苯吡烯胺或佐美拉平。
66.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物抗癫痫剂。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述抗癫痫剂为卡马西平、氟吡汀、加巴喷丁、拉莫三嗪、奥卡西平、苯妥英、瑞替加滨、托吡酯或2-丙基戊酸钠。
68.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物非甾族抗炎药物(NSAID)。
69.根据权利要求68所述的方法、其中所述NSAID为阿西美辛、阿司匹林、塞来昔布、德拉昔布、双氯芬酸、二氟尼柳、乙水杨胺、依托芬那酯、依托昔布、非诺洛芬、氟芬那酸、氟比洛芬、氯那唑酸、氯诺昔康、布洛芬、吲哚美辛、伊索昔康、凯布宗、酮洛芬、酮咯酸、萘普生、萘丁美酮、尼氟酸、舒林酸、托美丁、吡罗昔康、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、莫非布宗、羟布宗、帕瑞昔布、芬尼定、保泰松、吡罗昔康、丙帕他莫、异丙安替比林、罗非昔布、水杨酰胺、舒洛芬、噻洛芬酸、替诺昔康、伐地昔布、4-(4-环己基-2-甲基噁唑-5-基)-2-氟苯磺酰胺、N-[2-(环己氧基)-4-硝基苯]甲烷磺酰胺、2-(3，4-二氟苯基)-4-(3-羟基-3-甲基丁氧基)-5-[4-(甲磺酰)苯基]-3(2H)-哒嗪酮、和2-(3，5-二氟苯)-3-[4-(甲磺酰)苯基]-2-环戊烯-1-酮)。
70.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物抗心率不齐剂。
71.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物GABA-B拮抗剂。
72.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物
α-2-肾上腺素能受体激动剂。
73.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物血清素
5HT1B/1D激动剂。
74.根据权利要求73所述的方法，其中所述血清素5HT1B/1D激动剂为阿莫曲普坦、依来曲普坦、夫罗曲普坦、那拉曲普坦、利扎曲普坦、舒马曲普坦或佐米曲普坦。
75.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物N-甲基-D-天冬氨酸盐/酯拮抗剂。
76.根据权利要求75所述的方法，其中所述N-甲基-D-天冬氨酸盐/酯拮抗剂为金刚烷胺；阿替加奈；贝松罗地；布地品；芋螺毒素G；得鲁西明；地塞比诺；右美沙芬；右丙氧芬；非氨酯；氟代非氨酯；加环利定；甘氨酸；伊培沙宗；凯托福林；氯胺酮；凯托米酮；拉尼西明；利可替奈；米达福太；美金刚；D-美沙酮；D-吗啡；米那普仑；奈美胺；奥芬那君；瑞马西胺；磺胺佐辛；FPL-12，495(瑞马西胺代谢物)；托吡酯；(αR)-α-氨基-5-氯-1-(磷酰甲基)-1H-苯并咪唑-2-丙酸；1-氨基环戊烷-羧酸；[5-(氨甲基)-2-[[[(5S)-9-氯-2，
3，6，7-四氢-2，3-二氧代-1H-，5H-吡啶并[1，2，3-de]喹噁啉-5-基]乙酰基]氨基]苯氧基]-乙酸；α-氨基-2-(2-磷酰乙基)-环己烷丙酸；α-氨基-4-(磷酰甲基)-苯乙酸；(3E)-2-氨基-4-(磷酰甲基)-3-庚烯酸；3-[(1E)-2-羧基-2-苯乙烯]-4，6-二氯-1H-吲哚-2-羧酸；8-氯-2，3-二羟哒嗪[4，5-b]喹啉-1，4-二酮5-氧化物与2-羟基-N，N，N-三甲基-乙铵的盐；N’-[2-氯-5-(甲硫基)苯基]-N-甲基-N-[3-(甲硫基)苯基]-胍；N’-[2-氯-5-(甲硫基)苯基]-N-甲基-N-[3-[(R)-甲基亚硫酰基]苯基]-胍；6-氯-2，3，4，9-四氢-9-甲基-2，3-二氧代-1H-茚并[1，2-b]吡嗪-9-乙酸；
7-氯硫代犬尿喹啉酸；(3S，4aR，6S，8aR)-十氢-6-(磷酰甲基)-3-异喹啉羧酸；(-)-6，
7-二氯-1，4-二氢-5-[3-(甲氧基甲基)-5-(3-吡啶)-4-H-1，2，4-三氮唑-4-基]-2，
3-喹噁啉二酮；4，6-二氯-3-[(E)-(2-氧代-1-苯基-3-吡咯烷亚基)甲基]-1H-吲哚-2-羧酸；(2R，4S)-rel-5，7-二氯-1，2，3，4-四氢-4-[[(苯氨)羰基]氨基]-2-喹啉羧酸；(3R，4S)-rel-3，4-二氢-3-[4-羟基-4-(苄基)-1-哌啶基]-2H-1-苯并吡喃-4，
7-二醇；2-[(2，3-二氢-1H-茚-2-基)氨基]-乙酰胺；1，4-二氢-6-甲基-5-[(甲基氨基)甲基]-7-硝基-2，3-喹噁啉二酮；[2-(8，9-二氧代-2，6-二氮杂双环[5.2.0]壬-1(7)-烯-2-基)乙基]-膦酸；(2R，6S)-1，2，3，4，5，6-六氢-3-[(2S)-2-甲氧基丙基]-6，11，11-三甲基-2，6-亚甲基-3-苯并吖辛因-9-醇；2-羟基-5-[[(五氟苯基)甲基]氨基]-苯甲酸；1-[2-(4-羟基苯氧基)乙基]-4-[(4-甲基苯基)甲基]-4-哌啶醇；
1-[4-(1H-咪唑-4-基)-3-丁炔]-4-(苄基)-哌啶；2-甲基-6-(苯乙炔)-吡啶；3-(磷酰甲基)-L-苯丙氨酸；或3，6，7-四氢-2，3-二氧代-N-苯基-1H，5H-吡啶并[1，2，3-de]喹噁啉-5-乙酰胺。
77.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物缩胆囊肽B拮抗剂。
78.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物P物质拮抗剂。
79.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物抗炎化合物。
80.根据权利要求79所述的方法，其中所述抗炎化合物为阿司匹林、塞来昔布、可的松、德拉昔布、二氟尼柳、依托昔布、非诺洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、泼尼松龙、舒林酸、托美丁、吡罗昔康、甲芬那酸、美洛昔康、保泰松、罗非昔布、舒洛芬、伐地昔布、4-(4-环己基-2-甲基噁唑-5-基)-2-氟苯磺酰胺、N-[2-(环己氧基)-4-硝基苯]甲烷磺酰胺、2-(3，
4-二氟苯基)-4-(3-羟基-3-甲基丁氧基)-5-[4-(甲磺酰)苯基]-3(2H)-哒嗪酮、或
2-(3，5-二氟苯基)-3-[4-(甲磺酰)苯基]-2-环戊烯-1-酮。
81.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物DHP敏感性L型钙离子通道拮抗剂、ω-芋螺毒素敏感性N型钙离子通道拮抗剂或P/Q型钙离子通道拮抗剂。
82.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物腺苷激酶拮抗剂。
83.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物腺苷受体A1激动剂、腺苷受体A2a拮抗剂或腺苷受体A3激动剂。
84.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物腺苷脱氨酶抑制剂。
85.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物腺苷核苷转运抑制剂。
86.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物辣椒素VR1受体激动剂。
87.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物大麻素CB1/CB2激动剂。
88.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物AMPA受体拮抗体。
89.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物红藻氨酸盐受体拮抗体。
90.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物钠通道阻断剂。
91.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物烟碱乙酰胆碱受体激动剂。
92.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物KATP钾
2+
通道、Kv1.4钾通道、Ca 激活的钾通道、
SK钾通道、BK钾通道、IK钾通道或KCNQ2/3钾通道开放药剂。
93.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物毒蕈碱M3拮抗剂、毒蕈碱M1激动剂或毒蕈碱M2/M3部分激动剂/拮抗剂。
94.根据权利要求43所述的方法，其中所述方法进一步包括给予所述哺乳动物抗氧化剂。
95.一种药物组合物，包含 和药用载体。
吲哚化合物和治疗内脏痛的方法
[0002] 本专利申请要求2007年11月16日提交的美国临时专利申请No.60/988,757和2008年7月3日提交的美国临时专利申请No.61/133,930的优先权，其均通过引用结合于此。
技术领域
[0003] 本发明涉及治疗内脏痛的化合物和方法。
背景技术
[0004] 内脏痛是最常见的疼痛形式，并且是最难治疗的疼痛类型之一，经常借助于鸦片类物质进行治疗。内脏痛与躯体痛不同，并且通常被描述为起源于身体内腔或器官的疼痛，其具有五种重要的临床和感觉特征：(1)它不是由所有脏器(例如，肝、肾、肺)引起的；(2)它不总是与内脏损伤有关(例如，肠切割不引起疼痛)；(3)它是弥漫性的；(4)它与其他位置有关；以及(5)它可以与其他的自主反射和运动反射有关(例如，恶心、肾绞痛引起的腰肌紧张)(Lancet，1999，353，2145-48)。已经提出了说明内脏痛机制的几种理论。第一种理论中，内脏通过不同的神经元种类受到神经支配，这些神经元种类中的一种涉及自主调控而另一种涉及如疼痛的感觉现象。第二种理论说明了单一均匀的一类感觉感受器，其在激活低频率(正常调控信号)或激活高频率(由强疼痛信号诱导)活化。然而，研究表明内脏通过两类疼痛感觉感受器而受到神经支配：高阈值(主要为在心脏、静脉、肺、气道、食管、胆管系统、小肠、结肠、输尿管、气道、膀胱和子宫中存在的机械受体；通过有害刺激激活)和低阈值强度编码受体，其对无害和有害的刺激(心脏、食管、结肠、膀胱和精巢)产生反应。另一种理论说明了通常对刺激感受迟钝的传入纤维成分(沉默的疼痛感受器)，其可以在炎症过程中激活或敏化(Trends Neurosci.1992，15，374-78)。一旦敏化，这些疼痛感受器对通常在内脏器官中发生的无害刺激产生反应，从而导致对脊髓的收敛投入的阻塞提高，并随后触发了放大外围输入效果的中枢机制。
[0005] 因此，非常需要治疗内脏痛的化合物。
发明内容
[0006] 本发明的特征在于通过给予有需要的患者治疗有效量的具有下列通式的化合物或其药用盐或药物前体治疗内脏痛的方法，其中，1
[0007] R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C1-4烷基杂环基、或可选取代的C3-8环烷基；2 3
[0008] R 和R 分别独立地为H、Hal、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9桥连的杂环基、可选取代的C1-4桥连的烷基杂环基、可选取代的C2-9杂环基、或可选取代的C1-4烷基杂环基；
[0010] R5为H、R5AC(NH)NH(CH2)r5或R5BNHC(S)NH(CH2)r5，其中r5为0至2的整数，R5A为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基、5B
可选取代的芳酰基(aryloyl)、或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；而R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基或可选取代的芳酰基；和
可选取代的芳酰基(aryloyl)、或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；而R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基或可选取代的芳酰基；和
[0011] R6为H、F、R6AC(NH)NH(CH2)r6或R6BNHC(S)NH(CH2)r6，其中r6为0到2的整数，R6A为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基、6B
可选取代的芳酰基或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；并且R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基或可选取代的芳酰基。
可选取代的芳酰基或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；并且R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基或可选取代的芳酰基。
[0012] 在优选的实施方式中，R6为H。
[0013] 在某些实施方式中，R1为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C1-4烷芳基或可选取1
代的C1-4烷基杂环基。在优选的实施方式中，R 为H。
代的C1-4烷基杂环基。在优选的实施方式中，R 为H。
[0014] 本发明方法可以治疗继发于过敏性肠综合征、炎性肠综合征、胰腺炎、憩室炎、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、腹膜炎、心包炎、肝炎、阑尾炎、结肠炎、胆囊炎、肠胃炎、子宫内膜异位、痛经、间质性膀胱炎、前列腺炎、胸膜炎、上胃肠道消化不良、肾绞痛或胆石绞痛的内脏痛；继发于肝、肾、卵巢、子宫、膀胱、肠、胃、食管、十二指肠、肠、结肠、脾、胰腺、阑尾、心脏或腹膜疾病的内脏痛；或由赘生物或损伤造成的内脏痛，或由感染造成的内脏痛。本发明方法所治疗的内脏痛可以是炎性的或非炎性的。
[0015] 在某些实施方式中，对于所使用的化合物来说，R5A或R6A为甲基、氟甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、硫代甲氧基、硫代乙氧基、硫代正丙氧基、硫代异丙氧基、硫代正丁氧基、硫代异丁氧基、硫代叔丁氧基、苯基、苄基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噁唑、4-噁唑、5-噁唑、2-噻唑、4-噻唑、5-噻唑、2-异噁唑、3-异噁唑、1 2 3
4-异噁唑、2-异噻唑、3-异噻唑和4-异噻唑。在一些实施方式中，R、R 和R 分别为H。在
1 2 3 1 1 1
其它实施方式中，R、R 和R 中的一个或多个不是H。例如，R 可以是(CH2)m1X，其中X 选自：
4-异噁唑、2-异噻唑、3-异噻唑和4-异噻唑。在一些实施方式中，R、R 和R 分别为H。在
1 2 3 1 1 1
其它实施方式中，R、R 和R 中的一个或多个不是H。例如，R 可以是(CH2)m1X，其中X 选自：
[0016] 和
[0017] 其中
[0018] R1A和R1B分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；
[0019] R1C和R1D分别独立地为H、F、OH、CO2R1E或NR1FR1G，其中R1E、R1F和R1G分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳1C 1D
基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基，或R 和R 连同与它们键合的碳为C＝O。
基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基，或R 和R 连同与它们键合的碳为C＝O。
[0020] Z1为NR1H、NC(O)R1H、NC(O)OR1H、NC(O)NHR1H、NC(S)R1H、NC(S)NHR1H、NS(O)2R1H、O、S、1H
S(O)或S(O)2，其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；
S(O)或S(O)2，其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；
[0021] m1为0至6的整数；
[0022] n1为1至4的整数；
[0023] p1为0至2的整数；并且
[0024] q1为0至5的整数。1 1
[0025] 在一 些实 施 方式 中，在 X 为 的 情 况下，X 具有 选 自1
的结构，其中Z、q1和p1如本文中所定义。
的结构，其中Z、q1和p1如本文中所定义。
[0026] R2 可 以 是 (CH2)mX2， 其 中 X2 选 自其中
2A 2B
2A 2B
[0027] R 和R 分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；2C 2D 2E 2F 2G 2E 2F 2G
[0028] R 和R 分别独立地为H、F、OH、CO2R 或NR R ，其中R 、R 和R 分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳2C 2D
基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基，或R 和R 连同与它们键合的碳为C＝O；
基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基，或R 和R 连同与它们键合的碳为C＝O；
[0029] Z2为NR2H、NC(O)R2H、NC(O)OR2H、NC(O)NHR2H、NC(S)R2H、NC(S)NHR2H、NS(O)2R2H、O、S、2H
S(O)或S(O)2，其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；
S(O)或S(O)2，其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；
[0030] m2为0至6的整数；
[0031] n2为1至4的整数；
[0032] p2为0至2的整数；和
[0033] q2为0至5的整数。2 2
[0034] 在一些实施方式中，在X 为 的情况下，X 可以具有选自2
的结构，其中Z、p2和q2如本文所定义。
的结构，其中Z、p2和q2如本文所定义。
[0035] R3可以是(CH2)mX3，其中X3选自：
[0036]
[0037] 其中3A 3B
[0038] R 和R 分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；3C 3D 3E 3F 3G 3E 3F 3G
[0039] R 和R 分别独立地为H、F、OH、CO2R 或NR R ，其中R 、R 和R 分别独立地为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳3C 3D
基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基，或R 和R 连同与它们键合的碳为C＝O；
3 3H 3H 3H 3H 3H 3H 3H
基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基，或R 和R 连同与它们键合的碳为C＝O；
3 3H 3H 3H 3H 3H 3H 3H
[0040] Z 为NR 、NC(O)R 、NC(O)OR 、NC(O)NHR 、NC(S)R 、NC(S)NHR 、NS(O)2R 、O、S、3H
S(O)或S(O)2，其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；
S(O)或S(O)2，其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基；
[0041] m3为0至6的整数；
[0042] n3为1至4的整数；
[0043] p3为0至2的整数；和
[0044] q3为0至5的整数。
[0045] 在一些 实施方式 中，在R3为 的 情况下，R3具有选 自3
的结构，其中Z、p3和q3如本文所定义。
的结构，其中Z、p3和q3如本文所定义。
[0046] 在本发明另一实施方式中，用化学式I所表示的化合物，其中R5为R5AC(NH)NH(CH2)r5或R5BNHC(S)NH(CH2)r5，R6、R2和R1为H，并且R3为(CH2)m3X3，也与血清素5HT1D/1B受体结合。优选地，IC50或Ki值在10至0.001微摩尔之间。更优选地，IC50或Ki小于1微摩尔。最优选地，IC50或Ki小于0.1。在其他实施方式中，化合物为5HT1B/1D受体的激动剂。2
[0047] 在其他实施方式中，R 为2J2 2J3 2J4 2J5 2J6
[0048] 其中R 、R 、R 、R 和R 分别独立地为H；C1-6烷基；OH；C1-6烷氧基；SH；C1-62Ja 2Jb 2Ja 2Jb
硫代烷氧基；卤素；NO2；CN；CF3；OCF3；NR R ，其中R 和R 分别独立地为H或C1-6烷基；
2Jc 2Jc 2Jd 2Jd 2Je 2Jf
C(O)R ，其中R 为H或C1-6烷基；CO2R ，其中R 为H或C1-6烷基；四唑基；C(O)NR R ，
2Je 2Jf 2Jg 2Jg 2Jh
其中R 和R 分别独立地为H或C1-6烷基；OC(O)R ，其中R 为C1-6烷基；NHC(O)R ，其
2Jh 2Ji 2Jj 2Ji 2Jj
中R 为H或C1-6烷基；SO3H；S(O)2NR R ，其中R 和R 分别独立地为H或C1-6烷基；
2Jk 2Jk 2Jl 2Jl
S(O)R ，其中R 为C1-6烷基；和S(O)2R ，其中R 是C1-6烷基。
硫代烷氧基；卤素；NO2；CN；CF3；OCF3；NR R ，其中R 和R 分别独立地为H或C1-6烷基；
2Jc 2Jc 2Jd 2Jd 2Je 2Jf
C(O)R ，其中R 为H或C1-6烷基；CO2R ，其中R 为H或C1-6烷基；四唑基；C(O)NR R ，
2Je 2Jf 2Jg 2Jg 2Jh
其中R 和R 分别独立地为H或C1-6烷基；OC(O)R ，其中R 为C1-6烷基；NHC(O)R ，其
2Jh 2Ji 2Jj 2Ji 2Jj
中R 为H或C1-6烷基；SO3H；S(O)2NR R ，其中R 和R 分别独立地为H或C1-6烷基；
2Jk 2Jk 2Jl 2Jl
S(O)R ，其中R 为C1-6烷基；和S(O)2R ，其中R 是C1-6烷基。
[0049] 其他化合物为其中R1或R3为 的那些，其中Z为X
NR，o为0-3的整数，p为1至2的整数，q为0至2的整数，r为0至1的整数，s为1至3
1 3
的整数，u为0至1的整数，并且t为3-7的整数(例如，5至7)，其中所述R 或R 取代基x
包括0至6个碳-碳双键或0或1个碳-氮双键，并且其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基。
NR，o为0-3的整数，p为1至2的整数，q为0至2的整数，r为0至1的整数，s为1至3
1 3
的整数，u为0至1的整数，并且t为3-7的整数(例如，5至7)，其中所述R 或R 取代基x
包括0至6个碳-碳双键或0或1个碳-氮双键，并且其中R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C3-8环烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、C2-9杂环基或可选取代的C1-4烷基杂环基。
[0050] 其他化合物具有化学式：
[0051] 其中X为O或S。
[0052] 在所述方法中有用的化合物包括2-乙基-1-(1H-吲哚-5-基)-异硫脲；N-(1H-吲哚-5-基)-噻吩-2-甲脒；N-[1-(2-二甲氨基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-噻
吩-2-甲脒；N-{1-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]-1H-吲哚-6-基}-噻吩-2-甲脒；
1-[1-(2-二甲氨基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-2-乙基-异硫脲；N-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-噻吩-2-甲脒；N-(1-苯乙基-1H-吲哚-6-基)-噻吩-2-甲脒；
N-[3-(2-二甲氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-噻吩-2-甲脒；N-(1-{2-[2-(4-溴-苯
基)-乙胺基]-乙基}-1H-吲哚-6-基)-噻吩-2-甲脒；(+)-N-{1-[2-(1-甲基-吡
咯烷-2-基)-乙基]-1H-吲哚-6-基}-噻吩-2-甲脒；(-)-N-{1-[2-(1-甲基-吡咯
烷-2-基)-乙基]-1H-吲哚-6-基}-噻吩-2-甲脒；N-[1-(1-甲基-氮 -4-基)-1H-吲
哚-6-基]-噻吩-2-甲脒；和N-[1-(2-哌啶-1-基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-噻吩-2-甲脒。
吩-2-甲脒；N-{1-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]-1H-吲哚-6-基}-噻吩-2-甲脒；
1-[1-(2-二甲氨基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-2-乙基-异硫脲；N-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-噻吩-2-甲脒；N-(1-苯乙基-1H-吲哚-6-基)-噻吩-2-甲脒；
N-[3-(2-二甲氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-噻吩-2-甲脒；N-(1-{2-[2-(4-溴-苯
基)-乙胺基]-乙基}-1H-吲哚-6-基)-噻吩-2-甲脒；(+)-N-{1-[2-(1-甲基-吡
咯烷-2-基)-乙基]-1H-吲哚-6-基}-噻吩-2-甲脒；(-)-N-{1-[2-(1-甲基-吡咯
烷-2-基)-乙基]-1H-吲哚-6-基}-噻吩-2-甲脒；N-[1-(1-甲基-氮 -4-基)-1H-吲
哚-6-基]-噻吩-2-甲脒；和N-[1-(2-哌啶-1-基-乙基)-1H-吲哚-6-基]-噻吩-2-甲脒。
[0053] 其他示例性化合物包括：
[0054]
[0055]
[0056]
[0057] 所 述 方 法 中 有 用 的 其 他 化 合 物 为 或优选(+)-对映异构体。
[0058] 本发明所述方法中有用的其他化合物为
[0059]
[0060] 本发明所述方法中有用的其他化合物为
[0061]
[0062]
[0063] 四种异构体的混合物。
[0065] 所述方法也可以包括给予选自止痛剂、抗抑郁剂和抗惊厥剂的一种或多种药剂。
[0066] 本发明的特征还在于化合物 或其药用盐；和或其药用盐。
[0067] 本 发明 的 特 征 还 在 于 化 合 物 或 其药 用 盐；或或其药用盐。
[0068] 本发明的特征还在于将任何上述化合物与药用载体相结合的药物组合物。
[0069] 本发明的特征还在于化合物 或其盐，和它们各自的(+)或(-)对映异构体的混合物。
[0070] 本发明的特征还在于合成对映异构体的方法，例如， 的(+)或(-)对映异构体，所述方法通过以下步骤实现：
[0071] a.将3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺与氯甲酸苄基酯反应以形成(±)3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯；
[0072] b.将(±)3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯进行手性HPLC或SFC(超临界流体色谱法)以分离苄基3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸酯的对映异构体；
[0073] c.通过氢化使3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯的一个对映异构体脱保护以得到3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺的一个对映异构体；和
[0074] d.将3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺的一个对映异构体与噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯(methyl thiophene-2-carbimidothioate)反应。
[0075] 另一方面，本发明的特征还在于治疗哺乳动物(如，例如人)体内由一氧化氮合成酶(NOS)，特别是nNOS作用引起的症状的方法，所述方法包括向所述哺乳动物给予有效量的用化学式 的化合物或其药用盐；化学式
的化合物或其药用盐；或
的化合物或其药用盐；或
[0076]
[0077]
[0078] 反式对映异构体的
[0079] (+)-顺式异构体、 (-)-顺式异构体、 混合物、
[0080]
[0081] 可以防止或治疗的症状的实例包括偏头痛(有或者没有先兆)、慢性紧张型头痛(CTTH)、偏头痛伴异常性疼痛、神经性疼痛、中风后疼痛、慢性头痛、慢性疼痛、急性脊髓损伤、糖尿病性神经病变、三叉神经痛、糖尿病性肾病、炎症疾病、中风、再灌注伤害、头外伤、心源性休克、CABG相关的神经损伤、HCA、AIDS相关痴呆、神经毒性、帕金森氏病(Parkinson’s disease)、阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、ALS、杭廷顿氏舞蹈病(Huntington’sdisease)、多发性硬化、偏亚锑酸引起的神经毒性、药物成瘾、吗啡/阿片样物质引起的耐药性、依赖性、痛觉过敏或脱瘾、酒精耐受性、依赖性或脱瘾、癫痫、焦虑、抑郁、注意力不集中的多动症或精神病。本发明的化合物对于治疗中风、再灌注伤害、神经变性、头外伤、CABG相关的神经损伤、偏头痛(有或者没有先兆)、偏头痛伴异常性疼痛、慢性紧张型头痛、神经性疼痛、中风后疼痛、鸦片类物质引起的痛觉过敏或慢性疼痛特别有用。特别地，3，5-取代的吲哚化合物对治疗偏头痛(有或者没有先兆)和CTTH有用。
[0082] 本发明的这些化合物也可以结合一种或多种其他治疗剂使用以防止或治疗上述症状之一。表1中列出了结合本发明化合物有用的治疗剂种类的实例和一些具体实例。
[0083] 结合这些化合物有用的其他药剂包括抗节律不齐剂；DHP敏感性L型钙通道拮抗剂；ω-芋螺毒素(齐考诺肽)-敏感性N型钙通道拮抗剂；P/Q-型钙通道拮抗剂；腺苷激酶拮抗剂；腺苷受体A1激动剂；腺苷受体A2a拮抗剂；腺苷受体A3激动剂；腺苷脱氨酶抑制剂；腺苷核苷转运抑制剂；辣椒素VR1受体激动剂；P物质/NK1拮抗剂；大麻素CB1/CB2激动剂；
GABA-B拮抗剂；AMPA和红藻氨酸盐拮抗剂、促代谢型谷氨酸受体拮抗体；α-2-肾上腺素能受体激动剂；烟碱乙酰胆碱受体激动剂(nAChR)；缩胆囊肽B拮抗剂；钠通道阻断剂；KATP钾通道、Kv1.4钾通道、Ca2+激活的钾通道、SK钾通道、BK钾通道，IK钾通道或KCNQ2/3钾通道开放药剂(例如，瑞替加滨)；5HT1A激动剂；毒蕈碱M3拮抗剂、M1激动剂、M2/M3部分激动剂/拮抗剂；和抗氧化剂。
GABA-B拮抗剂；AMPA和红藻氨酸盐拮抗剂、促代谢型谷氨酸受体拮抗体；α-2-肾上腺素能受体激动剂；烟碱乙酰胆碱受体激动剂(nAChR)；缩胆囊肽B拮抗剂；钠通道阻断剂；KATP钾通道、Kv1.4钾通道、Ca2+激活的钾通道、SK钾通道、BK钾通道，IK钾通道或KCNQ2/3钾通道开放药剂(例如，瑞替加滨)；5HT1A激动剂；毒蕈碱M3拮抗剂、M1激动剂、M2/M3部分激动剂/拮抗剂；和抗氧化剂。
[0084] 表1.结合本发明化合物有用的治疗剂
[0085]
[0086]
[0087]
[0088]
[0089]
[0090] 不对称中心或手性中心可以存在于本发明的任何化合物中。本发明考虑了各种立体异构体及其混合物。可以使用以下举例说明的方法分离这些立体化学混合物，如(1)将表示为(+/-)的对映异构体的外消旋混合物连接到手性助剂上，通过重结晶或色谱法分离所得到非对映体并从所述助剂上释放光学纯的产物或(2)直接在手性色谱柱上分离光学对映异构体的混合物。根据手性碳原子周围取代基的构型，本文中用符号“R”或“S”表示对映异构体。作为另外一种选择，分别根据对映异构体溶液是顺时针方向或逆时针方向旋转偏振光平面将对映异构体表示为(+)或(-)。
[0091] 几何异构体也可以存在于本发明的化合物中。本发明考虑了由碳-碳双键周围取代基分布所产生的各种几何异构体以及它们的混合物，并将这些异构体表示为Z或E构型，其中术语“Z”表示取代基位于碳-碳双键的同侧而术语“E”表示取代基位于碳-碳双键的对侧。还认为对于可能存在互变异构形式的结构，除非另作说明，否则对于一种互变异构形Q T Q T式的说明等价于对两种的说明。例如，化学式-C(＝NR)NHR 和-C(NHR)＝NR 所表示的T Q
脒的结构，其中R 和R 是不同的，但却是等同的互变结构并且对其中一个的说明内在地包含了另一个。
脒的结构，其中R 和R 是不同的，但却是等同的互变结构并且对其中一个的说明内在地包含了另一个。
[0092] 应理解本领域普通技术人员可以选择本发明化合物上的取代基和取代类型以提供化学稳定的，并且可以从易于获得的原料容易地通过本领域已知的技术以及以下所述的那些方法合成的化合物。如果取代基本身是被多于一个基团所取代的，则应理解只要得到稳定的结构，那么这些多个基团可以位于相同的碳原子或不同的碳原子上。
[0094] 定义
[0095] 如本文中可替换使用的，术语“酰基”或“烷酰基”表示如本文所定义的通过羰基连接到母体分子基团上的如本文所定义的烷基或氢，并通过甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等举例说明。示例性未取代的酰基基团包括2至7个碳原子。
[0096] 如本文所使用的，术语“Cx-y烷芳基”或“Cx-y亚烃基芳基”代表化学式-RR’所表示的化学取代基，其中R为x至y个碳的亚烃基基团而R’为如本文其他处所定义的芳基基团。类似地，术语“Cx-y烷基杂芳基”或“Cx-y亚烃基杂芳基”表示化学式-RR”所表示的化学取代基，其中R为x至y个碳的亚烃基基团，而R”为如本文其他处所定义的杂芳基基团。以同样的方法定义以前缀“烷基-(alk-)”或“亚烃基(alkylene-)”开头的其他基团。示例性未取代的烷芳基基团为7至16个碳。
[0097] 术语“烷基环烷基”代表通过亚烃基基团连接到母体分子基团上的环烷基基团。
[0098] 如本文所使用的，除非另作说明，术语“烯基”代表含有一个或多个碳-碳双键的2至6个碳的单价直链或支链基团，并通过乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等举例说明。
[0099] 术语“烷基杂环基”代表通过亚烃基基团连接到母体分子基团上的杂环基基团。示例性未取代的烷基杂环基基团为3至14个碳。
[0100] 术语“烷氧基”代表化学式-OR所表示的化学取代基，其中除非另作说明，R为1至6个碳的烷基基团。
[0101] 术语“烷氧基烷基”代表用烷氧基取代的烷基。示例性未取代的烷氧基烷基基团包括2至12个碳。
[0102] 除非另作说明，如本文所使用的术语“烷基”和前缀“烷基(alk-)”包括1至6个碳的直链和支链饱和基团。通过甲基、乙基、正丙基和异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基、新戊基等举例说明了烷基，并且所述烷基可以可选地用一个、两个、三个取代基取代，并且在烷基基团为两个或更多个碳的情况下，可以用四个取代基取代，所述取代基独立地选自：(1)1至6个碳原子的烷氧基；(2)1至6个碳原子的烷基亚硫酰基；(3)1至6个碳原子的烷基磺酰基；(4)氨基；(5)芳基；(6)芳基烷氧基；(7)芳酰基；(8)叠氮基；(9)甲醛(carboxaldehyde)；(10)3至8个碳原子的环烷基；(11)卤素；(12)杂环基；(13)(杂环)氧基；(14)(杂环)酰基；(15)羟基；(16)N-保护的氨基；(17)硝基；(18)氧代；(19)3至A A8个碳原子的螺烷烃；(20)1至6个碳原子的硫代烷氧基；(21)硫醇；(22)-CO2R，其中R 选自(a)烷基、(b)芳基和(c)烷芳基，其中所述亚烃基基团具有1至6个碳原子；(23)-C(O)B C B C
NRR，其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中所述亚烃D D
基基团具有1至6个碳原子；(24)-SO2R，其中R 选自(a)烷基、(b)芳基和(c)烷芳基，其中E F E F
所述亚烃基基团具有1至6个碳原子；(25)-SO2NRR，其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、G H
(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中所述亚烃基基团具有1至6个碳原子；和(26)-NRR，G H
其中R 和R 分别独立地选自(a)氢；(b)N-保护基；(c)1至6个碳原子的烷基；(d)2至6个碳原子的烯基；(e)2至6个碳原子的炔基；(f)芳基；(g)烷芳基，其中所亚烃基基团具有
1至6个碳原子；(h)3至8个碳原子的环烷基；和(i)烷基环烷基，其中在没有两个基团通过羰基或磺酰基基团结合到氮原子上的前提下，所述环烷基基团具有3至8个碳原子，并且所述亚烃基团具有1至10个碳原子。
NRR，其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中所述亚烃D D
基基团具有1至6个碳原子；(24)-SO2R，其中R 选自(a)烷基、(b)芳基和(c)烷芳基，其中E F E F
所述亚烃基基团具有1至6个碳原子；(25)-SO2NRR，其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、G H
(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中所述亚烃基基团具有1至6个碳原子；和(26)-NRR，G H
其中R 和R 分别独立地选自(a)氢；(b)N-保护基；(c)1至6个碳原子的烷基；(d)2至6个碳原子的烯基；(e)2至6个碳原子的炔基；(f)芳基；(g)烷芳基，其中所亚烃基基团具有
1至6个碳原子；(h)3至8个碳原子的环烷基；和(i)烷基环烷基，其中在没有两个基团通过羰基或磺酰基基团结合到氮原子上的前提下，所述环烷基基团具有3至8个碳原子，并且所述亚烃基团具有1至10个碳原子。
[0103] 如本文所使用的，术语“亚烃基”表示饱和的二价烃基团，其通过移除两个氢原子从直链或支链饱和烃中获得，并通过亚甲基、亚乙基、异亚丙基等举例说明。
[0104] 如本文所使用的，术语“烷基亚硫酰基”代表通过-S(O)-基团连接到母体分子基团上的烷基。示例性未取代的烷基亚硫酰基基团具有1至6个碳。
[0105] 如本文所使用的，术语“烷基磺酰基”代表通过-SO2-基团连接到母体分子基团上的烷基。示例性未取代的烷基磺酰基基团具有1至6个碳。
[0106] 如本文所使用的，术语“烷基亚硫酰基烷基”表示如本文所定义的被烷基亚硫酰基基团取代的烷基。示例性未取代的烷基亚硫酰基烷基基团具有2至12个碳。
[0107] 如本文所使用的，术语“烷基磺酰基烷基”表示如本文所定义的被烷基磺酰基基团取代的烷基。示例性未取代的烷基磺酰基烷基基团具有2至12个碳。
[0108] 如本文所使用的，术语“炔基”表示含有碳-碳三键的具有2至6个碳原子的单价直链或支链基团，并且通过乙炔基、1-丙烯基等举例说明。
[0109] 如本文所使用的，所述术语“脒”表示-C(＝NH)NH2基团。
[0110] 如本文所使用的，所述术语“氨基”表示-NH2基团。
[0111] 如本文所使用的，术语“氨烷基”表示被氨基取代的如本文所定义的烷基。
[0112] 如本文所使用的，术语“芳基”表示具有一个或两个芳香环的单环或双环碳环系统，并通过苯基、萘基、1，2-二氢萘基、1，2，3，4-四氢萘基、芴基、茚满基、茚基等举例说明，并且可以可选地用1、2、3、4或5个取代基取代，所述取代基独立地从选自：(1)1至6个碳原子的烷酰基；(2)1至6个碳原子的烷基；(3)1至6个碳原子的烷氧基；(4)烷氧基烷基，其中所述烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(5)1至6个碳原子的烷基亚硫酰基；(6)烷基亚硫酰基烷基，其中所述烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(7)1至6个碳原子的烷基磺酰基；(8)烷基磺酰基烷基，其中所述烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(9)芳基；(10)氨基；(11)1至6个碳原子的氨烷基；(12)杂芳基；(13)烷芳基，其中所述亚烃基基团具有1至6个碳原子；(14)芳酰基；(15)叠氮基；(16)1至6个碳原子的叠氮烷基；(17)甲醛；(18)(甲醛)烷基，其中所述亚烃基基团具有1至6个碳原子；(19)3至8个碳原子的环烷基；(20)烷基环烷基，其中所述环烷基基团具有3至8个碳原子而所述亚烃基基团具有1至10个碳原子；(21)卤素；(22)1至6个碳原子的卤代烷基；(23)杂环基；(24)(杂环基)氧基；(25)(杂环基)酰基1；(26)羟基；(27)1至6个碳原子的羟烷基；(28)硝基；(29)1至6个碳原子的硝基烷基；(30)N-保护的氨基；(31)N-保护的氨烷基，其中所述亚烃基基团具有1至6个碳原子；(32)氧代；(33)1至6个碳原子的硫代烷氧基；(34)硫代烷氧基烷基，其中所述烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原A A
子；(35)-(CH2)qCO2R，其中q为0至4的整数，而R 选自(a)烷基、(b)芳基和(c)烷芳基，B C
其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(36)-(CH2)qCONRR，其中q为0至4的整数，并且其B C
中R 和R 独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至D D
6个碳原子；(37)-(CH2)qSO2R，其中q为0至4的整数并且其中R 选自(a)烷基、(b)芳基E F
和(c)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(38)-(CH2)qSO2NRR，其中q为0至4E F
的整数，并且其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中亚G H G
烃基基团具有1至6个碳原子；(39)-(CH2)qNRR，其中q为0至4的整数，并且其中每个RH
和R 独立地选自(a)氢；(b)N-保护基；(c)1至6个碳原子的烷基；(d)2至6个碳原子的烯基；(e)2至6个碳原子的炔基；(f)芳基；(g)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(h)3至8个碳原子的环烷基；和(i)烷基环烷基，其中在没有两个基团通过羰基或磺酰基基团与氮原子结合的前提下，环烷基基团具有3至8个碳原子而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(40)硫醇；(41)全氟烷基；(42)全氟烷氧基；(43)芳氧基；(44)环烷氧基；(45)环烷基烷氧基；和(46)芳基烷氧基。
子；(35)-(CH2)qCO2R，其中q为0至4的整数，而R 选自(a)烷基、(b)芳基和(c)烷芳基，B C
其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(36)-(CH2)qCONRR，其中q为0至4的整数，并且其B C
中R 和R 独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至D D
6个碳原子；(37)-(CH2)qSO2R，其中q为0至4的整数并且其中R 选自(a)烷基、(b)芳基E F
和(c)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(38)-(CH2)qSO2NRR，其中q为0至4E F
的整数，并且其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中亚G H G
烃基基团具有1至6个碳原子；(39)-(CH2)qNRR，其中q为0至4的整数，并且其中每个RH
和R 独立地选自(a)氢；(b)N-保护基；(c)1至6个碳原子的烷基；(d)2至6个碳原子的烯基；(e)2至6个碳原子的炔基；(f)芳基；(g)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(h)3至8个碳原子的环烷基；和(i)烷基环烷基，其中在没有两个基团通过羰基或磺酰基基团与氮原子结合的前提下，环烷基基团具有3至8个碳原子而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(40)硫醇；(41)全氟烷基；(42)全氟烷氧基；(43)芳氧基；(44)环烷氧基；(45)环烷基烷氧基；和(46)芳基烷氧基。
[0113] 如本文所使用的，术语“芳基烷氧基”表示通过氧原子连接到母体分子基团上的烷芳基基团。示例性未取代的芳基烷氧基基团具有7至16个碳原子。
[0114] 术语“芳氧基”表示化学式-OR’所表示的化学取代基，其中除非另作说明，R’为6至18个碳的芳基基团。
[0115] 如本文可替换使用的，术语“芳酰基(aryloyl)”和“芳酰基(aroyl)”表示通过羰基连接到母体分子基团上的芳基基团。示例性未取代的芳酰基基团具有7或11个碳。
[0116] 术语“叠氮基”表示N3基团，其也可以表示为N＝N＝N。
[0117] 术语“叠氮烷基”表示通过烷基基团连接到母体分子基团上的叠氮基基团。
[0118] 如本文另外说明的，术语“桥连的杂环基”表示具有桥连的多环结构的杂环化合物，在该结构中一个或多个碳原子和/或杂原子将单环的两个不相邻成员桥连在一起。示例性桥连的杂环基基团为奎宁环基基团。
[0119] 如本文另外说明的，术语“桥连的烷基杂环基”表示通过亚烃基基团连接到母体分子基团上的桥连的杂环化合物。
[0120] 如本文所使用的，术语“羰基”表示C(O)基团，其也可以表示为C＝O。
[0121] 术语“甲醛”表示CHO基团。
[0122] 术语“甲醛烷基”表示通过亚烃基基团连接到母体分子基团上的甲醛基团。
[0123] 除非另作说明，如本文所使用的，术语“环烷基”表示3至8个碳的单价饱和或不饱和的非芳香环烃基团，并且通过环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、双环[2.2.1]庚基等举例说明。本发明的环烷基基团可以可选地用以下基团取代，如：(1)1至6个碳原子的烷酰基；(2)1至6个碳原子的烷基；(3)1至6个碳原子的烷氧基；(4)烷氧基烷基，其中所述烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(5)1至6个碳原子的烷基亚硫酰基；(6)烷基亚硫酰基烷基，其中烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(7)1至6个碳原子的烷基磺酰基；(8)烷基磺酰基烷基，其中烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(9)芳基；(10)氨基；(11)1至6个碳原子的氨烷基；(12)杂芳基；(13)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(14)芳酰基；(15)叠氮基；(16)1至6个碳原子的叠氮烷基；
(17)甲醛；(18)(甲醛)烷基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(19)3至8个碳原子的环烷基；(20)烷基环烷基，其中环烷基基团具有3至8个碳原子而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(21)卤素；(22)1至6个碳原子的卤代烷基；(23)杂环基；(24)(杂环基)氧基；
(25)(杂环基)酰基；(26)羟基；(27)1至6个碳原子的羟烷基；(28)硝基；(29)1至6个碳原子的硝基烷基；(30)N-保护的氨基；(31)N-保护的氨烷基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(32)氧代；(33)1至6个碳原子的硫代烷氧基；(34)硫代烷氧基烷基，其中烷基A A
和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(35)-(CH2)qCO2R，其中q为0至4的整数，而R选自(a)烷基、(b)芳基和(c)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(36)-(CH2)B C B C
qCONRR，其中q为0至4的整数，并且其中R 和R 独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基D
和(d)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(37)-(CH2)qSO2R，其中q为0至4的D
整数，并且其中R 选自(a)烷基、(b)芳基和(c)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原E F E F
子；(38)-(CH2)qSO2NRR，其中q为0至4的整数，并且其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、G H
(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(39)-(CH2)qNRR，G H
其中q为0至4的整数，并且其中R 和R 分别独立地选自(a)氢；(b)N-保护基；(c)1至6个碳原子的烷基；(d)2至6个碳原子的烯基；(e)2至6个碳原子的炔基；(f)芳基；(g)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(h)3至8个碳原子的环烷基；和(i)烷基环烷基，其中在没有两个基团通过羰基或磺酰基基团与氮原子结合的前提下，环烷基基团具有3至8个碳原子，而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(40)硫醇；(41)全氟烷基；(42)全氟烷氧基；(43)芳氧基；(44)环烷氧基；(45)环烷基烷氧基；和(46)芳基烷氧基。
(17)甲醛；(18)(甲醛)烷基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(19)3至8个碳原子的环烷基；(20)烷基环烷基，其中环烷基基团具有3至8个碳原子而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(21)卤素；(22)1至6个碳原子的卤代烷基；(23)杂环基；(24)(杂环基)氧基；
(25)(杂环基)酰基；(26)羟基；(27)1至6个碳原子的羟烷基；(28)硝基；(29)1至6个碳原子的硝基烷基；(30)N-保护的氨基；(31)N-保护的氨烷基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(32)氧代；(33)1至6个碳原子的硫代烷氧基；(34)硫代烷氧基烷基，其中烷基A A
和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(35)-(CH2)qCO2R，其中q为0至4的整数，而R选自(a)烷基、(b)芳基和(c)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(36)-(CH2)B C B C
qCONRR，其中q为0至4的整数，并且其中R 和R 独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基D
和(d)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(37)-(CH2)qSO2R，其中q为0至4的D
整数，并且其中R 选自(a)烷基、(b)芳基和(c)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原E F E F
子；(38)-(CH2)qSO2NRR，其中q为0至4的整数，并且其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、G H
(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(39)-(CH2)qNRR，G H
其中q为0至4的整数，并且其中R 和R 分别独立地选自(a)氢；(b)N-保护基；(c)1至6个碳原子的烷基；(d)2至6个碳原子的烯基；(e)2至6个碳原子的炔基；(f)芳基；(g)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(h)3至8个碳原子的环烷基；和(i)烷基环烷基，其中在没有两个基团通过羰基或磺酰基基团与氮原子结合的前提下，环烷基基团具有3至8个碳原子，而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(40)硫醇；(41)全氟烷基；(42)全氟烷氧基；(43)芳氧基；(44)环烷氧基；(45)环烷基烷氧基；和(46)芳基烷氧基。
[0124] 如本文可替换使用的，术语“环烷氧基(cycloalkyloxy)”或“环烷氧基(cycloalkoxy)”表示通过氧原子连接到母体分子基团上的如本文所定义的环烷基基团。示例性未取代的环烷氧基基团具有3至8个碳。
[0125] 如本文所使用的，术语药剂的“有效量”或“足够量”是足以产生有益或所需结果(如临床结果)的量，并且如此，“有效量”取决于其所应用的情况。例如，在给予NOS抑制剂药剂的情况下，药剂的有效量为，与没有给予该药剂所获得的响应相比，足以实现NOS活性降低的量。
[0126] 如本文所使用的，术语“卤化物”或“卤素”或“卤”或“卤代”表示溴、氯、碘或氟。
[0127] 如本文所使用的，术语“卤代烷基”表示被卤素基团取代的如本文所定义的烷基基团。
[0128] 如本文所使用的，术语“杂芳基”表示如本文所定义的杂环的子集，它们是芳香族的：即它们在单环或多环体系中含有4n+2个π电子。
[0129] 除非另作说明，如本文可替换使用的，术语“杂环”或“杂环基”表示5-、6-或7-元环，其含有1、2、3或4个杂原子，所述杂原子独立地选自氮、氧和硫。所述5元环具有0至2个双键而所述6-和7-元环有0至3个双键。术语“杂环”还包括双环、三环和四环基团，其中任何上述的杂环稠合至1、2、3个环中，所述的环独立地选自芳基环、环己烷环、环己烯环、环戊烷环、环戊烯环和另一单环杂环，如吲哚基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基等。杂环化合物包括吡咯基，吡咯啉基，吡咯烷基，吡唑基，吡唑啉基，吡唑烷基，咪唑基，咪唑啉基，咪唑烷基，吡啶基，哌啶基，高哌啶基，吡嗪基，哌嗪基，嘧啶基，哒嗪基，噁唑基，噁唑烷基，异噁唑基，异唑烷基，吗啉基，硫代吗啉基，噻唑基，噻唑烷基，异噻唑基，异噻唑烷基，吲哚基，喹唑基，异喹唑基，苯并咪唑基，苯并噻唑基，苯并噁唑基，呋喃基，噻吩基，噻唑烷基，异噻唑基，异吲唑基，三唑基，四唑基，噁二唑基，尿苷酰基，噻二唑基，嘧啶基，四氢呋喃基，二氢呋喃基，四氢噻吩基，二氢噻吩基，二氢吲哚基，四氢喹啉基，四氢异喹啉基，吡喃基，二氢吡喃基，二噻唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基等。杂环基团还包括化学式 所示的化合物，其中
[0130] F’选自-CH2-、-CH2O-和-O-，而G’选自-C(O)-和-(C(R’)(R”))v-，其中R’和R”分别独立地选自氢或1至4个碳原子的烷基，而v为1至3并且包括如1，3-苯并二氧杂环戊基、1，4-苯并二噁烷等的基团。本文所提到任何所述杂环基团均可以可选地用1、2、3、4或5个取代基取代，所述取代基独立地选自：(1)1至6个碳原子的烷酰基；(2)1至6个碳原子的烷基；(3)1至6个碳原子的烷氧基；(4)烷氧基烷基，其中烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(5)1至6个碳原子的烷基亚硫酰基；(6)烷基亚硫酰基烷基，其中烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(7)1至6个碳原子的烷基磺酰基；(8)烷基磺酰基烷基，其中烷基和亚烃基基团独立地具有1至6个碳原子；(9)芳基；(10)氨基；(11)1至6个碳原子的氨烷基；(12)杂芳基；(13)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；
(14)芳酰基；(15)叠氮基；(16)1至6个碳原子的叠氮烷基；(17)甲醛；(18)(甲醛)烷基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(19)3至8个碳原子的环烷基；(20)烷基环烷基，其中环烷基基团具有3至8个碳原子而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(21)卤素；(22)1至6个碳原子的卤代烷基；(23)杂环基；(24)(杂环基)氧基；(25)(杂环基)酰基；(26)羟基；(27)1至6个碳原子的羟烷基；(28)硝基；(29)1至6个碳原子的硝基烷基；(30)N-保护的氨基；(31)N-保护的氨烷基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(32)氧代；(33)1至
6个碳原子的硫代烷氧基；(34)硫代烷氧基烷基，其中烷基和亚烃基基团独立地具有1至6A A
个碳原子；(35)-(CH2)qCO2R，其中q为0至4的整数，而R 选自(a)烷基、(b)芳基和(c)B C
烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(36)-(CH2)qCONRR，其中q为0至4的整数，B C
并且其中R 和R 独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中亚烃基基团具D D
有1至6个碳原子；(37)-(CH2)qSO2R，其中q为0至4的整数，并且其中R 选自(a)烷基、E F
(b)芳基和(c)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(38)-(CH2)qSO2NRR，其中qE F
为0至4的整数，并且其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳G H
基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(39)-(CH2)qNRR，其中q为0至4的整数，并且其G H
中R 和R 分别独立地选自(a)氢；(b)N-保护基；(c)1至6个碳原子的烷基；(d)2至6个碳原子的烯基；(e)2至6个碳原子的炔基；(f)芳基；(g)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至
6个碳原子；(h)3至8个碳原子的环烷基；和(i)烷基环烷基，其中在没有两个基团通过羰基或磺酰基基团与氮原子结合的前提下，环烷基基团具有3至8个碳原子，而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(40)硫醇；(41)全氟烷基；(42)全氟烷氧基；(43)芳氧基；(44)环烷氧基；(45)环烷基烷氧基；和(46)芳基烷氧基。
(14)芳酰基；(15)叠氮基；(16)1至6个碳原子的叠氮烷基；(17)甲醛；(18)(甲醛)烷基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(19)3至8个碳原子的环烷基；(20)烷基环烷基，其中环烷基基团具有3至8个碳原子而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(21)卤素；(22)1至6个碳原子的卤代烷基；(23)杂环基；(24)(杂环基)氧基；(25)(杂环基)酰基；(26)羟基；(27)1至6个碳原子的羟烷基；(28)硝基；(29)1至6个碳原子的硝基烷基；(30)N-保护的氨基；(31)N-保护的氨烷基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(32)氧代；(33)1至
6个碳原子的硫代烷氧基；(34)硫代烷氧基烷基，其中烷基和亚烃基基团独立地具有1至6A A
个碳原子；(35)-(CH2)qCO2R，其中q为0至4的整数，而R 选自(a)烷基、(b)芳基和(c)B C
烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(36)-(CH2)qCONRR，其中q为0至4的整数，B C
并且其中R 和R 独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳基，其中亚烃基基团具D D
有1至6个碳原子；(37)-(CH2)qSO2R，其中q为0至4的整数，并且其中R 选自(a)烷基、E F
(b)芳基和(c)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(38)-(CH2)qSO2NRR，其中qE F
为0至4的整数，并且其中R 和R 分别独立地选自(a)氢、(b)烷基、(c)芳基和(d)烷芳G H
基，其中亚烃基基团具有1至6个碳原子；(39)-(CH2)qNRR，其中q为0至4的整数，并且其G H
中R 和R 分别独立地选自(a)氢；(b)N-保护基；(c)1至6个碳原子的烷基；(d)2至6个碳原子的烯基；(e)2至6个碳原子的炔基；(f)芳基；(g)烷芳基，其中亚烃基基团具有1至
6个碳原子；(h)3至8个碳原子的环烷基；和(i)烷基环烷基，其中在没有两个基团通过羰基或磺酰基基团与氮原子结合的前提下，环烷基基团具有3至8个碳原子，而亚烃基基团具有1至10个碳原子；(40)硫醇；(41)全氟烷基；(42)全氟烷氧基；(43)芳氧基；(44)环烷氧基；(45)环烷基烷氧基；和(46)芳基烷氧基。
[0131] 如本文可替换使用的，术语“杂环基氧基”和“(杂环基)氧基”表示通过氧原子连接到母体分子基团上的如本文所定义的杂环基团。
[0132] 如本文可替换使用的，术语“杂环基酰基”和“(杂环基)酰基”表示通过羰基基团连接到母体分子基团上的如本文所定义的杂环基团。
[0133] 如本文所使用的，术语“羟基”表示-OH基团。
[0134] 如本文所使用的，术语“羟烷基”表示被1至3个羟基取代的如本文所定义的烷基，其前提条件是不多于一个羟基基团可以连接到所述烷基基团的单个碳原子上，并且它通过羟甲基、二羟丙基等举例说明。
[0135] 当涉及功能或活性(如NOS活性)时，术语“抑制”或“压制”或“降低”表示当除所关心的条件或参数以外的其他条件相同时相比，或作为另外一种选择，与另一种条件相比时，降低了功能或活性。
[0136] 如本文所使用的，术语“N-保护的氨基”是指如本文所定义的氨基，在该氨基上连接了如本文所定义的N-保护或氮-保护基。
[0137] 如本文所使用的，术语“N-保护的氨烷基”表示被氨基基团取代的如本文所定义的烷基，其中在该氨基基团上连接了如本文所定义的N-保护或氮-保护基。
[0138] 如本文所使用的，术语“N-保护基”和“氮保护基”是指旨在合成步骤期间保护氨基不进行不期望的反应的那些基团。在Greene撰写的“有机合成中的保护基团(Protective Groups In OrganicSynthesis)”，第3版(John Wiley & Sons，New York，1999)中公开了常用的N-保护基，该文献通过引用并入本文。N-保护基包括酰基、芳酰基或氨甲酰基基团，如甲酰基、乙酰基、丙酰基，新戊酰基、叔-丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻苯二甲酰基、o-硝基苯氧乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基和手性助剂，如保护或不保护的D、L或D、L-氨基酸，如丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸等；磺酰基基团，如苯磺酰基、p-甲苯磺酰基等；氨基甲酸酯形成基团，如苄氧羰基、p-氯苄氧羰基、p-甲氧基苄氧羰基、p-硝基苄氧羰基、2-硝基苄氧羰基、p-溴苄氧羰基、3，4-二甲氧基苄氧羰基、3，5-二甲氧基苄氧羰基、2，4-二甲氧基苄氧羰基、4-甲氧基苄氧羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基苄氧羰基、3，4，5-三甲氧基苄氧羰基、1-(p-联苯基)-1-甲基乙氧羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧羰基、二苄基氧羰基、叔-丁氧羰基、二异丙基甲氧羰基、异丙基氧羰基、乙氧羰基、甲氧羰基、烯丙基氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、苯氧羰基、4-硝基苯氧基羰基，芴基-9-甲氧羰基、环戊氧羰基、金刚烷基氧羰基、环己氧羰基、苯基硫代羰基等，芳烷基基团，如苄基、三苯甲基、苄氧甲基等和甲硅烷基基团，如三甲基甲硅烷等。优选的N-保护基为甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、丙氨酰基、苯磺酰基、苄基、叔丁氧羰基(Boc)和苄氧羰基(Cbz)。
[0139] 如本文所使用的，术语“硝基”表示-NO2基团。
[0140] 如本文所使用的，术语“硝基烷基”表示被硝基基团取代的如本文所定义的烷基。
[0141] 如本文所使用的，术语“氧代”或(O)表示＝O。
[0142] 如本文所使用的，术语“全氟烷基”表示如本文所定义的烷基，其中在该烷基上结合的每个氢基均被氟基所取代。通过三氟甲基、戊氟乙基等举例说明了全氟烷基基团。
[0143] 如本文所使用的，术语“全氟烷氧基”表示如本文所定义的烷氧基基团，其中在该烷氧基基团上结合的每个氢基均被氟基所取代。
[0144] 如本文所使用的，术语“药用盐”表示在合理的医学判断范围内适于接触人和动物组织使用而不具有过度毒性、刺激、过敏反应等的那些盐，并且所述的盐具有合理的效果/风险比。在本领域中，药用盐是熟知的。例如，S.M berge等在J Pharmaceutical Sciences66：1-19，1977中详细说明的药用盐。可以在本发明化合物的最终分离和纯化期间原位制备这些盐或通过将游离碱基与适当的有机酸反应单独地制备。代表性的酸加成盐类包括醋酸盐、己二酸盐、藻朊酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊基丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基磺酸盐、乙烷磺酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂烷硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性的碱或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，其包括但不限于，铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。
[0145] 如本文所使用的，术语“药用的药物前体”表示本发明化合物的那些药物前体，其在合理的医学判断范围内适于接触人和动物组织使用而不具有过度毒性、刺激、过敏反应等，它们具有合理的效果/风险比并且按照设计用途起效，并且所述本发明化合物的前体药物在可能的情况下为本发明化合物的两性离子形式。
[0146] 如本文所使用的，术语“Ph”表示苯基。
[0147] 如本文所使用的，术语“药物前体”表示在体内(例如，通过在血液中水解)快速转化为上述化学式所表示的母体化合物的化合物。本发明化合物的药物前体可以是常见的酯。已用作药物前体的一些常见的酯包括但不限于，苯酯、脂肪酸酯(C8-C24)、酰氧甲酯、氨基甲酸酯和氨基酸酯。例如，含有OH基团的本发明化合物可以在其药物前体形式中的该位置处酰化。在T.Higuchi and V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems，Vol.14 of A.C.S.SymposiumSeries，Edward B.Roche，ed.，Bioreversible Carriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987，andJudkinset al.，，Synthetic Communications 26(23)：4351-4367，1996中进行了全面的讨论，以上每篇文献通过引用并入本文。
[0148] 术语“选择性抑制nNOS”或“选择性nNOS抑制剂”分别表示通过体外测定(如，例如本文所述的那些测定)对nNOS同工型的抑制或结合比对eNOS和/或iNOS同工型的抑制或结合更有效的物质，如，例如本发明的化合物。可以用术语IC50值、Ki值或抑制百分比的倒数表示选择性抑制，当所述物质在nNOS测定中测试时其比在eNOS和/或iNOS测定中测试时更低。优选地，所述IC50或Ki值低至二分之一。更优选地，所述IC50或Ki值低至五分之一。最优选地，IC50或Ki值低至十分之一，或甚至低至五十分之一。
[0149] 术语“预防”表示对预期会导致症状(例如，内脏痛)的事件的防止或抢先性治疗，并且它涵盖了设计用于针对具有患病(如内脏痛)风险的个体的方法。
[0150] 如本文所使用的，术语“溶剂化物”表示其中向晶格中掺入适当溶剂分子的本发明化合物。适合的溶剂在所给药的剂量下为生理学耐受的。适合的溶剂的实例为乙醇、水等。当水为所述溶剂时，该分子被称为“水合物”。
[0151] 如本文所使用的，术语“螺烷基”表示两端与母体基团的相同碳原子键合以形成螺环基团的亚烃基双基。
[0152] 如本文所使用的，术语“磺酰基”表示-S(O)2-基团。
[0153] 如本文所使用的，术语“硫代烷芳基”表示用芳基基团取代的硫代烷氧基基团。
[0154] 如本文所使用的，术语“硫代烷基杂环基”表示用杂环基基团取代的硫代烷氧基基团。
[0155] 如本文所使用的，术语“硫代烷氧基”表示通过硫原子连接到母体分子基团上的烷基。示例性未取代的烷硫基基团具有1至6个碳。
[0156] 术语“硫代烷氧基烷基”表示用硫代烷氧基基团取代的烷基。示例性未取代的硫代烷氧基烷基基团包括2至12个碳。
[0157] 术语“硫醇”表示-SH基团。
[0158] 如本文所使用的以及在本领域中所理解的，“治疗”是获得有益或所需结果(如临床结果)的方法。有益或所需结果可以包括，但不限于，一种或多种症状或症状的减轻或改善；疾病、病症或症状程度的降低；疾病、病症或症状的稳定(即不加重)状态；防止疾病、病症或症状的扩展；延缓或减慢疾病、病症或症状的进程；疾病、病症或症状的改善或缓和；以及可检测或不可检测的缓解(部分或全部)。“治疗”还可以表示与不接受治疗的预期存活期相比延长的存活期。“缓和”疾病、病症或症状表示与不进行治疗的程度或时程相比，疾病、病症或症状的程度和/或不希望的临床表现的减轻和/或发展时程的减慢或延长。
[0159] “内脏痛”表示受试者感受到的继发于内脏器官疾病、病症或症状的任何疼痛。导致内脏痛的症状包括，但不限于，过敏性肠综合征、炎性肠综合征、胰腺炎、憩室炎、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、腹膜炎、心包炎、肝炎、阑尾炎、结肠炎、胆囊炎、肠胃炎、肾脏疼痛、间质性膀胱炎、卵巢(例如，囊肿)、子宫内膜异位、痛经、子宫疼痛、由内脏器官癌所导致的疼痛、损伤疼痛、内脏器官感染、妇科疼痛、膀胱痛、肠痛、胃痛、食道痛、牵涉性心痛、上胃肠道消化不良和绞痛(包括肾绞痛和胆石绞痛)。具有内脏器官疾病或症状的动物可能经历内脏痛。
[0160] 如本文所使用的，“5HT1B激动剂”和“5HT1D激动剂”分别表示提高5-羟色胺/血清素受体1B和/或1D活性的药剂，例如，通过直接结合并激活5HT1B或5HT1D受体(例如，用曲普坦药剂)或通过抑制血清素的再摄取(例如，用SSRI)以提高活性。5HT1B/1D受体激动剂包括，但不限于，抗抑郁或抗焦虑药(例如，西酞普兰)、苯丙胺类(例如，右旋苯丙胺和左旋苯丙胺)、止吐剂或抗焦虑剂(例如，苯二氮)、抗惊厥剂(例如，丙戊酸钠)和曲普坦类(例如，舒马曲普坦)。5HT1B受体激动剂也可激动5HT1D受体；相反地，5HT1D受体激动剂也可以激动5HT1B受体。
[0161] “止痛剂”表示用于缓解疼痛的多个药物组中的任何成员。止痛药物以各种方式作用于外周和中枢神经系统。它们包括，但不限于，扑热息痛(即对乙酰氨基酚)、非类固醇抗炎药物(NSAID)和如吗啡的鸦片制剂药物。
[0162] “抗抑郁剂”表示用于缓解抑郁或情绪不良的多个药物组中的任何成员。抗抑郁剂的种类包括选择性血清素再摄取抑制剂(SSRI)、血清素-去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)、去甲肾上腺素能和特异血清素能抗抑郁剂(NASSA)、去甲肾上腺素再摄取抑制剂(NRI)、去甲肾上腺素-多巴胺再摄取抑制剂、三环抗抑郁剂(TCA)和单胺氧化酶抑制剂(MAOI)。抗抑郁药剂的实例包括，但不限于，阿米替林、西酞普兰、地昔帕明、度洛西汀、依他普仑、氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、舍曲林、阿米替林、去甲阿米替林、氯米帕明、多塞平、丙米嗪、丙米嗪氧化物、曲米帕明；阿地唑仑、阿米替林氧化物、阿莫沙平、地昔帕明、马普替林、去甲替林、普罗替林、阿米庚酸、布替林、地美替林、二苯西平、二甲他林、度琉平、氟西嗪、伊普吲哚、洛非帕明、美利曲辛、美他帕明、去甲氯利帕明(norclolipramine)、肟替林、奥匹哌醇、哌拉平、苯噻啶、丙吡西平、奎纽帕明、瑞波西汀、阿托莫西汀、安非他酮、瑞波西汀、托莫西汀、度洛西汀、米那普仑、米氮平、奈法唑酮、文拉法辛、阿米夫胺、异丙烟肼、异卡波肼、M-3-PPC(Draxis)、吗氯贝胺、帕吉林、苯乙肼、反苯环丙胺、伐诺司林、巴嗪普令、贝氟沙通、溴法罗明、西莫沙酮、氯吉兰、阿米替林、氯米帕明、地昔帕明、多塞平、丙米嗪、马普替林、去甲替林、普罗替林、曲米帕明、阿地唑仑、阿拉丙酯、阿米庚酸、阿米替林/氯氮 的组合、阿替美唑、阿扎米安色林(azamianserin)、巴嗪普令、苯呋拉林、二苯美伦、双胺苯吲哚、比培那醇、溴法罗明、卡罗沙酮、西文氯胺、氰帕明、西莫沙酮、西酞普兰、氯美醇、氯伏胺、氮尼尔、地阿诺、地美替林、二苯西平、度琉平、屈昔多巴、乙非辛、艾司唑仑、依托哌酮、非莫西汀、酚加宾、非唑拉明、氟曲辛、咪唑克生、吲达品、茚洛秦、伊普吲哚、左丙替林、锂、利托西汀；洛非帕明、美地沙明、美他帕明、美曲吲哚、米安色林、米那普仑、米那普林、米氮平、孟替瑞林、奈拉西坦、奈福泮、尼亚拉胺、诺米芬辛、诺氟西汀、奥替瑞林、奥沙氟生、匹那西泮、吡吲哚、苯噻啶、利坦色林、咯利普兰、色氯雷敏(sercloremine)、司普替林、西布曲明、舒布硫胺、舒必利、替尼沙秦、托扎啉酮、促甲状腺素释放素、噻奈普汀、替氟卡宾、曲唑酮、托芬那辛、托非索泮、托洛沙酮、托莫西汀、维拉必利、维洛沙秦、维喹啉、苯吡烯胺和佐美他平。
[0163] “抗惊厥剂”表示用于防止癫痫发作发生的药剂的多个组中的任何一个(即抗癫痫药)。抗惊厥剂的目标是抑制引起癫痫发作的神经元的快速和过度放电。多种抗惊厥剂阻+ 2+断了钠(Na)通道、钙(Ca )通道、AMPA受体或NMDA受体。一些抗惊厥剂抑制GABA的代谢或增加其释放。抗惊厥剂的实例包括，但不限于，卡马西平、氟吡汀、加巴喷丁、拉莫三嗪、奥卡西平、苯妥英、瑞替加滨、托吡酯和2-丙基戊酸钠。
[0164] “环加氧酶-2(COX-2)抑制剂”表示抑制COX-2酶活性的任何药剂。COX-2抑制剂的实例包括，但不限于，NSAID、扑热息痛(即对乙酰氨基酚)、塞来昔布、依托昔布、罗美昔布、帕瑞昔布、罗非昔布和伐地昔布。
[0165] “非甾族抗炎药物”(NSAID)表示对治疗的受试者显示出止痛、抗炎和退热作用的药剂。NSAID的实例包括，但不限于，阿司匹林、阿莫西普林(amoxiprin)、贝诺酯、胆碱水杨酸镁、费索胺(faislamine)、水杨酸甲酯、水杨酸镁、水杨基水杨酸盐(双水杨酯)、醋氯芬酸、溴芬酸、依托度酸、舒林酸、卡洛芬、芬布芬、洛索洛芬、奥沙普秦、阿扎丙宗、磺吡酮、尼美舒利、利克飞龙、阿西美辛、塞来昔布、德拉昔布、双氯芬酸、二氟尼柳、乙柳酰胺、依托芬那酯、依托昔布、非诺洛芬、氟芬那酸、氟比洛芬、氯那唑酸、氯诺昔康、布洛芬、吲哚美辛、伊索昔康、凯布宗、酮洛芬、酮咯酸、萘普生、萘丁美酮、尼氟灭酸、舒林酸、托美丁、吡罗昔康、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、莫非布宗、羟布宗、帕瑞昔布、芬尼定、保泰松、吡罗昔康、丙帕他莫、异丙安替比林、罗非昔布、水杨酰胺、舒洛芬、噻洛芬酸、替诺昔康、伐地昔布、4-(4-环己基-2-甲基噁唑-5-基)-2-氟苯磺酰胺、N-[2-(环己氧基)-4-硝基苯基]甲烷磺酰胺、2-(3，4-二氟苯基)-4-(3-羟基-3-甲基丁氧基)-5-[4-(甲磺酰基)苯基]-3(2H)-哒嗪酮和2-(3，5-二氟苯基)-3-[4-(甲磺酰基)苯基]-2-环戊烯-1-酮)。
[0166] “鸦片制剂”表示一旦与中枢神经系统中的鸦片类物质受体结合后起止痛作用的任何天然或合成的药剂。鸦片制剂的实例包括，但不限于，阿芬太尼、布托啡诺、丁丙诺啡、可待因、右吗拉胺、右丙氧芬、地佐辛、双氢可待因、地芬诺酯、埃托啡、芬太尼、氢可酮、氢吗啡酮、凯托米酮、左啡诺、左美沙酮、美沙酮、美普他酚、吗啡、吗啡-6-葡糖苷酸、纳布啡、纳洛酮、羟考酮、羟吗啡酮、喷他佐辛、哌替啶、哌腈米特、瑞芬太尼、舒芬太尼、他喷他多、替利定和曲马多。附图说明
[0167] 图1显示了在存在人肝微粒体的情况下孵育时，化合物6a和6b的代谢稳定性。
[0168] 图2显示了在存在人肝微粒体的情况下孵育时，化合物18的代谢稳定性。
[0169] 图3显示了在神经损伤引起的神经病样疼痛的Chung模型中腹膜内给予化合物6b后热痛觉过敏的逆转。
[0170] 图4显示了在神经损伤引起的神经病样疼痛的Chung模型中腹膜内给予化合物6a后对热痛觉过敏逆转的作用。
[0171] 图5和图6分别显示了向试验动物腹膜内给予化合物6b和6a后，6b逆转触觉性感觉过敏而6a不逆转。
[0172] 图7显示了胰腺炎内脏痛模型的一般试验方案。
[0173] 图8显示了化合物18在胰腺炎内脏痛模型中的作用。
[0174] 图9显示了化合物6b在胰腺炎内脏痛模型中的作用。
[0175] 图10显示了化合物18在IBS内脏痛模型中的作用。
[0176] 图11显示了化合物6a在胰腺炎内脏痛模型中的作用。
[0177] 图12显示了化合物27在胰腺炎内脏痛模型中的作用。
具体实施方式
[0178] 我们已发现某些吲哚化合物(如3，5-取代的吲哚化合物)在治疗内脏痛中有用。内脏痛可能是由内脏器官疾病或损伤所引起的，其牵连身体其他部分疼痛。通过本文所述方法治疗的内脏痛的示例性形式包括继发于过敏性肠综合征、炎性肠综合征、胰腺炎、憩室炎、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、腹膜炎、心包炎、肝炎、阑尾炎、结肠炎、胆囊炎、肠胃炎、子宫内膜异位、痛经、间质性膀胱炎、前列腺炎、胸膜炎、上胃肠道消化不良、肾绞痛或胆石绞痛的疼痛。本文说明了其他形式，并且另外的其他形式在本领域中是已知的。在美国专利US 2006/0258721和本文中公开了特别期望的化合物，并且它们具有以下化学式：
[0179] 或其药用盐或药物前体，其中，1
[0180] R 为H、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C1-4烷基杂环基或可选取代的C3-8环烷基；2 3
[0181] R 和R 分别独立地为H、Hal、可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9桥连的杂环基、可选取代的C1-4桥连的烷基杂环基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基或可选取代的C3-8环烷基；4 7
[0182] R 和R 分别独立地为H、F、C1-6烷基或C1-6烷氧基；5 5A 5B 5A
[0183] R 为H、R WC(NH)NH(CH2)r5或R NHC(S)NH(CH2)r5，其中r5为0至2的整数，R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基、5B
可选取代的芳酰基或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；而R 为C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基或可选取代的芳酰基；和
6 6A 6B 6A
可选取代的芳酰基或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；而R 为C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基或可选取代的芳酰基；和
6 6A 6B 6A
[0184] R 为H、F、R C(NH)NH(CH2)r6或R NHC(S)NH(CH2)r6，其中r6为0至2的整数，R 为可选取代的C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基、6B
可选取代的芳酰基或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；而R 为C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基或可选取代的芳酰基。
可选取代的芳酰基或可选取代的C1-4硫代烷基杂环基；而R 为C1-6烷基、可选取代的C6-10芳基、可选取代的C1-4烷芳基、可选取代的C2-9杂环基、可选取代的C1-4烷基杂环基、可选取代的C1-6硫代烷氧基、可选取代的C1-4硫代烷芳基或可选取代的芳酰基。
[0185] 在优选的实施方式中，R6为H。
[0186] 这些化合物的具体实例包括表2中所列的那些。
[0187] 表2
[0188]
[0189]
[0190]
[0191]
[0192] 美国专利US 2006/0258721中提供了合成表2中每种化合物的方法，并通过引用并入。
[0193] 优选的化合物包括 和
[0194] 其 它 3，5 取 代 的 吲 哚 包 括 (+) 和在美国专利US 2006/0258721中公开了它们的外消旋混合
物。
物。
[0195] 另一优选的化合物为 本文说明了它的合成。
[0196] 其他优选的化合物包括：
[0197]
[0198] 顺式对映异构体的混合
[0199] 物、 (+)-顺式异构体、 (-)-顺式异构体、
[0200]
[0201] 反式对映异构体的混合反式对映异构体的混合顺式对映异构体的混合
[0202] 物、 物、 物、
[0203]
[0204] 制备本发明化合物的方法
[0205] 在美国专利No.7,375,219中总体地说明了3，5-取代的吲哚的合成，其通过引用并入，并且本文说明了其他实例。以下示出了1，3-取代的己烷环的合成：
[0206]
[0207] 根据J.Org.Chem.68：2109-2114(2003)中报道的文献方法，实施了适当的吲哚衍生物对烯酮的迈克尔加成(Micheal addtion)。在存在三乙酰氧基硼氢化钠和酸(优选乙酸)的情况下，可以通过用各种伯胺或仲胺进行的标准还原性胺化合成化合物III。如果所述产物为仲胺(其中使用伯胺进行所述还原性胺化)，则在进一步进行之前可以用适合的保护基团(如叔丁氧羰基)对其进行保护。在Pd-C/H2的还原条件下，可以通过硝基基团的还原得到化学式IV所表示的胺。在溴取代的情况下，可以在标准的布赫瓦尔德胺化(Buchwald amination)条件下，使用Pd2(dba)3将其转化为伯胺(参见，例如美国专利No.7,375,219)。如美国专利No.7,375,219中所述的，通过与脒试剂反应可以将伯胺IV转化为化合物V。
[0208] 药物组合物
[0209] 优选地，将本发明化合物配置成适于体内给药的生物相容形式的用于向人受试者给药的药物组合物。因此，在另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含与适合的稀释剂或载体混合的本发明的化合物。
[0210] 本发明化合物可以以游离碱的形式使用，以盐、溶剂化物的形式使用和作为药物前体使用。所有形式均在本发明的范围内。根据本发明的方法，可以将所述化合物或它的盐、溶剂化物或药物前体根据所选的给药途径以多种形式向患者给予，如本领域技术人员所理解的。例如，可以通过口服、肠胃外、口腔、舌下、鼻腔、直肠、贴片、泵入或透皮给药的方式给予本发明化合物和据此配置成的药物组合物。肠胃外给药包括静脉内、腹膜内、皮下、肌内、经上皮、鼻腔、肺内、鞘内、直肠和局部给药模式。可以通过在所选的一段时间内连续输注以进行肠胃外给药。
[0211] 可以口服给予本发明化合物，例如，与惰性稀释剂或与可吸收的可食用载体一同口服给予，或者可以将其封装在硬壳或软壳明胶胶囊中，或者可以将其压缩成片剂，或者可以将其直接与饮食的食物混合。对于口服治疗性给药，可以将本发明化合物与赋形剂混合并且可以以可吸收的片剂、口含片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬液、糖浆、薄片等形式使用。
[0212] 还可以肠胃外给予本发明化合物。可以在水中适当地与表面活性剂(如羟丙基纤维素)混合制备本发明化合物的溶液。还可以在甘油、液体聚乙二醇、二甲亚砜和它们含或不含醇的混合物中以及在油剂中制备分散系。在常规储存和使用条件下，这些制剂可以含有防腐剂以防止微生物生长。在下列文献中说明了选择和制备合适剂型的常规方法和成分，例如，2003年出版的第20版雷明登氏制药科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)和1999年出版的美国药典：国家处方集(The National Formulary)(USP 24NF19)。
[0213] 适于注射使用的药物类型包括无菌水溶液或分散系以及用于即时制备无菌注射液或分散系的无菌粉末。在所有情况下，所述类型必须是无菌的并且必须是达到可通过注射器易于给药的程度的液体。
[0214] 可以将鼻腔给药的组合物方便地制成气雾剂、滴剂、凝胶剂和粉剂。气雾剂剂型通常包括用生理学可用的水溶剂或非水溶剂制成的活性物质的溶液或微悬液，并且通常以无菌形式以单剂量或多剂量存在于密封容器中，所述容器可以采取药筒的形式并可以重新灌注以配合雾化装置使用。可替代地，所述密封容器可以是单元分散装置，如单剂量鼻腔吸入器或配有计量阀的气雾分散器，所述计量阀设计成使用后丢弃。当所述剂型包含气雾分散器时，它将包含推进剂，所述推进剂可以是压缩气体，如压缩空气或有机推进剂，如氟氯烃类。气雾剂剂型还可以采取泵-喷雾器的形式。
[0215] 适于口腔或舌下给药的组合物包括片剂、糖锭和锭剂，其中将所述活性成分与如糖、阿拉伯胶、黄芪胶或明胶和甘油的载体一同配制。直肠给药的组合物方便地采取栓剂的形式，其含有常规栓剂基质，如可可脂。
[0216] 可以单独或结合如上所提到的药用载体将本发明化合物给予动物，并根据所述化合物的溶解度和化学性质、所选给药途径以及标准药物实践确定两者的比例。
[0217] 可以根据多种因素改变本发明化合物和/或包含本发明化合物的组合物的剂量，所述因素如，所述化合物的药效性质；给药模式；接受者的年龄、健康和体重；症状的性质和程度；治疗的频率和并发治疗的类型(如果有)；所述化合物在治疗动物中的清除率。本领域技术人员可以根据上述因素确定适当的剂量。可以起初以适合的剂量给予本发明化合物并且可以基于临床反应根据需要进行调节。一般说来，以每天0.05mg至3000mg(以固体形式测量)的剂量向人给予本发明化合物可以获得满意的结果。优选的剂量范围在0.05-500mg/kg之间，更优选的在0.05-50mg/kg之间。
[0218] 可以单独使用本发明化合物，或结合具有NOS活性的其它药剂使用，或结合其它治疗类型(可以或可以不抑制NOS)使用以治疗、防止和/或降低中风、神经性疼痛或偏头痛或受NOS抑制影响的其他病症的风险。在组合治疗中，当单独给药时，可以根据标准剂量降低一种或多种治疗性化合物的剂量。在这种情况下，组合时所述化合物的剂量应提供治疗作用。这些其它药剂包括5HT1B和/或5HT1D受体激动剂，例如，曲普坦类，如舒马曲普坦、利扎曲普坦、那拉曲普坦、佐米曲普坦，依来曲普坦、阿莫曲普坦或夫罗曲普坦。
[0219] 其他药剂包括止痛剂、抗抑郁剂和抗惊厥剂。本文提供了具体实例。
[0220] 实施例1.N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(6a和6b)：
[0221]
[0222] (a)N-苄基-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(1)：
[0223] Macor，J.E et.alJ.Med.Chem.，37，2509-2512，(1994)。
[0224] (b)5-溴代-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(2)：
[0225] Macor，J.E et.al Synthesis，(1997)，443-449。
[0226] (c)3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(3)：
[0227] 方法(1)：将N-苄基-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺1(4.0g，13.097mmol)溶于用干燥氩气吹扫过的烧瓶中的无水乙醇(60mL)。快速加入湿润的20wt％的氢氧化钯碳(1.92g，2.734mmol)，用真空泵排出烧瓶中的气体并用置于气球中的氢气替换。再排出烧瓶中的气体并用氢气替换两次，将该混合物在室温下在氢气气氛中搅拌。48小时后，将该混合物通过硅藻土片过滤以除去不溶物，用无水乙醇(30mL)清洗该片并蒸发溶剂。将粗制的胺通过硅胶色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9至1∶4)纯化以得到
1
浅黄色泡沫，3(1.50g，得率53.6％)。H NMR(DMSO-d6)：δ1.80-1.92(m，1H)，2.10-2.24(m，
1H)，2.30(s，3H)，2.40(t，2H，J ＝ 8.4Hz)，2.66-2.78(m，1H)，2.93(t，1H，J ＝ 8.2Hz)，
3.35-3.46(m，1H)，4.42(br s，2H)，6.46(dd，1H，J＝2.1，8.5Hz)，6.70(d，1H，J＝2.0Hz)，
6.92(d，1H，J＝ 2.3Hz)，7.01(d，1H，J ＝8.5Hz)，10.23(br s，1H)；MS(ESI+)m/z( ％ )：
+
216(MH，100)，173(41)。
1
浅黄色泡沫，3(1.50g，得率53.6％)。H NMR(DMSO-d6)：δ1.80-1.92(m，1H)，2.10-2.24(m，
1H)，2.30(s，3H)，2.40(t，2H，J ＝ 8.4Hz)，2.66-2.78(m，1H)，2.93(t，1H，J ＝ 8.2Hz)，
3.35-3.46(m，1H)，4.42(br s，2H)，6.46(dd，1H，J＝2.1，8.5Hz)，6.70(d，1H，J＝2.0Hz)，
6.92(d，1H，J＝ 2.3Hz)，7.01(d，1H，J ＝8.5Hz)，10.23(br s，1H)；MS(ESI+)m/z( ％ )：
+
216(MH，100)，173(41)。
[0228] 方 法(2)：将 5-溴 代-3-(1-甲 基 吡 咯 烷 -3-基)-1H-吲 哚 2，(405mg，1.4507mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(132.8mg，0.1450mmol)和无水四氢呋喃(20mL)置于用干燥氩气吹扫过并配有磁力搅拌棒和冷凝器的烧瓶中。加入三-叔丁基膦(10wt％的己烷溶液，863μL，0.2901mmol)溶液，随后逐滴加入1M的双(三甲基硅基)氨基锂的四氢呋喃溶液(4.35mL，4.35mmol)，并将该混合物回流70分钟。将该混合物冷却到室温然后再冷却至0℃，用1M的HCl(10mL)结束反应并搅拌10分钟。用乙酸乙酯稀释该溶液并加入
5M NH4OH以将pH调节至10。将该混合物转移到分液漏斗中并收集有机层。用乙酸乙酯进一步萃取水层并用盐水清洗合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并将残余物通过硅胶干色谱用约25mL的20％2M NH3甲醇溶液/80％二氯甲烷的溶剂系统洗脱进行纯化以得到黄色残余物，3(162mg，得率51.9％)。
5M NH4OH以将pH调节至10。将该混合物转移到分液漏斗中并收集有机层。用乙酸乙酯进一步萃取水层并用盐水清洗合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并将残余物通过硅胶干色谱用约25mL的20％2M NH3甲醇溶液/80％二氯甲烷的溶剂系统洗脱进行纯化以得到黄色残余物，3(162mg，得率51.9％)。
[0229] 1H NMR(DMSO-d6)：与通过上述方法1所制备的相同。
[0230] (d)3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯((±)-4)：
[0231] 方法(1)：将3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺3，(96mg，0.446mmol)、二噁烷(6mL)、1M NaOH(0.89mL，0.89mmol)和水(0.11mL)置于配有搅拌棒和氩气气氛的烧瓶中并将混合物在冰浴中冷却至0℃。在低于5℃下，逐滴加入溶于二噁烷(2mL)的氯甲酸苄酯(0.125mL，0.892mmol)。移去冰浴并使混合物温度恢复至室温。1小时后，将该混合物在乙酸乙酯(50mL)和饱和的NaHCO3水溶液(10mL)之间分配并收集有机层。用乙酸乙酯进一步萃取水层，并用盐水清洗合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并将残余物通过硅胶色谱(10％2M NH3甲醇溶液/90％二氯甲烷)纯化以得到乳白色固体(±)-4(110mg，得1
率70.6％)。HNMR(DMSO-d6)：δ1.82-1.93(m，1H)，2.12-2.27(m，1H)，2.30(s，3H)，2.40(t，
2H，J＝8.4Hz)，2.68-2.79(m，1H)，2.95(t，1H，J＝8.2Hz)，3.40-3.52(m，1H)，5.14(s，2H)，
7.04-7.10(2m，2H)，7.20-7.25(m，1H)，7.29-7.46(m，5H)，7.71(br s，1H)，9.45(br s，1H)，+
10.67(br s，1H)；MS(ESI+)m/z(％)：350(MH，100)。
率70.6％)。HNMR(DMSO-d6)：δ1.82-1.93(m，1H)，2.12-2.27(m，1H)，2.30(s，3H)，2.40(t，
2H，J＝8.4Hz)，2.68-2.79(m，1H)，2.95(t，1H，J＝8.2Hz)，3.40-3.52(m，1H)，5.14(s，2H)，
7.04-7.10(2m，2H)，7.20-7.25(m，1H)，7.29-7.46(m，5H)，7.71(br s，1H)，9.45(br s，1H)，+
10.67(br s，1H)；MS(ESI+)m/z(％)：350(MH，100)。
[0232] 方法(2)：可替代地，直接从N-苄基-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺1合成(±)-4而不纯化中间体胺3。将N-苄基-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺1(4.8g，15.716mmol)溶于用干燥氩气吹扫过的烧瓶中的无水乙醇(250mL)。快速加入湿润的20wt％的氢氧化钯碳(2.688g)，用真空泵排出烧瓶中的气体并用置于气球中的氢气替换。再排出烧瓶中的气体并用氢气替换两次，将该混合物在室温下在氢气气氛中搅拌。44小时后，(15％2M NH3甲烷溶液/85％二氯甲烷)的溶剂系统中的薄层色谱显示完全转化为3，
3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺。将该混合物通过硅藻土片过滤以除去不溶物，用无水乙醇(50mL)清洗该片并蒸发溶剂，将化合物用真空泵大致干燥从而得到3.40g粉红色-紫色固体。将搅拌棒和氩气气氛置于烧瓶中。加入二噁烷(135mL)、1M NaOH(31.43mL，
31.43mmol，2.0当量)和水(3.8mL)并将该混合物在冰浴中冷却至0℃。在低于5℃下，在约20分钟内逐滴加入溶于二噁烷(40mL)的氯甲酸苄酯(4.42mL，31.432mmol)。移去冰浴并使混合物的温度恢复至室温。1小时后，将该混合物在乙酸乙酯(500mL)和饱和的NaHCO3(50mL)之间分配并收集有机层。用乙酸乙酯进一步萃取水层，并用盐水清洗合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并将残余物通过硅胶色谱法(7.5％2M NH3的甲醇溶液/92.5％二氯甲烷至10％2M NH3的甲醇溶液/90％二氯甲烷)纯化以得到乳白色固体
1
(±)-4(3.18g，得率57.9％)。H NMR(DMSO-d6)：与通过上述方法1所制备的相同。
3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺。将该混合物通过硅藻土片过滤以除去不溶物，用无水乙醇(50mL)清洗该片并蒸发溶剂，将化合物用真空泵大致干燥从而得到3.40g粉红色-紫色固体。将搅拌棒和氩气气氛置于烧瓶中。加入二噁烷(135mL)、1M NaOH(31.43mL，
31.43mmol，2.0当量)和水(3.8mL)并将该混合物在冰浴中冷却至0℃。在低于5℃下，在约20分钟内逐滴加入溶于二噁烷(40mL)的氯甲酸苄酯(4.42mL，31.432mmol)。移去冰浴并使混合物的温度恢复至室温。1小时后，将该混合物在乙酸乙酯(500mL)和饱和的NaHCO3(50mL)之间分配并收集有机层。用乙酸乙酯进一步萃取水层，并用盐水清洗合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并将残余物通过硅胶色谱法(7.5％2M NH3的甲醇溶液/92.5％二氯甲烷至10％2M NH3的甲醇溶液/90％二氯甲烷)纯化以得到乳白色固体
1
(±)-4(3.18g，得率57.9％)。H NMR(DMSO-d6)：与通过上述方法1所制备的相同。
[0233] (e)3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯(4a和4b)：通过制备HPLC使用Chiralpak AD-H色谱柱，5cm×25cm，用己烷/异丙醇/二乙胺(80/20/0.1)以120毫升/分钟的流速洗脱以从相应的外消旋物(±)-4中分离出化合物4a和4b。
[0234] 手性HPLC纯化条件：
[0235] 色谱柱：ChiralPak AD-H，4.6×250mm
[0236] 流动相：己烷/异丙醇/二乙胺(80/20/0.1)
[0237] 流速：1毫升/分钟
[0238] 紫外检测：240nm
[0239] 样品制备：用流动相配制成1mg/ml
[0240] 进样体积：5μl。
[0241] 化 合 物4a( 在14.7分 钟 第 一 个 洗 脱 的 异 构 体)：1H NMR(DMSO-d6)：δ1.82-1.93(m，1H)，2.12-2.27(m，1H)，2.30(s，3H)，2.40(t，2H，J ＝ 8.4Hz)，
2.68-2.79(m，1H)，2.95(t，1H，J＝8.2Hz)，3.43-3.52(m，1H)，5.14(s，2H)，7.04-7.10(2m，
2H)，7.20-7.24(m，1H)，7.29-7.45(m，5H)，7.71(br s，1H)，9.43(br s，1H)，10.65(br s，+
1H)；MS(ESI+)m/z(％)：350(MH，100)。
2.68-2.79(m，1H)，2.95(t，1H，J＝8.2Hz)，3.43-3.52(m，1H)，5.14(s，2H)，7.04-7.10(2m，
2H)，7.20-7.24(m，1H)，7.29-7.45(m，5H)，7.71(br s，1H)，9.43(br s，1H)，10.65(br s，+
1H)；MS(ESI+)m/z(％)：350(MH，100)。
[0242] 化 合 物4b( 在19.6分 钟 第 二 个 洗 脱 的 异 构 体)：1H NMR(DMSO-d6)：δ1.83-1.96(m，1H)，2.13-2.27(m，1H)，2.30(s，3H)，2.40(t，2H，J ＝ 8.4Hz)，
2.67-2.78(m，1H)，2.95(t，1H，J＝8.2Hz)，3.43-3.54(m，1H)，5.14(s，2H)，7.04-7.13(2m，
2H)，7.20-7.24(m，1H)，7.30-7.48(m，5H)，7.71(br s，1H)，9.43(br s，1H)，10.65(br s，+ +
1H)；MS(ESI)m/z(％)：350(MH，100)。
2.67-2.78(m，1H)，2.95(t，1H，J＝8.2Hz)，3.43-3.54(m，1H)，5.14(s，2H)，7.04-7.13(2m，
2H)，7.20-7.24(m，1H)，7.30-7.48(m，5H)，7.71(br s，1H)，9.43(br s，1H)，10.65(br s，+ +
1H)；MS(ESI)m/z(％)：350(MH，100)。
[0243] (f)N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(6a和6b)：
[0244] 将3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯4b，(＞99％ee，1.90g，5.437mmol)溶于用干燥氩气吹扫过的烧瓶中的无水乙醇(60mL)。快速加入10wt％的钯碳(578.5mg，0.544mmol)，用真空泵排出烧瓶中的气体并用置于气球中的氢气替换。
再排出烧瓶中的气体并用氢气替换两次，将该混合物在室温下在氢气气氛中搅拌。5小时后，(20％2M NH3的甲烷溶于/80％二氯甲烷)溶剂系统的薄层色谱显示完全转化为3b，
3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺。将该混合物用硅藻土片过滤以除去不溶物，并用无水乙醇(30mL)清洗该片。向3b的乙醇溶液中置入搅拌棒和氩气气氛，并向烧瓶中加入噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methylthiophene-2-carbimidothioate hydroiodide)，5(2.48g，8.699mmol，根据已知方法制备，参见US 20060258721)，在环境温度下在Ar气氛下搅拌使反应进行19小时。此时，蒸发溶剂并在H2O和乙酸乙酯之间分配残余物，加入1M NaOH溶液以将pH调节至10。将该混合物转移到分液漏斗中并收集有机层。用乙酸乙酯进一步萃取水层并用盐水清洗合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并将残余物通过干色谱用约50mL的15％2M NH3的甲醇溶液/85％二氯甲烷至20％2M NH3的甲醇溶液/80％二氯甲烷的溶剂系统洗脱进行纯化以得到黄色残余物6b(1.40g，得率
79.4％)。
再排出烧瓶中的气体并用氢气替换两次，将该混合物在室温下在氢气气氛中搅拌。5小时后，(20％2M NH3的甲烷溶于/80％二氯甲烷)溶剂系统的薄层色谱显示完全转化为3b，
3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺。将该混合物用硅藻土片过滤以除去不溶物，并用无水乙醇(30mL)清洗该片。向3b的乙醇溶液中置入搅拌棒和氩气气氛，并向烧瓶中加入噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methylthiophene-2-carbimidothioate hydroiodide)，5(2.48g，8.699mmol，根据已知方法制备，参见US 20060258721)，在环境温度下在Ar气氛下搅拌使反应进行19小时。此时，蒸发溶剂并在H2O和乙酸乙酯之间分配残余物，加入1M NaOH溶液以将pH调节至10。将该混合物转移到分液漏斗中并收集有机层。用乙酸乙酯进一步萃取水层并用盐水清洗合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并将残余物通过干色谱用约50mL的15％2M NH3的甲醇溶液/85％二氯甲烷至20％2M NH3的甲醇溶液/80％二氯甲烷的溶剂系统洗脱进行纯化以得到黄色残余物6b(1.40g，得率
79.4％)。
[0245] 以类似的方式，从3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基氨基甲酸苄基酯，4a(＞99％ee，2.0g，5.723mmol)起始，制备了黄色固体6a(1.10g，得率59.3％)。
[0246] 手性HPLC纯化条件：
[0247] 色谱柱：ChiralPak AD-H，4.6×250mm
[0248] 流动相：己烷/乙醇/二乙胺(90/10/0.1)
[0249] 流速：0.4毫升/分钟
[0250] 紫外检测：254、230nm
[0251] 样品制备：用乙醇配制成1mg/mL
[0252] 进样体积：5μl
[0253] 化合物6b(在75.0分钟第一个洗脱的异构体)：1HNMR(DMSO-d6)δ：1.83-1.98(m，1H)，2.16-2.28(m，1H)，2.32(s，3H)，2.50-2.60(m，2H)，2.66-2.74(m，1H)，2.95(t，1H，J＝ 8.4Hz)，3.45-3.56(m，1H)，6.32(br s，2H)，6.64(dd，1H，J ＝ 8.4，1.8Hz)，7.02(d，1H，J＝1.4Hz)，7.08-7.11(m，2H)，7.27(d，1H，J＝8.5Hz)，7.59(d，1H，J＝4.5Hz)，7.71(d，+
1H，J＝ 3.3Hz)，10.60(br s，1H)。MS(ESI+)m/z(％)：325(MH，89)，282(90)，163(100)。
C18H20N4S(M+)的EI-HRMS计算值为324.1409；观测值为：324.1407。
1H，J＝ 3.3Hz)，10.60(br s，1H)。MS(ESI+)m/z(％)：325(MH，89)，282(90)，163(100)。
C18H20N4S(M+)的EI-HRMS计算值为324.1409；观测值为：324.1407。
[0254] 化合物6a(在83.1分钟第二个洗脱的异构体)：1HNMR(DMSO-d6)δ：1.83-1.96(m，1H)，2.19-2.28(m，1H)，2.33(s，3H)，2.50-2.62(m，2H)，2.66-2.74(m，1H)，2.95(t，1H，J ＝
8.4Hz)，3.45-3.56(m，1H)，6.32(br s，2H)，6.64(dd，1H，J＝8.4，1.8Hz)，7.02(d，1H，J＝
1.4Hz)，7.08-7.11(m，2H)，7.27(d，1H，J ＝ 8.5Hz)，7.59(m，1H)7.71(d，1H，J ＝ 3.3Hz)，+ +
10.62(br s，1H)。MS(ESI+)m/z( ％ )：325(MH，89)，282(90)，163(100)。C18H20N4S(M) 的EI-HRMS计算值为324.1409；观测值为：324.1404。
8.4Hz)，3.45-3.56(m，1H)，6.32(br s，2H)，6.64(dd，1H，J＝8.4，1.8Hz)，7.02(d，1H，J＝
1.4Hz)，7.08-7.11(m，2H)，7.27(d，1H，J ＝ 8.5Hz)，7.59(m，1H)7.71(d，1H，J ＝ 3.3Hz)，+ +
10.62(br s，1H)。MS(ESI+)m/z( ％ )：325(MH，89)，282(90)，163(100)。C18H20N4S(M) 的EI-HRMS计算值为324.1409；观测值为：324.1404。
[0255] (g)N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(6b)的二盐酸盐：
[0256] 将N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒6b，(2.40g，7.398mmol)溶于用干燥氩气吹扫过的烧瓶中的无水甲醇(70mL)并用1M的HCl/
Et2O(22.2mL，22.2mmol)在室温下处理60分钟。蒸发溶剂并干燥残余物以得到浅黄色固体
29
6b.2HCl，(2.60g，得率88.5％)。[αD] (c＝1.0，甲醇)＝+13.0
Et2O(22.2mL，22.2mmol)在室温下处理60分钟。蒸发溶剂并干燥残余物以得到浅黄色固体
29
6b.2HCl，(2.60g，得率88.5％)。[αD] (c＝1.0，甲醇)＝+13.0
[0257] (h)N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(6a)的二盐酸盐：
[0258] 将N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒6a，(1.10g，3.391mmol)溶于用干燥氩气吹扫过的烧瓶中的无水甲醇(25ml)并用1M的HCl/
Et2O(10.17mL，10.17mmol)在室温下处理30分钟。蒸发溶剂并干燥残余物以得到浅黄色固
29
体6a.2HCl，(1.15g，得率85.4％)。[αD] (c＝1.0，甲醇)＝-13.0
Et2O(10.17mL，10.17mmol)在室温下处理30分钟。蒸发溶剂并干燥残余物以得到浅黄色固
29
体6a.2HCl，(1.15g，得率85.4％)。[αD] (c＝1.0，甲醇)＝-13.0
[0259] 实施例2.N-苄基-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(1)的尝试分离：
[0260]
[0261] 一般方法：
[0262] 将N-苄基-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺1，(1.0g，3.274mmol)溶于用干燥氩气吹扫过的烧瓶中的无水溶剂(约10mL)。向该溶液中边旋转边加入溶于无水溶剂(约10mL)的手性酸溶液(0.5当量)。如果在该溶液中立刻出现混着，则再缓慢加入加热的无水溶剂直至混合物均匀。将该混合物缓慢冷却。如果在烧瓶壁上沉淀出粘性胶质，则再加入加热的无水溶剂直至均匀，并使该溶液冷却至室温。当在室温下观察无沉淀时，将该烧瓶冷却至0℃过夜，和/或加入反溶剂以尝试引起结晶。下表3中总结了结果。
[0263] 表3：N-苄基-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(1)的尝试分离：
[0264]甲醇 甲醇+乙 乙醇 异丙醇 丙酮
醚
联苯酰酒 胶质、稀释、
石酸-(L) 加入丙酮无沉
淀
二对甲苯 胶质或无沉淀 胶质、稀释、 无沉淀、
酰酒石酸 加入乙醚无 加入乙醚
-(L) 沉淀 为胶质
联苯酰酒 胶质
石酸-(D) 0％ee胶质
0％ee过滤物
二对甲苯 胶质
酰酒石酸 0％ee胶质
-(D) 0％ee过滤物
(R)-樟脑磺 无沉淀 浑浊-无 胶质 无沉淀
酸 0℃无沉淀 沉淀 加入乙醚
(S)-樟脑磺 无沉淀 浑浊-无 胶质 无沉淀
酸 0℃无沉淀 沉淀 加入乙醚
(R)-苯乙醇 无沉淀 浑浊-无 固体
酸 0℃无沉淀 沉淀 ～6％ee胶质
～6％ee过滤
物
(S)-苯乙醇 无沉淀 固体
醚
联苯酰酒 胶质、稀释、
石酸-(L) 加入丙酮无沉
淀
二对甲苯 胶质或无沉淀 胶质、稀释、 无沉淀、
酰酒石酸 加入乙醚无 加入乙醚
-(L) 沉淀 为胶质
联苯酰酒 胶质
石酸-(D) 0％ee胶质
0％ee过滤物
二对甲苯 胶质
酰酒石酸 0％ee胶质
-(D) 0％ee过滤物
(R)-樟脑磺 无沉淀 浑浊-无 胶质 无沉淀
酸 0℃无沉淀 沉淀 加入乙醚
(S)-樟脑磺 无沉淀 浑浊-无 胶质 无沉淀
酸 0℃无沉淀 沉淀 加入乙醚
(R)-苯乙醇 无沉淀 浑浊-无 固体
酸 0℃无沉淀 沉淀 ～6％ee胶质
～6％ee过滤
物
(S)-苯乙醇 无沉淀 固体
[0265]酸 0℃无沉淀 ～6％ee胶质
～6％ee过滤
物
～6％ee过滤
物
[0266] 实施例3.N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(6)的尝试分离：
[0267]
[0268] 一般方法：
[0269] 将N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒6，(0.78g，2.404mmol)溶于用干燥氩气吹扫过的烧瓶中的无水溶剂(约10mL)。向该溶液边旋转边加入溶于无水溶剂(约10mL)的手性酸溶液(0.5当量)。如果在该溶液中立刻出现混着，则再缓慢加入加热的无水溶剂直至混合物均匀。将该混合物缓慢冷却。如果在烧瓶壁上沉淀出粘性胶质，则再加入加热的无水溶剂直至均匀，并使该溶液冷却至室温。当在室温下观察无沉淀时，将该烧瓶冷却至0℃过夜以尝试引起结晶。下表4中总结了结果。
[0270] 表4：N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(6)的尝试分离：
[0271]甲醇 甲醇+乙醇 乙醇
酒石酸-(L) 无沉淀 胶质 胶质
0℃无沉淀
联苯酰酒石酸-(L) 无沉淀 胶质 胶质
0℃无沉淀
二对甲苯酰酒石 无沉淀
酸-(L) 0℃无沉淀
(S)-樟脑磺酸 无沉淀
0℃无沉淀
(S)-苯乙醇酸 无沉淀
0℃无沉淀
酒石酸-(L) 无沉淀 胶质 胶质
0℃无沉淀
联苯酰酒石酸-(L) 无沉淀 胶质 胶质
0℃无沉淀
二对甲苯酰酒石 无沉淀
酸-(L) 0℃无沉淀
(S)-樟脑磺酸 无沉淀
0℃无沉淀
(S)-苯乙醇酸 无沉淀
0℃无沉淀
[0272] 实施例4.5-溴代-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(2)的尝试分离：
[0273]
[0274] 一般方法：
[0275] 将5-溴代-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺2，(0.544g，1.949mmol)溶于用干燥氩气吹扫过的烧瓶中的无水溶剂(约8mL)。向该溶液中边旋转边加入溶于无水溶剂(约2.5mL)的手性酸溶液(0.5当量)。将该混合物缓慢冷却至室温。当在室温下观察无沉淀时，将该烧瓶冷却至0℃过夜，和/或加入反溶剂以尝试引起结晶。
[0276] 在下表5中总结了结果。
[0277] 表5：5-溴代-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(2)的尝试分离：
[0278]甲醇，室温 甲醇，0℃ 浓缩至一半体 加入异丙醇直
积 到出现浑浊
(L)-酒石酸 无沉淀 无沉淀 无沉淀 胶质
联苯酰-(L)-酒 无沉淀 无沉淀 无沉淀 胶质
石酸
二对甲苯酰 无沉淀 无沉淀 无沉淀 胶质
-(L)-酒石酸
(1S)-樟脑磺酸 无沉淀 无沉淀 无沉淀 无沉淀
(S)-苯乙醇酸 无沉淀 无沉淀 无沉淀 无沉淀
积 到出现浑浊
(L)-酒石酸 无沉淀 无沉淀 无沉淀 胶质
联苯酰-(L)-酒 无沉淀 无沉淀 无沉淀 胶质
石酸
二对甲苯酰 无沉淀 无沉淀 无沉淀 胶质
-(L)-酒石酸
(1S)-樟脑磺酸 无沉淀 无沉淀 无沉淀 无沉淀
(S)-苯乙醇酸 无沉淀 无沉淀 无沉淀 无沉淀
[0279] 实施例5.N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(6)对映异构体的尝试手性HPLC分离：
[0280] 对N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(6)进行筛选实验以确定大规模对映异构体选择性色谱分离的可行性。
[0281] 在下表6中列出了结果。
[0282] 表6：N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(6)对映异构体的尝试手性HPLC/SFC分离：
[0283]
[0284]
[0285] 实施例6.N-苄基-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(1)；5-溴代-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(2)；3-(5-溴代-1H-吲哚-3-基)-1-甲
基吡咯烷-2，5-二酮(7)和N-(3-(1-甲基-2，5-二氧代吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯甲酰胺(8)对映异构体的尝试手性HPLC/SFC分离：
基吡咯烷-2，5-二酮(7)和N-(3-(1-甲基-2，5-二氧代吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯甲酰胺(8)对映异构体的尝试手性HPLC/SFC分离：
[0286]
[0287] 以类似的方式，对N-苄基-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(1)；5-溴代-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺(2)；3-(5-溴代-1H-吲哚-3-基)-1-甲基吡咯烷-2，5-二酮(7)(根据Macor et al.，Synthesis，443-449(1997)制备)和N-(3-(1-甲基-2，5-二氧代吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)苯甲酰胺(8)(根据Macor et al，Synthesis，443-449(1997)制备)进行筛选试验以确定大规模对映异构体选择性色谱分离的可行性。在所有情况下，这些化合物显示出不充分的分离或在分离过程中表现出有限的手性稳定性。
[0288] 例如，利用色谱柱Chiralpak AD-H、Chiralpak AS-H、ChiralcelOJ-H、Chiralcel OD-H、Chiralcel OB-H、Sepapak-3和Whelk-01(R，R)用在适当情况下加入或未加入0.1％二乙胺或加入0.1％甲烷磺酸的甲醇、乙醇、IPA、ACN溶剂对化合物1进行筛选。
[0289] 实施例7.1-((5-溴代-3-(1甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-1-基磺酰基)甲基)-7，7-二甲基双环[2.2.1]庚-2-酮(9)：
[0290]
[0291] 在0℃用NaH(0.027g，0.680mmol，60％的矿物油溶液)处理化合物2(0.095g，0.34mmol)的干四氢呋喃(3mL)溶液。使反应恢复至室温并搅拌30分钟。在0℃加入
1S-(+)-10-樟脑磺酰氯(0.085g，0.340mmol)，经过1小时恢复至室温并再搅拌1小时。
先用饱和NH4Cl溶液(15mL)再用水(10mL)使该反应淬灭，用乙酸乙酯(2×15mL)萃取该产物。用盐水(15mL)清洗该合并的乙酸乙酯层并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂并用硅胶柱色谱(4％2MNH3的甲醇溶液/96％二氯甲烷)纯化粗品以得到固体化合物9(0.11g，
66 ％ )。1H NMR(DMSO-d6)：δ0.77(s，3H)，1.01(s，3H)，1.40-1.48(m，1H)，1.58-1.67(m，
1H)，1.77-2.01(m，3H)，2.07(t，1H，J ＝ 4.2Hz)，2.19-2.39(s+m，6H)，2.50-2.64(m，2H)，
2.67-2.76(m，1H)，2.84(t，1H，J＝ 8.6Hz)，3.42-3.63(m，3H)，7.45(s，1H)，7.55(dd，1H，J+
＝1.8，8.8Hz)，7.84(d，1H，J＝8.8Hz)，8.00(br s，1H)；MS(ESI+)m/z(％)：493/495(MH，
100)。用常规柱色谱法不可能分离化合物的非对映体混合物。
1S-(+)-10-樟脑磺酰氯(0.085g，0.340mmol)，经过1小时恢复至室温并再搅拌1小时。
先用饱和NH4Cl溶液(15mL)再用水(10mL)使该反应淬灭，用乙酸乙酯(2×15mL)萃取该产物。用盐水(15mL)清洗该合并的乙酸乙酯层并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂并用硅胶柱色谱(4％2MNH3的甲醇溶液/96％二氯甲烷)纯化粗品以得到固体化合物9(0.11g，
66 ％ )。1H NMR(DMSO-d6)：δ0.77(s，3H)，1.01(s，3H)，1.40-1.48(m，1H)，1.58-1.67(m，
1H)，1.77-2.01(m，3H)，2.07(t，1H，J ＝ 4.2Hz)，2.19-2.39(s+m，6H)，2.50-2.64(m，2H)，
2.67-2.76(m，1H)，2.84(t，1H，J＝ 8.6Hz)，3.42-3.63(m，3H)，7.45(s，1H)，7.55(dd，1H，J+
＝1.8，8.8Hz)，7.84(d，1H，J＝8.8Hz)，8.00(br s，1H)；MS(ESI+)m/z(％)：493/495(MH，
100)。用常规柱色谱法不可能分离化合物的非对映体混合物。
[0292] 用1R-(-)-10-樟脑磺酰氯进行的相同反应未得到任何产物。在该情况下，仅回收到了起始材料。
[0293] 实施例8.1-(7，7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚-1-基-)-N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)甲烷磺酰胺的尝试制备：
[0294]
[0295] 向3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-胺，3(62mg，0.288mmol)的无水二氯甲烷(10mL)溶液中加入三乙胺(72.9mg，0.720mmol)，并将该混合物在冰浴中大致冷却。在0℃加入1S-(+)-10-樟脑磺酰氯(75.8mg，0.302mmol)，使该反应恢复到室温并再搅拌16小时。使该反应浓缩，并通过硅胶色谱(5％甲醇/95％二氯甲烷至10％甲醇/90％二氯甲烷)纯化粗残余物以得到(双)磺酰胺10和(三)磺酰胺11。
[0296] 化合物10：1-(7，7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚-1-基)-N-((7，7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚-1-基)甲基磺酰基)-N-(3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲+ +
哚-5-基)甲烷磺酰胺。MS(ESI+)m/z(％)：644(MH，100)，C33H46N3O6S2(MH)的ESI-HRMS的计算值为644.2822；观测值为：644.2829。
哚-5-基)甲烷磺酰胺。MS(ESI+)m/z(％)：644(MH，100)，C33H46N3O6S2(MH)的ESI-HRMS的计算值为644.2822；观测值为：644.2829。
[0297] 化合物11：1-(7，7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚-1-基)-N-((7，7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚-1-基)甲基磺酰基)-N-(1-((7，7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚-1-基)甲基磺酰基)-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚-5-基)甲烷磺酰
+ +
胺。MS(ESI+)m/z(％)：858(MH，100)，C43H60N3O9S3(MH)的ESI-HRMS的计算值为858.3492；
观测值为：858.3497。
+ +
胺。MS(ESI+)m/z(％)：858(MH，100)，C43H60N3O9S3(MH)的ESI-HRMS的计算值为858.3492；
观测值为：858.3497。
[0298] 实施例9.3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-N-((R)-1-苯乙基)-1H-吲哚-5-胺(13)：
[0299]
[0300] 一般方法：
[0301] 将5-溴代-3-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吲哚2，(100mg，0.358mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)、(R)-1-苯乙胺12，(52.1mg，0.430mmol，1.2当量)、(±)-BINAP、叔丁氧基钠和无水溶剂置于氩气气氛下具有磁力搅拌棒的微波瓶中。将该瓶密封并按照表7中所列的条件在油浴中加热。
[0302] 表7：尝试与(R)-1-苯乙胺交叉偶联
[0303]钯源(当量) 配基(当量) 溶剂 碱(当量) 反应温 结果
度，时间 (TLC)
Pd2dba3 BINAP 甲苯 NaOtBu 70℃，21 可忽略的
(2mol％) (4mol％) (1.4当 小时 反应
量)
Pd2dba3 BINAP 甲苯 NaOtBu 70℃，21 可忽略的
(2mol％) (4mol％) (3.0当 小时 反应
量)
Pd2dba3 BINAP 甲苯 NaOtBu 100℃，21 可忽略的
(5mol％) (10mol％) (2.5当 小时 反应
量)
Pd2dba3 BINAP 二噁烷 NaOtBu 100℃，21 可忽略的
(5mol％) (10mol％) (2.5当 小时 反应
量)
Pd2dba3 BINAP THF NaOtBu 65℃，21 可忽略的
(5mol％) (10mol％) (2.5当 小时 反应
量)
度，时间 (TLC)
Pd2dba3 BINAP 甲苯 NaOtBu 70℃，21 可忽略的
(2mol％) (4mol％) (1.4当 小时 反应
量)
Pd2dba3 BINAP 甲苯 NaOtBu 70℃，21 可忽略的
(2mol％) (4mol％) (3.0当 小时 反应
量)
Pd2dba3 BINAP 甲苯 NaOtBu 100℃，21 可忽略的
(5mol％) (10mol％) (2.5当 小时 反应
量)
Pd2dba3 BINAP 二噁烷 NaOtBu 100℃，21 可忽略的
(5mol％) (10mol％) (2.5当 小时 反应
量)
Pd2dba3 BINAP THF NaOtBu 65℃，21 可忽略的
(5mol％) (10mol％) (2.5当 小时 反应
量)
[0304] 实施例10.3-(5-溴代-1H-吲哚-3-基)-1-甲基吡咯烷-2，5-二酮(7)：
[0305]
[0306] 一般方法：
[0307] 将3-(5-溴代-1H-吲哚-3-基)-1-甲基-1H-吡咯-2，5-二酮14，(根据已知方法制备，EP 1224932A1)在相应溶剂(如表8所示)中的溶液在室温下用金属催化剂和配基处理，并根据表8中所列的条件在室温下并在氢气气氛中搅拌该反应混合物。通过硅胶床过滤该反应混合物并蒸发溶剂以得到粗产物。通过快速柱色谱(60％乙酸乙酯/40％己烷)纯化该粗产物以得到3-(5-溴代-1H-吲哚-3-基)-1-甲基吡咯烷-2，5-二酮(7)。用手性HPLC确定对映体过量。
[0308] 手性HPLC纯化条件：
[0309] 色谱柱：ChiralPak AD-H，4.6×250mm。
[0310] 流动相：己烷/乙醇/二乙胺(80/20/0.1)
[0311] 流速：1毫升/分钟
[0312] 紫外检测：254、230nm
[0313] 样品制备：用乙醇配制为1mg/mL。
[0314] 进样体积：5μL
[0315] 表8：3-(5-溴代-1H-吲哚-3-基)-1-甲基-1H-吡咯-2，5-二酮，14的不对称氢化
[0316]金属前体 配基 溶剂 H2压力 反应时 结果
间
Rh(COD)2OTf (R，R)-MeDuphos 甲醇/THF 气球 5天 无反应
Rh(COD)2OTf (R，R)-MeDuphos 甲醇/THF 40psi 17.5小 得到产
时 物，0％
ee
Rh(COD)2OTf (R，R)-Me-BPE 甲醇/THF 40-60psi 24小时 无反应
Rh(COD)2OTf (R)-Phanephos 甲醇 80-100psi 32小时 无反应
间
Rh(COD)2OTf (R，R)-MeDuphos 甲醇/THF 气球 5天 无反应
Rh(COD)2OTf (R，R)-MeDuphos 甲醇/THF 40psi 17.5小 得到产
时 物，0％
ee
Rh(COD)2OTf (R，R)-Me-BPE 甲醇/THF 40-60psi 24小时 无反应
Rh(COD)2OTf (R)-Phanephos 甲醇 80-100psi 32小时 无反应
[0317](R)-Binaphane-Rh(COD)BF4 甲醇/THF 80psi 24小时 无反应
RuClphosphine配基 甲醇/THF 80psi 24小时 无反应
RuClphosphine配基 甲醇/THF 80psi 24小时 无反应
[0318] 实施例11.3-(5-溴代-1-(叔-丁基二甲硅烷基)-1H-吲哚-3-基)-1-甲基吡咯烷-2，5-二酮(17)：
[0319]
[0320] 一般方法：
[0321] 向配备磁力搅拌棒的烘干并用氩气吹扫过的烧瓶中加入5-溴代-1-(叔-丁基二甲硅烷基)-1H-吲哚-3-基硼酸15(141.6mg，0.400mmol)、N-甲基马来酰亚胺16(22.2mg，0.200mmol)、铑催化剂(0.05当量)、无水二噁烷(1mL)并开始搅拌。加入H2O(0.05mL)，并根据下表9中所列的条件在油浴中加热混合物。通过硅胶床过滤该反应混合物，并蒸发溶剂以获得粗产物。通过硅胶色谱(20％乙酸乙酯/80％己烷)纯化粗产物以得到3-(5-溴代-1-(叔-丁二甲硅烷基)-1H-吲哚-3-基)-1-甲基吡咯烷-2，5-二酮17。用手性HPLC确定对映体过量。
[0322] 表9：N-甲基马来酰亚胺16的不对称1，4加成
[0323]铑催化剂 反应温 时间 结果
度
Rh(COD)2BF4 40℃ 0.5小时 可忽略的反应，主
要为材料15(TLC)
Rh(COD)2BF4 45℃ 16小时 Protodeborination
Rh(COD)2BF4 70℃ 2.5小时 分离的得率为23％
Rh(COD)2OTf 45℃ 2小时 分离的得率为65％
Rh(COD)(C16H24O3P2)BF4 70℃ 1小时 分离的得率为
60％，0％ee
Rh(COD)(C5H5(C7H14P)2Fe)BF4 70℃ 1小时 分离的得率为
45％，0％ee
(R)-Binaphane-Rh(COD)BF4 70℃ 1.5小时 分离的得率为
45％，0％ee
度
Rh(COD)2BF4 40℃ 0.5小时 可忽略的反应，主
要为材料15(TLC)
Rh(COD)2BF4 45℃ 16小时 Protodeborination
Rh(COD)2BF4 70℃ 2.5小时 分离的得率为23％
Rh(COD)2OTf 45℃ 2小时 分离的得率为65％
Rh(COD)(C16H24O3P2)BF4 70℃ 1小时 分离的得率为
60％，0％ee
Rh(COD)(C5H5(C7H14P)2Fe)BF4 70℃ 1小时 分离的得率为
45％，0％ee
(R)-Binaphane-Rh(COD)BF4 70℃ 1.5小时 分离的得率为
45％，0％ee
[0324] 实施例12.nNOS(人)、eNOS(人)酶测定
[0325] 人nNOS和eNOS试验：
[0326] 试剂和材料
[0327] 酶：一氧化氮合成酶(神经元，人重组)nNOS I，产品目录号：ALX-201-068，Axxora LLC，CA 92121，USA；一氧化氮合成酶(内皮，人重组)eNOS III，产品目录号：ALX-201-070，GAxxora LLCL-NMMA N-单甲基-L-精氨1/04/05，产品目录号：A17933，Novabiochem[0328] L-NAME NG-硝基-L-精氨酸甲酯，产品目录号N5751，Aldrich2×反应缓冲液：
50mM Tris-HCl(pH 7.4)，产品目录号93313，Sigma-Aldrich Co.，St.Louis，MO[0329] 6μM四氢生物蝶呤(BH4)，产品目录号：T4425，Sigma
50mM Tris-HCl(pH 7.4)，产品目录号93313，Sigma-Aldrich Co.，St.Louis，MO[0329] 6μM四氢生物蝶呤(BH4)，产品目录号：T4425，Sigma
[0330] 2μM黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)，产品目录号：F6625，Sigma
[0331] 2μM黄素腺嘌呤单核苷酸(FMN)，产品目录号：F8399，Sigma终止缓冲液：50mM N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙烷磺酸；(HEPES)(pH 5.5)，H7523，Sigma和5mM乙二胺四乙酸(EDTA)，产品目录号：EDS，Sigma
[0332] NADPH：测定当天新鲜配制的10mM溶液，产品目录号：N7505，Sigma
[0333] 氯化钙：6mM，产品目录号：21107，Sigma
[0334] 钙调蛋白：1mM，产品目录号：P2277，Sigma
[0335] [3H]-L-精氨酸：1μCi/反应，40-70Ci/mmol，产品目录号：TRK-698，Amersham Biosciences
[0336] L-精氨酸：2.5μM(最终测定浓度)，产品目录号：A5131，Sigma平衡的树脂：置于HEPES缓冲液(pH 5.5)中的AG-50W X8树脂，
[0337] 产品目录号：1421441，Bio-Rad Laboratories Ltd.
[0338] 离心杯和支座：产品目录号：C8163，Fisher Scientific
[0339] 液体闪烁计数器：Tri-Carb 2000CA/LL，Canberra Packard Canada液体闪烁液：产品目录号：6012239，Ultima Gold，Perkin-Elmer Lifeand Analytical Sciences，MA[0340] CO2培养器：Lab-Line Enviro Shaker
[0341] 微型离心机：Mikro 20
[0342] 漩涡混合器：微型漩涡混合器，IKA
[0343] 人nNOS和eNOS的步骤
[0344] 制备浓度为6mM的测试化合物的原始储液。在研究当天用蒸馏水新鲜配制每种测试化合物的原始储液。对于IC50值的确定，以3倍连续稀释配制了12种测试化合物浓度。nNOS使用的测试化合物的浓度范围在0.001至300μM，而eNOS的在0.003至1000μM。使用测试化合物或抑制剂的载体作为空白对照。对于非特异性活性，使用100μM的L-NMMA。
L-NAME的IC50浓度与对照平行运行。
L-NAME的IC50浓度与对照平行运行。
[0345] 所有孵育重复进行两次：
[0346] 通过用微量吸液管将下列组分加入到聚丙烯微量离心管中，在冰上制备了反应混合物：
[0347] 10μL的测试化合物、抑制剂或对照(载体或L-NMMA)溶液
[0348] 25μL的反应缓冲液{25mM Tris-HCl、0.6μM BH4、0.2μM FMN、0.2μM FAD}[0349] 5μL的10mM NADPH溶液{1mM}(用10mM的Tris-HCl(pH7.4)新鲜制备)
[0350] 5μL的6mM CaCl2{600μM}
[0351] 5μL的1mM钙调蛋白{100μm}
[0352] 5μL的0.02μg/μL nNOS或0.12μg/μL eNOS
[0353] 在室温下将上述反应混合物预孵育15分钟。
[0354] 通过向反应混合物中加入底物(在含有1μCi[3H]-L-精氨酸+2.5μM未标记的L-精氨酸的5□L溶液中)起始反应。总反应体积为60μL。
[0355] 使用漩涡混合器进行混合并在培养器中将上述反应混合物在37℃下孵育30分钟。
[0356] 在孵育期结束时，加入400μL冰冷的终止缓冲液以终止反应。(终止缓冲液中的乙二胺四乙酸与所有可用的钙螯合。)
[0357] 使用漩涡混合器进行混合，将反应样本转移至离心杯中并使用微型离心机以13000rpm的转速在室温下离心30秒。
[0358] 从支座中取出离心杯并将450μL的洗脱液(含有未结合的L-瓜氨酸)转移至闪烁瓶中。加入3mL闪烁液并在液体闪烁计数器中对放射性进行定量。
[0359] IC50值的计算：
[0360] 使用S形的剂量-反应(可变斜率)曲线分析数据以确定测试化合物的IC50值。
[0361] Y＝底值+(顶值-底值)/(1+10A((LogIC50-X)*希尔斜率))
[0362] X是测试化合物或抑制剂浓度的对数
[0363] Y是L-瓜氨酸形成的量(pmol)
[0364] 底值是指最小的Y值而顶值是指最大的Y值。
[0365] 这与“四参数逻辑方程”相同。
[0366] 斜率因子(也称作希尔斜率)说明了曲线的陡峭程度。符合质量作用定律的标准竞争性结合曲线的斜率为-1.0。如果斜率较小，则斜率因子将为负分数，例如，-0.85或-0.60。
[0367] 人iNOS测定：
[0368] 通过放射性测量法测量了[3H]L-精氨酸向[3H]L-瓜氨酸的转化从而确定了iNOS的活性。在杆状病毒(Baculovirus)-感染的Sf9细胞(ALEXIS)中产生了重组人诱导型NOS(iNOS)。为了测量组成同工型NOS，将10μL的酶加入至100μL的40mM HEPES(pH＝7.4)中，所述HEPES含有2.4mM CaCl2、1mM MgCl2、1mg/mlBSA、1mM EDTA、1mM二硫苏糖醇、
1μM FMN、1μM FAD、10μM四氢生物蝶呤、1mM NADPH、1.2μM CaM。
1μM FMN、1μM FAD、10μM四氢生物蝶呤、1mM NADPH、1.2μM CaM。
[0369] 1.将15μL的测试物质加入至具有特异酶的混合物中并在室温下预孵育15分钟。
[0370] 2.通过加入20μl含有0.25μCi的[3H]精氨酸/毫升和24μM L-精氨酸的L-精氨酸起始该反应。
[0371] 3.在37℃孵育45分钟。
[0372] 4.通过加入20μl含有100mM HEPES、3mM EGTA、3mMEDTA(pH＝5.5)的冰冷的缓冲液终止反应。
[0373] 5.用DOWEX(离子交换树脂DOWEX 50W X 8-400，SIGMA)分离[3H]L-瓜氨酸。
[0374] 6.在离心机中在12000g下旋转10分钟以除去DOWEX。
[0375] 7.向100μL闪烁液中加入70μL的上清液等份。
[0376] 8.在液体闪烁计数器(1450Microbeta Jet，Wallac)中对样品进行计数。
[0377] 将特异NOS活性为(总)活性与存在最终浓度240μM的抑制剂L-NMMA(非特异性)时的活性之间的差值。反应混合物的总体积为每孔150μL。所有测定至少重复两次。标准偏差为10％或更小。表10中示出了本发明示例性化合物的结果。这些结果再次表明与eNOS或iNOS相比，本发明化合物对nNOS抑制的选择性。
[0378] 表10.本发明化合物对人NOS的选择性抑制
[0379]化合物 nNOSh eNOSh e/n iNOSh
(μM) (μM) (μM)
6 0.4 38.7 97 35
6a 0.68 45.5 67 25
6b 0.205 20.6 100 20
18 0.92 51.1 55 20
舒马曲普坦 - - - -
L-NMMA 0.7 0.5 0.7 -
(μM) (μM) (μM)
6 0.4 38.7 97 35
6a 0.68 45.5 67 25
6b 0.205 20.6 100 20
18 0.92 51.1 55 20
舒马曲普坦 - - - -
L-NMMA 0.7 0.5 0.7 -
[0380] 实施例13.血清素5HT1D/1B结合测定
[0381] 根据Heuring和Peroutka(J.neurosci.，7：894-903(1987))的方法，使用牛尾膜进行5-HT1D结合测定(激动剂放射性配基)。根据Hoyer等(Eur.J.Pharmacol.，118：1-12(1995))的方法进行5-HT1B(大鼠大脑皮层)结合测定(激动剂放射性配基)。出于结果分析的目的，将结合至受体的特异配基结合定义为总结合与存在过量未标记配基时所确定的非特异性结合之间的差值。将结果表示为存在测试化合物时所获得的对照特异性结合的百分比。使用希尔方程(Hill equation)曲线拟合通过竞争性曲线的非线性回归分析确定了IC50值(造成对照特异性结合最大抑制的一半时的浓度)和希尔系数(Hill coefficients，nH)并根据Cheng Prusoff方程(Ki＝IC50/(1+(1+(L/KD))计算出抑制常数(Ki)，其中L＝测定中放射性配基的浓度，而KD＝放射性配基对受体的亲合力)。表11示出了所选化合物在5HT1D和1B中结合的结果。
[0382] 表11.化合物在牛1D和大鼠1B受体中的结合
[0383]化合物 5HT1D(μM) 5HT1B(μM)
6 0.19 0.85
6a 0.17 1.4
6b 0.079 0.705
18 0.051 0.16
舒马曲普坦 0.059 0.11
L-NMMA - -
6 0.19 0.85
6a 0.17 1.4
6b 0.079 0.705
18 0.051 0.16
舒马曲普坦 0.059 0.11
L-NMMA - -
[0384] 实施例14.对映异构体6a、6b和18的人肝微粒体体外代谢测定
[0385] 总则
[0386] 在存在和不存在辅因子、细胞色素p-450(CYP)氧化代谢所需的β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)和含有单加氧酶(FMO)的黄素的情况下，将化合物(10μM)与混合的人肝微粒体一同孵育。开发了液相色谱-质谱串联分析法(LC-MS/MS)和/或对每个化合物进行定量以测量终止的反应混合物中6a、6b和18的相对稳定性。在两个重复样本中确定与肝微粒体、NADP+和NADPH-再生系统孵育15、30和60分钟后测试化合物的相对消失。还确定在不存在NADP+的情况下与肝微粒体孵育0和60分钟后6a、6b和18的稳定性。作为阳性对照，平行确定了氯氮平(10μM)的代谢稳定性。
[0387] 在测定当天用蒸馏水新鲜配制了每种测试化合物的1mM储液。该储液用于代谢稳定性测定和校正标准的制备。
[0388] 药剂和标准
[0389] 1.人肝微粒体(混合性别，产品目录号452161，BD Gentest)
[0390] 2.0.5M磷酸钾缓冲液，pH 7.4：用150mL的0.5M磷酸二氢钾(产品目录号P0662，Sigma Aldrich Co.)和700mL的0.5M磷酸氢二钾(产品目录号P8281，Sigma Aldrich Co.)配制
[0391] 3.67mM的磷酸钾缓冲液，pH 7.4：用0.5M的磷酸钾缓冲液储液(pH 7.4)制备[0392] 4.甲醇(产品目录号MX0480-1，EMD)
[0393] 5.六水合氯化镁(MgCl2，产品目录号M0250，Sigma AldrichCo.)
[0394] 6.蒸馏水(产品目录号15230-162，invitrogen Corp.)
[0395] 7.NADP+(产品目录号N0505，Sigma Aldrich Co.)
[0396] 8.葡萄糖-6-磷酸(G6P，产品目录号G7250，Sigma Aldrich Co.)
[0397] 9.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH，产品目录号G7877，SigmaAldrich Co.)[0398] 10.氯氮平(产品目录号C6305，Sigma Aldrich Co.)
[0399] 11.米安色林(4486B，产品目录号153619，ICN)
[0400] 设备和备件
[0401] 1.微型离心机(Mikro20，Hettich)
[0402] 2.轨道振荡器/培养器(Lab-Line Enviro Shaker)
[0403] 3.24-孔BD簇板(产品目录号351147，VWR International)
[0404] 4.1.5mL微型离心管(产品目录号L-510-GRD，Rose ScientificLtd.)
[0405] 5.15mL Falcon管(产品目录号35-2096，VWR International)
[0406] 6.50mL Falcon管(产品目录号21008-178，VWR International)
[0407] 生物分析
[0408] 测试化合物的生物分析方法的发展和确认
[0409] 使用PE Sciex API 4000LC-MS/MS系统进行方法发展和样本分析，该系统配备了Agilent液相色谱系统，其具有二元泵和溶剂脱气器、适合的液相色谱自动进样器和安装在色谱柱与质谱入口之间的换向阀(VIVI，Valco Instrument Co.Inc.)。每种测试化合物的方法确认包括：确定化合物和内标的离子跃迁(即鉴别母体和子体离子)、使用5个校正标准品重复确定线性动态范围两次、确定批内精确度和准确性以及使用纯化合物确定系统校验再现性(±20％)。
[0410] 将氯氮平用作测试化合物的内标(IS)。对于6a，IS浓度为0.570ng/mL，而对于6b为1.14ng/mL。以下包括了分析物的生物分析方法的详细总结。
[0411] 6a、6b和18＊的样本分析
[0412] *该化合物以与6a和6b相似的方式在单独的试验中进行分析。
[0413] 通过确认的LC-MS/MS方法，对从测定中产生的每个测试化合物的样本作为一个批次进行分析。样本批次由下列内容组成：初始系统校验标准(三个重复)、测定试样(两个重复)和最终系统校验标准(三个重复)。如果达到如上所述的系统校验进样验收标准，则认为该批次可接受。在与测试化合物孵育后，通过比较各个时间点与所获得的0小时的值(100％稳定)的峰面积比值(分析物/内标)确定了保留％的各个结果。
[0414] 氯氮平的样本分析
[0415] 通过确认的LC-MS/MS方法，分析了从人肝微粒体稳定性测定中产生的氯氮平的样本。
[0416] 代谢稳定性测定
[0417] 人肝微粒体
[0418] 使用由15个供体(男性和女性供体的混合物)混合的冷藏保存的人肝微粒体进行研究。为表示“平均”代谢活性，使用了混合的供体微粒体。供应商已鉴定了微粒体的I期(CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4、CYP4A11和FMO)和II期(UGT1A1、UGT1A4和UGT1A9)酶活性。
[0419] 稳定性测定
[0420] 1.用0.5mg/mL的人肝微粒体在50mM磷酸钾缓冲液，pH 7.4(PPB)中，在存在+NADPH再生系统(1.3mM NADP、3.3mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)和
3.3mM MgCl2的情况下进行测定。所有孵育重复进行两次。对测试化合物的一个浓度进行测试(10μM)。
3.3mM MgCl2的情况下进行测定。所有孵育重复进行两次。对测试化合物的一个浓度进行测试(10μM)。
[0421] 2.在测定当天，在37℃的水浴中使微粒体的储液(20mg/mL)解冻，然后立即置于冰上。接着用适当体积的PPB稀释微粒体从而使测定中的最终蛋白质浓度为0.5mg/mL而最终PPB浓度为50mM。
[0422] 3.将测试化合物的1mM储液的适当等份(水溶液)加入至稀释的微粒体中，然后将该混合物在培养器中加热至37℃并保持5分钟。将该加热溶液的两个75μL等份加入到冷藏的标记过的聚丙烯离心管中，该管中含有100μL的适当的冰冷的内标甲醇溶液和+25μL的4倍浓缩的NADPH再生系统溶液(5.2mM NADP、13.2mM葡萄糖-6-磷酸、1.6U/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)和13.2mM MgCl2。这些样本代表时间为零时的样本。
[0423] 4.将预加热的肝微粒体和测试化合物混合物的等份(375μL)分散到24-孔板的孔中。然后加入预加热(在37℃保持5分钟)的4倍浓缩的NADPH再生系统溶液的125μl等份以起始反应。在震荡培养器(150rpm)中在37℃下孵育反应混合物(0.5mL)。
[0424] 5.在孵育15、30和60分钟后从反应混合物中取样100μL。立即将每个样本与测试化合物一起加入至含有100μL冰冷甲醇的冷藏的标记过的离心管中以终止反应。
[0425] 6.用涡流混合器混合所有样本，然后离心(15,000×g保持10分钟，4℃)以使蛋白质成粒。然后将每个样本的上清液的等份转移至清洁、标记过的离心管中并在-70℃保存直至进行生物分析。
[0426] 7.类似地，平行监测氯氮平(10μM)的代谢稳定性。
[0427] 8.作为对照，在不存在NADP+的情况下将测试化合物与微粒体一起孵育。如以上详细说明的，在孵育0和60分钟后，采集对照样本100μL反应混合物。
[0428] 9.在具有实验日期、研究编号、化合物标识、采样时间、板孔位置图以及与所述试验的任何偏差的数据表上进行记录。
[0429] 空白模拟基质的制备
[0430] 如下制备了在生物分析(校正标准和QC样本的制备)中使用的不含微粒体蛋白的10mL模拟空白基质：
[0431] 1.将1.25mL 4-倍浓缩的NADPH再生系统溶液加入至0.05mL的水和3.70mL的磷酸钾缓冲液，pH 7.4(50mM的最终浓度)中并通过漩涡混合器充分混合。
[0432] 2.然后加入5mL冰冷的甲醇，并通过漩涡混合器将该混合物再次混合。将模拟基质在-70℃保存直至使用。
[0433] 结果的计算和表达
[0434] 计算了零时间点处样本的测试化合物与内标峰面积比值的平均值。将孵育15、30和60分钟后的两个重复的峰面积比值分别与平均零时间点样本进行比较，并表示为15、30和60分钟后的保留％。
[0436] ％Rt＝％Ro e-Kt
[0437] 其中％Rt表示时间t处的保留％，％R0表示孵育混合物中母体化合物的初始百分比(即零时间点)，而k表示衰减的速率常数。在回归分析中未使用权重。适当时，将化合物消失的半衰期(t1/2)计算为0.693/k。
[0438] 6a和6b的生物分析方法
[0439]分析物标识 6a，6b
校正范围 不适用(无标准曲线。使用化合物/IS比值
比较浓度变化)
内标标识 氯氮平
基质 HLM
HPLC Agilent 1100液相色谱，配备了真空脱气器
(型号G1322A)、四元泵(型号G1311A)
和孔板自动进样器(型号G1367A)
校正范围 不适用(无标准曲线。使用化合物/IS比值
比较浓度变化)
内标标识 氯氮平
基质 HLM
HPLC Agilent 1100液相色谱，配备了真空脱气器
(型号G1322A)、四元泵(型号G1311A)
和孔板自动进样器(型号G1367A)
[0440]进样体积 6b-10μL，6a-10μL和氯氮平-2.0μL
分析柱 Onyx Momolithic C-18，100×3.0mm，产品
目录号051020-10，Phenomenex.色谱柱#：
30
在线过滤器 0.5μm(产品目录号A-428，Upchurch
Scientific)
柱温 环境温度
流动相 A＝加入10mM AmF的95％水，pH 3(v/v)
和5％甲醇
B＝95％甲醇和加入10mMAmF的5％水，pH
3(v/v)
80％B和20％A
流速 1.0mL/min
运行模式 等度洗脱
洗针 50％的甲醇水溶液
分析时间 1min
换向阀 VICI，型号EHMA(Valco Instrument Co.
Inc.)
0至0.2min，柱流出液转换至废液
0.2至0.9min，柱流出液流向质谱
0.9至1.0min，柱流出液转换至废液
检测器 API 4000LC-MS/MS系统(Applied
Biosystems/MDS Sciex)
接口 APCI
极性(模式) 阳离子多反应监测(MRM)
帘气 所有分析物均为40psig
离子源气1 所有分析物均为65psig
接口温度 500℃
接口加热器 开
喷雾器电流 5μA
停留时间 150ms
探头位置 X＝5，Y＝3
碰撞活性
解离(CAD)气 所有分析物均为6psig
去簇电压 所有分析物均为100V
入口电压 所有分析物均为10V
碰撞能 氯氮平为30V而所有分析物为40V
碰撞池出口电压 所有分析物为15V
分析柱 Onyx Momolithic C-18，100×3.0mm，产品
目录号051020-10，Phenomenex.色谱柱#：
30
在线过滤器 0.5μm(产品目录号A-428，Upchurch
Scientific)
柱温 环境温度
流动相 A＝加入10mM AmF的95％水，pH 3(v/v)
和5％甲醇
B＝95％甲醇和加入10mMAmF的5％水，pH
3(v/v)
80％B和20％A
流速 1.0mL/min
运行模式 等度洗脱
洗针 50％的甲醇水溶液
分析时间 1min
换向阀 VICI，型号EHMA(Valco Instrument Co.
Inc.)
0至0.2min，柱流出液转换至废液
0.2至0.9min，柱流出液流向质谱
0.9至1.0min，柱流出液转换至废液
检测器 API 4000LC-MS/MS系统(Applied
Biosystems/MDS Sciex)
接口 APCI
极性(模式) 阳离子多反应监测(MRM)
帘气 所有分析物均为40psig
离子源气1 所有分析物均为65psig
接口温度 500℃
接口加热器 开
喷雾器电流 5μA
停留时间 150ms
探头位置 X＝5，Y＝3
碰撞活性
解离(CAD)气 所有分析物均为6psig
去簇电压 所有分析物均为100V
入口电压 所有分析物均为10V
碰撞能 氯氮平为30V而所有分析物为40V
碰撞池出口电压 所有分析物为15V
[0441] 表12a.分析物离子跃迁和保留时间总结表
[0442]
[0443]
[0444] m/z表示质荷比
[0445] 氯氮平的LC-MS/MS方法总结
[0446]分析物标识 氯氮平
校正范围 0.010-6.00μM
基质 终止的人肝微粒体反应混合物
内标(IS)标识 米安色林(250ng/mL)
HPLC Agilent 1100液相色谱，配备了真空脱
气器(型号G1322A)、二元泵(型号
G1312A)和孔板自动进样器(型号
G1367A)
进样体积 2.0μL
分析柱 Discovery HS F5，2.1×50mm，3.0μm
(产品目录号567500-U，Supelco)
在线过滤器 0.5μm(产品目录号A-428，Upchurch
Scientific)
柱温 环境温度
流动相 60％甲醇和加入10mM甲酸铵的40％
水，pH 3.0
流速 0.5mL/min
运行模式 等度
洗针 溶剂：流动相
清洗时间：1s
分析时间 6.0min
换向阀 VICI(型号EHMA，Valco Instrument
Co.Inc.)
0至2.8min，柱流出液转换至废液
2.9至5.8min，柱流出液流向质谱
5.9至6.0min，柱流出液转换至废液
检测器 API 4000LC-MS/MS系统(Applied
Biosystems/MDS Sciex)
接口 APCI
极性(模式) 阳离子多反应监测(MRM)
帘气 45psig，氮气
离子源气1 65psig，氮气
接口温度 500℃
接口加热器 开
喷雾器电流 1μA
停留时间 500ms
探头位置 X＝5，Y＝3
校正范围 0.010-6.00μM
基质 终止的人肝微粒体反应混合物
内标(IS)标识 米安色林(250ng/mL)
HPLC Agilent 1100液相色谱，配备了真空脱
气器(型号G1322A)、二元泵(型号
G1312A)和孔板自动进样器(型号
G1367A)
进样体积 2.0μL
分析柱 Discovery HS F5，2.1×50mm，3.0μm
(产品目录号567500-U，Supelco)
在线过滤器 0.5μm(产品目录号A-428，Upchurch
Scientific)
柱温 环境温度
流动相 60％甲醇和加入10mM甲酸铵的40％
水，pH 3.0
流速 0.5mL/min
运行模式 等度
洗针 溶剂：流动相
清洗时间：1s
分析时间 6.0min
换向阀 VICI(型号EHMA，Valco Instrument
Co.Inc.)
0至2.8min，柱流出液转换至废液
2.9至5.8min，柱流出液流向质谱
5.9至6.0min，柱流出液转换至废液
检测器 API 4000LC-MS/MS系统(Applied
Biosystems/MDS Sciex)
接口 APCI
极性(模式) 阳离子多反应监测(MRM)
帘气 45psig，氮气
离子源气1 65psig，氮气
接口温度 500℃
接口加热器 开
喷雾器电流 1μA
停留时间 500ms
探头位置 X＝5，Y＝3
[0447]碰撞活性
解离(CAD)气 6psig
去簇电压 分析物和IS均为100V
入口电压 分析物和IS均为10V
碰撞能 分析物和IS均为30V
碰撞池出口电压 分析物为15V，IS为6V
解离(CAD)气 6psig
去簇电压 分析物和IS均为100V
入口电压 分析物和IS均为10V
碰撞能 分析物和IS均为30V
碰撞池出口电压 分析物为15V，IS为6V
[0448] 表12b.分析物离子跃迁和保留时间总结表
[0449]
[0450] m/z表示质荷比
[0451] 结果与讨论
[0452] 生物分析方法确认和样本分析
[0453] 以上包括了用于鉴定终止的微粒体反应混合物中测试化合物的生物分析方法的详细总结。表13a中包含了样品分析的结果。对于方法确认和样本分析，所有验收标准均满足。
[0454] 代谢稳定性
[0455] 表12c中总结了与孵育时间有关的氯氮平和测试化合物(6a和6b)的平均浓度。在以下的附图中示出了这些数据(表示为相对于孵育时间的保留％)。由于已证明氯氮平口服后可以在人体中良好吸收(90-95％)，因此将其用作阳性对照，但是由于经过代谢从而导致绝对生物利用率为50％至60％。还已知氯氮平主要代谢为N-去甲基氯氮平和氯氮平N-氧化物，其中几种CYP亚型与它们的形成有关。
[0456] 与人肝微粒体孵育时，氯氮平的消失为NADPH-依赖型(表12c)。氯氮平从微粒体反应混合物中消失的估计的半衰期为354分钟，表明微粒体为代谢活性的。在孵育60分钟期间，测试化合物6b(图1)和18(图2)为代谢稳定的，表明这些化合物不是CYP或FMO酶氧化代谢的底物。6a估计的半衰期为132分钟(图1)。数据表明了两种对映异构体的代谢稳定性之间的显著差异。这一较短的半衰期可能对胰腺炎动物模型中所观察到的6a相对于6b的效力差异有作用(参见实施例16)。+
[0457] 表12c.与存在和不存在NADP 时在人肝微粒体中孵育的孵育时间有关的平均测试化合物的峰面积比，重复确定两次。
[0458]
[0459] a峰面积比为测试化合物的峰响应值与内标的峰响应值的比值。
[0460] 实施例15.6a和6b在预测神经病样疼痛状态的模型中的效力
[0461] 使用通过多种方法引起的预测抗痛觉过敏和抗异常性疼痛活性的标准动物模型评价本发明化合物治疗神经性疼痛的效力，随后将对所述多种方法进行详细说明。
[0462] (a)损伤引起的神经病样疼痛的Chung模型：在下图中说明了神经性疼痛的Chung脊神经结扎SNL模型(Chung Spinal NerveLigation SNL Model)测定的实验设计。根据Kim和Chung(Kim andChung，Pain 50：355-363，1992)说明的方法进行神经结扎损伤。该技术产生了神经性触物感痛的病征，包括触诱发痛、热痛觉过敏和患病爪的保护。用氟烷使大鼠麻醉，并暴露脊椎的L4至S2区域。暴露出L5和L6脊神经，小心分离并用4-0丝线紧紧地结扎DRG的远端。在确保体内平衡的稳定性后，缝合伤口，并使动物在各自的笼中恢复。除L5/L6脊神经未结扎外，以相同的方式制备假手术大鼠。使表现出运动缺乏症状的任何大鼠安乐死。手术介入后恢复一段时间，大鼠表现出对疼痛和正常非疼痛刺激的敏感性。
[0463] 根据发表的方法腹膜内注射一剂标准剂量(30mg/kg)后，5HT1D/1B/nNOS选择性化合物6b表现出明显的抗痛觉过敏作用(参见图3)，但6a仅表现出较弱的作用(参见图4)。向测试动物给予化合物6b而不给予6a也造成触觉性感觉过敏的逆转(分别参见图5和图
6)。在该神经性疼痛模型中观察到了化合物6的两种对映异构体之间的明显差异。
6)。在该神经性疼痛模型中观察到了化合物6的两种对映异构体之间的明显差异。
[0464] 实施例16.内脏痛的实验动物模型
[0465] 动物
[0466] 将体重150-200g的成年雄性Sprague Dawley大鼠(Harlan，Indianapolis，IN)保持在气候控制的房间中，喂食和喂水无限制，光周期为12小时(07:00小时光照)。所有步骤遵照国际疼痛研究协会(International Association for the Study of Pain)的原则和NIH对实验室动物处理和使用的指导。研究经过亚利桑那大学(University of Arizona)IACUC的批准。
[0467] 实验设计
[0468] 内脏痛模型
[0469] 在异荧烷麻醉(2-3升/分钟，4.0％/vol直至麻醉，然后在整个步骤中使用2.5％/vol)(Vera-Portocarrero等，2006)的情况下，通过尾静脉注射8mg/kg剂量的溶于100％乙醇的二丁基二氯化锡(DBTC，Aldrich，Milwaukee，WI，0.25cc)产生胰腺炎。对照动物只注射载体溶液(100％乙醇，0.25cc)。
[0470] 通过用丁酸钠溶液(1000mM)灌肠3天，每天2次引起了结肠超敏感性(Bourdu等，2005)。对于每次灌肠，将由P100聚乙烯管制成的导管置于距肛门7厘米的结肠中，并且动物接受1mL pH中性的丁酸钠。插入导管时应小心以避免损伤结肠壁。
[0471] 行为测量
[0472] 通过测量应用校准测痛丝(von Frey filament)所引起的撤回事件的数目定量胰腺炎模型中牵连的腹部超敏感性(通过腹部撤回、腹部区域的舔舐或全身撤回确定)。将大鼠置于Plexiglas盒内架高的精细纤维玻璃筛网上并在试验前适应30分钟。将4g测痛丝(vonFrey filament)从底部穿过筛网层应用到腹部区域表面上的不同位点。单次试验由该测痛丝的10次应用组成，测痛丝每10秒应用一次以使得动物停止任何反应并回到相对不活动的位置。每次试验中撤回事件的平均发生次数表示为对之前所述的10次应用的反应次数(Vera-Portocarrero等，2003)。
[0473] 通过对大鼠腰皮区应用弗莱毛(von Frey hair)定量结肠超敏感性模型中的牵连腰超敏感性(Bourdu等，2005)。在任何操作前将大鼠的腰皮区刮毛并在测试当天将大鼠放置在Plexiglas盒中适应30分钟。将从0.04至6g的直径逐渐增加的校准弗莱毛(von Freyhair)应用5次，每次1秒。机械阈值对应于弗莱毛(von Frey hair)以克为单位的作用力，其通过从丝的逃离行为引起随后的腰部皮肤起皱或不起皱。
[0474] 统计方法
[0475] 在Fishers最不显著差异事后检验(Fishers Least SignificanceDifference post-hoc test)后用双因素ANOVA检测每个实验组随时间的行为试验之间的显著差异。单因素ANOVA用于检测每个实验组内随时间的行为结果的显著差异性。线性回归分析用于检测效果的剂量依赖性。在p＜0.05的水平建立显著性。
[0476] 参考文献列表
[0477] Bourdu S，Dapoigny M，Chapuy E，Artigue F，Vasson MP，Dechelotte P，Bommelaer G，Eschalier A，Ardid D.Rectal instillation ofbutyrate provides a novel clinically relevant model of noninflammatorycolonic hypersensitivity in rats.Gastroenterology 2005；128：1996-2008.
[0478] Vera-Portocarrero LP，Xie JY，Kowal J，Ossipov MH，King T，Porreca F.Descending facilitation from the rostral ventromedialmedulla maintains visceral pain in rats with experimental pancreatitis.Gastroenterology 2006；130：2155-2164.
[0479] Sparmann G，Merkord J，Jaschke A，Nizze H，Jonas L，Lohr M，Liebe S，Emmrich J.Pancreatic fibrosis in experimental pancreatitisinduced by dibutyltin dichloride.Gastroenterology1997；112：1664-1672.
[0480] 18、6a和6b的动物模型试验结果
[0481] 图8和10显示了内脏痛的胰腺炎和IBS模型中18的效果，而图9和11显示了胰腺炎实验模型中对映异构体6b的效果。注意，对映异构体6a未逆转患有实验胰腺炎的大鼠中的触诱发痛，表明具有nNOS抑制活性和5HT1B/1D活性的化合物对内脏痛是优选的(图11)。这两种化合物均逆转与两种损伤有关的触诱发痛。因此，预期本发明化合物将对内脏痛治疗有用。
[0482] 实施例17.N-(3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(化合物19)的合成
[0483]
[0484] 3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-5-硝基-1H-吲哚：将5-硝基-1H-吲哚(0.67g，4.13mmol)、1-乙基哌啶-4-酮(1.094mL，8.26mmol)和吡咯烷(1.025mL，12.40mmol)在干甲醇(10mL)中的溶液回流48小时。使反应恢复至室温，用水稀释并将产物萃取至CH2Cl2(2×50mL)。将合并的CH2Cl2层用盐水清洗(20mL)并干燥(Na2SO4)。
蒸发溶剂，将粗品与异丙醇∶己烷(15mL，1∶7)一同搅拌，过滤掉黄色沉淀并干燥以获得3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-5-硝基-1H-吲哚(0.87g，78％)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.87(s，1H)，8.69(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，8.01(dd，1H，J ＝ 2.4，9.0Hz)，
7.65(s，1H)，7.55(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，6.18(s，1H)，3.16-3.12(m，2H)，2.64(t，2H，J ＝
5.1Hz)，2.54-2.42(m，4H，与DMSO峰合并)，1.70(t，3H，J＝7.2Hz)；ESI-MS(m/z，％)：
272(MH+，100)。
蒸发溶剂，将粗品与异丙醇∶己烷(15mL，1∶7)一同搅拌，过滤掉黄色沉淀并干燥以获得3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-5-硝基-1H-吲哚(0.87g，78％)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.87(s，1H)，8.69(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，8.01(dd，1H，J ＝ 2.4，9.0Hz)，
7.65(s，1H)，7.55(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，6.18(s，1H)，3.16-3.12(m，2H)，2.64(t，2H，J ＝
5.1Hz)，2.54-2.42(m，4H，与DMSO峰合并)，1.70(t，3H，J＝7.2Hz)；ESI-MS(m/z，％)：
272(MH+，100)。
[0485] 3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-胺：将3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-5-硝基-1H-吲哚(0.375g，1.382mmol)在干甲醇(10mL)中的悬液在室温下用雷尼镍(0.1g，0.351mmol)处理并随后再用水合肼(0.672mL，13.82mmol)处理。
将所得的混合物置于预热的油浴中并回流5分钟。(TLC基，2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，
5∶95)。使反应恢复至室温，通过硅藻土床过滤并用甲醇(3×5mL)清洗。蒸发合并的甲醇层并用快速柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，5∶95)纯化粗品以获得泡沫状的
3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-胺(0.33g，99％)。1H NMR(DMSO-d6)δ10.60(s，1H)，7.15(d，1H，J＝2.7Hz)，7.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.00(d，1H，J＝1.5Hz)，
6.48(dd，1H，J＝2.1，8.5Hz)，5.98(s，1H)，4.48(s，2H)，3.10-3.04(m，2H)，2.59(t，2H，J＝
5.4Hz)，2.54-2.39(m，4H，与DMSO的峰合并)，1.06(t，3H，J＝7.2Hz)；EI-MS(m/z，％)：
241(M+，100)。
将所得的混合物置于预热的油浴中并回流5分钟。(TLC基，2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，
5∶95)。使反应恢复至室温，通过硅藻土床过滤并用甲醇(3×5mL)清洗。蒸发合并的甲醇层并用快速柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，5∶95)纯化粗品以获得泡沫状的
3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-胺(0.33g，99％)。1H NMR(DMSO-d6)δ10.60(s，1H)，7.15(d，1H，J＝2.7Hz)，7.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.00(d，1H，J＝1.5Hz)，
6.48(dd，1H，J＝2.1，8.5Hz)，5.98(s，1H)，4.48(s，2H)，3.10-3.04(m，2H)，2.59(t，2H，J＝
5.4Hz)，2.54-2.39(m，4H，与DMSO的峰合并)，1.06(t，3H，J＝7.2Hz)；EI-MS(m/z，％)：
241(M+，100)。
[0486] N-(3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒：将3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-胺(0.32g，1.326mmol)在干乙醇(10mL)中的溶液在室温下用噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methyl thiophene-
2-carbimidothioatehydroiodide)(0.756g，2.65mmol)处理并搅拌过夜(18小时)。将该反应用饱和NaHCO3溶液(30mL)碱化并将产物萃取至CH2Cl2(2×25mL)。将合并的CH2Cl2层用盐水清洗(20mL)并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂并用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，
1∶9)纯化粗品以获得固体的N-(3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲
1
哚-5-基)噻吩-2-甲脒(0.37g，80％)。H NMR(DMSO-d6)δ10.94(s，1H)，7.71(d，1H，J＝3.3Hz)，7.59(s，1H，J＝5.1Hz)，7.31(dd，1H，J＝2.7，5.4Hz)，7.22(s，1H)，7.10(t，1H，J＝ 4.8Hz)，6.67(d，1H，J＝ 8.4Hz)，6.26(brs，2H)，6.05(s，1H)，3.10(brs，2H)，2.63(t，
2H，J＝5.1Hz)，2.54-2.40(m，4H，与DMSO的峰合并)，1.06(t，3H，J＝7.2Hz)；ESI-MS(m/+ +
z，％)：351(MH，37)，294(100)；C20H23N4S(MH)的ESI-HRMS计算值为：351.1637；观测值为：
351.1636。
2-carbimidothioatehydroiodide)(0.756g，2.65mmol)处理并搅拌过夜(18小时)。将该反应用饱和NaHCO3溶液(30mL)碱化并将产物萃取至CH2Cl2(2×25mL)。将合并的CH2Cl2层用盐水清洗(20mL)并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂并用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，
1∶9)纯化粗品以获得固体的N-(3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲
1
哚-5-基)噻吩-2-甲脒(0.37g，80％)。H NMR(DMSO-d6)δ10.94(s，1H)，7.71(d，1H，J＝3.3Hz)，7.59(s，1H，J＝5.1Hz)，7.31(dd，1H，J＝2.7，5.4Hz)，7.22(s，1H)，7.10(t，1H，J＝ 4.8Hz)，6.67(d，1H，J＝ 8.4Hz)，6.26(brs，2H)，6.05(s，1H)，3.10(brs，2H)，2.63(t，
2H，J＝5.1Hz)，2.54-2.40(m，4H，与DMSO的峰合并)，1.06(t，3H，J＝7.2Hz)；ESI-MS(m/+ +
z，％)：351(MH，37)，294(100)；C20H23N4S(MH)的ESI-HRMS计算值为：351.1637；观测值为：
351.1636。
[0487] N-(3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒二盐酸盐：将N-(3-(1-乙基-1，2，3N-(3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(0.35g，0.999mmol)在干甲醇(5mL)中的溶液在室温下用1N HCl乙醚溶液(2.99mL，2.99mmol)处理并搅拌15分钟。蒸发溶剂并在真空下干燥粗品以获得固体的N-(3-(1-乙基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒的二盐酸盐。1
H NMR(DMSO-d6)δ11.74(s，1H)，11.52(s，1H)，10.98(brs，1H)，9.68(s，1H)，8.62(s，1H)，
8.22-8.16(m，2H)，7.93(s，1H)，7.68(d，1H，J＝2.1Hz)，7.59(d，1H，J＝8.7Hz)，7.39(t，
1H，J＝4.2Hz)，7.18(d，1H，J＝8.7Hz)，6.16(s，1H)，3.97-3.92(m，1H)，3.75-3.59(m，2H)，
3.27-3.16(m，3H)，2.99-2.93(m，1H)，2.81-2.75(m，1H)，1.32(t，3H，J＝7.2Hz)。
H NMR(DMSO-d6)δ11.74(s，1H)，11.52(s，1H)，10.98(brs，1H)，9.68(s，1H)，8.62(s，1H)，
8.22-8.16(m，2H)，7.93(s，1H)，7.68(d，1H，J＝2.1Hz)，7.59(d，1H，J＝8.7Hz)，7.39(t，
1H，J＝4.2Hz)，7.18(d，1H，J＝8.7Hz)，6.16(s，1H)，3.97-3.92(m，1H)，3.75-3.59(m，2H)，
3.27-3.16(m，3H)，2.99-2.93(m，1H)，2.81-2.75(m，1H)，1.32(t，3H，J＝7.2Hz)。
[0488] 在如上所述进行的实验中，如表13所示，化合物19相对于eNOS表现出对nNOS的选择性抑制。
[0489] 表13
[0490]
[0491] 实施例18.N-(3-((1S，3R)-3-(甲基氨基)环己基-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(化合物(±)-20)的合成
[0492]
[0493] 3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酮：向5-硝基吲哚(4.00g，25.61mmol)在干乙腈(5.00mL)的溶液中加入环己-2-烯酮(7.40mL，76.83mmol)和Bi(NO3)3(0.12g，0.26mmol)并将该混合物在室温下搅拌过夜。然后蒸发溶剂并用柱色谱(50％己
1
烷∶50％乙酸)纯化粗品以获得黄色固体的标题化合物(2.70g，41％)。H-NMR(CDCl3)δ1.81-2.09(m，3H)，2.26-2.34(m，1H)，2.37-2.55(m，2H)，2.65(dd，1H，J＝9.9，12.9Hz)，
2.77-2.85(m，1H)，3.47-3.56(m，1H)，7.15(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，7.41(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，+
8.12(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，8.51(s，1H)，8.59(d，1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z，％)258(M，
100)。
1
烷∶50％乙酸)纯化粗品以获得黄色固体的标题化合物(2.70g，41％)。H-NMR(CDCl3)δ1.81-2.09(m，3H)，2.26-2.34(m，1H)，2.37-2.55(m，2H)，2.65(dd，1H，J＝9.9，12.9Hz)，
2.77-2.85(m，1H)，3.47-3.56(m，1H)，7.15(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，7.41(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，+
8.12(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，8.51(s，1H)，8.59(d，1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z，％)258(M，
100)。
[0494] N-甲基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺(反式对映异构体的混合物)和N-甲基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺(顺式对映异构体的混合物)：向3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酮(1.20g，4.65mmol)在1，2-二氯乙烷(50mL)中的溶液中加入乙酸(0.28mL，4.65mmol)、MeNH2·HCl(0.38g，4.65mmol)和NaBH(OAc)3(1.50g，7.00mmol)并将该混合物置于室温下搅拌过夜。用2N NaOH(10mL)萃取反应混合物并用二氯甲烷(2×10mL)清洗；分离二氯甲烷层并蒸发。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9)纯化粗品以获得黄色固体的两种非对映体。使用COSY和NOESY光谱技术确定两种非对映体的立体化学。
[0495] 第一个洗脱的化合物(反式对映异构体的混合物)：(0.58g，46％)；1
H-NMR(CDCl3)δ1.49-1.65(m，3H)，1.69-1.88(m，3H)，2.04-2.08(m，2H)，2.41(s，3H)，
2.87-2.97(m，1H)，3.26-3.37(m，1H)，7.12(s，1H)，7.36(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，8.09(dd，1H，J＝ 2.1，9.0Hz)，8.44(s，1H，NH)，8.63(d，1H，J ＝ 2.1Hz)；EI-MS(m/z， ％ )242(100)，
273(10)；2DNOESY：Ha(δ3.26-3.37)和Hc(δ2.87-2.97)不相关；Hc和Hd之间相关；2D COSY：Ha和Hc彼此不偶联。
H-NMR(CDCl3)δ1.49-1.65(m，3H)，1.69-1.88(m，3H)，2.04-2.08(m，2H)，2.41(s，3H)，
2.87-2.97(m，1H)，3.26-3.37(m，1H)，7.12(s，1H)，7.36(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，8.09(dd，1H，J＝ 2.1，9.0Hz)，8.44(s，1H，NH)，8.63(d，1H，J ＝ 2.1Hz)；EI-MS(m/z， ％ )242(100)，
273(10)；2DNOESY：Ha(δ3.26-3.37)和Hc(δ2.87-2.97)不相关；Hc和Hd之间相关；2D COSY：Ha和Hc彼此不偶联。
[0496] 第二个洗脱的产物(顺式对映异构体的混合物)：(0.21g，16％)；1H-NMR(CDCl3)δ1.26-1.38(m，2H)，1.45-1.57(m，2H)，1.89-1.95(m，1H)，2.01-2.08(m，1H)，2.13-2.17(m，1H)，2.33-2.44(m，1H)，2.56(s，3H)，2.75-2.93(m，2H)，7.06(s，1H)，7.35(d，
1H，J＝9.0Hz)，8.06(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，8.54(d，1H，J＝2.4Hz)，8.93(s，1H，NH)；
EI-MS(m/z，％)230(100)，273(30)；2D NOESY：Ha(δ2.75-2.93)和Hc(δ2.33-2.44)之间强相关；Hc和Hd之间相关；2D COSY：Ha和Hc彼此不偶联。
1H，J＝9.0Hz)，8.06(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，8.54(d，1H，J＝2.4Hz)，8.93(s，1H，NH)；
EI-MS(m/z，％)230(100)，273(30)；2D NOESY：Ha(δ2.75-2.93)和Hc(δ2.33-2.44)之间强相关；Hc和Hd之间相关；2D COSY：Ha和Hc彼此不偶联。
[0497] 叔-丁基甲基((1R，3S)-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(顺式对映异构体的混合物)：向N-甲基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺
(0.40g，1.46mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入(Boc)2O(0.35g，1.61mmol)和三乙基胺(0.40mL，2.92mmol)并将所得的混合物置于室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并用柱色谱(EtOAc∶己烷，1∶1)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.40g，73％)。
1
H-NMR(CDCl3)δ1.34-1.44(m，1H)，1.49(s，9H)，1.57-1.69(m，3H)，1.78-1.86(m，1H)，
1.92-2.00(m，1H)，2.03-2.10(m，2H)，2.78(s，3H)，2.95-3.06(m，1H)，3.96-4.27(m，1H)，
7.11(d，1H，J＝1.8Hz)，7.38(d，1H，J＝9.0Hz)，8.10(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，8.37(s，1H，NH)，8.61(d，1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z，％)，242(100)，373(20)。
(0.40g，1.46mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入(Boc)2O(0.35g，1.61mmol)和三乙基胺(0.40mL，2.92mmol)并将所得的混合物置于室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并用柱色谱(EtOAc∶己烷，1∶1)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.40g，73％)。
1
H-NMR(CDCl3)δ1.34-1.44(m，1H)，1.49(s，9H)，1.57-1.69(m，3H)，1.78-1.86(m，1H)，
1.92-2.00(m，1H)，2.03-2.10(m，2H)，2.78(s，3H)，2.95-3.06(m，1H)，3.96-4.27(m，1H)，
7.11(d，1H，J＝1.8Hz)，7.38(d，1H，J＝9.0Hz)，8.10(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，8.37(s，1H，NH)，8.61(d，1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z，％)，242(100)，373(20)。
[0498] 叔-丁基-3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环己基(甲基)氨基甲酸酯(顺式对映异构体的混合物)：向叔-丁基甲基-(3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(0.38g，1.02mmol)在干甲醇(10mL)中的溶液中加入Ra-Ni(0.1g，与水混合的浆状物)和水合肼(0.50mL，10.20mmol)。将所得的混合物浸于预热的油浴中并回流15分钟或直到溶液变澄清。使反应冷却并通过硅藻土过滤，用甲醇(20mL)清洗并蒸发溶剂。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98)纯化粗品以得到浅棕色固体的标题化合物(0.34g，
97％)。
97％)。
[0499] 1H-NMR(CDCl3)δ1.31-1.66(m，4H)，1.48(s，9H)，1.75-1.80(m，1H)，1.89-1.96(m，1H)，2.03-2.11(m，2H)，2.74(s，3H)，2.84-2.93(m，1H)，3.52(s，2H，NH)，4.13-4.26(m，
1H)，6.65(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.88(d，1H，J＝2.4Hz)，6.95(s，1H)，7.15(d，1H，J＝
8.4Hz)，7.72(s，1H，NH)；EI-MS(m/z，％)，343(100)。
1H)，6.65(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.88(d，1H，J＝2.4Hz)，6.95(s，1H)，7.15(d，1H，J＝
8.4Hz)，7.72(s，1H，NH)；EI-MS(m/z，％)，343(100)。
[0500] 叔-丁基甲基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(顺式对映异构体的混合物)：向叔-丁基-3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环己基(甲基)氨基甲酸酯(0.32g，0.93mmol)在干乙醇(25mL)中的溶液中加入噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methylthiophene-2-carbimidothioate hydroiodide)(0.53g，1.86mmol)并将该反应置于室温下搅拌48小时。然后蒸发溶剂，并将该混合物溶于二氯甲烷(20mL)并用2N NaOH(10mL)清洗。萃取并蒸发有机层。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98至
1
5∶95)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.32g，75％)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.38(s，
9H)，1.46-1.68(m，5H)，1.84-2.00(m，5H)，2.69(s，3H)，2.79-2.87(m，1H)，3.78-4.09(m，
1H)，6.20(s，2H，NH)，6.62(dd，1H，J＝1.8，8.4Hz)，6.98(s，1H)7.04(s，1H)，7.09(dd，1H，J＝3.6，3.6Hz)，7.26(d，1H，J＝8.4Hz)，7.58(d，1H，J＝4.8Hz)，7.70(d，1H，J＝3.3Hz)，+
10.59(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)453(MNa，100)。
1
5∶95)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.32g，75％)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.38(s，
9H)，1.46-1.68(m，5H)，1.84-2.00(m，5H)，2.69(s，3H)，2.79-2.87(m，1H)，3.78-4.09(m，
1H)，6.20(s，2H，NH)，6.62(dd，1H，J＝1.8，8.4Hz)，6.98(s，1H)7.04(s，1H)，7.09(dd，1H，J＝3.6，3.6Hz)，7.26(d，1H，J＝8.4Hz)，7.58(d，1H，J＝4.8Hz)，7.70(d，1H，J＝3.3Hz)，+
10.59(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)453(MNa，100)。
[0501] N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒：将叔-丁基甲基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(0.30g，0.66mmol)用20％三氟乙酸(TFA)的二氯甲烷溶液(31mL)在0℃进行处理，并将该混合物置于0℃搅拌2小时。然后用10％的NH4OH中和该溶液，使有机层分离并蒸发。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶
1
液∶CH2Cl2，1∶4)纯化粗品以得到黄色固体的标题产物(0.22g，定量)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.28-1.61(m，4H)，1.84-2.01(m，2H)，2.08-2.11(m，1H)，2.27-2.35(m，1H)，2.58(s，3H)，
2.86-2.94(m，1H)，3.08-3.25(m，1H)，7.10(d，1H，J ＝ 8.4Hz)，7.28(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，
7.39(假t，1H，J＝4.5Hz)，7.52(d，1H，J＝8.4Hz)，7.65(s，1H)，8.12(d，1H，J＝3.6Hz)，
8.16(d，1H，J＝4.5Hz)，8.58(s，2H，NH)，9.61(s，1H)；ESI-MS(m/z，％)353(100)，C20H25N4S的ESI-HRMS计算值为：353.1794，测量值为353.1792。
1
液∶CH2Cl2，1∶4)纯化粗品以得到黄色固体的标题产物(0.22g，定量)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.28-1.61(m，4H)，1.84-2.01(m，2H)，2.08-2.11(m，1H)，2.27-2.35(m，1H)，2.58(s，3H)，
2.86-2.94(m，1H)，3.08-3.25(m，1H)，7.10(d，1H，J ＝ 8.4Hz)，7.28(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，
7.39(假t，1H，J＝4.5Hz)，7.52(d，1H，J＝8.4Hz)，7.65(s，1H)，8.12(d，1H，J＝3.6Hz)，
8.16(d，1H，J＝4.5Hz)，8.58(s，2H，NH)，9.61(s，1H)；ESI-MS(m/z，％)353(100)，C20H25N4S的ESI-HRMS计算值为：353.1794，测量值为353.1792。
[0502] 实施例19.N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒二盐酸盐[(+)-和(-)-异构体]的合成(化合物20a和20b)
[0503]
[0504] N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒：有关完整的详细实验内容和光谱数据，请参见实施例18(化合物(±)-20)。
[0505] 手性分离：将N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(0.95g，2.70mmol)进行手性HPLC(CHIRALPAK AD-H)分离。流速15mL/min，15％乙醇∶85％己烷+0.2％DEA。最大上样量为270mg。
[0506] 第一洗脱的对映异构体在15分钟开始洗脱，[α]D＝+23.77(4.50mg溶于2mL甲醇)，通过HPLC为88％ee。第二洗脱的对映异构体在28分钟开始洗脱[α]D
＝-28.64(4.80mg溶于2mL甲醇)，通过HPLC为100％ee以获得160.00mg的各个对映异构体。
＝-28.64(4.80mg溶于2mL甲醇)，通过HPLC为100％ee以获得160.00mg的各个对映异构体。
[0507] N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒二盐酸盐[(+)-顺式对映异构体]：将N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒[(+)-顺式对映异构体](0.16g，0.45mmol)溶于最少量的甲醇中，并向其中加入盐酸(1.00mL，1.00mmol，1M的二乙醚溶液)。将该混合物置于室温下搅拌1小时。蒸发溶剂并
1
将所得的固体在真空下干燥以得到浅黄色固体的产物(0.16g，97％)。H-NMR(MeOH-d4)δ1.30-1.67(m，4H)，1.93-2.24(m，3H)，2.47-2.51(m，1H)，2.73(s，3H)，2.96-309(m，1H)，
7.16(d，1H，J ＝ 8.7Hz)，7.25(s，1H)，7.38(dd，1H，J ＝ 4.5，8.4Hz)，7.56(d，1H，J ＝+
8.4Hz)，7.73(s，1H)，8.05-8.07(m，2H)；ESI-MS(m/z，％)322(100)，353(MH，游离碱，50)，+
C16H25N4O5(MH，游离碱)的ESI-HRMS计算值为353.1819，测量值为：353.1807。
1
将所得的固体在真空下干燥以得到浅黄色固体的产物(0.16g，97％)。H-NMR(MeOH-d4)δ1.30-1.67(m，4H)，1.93-2.24(m，3H)，2.47-2.51(m，1H)，2.73(s，3H)，2.96-309(m，1H)，
7.16(d，1H，J ＝ 8.7Hz)，7.25(s，1H)，7.38(dd，1H，J ＝ 4.5，8.4Hz)，7.56(d，1H，J ＝+
8.4Hz)，7.73(s，1H)，8.05-8.07(m，2H)；ESI-MS(m/z，％)322(100)，353(MH，游离碱，50)，+
C16H25N4O5(MH，游离碱)的ESI-HRMS计算值为353.1819，测量值为：353.1807。
[0508] N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒二盐酸盐[(-)-顺式对映异构体]：将N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒[(-)-顺式对映异构体](0.16g，0.45mmol)溶于最少量的甲醇中，并向其中加入盐酸(1.00mL，1.00mmol，1M的二乙醚溶液)。将该混合物置于室温下搅拌1小时，然后蒸发溶
1
剂并将该固体在真空下干燥以得到浅黄色固体的产物(0.16g，97％)。H-NMR(MeOH-d4)δ1.27-1.71(m，5H)，1.99-2.33(m，3H)，2.47-2.52(m，1H)，2.72(s，3H)，2.96-3.09(m，1H)，
7.16(dd，1H，J＝2.1，8.7Hz)，7.25(s，1H)，7.38(dd，1H，J＝4.2，4.8Hz)，7.56(d，1H，J＝+
8.7Hz)，7.73(d，1H，J＝1.8Hz)，8.05-8.07(m，2H)；ESI-MS(m/z，％)322(100)，353(MH，游+
离碱，50)，C16H25N4O5(MH，游离碱)的ESI-HRMS计算值为：353.1819，测量值为：353.1809。
1
剂并将该固体在真空下干燥以得到浅黄色固体的产物(0.16g，97％)。H-NMR(MeOH-d4)δ1.27-1.71(m，5H)，1.99-2.33(m，3H)，2.47-2.52(m，1H)，2.72(s，3H)，2.96-3.09(m，1H)，
7.16(dd，1H，J＝2.1，8.7Hz)，7.25(s，1H)，7.38(dd，1H，J＝4.2，4.8Hz)，7.56(d，1H，J＝+
8.7Hz)，7.73(d，1H，J＝1.8Hz)，8.05-8.07(m，2H)；ESI-MS(m/z，％)322(100)，353(MH，游+
离碱，50)，C16H25N4O5(MH，游离碱)的ESI-HRMS计算值为：353.1819，测量值为：353.1809。
[0509] 在如上所述进行的实验中，化合物(±)-20、20a和20b相对于eNOS表现出对nNOS的选择性抑制，并且还表现出抑制5HT 1B和1D的活性，如以下在表14中所示。
[0510] 表14
[0511]
[0512]
[0513] 实施例20.N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(反式对映异构体的混合物)(化合物21)的合成
[0514]
[0515] N-甲基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺(反式对映异构体的混合物)：有关完整的详细实验内容和光谱数据，请参见实施例19。
[0516] 叔-丁基甲基(3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(反式对映异构体的混合物)：向N-甲基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺(0.55g，2.0mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入(Boc)2O(0.48g，2.21mmol)和三乙胺(0.56mL，4.10mmol)并将所得的混合物置于室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并用柱色谱(EtOAc∶己烷，1∶1)纯化
1
粗品以得到黄色固体的化合物(0.73g，定量)。H-NMR(CDCl3)δ1.43(s，9H)，1.64-1.81(m，
3H)，1.86-1.98(m，1H)，1.49-1.57(m，2H)，2.09-2.18(m，2H)，2.78(s，3H)，3.57-3.63(m，
1H)，4.35-4.52(m，1H)，7.26(s，1H)，7.35(d，1H，J＝9.0Hz)，8.08(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，+
8.50(s，1H，NH)，8.57(d，1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z，％)299(M，100)。
1
粗品以得到黄色固体的化合物(0.73g，定量)。H-NMR(CDCl3)δ1.43(s，9H)，1.64-1.81(m，
3H)，1.86-1.98(m，1H)，1.49-1.57(m，2H)，2.09-2.18(m，2H)，2.78(s，3H)，3.57-3.63(m，
1H)，4.35-4.52(m，1H)，7.26(s，1H)，7.35(d，1H，J＝9.0Hz)，8.08(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，+
8.50(s，1H，NH)，8.57(d，1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z，％)299(M，100)。
[0517] 叔-丁基3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环己基(甲基)氨基甲酸酯(反式对映异构体的混合物)向叔-丁基甲基(3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯
(0.70g，1.87mmol)在干甲醇(15mL)中的溶液中加入雷尼镍(0.1g，与水混合的浆状物)和水合肼(1.00mL，18.70mmol)。将所得的混合物浸于预热的油浴中并回流15分钟或直到溶液变澄清。使反应冷却并通过硅藻土过滤，用甲醇(20mL)清洗并蒸发溶剂。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98)纯化粗品以得到浅棕色固体的标题化合物(0.60g，
92％)。
(0.70g，1.87mmol)在干甲醇(15mL)中的溶液中加入雷尼镍(0.1g，与水混合的浆状物)和水合肼(1.00mL，18.70mmol)。将所得的混合物浸于预热的油浴中并回流15分钟或直到溶液变澄清。使反应冷却并通过硅藻土过滤，用甲醇(20mL)清洗并蒸发溶剂。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98)纯化粗品以得到浅棕色固体的标题化合物(0.60g，
92％)。
[0518] 1H-NMR(CDCl3)δ1.42(s，9H)，1.46-1.72(m，6H)，1.88(ddd，1H，J ＝ 5.4，12.3，24.9Hz)，2.05-2.16(m，2H)，2.76(s，3H)，3.50(s，2H，NH)，4.36-4.51(m，1H)，6.64(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.89(d，1H，J＝2.1Hz)，7.16(d，1H，J＝8.4Hz)，7.28(s，1H)，7.76(s，1H，+
NH)；EI-MS(m/z，％)343(M，70)，212(100)。
NH)；EI-MS(m/z，％)343(M，70)，212(100)。
[0519] 叔-丁基甲基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(反式对映异构体的混合物)。向叔-丁基3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环己基(甲
基)氨基甲酸酯(0.57g，1.66mmol)在干乙醇(25mL)中的溶液中加入噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methylthiophene-2-carbimidothioate hydroiodide)(0.75g，
3.32mmol)并将该反应置于室温下搅拌48小时。然后蒸发溶剂，将该混合物溶于二氯甲烷(20mL)并用2N NaOH(10mL)清洗。萃取并蒸发有机层。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98至5∶95)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.62g，81％)。
1
H-NMR(DMSO-d6)δ1.35(s，9H)，1.42-1.71(m，5H)，1.88-1.93(m，2H)，1.98-2.04(m，1H)，
2.69(s，3H)，3.40-3.53(m，1H)，4.24-4.27(m，1H)，6.22(s，2H，NH)，6.64(dd，1H，J＝ 1.8，
8.4Hz)，6.93(s，1H)，7.09(dd，1H，J＝3.6，5.1Hz)，7.28(d，2H，J＝8.4Hz)，7.58(d，1H，J+
＝4.5Hz)，7.70(d，1H，J＝3.6Hz)，10.68(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)453(MNa，100)。
基)氨基甲酸酯(0.57g，1.66mmol)在干乙醇(25mL)中的溶液中加入噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methylthiophene-2-carbimidothioate hydroiodide)(0.75g，
3.32mmol)并将该反应置于室温下搅拌48小时。然后蒸发溶剂，将该混合物溶于二氯甲烷(20mL)并用2N NaOH(10mL)清洗。萃取并蒸发有机层。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98至5∶95)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.62g，81％)。
1
H-NMR(DMSO-d6)δ1.35(s，9H)，1.42-1.71(m，5H)，1.88-1.93(m，2H)，1.98-2.04(m，1H)，
2.69(s，3H)，3.40-3.53(m，1H)，4.24-4.27(m，1H)，6.22(s，2H，NH)，6.64(dd，1H，J＝ 1.8，
8.4Hz)，6.93(s，1H)，7.09(dd，1H，J＝3.6，5.1Hz)，7.28(d，2H，J＝8.4Hz)，7.58(d，1H，J+
＝4.5Hz)，7.70(d，1H，J＝3.6Hz)，10.68(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)453(MNa，100)。
[0520] N-(3-(3-(甲基氨基)环己基)-1-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(反式对映异构体的混合物)。将叔-丁基甲基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环己基)
氨基甲酸酯(0.60g，0.13mmol)用20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(31mL)在0℃进行处理并将该混合物置于0℃搅拌2小时。然后用10％的NH4OH中和该溶液，使有机层分离并蒸发。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶4)纯化粗产物以得到黄色固体的最终产
1
物(0.45g，定量)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.51-1.60(m，3H)，1.69-1.77(m，3H)，1.83-1.91(m，
1H)，1.96-2.07(m，1H)，2.40(s，3H)，3.24-3.51(m，3H)，6.20(brs，2H，NH)，6.63(d，1H，J＝
10.2Hz)，7.02(d，2H，J＝10.4Hz)，7.09(dd，1H，J＝3.6，4.8Hz)，7.58(d，1H，J＝5.1Hz)，+
7.71(d，1H，J ＝ 3.3Hz)，10.59(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z， ％ )353(MH，80)，322(100)，+ +
C20H25N4S(MH)的ESI-HRMS(MH)计算值为：353.1794，测量值为：353.1812。
氨基甲酸酯(0.60g，0.13mmol)用20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(31mL)在0℃进行处理并将该混合物置于0℃搅拌2小时。然后用10％的NH4OH中和该溶液，使有机层分离并蒸发。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶4)纯化粗产物以得到黄色固体的最终产
1
物(0.45g，定量)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.51-1.60(m，3H)，1.69-1.77(m，3H)，1.83-1.91(m，
1H)，1.96-2.07(m，1H)，2.40(s，3H)，3.24-3.51(m，3H)，6.20(brs，2H，NH)，6.63(d，1H，J＝
10.2Hz)，7.02(d，2H，J＝10.4Hz)，7.09(dd，1H，J＝3.6，4.8Hz)，7.58(d，1H，J＝5.1Hz)，+
7.71(d，1H，J ＝ 3.3Hz)，10.59(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z， ％ )353(MH，80)，322(100)，+ +
C20H25N4S(MH)的ESI-HRMS(MH)计算值为：353.1794，测量值为：353.1812。
[0521] 实施例21.N-(3-(3-(乙胺基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(反式对映异构体的混合物)，(化合物22)的合成
[0522]
[0523] 3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酮：有关完整的详细实验内容，请参见实施例19。
[0524] N-乙基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺((±)-反式)和N-乙基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺((±)-顺式)。向3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酮(1.20g，4.65mmol)在1，2-二氯乙烷(50mL)中的溶液中加入乙酸(0.28mL，4.65mmol)、EtNH2·HCl(0.38g，4.65mmol)和NaBH(OAc)3(1.50g，7.00mmol)并将该混合物置于室温下搅拌过夜。用2N NaOH(10mL)萃取反应混合物并用二氯甲烷(2×10mL)清洗，使二氯甲烷层分离并蒸发。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9)纯化粗品以获得黄色固体的两种非对映体。
[0525] 第一洗脱异构体(反式对映异构体的混合物)(0.70g，52％)：1H-NMR(CDCl3)δ1.17(t，3H，J ＝ 8.4Hz)，1.55-1.70(m，4H)，1.74-1.82(m，2H)，2.01-2.07(m，2H)，2.70(q，2H，J ＝ 7.2，7.2Hz)，3.01-3.06(m，1H)，3.24-3.42(m，1H)，7.12(d，1H，J ＝
2.1Hz)，7.37(d，1H，J＝ 9.0Hz)，8.09(dd，1H，J＝ 2.1，9.0Hz)，8.34(s，1H，NH)，8.64(d，+
1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z， ％)287(M，10)，242(100)；2D NOESY：Ha(δ3.24-3.42) 和Hc(δ3.01-3.06)弱相关；Hc和Hd之间相关；2D COSY：Ha和Hc彼此不偶联。
2.1Hz)，7.37(d，1H，J＝ 9.0Hz)，8.09(dd，1H，J＝ 2.1，9.0Hz)，8.34(s，1H，NH)，8.64(d，+
1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z， ％)287(M，10)，242(100)；2D NOESY：Ha(δ3.24-3.42) 和Hc(δ3.01-3.06)弱相关；Hc和Hd之间相关；2D COSY：Ha和Hc彼此不偶联。
[0526] 第二洗脱异构体(顺式对映异构体的混合物)(0.21g，16％)：1H-NMR(CDCl3)δ1.14(t，3H)，1.29-1.44(m，3H)，1.47-1.63(m，2H)，1.84-1.97(m，1H)，2.04-2.11(m，2H)，2.28-2.32(m，1H)，2.75(q，2H，J ＝ 7.2，7.2Hz)，2.89-3.00(m，1H)，7.10(d，1H，J ＝
1.8Hz)，7.37(d，1H，J＝ 9.0Hz)，8.10(dd，1H，J＝ 2.1，9.0Hz)，8.37(s，1H，NH)，8.61(d，+
1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z， ％)287(M，15)，244(100)；2D NOESY：Ha(δ2.89-3.00) 和Hc(δ2.28-2.32)强相关；Hc和Hd之间相关；2D COSY：Ha和Hc彼此不偶联。
1.8Hz)，7.37(d，1H，J＝ 9.0Hz)，8.10(dd，1H，J＝ 2.1，9.0Hz)，8.37(s，1H，NH)，8.61(d，+
1H，J＝2.1Hz)；EI-MS(m/z， ％)287(M，15)，244(100)；2D NOESY：Ha(δ2.89-3.00) 和Hc(δ2.28-2.32)强相关；Hc和Hd之间相关；2D COSY：Ha和Hc彼此不偶联。
[0527] 叔-丁基乙基(3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(反式对映异构体的混合物)。向N-乙基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺(0.67g，2.36mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入(Boc)2O(0.57g，2.60mmol)和三乙胺(0.66mL，4.74mmol)并将所得的混合物置于室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并用柱色谱(50％己烷∶50％EtOAc)
1
纯化粗品以得到黄色固体的化合物(0.72g，78％)。H-NMR(CDCl3)δ1.14(t，3H，J＝
6.9Hz)，1.45-1.49(m，9H，3H)，1.62-1.79(m，3H)，1.86-1.96(m，1H)，2.07-2.17(m，2H)，
3.07-3.28(m，2H)，3.57-3.61(m，1H)，7.26(s，1H)，7.35(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，7.63(s，1H)，+
8.08(dd，1H，J＝9.0，2.1Hz)，8.57(d，1H，J＝2.1Hz)；ESI-MS(m/z，％)410(MNa，50)，
288(100)。
1
纯化粗品以得到黄色固体的化合物(0.72g，78％)。H-NMR(CDCl3)δ1.14(t，3H，J＝
6.9Hz)，1.45-1.49(m，9H，3H)，1.62-1.79(m，3H)，1.86-1.96(m，1H)，2.07-2.17(m，2H)，
3.07-3.28(m，2H)，3.57-3.61(m，1H)，7.26(s，1H)，7.35(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，7.63(s，1H)，+
8.08(dd，1H，J＝9.0，2.1Hz)，8.57(d，1H，J＝2.1Hz)；ESI-MS(m/z，％)410(MNa，50)，
288(100)。
[0528] 叔-丁基3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环己基(乙基)氨基甲酸酯(反式对映异构体的混合物)。向叔-丁基乙基(3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(0.70g，1.81mmol)在干甲醇(15mL)中的溶液中加入雷尼镍(0.1g，与水混合的浆状物)和水合肼(0.90mL，18.10mmol)。将所得的混合物浸于预热的油浴中并回流15分钟或直至溶液变澄清。使反应冷却并通过硅藻土过滤，用甲醇(20mL)清洗并蒸发溶剂。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98)纯化粗品以得到褐色固体的标题化合物(0.64g，定量)。
[0529] 1H-NMR(CDCl3)δ1.12(t，3H，J ＝ 6.8Hz)，1.45(s，9H)，1.53-1.69(m，3H)，1.71-1.79(m 1H)，1.82-1.92(m，1H)，2.07-2.17(m，2H)，3.06-3.24(m，2H)，3.43-3.56(m，
1H)，4.43(s，1H)，6.64(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.89(d，1H，J＝2.1Hz)，7.15(d，1H，J＝+
8.4Hz)，7.26(s，1H)，7.33(s，1H)，7.82(s，1H)；EI-MS(m/z，％)357(M，70)，212(100)。
1H)，4.43(s，1H)，6.64(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.89(d，1H，J＝2.1Hz)，7.15(d，1H，J＝+
8.4Hz)，7.26(s，1H)，7.33(s，1H)，7.82(s，1H)；EI-MS(m/z，％)357(M，70)，212(100)。
[0530] 叔-丁基乙基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(反式对映异构体的混合物)。向叔-丁基3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环己基(乙基)氨基甲酸酯(0.62g，1.73mmol)在干乙醇(25mL)中的溶液中加入噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methylthiophene-2-carbimidothioate hydroiodide)(1.00g，3.47mmol)并将该反应置于室温下搅拌48小时。然后蒸发溶剂，将该混合物溶于二氯甲烷(20mL)并用
2N NaOH(10mL)清洗。萃取并蒸发有机层。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98至5∶95)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.80g，定量)。
2N NaOH(10mL)清洗。萃取并蒸发有机层。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98至5∶95)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.80g，定量)。
[0531] 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.04(t，3H，J ＝ 6.9Hz)，1.36(s，9H)，1.44-1.68(m，5H)，1.84-2.04(m，3H)，3.05-3.20(m，2H)，3.42-3.53(m，1H)，4.19-4.26(m，1H)，6.21(s，2H)，
6.64(dd，1H，J ＝ 1.8，8.4Hz)，6.92(s，1H)，7.09(dd，1H，J ＝ 3.6，5.1Hz)，7.26(s，1H)，
7.29(s，1H)，7.58(d，1H，J ＝ 5.1Hz)，7.70(d，1H，J ＝ 3.9Hz)，10.67(s，1H)。ESI-MS(m/+
z，％)467(MH，100)。
6.64(dd，1H，J ＝ 1.8，8.4Hz)，6.92(s，1H)，7.09(dd，1H，J ＝ 3.6，5.1Hz)，7.26(s，1H)，
7.29(s，1H)，7.58(d，1H，J ＝ 5.1Hz)，7.70(d，1H，J ＝ 3.9Hz)，10.67(s，1H)。ESI-MS(m/+
z，％)467(MH，100)。
[0532] N-(3-(3-(乙胺基)环己基)-1-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(反式对映异构体的混合物)。将叔-丁基乙基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(0.75g，1.61mmol)用20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(31mL)在0℃进行处理并将该混合物置于0℃搅拌2小时。然后用10％的NH4OH溶液中和该溶液，使有机层分离并蒸发。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶4)纯化粗产物以得到黄色固体的最终产物(0.50g，1
85％)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.05(t，3H，J＝6.9Hz)，1.44-1.51(m，3H)，1.58-1.82(m，3H)，
1.89-1.97(m，2H)，2.58(q，2H，J ＝ 7.2Hz)，2.85-2.99(m，1H)，3.08-3.23(m，1H)，6.19(s，
2H)，6.62(d，1H，J＝8.4Hz)，6.98-7.00(m，2H)，7.09(dd，1H，J＝3.9，5.1Hz)，7.26(d，1H，J ＝ 8.4Hz)，7.58(d，1H，J ＝ 5.1Hz)，7.70(d，1H，J ＝ 3.0Hz)，10.54(s，1H)；ESI-MS(m/+ +
z，％)367(MH，50％)，322(100)，C21H27N4S的ESI-HRMS(MH)计算值为：367.1950，测量值为：367.1956。
85％)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.05(t，3H，J＝6.9Hz)，1.44-1.51(m，3H)，1.58-1.82(m，3H)，
1.89-1.97(m，2H)，2.58(q，2H，J ＝ 7.2Hz)，2.85-2.99(m，1H)，3.08-3.23(m，1H)，6.19(s，
2H)，6.62(d，1H，J＝8.4Hz)，6.98-7.00(m，2H)，7.09(dd，1H，J＝3.9，5.1Hz)，7.26(d，1H，J ＝ 8.4Hz)，7.58(d，1H，J ＝ 5.1Hz)，7.70(d，1H，J ＝ 3.0Hz)，10.54(s，1H)；ESI-MS(m/+ +
z，％)367(MH，50％)，322(100)，C21H27N4S的ESI-HRMS(MH)计算值为：367.1950，测量值为：367.1956。
[0533] 实施例22：N-(3-(3-(乙氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(顺式对映异构体的混合物)(化合物23)的合成
[0534]
[0535] N-乙基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺：有关完整的详细实验内容和光谱数据，请参见实施例21。
[0536] 叔-丁基乙基(3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(顺式对映异构体的混合物)。向N-乙基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己酰胺(0.20g，0.69mmol)在1，4-二噁烷(5mL)中的溶液中加入(Boc)2O(0.17g，0.76mmol)和三乙胺(0.20mL，1.40mmol)并将所得的混合物置于室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并用柱色谱(EtOAc∶己烷，1∶1)纯化粗品以得到黄色固体的化合物(0.26g，97％)。
[0537] 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.04(t，3H，J ＝ 6.9Hz)，1.49-1.23(m，2H)，1.42(s，9H)，1.51-1.57(m，2H)，1.64-1.75(m，2H)，1.86-1.95(m，2H)，2.96-3.04(m，1H)，3.14(q，2H，J＝
6.9Hz)，7.39(s，1H)，7.50(d，1H，J＝9.0Hz)，7.97(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，8.55(d，1H，J+
＝2.1Hz)；EI-MS(m/z，％)387(M，20)，270(100)。
6.9Hz)，7.39(s，1H)，7.50(d，1H，J＝9.0Hz)，7.97(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，8.55(d，1H，J+
＝2.1Hz)；EI-MS(m/z，％)387(M，20)，270(100)。
[0538] 叔-丁基3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环己基(乙基)氨基甲酸酯(顺式对映异构体的混合物)：向叔-丁基乙基(3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(0.24g，0.62mmol)在干甲醇(10mL)中的溶液中加入雷尼镍(0.1g，与水混合的浆状物)和水合肼(0.30mL，6.20mmol)。将所得的混合物浸于预热的油浴中并回流15分钟或直到溶液变澄清。使反应冷却并通过硅藻土过滤，用甲醇(20mL)清洗并蒸发溶剂。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98)纯化粗材料以得到褐色固体的标题化合物(0.21g，96％)。
[0539] 1H-NMR(CDCl3)δ1.09(t，3H，J ＝ 6.9Hz)，1.30-1.66(m，3H)，1.48(s，9H)，1.80-1.83(m，1H)，1.90-1.94(m，1H)，1.98-2.04(m，1H)，2.11-2.15(m，1H)，2.80-2.90(m，
1H)，3.05-3.22(m，2H)，4.12-4.19(m，1H)，6.65(dd，1H，J ＝ 2.1，8.7Hz)，6.87(d，1H，J ＝+
2.1Hz)，6.96(s，1H)，7.15(d，1H，J＝8.7Hz)，7.725(s，1H)；EI-MS(m/z，％)357(M，100)。
1H)，3.05-3.22(m，2H)，4.12-4.19(m，1H)，6.65(dd，1H，J ＝ 2.1，8.7Hz)，6.87(d，1H，J ＝+
2.1Hz)，6.96(s，1H)，7.15(d，1H，J＝8.7Hz)，7.725(s，1H)；EI-MS(m/z，％)357(M，100)。
[0540] 叔-丁基乙基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(顺式对映异构体的混合物)。向叔-丁基3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环己基(乙基)氨基甲酸酯(0.19g，0.53mmol)在干乙醇(20mL)中的溶液中加入噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methylthiophene-2-carbimidothioate hydroiodide)(0.30g，1.06mmol)并将该反应置于室温下搅拌48小时。然后蒸发溶剂，将该混合物溶于二氯甲烷(20mL)并用
2N NaOH(10mL)清洗。萃取并蒸发有机层。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98至5∶95)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.19g，78％)。
2N NaOH(10mL)清洗。萃取并蒸发有机层。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98至5∶95)纯化粗品以得到黄色固体的标题化合物(0.19g，78％)。
[0541] 1H-NMR(DMSO-d6)δ1.04(t，3H，J ＝ 6.9Hz)，1.39(s，9H)，1.46-1.57(m，3H)，1.57-1.74(m，2H)，1.80-1.94(m，3H)，2.77-2.89(m，1H)，3.13(q，2H，J ＝ 6.0Hz)，
3.89-4.03(m，1H)，6.83(d，1H，J ＝ 8.4Hz)，7.13(s，1H)，7.22(dd，1H，J ＝ 4.5，8.7Hz)，
7.29(s，1H)，7.37(d，1H，J ＝ 8.7Hz)，7.84(d，1H，J ＝ 3.3Hz)，7.88(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，+
10.83(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)467(MH，100)。
3.89-4.03(m，1H)，6.83(d，1H，J ＝ 8.4Hz)，7.13(s，1H)，7.22(dd，1H，J ＝ 4.5，8.7Hz)，
7.29(s，1H)，7.37(d，1H，J ＝ 8.7Hz)，7.84(d，1H，J ＝ 3.3Hz)，7.88(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，+
10.83(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)467(MH，100)。
[0542] N-(3-(3-(乙氨基)环己基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(顺式对映异构体的混合物)。将叔-丁基乙基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环己基)氨基甲酸酯(0.17g，0.36mmol)用20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(20mL)在0℃进行处理并将该混合物置于0℃搅拌2小时。然后用10％的NH4OH溶液中和该溶液，使有机层分离并蒸发。用柱色谱(20％2N NH3的甲醇溶液∶80％CH2Cl2)纯化粗品以得到黄色固体的最终产物(0.50g，1
85％)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.11(t，3H，J＝6.9Hz)，1.21-1.53(m，4H)，1.81-2.11(m，3H)，
2.27-2.37(m，1H)，2.82-2.88(m，3H)，2.99-3.07(m，1H)，6.22(s，2H，NH)，6.64(d，1H，J ＝
8.4Hz)，7.01-7.03(m，2H)，7.10(dd，1H，J＝3.6，5.1Hz)，7.28(d，1H，J＝8.7Hz)，7.59(d，+
1H，J＝5.1Hz)，7.71(d，1H，J＝3.0Hz)，10.62(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)367(MH，50)，+
322(100)，C21H27N4S(MH)的ESI-HRMS计算值为367.1950，测量值为367.1968。
85％)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.11(t，3H，J＝6.9Hz)，1.21-1.53(m，4H)，1.81-2.11(m，3H)，
2.27-2.37(m，1H)，2.82-2.88(m，3H)，2.99-3.07(m，1H)，6.22(s，2H，NH)，6.64(d，1H，J ＝
8.4Hz)，7.01-7.03(m，2H)，7.10(dd，1H，J＝3.6，5.1Hz)，7.28(d，1H，J＝8.7Hz)，7.59(d，+
1H，J＝5.1Hz)，7.71(d，1H，J＝3.0Hz)，10.62(s，1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)367(MH，50)，+
322(100)，C21H27N4S(MH)的ESI-HRMS计算值为367.1950，测量值为367.1968。
[0543] 实施例23.N-(3-(1-(2-羟乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(化合物24)的合成
[0544]
[0545] 叔-丁基4-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸盐：将5-硝基-1H-吲哚(1g，6.17mmol)、叔-丁基4-氧代哌啶-1-羧酸盐(2.458g，12.33mmol)和吡咯烷(1.530mL，18.50mmol)的溶液回流48小时。使反应恢复至室温，用水(50mL)稀释并将产物萃取至乙酸乙酯(2×50mL)。用盐水(15mL)清洗该合并的乙酸乙酯层并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂并用异丙醇∶己烷，1∶6(20mL)稀释粗品。搅拌15分钟后，滤出固体，用己烷(2×10mL)清洗并干燥以获得叔-丁基4-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-5，6-二氢吡1
啶-1(2H)-羧酸盐(1.515g，71.5％)。H NMR(CDCl3)δ8.83(d，1H，J＝1.5Hz)，8.60(brs，
1H)，8.14(dd，1H，J ＝ 2.1，9.0Hz)，7.42(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，7.31(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，
6.21(s，1H)，4.20-4.16(m，2H)，3.70(t，2H，J＝5.7Hz)，2.60-2.50(m，2H)，1.51(s，9H)。
啶-1(2H)-羧酸盐(1.515g，71.5％)。H NMR(CDCl3)δ8.83(d，1H，J＝1.5Hz)，8.60(brs，
1H)，8.14(dd，1H，J ＝ 2.1，9.0Hz)，7.42(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，7.31(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，
6.21(s，1H)，4.20-4.16(m，2H)，3.70(t，2H，J＝5.7Hz)，2.60-2.50(m，2H)，1.51(s，9H)。
[0546] 5-硝基-3-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚：将叔-丁基4-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸盐(0.8g，2.330mmol)在CH2Cl2(16mL)中的溶液用三氟乙酸(4mL)在0℃进行处理并将所得的混合物在相同温度下搅拌3小时。使反应蒸发并用1N NaOH溶液(约pH 14)使粗品碱化。滤出固体，用水(2×10mL)清洗。真空干燥所述粗品并用10％乙酸乙酯的己烷溶液(20mL)处理。过滤固体并用己烷(2×5mL)清洗。真空干燥黄色固体以得到5-硝基-3-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚(0.56g，1
99％)。HNMR(DMSO-d6)δ8.69(d，1H，J＝2.1Hz)，8.00(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，7.63(s，
1H)，7.55(d，1H，J＝9.0Hz)，6.21(s，1H)，3.42-3.30(m，2H，与DMSO的峰合并)，2.93(t，2H，+
J＝5.4Hz)，2.40-2.30(m，2H)；ESI-MS(m/z，％)：244(MH，77)，215(100)。
99％)。HNMR(DMSO-d6)δ8.69(d，1H，J＝2.1Hz)，8.00(dd，1H，J＝2.1，9.0Hz)，7.63(s，
1H)，7.55(d，1H，J＝9.0Hz)，6.21(s，1H)，3.42-3.30(m，2H，与DMSO的峰合并)，2.93(t，2H，+
J＝5.4Hz)，2.40-2.30(m，2H)；ESI-MS(m/z，％)：244(MH，77)，215(100)。
[0547] 2-(4-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙醇：将5-硝基-3-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚(0.55g，2.261mmol)在干CH2Cl2∶1，4-二噁烷(15mL，2∶1)中的悬液在室温下用三乙胺(0.636mL，4.52mmol)处理，再用2-溴乙醇(0.176mL，2.487mmol)处理。在室温下搅拌4小时后仅观察到起始材料。然后，将反应回流
24小时。使反应恢复至室温，用1N NaOH溶液(25mL)稀释并将产物萃取至CH2Cl2(2×25mL)。
将合并的CH2Cl2层用盐水(20mL)清洗并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂并用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，5∶95)纯化粗品以获得深黄色固体的2-(4-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-5，
6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙醇(0.24g，36.9％)。
24小时。使反应恢复至室温，用1N NaOH溶液(25mL)稀释并将产物萃取至CH2Cl2(2×25mL)。
将合并的CH2Cl2层用盐水(20mL)清洗并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂并用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，5∶95)纯化粗品以获得深黄色固体的2-(4-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-5，
6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙醇(0.24g，36.9％)。
[0548] 1H NMR(DMSO-d6)δ11.86(s，1H)，8.68(d，1H，J＝2.1Hz)，8.01(dd，1H，J＝2.4，9.0Hz)，7.65(s，1H)，7.55(d，1H，J＝9.0Hz)，6.16(s，1H)，4.42(t，1H，J＝5.4Hz)，3.56(q，
2H)，3.18(t，2H，J＝6.3Hz)，2.69(t，2H，J＝5.4Hz)，2.54-2.50(m，4H)；ESI-MS(m/z，％)：
+
288(MH，100)。
2H)，3.18(t，2H，J＝6.3Hz)，2.69(t，2H，J＝5.4Hz)，2.54-2.50(m，4H)；ESI-MS(m/z，％)：
+
288(MH，100)。
[0549] 2-(4-(5-氨 基-1H-吲 哚-3-基)-5，6- 二氢 吡 啶-1(2H)-基) 乙醇：将2-(4-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙醇(0.225g，0.783mmol)在干甲醇(5mL)中的溶液在室温下用水合肼(0.244mL，7.83mmol)处理，再用雷尼-镍(0.1g，
0.783mmol)处理。将所得的混合物置于预热的油浴中并回流5分钟(TLC基，2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9)。使反应恢复至室温，通过硅藻土床层过滤并用甲醇(3×10mL)清洗。蒸发合并的甲醇层并用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9)纯化粗品以获得固体的2-(4-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙醇(0.175g，87％)。
1
HNMR(DMSO-d6)δ10.59(s，1H)，7.15(d，1H，J＝2.4Hz)，7.05(d，1H，J＝8.4Hz)，6.99(s，
1H)，6.48(dd，1H，J ＝ 1.8，8.4Hz)，5.96(s，1H)，4.48(brs，2H)，4.40(t，1H，J ＝ 5.4Hz)，
3.55(q，2H)，3.16-3.10(m，2H)，2.65(t，2H，J ＝ 5.7Hz)，2.50-2.45(m，4H)；ESI-MS(m/+
z，％)：258(MH，30)，185(100)。
0.783mmol)处理。将所得的混合物置于预热的油浴中并回流5分钟(TLC基，2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9)。使反应恢复至室温，通过硅藻土床层过滤并用甲醇(3×10mL)清洗。蒸发合并的甲醇层并用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9)纯化粗品以获得固体的2-(4-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙醇(0.175g，87％)。
1
HNMR(DMSO-d6)δ10.59(s，1H)，7.15(d，1H，J＝2.4Hz)，7.05(d，1H，J＝8.4Hz)，6.99(s，
1H)，6.48(dd，1H，J ＝ 1.8，8.4Hz)，5.96(s，1H)，4.48(brs，2H)，4.40(t，1H，J ＝ 5.4Hz)，
3.55(q，2H)，3.16-3.10(m，2H)，2.65(t，2H，J ＝ 5.7Hz)，2.50-2.45(m，4H)；ESI-MS(m/+
z，％)：258(MH，30)，185(100)。
[0550] N-(3-(1-(3-羟乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒：将2-(4-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙醇(0.16g，0.622mmol)在干乙醇(5mL)中的溶液在室温下用噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methylthiophene-2-carbimidothioate hydroiodide)(0.355g，1.244mmol)进 行 处理并搅拌过夜(18小时)。将该反应用饱和的NaHCO3溶液(50mL)碱化并将产物萃取至CH2Cl2(3×20mL)。将合并的CH2Cl2层用盐水(20mL)清洗并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂并用柱色谱(2MNH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9)纯化粗品以获得固体的N-(3-(1-(2-羟乙基)-1，
1
2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(0.14g，61.4％)。H NMR(DMSO-d6)δ10.92(s，1H)，7.71(d，1H，J ＝ 3.6Hz)，7.58(d，1H，J ＝ 5.1Hz)，7.33-7.30(m，2H)，
7.21(s，1H)，7.09(t，1H，J ＝ 3.9Hz)，6.66(d，1H，J ＝ 8.4Hz)，6.23(brs，2H)，6.03(s，
1H)，4.40(t，1H，J ＝ 5.1Hz)，3.54(q，2H)，3.16-3.10(m，2H)，2.66(t，2H，J ＝ 5.4Hz)，+
2.50-2.44(m，4H，与DMSO的峰合并)；ESI-MS(m/z，％)：367(MH，33)，294(100)。
1
2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(0.14g，61.4％)。H NMR(DMSO-d6)δ10.92(s，1H)，7.71(d，1H，J ＝ 3.6Hz)，7.58(d，1H，J ＝ 5.1Hz)，7.33-7.30(m，2H)，
7.21(s，1H)，7.09(t，1H，J ＝ 3.9Hz)，6.66(d，1H，J ＝ 8.4Hz)，6.23(brs，2H)，6.03(s，
1H)，4.40(t，1H，J ＝ 5.1Hz)，3.54(q，2H)，3.16-3.10(m，2H)，2.66(t，2H，J ＝ 5.4Hz)，+
2.50-2.44(m，4H，与DMSO的峰合并)；ESI-MS(m/z，％)：367(MH，33)，294(100)。
[0551] N-(3-(1-(2-羟乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒二盐酸盐：将N-(3-(1-(2-羟乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(0.125g，0.341mmol)在干甲醇(3mL)中的溶液在室温下用氯化氢(1M的二乙醚溶液)(1.023mL，1.023mmol)处理。搅拌15分钟后，将溶剂减压蒸发并干燥粗材料以获得固体的N-(3-(1-(2-羟乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒1
二盐酸盐(0.14g，93％)。H NMR(DMSO-d6)δ11.70(s，1H)，11.47(s，1H)，10.57(brs，1H)，
9.66(s，1H)，8.61(s，1H)，8.19-8.16(m，2H)，7.94(s，1H)，7.68(d，1H，J＝2.1Hz)，7.59(d，
1H，J＝8.4Hz)，7.39(t，1H，J＝4.5Hz)，7.18(d，1H，J＝9.3Hz)，6.16(s，1H)，5.36(s，1H)，
4.06-3.96(m，1H)，3.90-3.80(m，3H)，3.71-3.67(m，1H)，3.28-3.0(m，2H)，2.98-2.91(m，+
1H)，2.81-2.72(m，1H)，2.50-2.40(m，2H，与DMSO的峰合并)；ESI-MS(m/z，％)：367(MH，+
39)，294(100)；C20H23N4OS(MH，游离碱)的ESI-HRMS计算值为：367.1587；观测值为：
367.1605。
二盐酸盐(0.14g，93％)。H NMR(DMSO-d6)δ11.70(s，1H)，11.47(s，1H)，10.57(brs，1H)，
9.66(s，1H)，8.61(s，1H)，8.19-8.16(m，2H)，7.94(s，1H)，7.68(d，1H，J＝2.1Hz)，7.59(d，
1H，J＝8.4Hz)，7.39(t，1H，J＝4.5Hz)，7.18(d，1H，J＝9.3Hz)，6.16(s，1H)，5.36(s，1H)，
4.06-3.96(m，1H)，3.90-3.80(m，3H)，3.71-3.67(m，1H)，3.28-3.0(m，2H)，2.98-2.91(m，+
1H)，2.81-2.72(m，1H)，2.50-2.40(m，2H，与DMSO的峰合并)；ESI-MS(m/z，％)：367(MH，+
39)，294(100)；C20H23N4OS(MH，游离碱)的ESI-HRMS计算值为：367.1587；观测值为：
367.1605。
[0552] 实施例24：N-(3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(化合物25)的合成
[0553]
[0554] 5-溴代-3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚：根据Bioorg.&Med.Chem.Lett.14：727-729(2004)中报道的文献方法制备。
[0555] 3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-胺：将Pd2dba3(0.187g，0.205mmol)在干四氢呋喃(10mL)中的溶液在室温下用三-叔-丁基膦(2.483mL，0.819mmol)处理。搅拌10分钟后，在相同温度下加入5-溴代-3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚(1.2g，4.09mmol)的干四氢呋喃(10mL)溶液，随后加入双(三甲基硅基)酰胺锂在1M四氢呋喃(10.23mL，10.23mmol)中的溶液。将反应置于预热的油浴中并在密封管中在100℃搅拌3.5小时。使反应恢复至室温，用1N HCl溶液(25mL)淬灭并搅拌30分钟。用1N NaOH溶液(50mL)使反应碱化并将产物萃取至乙酸乙酯(3×25mL)。干燥合并的乙酸乙酯层(Na2SO4)并蒸发溶剂以获得粗产物。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，5∶95)纯化粗材料以获得棕色泡沫状的3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-胺(0.6g，2.62mmol，得率+
63.9％)。ESI-MS(m/z，％)：230(MH，100)。
63.9％)。ESI-MS(m/z，％)：230(MH，100)。
[0556] N-(3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒：将3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-胺(0.59g，2.57mmol)在干乙醇(10mL)中的溶液在室温下用噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methyl thiophene-2-carbimidothioate hydroiodide)(1.467g，5.15mmol)进行处理并将所得的混合物搅拌过夜。用饱和的NaHCO3溶液(50mL)使反应碱化，并将产物萃取至CH2Cl2(2×25mL)。用盐水(20mL)清洗合并的有机层并使其干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂并用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9)纯化粗品以获得固体的N-(3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲1
脒(0.39g，1.152mmol，得率44.8％)。H NMR(DMSO-d6)δ10.59(s，1H)，7.70(d，1H，J＝
2.7Hz)，7.58(d，1H，J＝3.9Hz)，7.26(d，1H，J＝6.3Hz)，7.10-7.08(m，2H)，6.92(s，1H)，
6.62(d，1H，J ＝ 6.3Hz)，6.23(s，2H)，2.80(t，2H，J ＝ 6.0Hz)，2.65(t，2H，J ＝ 5.4Hz)，+
2.52-2.48(m，4H，与DMSO的峰合并)，1.68(s，4H)；ESI-MS(m/z，％)：339(MH，100)。
脒(0.39g，1.152mmol，得率44.8％)。H NMR(DMSO-d6)δ10.59(s，1H)，7.70(d，1H，J＝
2.7Hz)，7.58(d，1H，J＝3.9Hz)，7.26(d，1H，J＝6.3Hz)，7.10-7.08(m，2H)，6.92(s，1H)，
6.62(d，1H，J ＝ 6.3Hz)，6.23(s，2H)，2.80(t，2H，J ＝ 6.0Hz)，2.65(t，2H，J ＝ 5.4Hz)，+
2.52-2.48(m，4H，与DMSO的峰合并)，1.68(s，4H)；ESI-MS(m/z，％)：339(MH，100)。
[0557] N-(3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒二盐酸盐：将N-(3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(0.16g，0.473mmol)在甲醇(3mL)中的溶液用1N盐酸的乙醚(1.418mL，1.418mmol)溶液处理并在室温下搅拌15分钟。蒸发溶剂并减压干燥产物以获得固体的N-(3-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒二盐酸盐(0.17g，0.413mmol，得率87％)。
[0558] 1H NMR(DMSO-d6)δ11.50(s，1H)，11.38(s，1H)，11.26(brs，1H)，9.71(s，1H)，8.64(s，1H)，8.20-8.17(m，2H)，7.75(s，1H)，7.53(d，1H，J＝6.6Hz)，7.39(s，2H)，7.12(d，
1H，J ＝ 6.3Hz)，3.58-3.52(m，2H)，3.40-3.32(m，2H)，3.20-3.16(m，2H)，3.06-3.04(m，+
2H)，2.00-1.88(m，4H)；ESI-MS(m/z， ％ )：339(MH，游 离 碱，100)，268(74)，126(59)；
+
C19H23N4S(MH，游离碱)的ESI-HRMS计算值为：339.1637；观测值为：339.1649。
1H，J ＝ 6.3Hz)，3.58-3.52(m，2H)，3.40-3.32(m，2H)，3.20-3.16(m，2H)，3.06-3.04(m，+
2H)，2.00-1.88(m，4H)；ESI-MS(m/z， ％ )：339(MH，游 离 碱，100)，268(74)，126(59)；
+
C19H23N4S(MH，游离碱)的ESI-HRMS计算值为：339.1637；观测值为：339.1649。
[0559] 实施例25.N-(3-(3-(乙胺基)环戊基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(化合物26)的合成
[0560]
[0561] 3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环戊酮：向5-硝基吲哚(2.0g，12.80mmol)的干乙腈(10.0mL)溶液中加入环戊-2-烯酮(2.0mL，23.87mmol)和Bi(NO3)3(0.06g，0.13mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜。然后蒸发溶剂并用柱色谱(50％己烷∶50％EtOAc)纯化粗品以获得黄色固体的标题化合物(1.63g，52％)。
[0562] 1H-NMR(CDCl3)δ2.05-2.18(m，1H)，2.37-2.48(m，3H)，2.54-2.66(m，1H)，2.80(dd，1H，J ＝ 7.2，7.8Hz)，3.72-3.82(m，1H)，7.15(d，1H，J ＝ 1.5Hz)，7.42(d，1H，J ＝ 9.0Hz)，8.15(dd，1H，J ＝ 2.4，9.0Hz)，8.39(brs，1H，NH)，8.62(d，1H，J ＝ 2.4Hz)；
+
ESI-MS(m/z，％)267(MNa，100)。
+
ESI-MS(m/z，％)267(MNa，100)。
[0563] N-乙基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环戊酰胺：向3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环戊酮(1.6g，6.55mmol)在1，2-二氯乙烷(50mL)中的溶液中加入AcOH(0.40mL，6.55mmol)、EtNH2·HCl(0.53g，6.55mmol)和NaBH(OAc)3(2.1g，9.83mmol)并将该混合物置于室温下搅拌过夜。用2N NaOH(10mL)萃取反应混合物并用二氯甲烷(2×10mL)清洗。使二氯甲烷层分离并蒸发。用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，1∶9)纯化粗材料以获得
1
非对映异构体混合物的黄色固体的产物(1.2g，67％)。H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.16(m，6H)，
1.45-1.92(m，10H)，1.96-2.13(m，3H)，2.13-2.36(m，3H)，2.50-2.58(m，1H)，2.65-2.76(m，
4H)，3.28-3.43(m，3H)，3.49-3.60(m，1H)，7.11(d，1H，J＝1.8Hz)，7.15(d，1H，J＝1.5Hz)，
7.35(s，1H)，7.38(s，1H)，8.08(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，8.11(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，8.32(brs，
1H，NH)，8.41(brs，1H，NH)，8.61(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，8.63(d，1H，J ＝ 2.1Hz)；EI-MS(m/+
z，％)273(M，90)。
1
非对映异构体混合物的黄色固体的产物(1.2g，67％)。H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.16(m，6H)，
1.45-1.92(m，10H)，1.96-2.13(m，3H)，2.13-2.36(m，3H)，2.50-2.58(m，1H)，2.65-2.76(m，
4H)，3.28-3.43(m，3H)，3.49-3.60(m，1H)，7.11(d，1H，J＝1.8Hz)，7.15(d，1H，J＝1.5Hz)，
7.35(s，1H)，7.38(s，1H)，8.08(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，8.11(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，8.32(brs，
1H，NH)，8.41(brs，1H，NH)，8.61(d，1H，J ＝ 2.1Hz)，8.63(d，1H，J ＝ 2.1Hz)；EI-MS(m/+
z，％)273(M，90)。
[0564] 叔-丁基乙基(3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环戊基)氨基甲酸酯：向N-乙基-3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环戊酰胺(1.1g，4.02mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入(Boc)2O(0.97g，4.43mmol)和三乙胺(1.2mL，8.04mmol)并将所得的混合物置于室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并用柱色谱(EtOAc∶己烷，1∶1)纯化粗品以得到
1
黄色固体的化合物(1.43g，定量)。H-NMR(CDCl3)δ1.13-1.21(m，6H)，1.49(s，18H)，
1.65-1.94(m，5H)，2.01-2.20(m，5H)，2.21-2.40(m，3H)，3.15-3.32(m，5H)，3.53-3.58(m，
1H)，4.42-4.53(m，2H)，7.10(d，1H，J＝1.5Hz)，7.14(m，1H，J＝1.8Hz)，7.35(d，1H，J＝
4.5Hz)，7.38(d，1H，J ＝ 4.5Hz)，8.08(dd，1H，J ＝ 2.7，9.0Hz)，8.11(dd，1H，J ＝ 2.4，
4.8Hz)，8.56(d，1H，J＝2.1Hz)，8.60(d，1H，J＝2.1Hz)，8.62(brs，1H，NH)，8.71(brs，1H，+
NH)；EI-MS(m/z，％)373(M，30)。
1
黄色固体的化合物(1.43g，定量)。H-NMR(CDCl3)δ1.13-1.21(m，6H)，1.49(s，18H)，
1.65-1.94(m，5H)，2.01-2.20(m，5H)，2.21-2.40(m，3H)，3.15-3.32(m，5H)，3.53-3.58(m，
1H)，4.42-4.53(m，2H)，7.10(d，1H，J＝1.5Hz)，7.14(m，1H，J＝1.8Hz)，7.35(d，1H，J＝
4.5Hz)，7.38(d，1H，J ＝ 4.5Hz)，8.08(dd，1H，J ＝ 2.7，9.0Hz)，8.11(dd，1H，J ＝ 2.4，
4.8Hz)，8.56(d，1H，J＝2.1Hz)，8.60(d，1H，J＝2.1Hz)，8.62(brs，1H，NH)，8.71(brs，1H，+
NH)；EI-MS(m/z，％)373(M，30)。
[0565] 叔-丁基3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环戊基(乙基)氨基甲酸酯：向叔-丁基乙基(3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)环戊基)氨基甲酸酯(1.40g，3.75mmol)在干甲醇(15mL)中的溶液中加入雷尼镍(0.1g，与水混合的浆状物)和水合肼(1.9mL，37.5mmol)。将所得的混合物浸于预热的油浴中并回流15分钟或直到溶液变澄清。使反应冷却并通过硅藻土过滤，用甲醇(20mL)清洗并蒸发溶剂。用柱色谱(2％2N NH3的甲醇溶液∶98％CH2Cl2)纯1
化粗品以得到褐色固体的标题化合物(1.25g，定量)。H-NMR(CDCl3)δ1.11-1.19(m，6H)，
1.49(s，18H)，1.67-1.89(m，6H)，1.96-2.12(m，4H)，2.13-2.22(m，2H)，2.26-2.35(m，2H)，
3.10-3.28(m，4H)，3.37-3.58(m，4H)，4.44-4.59(m，2H)，6.64(dd，1H，J ＝ 1.8，9.0Hz)，
6.67(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.91(d，1H，J＝2.4Hz)，6.92(d，1H，J＝2.1Hz)，7.14(d，1H，+
J＝2.1Hz)，7.17(d，1H，J＝2.1Hz)，7.73(brs，2H，NH)；EI-MS(m/z，％)343(M，100)。
化粗品以得到褐色固体的标题化合物(1.25g，定量)。H-NMR(CDCl3)δ1.11-1.19(m，6H)，
1.49(s，18H)，1.67-1.89(m，6H)，1.96-2.12(m，4H)，2.13-2.22(m，2H)，2.26-2.35(m，2H)，
3.10-3.28(m，4H)，3.37-3.58(m，4H)，4.44-4.59(m，2H)，6.64(dd，1H，J ＝ 1.8，9.0Hz)，
6.67(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.91(d，1H，J＝2.4Hz)，6.92(d，1H，J＝2.1Hz)，7.14(d，1H，+
J＝2.1Hz)，7.17(d，1H，J＝2.1Hz)，7.73(brs，2H，NH)；EI-MS(m/z，％)343(M，100)。
[0566] 叔-丁基乙基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环戊基)氨基甲酸酯：向叔-丁基3-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)环戊基(乙基)氨基甲酸酯(1.22g，3.55mmol)的干乙醇(30mL)溶液中加入噻吩-2-硫代碳酰亚胺甲基酯氢碘酸盐(methyl thiophene-2-carbimidothioatehydroiodide)(2.0g，7.10mmol)，并将反应置于室温下搅拌48小时。蒸发溶剂，将该混合物溶于二氯甲烷(20mL)并用2N NaOH(20mL)清洗。萃取并蒸发有机层。
用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98至5∶95)纯化粗材料以得到黄色固体的标
1
题化合物(1.28g，80％)。H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.17(m，6H)，1.47(s，18H)，1.68-1.89(m，
6H)，1.97-2.12(m，4H)，2.13-2.34(m，4H)，3.11-3.32(m，4H)，3.42-3.53(m，1H)，4.51(brs，
2H)，4.92(brs，2H)，6.86(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.89(dd，1H，J＝2.4，8.4Hz)，6.96(d，
1H，J＝2.1Hz)，6.98(d，1H，J＝2.1Hz)，7.07-7.10(m，2H)，7.21-7.23(m，2H)，7.30(d，1H，J＝3.3Hz)，7.33(d，1H，J＝3.3Hz)，7.42(s，1H)，7.43(s，1H)，7.95(brs，1H，NH)，7.97(brs，+
1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)453(M，100)。
用柱色谱(2M NH3的甲醇溶液∶CH2Cl2，2∶98至5∶95)纯化粗材料以得到黄色固体的标
1
题化合物(1.28g，80％)。H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.17(m，6H)，1.47(s，18H)，1.68-1.89(m，
6H)，1.97-2.12(m，4H)，2.13-2.34(m，4H)，3.11-3.32(m，4H)，3.42-3.53(m，1H)，4.51(brs，
2H)，4.92(brs，2H)，6.86(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.89(dd，1H，J＝2.4，8.4Hz)，6.96(d，
1H，J＝2.1Hz)，6.98(d，1H，J＝2.1Hz)，7.07-7.10(m，2H)，7.21-7.23(m，2H)，7.30(d，1H，J＝3.3Hz)，7.33(d，1H，J＝3.3Hz)，7.42(s，1H)，7.43(s，1H)，7.95(brs，1H，NH)，7.97(brs，+
1H，NH)；ESI-MS(m/z，％)453(M，100)。
[0567] N-(3-(3-(乙胺基)环戊基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(26)：将叔-丁基乙基(3-(5-(噻吩-2-甲脒基)-1H-吲哚-3-基)环戊基)氨基甲酸酯(1.25g，
2.76mmol)用20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(31mL)在0℃进行处理并将混合物置于
0℃搅拌2小时。然后用10％的NH4OH溶液中和该反应，使有机层分离并蒸发。用柱色谱(20％2NNH3的甲醇溶液∶80％CH2Cl2)纯化粗品以得到黄色固体的产物(0.87g，
1
89％)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.07(t，3H，J＝7.2Hz)，1.45-1.71(m，2H)，1.77-2.16(m，3H)，
2.23-2.40(m，1H)，2.64-2.73(m，2H)，3.24-3.49(m，2H)，6.22(brs，2H，NH)，6.63(d，1H，J＝
8.1Hz)，7.03-7.11(m，3H)，7.26(d，1H，J＝8.4Hz)，7.58(d，1H，J＝5.1Hz)，7.71(d，1H，J+
＝3.6Hz)，10.57(s，1H，NH)；EI-MS(m/z，％)352(M，50)，243(80)，158(100)，C20H24N4S的+
EI-HRMS(M)计算值为：352.1722，测量值为：352.1725。
2.76mmol)用20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(31mL)在0℃进行处理并将混合物置于
0℃搅拌2小时。然后用10％的NH4OH溶液中和该反应，使有机层分离并蒸发。用柱色谱(20％2NNH3的甲醇溶液∶80％CH2Cl2)纯化粗品以得到黄色固体的产物(0.87g，
1
89％)。H-NMR(DMSO-d6)δ1.07(t，3H，J＝7.2Hz)，1.45-1.71(m，2H)，1.77-2.16(m，3H)，
2.23-2.40(m，1H)，2.64-2.73(m，2H)，3.24-3.49(m，2H)，6.22(brs，2H，NH)，6.63(d，1H，J＝
8.1Hz)，7.03-7.11(m，3H)，7.26(d，1H，J＝8.4Hz)，7.58(d，1H，J＝5.1Hz)，7.71(d，1H，J+
＝3.6Hz)，10.57(s，1H，NH)；EI-MS(m/z，％)352(M，50)，243(80)，158(100)，C20H24N4S的+
EI-HRMS(M)计算值为：352.1722，测量值为：352.1725。
[0568] N-(3-(3-(-(乙胺基)环戊基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒的手性分离：
[0569] 将化合物(四种异构体的混合物)进行手性制备HPLC(CHIRALPAK AD-H)分离。
[0570] 流速18mL/min，10％乙醇∶90％己烷+0.2％DEA。
[0571]
[0572] 第一(极性最弱)异构体在27分钟开始洗脱，得到了13.0mg的对映异构体纯度为100％的化合物。第二异构体在33分钟开始洗脱，得到了8.0mg的对映异构体纯度为100％的化合物。另外两种异构体在35分钟同时洗脱，因此不能分离成它们纯的对映异构体形式。
[0573] 下表15中列出了所有新型化合物的nNOS和eNOS抑制活性。
[0574] 表15
[0575]化合物 IC50(μM) IC50(μM) eNOS/nNOS
(人nNOS) (人eNOS)
21 0.309 7.76 25.1
22 0.264 10.8 40.9
23 0.735 31.8 43.2
24 0.748 74.1 99
25 0.427 9.92 23.2
26 0.257 14.3 55.6
(人nNOS) (人eNOS)
21 0.309 7.76 25.1
22 0.264 10.8 40.9
23 0.735 31.8 43.2
24 0.748 74.1 99
25 0.427 9.92 23.2
26 0.257 14.3 55.6
[0576] 实施例26.(R)-N-(3-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)-1H-吲哚-5-基)噻吩-2-甲脒(化合物(27))在胰腺炎内脏痛模型中的作用
[0577] 使用实施例16中所述的方法证明了化合物(27)在胰腺炎内脏痛模型中的作用，在美国专利No.7375219中说明了该化合物的合成，其通过引用并入本文。图12表明化合物(27)逆转了胰腺炎大鼠中的触诱发痛。
[0578] 其他实施方式
[0579] 尽管本发明已参考目前认为优选的实施例进行了说明，但是应理解本发明不局限于这些公开的实施例。相反，本发明旨在覆盖包含在所附权利要求的精神和范围内的各种改变或等价安排。
[0580] 所有出版物、专利和专利申请在本文中以其整体通过引用并入从而就像是达到了具体并单独地列出了将每个单独的出版物、专利和专利申请以其整体通过引用并入的程度。在本发明申请的术语与在通过引用并入本文的文件中的定义不同时，本文所提供的定义用作该术语的定义。
[0581] 其它实施方式包含在权利要求中。
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